JP2000038402A - 架橋された単糖及びオリゴ糖の粒子、特にマイクロ粒子又はナノ粒子、それらの調製法、並びに、それらを含有する化粧用、医薬用又は食物組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】化粧品、医薬品又は食品組成物の製造に使用で
きる粒子を製造する。 【解決手段】 単糖又はオリゴ糖のアシル化可能な一級
アルコールの水酸基、及び、多官能性アシル化架橋剤の
アシル基との間でエステル結合が生成するように、少な
くとも１つの一級アルコール基を有する単糖又はオリゴ
糖と、多官能性アシル化架橋剤、好ましくは二酸ハロゲ
ン化物、さらに好ましくは二酸塩素化物との間で、好ま
しくは室温において、乳化物中で界面架橋することによ
って架橋された１つ又は複数の単糖又はオリゴ糖から形
成される壁が、少なくとも表面上にある粒子。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、架橋された単糖及
びオリゴ糖の粒子、特にマイクロ粒子又はナノ粒子、そ
れらの調製法、並びに、それらを含有する化粧用、医薬
用又は食物組成物に関する。これらの粒子は、好都合に
小容量である。加えて、これらの粒子は種々の親水性若
しくは脂溶性物質、並びに、特に医薬品、化粧品及び食
品の分野に使用可能な物質の配合、又は、カプセル化に
有利に使用される。本記述と請求項の骨子では、「小容
量の粒子」はマイクロ粒子及びナノ粒子の双方を示し、
「マイクロ粒子」又は「ナノ粒子」という言葉は、マイ
クロ球体又はナノ球体、及び、マイクロカプセル又はナ
ノカプセルの双方を示すものとする。さらに「マイクロ
球体」又は「ナノ球体」という言葉は、それらの体積全
体を通して基本的に均一構造を有する粒子のことを称
し、また「マイクロカプセル」又は「ナノカプセル」と
いう言葉は、固体、ゲル、液体若しくは気体の媒質で満
たされた内部の核若しくは空間を囲んでいる架橋壁を有
する粒子のことを称すものとする。

【０００２】

【従来の技術】粒子中に活性物質を封入することによ
り、例えば、封入された物質の保護や持続的効果を目的
とした使用部位において活性物質の解離を遅くする等の
価値ある利点が得られる。粒子を化粧品、医薬品又は食
品の分野に使用する目的である場合、その粒子はタンパ
ク質及び多糖類等の生体適合性を有する物質からなるも
のでなければいけない。例えば、高分子炭水化物等の多
糖類由来のマイクロカプセルの調製は、従来の技術文献
（参考、例えば、Ｐ．Ｂ．Ｄｅａｓｙ：Ｍｉｃｒｏｅｎ
ｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｐ
ｒｏｃｅｓｓｅｓ、Ｄｒｕｇｓ ａｎｄｔｈｅ Ｐｈａ
ｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ｖｏ
ｌ．２０，１９８４，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ）に
広く記載されている。特に上記化合物は、単純なコアセ
ルベートを基にしたマイクロ粒子封入法で得られる化合
物自体が使用でき、又は、多価電解質複合体の生成を基
にした手法で得られる多カチオン性高分子と会合させる
ことができる。

【０００３】マイクロカプセルは、例えば、ヒドロキシ
プロピルセルロースから調製されるマイクロカプセルに
関する文献ＦＲ−Ａ−２ ２７５ ２５０、又は、天然
ゴム若しくはキトサンを提案した文献ＵＳ４ １３８
３６２に記載されている多官能性イソシアネートを用い
た多糖類の界面架橋により調製される。さらに、共架橋
されたグルコサミノグリカン及びコラーゲンから生成さ
れた壁を有するマイクロカプセルは、グルコサミノグリ
カン及びコラーゲン混合物の二酸塩化物による界面架橋
する用途に関する文献ＦＲ−Ａ−２ ６４２ ３２９に
記載されている。

【０００４】乳化物系において二酸塩化物を用いた界面
架橋としては、文献ＥＰ−０ ６３０２８７ Ｂ１にお
いて、反応ｐＨ値が１０以下である多糖類からの粒子の
調製法にも利用されてきた。マイクロカプセルの調製法
としての種々の方法において、使用される炭水化物は、
例えば、多数の糖ユニットの会合体からなり、５０００
ダルトンを超過する高分子量の分子等の多糖類である。
実際、タンパク質及び多糖類の様な高分子は界面で特定
の吸着特性を有することが知られている（参考として、
例えば、以下の文献：“Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｐｒｏ
ｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｆｏｏｄ ｍａｃｒｏｍｏｌｅ
ｃｕｌｅｓ” Ｍｉｔｃｈｅｌｌ Ｊ．Ｒ．及び Ｌｅ
ｄｗａｒｄ Ｄ．Ａ．編，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｌｏｎｄ
ｏｎ，１９８６の３１７−３３５頁）。上記界面での吸
着現象は、結果として界面膜の生成が生じるものである
が、それは多糖類等の生体高分子の界面架橋による粒子
の調製に特に好ましい要素である。５０００ダルトン以
下の分子量の炭水化物として、従来の技術文献には、種
々の分子が立体構造を損なわず付着することができる疎
水孔を有する環状オリゴ糖であるシクロデキストリン由
来の高分子ビーズの調製法を記載している。最も広く使
用される架橋剤は、例えば、Ｗｉｅｄｅｎｈｏｆ Ｎ．
ら（Ｄｉｅ Ｓｔｒｋｅ，１９６９，２１，１１９−１
２３）の文献のエピクロヒドリンである。

【０００５】二塩化物酸の使用に関する限り、文献ＵＳ
３，４７２，８３５には、均一溶媒（ＤＭＦ又はＤＭＳ
Ｏ）中での架橋によるシクロデキストリン樹脂の調製法
が記載されている。しかしながら、調製条件が厳しく、
１００℃で長期間（６時間）で行われる反応である。そ
の上、付着されるべき物質は、密集したビーズ中へ容易
に分散しない。系中で二酸化炭素の解離を生じさせるか
（文献ＵＳ４，９５８，０１５）、若しくは、多孔性鉱
酸化物の表面上で架橋を行うか（文献ＵＳ４，９０２，
７８８）のいずれかにより、高分子の間隙率を向上させ
ることが提案されている。文献ＵＳ４，９０２，７８８
には（３頁、３欄、５４−５５行目）、芳香族酸二塩化
物では樹脂の収率が相対的に低いという主要な欠点が記
載されている。このように、従来技術では、乳化物系中
で二酸塩化物を用いた、シクロデキストリン等の単糖類
又はオリゴ糖を界面架橋することによる粒子の調製法が
記載されておらず、また、示唆されもしていない。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の１つの主な目
的は、必要に応じて種々の親水性若しくは脂溶性物質を
配合し、医薬品、化粧品及び食品分野において使用され
うる、生物適合性であり、且つ、生分解性で安定な粒子
を提供することからなる、新規技術的課題を解くことで
ある。

【０００７】さらに本発明の主な目的は、一定の品質を
有する粒子を提供する特に簡単な製造方法により、生物
適合性であり、且つ、生分解性である粒子であって、好
ましくは全く明確な化学組成物の物質に由来する粒子で
あり、好ましくは室温において水層で好適に溶解されう
る粒子を提供することからなる新規技術的課題を解決す
ることである。

【０００８】本発明の一つの主な目的は、単糖類及びオ
リゴ糖由来の、生物適合性であり、且つ、生分解性であ
る小容量の新規粒子を提供することからなる新規技術的
課題を解決することである。さらに本発明の目的は、必
要に応じて、溶液、懸濁液又は乳化物の形態で、１つ又
は複数の活性物質を封入することが可能であると同時
に、単糖類及びオリゴ糖由来の、小容量の安定な粒子の
調製のための解決法を提供することからなる新規技術的
課題を解決することである。

【０００９】さらに本発明の目的は、シクロデキストリ
ン、特にβ−シクロデキストリン由来であり、容易に液
体溶媒から単離でき、且つ、シクロデキストリンの特定
の付着容量を維持できる生物適合性であり、且つ、生分
解性である小容量の新規不溶性粒子の調製という解決法
を提供することからなる新規技術的課題を解決すること
である。さらに本発明の目的は、シクロデキストリン、
好ましくはβ−シクロデキストリン由来で、生物適合性
であり、且つ、生分解性である小容量の新規多孔質の不
溶性粒子であって、容易に種々の活性分子を充填でき、
より大きな粒子の素材を通して拡散することにより活性
分子のより遅く且つ維持された解離を実現する為に、生
物適合性であり、且つ、生分解性でもあるより大きな粒
子に配合することできる粒子の調製の為の解決法を提供
することからなる新規技術的課題を解決することであ
る。

【００１０】さらに本発明の目的は、組成物に配合され
た場合、安定性、特に色の安定性を損なうことなく、且
つ、皮膚に塗布された場合、皮膚のアミノ酸に結合し
て、色素形成がなされ得るジヒドロキシアセトン（ＤＨ
Ａ）を解離する、ＤＨＡ由来の製品を調製するための解
決法を提供することからなる新規技術的課題を解決する
ことである。さらに本発明の目的は、ＤＨＡを含有する
組成物のいかなる分解、特に時間経過によるいかなる色
の変化を阻止することである。

【００１１】さらに本発明の目的は、酵素加水分解によ
り出発物質を解離して、それによって価値ある生物学的
活性を有する化合物を遅く解離できるある種の前駆体を
生成することが可能な、オリゴ糖若しくは単糖類、又
は、その物質由来のポリオール若しくはアミノ酸由来
で、小容量で安定な粒子を調製する為の解決法を提供す
ることからなる新規技術的課題の解決である。さらに本
発明の目的は、その糖部分が１つ又は複数の糖分子を含
有し、酵素による加水分解によりヘテロシドを解離し
て、ある種の前駆体又はプロドラックを生成することが
可能な、ヘテロシド由来で小容量の安定な粒子を調製す
る為の解決法を提供することからなる新規技術的課題を
解決することである。

【００１２】さらに本発明の目的は、好ましくは化粧
品、医薬品又は食品産業において、産業規模で使用可能
な、簡易な製造方法により上記新規技術的課題を解決す
ることである。その解決により、望ましくは、そのサイ
ズを任意に調製でき、好ましくは１ナノメートルから１
ミリメートルをこえる、また好ましくは１０ナノメート
ルから約２ミリメートルの粒径範囲にわたる小容量粒子
を調製することが可能となる。さらに本発明の主な目的
は、完全に無害で安価であり、それ故医薬品、化粧品及
び食品産業において広く使用される出発物質についての
上記新規技術的課題の解決である。

【００１３】

【発明を解決するための手段】すなわち、本発明によっ
て、好ましくは室温において、特にＷ／Ｏ型の乳化物の
層の界面において、単糖類又はオリゴ糖と、多官能性ア
シル化架橋剤、好ましくは二酸ハロゲン化化物、さらに
好ましくは二酸塩化物との間の界面架橋反応を開始する
ことによって、単糖類又はオリゴ糖由来の安定な粒子、
好ましくはマイクロ粒子又はナノ粒子を得ることが可能
であることが、全く予期せず発見された。

【００１４】特に有利な形態の一つにおいては、先ず、
好ましくは室温で、疎水層において単糖又はオリゴ糖を
含有するアルカリ性水層を乳化して、その後、乳化物へ
架橋剤の溶液を加えることにより、上記粒子を製造する
ことができる。そして、炭水化物の架橋分子からなる膜
は、架橋剤と、単糖又はオリゴ糖の水酸基との間のエス
テル結合の生成により、水滴界面で生成されることが発
見されている。

【００１５】本発明により、好ましくは室温で、乳化物
系中で二官能基性アシル化剤を用いて単糖及びオリゴ糖
を界面で架橋することにより、有用な粒子を調製するこ
とも可能となる。実際、単糖及びオリゴ糖は全く明確な
化学組成物の物質であり、つまり、高分子量多糖と違っ
て、製造者間及び製造バッチ間において、組成物が多様
化するという恐れを被らず品質が一定である。その上、
上記過程において使用できる水層にしばしば容易に溶解
せず、溶解させる為に水層を加熱することがしばしば要
求された多糖とは違い、グルコース等の単糖、及び、ラ
クトース又はスクロース等のオリゴ糖は、室温で水によ
く溶解する。スクロース又はラクトース等の上記化合物
の多くは、食品産業において広く使用され、比較的低コ
ストで利用できることが追加できる。そして、上記化合
物は完全に無害である。それ故、上記化合物は、一般的
に種々の親水性若しくは親油性物質を含有し、生物適合
性であり、かつ、生分解性である粒子であり、医薬品、
化粧品及び食品分野において使用されうる粒子を得るこ
とができる。

【００１６】その上、上記化合物のあるものは、一般的
に、界面で架橋することにより、以下のような特定の目
的を達成することができる。ジヒドロキシアセトン（Ｄ
ＨＡ）等の、時間と共に色調が劣化する分解性物質の安
定化、及び／又は、酵素の攻撃に続いて、活性型を解離
することができる粒子型である前駆体の調製、例え
ば、；皮膚において、アミノ酸と結合してその部分での
着色を阻害するＤＨＡ、−又は、少なくとも１つの一級
アルコール基を含有する１つ又は複数の糖分子からなる
ヘテロシドの糖部分であって、界面架橋による粒子の調
製を可能にする場合の、サポノシド（ｓａｐｏｎｏｓｉ
ｄｅ）やストレプトマイシン等のヘテロシド

【００１７】活性分子のエステル前駆体の原理は、皮膚
への塗布を目的とする薬品での治療（Ｖｉａｌａ Ｋ．
Ｈ．ら，Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．Ｉｎｄ．Ｐｈａｒｍ．，１
９８５，１１，１１３３−１１７３）、若しくは、化粧
学（Ｆｏｒｅｓｔｉｅｒ Ｊ．Ｐ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｏ
ｓｍｅｔｉｃ Ｓｃｉ．，１９９２，１４，４７−６
３）において発展してきたことを指摘しておく。又は、
液体溶媒から分子を除き、分子を回収する、若しくは、
作用部位においてゆっくりと付着した分子を解離する為
に、分子を付着させることを基礎とした特定の用途を開
発したシクロデキストリン多孔性不溶粒子の調製。

【００１８】そこで、多糖に適用されている文献ＥＰ−
０ ６３０ ２８７ Ｂ１等の従来の技術文献に記載さ
れた条件を単糖又はオリゴ糖にに適用するならば、例え
ば、界面架橋が、炭水化物を溶解するために使用される
水層のｐＨが９．８を越えない乳化物系中で二酸塩化物
を用いて行われる場合、安定な粒子は得られない。粒子
はゼロ又はかなり低い収率で得られ、顕微鏡実験によ
り、架橋された物質がかなり脆いことを示す、夥しい数
の破片が観察される。

【００１９】本発明の骨子として、ｐＨ１０をこえるア
ルカリ性水層を使用して炭水化物を溶解し、二ハロゲン
化物、特に酸二塩化物を乳化物の界面で縮合重合を開始
させることにより、架橋されたオリゴ糖又は単糖の安定
な粒子、好ましくはマイクロ粒子又はナノ粒子が得られ
ることが、全く意外に発見された。得られた粒子は、水
性懸濁液の状態で、４５℃のオーブンでの長期間のイン
キュベーションに対し、その構造を破壊することなく耐
えうるほど安定である。また上記粒子は、その構造を破
壊することなく凍結乾燥に耐え、再水和後球形を回復す
るほど安定であり、それは本発明の特質となる技術的利
点の一つでもある。上記粒子はヒト血漿内でインキュベ
ーション後破壊が進行するが、これは上記粒子が特にエ
ステラーゼの作用下で、生分解性であることを示してい
る。

【００２０】乳化条件を選択することにより、粒子径
は、例えば高圧ホモジナイザーを使用することによっ
て、１ミクロメートル未満、例えば、ナノメートルサイ
ズから、数百ミクロメートル、及び、１ｍｍを越える範
囲まで変化させることができる。また、Ｏ／Ｗ型の乳化
物において、縮合重合反応を開始することにより、粒子
を得ることが可能であることも発見された。この場合、
好ましくは二酸ハロゲン化物、更に好ましくは二酸塩化
物である架橋剤を含有する疎水層は、連続層として使用
される単糖又はオリゴ糖を含有するアルカリ性水層中で
乳化される。上記反応は、界面で進行し、攪拌は適当な
時間続けられる。膜は分散した疎水液滴の周囲で生成さ
れ、この場合カプセルからなる疎水性内容物を有する粒
子を供する。

【００２１】第一の特徴として、本発明は、単糖又はオ
リゴ糖の一級アルコールのアシル化可能な水酸基、及
び、多官能性アシル化架橋剤のアシル基との間でエステ
ル結合が生成するように、少なくとも１つの一級アルコ
ール基を有する単糖又はオリゴ糖と、多官能性アシル化
架橋剤、好ましくは二酸ハロゲン化物、より好ましくは
二酸塩素化物との間で、好ましくは室温において、乳化
物中で界面架橋することによって架橋された１つ又は複
数の単糖又はオリゴ糖から形成される壁が、少なくとも
表面上にある粒子である。

【００２２】本発明の骨子においては、少なくとも１つ
の一級アルコール基を含有する、分子量５０００ダルト
ン以下の単糖又はオリゴ糖のいずれもが制限されること
なく使用される。同時に、少なくとも２つのアシル化す
る基を含有する多官能架橋剤も、制限されることなく使
用される。本発明の好適な形態では、糖のアルデヒド基
若しくはケトン基の水素添加から得られるポリオール、
アルドース由来のアルドン酸、それに相当するラクト
ン、その配糖体部分が１つ又は複数の糖からなり、少な
くとも１つの一級アルコールを含有する糖、オサミン、
ヘテロシドのリン酸エステル等の単糖又はオリゴ糖の誘
導体を使用することが可能である。

【００２３】本発明の１つの好適な形態では、上記粒子
は単一の低分子単糖若しくはオリゴ糖、又は、混合物か
ら調製できる。また別の本発明の好適な形態では、上記
単糖は、ジヒドロキシアセトン（ＤＨＡ）、エリトルロ
ース、リブロース、キシルロース、フルクトース及びソ
ルボース、並びに、それらの誘導体等のケトースであ
る。また別の本発明の好適な形態では、上記単糖は、エ
リトロース、トレオース、キシロース、アラビノース、
リボース、デオキシリボース、グルコース、マンノース
及びガラクトース等のアルドース、並びに、それらの誘
導体である。本発明の調製において、そのままで又は混
合物として使用される単糖誘導体としては、特にソルビ
トール、マンニトール、キシリトール、アラビトール、
ズルシトール、ラクチトール、ガラクチトール、エリト
リトール及びトレイトール等の相当するポリオール、グ
ルコサミン、ガラクトサミン、グルコサミン硫酸及びガ
ラクトサミン硫酸等のアミノ糖、及び、グルコン酸、ガ
ラクトン酸、グルコノラクトン及びガラクトノラクトン
等のアルドン酸又はラクトンが挙げられる。ポリオール
を含有する市販調製物としては、例えば、Nosorb 70Ｒ
（“ソルビトール７０％”、ロクエット（Ｒｏｑｕｅｔ
ｔｅ））等の、その種に属するものである。

【００２４】本発明の調製において、そのままで又は混
合物として使用されるオリゴ糖としては、好ましくは、
スクロース、ラクトース、マルトース、セロビオース、
トレハロース及びメリビオース等の二糖類、ラフィノー
ス、デキストリン等のオリゴ糖、又は、デンプンの部分
加水分解物、α−シクロデキストリン、β−シクロデキ
ストリン及びγ−シクロデキストリン等のシクロデキス
トリン、ヒドロキシエチル β−シクロデキストリン、
ヒドロキシプロピル β−シクロデキストリン（２−Ｈ
Ｐ−β−ＣＤ、３−ＨＰ−β−ＣＤ、２，３−ＨＰ−β
−ＣＤ）等のシクロデキストリン誘導体、グリコシルβ
−ＣＤ、ジグリコシルβ−ＣＤ、マルトシルβ−ＣＤ及
びジマルトシルβ−ＣＤ等の分岐シクロデキストリンの
部分加水分解物、又は、オリゴ糖混合物、例えば、種々
の割合で、グルコース、マルトース及びマルトデキスト
リンを含有したロクエット社のGlucidexＲという名の市
販製品が挙げられる。本発明の調製において、そのまま
で又は混合物として使用されるオリゴ糖誘導体として
は、特に、マルチトール、ラクチトール等の相当するポ
リオール、又は、ポリオールを含有し、デンプンの部分
加水分解物を水素添加して得られる市販調製物が挙げら
れる。単糖及びオリゴ糖の誘導体としては、例えば、非
糖部分と結合した糖部分からなる分子等のヘテロシド又
はグリコシドも含む。本発明の調製において使用される
ヘテロシドは、１つ又は複数の糖単位及び少なくとも１
つの一級アルコール基を含有した糖部分を有する。非糖
部分又はアグリコン部分は、好ましくは窒素、酸素又は
硫黄原子等のヘテロ原子を含有してもよい１つ若しくは
複数の芳香環又は非芳香環を含有する環状構造を含有す
る。

【００２５】本発明の調製において使用されるヘテロシ
ドは、好ましくは、４−メチルウンベリフェリルβ−Ｄ
−キシロシド、ｐ−ニトロフェニルβ−Ｄ−キシロシド
等のβ−Ｄ−キシロシド、リボフラビン、グアノシン、
アデノシン、ウリジン、シチジン等のリボヌクレオシド
からなる天然ヌクレオシド、又は、デオキシグアノシ
ン、デオキシアデノシン、デオキシシチジン及びチミジ
ン等のデオキシリボヌクレオシド、合成抗ウイルス若し
くは抗ガン性のヌクレオシド、アデノシン類似体及びデ
オキシシチジン類似体の天然ヌクレオシドの構造アナロ
グ、モノヌクレオチド、デオキシモノヌクレオチド、オ
リゴヌクレオチド、デオキシオリゴヌクレオチド、スト
レプトマイシン、ジヒドロストレプトマイシン、カナマ
イシン、アミカシン、ジベカシン、トブラマイシン、ネ
オマイシン及びパロモマイシン等のアミノグリコシド基
を含有する抗生物質、西洋キズタ由来のサポノシド等の
ステロイドアグリコンを有するサポノシド、パナマタン
皮由来のサポノシド等のトリテルペンアグリコンを含有
するサポノシド、ジギトキシン等のステロイドアグリコ
ンを有する強心性のヘテロシドが挙げられる。本発明の
別の有利な形態では、本発明は、少なくとも１つの表面
上にシクロデキストリン、好ましくは架橋したβ−シク
ロデキストリンから形成される壁からなる粒子も含む。

【００２６】本発明者は、特に予期せずに、シクロデキ
ストリンから調製される粒子は、有用な付着能を有し、
付着されるべき物質を含有する媒体から容易に分離さ
れ、付着された物質を除いた後再利用できることを発見
した。すなわち、錯体形成による混合物の構成物を除く
必要がある場合、上記不溶型の使用により、錯体を容易
に分離して、錯体化分子をシクロデキストリンの不溶型
から除き、再利用することができる。また本発明の別の
有利な形態では、本発明の架橋シクロデキストリン粒子
は、活性物質、好ましくは化粧学的活性物質、医薬的活
性物質、栄養学的活性物質、農業食品物質又は農産物質
を、含浸、又は、充填できる。上記活性物質又は活性成
分の含浸又は充填は、非常に簡単に行うことができる。
例えば、架橋シクロデキストリン粒子を、少なくとも幾
つかの活性成分を含浸若しくは充填又は付着するよう、
充分な時間、活性成分を含有する溶液中に浸潤又はイン
キュベーションする。活性成分の水性溶液のｐＨは、中
性付近か又は僅かに酸性であり、８を越えることはでき
ず、エステル結合の加水分解及び粒子の分解を避ける
為、例えば、４．５〜８の間が好ましい。

【００２７】上記活性物質又は活性成分の含浸又は充填
は、上記活性物質又は活性成分を系外にゆっくり解離す
る系を形成する。上記の遅い又は遅延した解離は、以下
の方法でさらに向上させることができる。即ち、本発明
の別の有利な形態では、活性成分を充填した本発明の架
橋シクロデキストリン粒子は、架橋タンパク質又は共架
橋されたタンパク質及び多糖の混合物で形成されるより
大きな粒子に封入され、遅い解離の系を形成する。この
場合、上記粒子は本発明の架橋シクロデキストリン粒子
を最初に調製する。その後、架橋シクロデキストリン粒
子内で活性物質又は活性成分を付着又は充填させる為に
上述したように、粒子にいくつかの活性成分が付着する
程充分な時間、上記粒子を活性成分の溶液中でインキュ
ベーションする。

【００２８】タンパク質又はタンパク質及び多糖の混合
物は、架橋粒子の懸濁液に溶解し、そして、得られた溶
液は、本出願人の以前の特許、例えば、特許ＵＳ−Ａ−
５，３９５，６２０又は特許ＦＲ−Ａ−９７ ０８９６
８に従い、酸二ハロゲン化物、好ましくは二塩化物を用
いて、Ｗ／Ｏ型の乳化物におけるタンパク質又はタンパ
ク質／多糖混合物の界面架橋による粒子の調製の為の水
層として用いられる。そして上記混合物は疎水層に分散
させ乳化物とし、その後酸二ハロゲン化物、好ましくは
二塩化物が乳化物に加えられ、そして、反応はタンパク
質又はタンパク質／多糖混合物のアシル化可能な官能基
のアシル化により、より大きな粒子が本発明の先の架橋
シクロデキストリン粒子の周囲に形成するのに充分な時
間続けられる。こうして、最後に本発明の架橋シクロデ
キストリンの完全粒子、及び、架橋シクロデキストリン
粒子により部分的に複合された活性成分を含有する、よ
り大きな粒子が供される。より大きな粒子を構成する架
橋物質は、活性成分を系外に遅く解離させるものであ
る。

【００２９】本発明の範囲内で好適に使用されるタンパ
ク質に関して、コラーゲン、アテロコラーゲン、ゼラチ
ン、血清アルブミン、卵白アルブミン、ヘモグロビン、
カゼイン及び乳清タンパク質を含む牛乳タンパク質、ラ
クトアルブミン、グロブリン及びフィブリノーゲン等の
動物性タンパク質；特にマメ科植物及び特に以下の植
物；大豆、ハウチハマメ、エンドウ、ヒヨコマメ、アル
ファルファ、ソラマメ、ヒラマメ、インゲンマメ、ナタ
ネ及びヒマワリ、又は、小麦、トウモロコシ、大麦、麦
芽、エンバク及びライ麦等の穀類から抽出した植物性タ
ンパク質が挙げられる。好適に使用される多糖類として
は、例として、好ましくはコンドロイチン４−硫酸、コ
ンドロイチン６−硫酸、デルマタン硫酸、ヘパラン硫酸
及びケラタン硫酸等のグリコサミノグリカン、並びに、
ヘパリン及びそれらの誘導体、好ましくは分子量約２０
００〜１００００の低分子ヘパリン、並びに、ナトリウ
ム及びカルシウム塩等の化粧学的又は医薬的に許容され
るヘパリン塩、天然ゴム、カラギーナン、グルコマンナ
ン、ガラクトマンナン、アミロース、又は、アミロペク
チン、又は、それらの混合物、及び、ヒドロキシエチル
デンプン若しくはヒドロキシエチルセルロース等のヒド
ロキシアルキル化多糖誘導体が挙げられる。

【００３０】本発明の別の好適な形態では、本発明は、
少なくとも表面上に、活性物質を充填し、かつ、遅い解
離の系を形成するように、例えば、架橋タンパク質又は
タンパク質及び多糖の共架橋物の粒子等の、生物適合性
であり、生分解性のより大きな粒子に封入された架橋シ
クロデキストリン、好ましくはβ−シクロデキストリン
から形成される壁からなる粒子でもある。この場合、上
記粒子を製造するには、必要に応じて多糖類と共にタン
パク質を、活性物質の溶液中のシクロデキストリン粒子
の懸濁液に添加し、この水層は、本出願人の以前の特
許、例えば、特許ＵＳ−Ａ−５，３９５，６２０又は特
許ＦＲ−Ａ−９７ ０８９６８に従い、界面架橋による
粒子の調製の為に用いられる。シクロデキストリンは６
〜８個のグルコースユニットからなる環状オリゴ糖であ
ることが知られている。上記分子は、その内部空洞が疎
水性であることに伴う価値ある性質を有する。特に、そ
れは活性成分の水溶性を増加させ（特にβ−シクロデキ
ストリン及びその親水性誘導体における場合）、また様
々な分子に付着して、熱、酸化、光及び蒸発に対して安
定となる（例えば、精製油、香料及び脂溶性ビタミンの
場合）。

【００３１】その上、シクロデキストリン誘導体には、
付着した分子の解離を維持し、又は、遅延させる性質を
有するものもある（Ｕｅｋａｍａ Ｋ．ら；Ｎｅｗ Ｔ
ｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｃｙｃｒｏｄｅｘｔｒｉｎｓ ａｎ
ｄ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ，D．Duchne 編集，Editio
ns de Sant，Ｐａｒｉｓ，１９９１，ｃｈａｐ．１２，
４１１−４４６）。このことは、特に、非常に水溶性の
高い活性成分の水性溶解度を減少させる（解離を維持）
ジエチル及びトリエチルβ−シクロデキストリン等の疎
水性β−シクロデキストリンの場合、及び、酸溶媒に難
溶性であり、その溶解度がカルボメチル基のイオン化を
通してｐＨとともに増加する化合物等、即ち、カルボキ
シメチルエチルβ−シクロデキストリンのイオン化可能
なβ−シクロデキストリン誘導体の場合（胃液中での解
離が阻害され、腸に達するまで遅延される）である。

【００３２】しかしながら、上記誘導体は、初期のシク
ロデキストリンに比べて、比較的高額である。初期のシ
クロデキストリンに関しては、水への溶解度が、水に接
触する解離系で上記シクロデキストリンを使用すること
が望まれている場合、その溶解度が複合分子の解離の調
節を困難にしているという問題がででくる（Ｆｒｅｉｄ
ｍａｎ Ｒ．Ｂ．；Ｎｅｗ Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｃｙ
ｃｒｏｄｅｘｔｒｉｎｓａｎｄ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ
ｓ，D．Duchne 編集，Editions de Sant，Ｐａｒｉｓ，
１９９１，ｃｈａｐ．４，１５５−１７７）。同様に、
水への溶解度があるため、特に水性溶媒中の混合物から
ある構成物を除去することが特に望まれている場合に
は、複合体の分離が、また、商業上シクロデキストリン
を再利用することが望まれている場合には遊離したシク
ロデキストリンの回収が妨げられることとなる。

【００３３】シクロデキストリンを含有する高分子の調
製は、上記問題に解決を与える。すなわち、活性物質の
解離を遅くさせることは、活性成分をβ−シクロデキス
トリンを有する高分子と複合させること、及び、高分子
と解離溶媒との間に透析膜を配置することによって、実
現できる。即ち、例えば、Ｂｅｈａｒ Ｎ．ら（Ｓ．
Ｔ．Ｐ．Ｐｈａｒｍａ，１９８７，３，２３７−２４
７）は、透析チューブに入れた場合、一つは水溶性（ポ
リエチレン−イミン）高分子であり、他方は不溶性高分
子（ポリビニルクロロホルメートから調製）であって、
シクロデキストリン分子を有し、且つ、プロプラノロー
ルのような水溶性の高い活性物質を充填した合成高分子
によって、活性成分の外部水性部分への分散が遅くな
り、高分子及び複合体が膜を透過できないことを示して
いる。本発明者は、予想外にも、本発明の完全に生物適
合性であり、生分解性である架橋シクロデキストリン粒
子の存在下で、プロプラノロールを用いて行った透析実
験において同じ現象を観察することができた。同じ原理
に従って、Ｆｅｎｙｖｅｓｉ Ｅ．（Ｊ．Ｉｎｃｌｕｓ
ｉｏｎ Ｐｈｅｎｏｍ．，１９８８，６，５３７−５４
５）は、可溶性シクロデキストリン高分子を複合する活
性成分を含有したマイクロカプセルからなる系は、活性
成分の解離を遅延させることができ、上記高分子はマイ
クロカプセルの膜を透過できないことを報告している。

【００３４】本発明者らは、増量した架橋β−シクロデ
キストリン粒子で複合したメチレンブルーを含有する架
橋タンパク質の完全に生物適合性であるマイクロカプセ
ルにより、上記顕著な結果を達成することができた。試
験管内における解離実験は、シクロデキストリン粒子を
含有しないマイクロカプセルと比較して、解離が遅延し
ていることを示す。上記遅延はカプセル化されたシクロ
デキストリン粒子量を増加するほど、より顕著となる。
本発明者らは、架橋ＤＨＡ粒子が、皮膚に塗布した後着
色し、生分解性であり、且つ、酵素分解後その特異的活
性を損っていない基剤物質を再生することができる一方
で、完全に安定であることも示した。

【００３５】第二の特徴として、本発明は、少なくとも
表面上において、１つ又は複数の架橋された単糖又はオ
リゴ糖から形成される壁からなる小容量の粒子の製造方
法であって、上記製造方法は； ａ）少なくとも１つの単糖又は少なくとも１つのオリゴ
糖が溶解しているｐＨ１０．５〜１４付近の水層を調製
し； ｂ）本質的に水非混和性であり、場合により界面活性剤
を含有する疎水層を調製し； ｃ）Ｗ／Ｏ型の乳化物を形成させるように攪拌して疎水
層中へ水層を分散し；ｄ）多官能性アシル化剤の溶液を
前記乳化物へ加え、前記乳化物の分散滴の界面で単糖又
はオリゴ糖が架橋し、粒子を形成するのに充分な時間攪
拌を続け；及び、 ｅ）場合により反応溶媒から前記粒子を分離することか
らなる。

【００３６】また、本発明は、少なくとも表面におい
て、１つ若しくは複数の架橋された単糖又はオリゴ糖か
ら形成される壁からなる小容量の粒子の製造方法でもあ
るが、上記製造方法は； ａ）少なくとも１つの単糖又は少なくとも１つのオリゴ
糖が溶解しているｐＨ１０．５〜１４付近の水層を調製
し； ｂ）本質的に水非混和性であり、多官能性アシル化架橋
剤を含有する疎水層を調製し； ｃ）Ｏ／Ｗ型の乳化物を形成するよう攪拌して水層中へ
疎水層を分散し、前記攪拌は、前記乳化物の分散滴の界
面で単糖又はオリゴ糖が架橋し、粒子、好ましくはカプ
セルを形成するのに充分な時間続けるものであって；そ
して、 ｄ）場合により反応溶媒から前記粒子を分離することか
らなる。

【００３７】また、本発明は、より大きな粒子中に封入
された小容量の架橋シクロデキストリン粒子の製造方法
であるが、上記製造方法は、以下の工程に従う； ａ）最初に、本発明の架橋シクロデキストリン粒子をＷ
／Ｏ型の乳化物の系で調製し、回収する ｂ）その後、前記粒子を活性成分が粒子に付着するのに
充分な時間、ｐＨ約４．５〜約８で活性成分の水溶液中
に入れ、インキュベーションする ｃ）次いで、タンパク質、又は、タンパク質／多糖混合
物を粒子分散液中に溶解させる ｄ）混合物を攪拌により疎水層中に分散し、Ｗ／Ｏ型の
乳化物を得る ｅ）多官能性アシル化剤の溶液を乳化物中に加え、タン
パク質、又は、タンパク質／多糖混合物のアシル化可能
な官能基のアシル化により、本発明の架橋シクロデキス
トリン粒子の周囲により大きな粒子を形成するのに充分
な時間攪拌を続ける ｆ）場合により、本発明の架橋シクロデキストリンの完
全な粒子、及び、架橋シクロデキストリン粒子のシクロ
デキストリンによって部分的に複合した活性成分を含有
する、得られたより大きな粒子を分離することからな
る。

【００３８】本発明の一つの好適な形態では、上記水性
溶媒は、ｐＨ１０．５以上、例えば１１に調製された炭
酸若しくはリン酸緩衝液等の緩衝液、又は、例えば１Ｍ
水酸化ナトリウム溶液等の、水酸化ナトリウム等のアル
カリ剤溶液からなる。本発明の一つの好適な形態では、
上記水層中の単糖又はオリゴ糖の濃度は、３〜８０％、
好ましくは、１０〜３０％である。本発明の別の好適な
形態では、上記多官能性アシル化架橋剤の溶液は、好ま
しくは、フタロイル、テレフタロイル、セバコイル、グ
ルタリル、アジポイル及びスクシニルの二ハロゲン化物
からなる群より選択される少なくとも１つの酸二ハロゲ
ン化物、又は、上記酸の無水酸化物からなる。また、こ
れらの酸の二塩化物を用いることが好ましい。本発明の
別の好適な形態では、上記マイクロカプセルは、好まし
くは室温において、その封入されるべき分散層が、溶
液、懸濁液又は乳化物の形態で配合された１つ又は複数
の、水溶性、脂溶性又は不溶性活性物質を含有する乳化
物から、界面架橋により、調製される。

【００３９】第三の特徴として、本発明は上記粒子の使
用も含む。架橋した単糖及びオリゴ糖粒子の一般的な適
用法は、以下の通りである；化粧品、医薬品及び食品の
分野において、上記生物適合性であり、生分解性の粒子
は、溶液、懸濁液又は乳化物の形態の水溶性又は脂溶性
の物質を含有できる。本発明の粒子は、化粧品において
特定の付加価値がある；上記粒子は、加水分解後、基剤
構成物の系内での解離を伴うが、上記構成物は、例えば
単糖、二糖（ラクトース）及びそれら由来のポリオール
（マンニトール、ソルビトール）の保湿効果、グリコサ
ミノグリカン合成促進効果、並びに、しわ防止効果（グ
リコサミン硫酸、ガラクトサミン硫酸、β−キシロシド
誘導体）等の、皮膚に対する望ましい特異的活性を有す
る。例えば、架橋ソルビトール又はスクロースからなる
親水性の非常に高い膜中に疎水性液滴を封入することの
有用性にも着目される。

【００４０】架橋シクロデキストリン粒子の用途として
は、以下のものが挙げられる：＊封入複合体の形態で溶
媒から構成物を除く為、充填されていないものとして：
立体異性体の分離、化学反応の触媒、及び刺激分子、カ
フェイン、コレステロール及びフェニルアラニンの抽出
の技術的適用のための用途。上記粒子は、このように、
例えば、精製すべき液体を通過させる充填カラム等、使
用すべき固体吸着体を構成しうる。生体又は非生体液の
溶媒の及び水の解毒化、特に芳香族アミン、フェノー
ル、ビリルビン及びトキシンの抽出のための用途。ここ
で、生物適合性である粒子の性質は重要な利点となる。
液体溶媒からの物質の回収のための用途。分析への適
用。上記粒子により、物質を濃縮して、物質の検出を向
上することができる。シクロデキストリンの付着能が、
皮膚の過剰脂質の吸収（減退効果）、発汗を減少する化
合物（デオドラント製品）又は口臭の原因となる物質の
吸収（歯磨き粉又はうがい薬中の抗口臭効果）に利用す
ることができる化粧品の分野における用途

【００４１】＊封入複合体の形態で活性物質が充填さ
れ、遅延拡散系、特に粒子、好ましくは架橋タンパク
質、又は、共架橋タンパク質及び多糖の粒子中に配合さ
れるものとして、：活性物質の解離を遅延させ維持さ
せ、それによって、レチノール酸、サリチル酸等の刺激
効果を有する活性成分に対する皮膚の許容性を向上させ
ると共に、その作用を延長させることができる化粧学の
分野における用途。活性物質の解離を遅延させ維持させ
ることによって、これより、いずれの投与形態によって
も、作用を延長し皮膚及び粘膜の許容性を向上させるこ
とができる医薬品又は医薬組成物の製造を目的とする治
療の分野における用途。架橋ＤＨＡ粒子の用途には、Ｄ
ＨＡの安定化に伴うものであり、これによって様々な化
粧用調製物への配合が可能となり、及び、皮膚表面上に
酵素分解後のＤＨＡが解離することとなるが、上記ＤＨ
Ａは皮膚のアミノ酸と結合して着色しうるものである。

【００４２】架橋ヘテロシド粒子は、特に粒子型の新規
前駆体を表すという事実に伴う用途がある；粒子の酵素
分解によるヘテロシド構成部分のゆっくりと解離させ、
ヘテロシドの特異的活性を働かせる為の化粧品における
用途（例：架橋サポノシド粒子）、並びに、粒子が、粒
子ベクター若しくはプロドラックの新規な型を構成し、
同時に、−活性成分の保護、並びに、持続した効果、及
び／又は、バイオアベイラビリティの向上、及び／又
は、皮膚若しくは粘膜の許容性の向上の為の、粒子の酵
素分解によるヘテロシド構成部分をゆっくりと解離させ
ること、並びに、プロドラックの粒子の性状に関して標
的とすることができるようにするための治療における用
途。

【００４３】粒子の大きさによるが、例えば、１０〜１
００μｍの間、例えば、約１５μｍの直径の粒子を、ス
トレプトマイシン等の抗生物質から調製することが可能
である；静脈注射後、上記粒子は、毛管保護によるベク
ター化の公知の原理（Ｄａｖｉｓ Ｓ．Ｓ．及び Ｉｌ
ｌｕｍ Ｌ．，Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍ．Ｔｅｃｈｎｏ
ｌ．，１９８６，３２，４−９）に従って肺の毛細血管
を標的とすること、及び、ストレプトマイシン等の抗生
物質を系内で遅く解離することを可能にする。代わっ
て、調製された活性物質のナノ粒子は、細胞、好ましく
は網内系の細胞に取り入れられ、バクテリア又は寄生虫
による病気等の疾患が上記活性物質を用いて治療でき
る。また、さらに代わって、オリゴヌクレオチド又はオ
リゴデオキシヌクレオチド由来のナノメートルサイズの
粒子の調製により、直接的に、ベクター化し安定した型
の上記オリゴヌクレオチド又はオリゴデオキシヌクレオ
チドとすることがてきるが、これらは、好ましくは抗ウ
ィルス若しくは抗癌の治療又は遺伝子治療に即した使
用、又は、細胞の感染若しくは遺伝物質を移送すること
に即した使用の為、細胞内へ直接運搬することができ、
また細胞内の初期オリゴヌクレオチド又はオリゴデオキ
シヌクレオチドを解離させることができ、これによって
ウィルスベクター若しくは合成ベクターの使用を避ける
ことができる。また、さらに代わって、抗ウィルス若し
くは抗癌性のヌクレオシド由来のナノメートルサイズの
粒子の調製は、直接的に、細胞に直接運搬して、細胞内
の初期ヌクレオシドを解離することができる、ベクター
化し安定した型のヌクレオシドを提供することができ
る。

【００４４】第４の特徴によると、本発明は、好ましく
は、化粧組成物、医薬組成物、及び、食品組成物からな
る群より選択される組成物であり、上記組成物は、上記
組成物又は活性成分の一つとしての粒子からなるもので
あり、上記粒子は、単糖又はオリゴ糖の一級アルコール
のアシル化可能な水酸基、及び、多官能性アシル化架橋
剤のアシル基との間でエステル結合が生成するように、
少なくとも１つの一級アルコール基を有する単糖又はオ
リゴ糖と、多官能性アシル化架橋剤、好ましくは二酸ハ
ロゲン化物、より好ましくは二酸塩素化物との間で、好
ましくは室温において、乳化物中で界面架橋することに
よって架橋された１つ又は複数の単糖又はオリゴ糖から
形成される壁が、少なくとも表面上にある粒子である。
上記粒子の他の特徴は、上述の記述、及び、以下の実施
例に関する記述により明らかである。

【００４５】第５の特徴によると、本発明は、ホ乳類、
好ましくはヒトの適切な部位へ、上記粒子を化粧学的に
効果的な量を塗布することからなる化粧用の処置方法で
あって、上記粒子は、単糖若しくはオリゴ糖の一級アル
コールのアシル化可能な水酸基と、多官能性アシル化架
橋剤のアシル基との間でエステル結合を生成するよう
に、少なくとも１つの一級アルコール基を含有する単糖
又はオリゴ糖と、多官能性アシル化架橋剤、好ましくは
二酸ハロゲン化物、より好ましくは二酸塩化物との間
で、好ましくは室温で、乳化物中で特に界面架橋するこ
とにより架橋された１つ又は複数の単糖又はオリゴ糖か
ら形成される壁を、少なくとも表面上に有するものであ
る方法である。上記粒子の他の特徴は、上述の記述、並
びに、以下の記述、特に実施例に関するもの、及び、上
記に示した化粧用又は治療用の使用と同様、特に第二の
特徴に関する記述により明らかである。

【００４６】一つの特定した形態では、本発明は、ホ乳
類、好ましくはヒトに対する化粧学的処置方法であり、
問題となる皮膚、地肌又は髪の部分への、上記定義した
粒子、好ましくは少なくとも１つの化粧学的活性物質を
も含有しうる粒子の局所的塗布することからなる方法に
関する。一つの好ましい形態では、本発明は、ホ乳類、
好ましくはヒトの適切な部位へ、上記粒子を治療学的に
効果的な量を塗布することからなる治療の処置方法であ
り、上記粒子は、少なくとも表面上に、架橋タンパク質
又はタンパク質及び多糖の共架橋物の粒子等の、より大
きい生物適用性があり、且つ、生分解性である粒子に封
入され、活性物質を充填した架橋シクロデキストリン、
好ましくはβ−シクロデキストリンから形成される壁か
らなり、これらの二重粒子は、経口、経管、直腸、膣、
肺、皮膚、眼又は鼻経由の投与等のいずれの投与形態で
も、投与できる遅延解離系を構成する方法をも含む。

【００４７】一つの好ましい形態では、本発明は、ホ乳
類、好ましくはヒトの適切な部位へ、上記粒子を治療学
的に効果的な量を塗布することからなる治療の処置方法
であり、上記粒子は、少なくとも表面上に、１つ又は複
数の架橋ヘテロシドから形成される壁からなり、粒子性
プロドラック又は活性ヘテロシドとして作用し、エステ
ラーゼ等の酵素作用下において生体内で活性成分を解離
できるものであって、また上記粒子は、経口、経管、直
腸、膣、肺、皮膚、眼又は鼻経由の投与等のいずれの投
与形態でも投与でき、活性成分の保護、遅い解離、バイ
オアベイラビリティの向上、器官、組織若しくは毛管部
分に対する皮膚若しくは粘膜の許容性の向上、又は、ナ
ノ粒子の場合は、抗菌、抗ウィルス若しくは抗癌の治
療、又は、遺伝物質の細胞内への移送の為に標的細胞へ
活性成分を移送させることを可能にする方法をも含む。

【００４８】

【実施例】本発明の他の目的、特徴及び利点は以下の例
示記述から明らかになるが、このことについて言及して
いる以下の実施例は、単に例示に過ぎず、本発明をなん
ら制限するものでない。以下の実施例において、全ての
パーセントは、他に断りのないかぎり、重量％である。
同様に、他に断りのないかぎり、温度は室温にて行い、
圧力は常圧とする。

【００４９】実施例１：「Ｗ／Ｏ」型の乳化物系におけ
る架橋オリゴ糖又は単糖粒子の調製の基本手順 ａ）１Ｍ水酸化ナトリウム溶液中でオリゴ糖又は単糖１
０％の溶液を調製する。 ｂ）この溶液６ｍｌを、Ｓｐａｎ８５を５％含有するシ
クロヘキサン３０ｍｌ中で、５分間、２０００ｒｐｍで
機械的に攪拌して、乳化する。 ｃ）攪拌を止めずに、１：４（ｖ／ｖ）クロロホルム：
シクロヘキサン混合液中５％のテレフタロイルクロライ
ド溶液４０ｍｌを乳化物に加えて、３０分間攪拌する。
反応が終わった際、反応溶媒をシクロヘキサン４０ｍｌ
を加えて、希釈し、攪拌を２〜３分続ける。 ｄ）マイクロカプセルは自然にデカンテーションする
か、又は、遠心分離して分離する。 ｅ）沈降物を異なる溶媒、すなわちシクロヘキサン、ツ
イーン２０を２％含有した９５％エタノール、９５％エ
タノール、及び、蒸留水で連続的に再懸濁して洗浄し
た。

【００５０】本手順は、以下の化合物（他に表示しない
限り、シグマ社の製品）を適用して成功した、例とし
て、例えば、： 実施例１．１．β−シクロデキストリン 実施例１．２．デキストリン（Ｇｌｕｃｉｄｅｘ４０Ｒ
又はＧｌｕｃｉｄｅｘ４７Ｒ、ロクエッテ社） 実施例１．３．ラフィノース 実施例１．４．セロビオース 実施例１．５．スクロース 実施例１．６．マルトース 実施例１．７．ラクトース 実施例１．８．トレハロース 実施例１．９．ジヒドロキシアセトン（ＤＨＡ） 実施例１．１０．Ｄ−フルクトース 実施例１．１１．ソルボース 実施例１．１２．Ｄ−リボース 実施例１．１３．Ｄ−デオキシリボース 実施例１．１４．Ｄ−キシロース 実施例１．１５．パラニトロフェニルβ−Ｄ−キシロシ
ド 実施例１．１６．Ｄ−アラビノース 実施例１．１７．Ｄ−グルコース 実施例１．１８．Ｄ−マンノース 実施例１．１９．Ｄ−ガラクトース 実施例１．２０．キシリトール 実施例１．２１．エリスリトール 実施例１．２２．アラビトール 実施例１．２３．ソルビトース 実施例１．２４．マンニトール 実施例１．２５．ダルシトール（ガラクチトール） 実施例１．２６．マルチトール 実施例１．２７．グルコン酸 実施例１．２８．グルコノラクトン 実施例１．２９．Ｄ−グルコサミン 実施例１．３０．Ｄ−ガラクトサミン 実施例１．３１．Ｄ−グルコサミン硫酸 実施例１．３２．Ｄ−ガラクトサミン硫酸 実施例１．３３．セッケンボク由来サポノシド 実施例１．３４．グアノシン 実施例１．３５．ストレプトマイシン硫酸 実施例１．３６．リボフラビン 実施例１．３７．ニシン精子由来デオキシリボ核酸（Ｄ
ＮＡ）（オリゴヌクレオチド粗製物） 実施例１．３８．ウリジン 実施例１．３９．ラクチトール 数ミクロメートルから数十マイクロメートル（２０〜９
０μｍ）の球状マイクロ粒子が得られた。

【００５１】実施例２：「Ｗ／Ｏ」型の乳化物系におけ
る架橋オリゴ糖又は単糖粒子の調製手順の変形 １）水層のオリゴ糖又は単糖の濃度は、２％〜８０％の
間で変化できる。 ２）１Ｍ水酸化ナトリウム溶液は、水酸化ナトリウム、
又は、水酸化カリウム等の他のアルカリ剤に置き換える
ことができ、それらは、さらに濃縮しても（２Ｍ、５Ｍ
等）、より希釈してもよく、又は、ｐＨ１０を越える緩
衝液、例えば、ｐＨ１１の炭酸又はリン酸緩衝液で置き
換えることができる。

【００５２】３）使用されるオリゴ糖又は単糖は、好ま
しくは実施例１に挙げた化合物の群から選択され、それ
は、β−シクロデキストリン、デキストリン、ラフィノ
ース、好ましくはセロビオース、スクロース、マルトー
ス、ラクトース、トレハロース等の二糖類、ジヒドロキ
シアセトン（ＤＨＡ）、フルクトース、ソルボース等の
ケトース、又は、リボース、デオキシリボース、キシロ
ース、アラビノース、グルコース、マンノース及びガラ
クトース等のアルドースからなる単糖、好ましくはマル
チトール等の相当するポリオールからなるオリゴ糖若し
くは単糖誘導体、ポリオールを含有し、デンプン、キシ
リトール、エリスリトール、アラビトール、ソルビトー
ル、マンニトール、ダルシトール、ラクチトール若しく
はガラクチトールの部分的加水分解物の水素添加により
得られる市販調製物、グリコサミン等のアミノ糖、グル
コン酸、グルコノラクトン等のアミノ糖由来の酸若しく
はラクトン、サポニン等のヘテロシド、ストレプトマイ
シン等の抗生物質、リボフラビン、グアノシン、又は、
アデノシン、又は、オリゴヌクレオチド、又は、オリゴ
デオキシヌクレオチド等からなる。

【００５３】以下のものも使用されうる：α−シクロデ
キストリン及びγ−シクロデキストリン等の他のシクロ
デキストリン、ヒドロキシエチルβ−シクロデキストリ
ン、ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン（２−
ＨＰ−β−ＣＤ、３−ＨＰ−β−ＣＤ、２，３−ＨＰ−
β−ＣＤ）等のシクロデキストリン誘導体、並びに、グ
リコシルβ−ＣＤ、ジグリコシルβ−ＣＤ、マルトシル
β−ＣＤ、ジマルトシルβ−ＣＤ等の分岐シクロデキス
トリンオリゴ糖混合物、例えば、種々の割合で、グルコ
ース、マルトース及びマルトデキストリンを含有したロ
クエット社により販売されたＧｌｕｃｉｄｅｘＲという
名の製品が挙げられる。ポリオールを含有した市販調製
物、例えば、Nosorb 70Ｒ（「ソルビトール７０％」、
ロクエット社）デオキシグアノシン、デオキシシチジン
等のデオキシリボヌクレオシド、合成抗ウィルス性、又
は、抗腫瘍性のヌクレオシド、アデノシン及びデオキシ
アデノシン類似体、並びに、シシチジン及びデオキシシ
チジン類似体等の天然ヌクレオシドの構造アナログ、モ
ノヌクレオチド及びオリゴヌクレオチド、並びに、モノ
デオキシヌクレオチド及びオリゴデオキシヌクレオチド
等。

【００５４】４）疎水層は、他の有機溶媒、又は、溶媒
混合物、２−エチルヘキシルココエート等の不揮発性
油、又は、当業者に公知の他の混合物からなるものでも
よい。加えられる界面活性剤の性質及びパーセンテージ
を、変化させてよい。 ５）粒子径は、界面活性剤の性質及びパーセンテージ、
並びに／又は、攪拌速度を変化させることにより、調製
できる。粒子径は、回転速度１５０００〜２００００ｒ
ｐｍに対して、１μｍ以下となりうる。

【００５５】実施例３：「Ｗ／Ｏ」型の乳化物系におけ
る架橋オリゴ糖又は単糖粒子の安定性実験実験手順 ；蒸留水に懸濁した粒子サンプルを４５℃のオ
ーブンに置く。サンプルは、色及び外観におけるいかな
る変化でも検出し、上澄液の透明度を確認できるよう
に、一定の間隔で観察する。粒子の完全さは、顕微鏡実
験で調べた。結果 ：以下の粒子について実験を行った： ＊ 実施例１．１．の架橋β−シクロデキストリン 実施例１．５．の架橋スクロース 実施例１．９．の架橋ＤＨＡ 実施例１．１０．の架橋フルクトース 実施例１．２４．の架橋マンニトール 実施例１．２９．の架橋グルコサミン 実施例１．３３．の架橋サポニン： の粒子

【００５６】粒子の大部分について、３ヵ月をこえて安
定であることが観察された：粒子沈降物の色は、変化せ
ず（白又はクリーム）、上澄液は透明又は無色であり、
顕微鏡実験で粒子が完全であることが示された。ＤＨＡ
粒子に関しては、４ヵ月をこえて安定であり、架橋マン
ニトールに関しては六週間をこえて安定であった。 ＊シクロデキストリン濃度７．５％又は５％以外の実施
例１．１．の架橋β−シクロデキストリン粒子：３ヵ月
をこえて安定 ＊他の粒子は、１Ｍ水酸化ナトリウム溶液をｐＨ１１の
炭酸塩緩衝液に置き換える以外は実施例１に従って調製
した、例として １０％又は５％のシクロデキストリンで調製した架橋β
−シクロデキストリン：１０週間をこえて 安定 架橋スクロース：１ヵ月をこえて安定 架橋ＤＨＡ：３ヵ月をこえて安定

【００５７】実施例４：「Ｗ／Ｏ」型の乳化物系におけ
る架橋したオリゴ糖又は単糖粒子の生分解性実験 粒子は、攪拌速度を５０００ｒｐｍに増やす以外は実施
例１に記述したように調製した。ａ）血漿中粒子の分解 実験手順：凍結ヒト血漿（Ｃｅｎｔｒｅ ｄｅ Ｔｒａ
ｎｓｆｕｓｉｏｎ Ｓａｎｇｕｉｎｅ ｄｅ Ｒｅｉｍ
ｓ）を、使用時に解凍して使用する。５０ｍｇの濾過し
た新鮮な粒子を試験管に入れ、５ｍｌの血漿中に分散さ
せる。試験管は、スターラーが備わっている３７℃の湯
浴槽に入れる。分解は、ｐＨ７．４のリン酸緩衝液中に
５０ｍｇの粒子を分散させて調製したコントロールと比
較して光学顕微鏡で観察した。

【００５８】結果： ＊架橋β−シクロデキストリン粒子：分解は５時間後に
開始する。非常に多くの粒子屑と開いた粒子が２４時間
後に観察される。それと比較して、ｐＨ７．４の緩衝液
を含むコントロールの試験管では、分解は観察されな
い。 ＊架橋したスクロース粒子：分解は３時間後に開始す
る。非常に多くの粒子屑とが２４時間後に観察される。
粒子が完全であるコントロールと比較して、分解が非常
に顕著である。 ＊架橋ＤＨＡ粒子：遅い分解が生じ、茶色の着色が観察
され、４８時間後に明確となる。それは、解離したＤＨ
Ａが血漿タンパク質と反応していることを示す。 ＊架橋グルコース粒子：１時間後に粒子は、球形を失
い、楕円形となる。遅い分解が観察される。２４時間後
に、小片と開いたマイクロカプセルが見られるようにな
る。 ＊架橋マンニトール粒子：分解は３時間後に開始する。
非常に多くの粒子屑及び開いた粒子が２４時間後に観察
される。コントロールは、分解が生じていない。 ＊架橋グルコサミン粒子：遅い分解が生じ、２４時間後
に粒子屑が出現する。 ＊架橋サポニン粒子：分解は２時間後に開始：粒子屑が
存在する。２４時間後、全ての粒子が、小片に分解され
る。 これらの実験は、本発明の対象である粒子が生分解性で
あることを示す。それはｐＨ７．４の緩衝液で長期間イ
ンキュベーションした後も完全である一方で、血漿中で
は、一般に分解されるが、これは架橋剤により単糖、オ
リゴ糖又はそれらの誘導体の水酸基で形成されたエステ
ル結合を破壊するという、血漿エステラーゼの作用に対
し、感受性であることを示している。

【００５９】ｂ）インベルターゼによる架橋スクロース
粒子の分解 試薬：ｐＨ４．９の酢酸緩衝液に１％分散させて使用し
たインベルターゼ（ＧｒａｄｅＶ，ｂａｋｅｒ’ｓ ｙ
ｅａｓｔ，ＳＩＧＭＡ） 実験手順：５０ｍｇの濾過した新鮮な粒子を試験管に入
れ、５ｍｌのインベルターゼ１％が分散している酢酸緩
衝液を加える。試験管は、スターラーが備わっている３
７℃の湯浴槽に入れる。分解は、ｐＨ４．９の酢酸緩衝
液中５０ｍｇの粒子を分散させて調製したコントロール
と比較して光学顕微鏡で観察した。加えて、溶媒中のグ
ルコースの外観を、ＣｌｉｎｉｓｔｉｘＲ試験（ＢＡＹ
ＥＲ）で調べた：グルコースオキシダーゼ試験片のピン
ク色の着色は、グルコースの存在下では紫色になる。

【００６０】結果： ６時間後：光学顕微鏡下で見られる粒子分解が開始す
る。Ｃｌｉｎｉｓｔｉｘ試験より陽性の結果である：紫
色着色、結果：＋ ２４時間後、僅かな単独粒子のみ完全であった。Ｃｌｉ
ｎｉｓｔｉｘ試験より陽性の結果である：純粋な紫色着
色、結果：＋＋。架橋スクロース粒子は、緩衝液だけの
インキュベーション後は完全のままであるが、スクロー
スをグルコースとフルクトースに分解する酵素であるイ
ンベルターゼによって破壊された。

【００６１】実施例５：「Ｏ／Ｗ」型の乳化物系におけ
る架橋オリゴ糖又は単糖粒子の調製の基本的手順 ａ）封入される油層の調製：０．６ｍｌ塩化セバコイル
を、５．４ｍｌオリーブオイルに加え、材料を混合す
る。 ｂ）水層の調製：１Ｍ水酸化ナトリウム溶液中で２０％
のスクロース溶液３０ｍｌを調製する。ｃ）乳化／架橋 ６ｍｌ油混合物を、３０ｍｌの水層中で、２０００ｒｐ
ｍの攪拌を行い乳化し、１時間攪拌を続ける。 ｄ）粒子は、例えば遠心分離等で、反応溶媒から分離す
る。 ｅ）洗浄：粒子は、蒸留水で数回洗浄する。

【００６２】実施例６：「Ｏ／Ｗ」型の乳化物系におけ
る架橋オリゴ糖又は単糖粒子の特性粒子の調製 以下のバッチの粒子を調製した： ＊バッチ１: 実施例５の架橋スクロース粒子 ＊バッチ２: 水層中のスクロース濃度を３０％、攪拌速
度を５０００ｒｐｍに増加する以外は実施例５に従った
架橋スクロース粒子 ＊バッチ３: スクロースをマンニトール（２０％）に置
き換え、攪拌速度を５０００ｒｐｍに増加する以外はバ
ッチ１と同様に調製した。 ＊バッチ４: スクロースをソルビトールに置き換え、濃
度を３０％に増加させ、攪拌速度を５０００ｒｐｍに増
加する以外はバッチ２と同様に調製した。

【００６３】粒子の特性 全ての場合、それぞれ油滴を含有するマイクロカプセル
が形成され、クリーム色の上澄液が得られる。顕微鏡試
験では、全てに油が封入されていることが示されてい
る。マイクロカプセルは、明確な灰色の膜を有し、粒径
２０〜１５０μｍの球体であった。顕微鏡観察のスライ
ドで高圧をかけ続けると、マイクロカプセルは破壊さ
れ、封入された油を解離し、膜が観察されるが、その膜
は、裂かれた透明バックのように見えた。

【００６４】４５℃での安定性 バッチ２及び４に対し、実施例３と同様の試験を行う。 結果：バッチ２のマイクロカプセルは少なくとも５週
間、４５℃で安定であり、バッチ４のマイクロカプセル
は少なくとも３週間安定であった。

【００６５】実施例７：架橋β−シクロデキストリン
（β−ＣＤ）マイクロカプセルの製造パラメーターの機
能としての特性１）形態学 これは、光学顕微鏡及び走査電子顕微鏡による試験であ
る。 光学顕微鏡試験法：実施例１（１０％β−ＣＤ、２００
０ｒｐｍ）に従い調製した粒子は、白色沈降物の状態で
ある。上記粒子は、斑点があり、明確な膜を有する球状
粒子を形成する。７．５％β−ＣＤ（ＮＰ１４３）を有
するものは、粒子は同等の外観を有する。５％β−ＣＤ
（ＮＰ５０ｂｉｓ）を有するものは、純粋な内容物であ
る粒子が得られる。１Ｍ水酸化ナトリウム溶液をｐＨ１
１の緩衝液に再び置き換えた場合、粒状の内容物である
球状粒子が得られる。

【００６６】走査電子顕微鏡試験法：本実験は、凍結乾
燥した粒子について行った。上記条件の全てにおいて、
実験は凍結乾燥の為破壊された連続膜を有する粒子が観
察された。実施例の方法により、図１は、実施例１の条
件下で調製したマイクロ粒子を示す。これらの凍結乾燥
した粒子は水で再懸濁すると、水を吸収し、急速に球形
を再生する。

【００６７】２）サイズ これは、レーザー回折技術（Ｃｏｕｌｔｅｒ ＬＳ ２
００ ｇｒａｎｕｌｏｍｅｔｅｒ，Ｃｏｕｌｔｒｏｎｉ
ｃｓ）によって決定した。結果は、粒子の体積／粒径
（ＳＤ）として示した。結果

【００６８】

【表１】

【００６９】予想通り、攪拌速度を増加した場合、粒子
の大きさは減少する。そして、β−シクロデキストリン
濃度が減少した場合、粒子の大きさは減少する。

【００７０】３）赤外線スペクトル 方法：赤外線スペクトルは、フーリエ変換赤外線スペク
トル計（ＢＯＭＥＭ，ＭＢシリーズ）を用いて、ＫＢｒ
板法により決定した。

【００７１】結果：実験の結果、図２は、非架橋β−Ｃ
Ｄで得られるＩＲスペクトル（スペクトルａ）及びβ−
ＣＤ濃度を７．５％とし、攪拌速度を５０００とする以
外は実施例１に従って調製した粒子のＩＲスペクトル
（スペクトルｂ）とを比較したものである。二つスペク
トルの主な違いは、粒子（ｂ）のスペクトルでは、β−
ＣＤの水酸基由来のエステルの生成を反映した、１７２
４ｃｍ^-1、１２８０ｃｍ^-1、及び７３１ｃｍ^-1のバンド
が出現していることである。

【００７２】４）粒子のβ−ＣＤ含量：偏光分析による
決定 方法：粒子内に含有されているβ−ＣＤ量は、高分子に
固定したβ−ＣＤに関する研究で、例えばＢｅｈａｒ
Ｎ．ら（Ｓ．Ｔ．Ｐ．Ｐｈａｒｍａ，１９８７，３，２
３７−２４７）により記されているような方法を用い
て、β−ＣＤの光学回折で測定した。最初に、２０℃４
５分間攪拌して、０．５Ｍ 水酸化ナトリウム溶液（３
ｍｌ）中で凍結乾燥した粒子（６０ｍｇ）を完全に加水
分解した。混合液は、０．２５Ｍ塩酸を添加して、中和
し、蒸留水を加えて、１２ｍｌとした。その溶液（０．
５％粒子相当）を０．２２μｍ膜で濾過した。溶液は、
偏光分析により試験して、非架橋β−ＣＤと比較した。
０．５Ｍ 水酸化ナトリウム溶液の処置では偏光測定の
結果に影響しない非架橋β−ＣＤを用いて、照合した。

【００７３】実験は、β−ＣＤ濃度を７．５％とし、攪
拌速度を５０００ｒｐｍとする以外は実施例１に従って
調製した２つのバッチの粒子について実験を行った。こ
の２つのバッチの残余水分含量は、乾燥粒子の重量の結
果と関連させるため、水分分析機（ＨＲ７３タイプ Ｈ
ａｌｏｇｅｎ Ｍｏｉｓｔｕｒｅ Ａｎａｌｙｚｅｒ、
Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ）を用いて、決定した。 結果：粒子中のβ−ＣＤ含量（乾燥重量％）

【００７４】

【表２】

【００７５】このように、粒子は、６８％のβ−ＣＤと
３２％のテレフタレートを含有し、分子量に関し、これ
は１モルβ−ＣＤ中平均３．２モルテレフタレートに相
当する。

【００７６】実施例８：パラニトロフェノールに対する
架橋β−シクロデキストリン粒子複合物の評価、及び、
調製パラメーターの影響１）参考バッチの複合化特性：サンプルの種類及び複合
化時間 ＊選択する参考バッチは、実施例１に従ったが、β−シ
クロデキストリン濃度を７．５％とした（１Ｍ水酸化ナ
トリウム溶液中β−ＣＤ７．５％、攪拌速度：２０００
ｒｐｍ）。 ＊マイクロ粒子の種々のサンプルは、ｐＨ４の１ｍＭパ
ラニトロフェノール（ｐＮＰ）緩衝液中で、攪拌しなが
ら、２０℃でインキュベーションする：その後、ある一
定の時間間隔で、上澄液中の残余ｐＮＰを、平衡に至る
まで吸光度計で測定した。光学濃度測定は、残余ｐＮＰ
濃度を導くために使用し、それより、マイクロカプセル
に固定されたｐＮＰ量を計算した。最初にｐＮＰの初期
量のパーセンテージを示し、二番目にマイクロカプセル
１ｇ当たりに固定されたｐＮＰをμｍｏｌで示す。

【００７７】手順：重量を増加させたマイクロカプセル
（１０、２０、５０及び１００ｍｇ）は、ｐＨ４の酢酸
緩衝液中のｐＮＰ１ｍＭの溶液１０ｍｌを室温で、時間
を増やし、スターラーで攪拌しながら、光のない状態で
インキュベーションする。インキュベーションは、重量
につき、及び、接触時間単位につき行い、そして、各実
験は二回ずつ行う。インキュベーション後、懸濁液を遠
心分離する。３００μｌ上澄液に対し、ｐＨ４の酢酸緩
衝液２．７ｍｌ、次に０．２５Ｍ水酸化ナトリウ溶液３
ｍｌを加えた。混合物は、孔径０．２２μｍの膜で濾過
した。光学濃度は、ｐＮＰなしで調製したブランクに対
して４０５ｎｍで測定した。全体の実験をマイクロ粒子
の新しいバッチで繰り返す。

【００７８】結果： 架橋β−ＣＤのマイクロ粒子によるパラニトロフェノー
ルの固定：サンプル及びインキュベーション時間の影響

【００７９】

【表３】

【００８０】予想通り、使用するマイクロ粒子量を増加
した場合、最初に％量で示した固定したｐＮＰ量は増加
する。固定したｐＮＰ量がマイクロカプセル１ｇ当たり
μｍｏｌで示した場合、使用するマイクロカプセル量の
増加に伴い、固定したｐＮＰ量は減少すること：粒子数
が増加する場合、粒子間でｐＮＰがより拡散することも
示されている。最後に、平衡は急速に定まること、その
値は、５分の接触時間後大きく変化することがなくな
り、一時間後に安定期となることが観察される。

【００８１】２）複合化特性におけるマイクロ粒子の調
製パラメーターの影響（１時間のインキュベーション） 手順：以下の条件を本実験に採用する：試料：５０ｍ
ｇ、２０℃でのインキュベーション時間：１時間。各パ
ラメーター試験について、マイクロカプセルの複合化特
性を各バッチについて二つの異なるインキュベーション
を行い、二つの異なるバッチを評価する。これより、得
られた結果の再現性を確認することができる。

【００８２】以下の種類の物を参考バッチ（バッチ１及
び２）で、２度試験（７．５％ β−ＣＤ、２０００ｒ
ｐｍ）した：水層中のβ−ＣＤ濃度における種類の物：
１０％に増加させたもの（バッチ３及び４）、並びに、
５％に減少させたもの（バッチ５及び６） 攪拌速度を５０００ｒｐｍに増加したもの（バッチ７及
び８） テレフタロイルクロライド濃度を２．５％に増加したも
の（バッチ９及び１０） これら全てのバッチの粒子の平均径は、Ｃｏｕｌｔｅｒ
ＬＳ ２００粒子計を用いて決定した。

【００８３】結果： ａ）参考バッチによる１時間でのｐＮＰの固定：バッチ
１及び２（７．５％ β−ＣＤ；ＴＣ：５％；ｓ：２０
００ｒｐｍ）

【００８４】

【表４】

【００８５】ｂ）バッチ３及び４による１時間でのｐＮ
Ｐの固定：β−ＣＤ濃度の増加（１０％ β−ＣＤ；Ｔ
Ｃ：５％；ｓ：２０００ｒｐｍ）

【００８６】

【表５】

【００８７】ｃ）バッチ５及び６による１時間でのｐＮ
Ｐの固定：β−ＣＤ濃度の減少（５％β−ＣＤ；ＴＣ：
５％；ｓ：２０００ｒｐｍ）

【００８８】

【表６】

【００８９】ｄ）バッチ７及び８による１時間でのｐＮ
Ｐの固定：攪拌速度の増加（７．５％β−ＣＤ；ＴＣ：
５％；ｓ：５０００ｒｐｍ）

【００９０】

【表７】

【００９１】ｅ）バッチ９及び１０による１時間でのｐ
ＮＰの固定：テレフタロイルクロライド濃度を２．５％
に減少（７．５％ β−ＣＤ；ｓ：２０００ｒｐｍ）

【００９２】

【表８】

【００９３】すなわち、８３μｍｏｌ／ｇを固定した参
考バッチと比較して、複合化特性は水層におけるβ−Ｃ
Ｄ濃度とともに変化する：１０％では減少（７７μｍｏ
ｌ／ｇ）、そして５％では増加（９２μｍｏｌ／ｇ）す
る。その上のマイクロカプセル攪拌速度を増加すること
は、より小さいマイクロカプセル、従ってより大きい表
面のマイクロカプセルが生成されるという、好ましい要
素といえる（９８μｍｏｌ／ｇ）。一方、架橋剤濃度を
２．５％に減少しても、複合化特性は変化しない。

【００９４】実施例９：プロプラノロールに対する架橋
β−シクロデキストリン粒子複合化特性の評価 プロプラノロールは、アドレナリン系を阻害する薬物で
ある。水に対して溶解性が高く、また分子のナフタレン
基がβ−ＣＤの疎水孔に適合する（Ｂｅｈａｒら、Ｓ．
Ｔ．Ｐ．Ｐｈａｒｍａ，１９８７，３，２３７−２４
７）ゆえに、β−ＣＤに対し親和性が高い為、この試験
に選ばれた。

【００９５】手順：１Ｍ 水酸化ナトリウム溶液中７．
５％β−ＣＤの溶液から、回転速度５０００ｒｐｍでβ
−ＣＤ粒子を調製した。複合化特性は、光のない状態
で、ｐＨ７．４のリン酸緩衝液中１ｍＭ又は２ｍＭのプ
ロプラノロール溶液１０ｍｌ内で凍結乾燥粒子１０ｍｇ
を攪拌した後、評価する。その後、懸濁液を遠心分離し
て、上澄液を回収し、非固定のプロプラノロールをＵＶ
吸光度計で、２９０ｎｍの波長を測定する。２つの濃度
のプロプラノロールそれぞれに対して、二つのバッチを
試験して、バッチごとに二つの試験をした。結果は、乾
燥マイクロカプセル１ｇ当たりに固定されたプロプラノ
ロールをμｍｏｌで示す。

【００９６】結果：１ｍＭ又は２ｍＭのプロプラノロー
ル溶液１０ｍｌ中１時間のインキュベーション後のβ−
ＣＤマイクロ粒子により固定されたプロプラノロール
（μｍｏｌ／ｇ表示）

【００９７】

【表９】

【００９８】この結果は、インキュベーションを２時間
又は３時間に延長しても変化しない。

【００９９】実施例１０：架橋β−シクロデキストリン
粒子によるプロプラノロール複合化の可逆性、及び、再
利用 β−ＣＤ粒子は、実施例９に記載したように調製し、凍
結乾燥する。

【０１００】試験手順：１）複合化過程 マイクロカプセルの試料１０ｍｇを、ｐＨ７．４のリン
酸緩衝液中１ｍＭのプロプラノロール溶液１０ｍｌ中で
インキュベーションする。１時間攪拌した後、懸濁液を
遠心分離して、上澄液中でプロプラノロールを測定す
る。

【０１０１】２）脱複合化過程 遠心分離済のマイクロ粒子は、ｐＨ７．４のリン酸緩衝
液５０ｍｌに分散させ、１５分間マグネティックスター
ラーで攪拌する。マイクロ粒子を溶媒から分離した。上
澄液中解離しているプロプラノロールを測定する。粒子
は、５０ｍｌの新しい緩衝液に再分散させる。１５分間
マグネティックスターラーで攪拌した後、マイクロ粒子
を溶媒から分離し、そして、５０ｍｌの新しい緩衝液中
で再びインキュベーションする。この操作の後、緩衝液
中解離しているプロプラノロールの吸光度計による同定
により、全てのプロプラノロールが架橋したβ−ＣＤと
の複合から解離していることが示される。

【０１０２】３）更なる複合化に対するマイクロ粒子の
再利用 プロプラノロールを除いた上記マイクロ粒子を、ｐＨ
７．４のリン酸緩衝液中１ｍＭのプロプラノロール溶液
１０ｍｌ内で再インキュベーションする。１時間攪拌し
た後、懸濁液を遠心分離して、プロプラノロールを上澄
液で測定する。実験は２度行う。

【０１０３】結果： ＊試験例１： −複合化過程１の間に１０ｍｇの粒子により固定化され
たプロプラノロールの量：５１４μｍｏｌ／乾燥粒子１
ｇ −脱複合化過程の３度の洗浄後の再利用過程３における
１０ｍｇの粒子により固定化されたプロプラノロールの
量：５１７μｍｏｌ／１ｇ ＊試験例２： −複合化過程１の間に１０ｍｇの粒子により固定化され
たプロプラノロールの量：５１２μｍｏｌ／乾燥粒子１
ｇ −脱複合化過程の３度の洗浄後の再利用過程３における
１０ｍｇの粒子により固定化されたプロプラノロールの
量：５２３μｍｏｌ／１ｇ 本試験は、β−ＣＤ粒子が物質を充填し、解離し、そし
て、同じ充填能で再利用することが可能であることを示
す。

【０１０４】実施例１１：増量した架橋β−シクロデキ
ストリン粒子を含むプロプラノロール溶液の透析試験：
活性成分の遅い解離の実証 Ｂｅｈａｒら（Ｓ．Ｔ．Ｐ．Ｐｈａｒｍａ，１９８７，
３，２３７−２４７）が、プロプラノロールを使用し
て、膜を透過できない高分子（並びに高分子に固定した
活性成分及びβ−ＣＤの複合体）であり、可溶性又は不
溶性の高分子に固定したβ−ＣＤにより、透析膜を透過
する活性成分の分散を遅くすることができることを示し
た。比較実験として、実施例９で調製した架橋β−ＣＤ
のマイクロ粒子を用いて行った。

【０１０５】手順：１）粒子によるプロプラノロールの複合化の段階 １０ｍｇ又は５０ｍｇの凍結乾燥したマイクロ粒子を、
ｐＨ７．４のリン酸緩衝液中２ｍＭのプロプラノロール
溶液１０ｍｌ内でインキュベーションする。攪拌は、室
温で光のない状態で１時間続ける。

【０１０６】２）透析膜を介したプロプラノロールの分
散の試験 プロプラノロール溶液中のβ−ＣＤマイクロ粒子の懸濁
液１０ｍｌを、予めｐＨ７．４のリン酸緩衝液で洗浄し
た透析チューブ（ＳＰＥＣＴＲＡ ＰＯＲ：セルロース
エステル膜、最大除外分子量：５０００、直径：１５ｍ
ｍ）に入れる。透析チューブは２つのクリップで閉め、
下部のクリップは系を攪拌することができるよう、磁気
性のものにする。そして、その透析チューブを１４０ｍ
ｌのｐＨ７．４のリン酸緩衝液をいれたビーカー中に置
く。全体を３７℃の水槽に置き、マグネティックスター
ラーで攪拌する。解離溶媒の試料は、一定の時間間隔で
取り出して、拡散したプロプラノロールをＵＶ吸光度計
で、２９０ｎｍの波長を測定する。測定後、試料を再び
溶媒に戻し、容積を１４０ｍｌ一定にし続ける。 ２つの粒子試料：１０ｍｇ及び５０ｍｇそれぞれにつき
３つの測定を行った。結果は、透析チューブに入れた量
を基にした解離プロプラノロールの平均パーセンテージ
を（標準偏差と共に）示す。一連の３つの試験を、マイ
クロ粒子を加えないプロプラノロールでも行った（コン
トロール試験）。 結果：透析膜を透過するプロプラノロール溶液の分散及
び加えたβ−ＣＤ粒子の影響

【０１０７】

【表１０】

【０１０８】得られたデータを使用して、図３の解離曲
線をプロットした。この一連の実験は、架橋β−ＣＤ粒
子により、粒子量に比例して半透過膜を透過する非常に
可溶性の高い分子の分散を遅くすることができることを
示している。即ち、６時間後、コントロールが９０％の
プロプラノロールを解離しているのに対し、１０ｍｇ及
び５０ｍｇの粒子を用いた試験では、それぞれ、６８．
９％及び２８．５％のプロプラノロールが解離されてい
る。

【０１０９】実施例１２：架橋血清アルブミンのマイク
ロカプセル中、増量した架橋β−シクロデキストリン粒
子で封入したトレーサーであるメチレンブルーの遅い解
離の実証 以上の結果を基に、遅い解離の為の新規の系を調製し
た。ここでは、透析膜を架橋タンパク質のマイクロカプ
セルの半透過膜に変えた。β−ＣＤマイクロ粒子を、選
択したトレーサーのメチレンブルーとともに封入した。

【０１１０】手順：１）架橋血清アルブミンマイクロカプセルのコントロー
ルバッチの調製 ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を使用する。 −水層の調製：メチレンブルー（ＦＬＵＫＡ）１０ｍｇ
を１０ｍｌｐＨ７．４の酢酸緩衝液に溶解する。１ｇの
ＨＳＡをこの溶液に溶解する。 −乳化：１０ｍｌの水層をＳｐａｎ８５を２％含有する
シクロヘキサン５０ｍｌに溶解する。分散物は、５分
間、２０００ｒｐｍで攪拌する。 −架橋：テレフタロイルクロライド２．５％のシクロヘ
キサン溶液６０ｍｌを加える。混合物は、３０分間、２
０００ｒｐｍで攪拌する。続いてマイクロカプセルを遠
心分離して、シクロヘキサンで４回洗浄し、シクロヘキ
サンはロータリーエバポレーターで留去して取り除き、
マイクロカプセルは凍結して、凍結乾燥する。 結果：厚い膜を有する、１０〜６０μｍのサイズの、優
れた、完全に球形で、青いマイクロカプセル。凍結乾燥
後、２ｇの完全なマイクロカプセルからなる微粒子粉末
が得られる；この粉末は、水層で完全に分散する。

【０１１１】２）増量した架橋β−ＣＤ粒子を含有する
架橋ＨＳＡマイクロカプセルのバッチの調製 ａ）インキュベーション：実施例９と同様に調製し、凍
結乾燥したβ−ＣＤ粒子の様々なサンプル（２０ｍｇ、
５０ｍｇ又は１００ｍｇ）を、ｐＨ７．４の酢酸緩衝液
中メチレンブルーの０．１％溶液１０ｍｌに分散させ
る。攪拌は、１時間室温にて光のない所で行う。 ｂ）架橋ＨＳＡマイクロカプセルへの封入 −水層の調製：１時間インキュベーションした上記β−
ＣＤ懸濁液１０ｍｌに、１ｇのＨＳＡを溶解する。 −乳化：１０ｍｌの水層をスパン８５を２％含有するシ
クロヘキサン５０ｍｌに分散させる。分散物は、５分
間、２０００ｒｐｍで攪拌する。 −架橋：シクロヘキサン中テレフタロイルクロライド
２．５％の溶液６０ｍｌを加える。混合物は３０分間２
０００ｒｐｍで攪拌する。続いてマイクロカプセルを遠
心分離して、シクロヘキサンで４回洗浄し、シクロヘキ
サンはロータリーエバポレーターで留去して取り除き、
マイクロカプセルは凍結して、凍結乾燥する。

【０１１２】結果：優れた青いマイクロカプセルが得ら
れた。顕微鏡観察により、それが厚い膜を有し、サイズ
が１０〜７０μｍの完全な球形であること、及び、それ
がメチレンブルーにより強く着色されたβ−ＣＤマイク
ロ粒子を含有することが示される。サンプルに係わらず
（２０ｍｇ、５０ｍｇ又は１００ｍｇのβ−ＣＤマイク
ロ粒子）、上記マイクロ粒子は完全に封入される。凍結
乾燥後、２ｇ〜２．１ｇの完全なマイクロカプセルから
なる微粒子粉末が得られる；この粉末は、水層で完全に
分散する。

【０１１３】３）５０ｍｇ非架橋β−ＣＤ粒子を含有す
る架橋ＨＳＡマイクロカプセルのバッチの調製 比較の為、３つのマイクロカプセルのバッチを架橋β−
ＣＤ粒子の代わりに非架橋β−ＣＤ粒子５０ｍｇをメチ
レンブルー溶液に加えた。上述したように、攪拌は室温
で１時間行う。そして、封入、分離及び乾燥を上述のよ
うに行う。メチレンブルー／β−ＣＤ複合は、遊離メチ
レンブルーと同じ波長で吸収されることを、記してお
く。その上、メチレンブルー及び５０ｍｇβ−ＣＤを含
有する混合物は、１時間のインキュベーション後β−Ｃ
Ｄ添加しないで測定したものと同じ吸収をすることが実
証された。

【０１１４】４）メチレンブルー解離試験 手順：回転翼溶解装置（薬事法に従ったＥＲＷＥＫＡ装
置）を使用した；３７℃の恒温状態にして、翼の回転速
度を５０ｒｐｍにした。凍結乾燥したマイクロカプセル
のバッチ全体を、ｐＨ７．４のリン酸緩衝液５００ｍｌ
に分散させる。一定の時間間隔で、５ｍｌ懸濁液サンプ
ルを取り出して遠心分離する。上澄液は、孔径０．２μ
ｍの膜で濾過する。濾液の光学濃度を６６８ｎｍで測定
する。遠心分離で沈降したマイクロカプセルを、５ｍｌ
のリン酸緩衝液で再懸濁して、解離溶媒へ再び入れる。
解離試験それぞれ（コントロール試験、２０ｍｇ、５０
ｍｇ及び１００ｍｇβ−ＣＤ粒子の試験、５０ｍｇ非架
橋β−ＣＤの試験）について、３重で行う。

【０１１５】結果：様々な時間後における様々なバッチ
のマイクロカプセルにより解離したメチレンブルーの量
を、試験で使用した量の重量％で示し、下の表に示し
た。 架橋ＨＳＡのマイクロカプセルから解離したメチレンブ
ルーの％［平均（標準偏差）］、及び、β−ＣＤ粒子又
は非架橋β−ＣＤ添加の影響：

【０１１６】

【表１１】

【０１１７】得られたデータを用いて、図４に示した解
離曲線を得た。その結果は、実施例１１の透析実験の結
果と一致して、半透過膜に封入すると、架橋β−ＣＤ粒
子により、水溶性物質の解離を遅くできることを示して
いる。またこの場合、減速は封入したβ−ＣＤの量に比
例する。予想通り、非架橋β−ＣＤの配合により解離を
遅くすることはできない。実際には、複合体はその溶解
性及び分子量が低いことからマイクロカプセル膜を通じ
て自由に拡散する。逆に、非架橋β−ＣＤの存在下で
は、メチレンブルーの解離は、β−ＣＤを添加しないで
調製したコントロールバッチのマイクロカプセルの場合
より、より速い。これは、コントロールバッチのマイク
ロカプセル中では、トレーサーが、ある割合でマイクロ
カプセル内にタンパク質を固定し解離を遅らせていると
いう事実より疑いなく説明できる。β−ＣＤがメチレン
ブルー溶液に加えられた場合、あるトレーサーは複合化
される。従って、マイクロカプセル中でタンパク質に結
合できるトレーサーの割合を減少することとなる。それ
故、解離速度は僅かに増加する。このことから、非架橋
β−ＣＤはトレーサーの拡散を遅くすることはできない
が、架橋β−ＣＤをマイクロカプセルの形態にしてβ−
ＣＤを不溶化したものは、配合したマイクロ粒子量に比
例して可溶性物質の解離速度を減少することができると
いう重要な利点をもたらすという結論が得られる。

【０１１８】実施例１３：架橋ＤＨＡ粒子：アミノ酸と
の結合の試験管内試験１）架橋ＤＨＡマイクロ粒子の調製 ＊架橋ＤＨＡマイクロ粒子を、１Ｍ水酸化ナトリウム溶
液をｐＨ１１の炭酸緩衝液にする以外は実施例１に記載
したのと同じ方法で調製し、そして： −攪拌速度を２０００ｒｐｍに保持する（バッチ１） −攪拌速度を５０００ｒｐｍに増加する（バッチ２） −攪拌速度を５０００ｒｐｍに増加し、ＤＨＡ濃度を５
％に減少する（バッチ３）。

【０１１９】２）アミノ酸結合との試験管内試験 試験の原理：架橋ＤＨＡのマイクロカプセルが、一方で
希釈炭酸二ナトリウム溶液（例えば１％）、もう一方で
ＰＥＧ２００等のポリエチレングリコールを含有する混
合物に徐々に溶解できることが観察されている。この過
程では、粒子に存在するエステル結合がアルコール分解
され、ＤＨＡを解離する。これがアミノ酸と反応して、
特徴的な茶色着色が生じる。我々は、グリシンの存在下
上記定義した条件下で調製したマイクロ粒子を用いて得
られる着色の強度と、非架橋ＤＨＡを用いて得られた強
度とを、４８時間後に４２０ｎｍの光学強度を測定する
ことにより比較した。

【０１２０】試験手順： ＊マイクロ粒子試験管、Ｔ１の調製：凍結乾燥した粒子
２０ｍｇを、９０％ｖ／ｖＰＥＧ２００及び１０％ｖ／
ｖの１％炭酸二ナトリウム溶液からなる混合物４ｍｌに
加える。０．６６Ｍグリシン溶液１００μｌを加え、３
２℃の恒温状態にした浴槽に管を設置する。４８時間
後、混合物を蒸留水で１／４に希釈して、光学強度を測
定する。 ＊グリシンを添加しないマイクロ粒子試験管、Ｔ２の調
製：グリシン溶液を添加する代わりに１００μｌ蒸留水
を加えたこと以外は、Ｔ１の同じ手順でする。 ＊グリシンを添加した、非架橋ＤＨＡのコントロール
管、Ｔ３の調製：マイクロ粒子を２０ｍｇＤＨＡを変え
たこと以外は、Ｔ１の同じ手順でする。＊グリシンを添
加していない、非架橋ＤＨＡのコントロール管、Ｔ４の
調製：マイクロ粒子を２０ｍｇＤＨＡを変えたこと以外
は、Ｔ２の同じ手順でする。

【０１２１】結果：以下の表の通りである。 グリシンを含有する架橋ＤＨＡ粒子の結合の試験管内試
験：遊離ＤＨＡと比較した４８時間後の色、ＯＤの測定
値

【０１２２】

【表１２】

【０１２３】このように、遊離ＤＨＡより明るい色調を
生成するが、マイクロ粒子はグリシンの存在下、４８時
間後の茶色着色を生じる。このことは、上記粒子がＤＨ
Ａを解離できること、続いて、ＤＨＡがアミノ酸に結合
できることを示す。バッチ２及び３のマイクロカプセル
は高回転速度で調製されたものであり、それ故比較的小
さいものであるが、最も暗い色調である。最も強度のあ
る着色が、５％ＤＨＡで調製した粒子で得られる（バッ
チ３）。

【０１２４】実施例１４：架橋ＤＨＡ粒子：再構成され
た皮膚におけるタンニング効果 バッチ番号３とした実施例１３に記載したとおりに調製
したＤＨＡ微小球体は、凍結乾燥し、２５ｋｇｒａｙの
β光線で滅菌した。それから、それを２．５％濃度とな
るように滅菌溶液で懸濁する。濃度０〜５％のＤＨＡ滅
菌溶液も調製する。それから、２つの調製物を、ケラチ
ノサイト、並びに、その表面上及びコラーゲンゲル（Ｃ
ｏｌｅｔｉｃａ）の凍結乾燥物により生成された細胞外
マトリックスのそれぞれに接種した健常人繊維芽細胞か
らなる再構成した皮膚に塗布する。上記再構成された皮
膚は動物又はヒトへの適用を想定して使用できる。各々
の試験調製物（１０μｌ／ｃｍ² ）を再構成させた皮膚
表面へ塗布した後、ＤＨＡのアミノ酸との反応の特徴で
ある茶色着色の外観の評価をして、各々のコントロール
範囲のサンプルと比較を行った。通常の細胞培養に使用
されるＣＯ₂／Ｏ₂ガス混合物の下で、８、２４、４８及
び９６時間の３７℃のインキュベーションの後、この色
を観察し、評価した。

【０１２５】まず最初に、着色はインキュベーション時
間を通じて増し、また再構成された皮膚に塗布したＤＨ
Ａ量とともに増すことがわかる。その上９６時間のイン
キュベーション後では、滅菌溶媒中の懸濁液で、２．５
％濃度にして使用したＤＨＡマイクロ球体が、組織的
に、再構成した皮膚を５％ＤＨＡ溶液のものと同様に強
く着色できることが示された。同一の濃度でＤＨＡマイ
クロ球体で得られる着色活性は、遊離状態で使用したＤ
ＨＡで得られる着色活性の２倍であり、このことはマイ
クロ球体の形態の場合、ＤＨＡがより有用であることか
ら示される。ＤＨＡマイクロ球体で得られる持続される
解離（又は遅延効果）は、結局、観察されるＤＨＡの態
様の相違を説明するものといえる。この遅延効果によ
り、化粧品、医薬品若しくは食品の用途において、刺激
性のある、又は、毒性である、又は、バイオアベイラビ
リティが低い、又は、皮膚組織に非常に速く浸透する活
性成分をマイクロ球体又はナノ球体の形態で使用するこ
とが一般に可能となる。

【０１２６】 実施例１５：Ｏ／Ｗ乳化型の化粧品又は医薬品の処方における本発明の生成物の 使用処方１５ａ Ａ ・脱イオン水 合計して１００ ・ブチレングリコール ２ ・グリセロール ３ ・ジヒドロキシセチルリン酸ナトリウム、イソプロピル ・ヒドロキシセチルエーテル ２ Ｂ ・グリセロールステアレート ＳＥ １４ ・トリイソノナノイン（Ｔｒｉｉｓｏｎｏｎａｎｏｉｎ） ５ ・オクチルココエート（Ｏｃｔｙｌ ｃｏｃｏａｔｅ） ６ Ｃ ・ｐＨ５．５に調製したブチレングリコール、メチルパラベン、 エチルパラベン、プロピルパラベン ２ Ｄ ・本発明の生成物 ０．０１〜１０％

【０１２７】処方１５ｂ Ａ ・水 合計して１００ ・ブチレングリコール ２ ・グリセロール ３ ・ポリアクリルアミド、イソパラフィン、ヘプタエチレングリコールラウリ ルエーテル（ラウレス（ｌａｕｒｅｔｈ）−７） ２．８ Ｂ ・ブチレングリコール、メチルパラベン、エチルパラベン、 プロピルパラベン ２ ・フェノキシエタノール、メチルパラベン、プロピルパラベン、 ブチルパラベン、エチルパラベン ２ ・ブチレングリコール ０．５ Ｃ ・本発明の生成物 ０．０１〜１０％

【０１２８】処方１５ｃ Ａ ・カルボキシビニルポリマー（カルボマー） ０．５０ ・プロピレングリコール ３ ・グリセロール ５ ・脱イオン水 合計して１００ Ｂ ・オクチルココエート（Ｏｃｔｙｌ ｃｏｃｏａｔｅ） ５ ・ビサボロール（Ｂｉｓａｂｏｌｏｌ） ０．３０ ・ジメチコン（Ｄｉｍｅｔｈｉｃｏｎｅ） ０．３０ Ｃ ・水酸化ナトリウム １．６０ Ｄ ・フェノキシエタノール、メチルパラベン、プロピルパラベン、 ブチルパラベン、エチルパラベン ０．５０ Ｅ ・香料 ０．３ Ｆ ・本発明の生成物 ０．０１〜１０％

【０１２９】 発明の実施例１６：Ｗ／Ｏ型の処方における本発明の生成物の使用 Ａ ・ＰＥＧ３０−ジポリヒドロキシステアレート ３ ・トリグリセリドカプリン酸 ３ ・セテアリルオクタノエート（Ｃｅｔｅａｒｙｌ ｏｃｔａｎｏａｔｅ） ４ ・ジブチルアジピン酸 ３ ・ブドウ種油 １．５ ・ホホバ油 １．５ ・フェノキシエタノール、メチルパラベン、プロピルパラベン、 ブチルパラベン、エチルパラベン ０．５ Ｂ ・グリセロール ３ ・ブチレングリコール ３ ・硫酸マグネシウム ０．５ ・ＥＤＴＡ ０．０５ ・脱イオン水 合計して１００ Ｃ ・シクロメチコン （Ｃｙｃｌｏｍｅｔｈｉｃｏｎｅ） １ ・ジメチコン （ｄｉｍｅｔｈｉｃｏｎｅ） １ Ｄ ・香料 ０．３ Ｅ ・本発明の生成物 ０．０１〜１０％

【０１３０】 発明の実施例１７：シャンプージェル又はシャワージェルの処方における本発明 の生成物の使用 Ａ ・キサンガム ０．８ ・脱イオン水 合計して１００ Ｂ ・ブチレングリコール、メチルパラベン、エチルパラベン、 プロピルパラベン ０．５ ・フェノキシエタノール、メチルパラベン、プロピルパラベン、 ブチルパラベン、エチルパラベン ０．５ Ｃ ・クエン酸 ０．８ Ｄ ・ラウリル硫酸ナトリウム ４０．０ Ｅ ・本発明の生成物 ０．０１〜１０％

【０１３１】 発明の実施例１８：リップスティク及び他の無水物生成物の処方における本発明 の生成物の使用 Ａ ・ミネラルワックス １７．０ ・イソステアリルイソステアレート ３１．５ ・プロピレングリコールジペラゴネート（Ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ ｄｉｐｅｌａｇｏｎａｔｅ） ２．６ ・プロピレングリコールイソステアレート １．７ ・ＰＥＧ８蜜蝋 ３．０ ・ヤシ及びヤシ種油 ３．４ ・ラノリン油 ３．４ ・ゴマ油 １．７ ・トリベヘニン（Ｔｒｉｂｅｈｅｎｉｎ） １．７ ・セチルラクテート １．７ ・鉱油、ラノリンアルコール ３．０ Ｂ ・ヒマシ油 合計して１００ ・顔料（合計） ３．９ ｛チタニウムジオキサイド、Ｒｏｕｇｅ ＣｏｖａｎｏｒＷ３６０ＡＲ（Ｗａｃ ｋｈｅｒｒ）、Ｂｒｏｍｏ ｄｅ Ｐｈｌｏｘｉｎｅ ２７Ｒ（Ｗａｃｋｈｅｒ ｒ）、Ｒｏｕｇｅ ＣｏｖａｌａｃＷ１５１０Ｒ（Ｗａｃｋｈｅｒｒ）、鉄酸化 物｝ Ｃ ・本発明の生成物 ０．０１〜５

【０１３２】 発明の実施例１９：水性ジェルの処方（目尻のジェル、スリミングジェル等）に おける本発明の生成物の使用 Ａ ・脱イオン水 合計して１００ ・カルボキシビニルポリマー（カルボマー） ０．５ ・ブチレングリコール １５ ・フェノキシエタノール、メチルパラベン、プロピルパラベン、 ブチルパラベン、エチルパラベン ０．５ Ｂ ・本発明の生成物 ０．０１〜１０

【０１３３】実施例２０：本発明の生成物で行った毒物
性試験 ａ）経口毒性 使用した試験手順は、急性経口毒性試験（１９８７年２
月２４日、４０１号）に関するＯＥＣＤガイドラインに
一致するものであり、最大投与を５ｇ／ｋｇ身体重量と
したが、試験により生成物の毒性の影響が寄与する障害
は肉眼で見受けられなかった。５ｇ／ｋｇ以下で経口投
与した場合も、本発明の生成物（実施例１）は、毒性ゼ
ロであった。

【０１３４】ｂ）眼球刺激 試験は、１９９０年５月３日の法令（１９９０年１１月
１４日のフランス公国の公報誌）に従った公式の方法に
より、本発明の生成物（実施例１）を用いて行ったが、
虹彩又は角膜に障害は生じなかった。本発明の生成物
（実施例１）は、純粋物を点眼した場合、刺激性がない
ようであり、目に対する許容性が非常に良好であると考
えられる。

【０１３５】ｃ）皮膚刺激 試験は、１９８２年２月１日の法令（１９８２年２月２
１日のフランス公国の公報誌）に従った公式の方法によ
り、本発明の生成物（実施例１）を用いて行ったが、刺
激による現象は生じなかった。本発明の生成物（実施例
１）は、純粋物を塗布した場合、刺激性がないようであ
り、皮膚に対する許容性も優れたものであると考えられ
る。

【０１３６】

【発明の効果】本発明の粒子は、上述のように構成され
ており、単糖類及びオリゴ糖由来で、生物適合性であ
り、且つ、生分解性である小容量の安定な粒子であるの
で、本発明は、必要に応じて種々の親水性若しくは脂溶
性物質を配合し、医薬品、化粧品及び食品分野において
使用されうる粒子を提供することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例７に対応する、攪拌速度２０００ｒｐｍ
で、濃度１０％のβ−シクロデキストリンから調製した
本発明の粒子の走査電子顕微鏡原板である。

【図２】実施例７に対応する非架橋β−シクロデキスト
リン（ａ）、及び、攪拌速度５０００ｒｐｍで濃度７．
５％のβ−シクロデキストリンから調製した本発明の架
橋β−シクロデキストリン粒子（ｂ）からそれぞれ得ら
れる赤外線スペクトルである。

【図３】実施例１１に記載されてるように、透析膜を透
過するプロプラノロールの分散実験の結果を示す。この
図は、異なる時間に解離した、初期量のパーセンテージ
として表記されたプロプラノロール量を表す３つの曲線
を組み合わせたものであり、一つはβ−シクロデキスト
リン粒子を添加せず行った実験（コントロール）であ
り、上記曲線の他の二つは本発明の架橋β−シクロデキ
ストリン粒子を、１０ｍｇ又は５０ｍｇ、それぞれ添加
して行った実験に相当するものである。

【図４】実施例１２に記載されてるように、架橋血清ア
ルブミンのマイクロカプセルからメチレンブルーを解離
した実験の結果を示す。この図は、異なる時間に解離
し、初期量のパーセンテージ（平均量±標準偏差）とし
て表記されたメチレンブルーの量を表す５つの曲線を組
み合わせたものであり、これらの曲線の一つはβ−シク
ロデキストリン粒子を添加せず行った実験（コントロー
ル）、また一つは５０ｍｇの非架橋β−シクロデキスト
リンを添加して行った実験、他の三つは本発明の架橋β
−シクロデキストリン粒子を、２０ｍｇ、５０ｍｇ又は
１００ｍｇ、それぞれ添加して行った実験に相当する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 フローラス エドワース フランス国 02160 ロングヴァル ５− ７，リ ュ ド ラ ベール オモーン (72)発明者 マリー クリスチーヌ アンドリュー フランス国 51530 ディジー 221，アヴ ェ ニュ デュ ジェネラル レクレール

Claims (26)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 単糖又はオリゴ糖の一級アルコールのア
   シル化可能な水酸基、及び、多官能性アシル化架橋剤の
   アシル基との間でエステル結合が生成するように、少な
   くとも１つの一級アルコール基を有する単糖又はオリゴ
   糖と、多官能性アシル化架橋剤、好ましくは二酸ハロゲ
   ン化物、より好ましくは二酸塩素化物との間で、好まし
   くは室温において、乳化物中で界面架橋することによっ
   て架橋された１つ又は複数の単糖又はオリゴ糖から形成
   される壁が、少なくとも表面上にある粒子。
2. 【請求項２】 前記単糖又はオリゴ糖は、分子量５００
   ０ダルトン以下であり、少なくとも１つの一級アルコー
   ル基を含有するものである請求項１記載の粒子。
3. 【請求項３】 前記単糖又はオリゴ糖は、誘導体の形態
   で、例えば、糖のアルデヒド基又はケトン基の水素添加
   から得られるポリオール、アルドース由来のアルドン
   酸、及び、それに相当するラクトン、その糖部分が１つ
   又は複数の糖からなり、かつ、少なくとも１つの一級ア
   ルコール基を含有する糖、オサミン又はヘテロシドのリ
   ン酸エステルからなる群から選択される少なくとも１つ
   の化合物の形態で存在する請求項１又は２記載の粒子。
4. 【請求項４】 単一の低分子単糖若しくはオリゴ糖、又
   は、混合物から調製される請求項１〜３いずれか１項記
   載の粒子。
5. 【請求項５】 前記単糖は、ケトース、アルドース、ポ
   リオール、アミノ糖、オサミン、アルドン酸及びそれに
   相当するラクトンからなる群より選択されるものである
   請求項１〜４いずれか１項記載の粒子。
6. 【請求項６】 前記ケトースは、ジヒドロキシアセト
   ン、エリトルロース、リブロース、キシルロース、フル
   クトース及びソルボース、並びに、それらの誘導体から
   選択されるものであり、；前記アルドースは、エリスロ
   ース、トレオース、キシロース、アラビノース、リボー
   ス、デオキシリボース、グルコース、マンノース及びガ
   ラクトースからなる群より選択されるものであり、；前
   記ポリオールは、ソルビトール、マンニトール、キシリ
   トール、アラビトール、ズルシトール、ガラクチトー
   ル、エリトリトール及びトレイトールからなる群より選
   択されるものであり、；前記アミノ糖又はオサミンは、
   グルコサミン、ガラクトサミン、グルコサミン硫酸、ガ
   ラクトサミン硫酸からなる群より選択されるものであ
   り、；前記アルドン酸は、グルコン酸及びガラクトン酸
   から選択されるものであり、；前記ラクトンは、グルコ
   ノラクトン及びガラクトノラクトンから選択されるもの
   である請求項５記載の粒子。
7. 【請求項７】 前記オリゴ糖は、スクロース、ラクトー
   ス、マルトース、セロビオース、トレハロース、メリビ
   オース等のジサッカライド又はラフィノース、デキスト
   リン又はデンプンの部分加水分解物、又は、好ましくは
   α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン若し
   くはγ−シクロデキストリン等のシクロデキストリン、
   ヒドロキシエチル β−シクロデキストリン若しくはヒ
   ドロキシプロピル β−シクロデキストリン（２−ＨＰ
   −β−ＣＤ、３−ＨＰ−β−シクロデキストリン、２，
   ３−ＨＰ−β−シクロデキストリン）等のシクロデキス
   トリン誘導体、グリコシルβ−シクロデキストリン、ジ
   グリコシルβ−シクロデキストリン、マルトシルβ−シ
   クロデキストリン若しくはジマルトシルβ−シクロデキ
   ストリン等の分岐シクロデキストリン、又は、オリゴ糖
   混合物からなる群より選択されるものであり、；前記オ
   リゴ糖由来のポリオールは、ラクチトール、マルチトー
   ル、及び、デンプンの部分加水分解物を水素添加するこ
   とによって得られたポリオールを含有する市販調製物か
   らなる群より選択されるものである前記請求項いずれか
   １項記載の粒子。
8. 【請求項８】 ヘテロシドは、１つ若しくは複数の糖単
   位、及び、少なくとも１つの一級アルコール基を含む糖
   部分からなり、非糖若しくはアグリコン部分は、好まし
   くは１つ若しくは複数の窒素、酸素又は硫黄原子等のヘ
   テロ原子を含むことができる１つ若しくは複数の芳香
   環、又は、非芳香環を含有した環状構造であり、前記ヘ
   テロシドは、好ましくは４−メチルウンベリフェリルβ
   −Ｄ−キシロシド、ｐ−ニトロフェニルβ−Ｄ−キシロ
   シド等のβ−Ｄ−キシロシド、リボフラビン、グアノシ
   ン、アデノシン、ウリジン及びシチジン等のリボヌクレ
   オシドからなる天然ヌクレオシド、又は、デオキシグア
   ノシン、デオキシアデノシン、デオキシシチジン及びチ
   ミジン等のデオキシリボヌクレオシド、合成抗ウイルス
   若しくは抗ガン性のヌクレオシド、アデノシン類似体及
   びデオキシシチジン類似体等の天然ヌクレオシドの構造
   アナログ、モノヌクレオチド、デオキシモノヌクレオチ
   ド、オリゴヌクレオチド、デオキシオリゴヌクレオチ
   ド、ストレプトマイシン、ジヒドロストレプトマイシ
   ン、カナマイシン、アミカシン、ジベカシン、トブラマ
   イシン、ネオマイシン及びパロモマイシン等のアミノグ
   リコシド基を有する抗生物質、西洋キズタ由来のサポノ
   シド等のステロイドアグリコンを有するサポノシド、パ
   ナマタン皮由来のサポノシド等のトリテルペンアグリコ
   ンを有するサポノシド、又は、ジギトキシン等のステロ
   イドアグリコンを有する強心性のヘテロシドからなる群
   より選択されるものである請求項３から７いずれか１項
   記載の粒子。
9. 【請求項９】 マイクロ粒子、好ましくは、マイクロカ
   プセル又はマイクロ球体である前記請求項いずれか１項
   記載の粒子。
10. 【請求項１０】 ナノ粒子、好ましくは、ナノカプセル
    又はナノ球体である請求項１〜８いずれか１項記載の粒
    子。
11. 【請求項１１】 少なくとも表面上に、シクロデキスト
    リン、好ましくは、架橋β−シクロデキストリンから形
    成される壁からなる前記請求項いずれか１項記載の粒
    子。
12. 【請求項１２】 活性物質、好ましくは化粧用物質、医
    薬用物質、栄養食品用物質、農業食品物質又は農産物質
    で充填されている請求項１１記載のシクロデキストリン
    粒子。
13. 【請求項１３】 架橋タンパク質又はタンパク質及び多
    糖との共架橋物の粒子等の、より大きく、生体適合性が
    あり、且つ、生分解性のある粒子に封入され、遅延解離
    系を形成する二重粒子を生成する請求項１１又は１２記
    載のシクロデキストリン粒子。
14. 【請求項１４】 前記タンパク質は、コラーゲン、アテ
    ロコラーゲン（ａｔｅｌｏｃｏｌｌａｇｅｎ）、ゼラチ
    ン、血清アルブミン、卵白アルブミン、ヘモグロビン、
    カゼイン及び乳清タンパク質を含む牛乳タンパク質、ラ
    クトアルブミン、グロブリン及びフィブリノーゲン等の
    動物性タンパク質；特にマメ科及び特に以下の植物；大
    豆、ハウチハマメ、エンドウ、ヒヨコマメ、アルファル
    ファ、ソラマメ、ヒラマメ、インゲンマメ、ナタネ及び
    ヒマワリ、又は、小麦、トウモロコシ、大麦、麦芽、エ
    ンバク及びライ麦等の穀類から抽出した植物性タンパク
    質が挙げられ；多糖としては、例として、好ましくはコ
    ンドロイチン４−硫酸、コンドロイチン６−硫酸、デル
    マタン硫酸、ヘパラン硫酸及びケラタン硫酸等のグリコ
    サミノグリカン、並びに、ヘパリン及びその誘導体、好
    ましくは分子量２０００〜１００００の低分子量ヘパリ
    ン、並びに、ナトリウム及びカルシウム塩等の化粧学的
    又は医薬的に許容されるヘパリン塩、天然ゴム、カラギ
    ーナン、グルコマンナン、ガラクトマンナン、アミロー
    ス、又は、アミロペクチン、又は、それらの混合物、並
    びに、ヒドロキシエチルデンプン若しくはヒドロキシエ
    チルセルロース等のヒドロキシアルキル多糖誘導体から
    なる群より選択される請求項１３記載の粒子。
15. 【請求項１５】 前記単糖はジヒドロキシアセトンであ
    る前記請求項のいずれか記載の粒子。
16. 【請求項１６】 化粧剤としての、又は、医薬組成物若
    しくは食品組成物の製造の為の請求項１〜１５いずれか
    １項記載の粒子の使用であって、前記粒子は、溶液、懸
    濁液又は乳化物の形態で、水溶性又は脂溶性物質を必要
    に応じて含有できる粒子の使用。
17. 【請求項１７】 前記組成物は、組成物の最終重量に対
    して、粒子を０．１〜２０重量％、好ましくは組成物の
    最終重量に対して、０．１〜５重量％含む請求項１６記
    載の使用。
18. 【請求項１８】 少なくとも表面上において、１つ若し
    くは複数の架橋された単糖又は多糖から形成される壁か
    らなる小容量の粒子の製造方法であって、前記方法は； ａ）少なくとも１つの単糖又は少なくとも１つのオリゴ
    糖が溶解しているｐＨ１０．５〜１４付近の水層を調製
    し； ｂ）本質的に水非混和性であり、場合により界面活性剤
    を含有する疎水層を調製し； ｃ）Ｗ／Ｏ型の乳化物を形成させるように攪拌して疎水
    層中へ水層を分散し； ｄ）多官能性アシル化剤の溶液を前記乳化物へ加え、前
    記乳化物の分散滴の界面で単糖又はオリゴ糖が架橋し、
    粒子を形成するのに充分な時間攪拌を続け；及び、 ｅ）場合により反応溶媒から前記粒子を分離することか
    らなる製造方法。
19. 【請求項１９】 少なくとも表面上において、１つ若し
    くは複数の架橋された単糖又は多糖から形成される壁か
    らなる小容量の粒子の製造方法であって、前記方法は； ａ）少なくとも１つの単糖又は少なくとも１つのオリゴ
    糖が溶解しているｐＨ１０．５〜１４付近の水層を調製
    し； ｂ）本質的に水非混和性であり、多官能性アシル化架橋
    剤を含有する疎水層を調製し； ｃ）Ｏ／Ｗ型の乳化物を形成するよう攪拌して水層中へ
    疎水層を分散し、前記攪拌は、前記乳化物の分散滴の界
    面で単糖又はオリゴ糖が架橋し、粒子、好ましくはカプ
    セルを形成するのに充分な時間続けるものであって；そ
    して、 ｄ）場合により反応溶媒から前記粒子を分離することか
    らなる製造方法。
20. 【請求項２０】 より大きな粒子中に封入された小容量
    の架橋シクロデキストリン粒子の製造方法であって、前
    記方法は、以下の工程； ａ）最初に、本発明の架橋シクロデキストリン粒子をＷ
    ／Ｏ型の乳化物の系で調製し、回収する ｂ）その後、前記粒子を活性成分が粒子に付着するのに
    充分な時間、ｐＨ約４．５〜約８で活性成分の水溶液中
    に入れ、インキュベーションする ｃ）次いで、タンパク質、又は、タンパク質／多糖混合
    物を粒子分散液中に溶解させる ｄ）混合物を攪拌により疎水層中に分散し、Ｗ／Ｏ型の
    乳化物を得る ｅ）多官能性アシル化剤の溶液を乳化物中に加え、タン
    パク質、又は、タンパク質／多糖混合物のアシル化可能
    な官能基のアシル化により、本発明の架橋シクロデキス
    トリン粒子の周囲により大きな粒子を形成するのに充分
    な時間攪拌を続ける ｆ）場合により、本発明の架橋シクロデキストリンの完
    全な粒子、及び、架橋シクロデキストリン粒子のシクロ
    デキストリンによって部分的に複合した活性成分を含有
    する、得られたより大きな粒子を分離することからなる
    製造方法。
21. 【請求項２１】 水性溶液は、ｐＨ１０．５以上、例え
    ばｐＨを１１に調製した炭酸若しくはリン酸緩衝液等の
    緩衝液、又は、例えば１Ｍ水酸化ナトリウム溶液等、水
    酸化ナトリウム等のアルカリ剤溶液からなるものである
    請求項１８〜２０いずれか１項記載の製造方法。
22. 【請求項２２】 前記水層中の単糖又はオリゴ糖の濃度
    は、３〜８０重量％、好ましくは、１０〜３０重量％で
    ある請求項１８〜２１いずれか１項記載の製造方法。
23. 【請求項２３】 上記多官能性アシル化架橋剤は、好ま
    しくは、フタロイル、テレフタロイル、セバコイル、グ
    ルタリル、アジポイル及びスクシニルの二ハロゲン化物
    からなる群より選択される少なくとも１つの酸二ハロゲ
    ン化物、又は、酸無水物からなるものである請求項１８
    〜２２記載の製造方法。
24. 【請求項２４】 ホ乳類、好ましくはヒトの適切な部位
    へ、請求項１〜１５のいずれか１つに記載の粒子を化粧
    学的に効果的な量を塗布することからなる化粧用の処置
    方法であって、前記粒子は、単糖若しくはオリゴ糖の一
    級アルコールのアシル化可能な水酸基と、多官能性アシ
    ル化架橋剤のアシル基との間でエステル結合を生成する
    ように、少なくとも１つの一級アルコール基を有する単
    糖又はオリゴ糖、及び、多官能性アシル化架橋剤、好ま
    しくは二酸ハロゲン化物、より好ましくは二酸塩化物と
    の間で、好ましくは室温で、乳化物中で特に界面架橋す
    ることにより架橋された１つ又は複数の単糖又はオリゴ
    糖から形成される壁を、少なくとも表面上に有するもの
    である方法。
25. 【請求項２５】 経口、経管、直腸、膣、肺、皮膚、眼
    又は鼻経由の投与等のいずれの投与形態でも、投与でき
    る遅延解離系を構成する医薬用組成物の製造のための請
    求項１〜１５のいずれか１項記載の粒子の使用。
26. 【請求項２６】 医薬組成物製造の為の請求項８記載の
    粒子の使用であり、前記粒子は、少なくとも表面上に、
    １つ又は複数の架橋ヘテロシドから形成される壁からな
    り、粒子型プロドラック又は活性ヘテロシドの前駆体と
    して作用し、エステラーゼ等の酵素作用下において生体
    内で活性成分を解離できるものであって、また、前記粒
    子はいずれの投与形態でも投与でき、活性成分の保護、
    遅い解離、バイオアベイラビリティの向上、器官、組織
    若しくは毛管部分に対する皮膚若しくは粘膜の許容性の
    向上、若しくは、ナノ粒子の場合は、抗菌、抗ウィルス
    若しくは抗癌の治療、又は、遺伝物質の細胞内への移送
    の為に、標的細胞へ活性成分を移送させることを可能に
    するものである使用。