JP2000500644A - Ｉｌ−６活性を阻害する合成ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 ＩＬ−６の活性を阻害するＩＬ−６受容体系のｇｐ８０サブユニット由来の新規なペプチドを提供する。

Description

【発明の詳細な説明】 ＩＬ−６活性を阻害する合成ペプチド 技術分野 本発明は一般的にインターロイキン−６（以下、ＩＬ−６ともいう）活性の阻 害剤の分野に関する。さらに詳しくは、本発明は骨髄腫細胞／形質細胞腫細胞の ＩＬ−６に依存する成長を阻害することができる新規な合成ペプチドに関する。 背景技術および従来技術 インターロイキン−６（ＩＬ−６）の受容体系は、ｇｐ８０（ＩＬ−６Ｒ）お よびｇｐ１３０と呼称される２つの別個の受容体サブユニットからなる（ヒラノ （Ｈｉｒａｎｏ）ら、１９９４に概説されている）。これらの２つの受容体タン パク質はバザン（Ｂａｚａｎ）（１９９０）のサイトカイン受容体のスーパーフ ァミリーに属する。このファミリーのメンバーであるヒト成長ホルモン受容体（ ｈＧＨＲ）の３次元構造が結晶学により解明され（デボス（ＤｅＶｏｓ）ら、１ ９９２）、前記構造からリガンドと相互作用する残基および２つの受容体サブユ ニット間のそれらの細胞外ドメインの相互作用を仲介する残基が決定されている 。バザンのモデルにもとづくＩＬ−６Ｒ配列およびｈＧＨＲ配列のアラインメン ト（ａｌｉｇｎｍｅｎｔ）を図式的に図１に示す。 ＩＬ−６は多数の重要な生物学的活性を有する多面発現性サイトカインである （概説については、レベル（Ｒ ｅｖｅｌ）、１９９２参照）。さらに、ＩＬ−６はヒト多発性骨髄腫の成長およ び進行に関与する（クライン（Ｋｌｅｉｎ）ら、１９９０）。 事実、ＩＬ−６は多発性骨髄腫のＢリンパ球の白血病性細胞の成長因子である 。これらの白血病性細胞は成熟したＢリンパ球または形質細胞に由来するので、 形質細胞腫細胞または骨髄腫細胞とも呼ばれる。抗体産生Ｂ細胞に融合すると、 これらの骨髄腫細胞または形質細胞腫細胞はハイブリドーマ細胞と呼ばれる。 ＩＬ−６が前記形質細胞腫細胞または骨髄腫細胞の成長因子であるという事実 からみて、前記形質細胞腫細胞／骨髄腫細胞のＩＬ−６で仲介される成長または ＩＬ−６に依存する成長をブロックするために使いうる特異的なＩＬ−６阻害剤 をえることが長いあいだ必要だと考えられてきた。この阻害剤により非常に多数 の世界中の人々を冒している疾患、多発性骨髄腫の治療方法が提供される。この ために、グルーブ（Ｇｒｕｂｅ）およびコクラン（Ｃｏｃｈｒａｎｅ）（１９９ ４）はマウス形質細胞腫Ｂ９細胞の成長を阻害することができる、ペプチド２４ ９〜２６４（すなわち、ＩＬ−６Ｒのアミノ酸配列の２４９番目から２６４番目 のアミノ酸残基を有するペプチド）と呼ばれる、ＩＬ−６Ｒに由来のペプチドを 記載している。ＩＬ−６は、たとえば骨粗鬆症および自己免疫疾患のようなほか の疾患を抑制する役割を果たすことも知られている。 従来、本発明の特異的なペプチドについても、またそれらの特異的な生物学的 活性や、たとえば特定のモノクローナル抗体に対するそれらの特異性などのその ほかの 特徴についても記載されていない。 したがって、本発明の目的はヒト骨髄腫細胞もしくはマウス形質細胞腫細胞の ＩＬ−６に依存する成長、骨粗鬆症および自己免疫疾患を抑制することができる ＩＬ−６Ｒに由来の新規なペプチドを提供することである。 本発明の別の目的はそれら自身がＩＬ−６活性をブロックすることができるモ ノクローナル抗体（Ｍａｂ）の結合部位であるＩＬ−６Ｒ配列中の定義された直 鎖状のエピトープの利点によりさらに特徴付けられる前記の新規なペプチドを提 供することができる。 本発明のもう１つの別の目的は前記の新規なペプチドを製造するための化学的 方法を提供することである。 本発明のさらにもう１つの別の目的は前記の新規なペプチドを含有する医薬組 成物を提供することである。 発明の概括 本発明はＩＬ−６の活性を強く阻害することがすでに知られている２つの異な るモノクローナル抗体（Ｍａｂ）と結合する能力の利点によりＩＬ−６受容体ｇ ｐ８０分子（ＩＬ−６Ｒ）中の短いペプチドが定義できるという予測できない知 見にもとづいている。 さらに、本発明にしたがい化学的に合成したばあい、これらのペプチドは白血 病性細胞の培養物に添加した際に、驚くべきことにこのような白血病性（形質細 胞腫／骨髄腫）細胞の成長の完全な阻害を生じせしめうることが示される。 したがって、本発明はＩＬ−６の活性を阻害することができるペプチドまたは その生物学的に活性な類似体で あって、該ペプチドがＩＬ−６受容体系のｇｐ８０（ＩＬ−６Ｒ）サブユニット 由来であり、かつＩＬ−６Ｒに特異的な１つまたはそれより多くのモノクローナ ル抗体（Ｍａｂ）により認識される直鎖状エピトープ（ｌｉｎｅａｒ ｅｐｉｔ ｏｐｅ）であるが、該ペプチドから（ｉ）ＩＬ−６Ｒ分子の残基２４９〜２６４ のアミノ酸配列を有する１６アミノ酸ペプチド、（ii）ＩＬ−６Ｒ分子の残基２ ５５〜２６８のアミノ酸配列を有する１４アミノ酸ペプチド、（iii）ＩＬ−６ Ｒ分子の残基２４９〜２５４のアミノ酸配列を有する６アミノ酸ペプチド、（iv ）ＩＬ−６Ｒ分子の残基２５９〜２６８のアミノ酸配列を有する１０アミノ酸ペ プチドおよび（ｖ）ＩＬ−６Ｒ分子の残基２４９〜２５８のアミノ酸配列を有す る１０アミノ酸ペプチドからなるペプチドの群は除かれる、ペプチドまたはその 生物学的に活性な類似体を提供する。 本発明の前記ペプチドまたはその類似体の実施態様は、図２に示される残基２ ２３〜残基２７２にわたるＩＬ−６Ｒ分子の部分に由来の約４〜約２５のアミノ 酸残基を有するペプチドの群から選ばれるペプチドであって、該ペプチドの群は （ａ）少なくともＩＬ−６Ｒ分子の位置２５５から位置２６４までの１０アミノ 酸配列ＬＲＹＲＡＥＲＳＫＴを有するペプチド、 （ｂ）少なくともＩＬ−６Ｒ分子の位置２５７から位置２６６までの１０アミノ 酸配列ＹＲＡＥＲＳＫＴＦＴを有するペプチド、 （ｃ）少なくともＩＬ−６Ｒ分子の位置２５９から位置 ２６８までの１０アミノ酸配列ＡＥＲＳＫＴＦＴＴＷを有するペプチド、 （ｄ）少なくともＩＬ−６Ｒ分子の位置２６１から位置２７０までの１０アミノ 酸配列ＲＳＫＴＦＴＴＷＭＶを有するペプチド、 （ｅ）少なくともＩＬ−６Ｒ分子の位置２６３から位置２７２までの１０アミノ 酸配列ＫＴＦＴＴＷＭＶＫＤを有するペプチド、 （ｆ）少なくともＩＬ−６Ｒ分子の位置２４７から位置２５６までの１０アミノ 酸配列ＳＦＹＲＬＲＦＥＬＲを有するペプチド、 （ｇ）少なくともＩＬ−６Ｒ分子の位置２４９から位置２５８までの１０アミノ 酸配列ＹＲＬＲＦＥＬＲＹＲを有するペプチド、 （ｈ）少なくともＩＬ−６Ｒ分子の位置２５１から位置２６０までの１０アミノ 酸配列ＬＲＦＥＬＲＹＲＡＥを有するペプチド、および （ｉ）１つまたはそれより多くのアミノ酸残基が別のアミノ酸残基により挿入、 欠失または置換された（ａ）〜（ｈ）のいずれか１つのペプチドの類似体 からなり、かつ（ａ）〜（ｉ）の該ペプチドおよび類似体が抗ＩＬ−６Ｒモノク ローナル抗体により認識される直鎖状エピトープの全体または部分を定義するこ ととＩＬ−６活性を阻害することができることにより特徴付けられるペプチドま たはその生物学的に活性な類似体である。 本発明の前記ペプチドまたは類似体の別の実施態様は該ペプチドまたは類似体 がＭａｂ３４．４およびＭａｂ ５０．６と本明細書中に示されるＭａｂの一方または両方により認識される直鎖 状エピトープを定義するペプチドまたは類似体である。 本発明の前記ペプチドのさらにもう１つ別の実施態様は、本明細書中に示され るペプチド、すな わち（ｉ）図２に示されるＩＬ−６Ｒ分子の位置２４７から 位置２６０の配列を有する１０６２、（ii）図２に示されるＩＬ−６Ｒ分子の位 置２５５から位置２７０の配列を有する１０６３、（iii）図２に示されるＩＬ −６Ｒ分子の位置２２６から位置２４５の配列を有する１０８６、および（ｉｖ ）図２に示されるＩＬ−６Ｒ分子の位置２３４から位置２４５の配列を有する１ ０８５、ならびに（ｖ）図２に示されるＩＬ−６Ｒ分子の位置２６０から位置２ ６９の配列を有する１１２２のいずれか１つから選ばれたペプチドである。 本発明はまた別の側面においてＩＬ−６の活性を阻害することができるペプチ ドまたはその生物学的に活性な類似体であって、該ペプチドがＩＬ−６受容体系 のｇｐ８０（ＩＬ−６Ｒ）サブユニット由来であり、かつＩＬ−６との結合に関 与するＩＬ−６Ｒの領域の部分または全体であることにより特徴付けられるが、 該ペプチドから（ｉ）ＩＬ−６Ｒ分子の残基２４９〜２６４のアミノ酸配列を有 する１６アミノ酸ペプチド、（ii）ＩＬ−６Ｒ分子の残基２５５〜２６８のアミ ノ酸配列を有する１４アミノ酸配列ペプチド、（iii）ＩＬ−６Ｒ分子の残基２ ４９〜２５４のアミノ酸配列を有する６アミノ酸ペプチド、（iv）ＩＬ−６Ｒ分 子の残基２５９〜２６８のアミノ酸配列を有する１０アミノ酸ペプチド、および （ｖ）ＩＬ−６Ｒ分子の残基２４９〜２５８のアミノ酸配列を有する１０アミノ 酸ペプチドからなる群は除かれる、ペプチドまたはその生物学的に活性な類似体 を提供する。 本発明のこの側面の実施態様は本明細書中に示されるペプチド、すなわち（ａ ）表１に示されるＩＬ−６Ｒ分子の位置２７７から位置２９９の配列を有する９ ８３、（ｂ）表１に示されるＩＬ−６Ｒ分子の位置２９０から位置３００の配列 を有する１０６４、（ｃ）表１に示されるＩＬ−６Ｒ分子の位置１２５から位置 １３５の配列を有する１０６７、および（ｄ）１つまたはそれより多くのアミノ 酸残基が別のアミノ酸残基により挿入、欠失または置換された（ａ）〜（ｃ）の いずれか１つの類似体から選ばれるペプチドである。 本発明はまた有効成分として少なくとも１つの前記ペプチド、その類似体また はそれらのいずれかの混合物と、薬学的に許容しうる担体、希釈剤もしくは賦形 剤からなる医薬組成物も提供する。 本発明の医薬組成物の実施態様は、ＩＬ−６の阻害用医薬組成物ならびに多発 性骨髄腫、骨粗鬆症および自己免疫疾患の治療用医薬組成物を包含する。 加えて、本発明はまた前記医薬組成物のいずれかの製造のための、またはＩＬ −６の阻害のための、または多発性骨髄腫、骨粗鬆症および自己免疫疾患の治療 のための、前記ペプチド、その類似体またはそれらのいずれかの混合物の使用の ために提供する。 本発明のそのほかの側面は以下の発明の詳細な記載から説明されるか直接生じ る。 図面の簡単な説明 図１はＩＬ−６Ｒ分子の細胞外ドメインのアミノ酸配列の部分とヒト成長ホル モン受容体（ｈＧＨＲ）の部分の比較を図式的に示す。前記配列のアラインメン トはバザン（１９９０）にしたがう。Ｍａｂ３４．４および５０．６に対するエ ピトープの位置は図中旗印により示す。 図２は本明細書中１０８６、１０６２および１０６３と呼称する３種のペプチ ドの範囲をボックス（図の上部）で示しているＩＬ−６Ｒのアミノ酸配列の断片 を図式的に示す。モノクローナル抗体との種々の重複するデカペプチドの反応を 図の下部に示す。前記デカペプチドは１０８６、１０６２および１０６３ペプチ ド中に含まれる配列を有する。この下側の部分において、全て実施例１〜３に記 載するように、数字は膜グリッド（ｇｒｉｄ）上（スポット−スキャン試験）の 各ペプチドの位置を表わし、「＋」の符号は反応（ポジティブな結果）の相対強 度を示す。 図３はＩＬ−６添加に依存するＢ９形質細胞腫由来細胞の成長に対するペプチ ド１０６２、１０６３およびコントロールのペプチド９０３（表１参照）の効果 をグラフで示す。組換えＣＨＯ産生ヒトＩＬ−６を２．５Ｕ／ｍｌ（すなわち７ ．５ＩＵ／ｍｌ）で使用し、成長は３日後に測定した。示した濃度でペプチドを ＩＬ−６とともに添加した。全ては実施例２および３に記載する。 図４は実施例３に記載するようにＢ９形質細胞腫由来細胞の成長に対するペプ チド１０６２、１０６３、１０ ６７、１０８６およびコントロールのペプチド９０３（表１参照）の効果をグラ フで示す。 図５は実施例３に記載するようにＢ９形質細胞腫由来細胞の成長に対するペプ チド１０６２、１０６３、１１２２、１１１８およびコントロールのペプチド９ ０３の配列および効果を示す。 図６はＩＬ−６Ｒ、ｇｐ１３０およびＩＬ−６リガンドからなるＩＬ−６受容 体複合体の３次元モデルを図式的に示す。このモデルはｈＧＨＲについてのデボ スらの結晶学のデータにもとづきコンピュータで作成した。ペプチド１０６３の 位置は黒丸で示し、鎖の方向は鎖の先を示す矢印（ｅｍｐｔｙ ａｒｒｏｗ）で 示す。ペプチド１０６２の部分は白四角で示し、ペプチド１０８６の部分は白楕 円で示す。全ては実施例３にも記載されている。 発明の詳細な説明 本発明は、１つの側面では、ＩＬ−６受容体系のｇｐ８０（ＩＬ−６Ｒ）サブ ユニットに由来し、かつＩＬ−６Ｒに特異的な１つまたはそれより多くのモノク ローナル抗体（Ｍａｂ）により認識される直鎖状エピトープであることを特徴と するＩＬ−６の活性を阻害することができる新規なペプチドに関する。 ＩＬ−６は多発性骨髄腫のＢリンパ球白血病性細胞、すなわち形質細胞腫細胞 または骨髄腫細胞の成長因子である。本発明によれば、前記新規ペプチドはＩＬ −６Ｒ分子内の短いペプチドであり、ＩＬ−６の活性を強く阻害するＭａｂであ るとして以前に単離され特徴付けられ た２つのＭａｂ（ノビック（Ｎｏｖｉｃｋ）ら、１９９２）と結合する能力によ り定義される。これらの新規なペプチドは化学的に合成され、そのような白血病 性細胞の培養物に加えられると、そのような形質細胞腫細胞／骨髄腫細胞の成長 の完全な阻害を引きおこすことがみとめられた。 このように、本発明の新規なペプチドまたは２つもしくはそれより多くの前記 ペプチドの混合物は、ＩＬ−６の阻害およびＩＬ−６に仲介される細胞の活性の 阻害のために一般的な様式で、前記活性を望まないときに用いられうる。たとえ ば、ＩＬ−６が異常に大量に細胞内で産生されるときもしくはＩＬ−６が多量に 投与されるとき、そして両方の状態においてＩＬ−６が体内で望ましくない高レ ベルに達して望ましくない副作用を生じるばあいには、本発明によるペプチドま たはその混合物が用いられうる。また、新規なペプチドを個別にまたは２つもし くはそれより多くのその混合物を、たとえば疾患を構成するがん性細胞（Ｂリン パ球白血病性細胞）の成長がＩＬ−６に依存するヒトの多発性骨髄腫などの疾患 の治療に特異的に用いられうる。本願では、本発明の新規なペプチドはＩＬ−６ 受容体とのＩＬ−６の結合に拮抗するか、細胞内で、骨髄腫細胞の成長に至る分 子シグナルを変換（ｔｒａｎｓｄｕｃｅ）する受容体系の機能に干渉する。 前記新規ペプチドのうち、好ましいペプチドはＩＬ−６Ｒ分子に由来の約４〜 約２５のアミノ酸残基を有するものであり、抗ＩＬ−６Ｒ Ｍａｂ３４．４およ び５０．６（両ＭａｂはＩＬ−６活性の有力な阻害剤であ る）のいずれかにより認識される直鎖状エピトープの範囲を限定する。これらの うちの好ましいペプチドには、（ａ）少なくともＩＬ−６Ｒ分子の位置２５５か ら位置２６４の１０アミノ酸配列ＬＲＹＲＡＥＲＳＫＴを有するペプチド、（ｂ ）少なくともＩＬ−６Ｒ分子の位置２５７から位置２６６の１０アミノ酸配列Ｙ ＲＡＥＲＳＫＴＦＴを有するペプチド、（ｃ）少なくともＩＬ−６Ｒ分子の位置 ２５９から位置２６８の１０アミノ酸配列ＡＥＲＳＫＴＦＴＴＷを有するペプチ ド、（ｄ）少なくともＩＬ−６Ｒ分子の位置２６１から位置２７０の１０アミノ 酸配列ＲＳＫＴＦＴＴＷＭＶを有するペプチド、（ｅ）少なくともＩＬ−６Ｒ分 子の位置２６３から位置２７２の１０アミノ酸配列ＫＴＦＴＴＷＭＶＫＤを有す るペプチド、（ｆ）少なくともＩＬ−６Ｒ分子の位置２４７から位置２５６の１ ０アミノ酸配列ＳＦＹＲＬＲＦＥＬＲを有するペプチド、（ｇ）少なくともＩＬ −６Ｒ分子の位置２４９から位置２５８の１０アミノ酸配列ＹＲＬＲＦＥＬＲＹ Ｒを有するペプチド、（ｈ）少なくともＩＬ−６Ｒ分子の位置２５１から位置２ ６０の１０アミノ酸配列ＬＲＦＥＬＲＹＲＡＥを有するペプチドが含まれる。 さらに、前記の好ましいペプチドは本明細書中に示されるペプチド、すなわち （ｉ）図２に示されるＩＬ−６Ｒ分子の位置２４７から位置２６０の配列を有す る１０６２、（ii）図２に示されるＩＬ−６Ｒ分子の位置２５５から位置２７０ の配列を有する１０６３、（iii）図２に示されるＩＬ−６Ｒ分子の位置２２６ から位置２４５の配列を有する１０８６、（iv）図２に示されるＩＬ −６Ｒ分子の位置２３４から位置２４５の配列を有する１０８５、および（ｖ） 図２に示されるＩＬ−６Ｒ分子の位置２６０から位置２６９の配列を有する１１ ２２のいずれをも含む。 さらに、本発明にしたがって、ＩＬ−６Ｒ分子上のＭａｂにより認識される直 鎖状エピトープを表わすペプチドを定義し、単離し、かつ特徴付けるためのＭａ ｂを使用することにより、ＩＬ−６Ｒタンパク質の機能に直接関与するペプチド 、たとえばこのタンパク質の機能に干渉することができる、すなわち（ＩＬ−６ Ｒにより仲介される）ＩＬ−６の活性を阻害することができる本発明のペプチド のようなペプチドを定義し、単離する新規な方法が提供されるということも注目 されるべきである。Ｍａｂのこの使用はＭａｂが最も頻繁にタンパク質内の立体 配置を認識することにより前記タンパク質と結合し、より例外的には、タンパク 質のアミノ酸配列の直鎖状断片により前記タンパク質と結合するというこれまで の知見からみて極めて重要である。 別の側面では、本発明は、ＩＬ−６受容体系のｇｐ８０（ＩＬ−６Ｒ）サブユ ニットに由来し、かつＩＬ−６との結合に関与するＩＬ−６Ｒの領域の部分また は全体であることにより特徴付けられるＩＬ−６の活性を阻害することができる 新規なペプチドにも関する。 したがって、これらのほかの新規なペプチドは既知のＭａｂにより認識される 直鎖状エピトープであるという利点により定義され単離されることはないが、そ れにもかかわらずＩＬ−６受容体とのＩＬ−６の結合に拮抗するか、細胞内でＩ Ｌ−６に依存する細胞、たとえば骨髄 腫細胞の成長に至る分子シグナルを変換する受容体系の機能に干渉するペプチド を意味する。したがって、これらのペプチドは前記と同様の方法、すなわちＩＬ −６活性の阻害を望むときは、一般的にその阻害のために、またはヒトの多発性 骨髄腫におけるようなＩＬ−６に依存するがん性細胞の抑制のために特異的に用 いられうる。 これらのほかの新規なペプチドのうち、好ましいペプチドは、（ａ）表１に示 されるＩＬ−６Ｒ分子の位置２７７から位置２９９の配列を有する９８３、（ｂ ）表１に示されるＩＬ−６Ｒ分子の位置２９０から位置３００の配列を有する１ ０６４、（ｃ）表１に示されるＩＬ−６Ｒ分子の位置１２５から位置１３５の配 列を有する１０６７を含む。 さらに別の側面では、本発明は前記新規ペプチドのいずれかの生物学的に活性 な類似体に関する。適切な類似体はＩＬ−６受容体とのＩＬ−６の結合を拮抗す るか、または細胞内でＩＬ−６に依存する細胞、たとえば骨髄腫細胞の成長に至 る分子シグナルを変換する受容体系の機能に干渉することによりＩＬ−６活性を 阻害する能力を維持するものである。これらの適切な類似体には、Ｍａｂ３４． ４および５０．６により認識される直鎖状エピトープの本質的なアミノ酸残基を 維持する類似体も含まれる。本発明のこれらの類似体は、類似体のアミノ酸配列 のもととなるペプチドアミノ酸配列と比較すると、別のアミノ酸により挿入、欠 失または置換された少なくとも１つのアミノ酸残基を有するものである。 本発明の類似体の前記特徴の利点により、これらの類似体は本発明の新規なペ プチドと同様の方法、すなわち 一般にはＩＬ−６活性の阻害剤としてか、またはＩＬ−６に依存するがん性細胞 の成長、たとえば多発性骨髄腫の治療剤として用いられうる。 本発明のペプチドおよび類似体は当該技術のいかなる周知の操作、とくに、自 動ペプチド合成とそれに続くクロマトグラフィーによる精製を利用する充分に確 立された化学的合成操作により製造されうる（実施例２参照）。 さらなる側面では、本発明は有効成分として前記新規ペプチド、類似体または ２つもしくはそれより多くのペプチドもしくは類似体の混合物のいずれかと、周 知の薬学的に許容しうる担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物にも関する 。 これらの医薬組成物は所望する投与、たとえば静脈内、腹腔内または経口投与 のためのいずれかの形態に製剤化されうる。したがって、希釈剤、担体または賦 形剤の選択は所望する投与の様式にしたがって行なわれるであろう。 実際の投与の様式およびそのための最適な製剤は、専門の医師により決定され るであろう。同様に、投与の様式にしたがった投与の用量およびそのための各用 量における有効成分の濃度も専門の医師により決定されるであろう。しかしなが ら、これらに関して、いずれの投与経路であっても、適切に作用する投与量の形 態は、投与ののちペプチド、類似体またはそれらの混合物の体内濃度が約５０〜 １００μＭになるものであると考えられる。 本発明の医薬組成物は、ＩＬ−６レベルが異常に高いばあいに前記のように、 前記のような治療が指示される ときＩＬ−６の阻害のために用いられうるし、または疾患組織がＩＬ−６に依存 する、たとえば多発性骨髄腫では骨髄腫細胞がＩＬ−６に依存する悪性の成長を 構成する、そのような疾患を治療するために特異的に用いられうる。 本発明を以下の非限定的な実施例およびそれにともなう図面によりさらに詳細 に説明する。実施例１：Ｍａｂ３４．４および５０．６により認識されるエピトープ 本発明者らの１人を含むグループにより以前に製造され、特徴付けられたモノ クローナル抗体３４．４および５０．６はＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）のｇｐ ８０サブユニットとのＩＬ−６の結合を阻害すること、それゆえヒトの細胞との ＩＬ−６の結合およびその生物学的活性を阻害することが示された（ノビックら 、１９９２）。 ２つの抗体３４．４および５０．６は本発明にしたがってＩＬ−６Ｒの細胞外 ドメインに由来の直鎖状ペプチドを認識するその能力に関して研究された。この 目的のために、標準的な化学的合成操作（実施例２も参照）を用いて、ＩＬ−６ Ｒ配列の残基１２３〜３２２にわたる１シリーズの９６個のデカペプチドを合成 した。各々の連続するペプチドは先の１つのペプチドから２つのアミノ酸をはず しそれを補うことにより相殺されており、組み合わされ、重複するライブラリー が結果としてえられた（図１のＩＬ−６Ｒ配列および図２に示されるいくつかの ペプチド参照）。その９６個のペプチドを担持する 膜をＭａｂ３４．４（１８μｇ／ｍｌ）と反応させ、β−ガラクトシダーゼ接合 ２次抗体（抗マウスイムノグロブリン抗体）で染色した。膜上に２シリーズのβ −ガラクトシダーゼのポジティブなスポットがみられ、一方は残基２２３〜２４ ０に対応するスポットであり、他方は残基２４１〜２７２に対応するスポットで あった。類似の実験を西洋ワサビペルオキシダーゼ接合２次抗体を用いて、増強 した化学発光による検出を行なった（イーシーエル・キット（ＥＣＬ ｋｉｔ） 、アマシャム・ラジオケミカルス（ａｍｅｒｓｈａｍ Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃ ａｌｓ）、英国）。この検出法は、より定量的に抗体と別個のペプチドとの反応 の強さを比較できる。強い反応がアミノ酸２５５〜２６４、２５７〜２６６、２ ５９〜２６８および２６１〜２７０に対応する４つのペプチドスポット（６７、 ６８、６９および７０）でみられた。これらの結果を図２に示す。図２は、本明 細書中１０８６、１０６２および１０６３と呼ぶ３種のペプチドの範囲をボック スで示したＩＬ−６Ｒアミノ酸配列の断片を図式的に示し（図の上部）、ペプチ ド１０８６、１０６２および１０６３に含まれる種々の重複するデカペプチドの Ｍａｂとの反応の結果も示す（図の下部）。これらの反応結果において、数字は 膜グリッド上（スポット−スキャン試験）の各ペプチドの位置を表わし、「＋」 の符号は反応の程度（＋＋＋＝非常に強い反応、＋＋＝強い反応、および＋＝中 位の強さの反応）を示す。このように、これらの結果から、Ｍａｂ３４．４に由 来のエピトープの中心はＲＳＫＴ（２６１〜２６４）であるが、恐らくはさらに この中心の周辺の残基にも及 ぶであろうことが明かになった。 同様の方法で、ＩＬ−６Ｒの９６ペプチドライブラリーを、イーシーエル検出 法でＭａｂ５０．６を用いて検出した。スポット６４および６５は最も強く反応 し、この第２の中和抗体（ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ）に対 する中心エピトープとして配列２５１〜２５８が示された（図２）。実施例２：Ｍａｂ３４．４および５０．６により定義されるエピトープに対応す る合成ペプチドはハイブリドーマ細胞の成長についてＩＬ−６の生物学的活性を 阻害する 中和Ｍａｂ３４．４および５０．６が結合するＩＬ−６Ｒ配列の領域は前記の ようにして決定した（図２）。示したペプチド１０６２（ＩＬ−６Ｒの残基２５ ７〜２６０）、１０６３（２５５〜２７０）および１０８６（２２６〜２４５） はアプライド・バイオシステムズ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）（ フォスター（Ｆｏｓｔｅｒ）市、カナダ）製のペプチド合成装置を用いて、固相 合成によりえた。ペプチドの純度をアクアポア（Ａｑｕａｐｏｒｅ）Ｃ８ カラ ム（ブラウンリー（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ））を用いた逆相高性能液体クロマトグラ フィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）により確認した。 つぎに、これらの精製したペプチドの細胞に対するＩＬ−６活性に干渉する能 力について試験した。その理論的根拠は、ＩＬ−６活性をブロックする抗体はこ れらのペプチド内のエピトープ配列と結合するので、これらの配列が受容体複合 体内のいくつかのタンパク質−タンパ ク質相互作用にとって重要であろうということである。このために、これらのペ プチドは前記のような相互作用をそれら自身で模倣し、受容体系の機能に必要な 正常のタンパク質−タンパク質接触に干渉することができる。 形質細胞腫細胞の成長に対するＩＬ−６活性の阻害剤としてのペプチドの生物 学的活性をアッセイするために、成長がＩＬ−６に依存するハイブリドーマ細胞 系Ｂ９（ヘレ（Ｈｅｌｌｅ）ら、１９８８）を用いた。Ｂ９細胞を１０％熱不活 化ウシ胎仔血清および４Ｕ／ｍｌのＩＬ−６を含む増殖培地ＲＰＭＩ１６４０（ バイオラブズ社（Ｂｉｏｌａｂｓ Ｌｔｄ．）、イスラエル国）の懸濁液で培養 した。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞由来の組換えヒトＩＬ−６は Ｔ１１６５形質細胞腫細胞５×１０⁶単位（ｕｎｉｔ）／ｍｇ（１．５×１０⁷国 際単位／ｍｇに相当する）と力価測定された（ノビックら、１９８９に）記載さ れているような純粋な調製物であった。本明細書中に用いられる単位はＴ１１６ ５単位（１単位＝３国際単位）である。 アッセイの前に、Ｂ９細胞を洗浄し、５時間、ＩＬ−６を含まない増殖培地中 でインキュベートした。細胞を遠心分離し、２．５単位／ｍｌ（すなわち、７． ５ＩＵ／ｍｌ）のＩＬ−６を含む増殖培地中に再懸濁し、ウェルあたり０．２ｍ ｌの最終容量として５０，０００個の細胞を９６ウェルマイクロプレート（ヌン ク（Ｎｕｎｃ）、デンマーク王国）に播種した。適切なペプチド濃度の水溶液２ ５μｌが各ウェルの最終容量に含まれていた。すなわち、６２．５μｇ／ｍｌか ら２５０μｇ／ｍｌの範囲の濃度のペプチド（および０μｇ／ｍｌのコン トロール）をＩＬ−６とともに添加した。３７℃で３日間培養したのち、アラマ ー・ブルー（Ａｌａｍａｒ Ｂｌｕｅ）（バイオソース（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ） 製、カマリロ（Ｃａｍａｒｉｌｌｏ）、カナダ）の溶液をウェルあたり２０ｐｇ ／ｍｌで添加し、混合したのち、３時間インキュベーションを続行した。各ウェ ルの５３０ｎｍ波長での吸光度を製造者により特定されたようにして測定した。 吸光度は５０，０００から１０⁶個のＢ９細胞の検定実験（本実験の条件下では ５×１０⁵個のＢ９細胞に対応する０．２５のＯＤ５３０）で確認されたように ウェル中の生細胞の数に直接的に比例した。結果をＩＬ−６を用いた最終細胞密 度とＩＬ−６を用いなかった最終細胞密度との差で表わした。 前記実験の結果を図４に示す。図４はＢ９形質細胞腫由来の細胞のＩＬ−６に 依存する成長に対するペプチド１０６２、１０６３およびコントロールペプチド の効果をグラフで示す（下記および表１参照）。これらの結果から明らかなよう に、添加するペプチド１０６３（２５５〜２７０）の濃度を上げていくとＢ９細 胞の成長を用量依存的に阻害するという結果がえられた。最も高い用量では、成 長の阻害は９９％であった。完全な阻害もペプチド１０６２（２５７〜２６０） を用いてもえられたが、異なる用量曲線であった。反対に、（下記の表１に示し た関係のない配列を有する）コントロールペプチド、９０３はＢ９細胞のＩＬ− ６に依存する成長を阻害しなかった。したがって、中和Ｍａｂ３４．４および５ ０．６の中心エピトープに相当する２つのペプチド１０６２および１０６３は形 質細胞腫由来細胞のＩＬ−６に 依存する成長の有力な特異的阻害剤である。 ペプチド１０６３（２５５〜２７０ＮＭａｂ３４．４エピトープ）の活性を５ つの別個の実験で試験した。３種類の用量での阻害は統計学上高度に有意であっ た（下記の表２）。コントロールペプチド９０３とペプチド１０６３の直接比較 は、ペプチド１０６３がコントロールペプチドの半分の濃度で用いられても、Ｂ ９細胞由来の形質細胞腫のＩＬ−６に依存する成長の高度に有意な阻害を示した （下記の表２の解説参照）。実施例３：ハイブリドーマＢ９細胞成長の阻害のためのＩＬ−６Ｒ配列のほかの 領域に由来のペプチドとＭａｂ３４．４および５０．６エピトープ由来のペプチ ドとの比較 ５つのペプチドを前記のようにして（実施例２）、ＩＬ−６Ｒ配列の異なる領 域に対応して製造した（前記表１参照）。ペプチド９８３および１０６４はリガ ンド結合に関与するｈＧＨＲ内の領域に相同な領域であり（図１、デボスら、１ ９９２）、ＩＬ−６と結合することが示されているＲＡＱＥＥＦモチーフを含む 領域（マーチン（Ｍａｒｔｉｎ）ら、１９９４）に対応する。ペプチド１０６７ もｈＧＨＲ分子内でリガンド結合に関与する領域に対応する（図１）。ペプチド １０８６はｇｐ１３０と相互作用することが示されており（サビノ（Ｓａｖｉｎ ｏ）ら、１９９４）、Ｍａｂ３４．４および５０．６のエピトープに近い領域に 対応する（図２）。これら のペプチドを実施例２のようにして、形質細胞腫由来Ｂ９細胞のＩＬ−６に依存 する成長に対するその効果を試験した。 残りのＩＬ−６に依存する成長を比較すると（下記の表３参照）、重なってい るペプチド９８３および１０６４はペプチド１０６３（２５５〜２７０）と比べ て活性ではないことが示される。ペプチド１０６７はいくらかの活性を示したが 、ペプチド１０６３より低かった。４回の実験のシリーズにおいて、ペプチド１ ０６７の存在下での残りの成長は６２％±４３であり、統計上有意ではなかった 。しかしながら、ペプチド１０８６（２２６〜２４５）は活性を示したが、ペプ チド１０６２および１０６３の活性よりは低かった。図４はＢ９形質細胞腫由来 細胞の成長に対するペプチド１０６２、１０６３、１０６７および１０８６の効 果を互いに比較して、またはコントロールペプチド９０３と比較してグラフで示 す。示した結果は４回の実験の平均の結果である。 図５は前記ペプチド１０６２および１０６３の配列を再度、ならびにＢ９形質 細胞腫由来細胞の成長に対するそれらの効果、加えてそれぞれ低い効果および強 い効果を有するペプチド１１１８および１１２２の効果ならびに不活性であるこ とがわかっている２つの関連するペプチドの効果を示す。 ＩＬ−６Ｒ分子の３次元モデルをｈＧＨＲの結晶学的な相対的位置（ｃｒｙｓ ｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃ ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅ）にもとづいて作成した。Ｉ Ｌ−６Ｒ、ｇｐ１３０およびＩＬ−６リガンドからなるＩＬ−６Ｒ複合体の３次 元モデルを図５に図式的に示す。このモデルはｈＧＨＲについてのデボス（１９ ９２）の結晶学的データにもとづいてコンピュータで作成した。試験した異なる ペプチドの位置を示す。ペプチド１０６３（２５５〜２７０、黒丸により示す） はＩＬ−６リガンドとは相互作用しないようであった。ペプチド１０６２（２４ ７〜２６０、ペプチド１０６３との重なりより前の領域において白四角により示 す）はＩＬ−６と相互作用することができる位置２４７の周辺の残基を含まない 。ペプチド１０８６（２２６〜２４５、白楕円により示す）はｇｐ１３０と相互 作用するループを含む。ｇｐ１３０はＩＬ−６とＩＬ−６Ｒの結合の結果、二量 化し（ヒラノら、１９９４）、ＩＬ−６Ｒも同様に二量化して六量体の複合体を 形成しうることが知られている。図５に示した三量体の複合体の２つの対称な集 合によるこ の六量体の複合体のコンピュータモデルを構築すると、ペプチド１０６３および １０６２の部分がＩＬ−６Ｒとｇｐ１３０の第２の相互作用に関係することが明 らかになった。したがって、活性なペプチドに共通な領域、とくにＩＬ−６の最 も活性のある阻害剤であるペプチド１０６３はＩＬ−６Ｒとｇｐ１３０との相互 作用に干渉し、六量体の複合体を形成し、それによりＩＬ−６受容体複合体の機 能を阻害すると考えられる。 実施例４：Ｍａｂ３４．４および５０．６エピトープにより定義されるペプチド はヒト骨髄腫細胞のＩＬ−６に依存する成長を阻害する 多発性骨髄腫はＩＬ−６が促進性（ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ）成長因子であると考 えられている形質細胞の白血病である（クラインら、１９９０）。したがって、 決定すべき興味の対象は、エピトープＭａｂ３４．４および５０．６に由来のペ プチドまたはそのほかのペプチドがそのような腫瘍細胞の成長を阻害するかどう かであった。ＸＧ−１細胞系は多発性骨髄腫を有する患者から確立され（クライ ンら、１９９０）、これらの細胞の成長はＩＬ−６の添加に依存する。ＸＧ−１ 細胞の培養物は６ウェルのコスター（Ｃｏｓｔａｒ）プレートで、１ｍｌの最終 容量で確立した。細胞をＩＬ−６（０．２Ｕ／ｍｌ、すなわち０．６ＩＵ／ｍｌ ）を用いて、または用いずに３日間培養し、つぎにトリチウム標識化チミジンで ２時間パルスラベル（ｐｕｌｓｅ）した。放射性チミジンの取り込みをＤＮＡ複 製および成長の測定に用いた。下記の表４に示すように、ＩＬ−６に依存する成 長は１ ００μｇ／ｍｌのペプチド１０６２の添加により大きく減少し（８５％まで）、 ペプチド１０６３を用いると５５％を超えて減少した。反対にペプチド１０６４ では、わずかな阻害効果しかなかった。ペプチド１０６７もこれらのヒト骨髄腫 細胞の成長を阻害するための活性を有することがわかった（下記の表４参照）。 したがって、ＩＬ−６Ｒペプチドはヒトの腫瘍細胞においてヒトＩＬ−６受容 体複合体の機能を阻害することができる。 前記の結果（実施例１〜４）からみて、これらの結果（「本発明」）とコクラ ンにより記載されたペプチドに関する以前に報告された結果（グルーブおよびコ クラン、１９９４、「従来技術」）とのあいだで比較した。この比較による分析 を下記の表５に記載する。コクランはペプチド２４９〜２６４（Ｙ２４９〜Ｔ２ ６４）がＢ９リンパ球腫由来の細胞に対し活性であることのみを示し、一方でコ クランにより記載されたほかのペプチドはフィブリノーゲン分泌に対する効果の ためのＨｅｐＧ２ 細胞に対して試験されたことに注目すべきである。反対に、（１０６２と１０６ ３に関してはいくらか重なるけれども）コクランのペプチドとは全て異なる本発 明のペプチド１０６２（２４７〜２６０）、１０６３（２５５〜２７０）、１０ ８６（２２６〜２４５）および１１２２（２６０〜２６９）はＢ９細胞に対して 活性であることが示された。さらに、ペプチド１０６２および１０６３はヒト骨 髄腫ＸＧ−１細胞を阻害する。さらにまた、本発明とコクランとの最も類似する （とはいえ、なおも異なる）ペプチド、すなわちそれぞれ１０６３（２５５〜２ ７０）および２５５〜２６８は活性が異なる。ＨｅｐＧ２細胞に対し試験された コクランのペプチド（２５５〜２６８）が不活性であったのに対し、本発明のペ プチド１０６３（Ｌ２２５〜Ｖ２７０）は本発明にしたがいＢ９細胞に対し活性 であることが示された。 最後に、本発明にしたがい製造され、特徴付けられたペプチドは以前に製造さ れたＭａｂ３４．４および５０．６を用いてエピトープマッピングという最初の 操作により単離した。反対に、コクランは異なるペプチドのランダム合成により ペプチドを製造した。 参考文献 Ｂazan Ｊ.Ｆ.(1990)Ｓtructural design and molecular evolution of a cytok ine receptor superfamily.Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ 87:6934-6938. 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───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 38/00 Ｃ０７Ｋ 14/54 Ｃ０７Ｋ 14/54 16/24 16/24 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，Ｓ Ｚ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ， ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，Ｇ Ｅ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ， ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，Ｐ Ｌ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ， ＶＮ (72)発明者 アリミ、ユベール フランス共和国、ストラスブール セデ 67084、15 リュー デ カルテ、ラボラ トワール ダムノシミー デ ペプチド エ ビリス、セーエヌアールエス イーベ ーエムセー (72)発明者 レベル、マイクル イスラエル国、レホボト 76100、ワイズ マン インスティチュート オブ サイエ ンス、ベイト ブラジル ５

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．ＩＬ−６の活性を阻害することができるペプチドまたはその生物学的に活性 な類似体であって、該ペプチドがＩＬ−６受容体系のｇｐ８０（ＩＬ−６Ｒ）サ ブユニット由来であり、かつＩＬ−６Ｒに特異的な１つまたはそれより多くのモ ノクローナル抗体（Ｍａｂ）により認識される直鎖状エピトープであるが、該ペ プチドから（ｉ）ＩＬ−６Ｒ分子の残基２４９〜２６４のアミノ酸配列を有する １６アミノ酸ペプチド、（ii）ＩＬ−６Ｒ分子の残基２５５〜２６８のアミノ酸 配列を有する１４アミノ酸ペプチド、（iii）ＩＬ−６Ｒ分子の残基２４９〜２ ５４のアミノ酸配列を有する６アミノ酸ペプチド、（iv）ＩＬ−６Ｒ分子の残基 ２５９〜２６８のアミノ酸配列を有する１０アミノ酸ペプチドおよび（ｖ）ＩＬ −６Ｒ分子の残基２４９〜２５８のアミノ酸配列を有する１０アミノ酸ペプチド からなるペプチドの群は除かれる、ペプチドまたはその生物学的に活性な類似体 。 ２．請求の範囲第１項記載のペプチドまたはその生物学的に活性な類似体であっ て、図２に示される残基２２３〜残基２７２にわたるＩＬ−６Ｒ分子の部分に由 来の約４〜約２５のアミノ酸残基を有するペプチドの群から選ばれ、該ペプチド の群は （ａ）少なくともＩＬ−６Ｒ分子の位置２５５から位置２６４までの１０アミ ノ酸配列ＬＲＹＲＡＥＲＳＫＴを有するペプチド、 （ｂ）少なくともＩＬ−６Ｒ分子の位置２５７から位 置２６６までの１０アミノ酸配列ＹＲＡＥＲＳＫＴＦＴを有するペプチド、 （ｃ）少なくともＩＬ−６Ｒ分子の位置２５９から位置２６８までの１０アミ ノ酸配列ＡＥＲＳＫＴＦＴＴＷを有するペプチド、 （ｄ）少なくともＩＬ−６Ｒ分子の位置２６１から位置２７０までの１０アミ ノ酸配列ＲＳＫＴＦＴＴＷＭＶを有するペプチド、 （ｅ）少なくともＩＬ−６Ｒ分子の位置２６３から位置２７２までの１０アミ ノ酸配列ＫＴＦＴＴＷＭＶＫＤを有するペプチド、 （ｆ）少なくともＩＬ−６Ｒ分子の位置２４７から位置２５６までの１０アミ ノ酸配列ＳＦＹＲＬＲＦＥＬＲを有するペプチド、 （ｇ）少なくともＩＬ−６Ｒ分子の位置２４９から位置２５８までの１０アミ ノ酸配列ＹＲＬＲＦＥＬＲＹＲを有するペプチド、 （ｈ）少なくともＩＬ−６Ｒ分子の位置２５１から位置２６０までの１０アミ ノ酸配列ＬＲＦＥＬＲＹＲＡＥを有するペプチド、および （ｉ）１つまたはそれより多くのアミノ酸残基が別のアミノ酸残基により挿入 、欠失または置換された（ａ）〜（ｈ）のいずれか１つのペプチドの類似体から なり、かつ（ａ）〜（ｉ）の該ペプチドおよび類似体が抗ＩＬ−６Ｒモノクロー ナル抗体により認識される直鎖状エピトープの全体または部分を定義することと ＩＬ−６活性を阻害することができることにより特徴付けられるペプチドまたは その生物学的に活性な 類似体。 ３．該ペプチドまたは類似体がＭａｂ３４．４およびＭａｂ５０．６と本明細書 中に示されるＭａｂの一方または両方により認識される直鎖状エピトープを定義 する請求の範囲第１項または第２項記載のペプチドまたはその類似体。 ４．該ペプチドが本明細書中に示されるペプチド、すなわち（ｉ）図２に示され るＩＬ−６Ｒ分子の位置２４７から位置２６０の配列を有する１０６２、（ii） 図２に示されるＩＬ−６Ｒ分子の位置２５５から位置２７０の配列を有する１０ ６３、（iii）図２に示されるＩＬ−６Ｒ分子の位置２２６から位置２４５の配 列を有する１０８６、および（ｉｖ）図２に示されるＩＬ−６Ｒ分子の位置２３ ４から位置２４５の配列を有する１０８５、ならびに（ｖ）図２に示されるＩＬ −６Ｒ分子の位置２６０から位置２６９の配列を有する１１２２のいずれか１つ から選ばれた請求の範囲第１項乃至第３項のいずれか１つに記載のペプチド。 ５．ＩＬ−６の活性を阻害することができるペプチドまたはその生物学的に活性 な類似体であって、該ペプチドがＩＬ−６受容体系のｇｐ８０（ＩＬ−６Ｒ）サ ブユニット由来であり、かつＩＬ−６との結合に関与するＩＬ−６Ｒの領域の部 分または全体であることにより特徴付けられるが、該ペプチドから（ｉ）ＩＬ− ６Ｒ分子の残基２４９〜２６４のアミノ酸配列を有する１６アミノ酸ペプチド、 （ii）ＩＬ−６Ｒ分子の残基２５５〜２６８のアミノ酸配列を有する１４アミノ 酸配列ペプチド、（iii）ＩＬ−６Ｒ分子の残基２４９ 〜２５４のアミノ酸配列を有する６アミノ酸ペプチド、（iv）ＩＬ−６Ｒ分子の 残基２５９〜２６８のアミノ酸配列を有する１０アミノ酸ペプチド、および（ｖ ）ＩＬ−６Ｒ分子の残基２４９〜２５８のアミノ酸配列を有する１０アミノ酸ペ プチドからなる群は除かれる、ペプチドまたはその生物学的に活性な類似体。 ６．請求の範囲第５項記載のペプチドまたは類似体であって、該ペプチドが本明 細書中に示されるペプチド、すなわち（ａ）表１に示されるＩＬ−６Ｒ分子の位 置２７７から位置２９９の配列を有する９８３、（ｂ）表１に示されるＩＬ−６ Ｒ分子の位置２９０から位置３００の配列を有する１０６４、（ｃ）表１に示さ れるＩＬ−６Ｒ分子の位置１２５から位置１３５の配列を有する１０６７、およ び（ｄ）１つまたはそれより多くのアミノ酸残基が別のアミノ酸残基により挿入 、欠失または置換された（ａ）〜（ｃ）のいずれか１つの類似体から選ばれるペ プチドまたは類似体。 ７．有効成分として請求の範囲第１項乃至第４項のいずれか１つに記載の少なく とも１つのペプチドもしくはその類似体または２つもしくはそれより多くのペプ チドもしくはその類似体の混合物と、薬学的に許容しうる担体、希釈剤もしくは 賦形剤からなる医薬組成物。 ８．ＩＬ−６の阻害のための請求の範囲第７項記載の医薬組成物。 ９．多発性骨髄腫の治療のための請求の範囲第７項または第８項記載の医薬組成 物。 10．ペプチドもしくはその類似体またはペプチドもしく はその類似体の混合物の量が、該医薬組成物を投与したのちに体内で５０〜１０ ０ｐＭの濃度を与えるに充分である請求の範囲第７項乃至第９項のいずれか１つ に記載の医薬組成物。 11．該医薬組成物の製造のための請求の範囲第１項乃至第４項のいずれか１つに 記載のペプチドもしくはその類似体または２つもしくはそれより多くのペプチド もしくはその類似体の混合物の使用。 12．多発性骨髄腫、骨粗鬆症および自己免疫疾患を治療するための医薬の製造の ための請求の範囲第１項乃至第４項のいずれか１つに記載のペプチドもしくはそ の類似体または２つもしくはそれより多くのペプチドもしくはその類似体の混合 物の使用。 13．ＩＬ−６活性の阻害のための請求の範囲第１項乃至第４項のいずれか１つに 記載のペプチドもしくはその類似体または２つもしくはそれより多くのペプチド もしくはその類似体の混合物の使用。 14．多発性骨髄腫の治療のための請求の範囲第１項乃至第４項のいずれか１つに 記載のペプチドもしくはその類似体または２つもしくはそれより多くのペプチド もしくはその類似体の混合物の使用。 15．ＩＬ−６の阻害における使用のための請求の範囲第１項乃至第４項のいずれ かに記載のペプチド、類似体またはペプチドもしくはその類似体の混合物。 16．多発性骨髄腫の治療における使用のための請求の範囲第１項乃至第４項のい ずれか１つに記載のペプチド、類似体またはペプチドもしくはその類似体の混合 物。 17．医薬組成物の製造における使用のための請求の範囲第１項乃至第４項のいず れか１つに記載のペプチド、類似体またはペプチドもしくはその類似体の混合物 。 18．有効成分として請求の範囲第５項または第６項記載の少なくとも１つのペプ チドもしくはその類似体または２つもしくはそれより多くのペプチドもしくはそ の類似体の混合物と、薬学的に許容しうる担体、希釈剤もしくは賦形剤からなる 医薬組成物。 19．ＩＬ−６の阻害のための請求の範囲第１８項記載の医薬組成物。 20．多発性骨髄腫の治療のための請求の範囲第１８項または第１９項記載の医薬 組成物。 21．医薬組成物の製造のための請求の範囲第５項または第６項記載のペプチド、 類似体またはペプチドもしくは類似体の混合物の使用。 22．多発性骨髄腫の治療における使用のための請求の範囲第５項または第６項記 載のペプチド、類似体またはペプチドもしくは類似体の混合物。