IT8148090A1 - Soluzioni concentrate stabili di cisplatina, utili come composizioni farmaceutiche, e relativo procedimento di produzione - Google Patents

Description

DOCUMENTAZIONE

RILEGATA

. SERIE NUMERO. 135373

Serie Nume ro : 0 6/1 35.373

? DATA ESPOSITO ; 31/0 3/? 980.

Classe : 424 UruOTO No . : 125 Richiedenti : MURRAY A. KAPLAN. SYRACUSE . NY. ; _

ALPHONSE P. GRANATEK, BALDWINS VILLE, NY.

. .CONTINUAZIONE LATI. . .

^CERTIFICATI

.DOMANDE ESTERE/PCT. . .

- CEH?H??ATI - . . - - -- t-COME DEPO SITATA - fr-St-a-to? o? Pae-se-:HNY-Tavo-?e? Bfse-gn-jr:?'- -Totale rivendicaz. :7-Riven dicaz.

- i - In dip. : ? 5 -Tassa- de-pos i to? ricevuta-; -$ 105 - Pratica Procuratore No . RL-1617

^INDIRIZZO 1 JffiRBEET _W_. TAYLOR, JR. _

BRISTOL "LABORATORIES

DIV. OP BRISTOL-MYERS 00 .

" P. 0 . 'BOX' 657 "

SYRACUSE, NY 1320 1_

^Tito lo IO EMULAZIONI FARMACEUTICHE. -

Si certifica con la presente che l'allegato ? una copia fe dele tratta dagli archivi_ dell'Ufficio Brevetti e _ Mar chi di Fabbrica degli Stati Uniti della domanda come originariamente depositata la qua-. le ? sopra identificata.

Per autorizzazione dal

COMMISSARIO LI BREVETTI E MARCHI LI FABBRICA

f.to) C. W. Smith - Ufficiale Rogante

-(Sigillo) Lata: 18 Febbraio 1981

Bollo datario

135373

IOEMULA ZIONI FARMACEUTICHE

_ |_ _ __ RIASSUNTO _ _ r --_ |__ La.presente .invenzione si riferisce a s?luzio-!

_ ini -cnncentrat e .statili di cisplatina in un solvente^-. - .

i

_ ^comprendente glicole -polietilenico o glicole metos- ... _ _ nipolietilenico oppure una doro miscela, pi?.'acqua .

_ ,_ ,ed una-sorgente non tossica, farmaceuticamente accet- _ i

_ tabule di ioni.cloruro, . _ -_ _ _ _ _ _ ..

I

l

1 . ? _ :_ DESCRIZIONE -DELLA.INVENZIONE_ :. . _ -La_presente..intenzione.si--riferisce _a soluzioni_ _

! _ stabili_e concentrate-di eisplatina.in glicole poli.- _

l ! - ^etilenico acauoso, glicole.metossipolietilenico,.o ;? - - -_ |loro miscele,..contenenti una -sorgente,di ioni_cloru-L_ _ - ro. . . . - -_ I composti del platino,sono un gruppo originale _ _ ;di composti nell1ambito degli agenti antineoplastici..

- .. 35ssi sono stati notati in primo luogo per il fatto

_ di. .a^ere ..un. eff etto., antibiotico .da ..Rosenberg .e., suoi...

_c_o II ab oratoti. nel.JL.965. .(.Pp.senb.erg, _B_,_ ..et. al ...v dature.

(XoncJra) .2 05-*- ~69&=5.99 196 5?-) ..ed ? in.neguito.. dallo

st e s s o .. Ro s enb er e_suol~co llaborat ori? ? . stato, trora-

. t o- -die. _es si _s ono .po_t en.ti_.ag.ent i..ant i.tui?or.aLL_iiegl.i i_

! .animalL.CHos.erLb.erg,..-3-._e.t^alJ_,,._Iiat.UJie.?Londra).,._222.( i JS5--5S6 _.(1969.) X _ |_ 4 I _ Strutturalmente essi rappresentano un comp? e ss o_ 1 . . . . ? ? _! formato da un atomo di -platino in posizione centrarle

-e?ci-rc onda t o -da.-sv.ari at e._di c ?r ib.u zi on i?d i .a inm i __di

_ LcXor.o _o_ gruppi di ammoniaca in relazione planare

Luis. ..Q_Jrrans .. Due dei composti del platino pi? coma-

^n?mentn_-S,tudla-tl.^SQno esposti schematicamente oui

-J-SOttO _ _

tl _

/.*?-__

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Pt Pt

J!1 i'TH??

01 __

Cis-platino ClI) Cis-olatino (IV)

:...d iammino.d i _c1.oruro diamminot etracloruro

Co me. si UDUG..vedere i 1 composto indicato col

termine ._di_ci s -pi atino _?il) diamminodicloruro pos-

-a-iede-irutti-i _ suoi gruppi cloro ed animino in un sin-

pol o_p i an o. .Qne.st-0_c_o.mn o.sio_,_.nt tual men te n oto poi

: ?nnme di cisplatina adottato negli Stati Uniti, g stato sintetizzato in accordo con il seguente sche-.ma'di reazione

...?|ptCl^j 2 ???^ ? - ? ^ - > eis-jpt ClTH^ > 2CI2] 2 KC1

-- - - (si veda Iiauf?**fman, G. B. et al. , in Inorganic Svnthe-? - -sis, J. Kleiber^ (Ed.), pap;. 239-245, McGraw-Hill .

.Book Co., Ine., ITew York, 1963).

Breusova-Baidala, Y. ,G. et al., in Akademia ITauk .SSSR, Ilo. 6 pag. 1239-1242 (ciurmo 1974), discutono la lenta isomerizzazione di cis-platino (II) diamrainobicloruro in soluzione accuosa cos? da formare il -composto trans.

. . Reishus, J.Y7. e.Martin, D, S., in Journal of - - th? American Chemical Society, 83, 2457-2462 (1961), descrivono l'idrolisi acida della cisplatina alle . .. temperature di 25?C e 35?C. Questi st?di venivano _ .condotti,in soluzioni..acquose alle,concentrazioni di. _ _ 1,5 * 10?3 M, 2,5 x IO."5 M, e 5,0 x IO-5 M, che cor-.rispondono a 0,45, 0,75, ed 1,5 mg/ml rispettivamente. Gli autori affermano che vi era una certa ambi-_guit? nel collocare 11origine (cio?, il cos? detto ."punto zero?) perle curve di idrolisi poich? i csm-- --pioni richiedevano da 10 a 30 minuti per disciorliersi completamente anche a oneste concentrazioni cos? ozencuelg.,? M..-_ei_al., ,._.in.Jlrm.als_ of .Internai .Medicine ,__6??_?.03^812._.(.?97?7-?,? - passano, in -r.asj3.egna.-i.-i ! .ri su lt at i ? og l.i_ _s var i at i .?s t.udi_ _nr.e din ici._e.._c Unici. de Illuso ..della?' - c i splat ina. .ne i..?.umord.._speri2ient ali. L .negli? animali ?..c_o2ie_anch-e_ji.n--S^La.r.iati...tip.i__di_turriori_ ..umani-._Dss.i-jn.e.t_t.ono_in_ey_iden?a?c.he- _il .Eedic.amentp . -so-tto-st?d-io v? raesso-a_ disposi ,?ione? di- -rie creatori qualificati per il tramite dell 1 Investigational Dru ! i 13r aneli ,of ?the__ Canc.ar. Iherapy Evaluation Program of , .-tliCL_Nntional?Canc.er_Instituti5 ,_ar.a fornito. .come_p.ol.-vRTfi bianca liofilizzata in fiale contenenti 10 mg -di_c?splat.ina^_EQ-jag_di cloruro dodico, 100 mg di -saimitnlo? (USP-X_ed_ acido ..cloridrico per la regolai; i Do<1-, i -ne-de 1-pH .-Quando ll-prodot t o_v_ian.e._ rlcost ituit o ^con un vol ume d i_l.Q__nil_djL_3 c pu a sterile p e r__in lezioni . ' (IIS_P3_c iasc.un mil 1 i 1 i t no_dc 1 la_ri_sult ante solu zi on e -C_QntioiLe_un-_mg-j?i_cjLspl.at ina 10_..mg_ diesami t_olo_... e 9 ? mg? di KaCl?.

.Tali ey., R_._iL_e_t. al.._v_in._C.ance.n_Che rio.t_he.rapy -Be.nor.ts,-5.Z,? 16-5^Mk71? C19-7-3-) , . de scrivono.-.!.. risultati : _ -della.- prima -fase? del- -loro-studi o-clinico. -delliiinpie--_go ? di? ci spiatine nella? cura .di pazienti .umani con -una_larga-variet? di. formazioni neO-pias.tiche.^__CoEic _ :anche -nel 1 a -.pubbli c a zione - pre c edente., ...il. .medie ame nto _ ..veniva?f orn it o._a. que s t i_ r.i.c or c.a.t_Qri_-d al. Hat. i pnal Can.cer Institute in fiale contenenti 10 me di cisolati-- - -na,~-90-raq;di cloruro-di sodio e 100 mg di marmitelo, - per. la_ricostituzione con.un volume di 10 mi di ac-- -- - oua sterile.- - - - - . ... - . - ;? J? Rossof, A.-J?._et_al.._,.in.Cancer,..30,.1451-1456-_ ? _ ..(1972) descrivono. ?- risultati,del loro impiego della ..

- .cisp latina, nella, cura..di .51_paz.ient i . umani con una . . _ - ? variet? .di_tini-d-i..tumori...Essi affermano che il me-- ...

-? . ? -. dicamento fornito dal National Cancer Institute era- --_ _ . .prodotto.dai Ben.Venne Laboratories, Ine. e contene-. _ .. - ? - va -per ogni fiala IO-mg;di cisplatina, 10 ma; (sic)-- - -- di-mannit-olo-e -Smng-Cnic-X-di-lTaCl , _e che la oolvere

- di? colore- bianco giallastro .si -discioglieva . fac.ilmen-- te._in un volume-di 8-10.ini -di acaua sterile.-_ _ _ -. .- _ Certe informazioni,riguardarti la chimica della

_ __ cisnlatina?e_.la_sua_lQrmulazione._farmaceutica.sono._ _ _ - date alle -pagine 1-5 e~51-52 della,pubblicazione dal -... _ titolo ."CLINICAL BROCHURE, CIS=ELMUiIUM .(II) DIAI21I -_ NEDICHLORIDS. (1TSC 119275-)'% -H. Haldelsman ..et _al . In- _ _ . _ :v.e.s ti National. Drug 3r.anch., . Cancer.: C.he mot ber apy 3va~. _ ._ - - - luation Program, Division of- Cancer Treatment, Natio- .' - - - ,nal. Cancer Institute (.Revisionata nell ' agosto 1974).. .

. ... .. ? _ ..Le pagine 51 e 32 di tale pubblicazione riguardano . _ . . _._ la formulazione di cisrlatina fornita gratis dal

N.C.I. ai clinici per la loro stima clinica nella

..-.ciie mieter anla_d_s l_cnn_cr.o. , .. ed., in _es c e . si. JL egge .quante ; i -segue; j ; i - Eoglio..dei...Dati..Farmaceutici._

HSC-r11$875 - CLis-diamminodicl.or-op1alino...(II)-_ L -Formula?ione di?do

.sagelo_10._ag/?:Lala_.:_JEl_.conienuto._dl..ciasc?na_lial.an _ trasparente-di..20 ml__ap:pare.come 1 ?uia massa biancastra_1iofilizza-.ta -Cialcuna-..liala...coutiene...1Ol? <?. di__N?5C-?119S.75; 90 mg di cloruro di sodio; 100 mg;di mannitolo ed -acido-cloridrico.uer?la,..regolaz.i_one?_de1.pH,_

Pr_enarazione deIla

-Soluzione

LO.ung/iiala. __?_Guanio_v_en.ga?_r.icostituito con

.-10 .nl__.di.accu.a.._ster.ile per__ini.ezioni, .USP_,_c.iascurL_ml?de1la._ oluzione risultante contiene_1 mg_ di_.USC-Il9.675., 10.jmg_di_mannito-__lo-e-9-mg?di-c-1or?ro-di?sodio___ con intervallo di pH da 5,.5__a_L, 1S-5

_C.ons.er_vazione. Le Piale secche_non anerte__do avrebbero. __e.as.ore conservate _ alla _ temperatura del frigorifero C4-

- 8?C?)..

Stabilit? : __Le.fiale,intatte hanno una stabi-_ lit? provvisoria della durata.

_ di.un_anno quando es^e .vengono _ conser.v.ate..alla_.temperatura .dal.... _ -_ frigorifero_(4-&.?0)-._Le racco= . _ ....mandasioni.di stabilit? possono...

. . . essere.regolate durante il com-_ _ plet.amento di uno studio di c.on-_ _ servazione.in.scaffale della_ . ..-durata.di due anni- La ricosti- . _ trazione effettuata, come, racco- _ mandato,d? .come.risultato .ima _ soluzione,d? _colore.giallo Dal?-. . _ lido.,la.nuale_? stabile_per non_ _ pi? di un'ora alla..temperatura _ _ amb i entJ2__( 22 ?G_) . mando _ venga _ _ esp ost a _ ad . una ..il lur i nasi on e .. am - _ _ _b ient al e normal e _ e non pi?_d3. . _ otto ore a .temperatura ambiente _ _ . (22 ?H) nuando .la soluzione ven-_ genprotetta^dalla luce , .Le .-soluzio-.. .ni.ricostituite possono formare un precipitato dono un'ora.

alla temperatura- del.. frigo i?i.f e-

ro . (4--8?C) .. . _ !

! Cautele Le-formulazioni -di dosaggio lioi( filizzate non contengono-agenti-

.preservanti e perci?,di consi-j._

gliei_.di gettare le. soluzioni..-! _

.stessa ottO- 0.re dono_ la..loro. ?l- _

- ...costituzione

_ [Agosto,

ClinicaUDrug Distribution S.ection _ _

i

jBmag _P.evelop.ment . Br.ancb _

! _ La .d omand a _d i b r e ve t t o. britanni c o -pubbli e afa

coL.numero ..202194-6A..descrivo soluzioni acquose.,sta-?;

bili .di , cisplatina aventi..concent razione di. _cisp.la-

i.t ina- c ompr e s a_tra? .aire a- 0 , 1 _ed _1 , 0 mg /mi ed. un pii ? _ ? [variabile nell4 intervallo da 2T0 a 5,0. Le spluzion !i j r -[inoltre_posson,o_anche__contenere..ura__sprgente di _io~ ' i : | imL.cloru.ro,._com.e_s.orgente.inorganica,..non tossica, ^

1 ifarmareuti.c.amento_.acce11abile,_ad esempio il cloruro

. ..'.di sodio, ed una_comOosizione eccipiente^come ad e-1 . sempio-il -gannitolo.._ __ _ _

_ . .La._pre.sente inyenzione__si fiferiscejijsoluzionL j I i ! ? ^stabili e-concentrate .di?cisplatina.'aventi concentra:

_!zioni da circa 2,5-a circa_2j^ mg/ml. Pi? in partico-! ' - . . - ! _ ilare, la_presente_invenzione si riferisce a soluzioni di cisplatina stabili e concentrate in un mezze ..solvente comprendente.da circa .30 ?' fino a circa 95d -. di glicole polietilenico avente .peso molecolare me----- .dio.variabile da circa 150 a.circa $.000 oppure un-- glicole_metossipolie-tilenico avente un -peso molecola-- re medio da .circa -500 -a-circa 6.000, ovvero una loro -_ miscela, . e da. .circa 5--?. a . circa 70 di acaua, le .. _ - dette soluzioni-inoltre contenendo anche almeno una? . ..sorgente non tossica e farmaceuticamente accettabile .

...di ioni cloruro in ouantit? che ? almeno all.1incirca _ _ equivalente alla quantit? di cisplatina presente nel- __ _ la .soluzione, e le.dette soluzioni avendo una conce.n-..tra Mone-di _ cisplatina. var.iaM.le d.a -Circa..2, 5 cir-.ca 25 mg/ml . . . . . _. _ _ _ ... _ .

_ Soluzioni, stabili acquose di cisplatina .sono _ . state,descritte nella domanda..di brevetto.brittannico _ pubblicata c<?n ..il_numero 20219.46A, .Sebbene^soluzio-_ ni.stabili contenenti .concentrazion.i_di_cisplatina _

_ .fino.a.circa 1.mg/mi.si.possano...ottenere-instali me^:- . ? -zi.acouosi a temperatura ambiente, pu?.avvenire per? _ la_eristallizz?zione della cisplatina al.freddo,a. .

_ concentrazioni di cisplatina sostanzialmente superio- .... _...ri._a circa 0,5 _mg/ml. La ridissoluzione distale cis---platina cristallizzata non avviene facilmente median-, ..te,agitazione a temperatura ambiente, sebbene si oos(Sa riottenere una_soluzione_._riscaliando?a circa 57?C-,_ iPoich? le .temperature del trasporto e del-magazzina^?' jqio dopo la.vendita.jnon possono-essere controllate, ...le.,la cristalizsazione?della..cisplatina nelle fiale i_ ..i Icreerehbe un problema'.indesider*abile per-la.sommini!- . _ |s trazione medica, _1 a massima? concentrazione. .pratica ~ .de lla_ ci s p lat in a - in ubali-rao-zzi- acquosi _?~di. circa ? | _ .0,3-Eig/ml ? _ _ _ . _ _ _ | _ _ __Le_s CLIOS i on i_d i_c isplat ina.. d e 1 X a p rea ente inveni I

zione-possono. contenere_fino_a_.c.i:fc.ca 25 m?.di .cisoia- .___ tina _per.mi11i1itro _sebbene_la?concsntr.azione ma.s-]_ sima-pref erita_sia -di? circa? 15- . -Soluzioni- del!- _ , ' ~ ! - IIla.,pAresente?invenzione_c.ontenen.fcL_1.5. ? ciso "lati t-_ I

na.-per mi sono -state. ixantanufce__alla..tenmeratura d?_J _ _ L4?CL?per 12.nesi.__se.nza._cb.e__si__ve_rificasseveristaliizza_zione._de11a_cisplatina._ Tali__soluzioni_sono_state. -lanche raffreddate ..a_~60_?C e__pol._riscaldate fino, a_ - ^temperatura ambiente .senza,nessuna formazion.e_eyid.enj i

r

.. _ Ite _di ..precipitato di cisplatina . Cos?, le soluzioni _ |per -Uso.nratic.Q__prepar_a.te secondo 1a.presente inven? _ Lzione._nossono.._avere_.concentraz.ioni..di cisplatina al--meno trenta- volte superiori .a lineile .delle .soluzioni-I ' ^acquose per uso pratico preparate .secondo.la tecnica i ?[ -^recedente?.- - -- - - . 1? Si._apprezzer? che le soluzioni concentrate di cisplatina fornite . dalla oresente invenzione richie-- --deranno costi- -inferiori di .trasporto, di magazzinag-- . -gio e di .altro. .per_dose unitaria puando .si paragonano - con le ..soluzioni acouose note . -Sebbene anche la f orr - na_.solida_.liofilizjzat.a_nota?abbia,costi,.di.trasporto - e-di magazzinaggio.inferi-ori,.-Questo risparmio_viene. ? pi?.che controbilanciato-dal .tempo e dalle scese ch? .

la liofilizzazione comprende?... __ __ _ _ . . . In.una realizzazione_preferita..della presente invenzione, .il mezzo solvente comprende da circa ._ ._ ? l'BO.-^.a circa il 95 (e .pi? preferibilmente.da cir-_ ca_JJ?5-?- a-.circa-.il.90-f-) di_glico.l.e.-jQOlietilenicp_... _ avente un..peso..moiecolare._ned.iO-da circa..250 .9..circa ._.1600 C_e.pi? preferibilmente.da_c.irca 250.a circa.

? 650).e.._da ,circa_.i]_ 5-^-a^_sirca_U _2.0 f;? (e pi? prefe-r ? .ribilmente da.circa..1Q_5'a.circa 15 JO _di acnua. In _..una.realizzazione._r_iLL.preferita._il_mezzo.so1vente_ _ comprende- c ire ai. il .90.. fidi glicole .poliet il?nico_._ayen-_ te_ un .peso molecolare.. medio. __d a^_circa_ 35.0..a . circ_a 45Q _e^c irca. il 10 ?'_di_acpua.. _ _ _

_ Di preferenza la soluzione contiene da circa 5 _mg a circa 20 mg .di cisplatina per mi e piu prefe-.ribilmente da circa 10-a.circa 15 mg/ml. le sorgente non tossica, .farmaceuticamente accettabile di ioni cloruro preferibilmente ? presente in una concentra._zione di.almeno.,circa due equivalenti-per.-equivaler- -? .. t Ie di cisplatina - nella soluzione .--Concentrazioni - co ? i I, __ . I ?? ?? ?levate come-SO-equivalenti o--piu--di-ioni-clorur?-,j per equivalente di cisplatina -possono essere utilizi-_ ; ? j -?date, a-.seconda della concentrazione -della-cisplatipa,? della-percentuale di -acqua?presente-e-della-parti-co--? lare-sorgente,.di-ioni-cloruro,.ma-tali.concentrazioni.. .

jI I ? elevate:di -ioni cloruro-normalmente,non sono..n? neces-.? . Parie n?..desiderabili..-.G-li-espertim el ramo relativo.---

' !

? Apprezzeranno che, con-una-elevata-concentrazione -di_ I ( ! s ! _ cisplatina .ed_una..saarsa quantit?-di.acqua,...non_sarqb-_ e-possibile-dnrsclogliere una_q.uantl.ta sufficiente? J _ j -di-una_jsorg;ente_.di-ioni? cloruro? c_ome_. ad esempio.. cloru=_ ; i ' ' * I ro-di-sodio. in -modo -da- dare -50 -equivalenti.. di- ione 1|,-cloruro-per-equivalente -di?cisolatinn.-Inoltre,,.unai_ i ? ! -soluzione.satura, -o-quasi-.satura.di_un.-sale.-di-.clcrur!.o-in'organ?GO-.non....sarebh_e_.desiderabile_.per_.la_possir j... -?'i-l-it?--di-cristallizzazione.dalia-soluzione al .freddo.-_ JIe.lLa.pit.uazione.stabilita sopra, 50 equivalenti di ;

-ioni,.cloruro .per.equivalente..?l..cispla.tina^_si_pot_reb--Pero . -Ottenere msando ..ac ido.._cloridric o_. c orae._s orgente ? _ di-ioni-cloruro, ma questo_ po.t.rebbe._dare-una_soluzio.-! ? i ne .inde siderabi Iment e molto ac ida,__cio ? _ con._un _pH. _b as ?so Si ?-trovat.o_clie_le?soluzioni'eccesqiyamente aci-\ I de._sono-in_Qualche-m.odo._meno...stabili delle soluzioni_ ? pi? moderatamente acide L' intervallo di pii delle - . . .soluzioni preferibilmente ? compreso de circa 1 , 5 . .. . . _a.circa 4,5? Di preferenza si utilizzano da circa . . __ _ _ __2.a._cirea .10..equivalenti di ioni cloruro per ec.uiv.a~ . - ?-,lente-di cisplatina,...e.pi?.preferibilmente da-circa - :_ 3?a..circa ? .eauivalenti._di ioni?cloruro per eauiva-r. - - -- .lente-di cisplatina._

_ _ .Gli ioni,cloruro.possono .essere .forniti a%-iun-- - rendo acido..cloridrico,.un.alogenuro.metallico non... .. - tossico farmaceuticamente-comead. esempio cloruro di _ sodio., cloruro...di potassio,,.cloruro d.i calcio o clq-. _ . _ ruro di_mannesio,.oppure.un_sale.di.addizione_dell_|-.. . . ....- acido .cloridrico?con .una.ammira .terziaria?non -tossi-. . . _ .ca farmaceuticamente accettabile come ad esempio la .

?- - trietilaramina,.0.loro miscele? La..sors:ente di-doni. _ cloruro.. pref er.it a_?_ l.'_acido cloridrico , il cloruro _ .._ ._ .di sodio.,oppure..una__loro miscela. _ _ _ ? - _ __ _ _-I_Kli.coli_.polietilenici-.e_i_.glicoli.netossipo-_ _ __ lietilenici.hanno._l.e-formula generali_ _

_ _ __ _ _H:C0CH2GH2)n0H _ e . .

- _ CHpz(0CIio dCH do)nOCHp,_ _ _ __ _ _ ;_ rispettivamente, _e._sonq_disponibili,in commercio co-_ _ me Carbouar Eolvetlivlene .Glrcols e Carbowax l'ethoxy . . . . .. ?Polyethylene Glycols . Si preferisce utilizzare i _ ._ _ Sentry Grades dei Carbowax Polyethylene Glycols, che ? sono .prodotti, se.condo p;ll_ standard per_ X ' alii.nentazi.qi me ,e.-pe.r l? aoolicazioni dei madicamenti-de^li .Isti-I

tubi U .S .P. , 1T.F_. .e 1 ,G ,C.. . Gl ^intervalli di_nesi ..! _ j ??molecolari-tipici oer-una- variet?- diCarbowax. Polye--i!-thylene- Glycols_ e- Carbowax Methoxy Polve thylene _Gly iicols.-son dati..nelle _tabelle.,l_e__2 _

Tabella 1

? ICarbov/ax- Intervallo.

J? ly e thylene _ tipico .di _.p_e-_ Olycols" _(>*9. so molecolare.

.200 _4a 2L.9Q_ 3. 210_ 3P0 da 281 a 519

. . . 4.0Q _ da 580 a 4-20

- 4 1500 da^ 570 a 630

1000 d a^SpO _a_ 105.0

154-0 da 1300 a 1600

.4-000. _da 3_00p a_3 700 _ 600CL da -7.000 a

_ ? .(.jfc ) . Gl i c o 1 i : no 1 i e t i 1 e n i c i _ .6 arbqwax.

_ Tabella 2

."Carbowax . Intervallo .. -4 . iiethoxy . _ tipico di pe-1-Polyathylene

_ GlycolsvW

550 da 355 a 565

...._ 550 . . . da 525 a 575

. 750 _ _ _ _ _ da 715 a . 785 . .

2000. . da 1850 a. 2150 _ ... .. _ (.+).-Glicoli.metossipolietilenici .Carbpwax.. - --_ _ E'_ noto. ohe i .glicoli ..poli etilenici sformano co.m-.

_ __ plessi con .certi-sali inorganici...Cosi, la reazione - . _ _ _ _ -dei glicoli .polietilenici .con.ammonio cobaltotiocia- . -- -nato.per formare un complesso blu.? la base di un.

? - -procedimento colorimetrico di determinazione della . - . - .? concentrazione .dei glicoli .nolietilenici in svaria- . . _ _ te_miscele . Si.ritiene,ohe._la stabilit? .di.caratte-....... _ _r_e...veramente..unic.o_.de11a_cisalatina ..nelle,soluzioni _ _ della?presente invenzione possa essere dovuta ad un- . _ _ -.complesso . format o.-tra-.liL.cis platina ed il glicole . .

_ .polietilenico, . ma questa ? .soltanto. una ipotesi .teo-_ ... _ rica ed..essa.non .forma narte della presente.invenzio- . - .ne?la prova.-della-iormazione.di .un .comnlesso ? sta-_ _ :_ ta notata nella..tecnica-di-cromatografia su..strato_ _ _ ._ sottile,seguita nella.presente invenzione. Usando _ _ le -tecniche .pi? sotto descritte, la cisplatina acouo-_ ..

_ _ sa produce una_m_acohia ad un valore Rf di circa 0,65.

.. _ ....Tuttavia, una..soluzione di cisplatina in glicolepo--?lietilenico-^00 al -90 ? .- acaua al 10 (ovvero

. ...10 % di HC10,5-K).fornisce una macchia ad un vaio

- re Rf.di-circa-.Qv3-il-quale_si_.estende.in.striscia.u_ ..fino a-circa 0,65-..-La-diluizione_con quanti!?_.s_ostan-' !

- biali-di...acqua appare.Gp.ejszar.e._..irmnediai:anient.e_.il__co.in-_ _ .plesso.,-poic.2i?_-la_dilui3i.one_-.d?ll.a_s.ol.uzi..one_.41_-c.uii_ _ s.onra._di PEG-Ii^0 (ovvero HCl) cpn.__5_^Plumi di acqua_ .mostra.'alljor.a_.so.l_o__una.macchia di cisplatina.ad un tal or.e_di_ RU J.__c.irc.a__0_V6JL

Cromatografia su strato sottile. Apparecchi_ e__reagenti_

5a) Piastre per cromatografia su strato sottile-piai _str.e^ EIvL_iahoratories_silic.a_gel_6Q-__numero_di caia! og o_5_76. J, _ o_e mix v.ale n ti ..

0}.)__Lluerte: acetone/UTO^ 1li?(-9/l). Da preparare di _ fresc.o_giornalmente.._ :_

_C_c X JSvilup pa?_or e^_di.s ci.o,gl iere 5,6 g di cloruro stanrinso in IO mi di HG1 concentrato. Aggiungere 90 mi _ i_ _di._ac.qua _distillata e 0,2 g di EI. Misce1are..be-_ :_ _!_ ne...Pre.u_ararc_<}L_?r_e_sco_giornalmente._ :

I

(d) Stufa da laboratorio regolata a 100?0.__

J_ Tecnica seguita_

Xa_)_Diiuire__il__c.ampi.one__c..on_5.volumi_di dineti1forj_ mammide (PHP) (Burdick e Jackson, distillata.in vetro.}.

Ch) Macchiare una piastra per cromatografia su strato -sottile,con..5.._mic.r.o.lLtri__de.l__c.amp-i-qne__.e..5 micro-_ litri di una soluzione standard contenente cis-? platina (e transnlatino e d atino S, se fosse ap-.propriato) ad .una concentrazione approssimativa-- mente identica a quella che ci si attenderebbe -nel campione da analizzare. Sviluppare un'altezr-- za di 10 cm in un recid ente da cromatografia su _ strato sottile preventivamente messa in equilibrio .con .il materiale eluente. Spruzzare la niastra essiccata con la soluzione di sviluppatore. preparata di fresco e porre auindi la piastra .. _ in una_stufa a 100?C per 10 minuti. Osservare la _ _zone d allo/porpora.

(c) Valori approssimati di Rf:

_ .? _..-0165^cisplatina . . -. _ ... . 0,76-transplatino .

_ - - .0,9-platino B , . . . - _

_ ...I.saggi effettuati-mediante cromatografia su .. _ ?_liauido delle.soluzioni della presente invenzione _ _ per il .contenuto di:cisplatina possono essere condotti in accordo con .la tecnica descritta nella domanda _ _ _ di brevetto per il Regno Unito No. 202194-6A. La fase .

? mobile preferita ? costituita da acetato di etile/ -metanolo/dimetilformammide/acaua distillata (25/16/ 5/5). Preferibilmente lo standard ? costituito da cisnlatina disciolta in dimetilforma-umide ad una conc entrasi one. di ..i.mg/ril ,-.?. camp ioni _per U analisi. ven- _ ;

. gono.-diluiti-.con. dime tilt ormamraide fino. ..ad _ ottener e _

\

una- concentrazione -approssimata di. cisplatina pari__ _ 1 _

_ J_ Sebbene. ..non ,s i_oo_s s_a._at tenere _ alcun.. p articolare _ __

t |

_ vant a ggi o_.d alla _lo.ro_ _pr.e s.enz a,._l e._ soluzioni .eie Ila _ ; _

I i

) *

_ presente-invenzione possono., s.e_s i .denide r.a ,_c.ont ene.- _

! !

_ _ _ re., un eccipiente tra quelli di solito impiegati, fi- _ _ _

| !

- - B io 1 o g ic am e n t e- accettabile _ come ad_..e s ciani o__il .-manniio.- _ j _

! ' ' !

i_ - lo.. - : _ _ _ : _ l _

i *

_ I - Sulla base di studi di stabilit? finora effet-j _

1

? _ tu a ti , . la -ut abili. t??pr e vistr.-d elle .s o lu z ioni__del.la-: _

? . I ' I

_ presente? invenziane_(.de.f irrita ?Come -re.rd.ita di__p_oten- _

j j

_ z a. pari -al-10- ?') ? ...maggiore? di....due ... anni? a _t e mpe ra t u- _ :

i ? i

_ r.a amb ientO-. _ _ :_

c I

f ;

_ _ In una realizzazione preferita della presente ?__

t ~~ t

i I

_ inve ns i ore. , le_ e o lu z ioni- s ,o no.. sterili- e.d_.e senti, .dai _ - _

- pdrogeno, e sono?conf ezionat e? im-cont enitor i? s tarili -

_ es ent i-da-_pir.agen.o_. _ Tali _. so lu.sioni__p.o.ss ono . .poi? e sae- _

- r e -di 1uit e pe r?es empio _c on _L'acqua . st.e ri le ..p er _:ln ie?^ _

_ zi oni. USP-? o_Yv.er.o_is oluzione._.s.alina_n ormale, si erile _ _

- __USE"? e -sono-somministrate?per. -la-via -intramuscolare _

- p -ln.trar.en osa,.? X_aez.zi-per_s.t erilizzare queste? s.olm- _ _

? \ J.

_ z i on i_ s ono_gi ?_be.n ..not i_n eJL_ram o_re lativo . . Se ll.a.._p_rer- _ , _

_ _ _ sente_in.v-enzi one _si_ pr ef eris c e. .far pass ar.e._l.e_-?olU? _ : sioni attraverso un filtro sterile esente da pirogeni Millipore da 0,22 micron, usando tecniche as?ttiche sotto pressione di azoto sterilizzato. ".Milli-_ pore" ? un marchio.di fabbrica depositato della.I:illipore Corporation per filtri a membrana. Il filtrato sterile viene raccolto in contenitori sterili esenti da pirogeni e viene da ultimo Introdotto, nella ouantit|idesiderata, in adatte fiale sterili esenti da nirogeni e tannate con tanni sterili esenti da pirogeno (di preferenza rivestiti di teflon) e sigillate con sigilli di-alluminio sterile. -?? Per 11impiego nella cura del cancro, le soluzio- -ni concentrate vengono diluite fino ad ottenere la .. concentrazione desiderato (tipicamente un mg di cisplatina per mi) per esempio'con la cosiddetta "accua sterile, per iniezioni USP", "soluzione salina normale . sterile USP", ovvero "soluzione sterile di glucosio!1 . ciuindi usate mediante .iniezioni.intramuscolari o intravenose, ovvero per infusione intravenosa come..gi? noto per i preparati di cisplatina.della tecnica precedente. ? dosi usate .correntemente con tossicit? . da blanda a moderatamente accettabile sono nell.1in-, tervallo da 60 a 100 mg/M^ per via intravenosa come dose singola oppure come dose suddivisa in un periodo da 3 a 5 giorni, per essere poi ripetuta ad inter? 1 p -.valli.. di 4_ .settimane .....Un .dosafcsicudi _6Q jns/Mf ..??gr.QS: .nolanamente ..equivalente. a__l , 5. .mg/kg;.. che_ a_sua_ volta!-i ! ? :?- tiOEs.O-lanamen.te _e5uale._.a_lQ>-nig/panlen.te_..del. pesol di . 70-las.._-I)_i_.f.reqxie.n_t_e__sl?i'n_lDipief:.o_.dl. .unaJ;exapial_ -concomitante_CDn-...aLtri-_a^nfel.._ohe,!ni.Qtarapicl._p.er__o-t-.. - tenera. imi pilo ri risultati .

Come viene qui usato _ e_ nelle rivendicazioni, il ?-piferlment i a "equivalenti11 di i one cloruro per "e-, a! IH i__c. i s piatir a__s_ign ifica _ecr u ival e.n t i _mo-!~i fl-r-? . Cosi per esempio quando si utilizza l ' interval-?l o : o r eie r i t o? de l-V alare? da._c_i r c a__5 c i r c a_ _7_e q u i va--lenti-di? ioni- -dor.uro~per . e.auivaLent.e di.__c_ispl-at.inay ni uti l i zza una Quantit? d?|circa 5 a circa 7 moli di WaCI per mole di cisplat?na ma una quantit? da ima _L, 5 a circa 3, 5 moli di CaCl per mole di ci s -iplatina , ?accelera..?

Il_nla?il?O__B _? .una lenominas ione arbitraria qui .impi.e.? at,a_p er_un . prodoil o . _d i_._reazi on&-ac_i?_o. di e i s.- . .platin a_r he _?_una met? d.e.l_no io? c_o mp l.e.sao? mas o ._di iagrus ..ed? alruiale. ?. s t ata_asa.egnata.-in_via_di _ip o-? la?sasmanta ? struttura

-H 4i JC1- _ ci _

Pt

. K3IL JCLL

- 1

-.la. prenente_ invenzione__.?? illustr ai a -dagli. .e aem- .pi che seguono senza per? essere limitata in alcun .. .modo da questi,.

_ _ . . . Esempio X .. . .

_ _ .. Soluzione concentrata stabile di

. - i cisplatina .(10 mg/ml) in miscela

_ _ di glicole -polietilenico 400 (90#.)/

_ _ - KC11N._.(10/ ?o) . _ ... . . . . 500 mg di cisplatina venivano sospesi in una . _ .. ....soluzione di 5 mi di HCl IN e 45 mi di glicole poli-. - .etilenico 400,.Dopo 2,5 giorni di agitazione a tem-_ paratura ambiente__(con il contenitore protetto dal-_ .la .luce con una'foglia di alluminio) si otteneva u-- na soluzione limpida di colore giallo. Parti,alicuo-- - te della.-soluzione venivano poste in fiale di colo-_ _ razione ambra del volume di 17 mi, tannate con tap-- -ni rivestiti di teflon, sigillate con cappucci di , - - ? alluminio e poste alla prova di stabilit? alla con-; - servazione a svaniate temperature. Dopo conservazio--- - ne di due settimane a 45?C, la cromatografia su stra-. . to sottile,indicava la presenza di unajtraccia di - .transplatino e circa 1 # di platino B. Dono conser-_ . .vazione di due settimane a 56?C, la cronatbgrafia su strato sottile indicava la presenza di una nuan-? . .tit? minoredell ? % di transplatino e circa 3 di platino B. I campioni conservati per due settimane .Lalla... te rape ratura.. eli _56.?0._ye ni .vano ci iluit i ..con .4 , Q ?

.o 19_v:Qlu?i..di.. acciua in- miod.o.. d.a_dare.. s ol_u.? i_oni . 1 ira-. ...ipide. che .contenevano ri s p e 11 iy.aman t e_2.,..,! .. ,e_0 , .5.jng/rsl. . -di? cisplat ina-Una-lieve-torbidit? si-sviluppava-in _ ! , i __ _|ciascuno_d.ei__camp.ioni- diluiti .1???-??;???..?_?.??- circa 18 .ore ..a? temperatura. ambiente... _ _ _ I io..2

SoIn zione c.onCe.ntrata...s_tabile _di -diapla;.b.lna._(10 mg/ml ) in glicole

..poi iotilenico 400 _(_9Q_i ZH010.5N

_(.10_..?i)

.5 mi di acqua purificata USP e 5,0 mi di HC1 IN _ venivano miscelati e ad essi si aggiungevano 90<0 Pi1 di_ .glicol.e_Qolietilenico 400. A 50 mi della s?luzione?di?cui?aonr.a_.si...agniungevan.o_ rng di cisn1atina e_J.a miscela era protetta da11a_luce con una foglia .-_dj_alluminia? e<d agitata a temperatura ambiente oer ?24-ore in modo da produrre una soluzione limpida.

La cromatografia du strato sottile della soluzione :preparata 1i fresco mostrava soltanto_una zona del-.lu-cisplatina cori.una p?ssibile__tracc.ia_ di transnla-__tino....Alianote_dnl.Jvolnme?cli_2...ni! deIla.soluzione. venlvano_poS-te..in .f.i?le.??i..colQr.a.zione_._ambra_clel_j :lume di 1? mi. tannate con tappi rivestiti di teflon. sigillate con tappi di alluminio e sottoposte alle ; .prove di stabilit? alla conservazione a svariate temperature. Una fiala campione era congelata in un badi ghiaccio secco-acetone per un' ora e poi la Asciata tornare alla temperatura ambiente. Si otteneiva una soluzione limnida senza alcuna traccia di ore-. i?cipitato . Dopo conservazione di tre mesi._.a 37-?-C ed ? ?

,a 45?C, la cromatografia su strato sottile.indicava :la presenza di platino J3 alla concentrazione da 1 a i

;2 ? ed una traccia possibiledi transplatino. Dopo .-un mese di conservazione alla temperatura di 56?C -la cromatografia su strato sottile indicava,la pre?_ .senza di pi? del 5 /.ma meno del 10% di .platino B._ .ed una traccia di trans.platino. I campioni,cpnserva--ti a 37?C ed a 45?C per tre mesi e a temperature di .56?C per un mese venivano diluiti con 4 volumi di ;acqua purificata USP cos? da dare soluzioni limpide _ ^contenenti 2.mg/ml di cisplatina. Le soluzioni dilui-- - -ite restavano limnide dopo rinoso .di 24 ore.a tempeT_ I

. . --irat?ra ambiente. _ _ _ __ _ --.Esempio 3 . .

Soluzione concentrata stabile di cisplatina (10 mg/ml) pi? CaCl^

(20 mg/ml) in glicole polietilenico

400 (90 ?J)/HC10,5N (10 ?)

2 g di CaCl2 anidro di oualit? "reagente" venii : i j

- .vano. disaiol.ti..in_una__miscela..di _5 ? ral dii. accua ourij - :^cata_USP_e_5-inl-di_HGl_.lN* .89 -Dii- -di_.;-;l.ic_ole._polie-..

- itilenic o 400 .arano .animiti .cos.?_da_?ori are_il voJLu-! i - 'Me., a. 1GQ 50._ml_di._Quest.a__s-Qlu.z:LQ.na_y_eniv-an.Q _ L_

aggiunti- .5-50- .mg: _ di._ c_ispl at ina., _ _e._ Xa_jois ce la_rra_prp-; i i ? jtejfci.a__.da II a_luce_.c_Qn una fo glia eli alluminio ed agi-

? |tata_a_tesperatura.-ambierite..p.er .2.4__ore..In_modo_.da__d.a-_.

;re_una_soluzione limpida. La crosatograf_ia_su stratb

-- :sottile-de11a_soluzxone__prapar.ata di..fresco indicava I " i _ ..soltanto..una_xoiia_di..C?sp_latina__con una traccia pos-__

;

- i|sibile. di _trans.n "l at in a. Ali au.o.t e ile 1_ volume di 2 mi j

_ Idella._soInzione venivano poste in fiale di colorazio-! i I i _ ln.P_-j?m~hra__de1.volume di 17 mi, tannate con tappi ri-

t i _ iv-estiti_di_t.e-fl.on,_sigil.lat_e_ con_eaorucci di allumi-I1 ? iI _ _ rio?e_sattoposie_r.ller rore di stabilit? alla conser-

_ lv.azipne_a...avariate_t.emp_erature. Una fiala campione__

! ^ ?i _ -veniva-p-os.t.a in..un bagno di ghiaccio secco-acetone _

_ pe-p ?? &7.7, 'ora e congelata fino a dare un gel traspa-

_ ?rentn. Essa era poi lasciata tornare alla temperatu-

? ra? amo i e n t e__e_ s i ...otte neva una_solu zi on e__ 1 impida. Do-

ino conservazione della durata di tre mesi alla tera?

ppratrm di 57?C, la cromatografia su strato sottile

-ind-icava?la--preaenza_di .una.conc.en.txazi.one da__l.a 2 %

t?i platino B ed una possibile tiaccia di transplati^.*-

?nnt Tinpr) tre mesi di conservazione alla temperatura di 45?C, la cromatografia su strato sottile indicava la -presenza di.circa 5 % di platino B ed una traccia ..- _ .possibile di.trahsnlatino. Dopo un mese,di conserva-_ .zione alla temperatura di 56?C, la .cromatografia su i

Astrato sottile indicava,la credenza di una auantit? -da 8 a 10 ?'di platino B ed-una traccia di transola-.tino. I campioni conservati alla temperatura di 37?C .e di 45?0 per tre mesi ed alla temperatura di 56?C per un mese venivano diluiti con 4 volumi di scnua _ ^purificata USP cos? da dare soluzioni limpide contenenti-2 m^/ml di cisplatina. Le soluzioni diluite -restavano limpide dopo riposo di 24 ore alla temperatura ambiente. . . .

__ 1 . . Esempio 4

Soluzione concentrata stabile d.i

: . _ t?isplatina (circa 22 mg/ml) pi? _

CaCl^.(25 mg/ml) in glicole polietilenico.(90 ?)/HCl 0,5I\T (10 ?) _ . . Ad un volume di 3 mi di una soluzione di glico-_ .le polietilenico 400 (.901') ed HC1 0,5^ (10 ?') ve-.nivano aggiunti 45 mg di cisplatina, e la miscela era agitata per circa un'ora a temperatura ambiente .cer ottenere una soluzione limpida. Una ouantit? aggiuntiva di 30 m~ di cisplatina veniva noi introdotta (per un totale di 25 mg/ml) e la miscela era amii (tata .al la. .temperatura, di circa 45?0 per un * ora e n L o .i |a. bemoo natura . ambiente . jDer_.18- oro. ..c.as?. da. produrre .. I " < una. soluzione ouasi._conpleta^_.JLa. piccola Quantit? .. ~ .di- materiale, insolubile- .era-xinioasa-mediante filtra- _ j i izione . - La.. cr.omat?graf ia_su_ strato_ sottile_ del .filtra- .

j-to mo s t r ava . sol ament e . una__z ona di_c i spi at.ina_ . co.n_ una ? i possibile traccia sdi _tr_a;a.s.p latin o..,JC;a__par te restante.. del_ filtrato era noeta in una fiala di colorazione , [ambra . d e 1 _ v o lurae .. a ' i_? V/L m 1 .f.Q.rni.ta._di_un_tappo: rive i-. ... Stito. di ..teflon , .sigilla.t.a..c.on_un._capppccio_ di_allup_. mino-e_msntenu.ta_alla_.tanip_eraiJura_di._t5--^.-l)er._tjre._ i _ m e si . Dono invecchiamento per tre me si a 45?C, la c r o mat o gr a f i a_ su_ st rato so t tile indi c av a la pre se n-( _

I

- i-za-di -una -concentrazione? dallll ~al-_2??i-di? nlatino-S ? ' [ '

. _ |e.._ne ss.un._qu antit at. ivo. di. . trans p latin o . _la_di 1 uiz i o.ne.

! ? _ ideila... soluzione -posta- acLinv.e echi are ron_acuuarpuri-^ ficaia USP .f ilio .ad.una concentrazione ..di_.2_mg/ml._di. cisplatina dava, .soluzioni limpide._che_restavana_taLi. tanche, dopo riposo alla? temperatura-ambiente? per_ 24 _ ore..

-Esempio- -5 ?

Soluzione stabile concentrata di

i

i

X cisplatina .(12 mg/ml).pi?-NaCl?

(10. mg/ml) _in .glicole-etilenico.

400 ..(90 il) /HC1 ..0 , 5N- (10 #)-- -

100 mg di cloruro di sodio venivano disciolti .in una ,soluzione._dL_5-mi di.acqua,purificata USP e. 5 -m3_di_.HCl-lIL.-A?que-Sta.soluzione si aggiungevano, 9.0_ml_di-.gli.cole_polietilenico.t-_0.0_e.la miscela era agi-tntn.-per-.l^-minutl^^ S-O.jil.di_.quest_'_ulti_rna._solu.-_. _ zione._venivano..aggiunti_50_0._mg..di cisplatina, e._la;. miscela_v.eniva_agitat.a_al11os.curo_a temperatura,_am-_ b.iente._non._tr.e_.giorni.,cos? da produrre._una__soluzione. _ limpida._-La._croraatogr.afia-_su_strato.sottile.,della_ solu.zi.one__preparata di fresco mostrava soltanto una ,..macchia di cisp.latiha.,._La._cromatografia su liquido. ad,^alta_.efficienza e.ff_ettuat_a .con}_e_.saggio.sulla so-1uzione._preparata di fresco mostrava che_essa conteneva..12 mg.di.._cisp.latina._per.mi.Parti aliquote ve-_ n ivano sigi1.1ate in_fiale__di_colore ambra del volu-_.jne.di_17-mi come_des.cri11o_belilesempio_3 e sotto-_ .poste all.e_prove_di_st.ab.ilit?^allaccoriservaiione a svariaie_.temperature_._ELop_o__cqns.arvazione.a 57?C per un-periodo di -tre.masir-.la cromatogr.af_ia_su strato s.ottile indieava 1a presenzajii una quantit? minore del ? ' 1 % di pl atino B e n essun au an ti t a t ivo _ di_ trans - _ ?platino--Dopo conservazione,a .56-?C_p.er._un_mese^ l.a... cromatografia,su.,strato.sottile indieava la presenza.di-una.,ouantit? dall.'l al 29' di platino.B e nessun cuoriitativo di transplatino. La diluizione dei -? .campioni invecchiati impiegando acqua purificata,USI! ? I - fino ad ottenere una.,concentrazione.di.2 mg/ral.di._|.. ? - jCispliitina dava . soluzioni limpide le .quali restavano.

tali anche dopo-riposo-a -temperatura-ambiente.per,... - *24.ore,_ _ _?_ ..:_ _ _

I js aggi e f f e ttuati rnedi.ante_ c pomato grafi a. ad ialta.efficienza..su_.campioni,.conservati .per_tre.juesi ! \ laila-temperatura di_45?C, per.dei..mesi a 37?C e per .! otto. mesi. a__temper.atura ambiente.. mostravano ..perd it e I;.. idi. potenza..rispettivamente, del 6,6_/,__ 6g 1_ e 2, - Esempio .6. _ _ _ _ Solu z ione. erme entra t a_ _s tabi 1 e._ d i _

__ cisplatina_C.ll,4.mg/rol) pi?..NaCl_

? -(10?mg/ml)?in.glicole.polietileni-_

:o-400 (90 -%)/acqua (10 fi)_ __

- Ad-una--soluzione_di-_50_mg_di .NaCl in_.5_mi_di_ \ ' > ;ac.oua_purificata.USP_e_43_jn1_di glicole_poii_etilenilco 400?venivano.aggiuntiJ300.mg..di.cisplatina, e la, V i .lmis.ce1a_v.eniva_agitata ..all!_o.scuro.a temperatura am-Ib.iente r?er 6 ore in nodo da dare^una soluzione^lim ^ ; I m.ida.-l?L_e.romat.ografia..su.strato sottile della soluiziom preparata di fresco mostrava soltanto una fflac-j ^ ! ' ' ' .. ?" "T" l.chia.di-cisnlatina. Il saggio effettuato mediante , j l cromatografia..su .liqui.do ad,alta_eff.i.ci.enza,mostra?! i!.va_che_tale_.soluzione conteneva 11,4 mg di cisplati Ina per millilitro. Parti aliauote venivano sigillate . . . in fiale di .colorazione, ambra .del volume di 17 mi co-_ - _ me descritto, nell!esempio-3- e ..sottoposte .a. prove , di .

_ _ stabilit?, alla, .conservazione. .a svariate temperature . . .

- Dopo-conservaz ione? alla .temperatura, J?? 37--C. e -di .4_5?C _ _ _ per. tre. mesi,; la_ cromatografia^ su strato sottile in-_ _ dicava.. la. prese.nza._di..l2' jif-jiLatino_ B .e .nessun ruan- _

. - - litativ.o di transolatino. La .diluizione .dei campioni . .

. . invecchiati .con acqua .purificata USP fino, ad ottener _ re. .una..concentrazion.e...di.. .2_mg/ml_di _c_.ispl at ina dava _

_ _ soluzioni trasparenti, le. .aualilre.stava no tali anche

. _ dopo riposo alla temperatura-_ambie.nt e .per. 24 ore . . . _ _ I . sagri, eff ettuati. -mediante cromatografia .ad _al- _ _ - - -ta efficienza su campioni conservati mer tre resi al-? - .. . _ la temperatura di_45-?.0^ s.ei .mesi alla- temperatura .di _

_ _ 37-?-C e. ..sette .mesi. alla temperatura, ambiente mostrava- _ _ no.. perdite .di..ootenza_rispe_t?_iyamgnte_ del 6,1 #., 7?_0r _

_ _ _ _ Esempio. _7_ _ _ _ _ _ _ _ Soluzione concentrata stabile di _ _ _ ; _ cisplatiiia (10 mg/ml)_.iii -glicole . _ _

. . _ _ polietilenico 6.00 .C90-^)/ECl 0,5 N .

. _ . do ro _ . - _ _ .' . _ _ _ __ Ad una soluzione di 2,5 ..mi ?i acqua purificata .

_ ESP, 2,5 mi di H31 IN e 45. mi. di glicole polietileni

-co 600 si.aggiungevano 500.mg.di_cisplatina,-e la mi-.-scela era agitata.allo .scuro-a?temperatura,ambiente. ter 5 ore cosi da ot:?onere__un?__s.oluzione limpida. ; _ ! i .la ..cromatografia.su ..strato_sot?ile_de.Ha.soluzione...... preparata -di-fresco rio s t r ava-s olt ant o- una..mac chi a. _di_ _ cisplatina. .Campioni. .della-Soluzione -.prepar.ata.-di_ _j fresco -erano-diluiti -Con.l,__2 3,?4-,._5~e-9-volumi-d?. iacqua purificaia.USPj?queste..soluzioni-diluite non_ - mostravano alcun_fenoineno- .di -'cristallizzazione p_er_

-riposo di-ISrore-a_temperaturaaixhient_a__ovvero.a 'HI? ^ceratura di- 4-?C.._Parti alinuo-te-dallnrsaluaione?.prer

-parata di fresco? ven ivano? s igi 11 at e _ ..in fial e._.di. . co-_1ore-.aiabra del__xo.lume.di 17 mi come igi?.deaeritto nell-'esempio 3-edJeran.o_p.oi._so.ttjoppste_a_prove di -- ? !stabilit?-alla cons.ervazione_a_svariate temperature _ _ !*Bo-oo-Oonser.vazione..-alljSL-ten)i)3xatupa_di_32?C_e di 45 i?C ! * ' . | 1 _ jjertre m?si, la cromatografia su strato sottile in-?! .. . . ~ ? T; _ _?]dicava la presenza di 1 % di Platino B__ed_assenza_di _

1

_ ... -itransplatino.. . Dopo, conservazione a 56? C pe_r_ un ne se _ aa_cro?natografia su strato sottile indicava la pre-_ .;senza di:.3,4 di .platino 3 e nessun Quantitativo -di?transplatino...la diluizione dei campioni invecchia-|

i

?ti_con acoua purificata.USP fino_ad ottenere unacon-?' -j contrazione -di 2 rag/ml-di. cisplatina _dava_.s_pluzioni_ [limpide-, le. .quali re st avaro. tali_anche dopo_ riposo a .temperatura ambiente per 24 ore.

..._ _. _ _ _ Esempio .6

- - Soluzione concentrata..stabile di.. . _ - - - Lcisplatina (.10.jag/ml) pi? I'Ia.C]_ ..__ __ _ ,_ (1.0_ng/ml)_in.giico1e_ppiie tile-_ _

- nico 400 -C-90 HCl_0t2E _(1.0l)- - . . ? _ ;_ Ad una splu3?Qne_di.C,5 : %_di.N.aGl in_4.mi di_ _ acaua purificat.a_.U.SP., di'1..mi di EOI IR _e di 45 mi_ _ _ di .glicole polietilenico.4-0.0..venivano,aggiunti .250 mg _ _ di _cisplatina,_e la miscela.v.eniva agitata..allloscu-_ _ ro a temperatura ambiente,j)er_4.ore.per dare,una so-_ luzione-limnida-gialla ._la.__crom_atpgrafia_..su strato . ... - : ? sottile delln soluzions^preparata. di fresco mostrava _ . _ solamente una. macchia ...di ci splatina . .Le._ diluizioni .. _ della soluzione_.prepar.at_a di_ fresco . con. l.,_ 2_* 3_, _ - 5- e 9 volumi-. di.. ac a ua_ purificata davaPP_ soluzioni _lim-_ _ ._ nido che?rest.avano__limpide__dop_o_rinos_o_di_24_ore a_ _ temperatura ambiente. Le diluizioni con .1, 2, 3, 4_ _ e 5 volumi non mostravano segno di cristallizzazio-_ _ ne_nuando_erano_mantenute .alla temperatura di j4?C_ _ _ per_24.ore. Parti aliouote d?lia soluzione preparata . _ di-fresco .venivano.sigillate..in fiale ??._2????.ambra _ del volume di 17.mi come,viene descritto.,nell'esem-_ pio.3 e venivano sottoposte.a prove di stabilit? al_-__ _ la conservazione,a svariate temperature. Dopo conserjvazione- alla temperatura di 37?C per tre mesi-, ?la- 1 - ? I ; cromato graiia su strato sottile indicava la presenza -di1.% .ai platino B_con.possibile traccia_di..tr?nspla-.tino.Dopo conservazione alla temperatura .di /-i-5?C.per indicava Ire.mesi,.-la.cromatografia..substrato sott.ileYla_pre-i-| -senza,di 5 #-di-platino B con-una.-possibile-traccia _ -d Ii'_ transplatino?. Dopo,conservazio?ne .alla temperatur Ia _di _?S-0-CLps r . nm_ mene la_ctomatogra.fi a, .su strato. .sot_i_ j

-ti le., indicava , la. presenza- di 2.^ 3_ ?i_di. -piati no...B .ed _ I j asaenza di,_transplatino._La diluizione dei .campioniL__ i( !t -invecchiati -con acq.ua_purific.ata_USP..fino...ad.un_a_coP.-_. contrazione-di .2..mg/ml_.di cisplatina..dava soluzioni 3impide che..re.stavano.._limp.ide_dopp_riposo di 2d_ore _?-temperatura -ambiente._

_ Esempio._9

Soluzione concentrata stabile di

- ciapia.tina..(2,5.mg/mi ..HaC.1(9....mg/mi).

a.-marmi.to.lo_(12,5.mg/ml)._in _glicole_ pQli.etilenico_.SOOO '.acidificatoai__ 1_.'31 % -(peso/volume).acquoso_

( 1 i Cloruro di sodio (0,9 g),.mannitolo (1,25 g) e: glicole nolietilenico.6000.(.51 ,5 )..lenivano disciol-? j Iti -in-un?:volume,d'.accua .purificata US? sufficiente. I _ . I !a_nreparare_100._ml..di_soluaione^ e poi la soluzione, [ ? .? ; veniva acidificata . fino.. ad un_pH di 2,2 con_HCl B 4 .(0,7 mi). Si agriunseva cisolatina (255 mtr) e la rr.i-. . scela era abitata all'oscuro per tre giorni a tempe-_ _ ratura. ambiente per..ottenere una soluzione limpida.. . . _ __La cromatografia,su..strato sottile..della soluzione. _ _. _ preparata di fresco.mostrava,solamente..una .zona.di_

-- ,- cisplatina. Parti^alinuote della soluzione -nrepara- - --_ ta .di.fresco venivano,sigillate in diale di..color_ .. _ ambra ..del volume di _17mi come descritto,nell'.esem- _ ... _ pio.5 e venivano sottoposte a prove di stabilit? al- _ _ J_a_conservazione_alle.temperature.,di./t5..?C...e_.56?C.._

_ Dopo .conservazione per due.mesialle temperature di .

_ _ 45-?..C e 56?C,.la.cromatografia.ou strato sottile mo- .

_ ?_ strava .la.nredenaa-jminPJ9...dell.,JLil..di _p.latinq._B ed_

_ ! assenza . di .transplatino . La. diluizione . dei . campioni .

- - invecchiati-, con .un. volume .eguale.. di acqua .purifica- . -_ _ _ _ ta .USP dava soluzioni -limoide che . restavano ..limpide ... . _ . _ : _ dopo . riposo, a . temperatura .ambiente oer. .24?. ore . ? ..

_ __ __ Es.empio._lQ_ _

_ __ Soluzione,concentrata .stabile,di_

... - - cisplatina .(15,8 mg/ml).pi? ITaCl . -_ _ (10 mg/ml) in .gliu?le polietilenico . _ . ... ___ __ _ _ _ 4.00.acquoso al.90 Si._ . . . ..

Glicole..p..o.lieti.l.eni.co .400.(90 mi) veniva disciol- .. . . . t? in una soluzione di 1,0 g di NaCl in 10 mi di ac-. _aua purificata USP . A 60 mi della soluzione risul

, tante__.venivano .agniunti ._900_rag .di_oisp].at ina .e la. i . _ ; I .miscela veniva .agitataceli1oscuro per ..cinaue..ore_aJ _ _ .temperatura ambiente per.ottenere-una soluzione-lim-.._ 1 I ?pica. la cromatografia,su strato sottile-delia .solo.-... _ t zione. preparata di..fresco .indie ava...solamente una zo-_ _ I

! ? ina di _cisplatina_; la cr.omato_gr.at ia._au._llquidO-ad_al- _ i I I i ta-efficienza .effettuata,come-saggio:mostrava-che.Os- _ _ i sa..conteneva.15^ -ing di cispialina_.per mi,_la-dilu?-_ .. !zione_.della soluzione..preparatg,._di._?re3cp_con _quat_H. .

i tro-volumi di__acaua.ourificata.USP_._dava..una soluzio-_ i ? ! ne JLirap.ida_che _ re s tava limo ida dopo .riposo di 2d o- _ re.artemperatura. ambiente..Parti..aliouQt_e-.della._sol Iu-_ izione preparatagli.fresco...venivano_si'gillate in fiJ-_ i Ile-di-color ambra del volume di 17 mi come descritt ?o

! ? _ inelU esempio 3 _.e_venivano-_sottoooste a prove di sta-I ' i j ! ibi1jt? alla conservazione a svariate temperature. ;

p - ? ~ i _ _Dopo_due mesi.di .conservazione alla temperatura di ! _ 1'4-5-C,-la -cromatografia.sa ...strato..sottile.indicava..J_

\

. _ '111., 5- %- ?i - platino B .e d _a s. cren 0.a__di_ t r an s p 1 a t_in o . ; _

i _ ...JDopo un mese di -.conservazione.. alla-_t.e.mperatur.a.-_di___[ _ _ ?560C,-la-cromatografia_siL-strato_sottile_indicava

_ la oresenza del-2. di olatino B edL.assenza_di trans- . - .platino. II..campione .invecchiato?alla temperatura-J_ _ Idi. 56.?C .veniva, diluito ad. una.. co_n cent razione d:^ 2_mg/ml _ [con acqua, steri le.. per .iniezioni, ed _il__c_ainpione invec. ..chiato alla temperatura di 45?C era diluito alle con- .

? -contrazioni di 2,5..e di 5,0 mg/ml -di cisplatina con .

_ acqua sterile..per.iniezioni. Ciascuno formava soluzio-..

- ni._limpide.,che restavano?limpide.dopo riposo.a tempe?._ - -- natura ,ambiente-di-24?-ore.._ _ _ _ _ _ I_ sagc.i. di. cromatografia .su liquido ad alta ef- _ _ _ _ _ ? ficienza_efiettuati.sui.__ canpiond .conservati per .-3- me- _ _ _ si. .alla, temperatura ..di A5 -Gr -p.er 6 - mesi alla..tempera--' _ - - tura di- 37?C e ^per 8? mesi s -temperatura .ambiente ??^ - . _ _s.travano_de.lle. .perdite...di.. no t enz a..de 1 7^ S S:, 7,6 .# . _

_ .e -O.ii,-rispettivamente _ _._ _ -_ _ __ _ _ -Esempio?11_ _ _ _

_ Soluzione._ji.oiicentrata_3?iLb.lle_di_ ;_ ?. _ ..._ cisplatina (15^mg/ml) .pi?..CaCl?^ _ _ _ :_ C?5-ms/mL)_.in_slicole_polietileni-_ _ . _ .co_4r00-acquoso_al_ _

J_ Nota: La cisplatina .?.jin_ppssibile.cancerogeno.^Duran-_ _ fce? U-int era_proc edura_ de vono es s ere_.indoss.ati vasi i- _ _ ti--protettivi Guanti,..maschere,-occhiali_e_c_onrica-_ _ pi Tutte,le aree djLlavora_e_JL_e_apparecchiature.deve- _ _ no_ essere..completamente ripulite,pepevitare una.nua- i_ _ lunoue contaminazione futura. . _ _ _ . . . _ . . . _ _ _ _ formula . . _ _ _ _ . _ . . . per mi per 10.0 mi _ cisplatina 0,015_5^~^ 0,150 %

.cloruro_.di sodio.? 0,0.15 ; ..._0,.150.?:?

i

acido,cloridrico 0,pir('"2)

.0,10 mi. _ 1,0 mi_ glicole.p eIietilenic.o...A.OQ?

- Cprodot to.Sentry)_ .Guanto,. -C-uarto:.

..basta,a _l_,.CLjnl bas.ta a 10.,.Q.rnl_ ,_ _ (.1.) Questo...peso..di .cisplatina .assuine.una?potonza di1

- 1jOOQ_mc.g/mg.-.Per ..de_terminare 1a_auantit?_di cdsplatina__.

I ;

! j

- ri chi e.st a .si lusa la_s.errruente forimi a: _ i

I ? !

_ ?0Q0_x_Qr015-* _

= g di cisplatina ??i?

! .Potenza. di _ ci.splat ina _in.. nieg /rag. .chiesti _ i _

.(_2 )_Un ..1 it.ro._di? acido....c 1 oridri co 0 , 5 IT . viene? crcpa r?-r_

;o? c CHIC _ angue :

??

._. Eo r re_057 , 25Vo.i_ a c qua.. s.t er ile., .por _inle.zicni ,

- . USP_An_um pallone? di.._Erlenme.y_e:r_pulit_o_ .d.el volume.? di.

-un_li-t.ro .

2. Agitando rapidamente, aggiungere lentamente

_e_cnn-caute1a !?,_75_.nl...di .acido cloridrico concentra-_ to-_A.gi.tare_nar-lQ_L'iinu.t.i..__larnar-e.._con^un_tappo_di_

_ go ramalo ut ilica_p3_ul i to....

L , I struzioni por la preparazione d i un litro

_ di _ s o.luzione _ s t e rii e _

i_ 2__Si mettono-1G0.ni di acido_cloridrico_0,.51L h

in un pallone di Erlenneyer pulito, tarato del_vpiume

!

di un litro contenente un agitatore adatto, come ad._

i

i

'esempio un.abitatore-a sbarretta magnetica lungo -----. ,6cm, rivestito di teflon._ _ -_ -I

t__ _ 2. Si aggiungono., con.agitazione,moderata.,.1.5*0 g 1

Idi cloruro di .sodio...Si.agita fincb?..il sale ri".?..?..... i|

!completamente-sciolto . _ _ _ _ -?

4)_ 5?._Si__a.g.giungono con rapida,.agitazione..750 mi; idi?glicole-polietilenico 400 (prodotto_S.enirv)_.e._si_ t

jagita per -cinque.minuti,_ :- --_ _4 ,_Si__r imu py e_l * agitatore _a . sbarretta magnetica _ La_si . drena, l'.eccesso-di-fluido ne!?? pallone... _ : j

i

_.J_ _ 5-?-Si_aggiungono_con .caute.la_15-,0_.g.di attivi-_ ?t-?-di-cisnlatina._

6?..Si aggiunge_glicole polietilenico 400 (prodotitoJSentry.)-fino al-segno del-litro...(-un._t.otale_di- -f

880-ml--di.-.glicole?polietilenico..400_riellesto _ - -7. Si.rimette-.11agitatGre..a..s.barrett.a-.di?teflon inella .miscela .e?si?tappa.con un_tappo di_gomma_buti-_ ? ilica -pulito.---- :-_ r_ 8.._Si avvolge il.pallone in un foglio di allu-_ ;minio..per..escludere la.luce del-tutto._ -__ _ i_ .9 Si-agita_rapidamente per_24-48 ore a temoei

- datura -ambiente. Si dovrebbe,ottenere una_soluzione . ;nitida. Se.non si ottiene una soluzione,limpida in-__.4tro-48 ore,la. miscela.pu?.essere.riscaldata_f ino . ?

. .a ..37-40?C per _2-6 ore in assenza di_.aria e.di luce cos? da facilitare 1a rapida dissoluzione.de11a.cis-_

? - platina-restante .-_Si-.raf fredda. -fino _a -23-27? C... ?L

__ !_ 10. _IIsando una.,.tecnica ase11ica .ai.fa.passare:_

- la.-so1uzione-di..co.lore_gi?lio_acuro?sotto..unlappr?-, .

i ! ? -priata-pressione-di...azoto?sterile.,--attraverso--un _adat-

i \ - to-f-il-tro?sterile-esente_da_t5irogeni_.Millin.ore_da_ ?_ i ? '? ? I - " Q!,.22__micron._-S?i-raccoglie_.il.-_filtrata__s.t.arile^LrLini;!_

_ pi'a'llone_di_Er1enueyer...sterile ed .esente.dn.pir.Qgcnij'

! t ?. _ Si tappa con un tappo di gomma butilica sterile ed 1_

..esente?da-pir.ogeni...La soluzione.-precessero_c..on.s.e.rv_a-; | -ta.-al.lo scuro,._

11. Si introduce la quantit? richiesta della

JS-olnzinne sterile in fiale sterili di co1ora zione

-ambra es?nti__da_piromeni. Si tappa con tanni di te-? : 1 . ? t 1on-Starili?esanii_da pirogeni. Si sigilla con ele-1 ; _:nen.t.i__sigillant.i_.di...siluminio sterili.

__ 12. Le fiale doyrebbero contenere la seguente ?

-et-iehetta_.a_tit.olo_di._precauzione.j_.

NON PER IL DIRETTO USO INTRAMUSCOLARE 0

INTRAVENOSO *

^La soluzione di PEG-4-00 pu? essere diluita con

H narti di acoua sterile per iniezioni USP

_op.p.ure__so.Lu zion.e..-sa_Lina_norriale___ste_rile_ IS_P_

J_ in modo da dare una soluzione di cisplatina j ; J_ alla concentrazione di 1 ras;/??-1.?Se sono neces_ :_ _ 'sarie,concentrazioni pi? elevate, si pu? impiegare : i

- - ?? juna-nuantit? proporzionalmente-pi?bassa di.acqua .

i

_ jsterile o.di soluzione,salina. Le.soluzioni diluite.

_ ,- 'possono essere impiegate.per uso.intravenoso..^ -Sono. _

|

- stabili a -temperatura ambiente . (22.-25 ?C.) per almeno

- -- 48_or.e...Non.raffreddare le.soluzioni diluite,..poich?

_ jpotrebh.erosformarsi.,cristalli... __ _ >.

!

_ !!_ __13.-Si cons'ervano,le'fiale 'allo scuro. _ .......

_ ^_ |_ ._ _ _ Esempio 13_ _ ]

_ j_ _ Soluzione _ concentrata_st abile di _ ^ _

_ I _ , _ ci splatina .(2 , 5. ng/ml) _NaCl (9_ mg/ml.)_ ; _ ?

_ CaClp_.(1-5?mg/ml)..e_raannitolo._(_10_mg/ml) _

_ _ j_:_ in .glicole-polietilenico .400.in_ _

_ !_ soluzione.acauosa_al 31.-?...acidifi- . .

i

!

- :- j?- cata. - :_ -_

- _ _ j _ Q,9-g- di.. cloruro sodico, 1 , 5 a di _CaCl _ed -.l , 0 st ..

I ? ^ _ : _ Idi-manni bolo erano disciolti in_una miscela di 31 ,25 mi j

_ Ldi-glicole-polietilenico -400__e_4CLnil.di_acqua_puri-. ..

- ficata.USE._Iia s.oluzione...era acidificata fino_a-pH ?

_ -_ ,?,? con mr volume di 0,4_ml_di_HCl IN, poi si_aggiun-

_ lgevano-255-mg.di ..cisplatina,-_il volume.era portato

_ _ i_a.100 mi con acqua purificata USE.e la miscela era

_ 1agitata .allo scuro per cinque ore a temperatura ami

_ Ibiente-cos?.-da ottenere una soluzione limpida. La

|

_ _ ,cromatografia su strato sottile_della .soluzione pre__iparat a. _di._ _f re sc_o...mos ti ava. _s_o.lt alito, .una..zona.di cisi ? platina. - - -

_ Esempio . 14-

Lo.tecnica generale..cieli.'esempio .1 viene....r.ipe_-

_ i.'_tuta__ecce_tto_c.he_.il__e.Loruro.__sodico..ivi utiIizzato__?_ i

}sostituito Aa una quantit? equivalente di cloruro di

magnes ed_in tal? modo viene prodotta una soluzio-

_i n e--.-C.anc.e ntrata .stati le di ci a platina.

1

-l_ Ese.mpio_._15_

Si ripete la tecnica generale dell*esempio 5

pccetto che il cloruro sodico ivi utilizzato viene

da una quantit? equivalente di cloridra-

Jj-Q?deIla trieti1ammira e si produce cos? una solu-

zione?eoncentrata stabile di cisplatina

_Esem.i>io_lS_

Si ripete 1a tecnica generale dell'esempio 5

e>r.cetto che il glicole polietilenico 4-00 ivi utiliz-

zato .viene sostituito da un volume eguale dei ^lico-

il pnlioti1anici 200 e ^00 rispettivamente, e si

producono cos? soluzioni concentrate stabili di cis-

_platina,

Esempio 17

Si ripeteela tecnica generale dell'esempio Q

eccetto che il glicole polietilenico 6000 ? sostitui-

t o ria un peso eguale dei glicoli polietilenici

i1000 e 4000 rispettivamente,,e..si.producono,cos?.soluzioni concentrate.e stabili.di..cisplatina._ ,

. . . . . RIVEHDICAZIOHI_ _

.. ..1..Soluzione,concentrata stabile_d? cisplatina

iin -un mezzo solvente.comprendente?da circa-30 a .

f

icirca..95-$-di..glicole polietilenico..avente,reso .mo-I

t.lecolare .medio da..circa 150_a c-Virca.9000 ovvero.,un j.Filicole.metossipolietilenico aven.te_un.peso_moleco-

-ilare, medi o_. da__ circa 300- a .circa 35.000 , ovvero una lo-

- __;ro_mis.cela, . e.. da ..eir.G.a_5 -% a. circ_a.J7_Q_?.._di._acjqusL,__._ _

i

_ Ldet_t a. soluzione^ inoltre conten?ft^almeno una sorgente

!

- oion .tossica farmaceuticamente..acr_et.tab.il.e_.di_i.oni_

ti '

? _ \ cloruro _in_ cmantit?.ch.e ?_almeno _all 1 incirca__eauivat

t

- - Olente ..alla -quantit? di ..cisplat ina_presente_. nella, so-_ ...

- - ? lluzione, .e ..detta _s.aluzione-avendjQ_ima_cjonc.entrazio~ .

4ne .di. _cis platina che va._da.circ.a_2, 5...a. c i re a _25_mm/m 1 . -_ 2 So lozione c onc ent rat a _ .stari i1 e__di jc i.splat ina _

- in-un-mezzo solvente comprendente-.da__circa.80...?La_ - ..circa .95? di un_gli.cx>le..po1i.etilenico avente,un pe-- :- Iso molecolare.medio_de.l .valore.<3a circa_25?.a.circa.

_ i-1600-.owero . un ..glicole, met.ossipolietilen?co. avente

_ ? un peso..molecolare medio da c ire a_30Q__ad_.80.0, ^ovvero

? - - iuna -loro miscela, e da circa. 5 ?L.a . circa. 20 3 di ac?

_ Lq.ua,?detta?soluzione inoltre contenendo .almeno uria

i

- _ Lsorgente .non tossica farmaceuticamente acc?ttabile

j

{

- ;d?_ ione... cloTt?ro__iii_ q.u ant i t a ...c.he . ?_ v .ari ab.il e _ne_X 1_| in- .? . l ; ..it.er.vallo_da .circa un o_ equivalente. a circa- 10 .e.quiva-_ilenti_p.er-eauivalent.e_ di -.ci splatina nella.. soluzione., _ _ j e__cle.t t a_s o In zion e._c untene ndo_Jla._ci rea 5 a c i rea.- 20_jag . I ; idi?cisplatina-per?mi.- :_ \ _ !_ o1u zione di cisp_latina-come -rivendicato nel-.jl.u_.riYendicn.iii.Qne__2._in.cui la sorgente non tossica ! % ? i -?? armac eut i.c ameni a .acce.tt abil?_di.i on.e__c l.oruro__ .?__a.cjL~ ?do., cloridrica, __cJ.orur_o_di_l? odio-, cloruro di calcio , : I i . Ic?oruro di magnesio oppure <31 or idrato di. trietilam- _ i ? j 1 d1mina- ovve ro- una lor o-ini s cela. _ _i! ; i _?_ 4 .-Soluzione concentrata stabile::di c?spiatina ? Iin un-renzo.._s.o.lvente._eariiprendente?_d.a clr_cfL__85/n.a._ci ir--ica--90-- te n1icole._po1ieti1enico._avente pe.s.Q.-ULO1eco-ILare-medio_da_circ.a_2.50-r.circa?650_e da circa 10 % i

ia_circa 15./i_di acqua, detta soluzione contenedo i-?coltre una sorgente di ioni cloruro scelta da acido' _.eloridrico.v_c1or.uro__s.odi_co_e__l_Qro.niscele, in quantit? che ? nell'intervallo da circa 2 a circa 7 equi~ vsk nti per equivalente di cisnlatina nella soluzione, p. detta sol.uz.ione_avendp__una concentrazione di cis-_Lnlalina variabile da cirea 10 a circa 15 tn^/ial.

5.?__S_oJ.uzione di cisnlatina secondo guanto riven-?dieato-nella._riv.endicazione_4_inurui_l_a__det1a_solu-!

i

j.zione??-S?erile.ecLe contenuta_j,n un contenitore si--- - p!illato come ad esempio una fiala. . - ? -- .

. . . :- 1- 6. Soluzione concentrata stabile .sterile, di cis~

f

? t

_ _ slatina- in.un contenitore ?igillato come ad ,e.s erro io

? I

_ ,una fiala, ?. la. detta.. soluzione contenendo .una. ouanti?

_ _ t?. variabile da circa-10 acirca. 15 mg di cisplatina

. - - - per-ml? e -da circa- 10- a -circa 15 mg di NaCl ? per mi -? ? .

i

- - -in -un-mezzo-solvente costituito -da circa - -90 - di - un -

I

- - - - glicole -polietilenico- avente -peso molecolare medio

i

_ vari abil e_da_. circa 350 a circa .450. .e .circa .10. ?Ldi

. i :

* '? iacqua . '?

?

_ _ i ? _ 7..?.Soluzione._c.oncenf rat ?L_st abile. sterile ci..c.is-!

- -p3.atina-.in -un_ contenitore, sigillato-come . acLesempio _

- una._f?alav~de.tta .soluzione ..contenendo, una Quantit? !. .

f

- var-iabile-da-circa -10-a- circa -15-0g -di -cisplatina _ _

- per-.ml _.e_da- circa -lQ_a_. circa. 15 .mg di Nudi per jnl_.in. _ !

- - un.me.zz0 _aolvente__costituito da una quantit?. .corri- _

- - spondente_.a.circa._9Q_^ ..di _un_glicole. .poli etileni co _ .

- avente -peso molecolare- medio variabile. da_circ.a_3 50. _

. . _a-_circa A50- e.d. una..Guantit? corrispondente a_j:irca .. _ _

. -. lQ-^-di_acidQ -cloridrico- diluito, avente c.oncentrazio- _

- ne. fino. a .circa _0.,5 H. _ _ _

IN VER TO RI. IN COM3 DICHIARAZIONE, PRO CURA E. DOMANDA

No i , MURRAY ARTHUR KAPDAN e ALPHONSE PETER , GRAN ATEK L di chi ari amo _ che noi siamo cit ta din jL degli (Stati Uni tj di America rispettivamente , res jdenti _ H in 1026 Glencove Road, Syracuse , New York e 8323 _ . Oswego Road, Bai dwin sville. N e_w .York, ris petti vaine nte ; che noi auliamo le tto le prece denti descrizione e rivendicazioni e noi veramente cre diamo che noi siamo gli originali primi e comuni inventori della i n v?nzion e_ in ^FORMULA.Z1?NI PARMACEUTICHE (RD- 1_6_1_7_) descritta e r i ve n di cat a nella me de si ma ;__che^ noi_n ojh pappiamo e non ere diamo che la presente invenzione , sia stata mau conosciuta o utilizzata anter_iormente_ alla nostra jln ven zio ne delle medesime , p b re_v e ttat a_ ^ descritta in una qualsiasi pubblicazione stampata in ^?? qualsiasi paese anteriormente alla nostra invenzione de lle_ medesime , o per un periodo superiore,, ad un anno anteriormente alla presente domanda; in uso^ pubblico o in ven dita negli Stati Uniti per un periodo superiore ad un anno anteriormente alla presente domanda; che la presente invenzione non ? stata mai brevettata o fatta oggetto di un certificato di inventore in un qualsiasi paese al di fuori degli St ati Uniti sui una do manda depositata da noi stessi _ o dai nostri rappresentanti legali o cessionari per ,un periodo superiore a do dici me si anteriormente al-,la presente domanda, che noi riconosciamo nostro dovere fornire le informazioni di cui noi siamo a cono scen za che rapprese nt ano materiale jper_l lesame_ del-I

^la presente domanda; e che nessuna domanda per bre-,yettq_ o certificato di_ inventore^ sulla pre sente invenzione ? stata mai depositata da noi stessi o dai n ostri rappresentanti legali o cessionari in un qualsiasi pae se al di fuori degli Stati Uniti . _

E noi con la pre sente nominiamo Herbert ' Ji7. Taylor, Jr. , Registrazione No . 18.177, David M.^ Morse, Registrazione No . 25? 742, Richard R. Lloyd, ^Registrazione No . 22.632 e Robert H. Uloth, Registrazione No . 26.041 , di Bristol Laboratories, Division of Bristol-Myers Company, Post Office Box 657, Syracuse , New York 13201 , nostri agenti e/o rappresentanti legali per proseguire la presente domanda^ e per compiere tutte le transazioni nell'Ufficio Brevetti^ e Marchi di Fabbrica in correlazione con ^la me desima.

PER LA QUALE RAGIONE, noi preghiamo che _ un Attestato di Brevetto possa essere a noi rilasciato per l' invenzione o scoperta descritta e rivendi,cata nelle prece denti descrizione _e jriyen dicazioni, e noi con la presente firmiamo i no stri nomi alle _ pre ce denti descrizione e rivendicazioni, alla Dichiarazione , alla Procura e alla presente Domanda.

I sottoscritti richie denti dichiarano inoltre che tutte le dichiarazioni fatte qui in prece den-'za sono vere per quel che ? di loro conoscenza, e ;che tutte le dichiarazioni fatte in Jba.se ad informazioni ed opinioni credono siano verej e^ inoltre che _ queste dichiarazioni sono state fatte a conoscenza che dichiarazioni intenzionalmente false e simili ^ cos? depositate sono punibili con multa o carcere , o con entrambi i provvedimenti, a norma del Paragrafo 1001 de 11? Art. 18 del Co dice degli Stati Uniti, e che tali dichiarazioni intenzionalmente false possono menomare la validit? della detta domanda o di qualsiasi brevetto rilasciato_in base alla me desima,.

Inventore^: f._to Murray Arthur Kaplan

Data: 25 Marzo 1980

Indirizzo Ufficio Postale : 1026 G-lencove Road,

Syracuse , New York

Inventore f.to ) Alphonse Peter Granatek

Data: 27 Mae zo 1980

In diri zzo_ Ufficio Postale : 8323 Oswego Road,

Baldwin s ville , New York.

, QUESTO MODULO PU? 1 ESSERE ESEGUITO! SOLTANTO QUANDO .ATTACCATO AD UNA COMPLETA ??) MANDA COME l?? '-ULTIMA PAGINA BELLA MEDESIMA

iPER TRALUZIONE CONIO RME.

4?.. ING. JBARZANO & Z Ali ARDO S .p.A.

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?, SY-I617

_ BISSO RI.21 OHE .

a ..corrodo di_.una. domanda. di brevetto per. invenzione

l iavante per t itolo..: _ _ . _ ? _ _? !

4.'.'Soluzioni. c.onn.entrat e. st abili di c isolatine utili .

. - - - icome- composizioni .f araaceutic?i?,. e., relativo .procedi-[

- - Imento .di. produzione'/ ? - - - - ? _ ..

!

- ja- nome :_BRISTOL .. -KYERS .C OMPANY rJ-yfv?1;

Descrizione modificate

(art 49 D.P.R. n. 333/1979) |

istanza dep. il _ _ _ RIASSUNTO _ _ _ ; .. .

La presento invenzione si riferisce a s?luzio-

.?ni?concentrate? stabili- di ci spiai ina.. in .un. solvente. _ [

I

4c ompr_endente_glic ole ..polietilenico. o_ glicole_jnetos- .

ns ipolie t il enic o . oppure, .una ..loro _mis ce la ,__.pi?_ acqua .

-odmra. sorgente non tossica, farmaceuticamente. accet-

-1 ab i le. di i oni ^c lo rur.o. . _ _

L?

_ DESCRIZIONE .DELLA. INVENZIONI

- ILa-presente ..invenzione si.jrif erisce. a .soluzioni.

. _ stabilii . concentrate . di. .cisplatina. in glicole poli-

- .etilenico . acquoso glicole, metossipolietilenico , o .

_ _ ,1 oro .miscele , ._contenenti__una_sorgente di ioni__cloru~

._... . ;rq. _ .. _ . _ .... _ _ _

_ __ I. composti del platino.. sono._un_ gruppo _criginale

-di composti nell.? amb.it o .degli agenti .antineoplastici . I

;Essi.-Sono stati notati in. primo luogo per il. _f .atto _[_di_avere_._un_ei_f.e11o._antib.i.o.tico..da Rosenberg e_su.oi__. ! : ._collab.orat,Qti_..nel.._1965..(Rosenberg,__B...e_t__al, TJatupe. -j-CLondr a. ).. ,_ _20.5_,_69.8- 699 - (.1-96..5-)-). _ e d __i n. s e gui t o .. d al .1 o _ _ ! P

Iste sso. -Rosenberg. e. suoi _ colla?ioratori- ? ..stato. inora-.to? che. _.essi sono. _p o t e nti__ ng e n t i an t ? tumorali] _ n e g 1 _ ; animali (Rosenberg, B . e t_ _.al_._, ... Natu r e..-.( Londr_a) 222 , i ; ? L3-8-5-^38S?C19&? )- L ..Utru_t_t_ura1mente..essi rappresentano un comp?es o .Liorimato da un atomo di platino in posizione centrale i j a e?nircondato?da.s\rariate_dis.tribuzi.oni_b.i__aiomi_..di.._ j cloro_o_.gruopi_di ammoniaca in relazione planare _ ?__ _cis o_brans. Due dei composti del platino pi? comu-:.nement s.t.udia11..s.??.?.__?_??o_S_ti_scbematicamente qui sott.o_

1 . ;7

CI ??

Pt

Pt

TTH

Cis-platino (II). Cis-platino (IV)

.d.iamiminodicipruro_ diamminotetracloruro Come .si_pu? vedere, i1 composto indicato col_ _te rm.ine....di..c Ls-platino (II) diamminodicl oruro possiede._tutti...i..suoi gruppi,cloro ed anmino in un s_in--go-lo-piano?..Onesto__c.omposto.,,attualmente noto col _noi di cisplatina adottato negli Stati Uniti, ? _ stato sintetizzato . in.. accordo, c. on_ il seguent.e_.Scb.e-_ ma_di_.reaziona. _ _ _

?.JVtci4j NH4C1

. c.i<? I-t(I;H3)2Gl2] 2 ICC1

? ( si _ueda. .ICauff man , . _G . R.-_e.fc_ al- ,_.in Inorganic. -Svnthe-? sis ,? J?- Kleiberg (Ed . )-,--pag . 239-245, - McG-raw-H?ll -_ Boolt-C.o Ine . , ..iiew-Y.ork, .1963) * _

.1 _ Breusova^Baidala, _Y. . G-_. et__al . .in Akadamia ITauk J3SSRv_Ko .. 6 .pag 12 39^*1242 (giugno _ 1.974) , ..-discutono _ _ ila. lenta _is omerizzaz i ona ...di. .c is-p.lail ino. XI I ) ..di aJM^?5s^ -noh i cloruro- in- soluzione taccmosa__c.os? da-l.ormare il :.ll : V,? ?' .composto, -trans . _ _ _ - _ :... , _ Reishus ,_<J ,_W ,.._e_Jiartin , D.,__S in _ Journal_ o.f _ -t he_ . Ame r i c an _C he mica] _ S.o.c iety _ 83 , ._24_57-2 4S2 _ (.1961.).? _ -descrivono JLLidrolisi -acida _della_.cisplatina alle .

_ _t emp.er.atur e di 25 ?C e 35?C . _ Questi- st?di ...ver ivano... ..

_ condotti .in .soluzioni.-aco_uose_ alle, .concentrazioni ...di 1 , 5- x .10?5. K, .2, 5. x-10_?5 M,?_e_ 5_,_0 x 10?5_ II,. .che. c ormi spondono a. 0, 45,-0., 75, ed 1, 5 mg/ml -rispettivamen-..te-_.Gll_.aut ori affermano _c he vi_ era, una _ certa . arnhi-_ Lgu.it ?_neL. c olLccare_LlQ.rlg.ine_Cc io?., .. i l cos? flett o __ . _ ??punto ?zera'O-.p.erle.. curve. _di. idrolisi .poich? , i c'n-|

? Spioni? richiedevano-.da_10_a.-30 .minuti., per_dlscioglier-_. _ si. .completamente- arche a oneste concentrazi oni cos ? Ho.zanc?eig M._ et .al .. ,_in_Annals _of_Internal

..Medicine.,? 86 ,...803-812.. (1977)-?) . passano-in...rns.s.egna 1

? <

'fei.su Ita. ti_d e.g l? . .svariati, st.udi._pr0clin lei . e _c 1 inici.

? :

..dal U-uao? della; ' - ci splat ina me i-.turoor i_sp e r imeni al i. ;

j i

..negli, .ani-mali.; c ome__ancihe. .in .s.varia ti. _t_lni_d i-_t_umo ri .

..umani.?.?Es.si_m.e_ti .0no__1n evid e.mz_a__c.he_Jl_medi .camento..

-sotto -studio,? mes so a . dispos i zi one?di?ric-erc at ori?

iiualif tcati. per il tramite dell 1Inve stigational Lrug

's ? ?

Br ano h.. o1 ?t h.e.._C.anc_an?The rapv Evaluati on Pr 0 gr am_._o.f_

S\-itile. _.Kuti onal_C.anaermIns.t i tute., ...era .f orni t o_...c_Qm&_??1_-_.v.er.e._branca? lio_f.il ?z.zat a __in_ f iale contenenti IO ms;

rii rvi spi atn.na, .1 cloruro ?odico, 100 mg di

-mann it olo- (??1 P ) ..ad? aeido._cl orid r i c o _p.e j__la_me g o la?l _Q?

in e-d e l_oH.. .Ou and o il...prodo.fc..t_cmYie.no_E?cost ituito con

1 mi di__acq.ua sterile per iniezioni

YUSP) m'asniin millilitro della ri su 1tante s ol azione .comt_i.en.emjJL.iiL?_di_O?i2_'pi]m_t.ina.v-.1.0...mp; di gannitolo e

-9 ? mg? di-Had-.

JTalle y., R . ? . _.e_t_al.? , in ..C ance r_._Cie motte, r.ap.y.

_ Re p? r t a ^57^ - 165 - t?l ....(197 3 ) ?> descrivono. 3 risultati _

_ de 11 a. -prima ? fase..d e 1-1 oro -? tudio_ clinic o .dell impie.-.

!

.-ugo?di- cisplatina.. nella, cura di-65-pazienti_umani_ean

_,una -larga, vari et?-, di? f orinazioni, .neo.plasticih e... . Come___ .

?anche-nella jpubblicazione_precedente.,? il. medicamento.

iv e n i v a? fo rn i.t 0 _ amu e s ti., r i c. e r c a t o r i ._ d a 1. Jia.t i.Qna 1_ . C an

cer -Institute? in-fiale- contenenti-lO-mg di ci spiati- ?

. na,-_ $0_rag_di? -cl-orur-o- di? sodio- e-100-ra.g di- mannitolo , J.p.er .la_nicostituzione_ eon.-un._ volume. di? 10--ml-di ac- -oua- sterile .

_Rossof-,_A.._H.... et _al .. in-Cancer.,? 30, - -1251?1156 .(.197.2-)? _do.s_c ri v.ono. i risu.lt at i . de ] _ 1 o r0_irapiego_d e I la

|

nisplatina_._ne.lla cura-di._5-l-pazienti_ura.ani? con_una

p.m di-tioi di? tumori..? Essi-afiermano-che-il rae-?die amento _f ornito_dal_Iffational? Caacer? Institute era-, Iprodotto? da? Ben-Vanue. _Laboratori.es, ..Ine ... e... c o n t e ? d- ? va? oer -ogni -f ialsu-10-mg. -di- ci sp la t ina , -IO- -rag? ? s-i c ) v~ di_m anni to Lo.? e--9-.ma . (si a) _ di _NaCl., _ e? che 1 a_ polv er e _

I

1 ' 1 .

,di_ colore? diane o_.giallast ro _si_di sciogli e va_?ac-i Iraen

I

t e._.in_un_Jvolum.e.-di.- 8- 10 mi-.. di_ac a ua_s? eri le.. - _

_ Cert e informazioni riguardanti la chimi c.a della ...

la_s.ua. f orraul az iona_i.arra.ac enti ca sono.

d at e_ a 1-1 e- -pag ine- I~5- e? Jl? -^2? dal la? pub n ] 1 c a zi on e - -dal- -l-tit Ol-O-LCLIITLCAL BROCHURE ,... CLS^RLAlimii-1. ( ??)_.?)???1?? ? HSDICHLORIDS (NRO 11_98_75)? t? H..._ Haldelsman _et_al . ,_lnjmeot ignt ional _Brug? Brune h., _C anc er._Gh.e rao. t ber apx. _Eva- _ -luation tErogram,?IXivision?of- Cuocer .Treatment ,?KatLo- -er-Institute _(Rav.isionata_nell '.agosto .197^)? bLe?iiagine? 31 e__32_di .tale.. pubblicazione .riguardano.

? a _ dorimi ari one_di_.c i s.p latina fornita . gratis... dal .

,NfC .I . ai clinici per 1 a _JLo ro .. stima clini c a nel 1 a

. cancro * - _ed._in_.e.ssa? si_.legge_q.uanto

I

.segue : . ~r

-Eogli o . .de j _ Dati . Farmaceutic i _

..KSG-l 108 75 _ G.is_-^d laminino die Loropl ai ino_ _(_II_).

I

0 mnu 1 a z i on e -d i? d o -s aggio _l.0_.mg/ilial a _ L_ Il__c onte nu.t_o._d i _ _cxasc?na_f 1 ala

tras narent.e snnsTip nnmri

_ nneL_mas_s.a_bxancas_t32a_li??ilizza=-ta .. .Ci ascun a- fiala, co nt ?ene_l O-ns _

_4i_NS_C - 1138.75 ; 9 Q mg di cloru r o_

._di_so_di o_: 1.00 mg_di mannitolo ed Tir -acida?c 1 or idric o_nar_4a_xexala-_ ?-?? zione. d< iJLpBL.

? ? ? Preparazione della

-Soluzione.

IO. mg/f.iala J?uand o .. v e n gxx i co.atLiiuit o_ c p n

1 Q _nJ _ di ..ac oua_s teriLe-_O-er_inxe-.aloni , _LTSIL,_c?as c un_nil _ dal la.s.o^.

luzion.e. risultante contiene 1 mg

di NSC-119875 , 10 mg d i mannitolo? e- 9- mg? di? cloruro -di- so dio

con intervallo di pH da 3 , 5 a

Le f ia 1 e_._s e c c he_n on ap erte do- , xr.ebben.o_e_s.s_e re .conservate all a

temperatura, del .frigorifero (? i- _ &??). _ !... _ Stabilit?. _ le_ fi al e._int att e ..hanno, una. s ta bi-.

_ lit?__pr QVV?S orla. _dell_a_dur at a. ..

_ _ d i. _un_ ..anno...a u an d.o....e aae .jzLe.ngona _ con s.er.vat_e._ alla te mp.er a tur a. ri e v; frigorifero _ (4--31 C.) ^ He_racc o-itH <JL .mand anioni. di... stabilit?, no ss on orsLL .ess ere.rego 1 atc ..durante ? il _c,om-_ pl etamento di uno studio . di.. con-_ s ervaz ione ln_sc affai e_d ella ...

-durata-di?dua anni ,._Xa ri co sii-. turione efxettn ata come racco

. manda to_d?__come__ r i su lt.ato. una . aoluzione._di colore... gi all o_p al-.

ouale-?. _.stabile_ner non .pi? di_un! ora_.aH a. temperatura _ amb i ente (22?C) Quando ver. g a..

. e so as.ta_ad__un.a . i 1 l.u"inaaione.__amb i en t ale. _n_qrna le e non pi?.. di _ ott o_o r e a temo e r atura amb i en t e _ .{22 fG_X..q.uando. la. _s .oluz i o n e_. v.e n ga_pr_o.te ita.. .dal 1 a_l_uc g_._Xe._.s.o.luz io_-po s s ono_Xo_rm a - _ ?r-e? un?oreoiox.t atcu dono? un fora .

_ ..alla .temperatura del frigotlf?-- - -ro (4-8?C). .- ?.

?

Cautele !

- - L-Le formulazioni -di dosaggio lio-I r

- filizzate-non contengono-agenti - pre servanti e__perci? -?i consi-_ glia_di_gettare le..s.oluziQni_

.stes.se_.ctto_ore dopo la loro..

& - - - ..costituzione

?

.Agosto, 1974_ _ ;_ S? \ J Clinica!..Drug Distribution_Sect.ion .

Dr?g JDevelopment Branch _ _

La d o rnand a ? di. breve 11 o _b r i t anni c o_ jpubb 1 i c ata

_col .numero_2021946A_descrive .seduzioni acquose_sta-!_

bili,di cisplatina?aventi-concentrazione-di?cispla-.tina-compresa-tra..circ.a-CL,l_ed_l.,_Q_mg/ml_ed_un ..pH .

variabile nell'intervallo da 2,0 a 3?0. Le soluzioni

ino Ltre possono_.anche__conten?re__una__sprgente _di__iq?ni .cloruro, come sorgente inorganica non tossica,;_

inamente ac c e 11 ab ile ,__ad .esempi o il _c 1 oruro

Ldi .sodio,. _ecl_.una . composizione. e_ccipiente__come ad e-^-&empio-.il_mannitolo .

La.presente invenzione si Riferisce a soluzioni??

Astabili e-concentrate _di?cisolatina aventi,concentra'

1

zinnia da_circa..2,5 a.circa_2_5 mg/ml. Pi? in partico-!

I . . . i

!Lare., la_presente_ invenzione si riferisce a soluzio

- -ni.-di_cisplatina-s.tabili~e..concentrate?in-un-mezzo-_ Jsolvente.compr_ende.nte_.da-.circa_30j? fino.,a .circa..95-_ _ Irdl_glicole_pO-lie.tilenic.O-av.eiit.e_peso molecolare-me-;-__.;.dio_variabiLejda_circa-150-a-circ.a_9-.000_oppure-un -_ !glicole_jne-t.ossipolietilenico avente un_ peso-mole cola- -:re--med?Q-?a-circa 300-a-circa-6.-000,-ovver-o-una--loroimis.c_ela,_ e.da_._circa.5-.?i-a._c_ir_cn_7.0. % di_ acqua,..le _:_ \ ' -L?et-te_sol.u2;ioni?in0ltu?-contenendo anche?almeno?una--_ a.orgente-non-_tossica-e-.farmaceuticamante-accettabilei v _ _dizioni d oruno.Jn nuantit? che _?_..al;r;eno...all'incirca

!? , L' ,

? e quiv.ale.nte_ .alla. _q_.u antit a_.di__cis p 1 at in a. pre s ente inai - _ .la__s_o.luzione_,__e_J..e_ dette _??.1?.?_????1_?. vendo _un.?r roncar - ^.v /_ .? razi.o.n_e_?a. i._c is.pl at in.a__varis.h il.e.__d.a . cir.c.a_2_,_5_-3.. _cir-_ _C.EL2.5? m.g/ml ...

__ 80lnzi.o.nt_ah.abili_abquose di___c_isplatina,cono_ state descriite ne11a domanda di brevetto_brittann_i_co_.. pubblicata con il numero 2021Q4-6A. Sebbene soluzio- _ ..?i_stabi1i_Contenenti concentrazioni di cis.p.lati_na_ fina~a_.c ire a _ L.nir/ni] _ si_ _p 0 s s an o__o t? e nere in__t ali_ne_z- _ -zi?acouosj_ a_temperatura..ambienta,_.pu??avvenire..par?la_cris_tallizz.az.ione..della cisplatina._al_freddo.a_ -eoncBnt razioni. di_cisplatina_sos tanzialnien.t.e_?:uperiOT- -_j.ri_a_circa..Q,5 mg/ml._La._r:idissoluzione di tale_cis-_ platina..eristalliazata_non..aw i.ene__?aeiIment_e__Diedian-:te agitacione a temperatura ambiente, sebbene si possa.l?iott.enere. _una-soluzione--rlscaldando .a .circa 37?C

\

Poich?.. le . temperature ?del._ trasporto-.e del ..masiazzinan

o;io dopo la. vendita_non. -possono -essere ..controllate,! .

I

- ?? la. ??????1??2???1??&-.1?.11?-.??3??1???? nelle -fiale- i i _

!

creerebbe ..un., oroblema .indesiderabile per la somminiU

j

strazione, medica, ?la-massima -concentrazione .pratica -I

della-cisplatina in -tali? me z-zi? ac.au osi ?- di. circa-

? ,5-.????^1.._ ._. _

_ Le ?s oLU Zi oni ?di__c.isp 1a t i na. .d eli a pr es.en t e _ inv ep-I

I

zione possono contenere-f.ino_a.~ci:t?ca? 25?msp?ii-Cispla-!

tina -per millilitro T_sebbene .la concentrazione . ras-; _

j

sima -pref eri-ta_sia._di_circa? 15-mg/ml? -Soluzioni, deli-^.

i j

ila pre senta -invenzione -.c.ont.enenti--l5 -inS-tii -ci-sP^ati?? ??? I ' . ? !

-inal ner-ml sono -atate-mantenute-.allaiteiimenataira di_[ _

? * ?

;74-.?C_per 12 eie si ..s e nz a che si veri.f ica s s e .cristalli z- _

;zaz ione-della_ci spiai ina.. la 1 i._ _s o 1 u.z.ip n i_ s orno.. _ s_t a. te.

_ banche. .raffreddate .a ._-60_?_C.e. poi riscaldate .fino, a_

? ^temperatura- ambiente . senza- nessuna -formazion.a_evid.en-_

? , :

-t e? di .pr e c ipit at o di ...cisplatina ..__.Co s? , le., soiuzi oni _

_|per .uso ..pratico preparate secondo la presente inven-

-zione possono _av_ere concent razipni_ di cisplst ina _al-

-iImeno trenta volte superiori _a.-Quell e delle soluzioni

f ? ;

..acquose 'per-uso.-.pratic.o_ preparate., secondo la tecnica

J

^precedente - - - _j ?

_ |_ Sl_appre.zzer? che le soluzioni concentrate di ^

- J.JL -

-.cisplatina._?ornite--d.alla_prasente-_invenzione-.-ricliie~. ?' ?

-deranno-costi-interiori?di_taasporto,--di.,maqazzinag^-!

-gl o- - _e__d 2 _ altro a e r_dQ.s e?.un iiari?Lquando_si_p aras on ano. i

-con?l-e? soluzioni-acquose, .note-.?- Sehle.na?anc?ie_la- f or- _ ma_solida._ liofili^ ata__nota abjHi3._c.o s. t i . ti i__t ra s p o ri o _ |

-e? dinnagaz s ina g g i O? in te r i o r i.v._ caie st.o...ri a panni o_vi.ene _ -pi?-clie-.controbilanciato?dal?tempo_e-dallo spesecche _ 1a..liofilizzaz?one__comprende

In una realizzazione preferita della presente ? invenzione^-il -mezzo?solvente?c-omprende._da .circa_

-1'-B0?4-a-.cirea_il 4)5?!n_(e pi?_.pr.e?eribilraento__da..c.i? _ca 118jz. % a_c.irca_i.l_9Q. %) _di_ -glie ole... pol? e i i_le ^ nlsM: t-, avente un _pa so_- noi e colare n_edi_o_..da ,.c_ir_ca 250. .a__c

1600 ( e pi? are f.eribi lmente__d a. _.c_irca_2.50 ..a__c_izc a _ _ _ _ 1

650) a da. circa 115 ? a circa.il 20 *4 (e pi? prefe-_ nibi lmen t e da c ire a 10 % a circa 15 90 _ di acnu a_._ In _ realizaazione oi? oreferita..ll_zezzo so.1venie nnrnprende circa il 90 % di glicol e__p.ol iet ile n i c .o__ay ennn ppRO.J.Q1,eco1are medio.da circa 550 a circ_a_450 circa .il_101?dj_ acqua._

Di preferenza la soluzione contiene da circa 5 mg a circa 20 mg di cisplatina oer ni e oi? preferib i Imente-da? circa 10? s _ circa...19- ns/ral ....la.? sorgente. j

-non ton ica, farmaceuticamente accettabile di ioni_ Llrvrnro preferibilmente ? presente -in una concentra

JL(Z

..pione .di._almeno circa -due equivalenti-ner.equivaler!- ?

! . _ ' ? * I

-te-di.cisplatina nella soluzione.?Concentrazioni -co--i

-s?-elevate come 50 equivalenti o pi?--di-ioni-cloruro ?

_per equivalente-di.cisplatina-possono essere utilizi_

-!sate, a-seconda della concentrazione della cisplatin ia,

i

-delia-percentuale-di -acqua?Dresente-e della nartico1

i ' !

-lare,sorgente di_ioni-cloruro,.ma tali.concentrazioni.-.elevate -di ..ioni cloruro,normalmente-non .sono-n?mnec?s-.

sarie-n?.desiderabili? .Gli .esnerti-nel ramo relativo_

! !

apore zzeranno che , , con una -elevata .concentrazione- di -- cisplatina .,ed_una_.scarsa quantit?-di acqua, non__sareb-- b Ie-possibile- disciogliere. una. m.uaniitu .-suf fidente i _ Ir -a - '- di_una,_sargen.te di...ioni.cloruro ..come ad esempio,cloru- .V;

I f

I

? : - ro-di .sodio, in modo , da-dare _50 .equivalenti di ione /:

- c iloruro-per-equivalente-di-.cisplatina..-Inoltre,_????;i'..

- soluzione-satura,,o -quasi-satura -di_un.-sale.-di ..cloruj

_ :_ ro.-inorganico.non-E.aiiebbe._desiderab.ile_per_.la.possi- __

? : - 5d-lit? di- cristallizzazione- dalla soluzione _al freddo ... .

?

_ Sella, situazione^.s_tabilita_s_qpra,_50_equivalenti di

- ioni .cloruro per-equivalente,di .cispl.atina..si_potrehr_

_ bero. ottenere .usando,acido..cloridrico-coin?.sorgente_

I

- di- ioni- cloruro, -ma questo - potrebbe .dare, una soluzio-- ne- indesiderabilmente.. molto? acida,. cio? con _.un pH. .bas- _

! _ 1

- to ? Si- ?? trovato, che _1 e...soluzioni.. ec_cessivanente_aci-_

- - - d I e- sono_.in. -qualche modo meno ..stabi .li. delle soluzi.oni 1 _ t _

4 pi?-moderat amende- -acide Lfinterval-la-di-pH- delle . ? I . '

junlu s i o n i... p.r o f e r ibi Ime n t .e_...?_ ..c.orn.p r e .s.o.. da_ ci rea _1. ,5. _

.a.? circadl,-5-?? di-P^-ef-erenza_si-.utiliz.?ano_da^c.irca__ _

? 2 3^.c.irc.a__lD_eQ.uiv-alenti di_ioni_ .cloruro.- permeo ui va- ... lente-di? cisplatina,? e- -pixj.-prefcribilm.ente.-du- circa -?. a.-ci r_c.a_d - oqui va lenti d, i-i.ani_cl o_rur Q_p.e.r e cu iva

1 ente? di? ci spi at ina. is uot?? Gli ioni cloruro_. .possono essere forniti agniu n - _ pendo .acido -cloridrico, un., alopenuro . me tamilico mn_: _ it os sico? f armac cubicamente- come _ad .es empi o-0 1 oruro_.di _

: s odi o.,. -Cloruro. _di_pot as.s_io.,._c 1 orar o di_cal c. io_o_ c 1 q- _ !

?ruro di magnesio, _ oppure un sale di__addizione dell

^acid o -eloridrixe- con. .un a-ummina _t e.r.z i aria_non ..tose i - _ c a farmaceuti c amen te _a ce et tabi l_e c_ojne_ad esempio la

_itr ietilammina, ? a doro? rais cele .. La .sorgent e -di i ori j -cl oruro preferita ? l ' acido cloridrico, il cloruro _ idi s o dio. oppure una lo r o .jais c e.la_,__

T rrl i c.oli_onlieiilenici-e..i glie oli m e.t o s s ipo= diedi 1 e ni ci hanno le formula ge n er ali.

_ dCOOH2CH2.)nOH _ e _

CH pZ (CCEL 2Crl 2O n OCH o, _ _ _

. riso e it ivaui e: t.e , e sono disponibili in commercio co-_ine_ Carbowax -.Polye.thylene _Glyc.ols e .C.arbov.xax.ilethpxy Poiy.eth; di ve ol s . Si prefer? se e utilizzare i

?pjprrhrv Grades dei Carbowax Polyethylene Glycols, che sono prodotti, secondo ??- sjiandard per_l ' alimentazio

.ne-e Der .l? ar>t>l reazioni dei medicamenti -de^li .Istituti U.S .E.,.N.E.....e-E.G..C. Gli?int?rvalli.-di_p.esi.

molecolari--tioici pei??una-variet?-di-Carbowax-Polye-! th.ylene_ Glycols^e_- Carbowax.Jletboxy .Polyetl^lene. Glycols. son.. dati nelle Jbab e l:le__l_e?2 _ , _

Tabella 1

".Carbowax _ _ Intervallo. - - V >

*'* Polyethylene.. . .tipico di _p_e-,

Glycols" O) _ so molecolare

200_ _daJ190_.a..210_

300. da 285 a 515

da 380 f 420

.,600 da 570 a 650

1000 da 950 a 1050

15.40 da 1300 a 1600 !

4000. da 5000.a 5700_ r

6000__ da 7000 a 9000 .

;(*) Glicoli:eolietilenici_6arb ov;ax

.Tabella_2._ _

_ !_ l'.Carbowax,. Intervallo.

Iiethoxy tipico di pe--1,__ ^plystbylene___ ^.a .anJLecoiare

.1_ _ Glycols" (*)

I

- _j- 350 .da.335? .a. . 365 _

_5?Q__ _ da.. 525 _ .a . .. 575- -- -_ 73Q___ _ da 7.15 _ a 785 _ ...

2000 da 185.0 -a, _21 50- _ -4?#? Glicoli raet osaipolictilenici -Garbowax ,

E1 noto che i g li c_Qli_p. aliai il ani ci_i_or.marLO_c_o.Tit?.. iplessm .con-certi-Gali-inorganici ._Cosi.T _la.-xea?ione~ i ! _.d ei ..gl ioni i_ p o.l i e_t.i leni c i _ con_amtaoni ?..-C ob.al t o1; i o ci a-..

-^nato per formare -un. complesso-blu-? _la. .base..di? un.

-procedi me n t o - c o lo r i me t r ic o - d i- d e t e r min a z i o n e? del 1 a . ^ ? v>: . ? -C.onc e n t rasi one -dei _ gl i c.o li. poi lei i l.enic i _in_s.v ari a-^ _ i

_te miserie.. ..Ei.. ritiene_clLe ..la_..slnbilit?._di. c.ar.atte- _ re . v.ejramente ...unico-dei 1 a clapJlaiina noll-e_s_oluz inni -idellauiresent? invenzione-poasa e-sneLra_dovii-ta_ad_nn _ ; r-nmp l e s c o__lorEiato__t ra.....liL.xi-Spl at ina__eci_i 1 glicole _ _ _ ; polle t il enic o , _ ma questa ? soltanto una ipo_t_es i__t e o- . rica ed essa non forma parte del la presente invenzione..? La-orova. della formazione -di .mn_c ornale s so. .? .sta.-..

\ t a -no t ata me 11 a..._tec ni c a_d i_c r o nalo-gr a f la _.s_u _?? r ai o_ so 11 i 1 e? s e :;ui t.a . nella presente invenzione . Usando _

Ile -te.cn i ch6-:pi.? .sotto. de aeriti e., _la_c_i spiatine, .acnuo-!

:sa produce una macchia ad un valore Rf di circa 0 ,6,5..

!Tu tta_yia,_ una_.s olu zi on e di cisp lati n_a_i n _glicole _po-_ liet-ilenico-dOO--al? 90-i3_ acqua - al -10-^_ Cammero

!in di-HC 1-..0, 5-_E.)-fornis.c e__una... macchi a??d_un- vai o r_ ire - Ri di -circa...0,5- 11 . anale.- si _..e s t end e. i n. _ s tri scia _

I .

-f-ino-.a_circa_0i6.5-? Le_diluizione-con._auantita_sostan?_ 3iali-di-acqua_ appare?spezzare-immediatamente_J.l__c_o.niplesuo.,-.poich? la .diluizione d?Ila _so.lnz.lQne?di?c_ui_

! ! koora...di.PEG-HgO...(ovvero .HClV con ? Volumi di acqua

.mostra; ? allora s olo . una macchia di_cjjspJ. at ina ad un

_valore.?di__Rf?di?c.irc.a_0,..65

Gromatografi a su strato sottile

. Ap pare echi e rea genti

_?ja_) Piastre per cromatografia su strato sottile-pias ir e__-EM__ Lato rato rie s s L i n ea gel 60? mimero._di- & nata!??:? 5763, o equivalenti

(b) Sluente : acetone/HNQ^ 1 TST (9/1 ) . Da preparare di;

-iresco-giornalmente._

Ce )... S.vllyp p atoxe^_dl.aclois Ile r_e_5, 6_ _g_di _c.l.o.ry.r.Q?. s t an -no.so . ir.10 mi _di_HGl_concentrato_.__As.h.i 90 mi

li acqua distillata e 0,2 g di ICI. Miscelare bene. Prenarare4L fresco.sriornalmente.._ ?_ L_

(d1) Stufa da laboratorio regolata a 100?C.

Tecnica senruita

( a). Diluire. _il..campione- _o_on_5? mJjmi_ d.i_ dime til formammide (DHF) (Burdick e Jackson, distillata in

jsietro)?._ 1_ __ ^_ :_ _ ;

'b) Macchiare una piastra per cromatografia su strato

.s o tt ile__c o n 6 mi crolit ri.iie 1? c_aBipi-one__e__5_ni icr O^L

'?'?'?litri-di .una soluzione.standard contenente cis-/ platina _(e_transplatino e platino.B,_se fosse ap--propriato). ad-una-concentrazione- approssimativa ? ?jnente .identica a quella che-ci.si attenderebbe/ nei.campione da .analizzare. Sviluppare .'un'.altezr-! -za di 10?cm in un recipiente da-cromatografia'su ! ._str.ato _sot.tile _preventivamente messa .in equili-, . , _Jbr.iO-_con- il-materiale-eluente ... -Spruzzare la -pia- . t

- _stra_es.s locata .con. la. soluzione .di sviluppa.tor.e_ _ ? preparata-di -fresco .e_porre quindi la .piastra- . : in .una..stufa a...lO.O?C._per.10 minuti. Osservare liLev??!?

?:.? _ zone?giallo/porporac.) Valori .approssimati di__Rf il i - 0,?-5^-cispiatina_

_ 0,76~transplatino._

-0.,9^-platino_B -saggi-effettuati ?mediante_cromatograf.ia.su. 4_liquido-delle?Soluzioni della,presente invenzione_ _per .ii-contenuto_di._cisolatine .possono essere..candot-. -ti in -accordo-con-la.tecnica descritta ne11a.domanda . --di brevetto.per.il Segno IJnitO-Ko._2.02194-6A...La.fase mobile preferita ?-costituita da.,acetato di etile/ . ._metano.lo/dimetllformammide/acqua.distillata ..(25/16/. 5/5) .Preferibilmente lo standard_?..costituito da _ cisnlatina .disciolta in_dimetil?ormaininid.e ad.una.con-,_.

.centra .z ione., di 1..rag/ml ._1__ campioni-ner..1J analisi-ven-.

-gono- dilu? t i _.c on..dinietilformaminide _ fino? ad' _.ot t enere.

-una- concentra-zione-approssimata- d?? cisplat ina. .pari

- .-??-.l.rag/ml._ _ i_

i !

_ i_ Seb?ene..non si_possa_ottonera alcun particolare_

i i

I 1

; l

- yantaggi o_d al LaJ. oro p re s_e n z a _ 1 e.._s oJLu zi on t _d ella _ ; _

! !

- presente...invenzIone possono.,_,r5.e_._s3_ desidera contens.?-_

| i

_ re?un...e.cci.p.len.t.e_tr.SL.ai?elli_4i_solito impiegati, fi-_

| 1

- etologicamente accettabile-nome _ad_eaempio_.il?dannito-_

j

- lo.._ :_ ^_

!

__ j_ Sulla base di studi di stabilit? finora effetj 1 A V iuati .,_1a_stabilit?.prevista_.de1Le_aoluzioni_ deJJL.a_

? .presente-invenzione? 4def inita-Co.me? pardi t.a._ d_i_ .poter

i 4. za. pari _al_10-?n). __? -maggiore ..di due .. anni_.a._i ejrtpe.ratu?

ra ambiente,._

_ Xn_un a__realizzazione preferita della presente _

inveri zione.^? le?Soluzioni _ sono? sterili? e.d . esenti, .da

pirogeno-, ? e? sono? conf e z-ionat e in conte-nitori- sten il i

e senti _ da-jp_i rogeno.. ?Tali _ s.oluz ioni posson o_.poi e ?? e --re?diluite?per__esempio-C.on._facqua-sterile-ner?inie^-i .USP".._ovvero_... "_.solusione _s.alina..nom aie stari1e

USB".?e?sono-somministrate?per?larvia_intramuscolare_

-O?intravenosa...I..me z zi_ per._.sterilizzare_quaste,solu-=?

.zi mri EQUO gi? ben noti n el_r amo _ r.e.1 stivo . .He ll.a _pr e_j=.

fignts inveri?! one si preferisce -far? passare- l.e_ aelu- _

zioni attraverso.,un __flitro,.sterile esente_da niro-1

r

geni .Millipor.e..da-0,22..micron,...usando.tecniche as?ti

\

biche.sotto-pressione.-di-azoto-sterilizzato . ?'MilliporeJhn -.un.marchio_di fabbrica,depositato-della.hil.--lipore- Corporation per?filtri-a-membrana ? Il-f iltra-1

?to .sterile . viene raccolto in contenitori sterili e

senti da-.pirogeni e..viene .da ultimo, introdotto,- nelS

1 \ ?la-quantit? desiderata,?in-adatte-fiale-sterili-esent

ti-da pirogeni e tappate con tappi-sterili? esenti_.da _ _ pirogeno (di .preferenza-rivestiti di tef lon)? e? sigil- -i ? ?late con sigilli-di-alluminio sterile.- -..?Per...!.'impiego nella.cura._de.l_.canc.r.o, rie solazip-_ n.i_concentrate.vendono diluite fino..ad oti.enere_JLaconcentrazione desiderato (tipicamenteun-mg-di-ris^ .._ f .

piatina .per_.ml.)._per._ese.mpio_con_1a._c.osi.dde11a_?acaua_ !

..sterile? per, iniezioni _ USI?" , " so luzi on e s a lina_n ornale _ ..? ter ile_ USP'! ^-ovvero J! s oJLuzione.. steri le...di...gl?no^i o " . quindi, risate mediante-inie zi oni .intramuscolari. 'o in- . . travenose. , ..ovvero .per infusione intr avenosa come gi? __ noto per... i- preparati .di.. cisplatina .della .tecnica _pre-_ cadente. . dosi .usate__cormentemente_con_tossioita _ .da..blanda.a moderatamente accettabile sono,nell..'in-,_

J o

tervallo .da..60.a 100?mg/M^ per..via-intravenosa,._come.

.dose.singola .oppure,come .dose-suddivisa in_un_perio-..do da.3 a 5 giorni, per..essere poi ripetuta_ad_interd.V

-v.alli_.cLi_ A settimane .. JJn.. dosaggio? di _gr.o&-! . I

nolanamente equiv.a?ente_._a. .1 , 5 .rag /kg . cde__a._s.ua ?volta' _

._n!__gr?.ss o.1an ameni a _ eguale a 1Q5 !ng/pa-ziente_?&l_ p.eso. i1_

j

_ ..j&i?7Q_ks..._ Hi . j?r.eAuentfi._si^?a_irap ieg o__di ..un a_t e_r.apla_ _

i ' ; i

_.c onc omitant e_. c on.. al.trl_ag.ent i_.c he.mi o t erap? cl_p_e.r_oi -!

? itene re -i miai i or t_..ri stillini i * _ : _ 1 j

Come v iena_ qui. _us at o__e_nel le__rive nd ic azioni. 1

-ri ferimenti a "equivalenti" di ione cloruro per "e- j/ > ? <?./

\ uiv.al ertr't.d i_ ci s piai ln_a__sign i f ic a_e.au i v ale. nt i__mo-. fc' ? ;

?lari. Cos? per esempio quando si utilizza 1 1interval

i i

ilo preferito del calore da circa 3 a carda 7 equiva-

_lent-i- di 1 oni? cloruro rpe r?eqniv.alent e__di _c i.s.p Lat ina.,

ni utilizza una quantit? da|circa 5 a circa 7 moli _ ;

di NeCI pe r._mo la di._c i s platina ma una ou entit? da

y.i rca 1.,_5_a circa 3, 5 moli di CaCl^ per mole di ci s-

_pl.at in a , _e.c c.e te r a - _ !

Xl_pla.tino_B ? una denominazione arbitraria qui

_imp legata pen_un_ pr o d o.t to di re ani on e acido di. cis-

_p.la?ln?L__nrie_?__una. net.?__del_not_o_c omplass o_rosno_di _

laguna ed.nl _ quale ?. s t aia _a sue grata .in..via_?i_ipo^_

4: e.s i_la _s e-guente? st rut tura - -

?jf 31. Gl

Ffe

_E5IL _Q1_

? t

_ La? presente ?Imr.enzione? ?_ll ~l.us-trat a_d agline rem.- _

_ _ _ lipi...cii:e seguono, senza, per? . ess_ere limitata in_ alcun

t !

. I j _ _? _ fmodo._da questi . _ j _ _ _ _ ?._ _

_ _ ; _ JJs.enipiQ_l _ i _

!

_ _ Soluzione, concentrata. stabile di _

- -- j.- cisplatina? (10. mg/ml) .in . miscela _ ! .. .

! - ;

- . _ di .glicole .polietilenico. 400_ C 90 %)/. _ . . .

r _ HCi .inXio_Ji _ | _ _

_ _ _ 5QCL-?&--di_clsplatina venivano sospesi, in_una_

I :

- : - [soluzione-, di .5-?l? di.. HC1 ?N .e. 4-5 mi., di glicole .poli- _ .

! ;

- [etilenico. 100 .?Dopo 15, 5- giorni di.. agitazione .a .t.e.m- _ _

_ paratura. ambiente _(.con . il . contenitore, protetto dal

_ ila_luc.e_con. _una_?o.gl i.a ...di...alluminio) . s i. otteneva 'u

i I

- in a-soluz ione-limpida, di. col ore- giallo.? .Earti. aliouo- .. ?

- f jte_della? soluzione ms/onivano poste. in fiale di colo- _ . ..

[

? _ _ _ razione .ambra del volume, di 17 mi, tappate con tap- _ ;_ * ' - -- rpi?rivestiti-di- teflon,- .sigillate -con cappucci _dj_ _

' r . -- - [alluminio- e posta-ali a-.prova.-dl_sta?ilit? .jalla_ con- _

? - J - ? j-servazione -a -svatiate- temperature. Dopo conservaziot

- .ne? di? due- settimane a ?a cromato graf ia_su _stra- . .. ..

- lo sottile? indi cava la _presenza_di .una|fcraccia_di _ _

_ _ _ _ ! _ ? transplatino . e. circa 1 di? p latin o.JB . _Dopo _con se ir-

_ vazione .di due...sett imene a 56?C, la cromat??r_af ia

?- !_ _ ;su strato, sottile indicava, la. presenza .di .una ..quan-

_ __ 1_ [tit?-minore .dell?'!.# di_transplatino _e_c.irca .3. % 'di . .

i

_ [platino .B. I. campioni-conservati per_due settimane

t

f

i

_a.l la _t crup e r a t ur a__ d i . .56 ? C ^venivano, d i lutti con A, 9. BL1S .volnAi d? _acqu.a_^in_mod_o^d_a_.dare _spluzioni_ li.m riderelle ..c.ontenevano_ rispettivajnente__2.,.__l.. e .0, 5 mg/ml di cispla.tina ? -Una-lie.ve_t orbidit?? si-sviluppava-in _ ? c i as c_ un o.._d.e i_.c ampi on ? ..di luit i dopo. rt_pos_o___pe.r circa 18 ore...a _t.emper.aiura_ambi.ente_._

i Esempio 2_ __ i _S ol u zio n.e__c .oncentrats.. _s_t_ab ile. _d i .

_ cis.pl.aiina.(IO.mg/ml)_in_glic_ole_

_ polle file nic..Q_ 400 ( 90 ?0/HC 1 jO, 5N _41GL?S.)_._

_5_ml_eli..acqua.p_ur_ificaia USP e_5.,_CLmi .di HC1 IN 1venivano miscelati e ad essi si aggiungevano 90,0 mi idi ... 'glicole . p.o.liet ilenico 400. A 5Q mi della s?luzioin e~d-i? cui? sxxpr a_s 5 _ aggiungevano .50Q..mjg_di_ci s platina _ t

__e_ia miscela era.protetta dalla luce con una foglia idi-alluminio _ ed agitata a temperatura ambiente per _ ' ?A ore in modo da orodurre una soluzione limpida.

i

-1La cromatografia du strato sottile della soluzione .preparata di fresco mostrava soltanto una zona della-C?splatina__con. una .possibile straccia.,, di trans ?_1?-_ I .

I

;tino.._Aliau.o.te__iel...volume...d.i_2__ml_del..la__solozione._ -j-v.enivano posie._in_fiale di.,colorazione._.ambra..de1_jsro.-:in"ip di 17 ni, tappate con tappi rivestiti di teflon. jsigillate con tappi,di alluminio e sottoposte.alle_ _ prove,di stabilit?_al.la .conservazione.a .svariate^ tem-_ penature. Una fiala campione era congelata-in??un bagno di-ghiaccio secco-acetone per.untora .e ..poi-la- . sciata -tornare alla -temperatura . ambiente . ._Si.-otteneva-una. soluzione-.limpida senza alcuna traccia .di orecipitato..._Dopo.conservazione,di..tre..mesi?a._3.7tO_ed > a-45?C, la?cromatografia su.,strato .s.othile._indi_cava___ la -presenza-di-platino B..alla,concentrazione-da.1. 2_ ed _una _t r ac cia^.p.osc ibile di transplatino. Dop<j>t - un .mese, di-conservazion.e_.alla .temperatura.. dd^SJLCU..

}-la-cromatograf ia._ su strato. sottile, indicava, la. _p.re4 I

-senza .di..pi?-dei 5 -% ma meno del 10 % di olatino_B__ ed una traccia di,transp_latinq_.,I campioni conserva?

\ti_a^3-7--C--ed a 45-?-C.._per tre mesi-e_a temperature,di_ i

56?C..per_un-mese^jvenivano diluiti con 4 volumi di_ j

XaCQ ua..purificata__USP__cos?..da dare_soluzioni limnide I x

icontenenti .2-mg/ml_di..cisplatina._.?e_.spluzioni_dilui-. -ite._restavano-litoide dono,riooso..di 24 ox.e_.a_tejipe-.. r attira ambiente .

JCsempio .3-Soluzione, concentrata stabile, _di

?cisplatina (10 mg/ml) pi? CaCl^ _ (20.mg/ml) in glicole polietilenico

AOO (90 ?)/H01 Or5N .(10 #)

.2..g._di CaCl^ anidro di qualit?J'reagenteJL.veni- :V.ano. discioltiHn. una _DILSC eia-di.. 5 ' mi di .acqua puri-- -j?icata-.USP_e-_5--ml . 1?_?01.1??.^_-8$--??? di _ glicole., noli e-.

I . v

- itilenico. . AQ Q _ _e r a n o ... a gg iun t i . c o s i da pori are_.il _y_olu-.

_:ine__a_ l.QQ. ml . A. 50 mi di questa a oluz :Lone._ven?vano

agg iun_ti . 550 .mg _cl i_ci.s_pl ali a?_e_ 1 a_ mi s cela... era pr?

t e_t.ln.Hall a.lu c e con una foglia eli alluminio.. ed agi

tata-a-temperatura. .amb.i.entc^pnr_21r ._ar.e_lii_mod,o da da-,

J

r.e -una soluzione limpida . La. cromatografia su strato _

s ot.t il e_ de 1 1a_~s.o.lu zi one preparata.. di . _f.r_e_sc_o_._indicava .

!

s oltant o. una^s ona di_c.ic.tLl atina con una traccia t>os- Ad . s ib il e_ di__ t r an s r 1 at ino.. Ali a u .o.t e. He _1 _Y.O lune__di_. _2_ _ mi

_ 'dell a.__s oluz ione_.yeniyan_o_.p o ste in fiale di colorazione ambra _de] _ volume... . , tappai e con tanni ri-'

[vestiti di teflon , _sigil_l_ni_e_ con,.. cappucci _di _alium.i-.

?nio--e--s.ot-t-op-ostc a.lle_proye di stabilit? alla conser-1^azione, a svari at_e__tpmp erature . Una fiala camp ione

J?vp.nriva_ pQ&ta_in.- un lagno di ghiaccio secco-acetone

per mf?zz'ora e congelat.a fino a dare un gel traspar ent e . Essa era, noi lasciata tornare alla temperatura -arabi ente... e. si. .otteneva una soluzione limpida. Dor 0-?cons erv.aei on.e_ dell a durata di tre mesi alla tem?

p aratura di. 37? C, la_cr ornai ografia su strato sott ile

indicava-la-presenza.. di _una._c.onc.e.ntm zione_Hp^_l_.._a 2 %

di rlatino B ed una possibile trac eia di transplauirn, T)r>rn tre mesi di conservazione alla temperatura

- ? di 45?C,.la cromatografia.su strato sottile indicava

!

----_ ,;la..presenza di.circa 5 ?Odi .platino B ed.una..traccia ..

?

- LD.O.Ssibila.di_trahsplat.ino. Dopo m me3e_d?..conserva- ..

Lzione alla -temperatura di 56?C? la .cromato grafia- su -

- - Istr.ato sottile indicava la presenza.di .una. quantit?

i

f

?da -8?a-10- %.di .platino B ed..una traccia di..transplajtino JLcampioni conservati .alla,temperatura_di_57?C

?e.di_45^C per tre mesi ed alla temperatura di_3.6?C_.

i

[p_er un mese yenivano diluiti_con 4 volumi di acoua

Jp?r?f?cata.-USJ?. cos? da dare .soluzioni limpide. con?

Jnenti--2--mg/ml -di -cisplatina. -Le_soluzioni diluite

Si ^restavano., -limpide, .dopo. riposo ..di 24 o.re_alla Jfc.empe.- 7 t

aratura ambiente . _ _ _

.Esecro i.o_.4 _

... S.o luz io n e_ . cono en t r a_ t a_. s t ab i le di _

_ cisp1atina_(c.irea..22 mg/ml_)_pi?_

- :- !- .CaCl _-(25-mg/mi)?J.n vlicole_._poliet.ile-- [_ nico _(90 il)/EOI...Q,5IL (10.?)_ ..

i

_ ;_ Ad_un volume_di 5 mi di_una soluzione di grlic0-

_ :_ ._ Ile polietilenico 400...C.9CL&)-.ed H01.Q,5N .(1050.ve-- - -- ;nivano.aggiunti 45..ras .di..cisplatina,.e la miscela

?- -^era-agitata per circa un?ora a temperatura..ambiente

- -- ,1_ per- ottenere una soluzione limpida. Una quantit? .ag-- Lgiuntiv.a..di 50.mg.di.cisplatina.veniva poi introdot-Ii'

_ _ Ita (per un totale,di 25 mg/ml) e la miscela era agi-If

i

- - itata .alla temperatura. di circa._4-5?CLper_Lm' ora. e poi _

| ? , ' i - . la. temperatura.. ambiente, nar 18 ore cosi_da .x>r.od.U3?re.j. _

! ^ " ' i . juna-.soluzione_auasi cormleta.._La piccola... auanti.ta _

\ !

- idi-materiale -insolubile --era_rim.oasa_-mediante JTil tra-?

! I - ? ii-ssione?. Ln cromat?gra?ia.-S.u - strato, sottile -del filtr 1a

- .ito mostrava- solamente una.-zona. di _cisp latina- con_una

? - ? ! !possibile . tr , i r accia ..sdi_ transplatino .-da jpart e .restante _ ;del_filtrato era posta _in_ u.na_fiala di colorazione j

- L iamb.ra .del -v :olum :e , di ..17. mi, - f.Drni .ta_di ' .u .n. tappo., ri ;ve ]- _

! ! - ?stito di teflon,, sigillata ._c.on_un -cappuccio ..di _allu- _

. . |mino-e-inrntenuta__alla. temperatura di 450C ner tre

_ |uie si . Dono invecchiamento per tre mesi a 4-5?C, la i

i

_ ?cromatografia_.su strato _so 1 1i le in d i c ava la pres en-;

! T f --za_ di- una c onc entra zi one-dal HI -al_2_?-di? nlat-ino B

_.e. nessun quantitativo . d.i.i.ransOlatino . L??. diluizione

- ideila, soluzione, posta- acLinve addi are. .con_.acoua puri- _

; i - jficata .USP .fino.. ad ui?- concentrazione __ eli.2_ng/?nl _cLi_ _

_ - risplatina dava, -soluzioni- limpide _che -restavano. -tali _

.anch.e_ dopo, riposo .alla temperatura. .ambiente? per. 24? - _

? ?... or.e . _ _

- - ? Esempio -5- ? - [ -

Soluzione stabile concentrata di _ i_

cispl&tina (1.2 mg/mi) pi?iTaGl _ _

)

i (.10.mg/ml) in .glicole etilenica _ _ T i

-L 4-00 (90 ?J)/.HC1 0,5N (10 ?) - _ _ _ ! . .. (

I I

J _ 10.0- .mg_.di _ cloruro- dl_. s. odi.o._ven ivano- dlsciol.ti_; _ i jin_una_3 oluzlone...di_5_m.l---di_. ac.aua...punii icata_.USP_e _ _ -!^ Ml-di-HGl-.IN.._A_.questa_soluzione..si..aggiungevano_

,?_9-0_JH ] _ di __gl i.co 1 a_p.ol le ti l.en_ico_ 4_Q0 _e_ 1 a_ ini s cela Q ?? _ _!????.?^?^-??^-.15-??1?^^._?^_50.-.??1- .di _Qua stlult ima_s olu- _ 4_zione_Jvenivano...aggiun.ti._iQQ_mg._di_. cis.platina.,. e la; _ i

miscela veniva_agi tata_all_!_o_s.cnrQ_a . temperatura am- _ J?ient.e__p-e.ii_Jir-e_gio_r.n.i_-._c.Qs?.da."produrre una soluzione_ I

_j.limpideL?. la cromatografia su strato sottile della 1_ _ :soluzione preparata di fresco mostrava soltanto una_ jnac.chia_di_cispiatifta..__Ln__crpiaatografia.su_liquido;_ nd ntta afficienZ8_e?f_ettuata come saggio sulla so^ __ ?

1luzione ureparata di fresco mostrava che essa con?te?-?:' ;neva 12 mg di cisplatina per mi. Parti aliquote ve- / nivano sigillate in fiale di colore ambra del voluime dj._17_mj_ come__deseritto._fae?L?_es.erupio_5 e .s_o.lt.0_r_ -poste.alle?prove di stabi1it?_al1a..conse.ryazion.e_a_ svariai e_temperaiure_._I)opo._conservazione a 5 ??C pe r_ un?periodo-di-ire_.mesi 1a_croma.togra?i?L_.su_SJir.ato sottile indicava la presenza di una quantit? minore_ dell 11 % di_ platino B e nessun quantitativo d_i_trans-; platino- -Dopo _consery.az.ione_. a 56?C per _un mese, li cr omatograf ia_ su_ strato.. sottile .indicava .la _pr.es.erL- _ , \

...l-zu-di.unaviuantit?_dallil_al..2?5i_cLi_platino_3__e..nes~_ iRim nuantitativo di transplatino, la diluizione dei _ - rcampioni invecchiati impiegando acqua . purificata. USP_

- - .fino-ad ottenere.una.concentrazione d?.2 mg/ml__di_. j

- --!ici.splatina. dava . soluzioni lim?pide le quali restavanio..

?tali anche- dopo- riposo a -temperatura..ambiente. per. i.

24?._ore?? _ _ _ :_ _ _ _ '

?t" .' _ I_sagg;i effettuati mediante cromatografia ad.

jal.ta -efficienza su . campioni_conservati per tre mesi

i

lalla?temperatura di 45?C,-Pe.r dei.mesi a.37?Q_,e_oer

! '

lIotto..mesi a-temperatura.ambiente mostravano.perdite!

Idi .potenza rispettivamente,del 6,6 6;l_#__e 2, 3 J?

Esempio -6

_ __ Soluzione concentrata stabile di_ /

_ cisplnt.ina._(ll,4 mg/ml) pi? NaCl _

?

- (lCL.mg/ml) -in glicole,polietileni--_ i_

- :- co-400 -(90-5a)/acqua-(10-?0_

- Ad. una .soluzione.di..5)fLmg_di-.HaC.l..J-n?5?mi?di r

acqua USP_e_45 mi di_g1icole_poliet_i1eni-

.:co 400-venivano,aggiunti .50.0 mg di.cisplatina, e la

-miscela veniva,agitata all!oscuro..a jtemperatura am~

I

- ' !

-hiente -per_6 ore in modo__da dare una ^oluzione_lim-

pida. .La?cromatografia.substrato sottile della solu-

?zioneprepar.ata_.di fresco mostrava soltanto upa mac-

_ |chia. di-cisplatina.II. saggio effettuato mediante ^

i j

_ jcromat?grafia..su_liquido,ad alta efficienza mostra-

\ '

_ Jva-.che .tale,soluzione conteneva 11,4 mg di cisplati

,_..na? per. .millilitro^_.Earti_.aliauote._venivano sigillate - _ _ in fiale_di .colorazione, .ambra- del .volume. di._1.7- mi no-. ? ? _ me. descritto. ..ne LUes e cuoi o._ 5 ..e ..sottoposte _ a_ prove. di stabilit? alla conservazione a svariate, .temperature -Dopo. . conservazione -all a_ temperatura? di_37-0-C_e? di. ..45 _C.. . j ?

per _tre_,me s i , _ la cromatografia su strato sottile in- _ _dl5rava_dLa_.pr.esa.nzs._di_ 1? _di_4nl.aiin.0i8__e._ne s.sun_. _euantitativo . di_ .transplat in o.*_.La_dilui zione_.de i ...camoioni invec.chiati __con__ac_qua..ou r i f i c a.t a. USP fino ad ottene-I .

re una concentrazione di 2 ine;/mi di cisplatina dava

?% " ? ' ? t - ? -r A soluzioni -trasparenti., _le._auali . rssJ;.ayano__tali_ancjb?Vi.i__,:? dopo, riposo _ alla. lampe r at urn__amb.i ent e per .24. .ore .

I sag^-i efle.ttuati mediante cromatografia ad al--ta? efficienza? su? carro ioni? conservati ?ner..-.tr.e mesi. al~_ . la. .tomo e ra t ura_. di? 4 Ij?dil,.. sei.. ..di _ _37?_-CL_e__s ette-mesi al 1 a_ t e mp.e r atur a_amb lente _cio.s brava- _ _no_p.erdite_.di. potenza, ris_p_e_t??iiyntLerte_. del_6_,.l_?L, _7

? ) O of-Esemnio

Soluzione concentrata stabile di

cisplatina _( 10... mg/ml ) in ..glie o le

.poi ietilenico 600 (90 1') /HC1_. 0 , 5_JL

. C.1Q.J$)_ ,_

Ad una soluzione di 2,5 mi di acoua purificata USP_,. U^5_ml _di.__KC1_XIT_e 45 mi di glie o1 e polieti leni

? I ?

jco -600_si-aggiungevano 500 mg..di?cisplatina,-e -la ani---i t

- Iscela . era agitata - allo .scuro ...a..temperatura ambiente _

i . ;

-- . ber 3 .ore cosi da _o.tt.enere _una...so.luzione .limnida., _

?

- La _cromatograf.ia._su..-Stra.to_.s.o_t.t.ile_.della soluzione.

preparata-di frescomostrava.soltanto, .una macchia di_

cisplatina..Campioni -della-.soluzione.preparata_di._

-:fresco erano diluiti-con 1,-3,-3,-4,_ 5?e-9 -volumi-di?.

acqua.purificata USP.;_auest.e.soluzi.oni_..dilu1b.e_.non.

mostravano-alcun fenomeno di?cristnlliazazione.per.!.

..?riposo di.16 .ore..a-temperatura-ambiente .ovvero..a_.t.em-_

? |

ceratura di-4?C.-Parti, aliquote.della-.:soluzione?crei _...

? loarata di - fresco- venivano_sia:illate? in_f.iale. di_co~

? / _ llore. .ambra d.el volume. Ai 17 mi come_fgi? descritto

? .p ?eli'esempio -3 ed .erano?po.i sottoposte a prove di_ ?!

- !stabilita..alla conservazione? a...svariate.temperi

-Dono .conservazione... alla. .temperatura di 37?C e di 45.r?_Q_

! " ~ I

r |

jnertre rnesi,.__la cromatografia su strato sottile in-._

dicava 1a eresenza di 1 $ di n1atino B ed assenza di

'transplatino. Dopo conservazione a 56?C per un mese,

__la__cromatografia,su strato sottile indicava la pre-_

-.senzadi..3,4.?'.di .platino..B e nessun quantitativo_ _

--di.transplatino. .La.diluizione,dei campioni invecchio

iti con.-acaua ourificata.USP.fino ad.ottonere unacon-:

centrat one di 3 mg/ml.di cisnlatina.dava,soluzioni

llimoide.le quali..restavano tali anche dopo riposo a

temperatura ambiente per 24-ore.

Ssemulo 8

. .. Soluzione concentrata stabile eli

. ?.??cisplatina (.10 .mg/ml) pi? .EaCl.. _

.... . ..._.(.10 mp:/inl) in n;ibicole .polietile-_

- nico-4-00 (-90. tX - HC10,2N (10f'). _ p_ _ Ad una soluzione,di 0,5 ~ di NaCl in A .mi d 4??* acaua purificata USP, di-1.mi di KC1 lN__e di_4-5__ml .... .Ai glicole .polietilenico 4-00 venivano,aggiunti.2.50 ms; di cisplatina, e .la miscela veniva abitata .allloscuro a temneratura ambiente per 4-ore per dare una sDiluzione.linmida gialla...la .cromatografia su strato .sottile,della soluzione,preparata,di .fresco mostrava. solamente una macchia di cisplatina. Le.diluizioni .. della,soluzione preparata di.fresco con 1,.2U _ ?5 e 9 volumi di acaua purificata davano^soluzioni lim_-_ pide che restavano,limpide dopo rinosp_._di _2t ore_a _ temperatura ambiente. Le diluizioni con 1, 2, 3.,.^ _ ji 5 volumi non mostravano sereno di cristallizzazio-,ja .nuando_erano mantenute alla temperatura di 4-?C_ . .per 24-ore,. Parti.aliquote,d?lia .soluzione preparata di fresco venivano.sigillate in fiale di color_ambra del volume di 17 mi come viene descritto.nell'esem-.rio 3 e venivano sottoposte a prove di stabilit? aIrla conservazione a svariate temperature. Dopo conservazione alla temperatura di 37?C per tre mesi, la -cromatografia su strato sottile indicava la presenza

di 1 c,o di platino B con possibile traccia di transplatino. Dopo conservazione alla temperatura di 4-5?C per

indicava

tre mesi, la cromatografia su strato sottileYTa nresenza di 5 di platino B con una possibile traccia'

!

-di transnlatino . Dopo conservazione alla temperatura

di 56?C per un mese, la cbomatografia cu strato sottile indicava la presenza di 2-5 C( di platino 3 ed .

assenza di transplatino. La iluizione dei campioni,

invecchiati con acnua purificata USP fino ad una concontrazione di 2 mg/mi di cisplatina dava soluzioni, ? ?' f.- ?' limpide che restavano limpide dopo riposo ?i 24-ore

a temperatura ambiente.

.. Esempio 9

Soluzione concentrata stabile di

cisplatina (2,5 mg/ml), ITaCl(9 mg/mi)

e mannitolo (12,5 mg/ml) in glicole

polietilenico 6000 ? acidificatoa]_

'31 /.(peso/volume) acquoso

Cloruro di sodio (0,9 s), mannitolo (1,25 ?0 e

glicole oolietilenico 6000 (31,3 g) venivano disciolti in un- volume d'acoua purificata USP sufficiente

a preparare ICO mi ?i soluzione, e poi la soluzione

veniva acidificata .fino ad un pii di 2,2 con HC11IT

(0,7 mi). Si aggiungeva cisplatina (255 ma;) e la mi- .

.scela era abitata all'oscuro per tre..giorni a temperatura ambiente per ottenere una soluzione limpida.. .

.La cromatografia su.strato sottile,della..soluzione...

.preparata.di.fresco mostrava solamente,una sona di _ _ _ .cisplatina. Parti-aliouote della soluzione?prepara? - ? . .ta di fresco venivano,sigillate,in .f.iale_di..color . _... ..ambra del volume di 17 mL come descritto^nell1esem- _ .pio ?. e.venivano sottoposte a prove,di stabilit? al- .... .la conservazione alle..temperature di 45?C..e_56?C. _ .Dopo,.conservazione per due.mesi alle,temperature di' .' r ,45?C e 56-?G, la cromatografia su strato sottile.mo-.strava la presenza..minore dell'.! l di platinoLB ed _ .assenza di transplatino. La diluizione dei campioni

- -invecchiati...con.un.-volume eguale...!! acaua ..purifica-.ta USP dava soluzioni limpide che restavano limpide

. .dopo.riposo a temperatura ambiente per..24 ore,. . , _ _ _ Esempio 10 _ _ _ _ _ .._ . _ Eduzione concentrata stabile di. . . . . . . . . _ cisplatina .(15, 8- mgy?al) . pi?.lTaCl . _ _ _ .. . . (lO.mg/ml) in glicole polietilenico _

_ 400..acnuoso al 9Q % . . . . .. .. _ ..

Glicole, rolietilenico 400 (.90 mi) veniva disciolto in una soluzione di 1,0 g di ?TaCl in 10 mi di accua purificata U.GP . A 60 mi della soluzione risul

tante venivano aggiunti 900 mg di cisplatina, e la

miscela veniva abitata all*oscuro per cinnue ore a.

temperatura ambiente ner ottenere,una soluzione lim-?pida. La cromatografia su strato sottile della .soluzione .preparata d.i fresco indicava solamente una zo-,na di cisplatina; la cromatografia su liquido ad al--ta efficienza effettuata come saggio mostrava che essa conteneva 15,8 mg di cisplatina per mi. La dilui-,

zione della soluzione preparata di.,fresco con quattro volumi di acqua rarificata USP dava una soluzio-.ne limpida che restava limpida dopo riposo di 24_o- Fi "'??,?r'I-V?. ^'.V re a temperatura ambiente. Parti aliquote della solu-.zione preparata di fresco venivano,sigillate in fiale di color ambra del volume .di.1? mi come descritto

.nell?esempio 3 e venivano sottoposte a prove di stab ilit? alla conservazione a svariate temperature.

.Dopo due mesi di conservazione alla temperatura di

?5?0, la crornatografia su strato sottile.indicava _...

.l,l,5??-.di platino B ed assenea__di transplatino...

.Dopo un mese di conservazione alla temperatura di ..

-56?C, la cromatografia su strato sottile indicava

.la presenza del 2 % di platino B ed assenza di transplatino. Il campione invecchiato alla temperatura

di 56?C veniva diluito ad una concentrazione di 2 mg/ml

con acqua sterile ner iniezioni ed il camnione invec

.. chiato alla temperatura di 4-5?C era diluito alle con- .

-centrazioni di.2.,5-e di -5,0 mg/ml di .cisplatina con -_ ,acqua sterile.,per.iniezioni. Ciascuno,formava soluzio-- ni_ limpide che restavana,limpide dopo riposo a teupe- -_ ratura ambiente,di .24?.ore._ _ _ _ . _ _ _ _ I saprii .di.cromatografia..su liquido .ad alta ef-r_ _ f.iclenza,.effettuati JSU?..campioni..conservati per 5.me-_ . _ _ _ si alla temperatura di.4-5?C,ner 6..mesi.alla .tempera-..

tura di -57?C e per 8?mesi a -temperatura.ambiente no-r.-stravano delle,.perdite di potenza _d.el 7,6.5'-, 7,6 ?-.

e 0 /., rispettivamente

.Esempio..IL .

..'..Loluzione .concentrata_s.tab.il.e_di cisplatina .(.15 .mg/ml) pi? CaClg

(25 Glicole polietilenico 4-00 acquoso,al.90 ?/?

_Nota:. .La .cisplatina ? un .possibile cancerogeno... Duran-_te..L-1intera,procedura devono.essere .indossati v.es.ti-_ -ti protettivi,.guanti,.maschere.,.occhiali .e c.opric.a-_ pi..Tutte le..aree,di lavoro e.le apparecchiature_deve- _ .no .essere completamente ripulite perevitare una_nualunoue contaminazione futura.

Formula

per mi per 10.0 mi ?cisplatina 0,015 0, 150 rr

cloruro di sodio .. .. 0,015 s .0,150.! ?; .. .

(2)

-- acido cloridrico Q,5U J. 0,10 mi . 1,0 mi _ __ _ -- Glicole polietilenica 400 _ . . .. _ _ _ _ _ .... .. . : - .-Corodotto Sentry) . . . _ quanto. . _ _ Guanto _ ! _ _ _ - - - - basta, a 1,0 mi....basta aL.J.0,.Q_ml_

_ (1).Questo peso,di cisolatina assume,una.potenza _di._ _ _ - 1000 mcg/mg. Per determinare J.a.quantit? di cisolatina_ _ ...

.richiesta si usa.la seguente formula: ... _ _ _

.1000 x 0,015 s_ _ _ _ _ '_

_ ;_ = g di cisolatina ii-Potenza di cisolatina in mcg/mg _ chiesti._ . . .

(2) Un litro di.acido_cloridrico..O,5 IT.viene,oropara-_ (?j_..^" _5.

? to come anmie:_ . -*/,_ _

:<hL

_ 1. Porre Q57,25Ydi acaua sterile ier iniezioni, ..

. .. . USB- In.. un -.pallone..di .Erlenmeyer pulito- d.el ..volume ..di.

?un litro

_ ..2...Abitando .rapidamente,-.aggiungere.lentamente_

. e .con cautela.42,75.mi.di acid.o__..clori_dricojsoncentra- _

- -to. Abitare.per 10.minuti...Tappare..c.on un.tanpo_di_ _

_ gomma butilica pulito.._

_ Istruzioni per la preparazione di un litro

. .. _ di .soluzionersterile ..._

1. Si mettono 100 mi di acido cloridrico 0,5N..

in un pallone di Srlenneyer pulito, tarato del volume

iTi un litro contenente un abitatore adatto, come ad

esempio un abitetore a sbarretta magnetica lungo 6cm,rivestito di teflon.

2.Si aggiungono, con abitazione moderata, 15,0 g .:di cloruro di sodio.Si abita finch? il sale :?g ? .completamente sciolto. . ...

5.Si aggiungono con rapida abitazione 750 mi.

.di glicole polietilenico 400 (prodotto Sentry) e si abita per cinaue.minuti.

4.Si rimuove l'abitatore a sbarretta magneti

???,',?5 .e si drena l'eccesso di fluido nel pallone.

5.Si aggiungono con cautela 15,0 g di attivit? di cisolatina.

6.Si aggiunge glicole polietilenico 4G0 (nroc?ot-.to Sentry) fino al seeno del litro (un totale di.__ 880 mi di glicole polietilenico 400 richiesto).

7?Si rimette l'abitatore a sbarretta di teflon nella miscela e si tappa con un tappo di bomma butilica pulito. .- . . _ .. . _ _.

8.Si avvolge il pallone in un.foglio.,di allu-.minio oer.escludere la luce del tutto.

, . 9.Si agita rapidamente per 24?48 ore a temperatura ambiente.Si dovrebbe ottenere una soluzione nitida.Se non si ottiene una soluzione limpida ?ntro 48 ore, la miscela pu? essere riscaldata fino

a 57-40?C per 2-6 ore in assenza di aria e di luce

cos? da facilitare . la rapida dissoluzione della cis-.platina restante..Si.raffredda fino .a 23-27?C.. . .

. - 10..-Usando .una tecnicaasettica,,si fa passare..

- ?la soluzione-di-.colore giallo scuro-sotto .un'_appro-_ _

. priata -pressione-.di azoto-sterile-,-attraverso..un adat-_ _ _ - . -to -filtro sterile-esente-da -pir.ogeni-Millipore..da _ _

- 0,22 micron...Si.raccoglie-ilufiltrat.o..sterile,in un _

. . .pallone di-.Erlenmeyer-sterile ed -esente._da pirogeni,,

. _ Si.tappa.con_un _tappo di gomma..butilica sterile ed_

esente,da pirogeni. La.soluzio.ne._pu? essere conserva- _ ?,? V ta allo scuro

11. Si introduce la nuantit? richiesta della

soluzione .sterile .in ..fiale.sterili di colorazione_

-_ ..ambra,esenti.da_pirogeni. Si tappa con tappi di te-. fiLon -sterili esenti_.da pirogeni. Si..sigilla.con ele-_ _ menti,sigillanti di alluminio .sterili.

12. Le fiale -doyrebterp_cpntenere_ la_seguente

- et iohetta .a_titola_di_orecauzione:_

NON PER IL DIRETTO USO IUTRAliUSCOLARE?0

Il'TTR?VEH OSO *

ijf-La soluzione di PEG-400 pu?_essere^_diluita con

..14.parti di acoua sterile per iniezioni USP _

oppure_.soluzione salina normale sterile USP_

in -rodo da dare una soluzione di risolatine

alla .concentra7:? one d i 1 mg/ml . Se sono neces

.sarie concentra??ioni pi? elevate, si pu? impietrare ?una nuant?t? proporzionalmente ni? bassa di accua sterile o di soluzione salina. Le soluzioni diluite, possono essere impiegate per uso intravenoso e sono,, ?stabili a temperatura ambiente (22-26?C) per almeno, -4-S ore. Non raffreddare le soluzioni diluite, poich? ?potrebbero formarsi cristalli.

13. Si conservano le fiale allo scuro.

/* Esempio 13 ... : Soluzione concentrata stabile di ^ cisplatina (2,5 ra.g/ml), ?TaCl (9 mg/nl) X . CaClp (15 mg/mi) e mannitolo (10-mg/ml) . in glicole polietilenico ?00 in ... soluzione accuosa al 31.^.' acidificata. .. .. 0,9 .g di cloruro sodico, 1,5 E diCaCl ed 1,Q s-Idi mannitolo erano dieciolti in una miscela di 31i?5 ml .di glicole polietilenico 4-00 e 4-0 mi di acqua puri--ficata.USP..La soluzione era acidificata fino a pH . .2,2 con.un .volume di 0,4-mi di HC1 IN, poi si aggiungevano 255 mg d? cisplatina, il volume era portato. a 100 mi con acoua purificata USP e la miscela era agitata allo scuro per cinque ore a temperatura am-.biente cos? da ottenere una soluzione limpida..La cromatografia su strato sottile della soluzione ore. penata di fresco mostrava soltanto una zona di cis-;

?platina. . _ .. .

- - - - - - .. Esempio 14_ .. .

- -- La tecnica generale.de.ll_'_esempio 5.viene ripe-?

- tuta.eccetto-Che il cloruro sodico _ivi.utili_z.zatp.?

_ _ .sostituito da una quantit? epuivalente di cloruro di

_ magnesio,,ed in tal nodo viene.prodotta una soluzione .concentrata,stabile di cispiatina,. . . ..

PU ^ ?. . ? - _ Esempio 15_ _

7 . _ Si ripete la tecnica generale dell'esempio 5_...

. .eccetto che.J.1 cloruro sodico .iyi_utilizzato viene.

_...sostituito,da una quantit? epuivalente di cloridra-_ Jt?odellsLjferietilamnina_e...si..produce..cos? una.solu-_

? zione concentrata-stabile -di.cisplatina.. .. . _

.. - - .Esempio 16_ _ _ _

_ Si ripete la tecnica..generale dell ' esempio 5

. _ .eccettolch.e il glicole p o 1 i e t_il e ni co zl-0_0 ivi utiliz-- zato cviene costituito da .un .volume . eguale _dei _plicp-_ li polietil.enici_2.00 _ e 30_0___rispett_iyament?, e. .si

.. produconp. c.os? soluzioni concentrate sjtabi li di cisplatina...

_ __ Esempio 17

Si ripeteeia tecnica generale dell'esempio 9

eccetto che il glicole polietilenico 6000 ? sostitui-..to da un coeso eguale dei glicoli polietilenici

.1000 e 4000 rispettivamente, e si producono cosi sotluzioni concentrate e stabili di .cisDlatina

RIVEUPICAZIONI

1. Soluzione concentrata stabile di cisplatina :in un mezzo solvente comprendente-da circa 30 % a

-circa 95 /?' di glicole polietilenico,avente reso molecolare medio da circa 150 a circa 9000 ovvero un.

.glicole metossipolietilenico avente.un Deso moleco-r .lare medio da circa 300 a cif'ca 6000, ovvero una 1Q

,ro miscela, e da circa 5 # a circa 70 # di accua

.detta soluzione inoltre conten?fl^oalmeno una sorgente non tossica farmaceuticamente accettabile di ioni . . . .cloruro in Quantit? che ? almeno all'incirca??enuiva-.:lente .alla Quantit? di cisplatina presente..nella so- ....

-luzione, e detta soluzione avendo ima.concentrazio- .

_ ne di .cisplatina che va da circa.2,5 a.circa 25 mg/m1,.

_, 2. Soluzione concentrata stabile di cisplatina

?in un mezzo solvente comprendente da.circa 80 a ? _ ..circa 95 % di un glicole polietilenico avente un pe-.a o molecolare medio del valore da circa 250 a circa

,1600 ovvero un glicole metossipolietilenico avente

.un Deso molecolare medio da circa 300 ad 800, ovvero

.una loro miscela, e da circa 5 ?- a circa 20 c;' di acnua, dette soluzione inoltre contenendo almeno una

.sorgente non tossica farmaceuticamente accettabile

di ione_ c lo nino? in_ ci u ant i t ?_._c_h_e _ _?.-.variabile_ nell 1 in-VEDI torva 11 o da f?-ir-Cn_.unQ- equivalente leqm va- i *

1 lenti? ner_equivalente di cisplatina nel l a ?????? pns',

e__dett_a_so.luzione ..contenendo, da circa? 5_ a circa_20_j?g_

idi?cisplatina per mi

3. Soluzione di cisplatina come rivendicato nel-

' 1a rivendicazione 2 in cui la sorgente non tossica

lama ceut icame nt.e _ cloniro ? aci-

d_o_cloridrico_*?cloruro di sodio, cloruro di calcio,1

_ cloruro di.juappiesio _oppur.fi._d1orldrato di trietilam-

-imina?ovver-o-una_1oro~miscela?

!

4. Soluzione concentrata stabile di cisolatina

.in__un-^e-ZZQ-_sjolv_erLte_.conprendente__d_a_circ_a_?55? 3?c_in^

??_-90_?1_1?-4?1???1&-43olietilen.icoL-avente._p.eso.jno.le.co-

io da cirea__25_Q-B___circa .650_..e._d.a__circa 10 ?'

a circa 15 # di acaua, detta soluzione .contenedo i-

.Innitro una sorgente di ioni cloruro scelta da acido

r1nridrico, cloruro sodico e loro miscelet in quan-i

! VEDI .tit? che ? nell ' intervallo da circa 2 a circa 7 eaui- ppgjlLlA ! 2 ?yr?erti per equivalente di cisnlatina nel],a soluzione,_

-dettasoluzione .avendo una concentrazione di cis

Ir la?.ina_var i abile da circa 10 a circa 15 nq/ml ,

5_._-So.l.uzione di cisolatina secondo quanto riven-

dicato nella rivendicazione .4 in cui la detta solu-

-zione.n .sterile ed e contenuta in un contenitore^ sjl?-_

di ione cloruro in quantit? che ? variabile nell'in-.tervallo da circa uno equivalente,a circa 10 eauiva-__lenti per equivalente di cisplatina nella soluzione.,

.e_.d.e.tta soluzione .contenendo.da_circa 5 a circa 20 mrz

-di cisplatina per..mi.

3.,^Soluzione di cisplatina.come..rivendicato_nel-- _ la rivendicazione.._2._in cui__la_.sorgente non tossica.

--farmaceuticamente -aceefctabile_dl...ion.e..cloruro._?.aci-_

do cloridrico, cloruro di sodio.,..cloruro__di.calcio * ,N . cloruro_di magnesio oppure,dioridrato eli trietilam-- .mina ovvero una loro, miscela. . _ _ _ ._ . . . . _

4. ..Soluzione concentrata stabile- di cisoia t ina

.? in..un_mezzo.solvente_-CQKorendent.e._dA--Circa ,?5f' a circa 9051 di glicole nolielilenico avente peso isoleco-.

- lare -medio .da.circa 250.a.circa .650 e da .circa _10_?i. .

.a.circa_15_ % .di acoua, detta soluzione contenedo inoltre una sorgentedi ioni,cloruro 5_celta_da acido,

.cloridrico,-cloruro sodico .e l-Oro__misce.le,..in._nuan-.tit? che ? nell'intervallo da circa 2 a circa ? equi-__vaienti per equivalente.di_cisplatina nella soluzione,

..e detta soluzione,avendo una concentrazione di cis-....Dlatina variabile da circa 10 a .circa 15jTig/ml_._

5. Soluzione di cisplatina secondo quanto rivendicato nella rivendicazione 4 in cui la detta solu-.zione ? sterile ed e contenuta in un contenitore si

gillato come ad esemoio una fiala

. - 6. Soluzione concentrate stabile sterile di cis-. ..platina in un contenitore ?imillato come ad esempio ! ?

_ ima fiala,.la detta soluzione contenendo una ouanti--- .. t? variabile da circa.10 a circa 15 ms;di cisolatina

I

-per mi e da circa 10 a circa 15 -me;di NaCl per mi in un mezzo solvente costituito da circa 90 % di un ..glicole polietilenico avente peso molecolare medio . _ variabile da circa 550 a circa ?50 e circa 10 ?

- -acqua. _ . . .

_ 7. Soluzione concentrata stabile sterile ci cisi-? _ . -platina in un contenitore sigillato come ad esemoio . - ..una fiala, detta soluzione contenendo una Quantit? - ? .?variabile da circa 10 a circa 15 mg di cisolatina . .. per mi e da circa 10 a circa 15 mg di IlaCl per mi in _ _ _ un mezzo solvente costituito da..una quantit? corri-,

. spondente a circa 90.A di un glicole polietilenico . - ?_ ?avente peso molecolare.medio variabile da circa 350. _ n.circa._d50 ed una quantit? corrispondente a circa .. ...10-5? di acid-O cloridrico diluito avente concentrazip? _ .. .ne fino a circa 0,5 H. .

8. Procedimento per la produzione di una soluzione concentrata stabile di cisplatina in un mezzo solvente il quale procedimento comprende l'operazione di disciomlierc una nuantit? sufficiente di cis.platina, nel mezzo solvente cosi da fornire una concentrazione di -cisplat ina variabile da. 2, 5 fino a circa.. 25. mg/ml,. il -detto- mezzo .solvente comprenden--do una nuantit? variabile _ da circa 30 Ji a . cirda _ -95 -#- Ai- plico le.- polietilenico. av.ente._ua peso molec.Q-.1 are _. medi o...da ..circa 150. _a__clr.ca ._90.0_Q. oppure un .gl ico ? 1 ? : me tos sipolietilenico _av.ent e un __pes o molecol are _ .medio del .valore da_circa_ 300 a circa 6000 ovvero. .una loro miscela, ed una quantit?. .variabile, da. cir-_ca 5 fino a. circa 70 ?l_di . acqua, la detta, soluzio-.ne inoltre ..contenendo almeno una s_ore mente non tos-.slca _e fnrmacRiatl camente accettabile ioni cloruro, -in - Quantit? t ale ..da essere .almeno all 1 incirda eoui- __ valente, alla Quantit?, di .cisplatina _che__? .presente _ nella? -soluzione. . _ _ _ __ . Roioa ; _ 2 4 H^R. 1981 _ _

. p : ... BRISTOL, IiTERS. COHPMiY ? _ _ . _ _ ; IMG ? BARZAITO * Se ZAITAUDO S ??^

lA-n- ? _ _ _ _ nn / _

68.98

Claims (1)

1. ALLEGATO A

   Rettifiche da apportare al testo della domanda di

   brevetto No. 48090-A/81 contenute in No. 2 postille

   chieste con istanza di rettifiche del

   POSTILLA 1: pag. 42, riga 2: rettificare "da circa 1

   a circa 10" in "da circa 2 a circa 10"; POSTILLA 2: pag. 42, riga 19: rettificare "da circa

   2 a circa 7" in "da circa 3 a circa 7" Roma 9 NCV 1982

   p. : BRISTOL-MYERS COMPANY

   p. : ING. BARZAN0? & ZANARDO ROMA S .p.A

   s

   FM/gg-6822