JP2000093162A - 有胞子乳酸菌の培養方法 - Google Patents
有胞子乳酸菌の培養方法Info
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- JP2000093162A JP2000093162A JP26925198A JP26925198A JP2000093162A JP 2000093162 A JP2000093162 A JP 2000093162A JP 26925198 A JP26925198 A JP 26925198A JP 26925198 A JP26925198 A JP 26925198A JP 2000093162 A JP2000093162 A JP 2000093162A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 酸性水溶液中での安定性の高い有胞子乳酸菌
を安価且つ簡便に製造する方法を提供する。 【解決手段】 培養初期ｐＨが4.5 〜6.5 である培地、
あるいは大豆分解物が0.01〜5.0 重量％添加された培
地、あるいは両者が組み合わされた培地にて有胞子乳酸
菌を培養する。
を安価且つ簡便に製造する方法を提供する。 【解決手段】 培養初期ｐＨが4.5 〜6.5 である培地、
あるいは大豆分解物が0.01〜5.0 重量％添加された培
地、あるいは両者が組み合わされた培地にて有胞子乳酸
菌を培養する。
Description
【０００１】
【発明が属する技術分野】本発明は、有胞子乳酸菌の培
養方法に関する。
養方法に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】有胞子
乳酸菌〔バチルス コアグランス（Bacillus coagulan
s) 〕は、一般的な乳酸菌と異なり、一定の条件下で乾
燥にも熱や酸にも非常に強く、腸内で発芽して増殖する
特性を有するものであり、各種食品用途への応用がなさ
れている。しかしながら、有胞子乳酸菌は粉末の状態で
は極めて安定であるが、水系、特に酸性水溶液中での安
定性が低く、各種飲料等への応用性が損なわれている。
従来、有胞子乳酸菌はｐＨ7.0 に調整した培地にて培養
されており〔食衛誌、25(6)488(1984)〕、ｐＨ４以下で
は生育しないとされている。
乳酸菌〔バチルス コアグランス（Bacillus coagulan
s) 〕は、一般的な乳酸菌と異なり、一定の条件下で乾
燥にも熱や酸にも非常に強く、腸内で発芽して増殖する
特性を有するものであり、各種食品用途への応用がなさ
れている。しかしながら、有胞子乳酸菌は粉末の状態で
は極めて安定であるが、水系、特に酸性水溶液中での安
定性が低く、各種飲料等への応用性が損なわれている。
従来、有胞子乳酸菌はｐＨ7.0 に調整した培地にて培養
されており〔食衛誌、25(6)488(1984)〕、ｐＨ４以下で
は生育しないとされている。
【０００３】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、有胞子乳
酸菌の培養条件について検討し、培養初期ｐＨを従来
より下げた特定範囲とすること、培地に大豆分解物を
添加すること、あるいはこの両手段を組み合わせるこ
とにより、酸性水溶液中での安定性の高い有胞子乳酸菌
を安価且つ簡便に製造できることを見出した。
酸菌の培養条件について検討し、培養初期ｐＨを従来
より下げた特定範囲とすること、培地に大豆分解物を
添加すること、あるいはこの両手段を組み合わせるこ
とにより、酸性水溶液中での安定性の高い有胞子乳酸菌
を安価且つ簡便に製造できることを見出した。
【０００４】
【発明の実施の形態】本発明の特徴は、培養初期ｐＨが
4.5 〜6.5 、特に5.0 〜6.5 である培地を用いること、
あるいは大豆分解物が0.01〜5.0 重量％、特に0.05〜1.
0 重量％添加された培地を用いること、あるいは大豆分
解物が0.01〜5.0 重量％添加された培養初期ｐＨが4.5
〜6.5 である培地を用いることにあり、この条件範囲で
本発明の目的が達成される。
4.5 〜6.5 、特に5.0 〜6.5 である培地を用いること、
あるいは大豆分解物が0.01〜5.0 重量％、特に0.05〜1.
0 重量％添加された培地を用いること、あるいは大豆分
解物が0.01〜5.0 重量％添加された培養初期ｐＨが4.5
〜6.5 である培地を用いることにあり、この条件範囲で
本発明の目的が達成される。
【０００５】本発明で用いる培地には、大豆分解物に加
え、窒素源又は炭素源として各種アミノ酸、カゼイン分
解物、栄養源として肉エキス、魚肉エキス、酵母エキス
等の天然エキス類等の通常培養に用いられるものが利用
できる。また、胞子形成に必要な金属塩としてＭｎ、Ｃ
ａ、Ｍｇ、Ｋ、Ｆｅ、Ｐ等を添加できる。大豆分解物
は、脱脂大豆を酵素分解して得られた水に容易に溶解で
きる粉末であり、市販品としてポリペプトンＳ（日本製
薬（株）製）、バクトソイトン（Ｄｉｆｃｏ社製）等が
ある。本発明において、その他の培養条件は好気的であ
れば液体培養、固体培養のいずれでもよい。液体培養に
おいては、振とう、通気、攪拌のいずれでも培養でき
る。
え、窒素源又は炭素源として各種アミノ酸、カゼイン分
解物、栄養源として肉エキス、魚肉エキス、酵母エキス
等の天然エキス類等の通常培養に用いられるものが利用
できる。また、胞子形成に必要な金属塩としてＭｎ、Ｃ
ａ、Ｍｇ、Ｋ、Ｆｅ、Ｐ等を添加できる。大豆分解物
は、脱脂大豆を酵素分解して得られた水に容易に溶解で
きる粉末であり、市販品としてポリペプトンＳ（日本製
薬（株）製）、バクトソイトン（Ｄｉｆｃｏ社製）等が
ある。本発明において、その他の培養条件は好気的であ
れば液体培養、固体培養のいずれでもよい。液体培養に
おいては、振とう、通気、攪拌のいずれでも培養でき
る。
【０００６】
【実施例】実施例１、比較例１ 培養に用いた培地は、塩酸にてｐＨを4.5 〜6.5 、ある
いは水酸化ナトリウムにてｐＨを7.0 に調整した下記培
地組成、あるいはＮＢ培地であり、それぞれ坂口フラ
スコに50ml仕込み、20min.蒸気滅菌した。事前にＮＢ培
地で培養したBacillus coagulansを、上記試験培地に１
％接種して50℃で３日間振とう培養した。得られた培養
液を遠心分離し（10,000rpm 、10min.）、沈殿した胞子
をｐＨ７の50mMのリン酸バッファーで洗浄した後、80℃
で30min.熱処理し、栄養細胞を死滅させた。再度遠心分
離して得られた胞子を10％グリセリン溶液にて懸濁し、
胞子濃縮液を調製した。この胞子を、ｐＨ3.5 の溶液で
ある、下記の処方に約３×107 個／ml接種し、50℃、
14日での胞子生存率を計測したところ、表１に示す通り
であった。 培地組成 酵母エキス；0.1 重量％ 魚肉エキス；0.5 重量％ グルタミン酸ナトリウム；1.0 重量％ MgSO4・7H2O；0.07重量％ MnSO4・5H2O；50ppm 処方 エリスリトール；8.0 重量％ クエン酸；0.1 重量％ 香料；0.2 重量％ ペクチン；0.4 重量％ 発酵乳；20.0重量％ ｐＨ3.5
いは水酸化ナトリウムにてｐＨを7.0 に調整した下記培
地組成、あるいはＮＢ培地であり、それぞれ坂口フラ
スコに50ml仕込み、20min.蒸気滅菌した。事前にＮＢ培
地で培養したBacillus coagulansを、上記試験培地に１
％接種して50℃で３日間振とう培養した。得られた培養
液を遠心分離し（10,000rpm 、10min.）、沈殿した胞子
をｐＨ７の50mMのリン酸バッファーで洗浄した後、80℃
で30min.熱処理し、栄養細胞を死滅させた。再度遠心分
離して得られた胞子を10％グリセリン溶液にて懸濁し、
胞子濃縮液を調製した。この胞子を、ｐＨ3.5 の溶液で
ある、下記の処方に約３×107 個／ml接種し、50℃、
14日での胞子生存率を計測したところ、表１に示す通り
であった。 培地組成 酵母エキス；0.1 重量％ 魚肉エキス；0.5 重量％ グルタミン酸ナトリウム；1.0 重量％ MgSO4・7H2O；0.07重量％ MnSO4・5H2O；50ppm 処方 エリスリトール；8.0 重量％ クエン酸；0.1 重量％ 香料；0.2 重量％ ペクチン；0.4 重量％ 発酵乳；20.0重量％ ｐＨ3.5
【０００７】
【表１】
【０００８】実施例２、比較例２ 培養に用いた培地は、下記培地組成をベースに、ポリ
ペプトンＳ、あるいはバクトソイトンをそれぞれ0.2 重
量％添加したもの（ｐＨ≒６）、および酵母エキスを0.
2 重量％添加したもの（ｐＨ≒７）であり、それぞれ坂
口フラスコに50ml仕込み、20min.蒸気滅菌した。事前に
下記培地組成で培養したBacillus coagulansを、上記
試験培地に１％接種し、以下は実施例１と同様にして胞
子濃縮液を調製した。この胞子を、ｐＨ3.5 の溶液であ
る、処方に約１×107 個／ml接種し、以下は実施例１
と同様にして胞子生存率を計測した。結果を表２に示
す。 培地組成 魚肉エキス；1.0 重量％ グルタミン酸ナトリウム；0.5 重量％ MnSO4・5H2O；50ppm 培地組成 ポリペプトンＳ；0.2 重量％ 魚肉エキス；1.0 重量％ グルタミン酸ナトリウム；0.5 重量％ MnSO4・5H2O；50ppm
ペプトンＳ、あるいはバクトソイトンをそれぞれ0.2 重
量％添加したもの（ｐＨ≒６）、および酵母エキスを0.
2 重量％添加したもの（ｐＨ≒７）であり、それぞれ坂
口フラスコに50ml仕込み、20min.蒸気滅菌した。事前に
下記培地組成で培養したBacillus coagulansを、上記
試験培地に１％接種し、以下は実施例１と同様にして胞
子濃縮液を調製した。この胞子を、ｐＨ3.5 の溶液であ
る、処方に約１×107 個／ml接種し、以下は実施例１
と同様にして胞子生存率を計測した。結果を表２に示
す。 培地組成 魚肉エキス；1.0 重量％ グルタミン酸ナトリウム；0.5 重量％ MnSO4・5H2O；50ppm 培地組成 ポリペプトンＳ；0.2 重量％ 魚肉エキス；1.0 重量％ グルタミン酸ナトリウム；0.5 重量％ MnSO4・5H2O；50ppm
【０００９】
【表２】
【００１０】実施例３ 培養に用いた培地は、塩酸にてｐＨを5.5 、6.2 、ある
いは水酸化ナトリウムにてｐＨを7.0 に調整した下記培
地組成であり、Jar （６枚タービン２段）通気攪拌培
養を行った。培養条件は、15リットル仕込みとし、回転
数、通気、培養温度そして培養日数は各々200rpm、0.5v
vm、50℃、４日として行い、種菌は前記培地組成で事
前に培養したBacillus coagulansを１％接種した。以下
は実施例２と同様にして胞子濃縮液を調製し、同様にし
て胞子生存率を計測した。結果を表３に示す。
いは水酸化ナトリウムにてｐＨを7.0 に調整した下記培
地組成であり、Jar （６枚タービン２段）通気攪拌培
養を行った。培養条件は、15リットル仕込みとし、回転
数、通気、培養温度そして培養日数は各々200rpm、0.5v
vm、50℃、４日として行い、種菌は前記培地組成で事
前に培養したBacillus coagulansを１％接種した。以下
は実施例２と同様にして胞子濃縮液を調製し、同様にし
て胞子生存率を計測した。結果を表３に示す。
【００１１】
【表３】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 東海林 功一 茨城県鹿島郡神栖町東深芝20 花王株式会 社研究所内 Ｆターム(参考） 4B065 BB27 BC02 CA41
Claims (3)
- 【請求項１】 培養初期ｐＨが4.5 〜6.5 である培地に
て培養する有胞子乳酸菌の培養方法。 - 【請求項２】 大豆分解物が0.01〜5.0 重量％添加され
た培地にて培養する有胞子乳酸菌の培養方法。 - 【請求項３】 大豆分解物が0.01〜5.0 重量％添加され
た培養初期ｐＨが4.5 〜6.5 である培地にて培養する有
胞子乳酸菌の培養方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26925198A JP2000093162A (ja) | 1998-09-24 | 1998-09-24 | 有胞子乳酸菌の培養方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26925198A JP2000093162A (ja) | 1998-09-24 | 1998-09-24 | 有胞子乳酸菌の培養方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000093162A true JP2000093162A (ja) | 2000-04-04 |
Family
ID=17469762
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26925198A Pending JP2000093162A (ja) | 1998-09-24 | 1998-09-24 | 有胞子乳酸菌の培養方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000093162A (ja) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009051753A1 (en) | 2007-10-16 | 2009-04-23 | Ganeden Biotech, Inc. | Beverage compositions |
| US8697055B2 (en) | 1998-08-24 | 2014-04-15 | Ganeden Biotech, Inc. | Probiotic, lactic acid-producing bacteria |
| US9446111B2 (en) | 2009-04-29 | 2016-09-20 | Ganeden Biotech, Inc. | Inactivated bacterial cell formulation |
| US9622502B2 (en) | 2008-10-16 | 2017-04-18 | Ganeden Biotech, Inc. | Probiotic Bacillus pasta compositions |
| US10111916B2 (en) | 2003-12-05 | 2018-10-30 | Ganeden Biotech, Inc. | Compositions comprising Bacillus coagulans spores and whey |
| US10383342B2 (en) | 2007-08-29 | 2019-08-20 | Ganeden Biotech, Inc. | Baked goods |
| CN110537573A (zh) * | 2018-05-28 | 2019-12-06 | 可口可乐公司 | 一种含孢子型凝结芽孢杆菌的常温酸性饮品的生产方法 |
| US11235008B2 (en) | 2011-03-31 | 2022-02-01 | Ganeden Biotech, Inc. | Probiotic sports nutrition compositions |
-
1998
- 1998-09-24 JP JP26925198A patent/JP2000093162A/ja active Pending
Cited By (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8697055B2 (en) | 1998-08-24 | 2014-04-15 | Ganeden Biotech, Inc. | Probiotic, lactic acid-producing bacteria |
| US10111916B2 (en) | 2003-12-05 | 2018-10-30 | Ganeden Biotech, Inc. | Compositions comprising Bacillus coagulans spores and whey |
| US10383342B2 (en) | 2007-08-29 | 2019-08-20 | Ganeden Biotech, Inc. | Baked goods |
| EP2638807A1 (en) * | 2007-10-16 | 2013-09-18 | Ganeden Biotech, Inc. | Beverage compositions |
| AU2008311932B2 (en) * | 2007-10-16 | 2014-05-29 | Ganeden Biotech, Inc. | Beverage compositions |
| WO2009051753A1 (en) | 2007-10-16 | 2009-04-23 | Ganeden Biotech, Inc. | Beverage compositions |
| US9622502B2 (en) | 2008-10-16 | 2017-04-18 | Ganeden Biotech, Inc. | Probiotic Bacillus pasta compositions |
| US11419355B2 (en) | 2008-10-16 | 2022-08-23 | Ganeden Biotech, Inc. | Probiotic grain-based compositions |
| US10321704B2 (en) | 2008-10-16 | 2019-06-18 | Ganeden Biotech, Inc. | Probiotic grain-based compositions |
| US9446111B2 (en) | 2009-04-29 | 2016-09-20 | Ganeden Biotech, Inc. | Inactivated bacterial cell formulation |
| US9757442B2 (en) | 2009-04-29 | 2017-09-12 | Ganeden Biotech, Inc. | Inactivated bacterial cell formulation |
| US11235008B2 (en) | 2011-03-31 | 2022-02-01 | Ganeden Biotech, Inc. | Probiotic sports nutrition compositions |
| US11351206B2 (en) | 2011-03-31 | 2022-06-07 | Ganeden Biotech, Inc. | Probiotic sports nutrition compositions |
| CN110537573A (zh) * | 2018-05-28 | 2019-12-06 | 可口可乐公司 | 一种含孢子型凝结芽孢杆菌的常温酸性饮品的生产方法 |
| CN112312770A (zh) * | 2018-05-28 | 2021-02-02 | 可口可乐公司 | 一种用于生产包含芽孢状凝结芽孢杆菌的室温酸性饮料的方法 |
| EP3801979A1 (en) | 2018-05-28 | 2021-04-14 | The Coca-Cola Company | A method for the production of a room-temperature acidic beverage containing sporic bacillus coagulans |
| EP3801979A4 (en) * | 2018-05-28 | 2022-03-09 | The Coca-Cola Company | PROCESS FOR MAKING AN ACIDIC ROOM TEMPERATURE BEVERAGE WITH Spore-FORMING BACILLUS COAGULANS |
| AU2019277128B2 (en) * | 2018-05-28 | 2025-06-19 | The Coca-Cola Company | A method for the production of a room-temperature acidic beverage containing sporic Bacillus coagulans |
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|---|---|---|---|
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Effective date: 20050804 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 |
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| A621 | Written request for application examination |
Effective date: 20050804 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 |
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Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20080507 |
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| A521 | Written amendment |
Effective date: 20080630 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 |
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Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090609 |
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