[go: up one dir, main page]

HUP0001125A2 - Kondenzált pirimidinszármazékok és nyílt láncú analógjaik, valamint az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények - Google Patents

Kondenzált pirimidinszármazékok és nyílt láncú analógjaik, valamint az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények

Info

Publication number
HUP0001125A2
HUP0001125A2 HU0001125A HUP0001125A HUP0001125A2 HU P0001125 A2 HUP0001125 A2 HU P0001125A2 HU 0001125 A HU0001125 A HU 0001125A HU P0001125 A HUP0001125 A HU P0001125A HU P0001125 A2 HUP0001125 A2 HU P0001125A2
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
group
general formula
compound according
compound
formula
Prior art date
Application number
HU0001125A
Other languages
English (en)
Inventor
Guy W. Bemis
John E. Cochran
John Patrick Duffy
Vincent P. Galullo
Edmund Martin Harrington
Mark A. Murcko
Francesco Gerald Salituro
Michael Su
Keith P. Wilson
Original Assignee
Vertex Pharmaceuticals Incorporated
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US08/822,373 external-priority patent/US5945418A/en
Application filed by Vertex Pharmaceuticals Incorporated filed Critical Vertex Pharmaceuticals Incorporated
Publication of HUP0001125A2 publication Critical patent/HUP0001125A2/hu
Publication of HUP0001125A3 publication Critical patent/HUP0001125A3/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/70—Sulfur atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P23/00—Anaesthetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/54—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/56—Amides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/75—Amino or imino radicals, acylated by carboxylic or carbonic acids, or by sulfur or nitrogen analogues thereof, e.g. carbamates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D237/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings
    • C07D237/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D237/06—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D237/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D237/18—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/12—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/14—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D241/20—Nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Anesthesiology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Abstract

A találmány a sejtproliferációban, a sejthalálban és azextracelluláris stimulusokra adott válaszreakcióban szerepet játszóp38 emlős protein kináz (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig) és(Ih) általános képletű inhibitoraira - amelyek képletében Q1, Q2 és Q3 aromás karbocikusos vagy heterociklusos csoport; ahol Q1és Q3 1-4-szeresen szubsztituált; és Q2 adott esetben legfeljebbnégyszeresen szubsztituált; R' hidrogénatom, vagy adott esetben szubsztituált alkil-, alkenil-,alkinil- vagy fenilcsoport; X tio-,oxi-, szulfonil-,szulfinil-,-S(O)2-N(R2)-, -N(R2) -S(O)2-, -N(R2)-C(O)O-,-O-C(O)-N(R2)-, karbonil-, -C(O)O-,-O-C(O) -, -C(O)-N(R2)-, -N(R2)-C(O)-, -N(R2)-, -C(R2)2 vagy -C(OR2)2- csoport; R hidrogénatom,-R2,-N(R2)2,-OR2, -SR2, -C(O)-N(R2)2, -S(O)2-N(R2)2vagy -C(O)-OR2 csoport, ahol két szomszédos R adott esetben egymássalés az Y szubsztituensekkel karbociklusos vagy heterociklusos gyűrűtképez; R2 hidrogénatom, vagy adott esetben szubsztituált alkil- vagyalkenilcsoport; Y nitrogénatom vagy szénatom; A - ha jelen van - nitrogénatom vagy=C(R')- csoport; n értéke 0 vagy l; R1 hidrogénatom, alkil-, hidroxi- vagy alkoxicsoport; R4 adott esetben alkil-, karbociklus vagy heterociklusos csoport; és R5 hidrogénatom, -C(R')2OH, -C(O)R4, -C(O)OR4 -C(R3)2OPO3H2 vagy -PO3H2 képletű csoport - vonatkozik. A találmány kiterjed a találmányszerinti inhibitorokat tartalmazó gyógyszerkészítményekre is. Ó

Description

S.B.G. & κ.
Nemzetközi w Szabada-'mi Iroda T P62 Budapest, Andrássy út 113 Telefon: 34-24.050,¾.^ „ , , . 68,.195/BE
KÖZZÉTÉTELI PÉLDÁNY 1··.. < 7 L • ·· · · · ·
nitrogéntartalmú hoterocikluooa <~p3B—protein -kin^z Inhibitorai
A találmány a sejtproliferációban, a sejthalálban és az extracelluláris stimulusokra adott válaszreakcióban szerepet játszó p38 emlős protein kináz inhibitoraira vonatkozik. A találmány kiterjed az inhibitorok előállítási eljárásaira, valamint a találmány szerinti inhibitorokat tartalmazó gyógyszerkészítményekre és a gyógyszerkészítmények különféle rendellenességek kezelésére és megelőzésére történő felhasználására is.
Az extracelluláris szignálokra adott különféle celluláris válaszreakciókban protein kinázok is szerepet játszanak. A közelmúltban ismerték fel a mitogén-aktivált protein kinázoknak (MAPK) egy olyan családját, amelynek tagjai a szubsztrátjaikat foszforiláció révén aktiváló Ser/Thr kinázok [B. Stein et al., Ann. Rep. Med. Chem., 21' 289-298 (1996) ] . Magukat a MAPK-kat különféle szignálok, köztük növekedési faktorok, citokinek, UV-sugárzás és stressz-indukáló szerek aktiválják.
Az egyik különösen fontos MAPK a p38 protein kináz. A citokin szuppressszív gyulladásellenes hatóanyagkötő proteinként (CSBP) és RK-ként is ismert p38-at CD14 lipopoliszacharid (LPS) receptorral transzfektált és LPS-sel indukált rágcsáló (murine) pre-B sejtekből izolálták. A p38-at kódoló cDNS birtokában azóta emberekben és egérben is izolálták és szekventálták a p38-at. A p38 aktivációját figyelték meg stresszek által stimulált, például lipopoliszacharidokkal (LPS), UV-vel, anizomicinnel vagy ozmotikus sokkal kezelt, illetve citokinekkel, például IL-l-gyel és tumor nekrózis faktorral (TNF) stimulált sejtekben.
A p38 kináz gátlása az IL-1 és a TNF termelés blokkolását eredményezi. Az IL-1 és a TNF egyéb proinflammatiós citokinek, például az IL-6 és az IL-8 termelését stimulálja és szerepet játszik akut és krónikus gyulladásos betegségekben, valamint a postmenopausalis osteoporosisban [R. B. Kimble et al., Endocrinol ., 136, 3054-3061 (1995)].
Ennek a felismerésnek az alapján úgy véljük, hogy a p38 — más MAPK-kal együtt — szerepet játszik különféle gyulladásos stimulusokra, például leukocita akkumulációra, makrofág/monocita aktivációra, szövetreszorpcióra, lázra, akut fázisú válaszreakciókra és neutrofillára adott celluláris válaszreakciók közvetítésében. Ezenkívül a MAPK-k, köztük a p38, szerepet játszanak a rákban, a trombin-indukált vérlemezke-aggregációban, az immunhiányos rendellenességekben, az autoimmun betegségekben, a sejthalálban, az allergiákban, az osteoporosisban és a neurodegeneratív rendellenességekben is. A prosztaglandin endoperoxid szintetáz-2 indukció gátlásán keresztül a p38 inhibitorai a fájdalom szabályozásának területén is hatást fejtenek ki. A WO 96/21654. számon közzétett nemzetközi szabadalmi bejelentésben az IL-1, az IL-6, az IL-8 vagy a TNF túlzott termelésével kapcsolatos további betegségeket ismertetnek.
A korábbiakban már történtek kísérletek olyan hatóanyagok kifejlesztésére, amelyek a MAPK-kat specifikusan gátolják. Például a WO 95/31451. számon közzétett nemzetközi szabadalmi bejelentésben olyan pirazolvegyületeket ismertetnek, amelyek gátolják a MAPK-kat, különösen a p38-at. Azonban ezeknek az inhibitoroknak
68.195/BE az in vivo hatékonyságát még mindig csak vizsgálják.
A fentiek ismeretében érthető, hogy jelentős igény van további, a p38 aktivációjával kapcsolatos különféle állapotok kezelésére felhasználható, hatásos, p38-specifikus inhibitorok kifejlesztése iránt.
A jelen találmány a p38 erős és specifikus gátlását biztosító vegyületek révén megoldást nyújt a fenti problémára.
Az ilyen vegyületek az (la) és (Ib) általános képlettel írhatók le, ahol a képletekben Qi és Q2 mindegyikének jelentése egymástól függetlenül 5-6 tagú aromás karbocikusos vagy heterociklusos csoport, vagy 8-10 tagú, aromás karbociklusos gyűrűket, aromás heterociklusos gyűrűket vagy egy aromás karbociklusos gyűrűből és egy aromás heterociklusos gyűrűből álló kombinációt tartalmazó biciklusos csoport.
A Qi szubsztituenst alkotó gyűrűk a következők közül egymástól függetlenül kiválasztott 1-4 csoporttal és/vagy atommal szubsztituáltak: halogénatom; 1-3 szénatomos alkilcsoport, amely adott esetben -NR' 2, -OR' , -C02R' vagy -CONR' 2 általános képletű csoporttal szubsztituált; 1-3 szénatomos alkoxicsoport, amely adott esetben -NR' 2, -OR' , -CO2R' vagy -CONR' 2 általános képletű csoporttal szubsztituált; -NR' 2 általános képletű csoport; trifluor-metoxi-; trifluor-metil-; nitrocsoport; ~CO2R' ; -CONR' 2; -SR' ; -S(O)2N(R' )2 általános képletű csoport; (trifluor-metil). . . 4 4
-tio-; cianocsoport; -N(R')C(O)R; -N (R' ) C (0) OR ;
4 4 4 4 4
-N (R' ) C (0) C (0) R ; -N (R' ) S (O) 2R ; -N(R')R; -N(R)2; -OR; -0C(0)R általános képletű csoport; -ΟΡ(Ο)2Η2 képletű csoport; vagy -N=C-N(R' )2 általános képletű csoport.
68.195/BE
A Q2 szubsztituenst alkotó gyűrűk a következők közül egymástól függetlenül kiválasztott egy vagy több csoporttal és/vagy atommal adott esetben legfeljebb négyszeresen szubsztituáltak: halogénatom; 1-3 szénatomos, egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, amely adott esetben -NR' 2, -OR' , -CO2R' , -S(O)2N(R' )2, -N=C-N (R' ) 2> -R vagy -CONR' 2 általános képletű csoporttal szubsztituált; 1-3 szénatomos alkoxicsoport, amely adott esetben -NR' 2, -OR', -CO2R' , -S (0) 2N (R' ) 2, -N=C-N(R')2, -R* vagy -CONR' 2 általános képletű csoporttal szubsztituált; -NR' 2 általános képletű csoport; trifluor-metoxi-; trifluor-metil-; nitrocsoport;
3 3 3 3 3
-CO2R' ; -CONR' 2; “R ; -OR ; -NHR ; -N(R ) 2; -SR ; -C(O)R ; 3 3
-C(O)N(R')R; -C(O)OR ; -SR' ; -S(O)2N(R')2 általános képletű csoport; (trifluor-metil)-tio-csoport; -N=C-N(R')2 általános képletű csoport; vagy cianocsoport.
R' jelentése hidrogénatom, 1-3 szénatomos alkilcsoport, 2-3 szénatomos alkenil- vagy alkinilcsoport, fenilcsoport, amely adott esetben a következők közül egymástól függetlenül kiválasztott 1-3 atommal és/vagy csoporttal szubsztituált: halogénatom, metoxi-, ciano-, nitro-, amino-, hidroxi-, metil- és/vagy etilcsoport .
R jelentése 5-6 tagú aromás karbociklusos vagy heterociklusos csoport.
R jelentese adott esetben -N (R' )2, -OR' , -CO2R' , -CON (R' )2 2 vagy -S02N (R )2 általános képletű csoporttal szubsztituált 1-4 szénatomos alkilcsoport; vagy adott esetben -N (R' )2, -OR' , 2
-C02R , -CON (R' )2 vagy -S02N(R )2 általános képletű csoporttal szubsztituált, 5-6 tagú karbociklus vagy heterociklusos csoport.
68.195/BE
X jelentése tio-, oxi-, szulfonil-, szulfinilcsoport, -S(O)2~ 222 2
-N(R )-, -N (R ) - S (0) 2-, -N(R )-C(0)0~, -0-C(0)-N(R )- általános képletű csoport, karbonilcsoport, -C(0)0~, -0-C(0)- képletű csoport, -C (0) -N (R2)-, -N (R2)-C (0)-, -N(R2)-, -C (R2) 2~ vagy -C(OR2)2általános képletű csoport.
R mindegyikének jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, „2222 2 2
-R , -N(R )2, ~0R , -SR , -C(O)-N(R )2, -S(O)2-N(R )2 vagy -C(0)-OR' általános képletű csoport, ahol két szomszédos R szubsztituens adott esetben egymáshoz kapcsolódik, és azokkal az Y szubsztituensekkel együtt, amelyekhez kötődnek, 4-8 tagú karbociklusos vagy heterociklusos gyűrűt képeznek.
R jelentése hidrogénatom, 1-3 szénatomos alkilcsoport vagy 2-3 szénatomos alkenilcsoport, amelyek mindegyike adott esetben -N(R')2, -OR' , -SR' , -C(O)-N(R' )2, -S (0) 2-N (R' ) 2, -C(O)-OR' vagy 3
-R általános képletű csoporttal szubsztituált.
Y jelentése nitrogénatom vagy szénatom.
A jelentése, ha jelen van, nitrogénatom vagy =C(R')- általános képletű csoport.
n értéke 0 vagy 1.
Rí jelentése hidrogénatom, 1-3 szénatomos alkilcsoport, hidroxicsoport vagy 1-3 szénatomos alkoxicsoport.
A találmány tárgyát képezik továbbá a találmány szerinti p38 inhibitorokat tartalmazó gyógyszerkészítmények. A kompozíciók különféle rendellenességek, például rák, gyulladásos betegségek, autoimmun betegségek, destruktív csontrendellenességek, proliferativ rendellenességek, fertőzéses betegségek, vírusos betegségek és neurodegeneratív betegségek kezelésére vagy megelőzésére
68.195/BE
szolgáló eljárásokban hasznosíthatók. A készítmények ezenkívül felhasználhatók a sejthalál vagy a hyperplasia megelőzésére szolgáló eljárásokban, illetve a stroke, szívroham és szervi hypoxia esetén fellépő reperfusio/ischaemia kezelésére vagy megelőzésére is. A trombin-indukált vérlemezke-aggregáció megelőzésére szolgáló eljárásokban is alkalmazhatók a találmány szerinti gyógyszerkészítmények. Az előbbiekben említett eljárások mindegyike ugyancsak a találmány tárgyát képezi.
A találmány elsődlegesen tehát (la) vagy (Ib) általános képletű p38 inhibitorokra vonatkozik, amelyek képleteiben Q|. és Q2 mindegyikének jelentése egymástól függetlenül 5-6 tagú aromás karbocikusos vagy heterociklusos csoport, vagy 8-10 tagú, aromás karbociklusos gyűrűket, aromás heterociklusos gyűrűket vagy egy aromás karbociklusos gyűrűből és egy aromás heterociklusos gyűrűből álló kombinációt tartalmazó biciklusos csoport.
A Qi szubsztituenst alkotó gyűrűk a következők közül egymástól függetlenül kiválasztott 1-4 csoporttal és/vagy atommal szubsztituáltak: halogénatom,· 1-3 szénatomos alkilcsoport, amely adott esetben -NR' 2, -OR' , -CO2R' vagy -CONR' 2 általános képletü csoporttal szubsztituált; 1-3 szénatomos alkoxicsoport, amely adott esetben -NR' 2, -OR' > -CO2R' vagy -CONR' 2 általános képletü csoporttal szubsztituált; -NR' 2 általános képletü csoport; trifluor-metoxi-; trifluor-metil-; nitrocsoport; -CO2R' ; -CONR' 2; -SR' ; -S(O)2N(R')2 általános képletü csoport; (trifluor-metil)-tio-; cianocsoport; -N (R' )C(O)R4; -N (R' )C(O)OR ;
4 4 4 4 4
-N (R ) C (0) C (0) R ; -N (R' ) S (0 ) 2R ; -N(R')R; -N(R)2; -OR; -OC(O)R általános képletü csoport; -OP(O)3H2 képletü csoport; vagy -N=C68.195/BE
-N(R' )2 általános képletű csoport.
A Q2 szubsztituenst alkotó gyűrűk a következők közül egymástól függetlenül kiválasztott egy vagy több csoporttal és/vagy atommal adott esetben legfeljebb négyszeresen szubsztituáltak: halogénatom; 1-3 szénatomos, egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, amely adott esetben -NR' 2, “OR' , -CO2R' , -S(O)2N(R' )2, 3
-N=C-N (R' )2, -R vagy -CONR'2 általános képletű csoporttal szubsztituált; 1-3 szénatomos alkoxicsoport, amely adott esetben -NR' 2, -OR', -CO2R' , -S (0) 2N (R' ) 2, -N=C-N(R')2, -R3 vagy -CONR' 2 általános képletű csoporttal szubsztituált; -NR'2 általános képletű csoport; trifluor-metoxi-; trifluor-metil-; nitrocsoport; -CO2R' ; -CONR' 2; -R3; -OR3; -NHR3; -N(R3)2; -SR3; -C(O)R3;
3
-C(O)N(R')R; -C(O)OR ; -SR' ; -S(O)2N(R')2 általános képletű csoport; (trifluor-metil)-tio-csoport; -N=C-N(R')2 általános képletű csoport; vagy cianocsoport.
R' jelentése hidrogénatom, 1-3 szénatomos alkilcsoport, 2-3 szénatomos alkenil- vagy alkinilcsoport, fenilcsoport, amely adott esetben a következők közül egymástól függetlenül kiválasztott 1-3 atommal és/vagy csoporttal szubsztituált: halogénatom, metoxi-, ciano-, nitro-, amino-, hidroxi-, metil- és/vagy etilcsoport .
R jelentése 5-6 tagú aromás karbociklusos vagy heterociklusos csoport.
R jelentése adott esetben -N (R' ) 2, -OR' , -CO2R' , -CON(R )2 2 vagy -SO2N(R )2 általános képletű csoporttal szubsztituált 1-4 szénatomos alkilcsoport; vagy adott esetben -N(R' )2< -OR' , 2
-CO2R' , -CON(R' )2 vagy -SO2N (R ) 2 általános képletű csoporttal
68.195/BE szubsztituált, 5-6 tagú karbociklus vagy heterociklusos csoport.
X jelentése tio~, oxi-, szulfonil-, szulfinilcsoport, -S(0)2~ 2 2 22
-N(R )-, -N (R )-S (0) 2-, -N (R )-C (0)0-, -0-C (0)-N (R ) - általános képletű csoport, karbonilcsoport, -0(0)0-, -0-C(0)- képletű cso2 2 2 22 port, -C(O)-N(R )-, -N(R )-0(0)-, -N(R )-, -C(R ) 2~ vagy -C (OR ) 2általános képletű csoport.
R mindegyikének jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 2 2 2 2 22
-R , -N(Rj2, -SR·, -C(O)-N(R )2, -S (0) 2~N (R') 2 vagy -C(O)2
-OR általános kepletú csoport, ahol két szomszédos R szubsztituens adott esetben egymáshoz kapcsolódik, és azokkal az Y szubsztituensekkel együtt, amelyekhez kötődnek, 4-8 tagú karbocikiusos vagy heterociklusos gyűrűt képeznek.
Amennyiben a két R komponens azokkal az Y komponensekkel együtt, amelyekhez kötődnek, gyűrűt képeznek, az ezen a területen jártas szakember számára nyilvánvaló, hogy mindkét kapcsolódás előtti R komponensből egy láncvégi hidrogénatom elveszik. Például ha egy gyűrűs struktúra két olyan R komponens összekapcsolódásával alakul ki, amelyek egyike -NH-CH3 képletű csoport, a másik pedig -CH2-CH3 képletű csoport, mindkét R komponensnek egy-egy terminális (félkövér szedéssel jelzett) hidrogénatomja elveszik. A gyűrűszerkezet így kialakult része tehát egy -NH-CH2-CH2-CH2- képletű csoportnak felel majd meg.
R jelentese hidrogénatom, 1-3 szenatomos alkilcsoport vagy 2-3 szénatomos alkenilcsoport, amelyek mindegyike adott esetben -N(R')2, -OR' , -SR' , -C (0)-N(R' ) 2, -S (0) 2-N(R' ) 2, -C(0)~0R' vagy 3
-R altalános kepletú csoporttal szubsztituált.
Y jelentése nitrogénatom vagy szénatom.
68.195/BE r
A jelentése, ha jelen van, nitrogénatom vagy =C(R' )- általános képletű csoport.
n értéke 0 vagy 1.
Rí jelentése hidrogénatom, 1-3 szénatomos alkilcsoport, hidroxicsoport vagy 1-3 szénatomos alkoxicsoport. Az ezen a területen jártas szakember számára nyilvánvaló, hogy ha R; jelentése hidroxicsoport, a képződő inhibitor (la' ) vagy (Ib' ) általános képletű vegyületté tautomerizálódhat. Az (la' ) vagy (Ib' ) általános képletű vegyületek ugyancsak a találmány szerinti p38 inhibitorok körébe tartoznak.
Az egyik előnyös megoldás értelmében Qx jelentése 1-3-szorosan szubsztituált fenil- vagy piridilcsoport, ahol a szubsztituensek legalább egyike orto-helyzetű, és ahol a szubsztituensek egymástól függetlenül a következő atomok és/vagy csoportok közül kerülnek kiválasztásra: klór-, fluor-, brómatom, metil-, metoxi —, hidroxi-, trifluor-metil-, trifluor-metoxi-, propoxi-, aminő-, 3,4-(metilén-dioxi)-, dimetil-amino-, (fenil-szulfonil)-amino-, {[(4-piridil)-metoxi]-karbonil}-amino-, (morfolinil-acetil)-amino-, [(dimetil-amino)-acetil]-amino-, (piperazinil-acetil)-amino-, (pirrolidinil-acetil)-amino-, (morfolinil-oxalil)-amino-, (piperazinil-oxalil)-amino-, (pirrolidinil-oxalil)-amino-, (dimetil-amino)-acetoxi- vagy 2-(dimetil-amino)-etoxi-csoport. Még előnyösebbek az olyan fenil- és piridilcsoportok, amelyek a fentiekben jelzett szubsztituensek közül legalább kettő, orto-helyzetű szubsztituenst hordoznak.
Előnyösen Qx jelentése például
68.L95/BE
nh2 oh
68.195/BE
68.195/BE
képletű csoport.
Legelőnyösebben Qx jelentése 2-fluor-6-(trifluor-metil)-fe nil-, 2,6-difluor-fenil-, 2,6-diklór-fenil~, 2-klór-4-hidroxi-fenil-, 2-klór-4-amino-fenil-, 2,6-diklór-4-amino-fenil-, 2,6-diklór-3-amino-fenil-, 2,6-dimetil-4-hidroxi-fenil~, 2-metoxi3,5-diklór-4-piridil-, 2-klór-4,5-(metilén-dioxi)-fenil- vagy 2-klór-4-[(morfolino-acetil)-amino]-fenil-csoport.
Az egyik előnyös megoldás értelmében Q2 jelentése adott esetben 1-3-szorosan szubsztituált fenil- vagy piridilcsoport, ahol a szubsztituensek egymástól függetlenül a következő atomok és/vagy csoportok közül kerülnek kiválasztásra: klór-, fluor-,
68.195/3E brómatom, metil-, etil-, izopropil-, metoxi-, hidroxi-, amino-, trifluor-metil-, trifluor-metoxi-, metil-tio-, karboxi-, metoxi-karbonil-, amino-metil-, dimetil-amino-, pirrolidinil-metil- és hidroxi-metil-csoport.
Előnyösen Q2 jelentése például
68. 195/BE
68. 195/BE
képletű csoport, szubsztituálatlan 2-piridilcsoport vagy szubsztituálatlan fenilcsoport.
Legelőnyösebben Q2 jelentése fenii-, 2-izopropil-fenil-, 3,4-dimetil-fenil-, 2-etil-fenil-, 3-fluor-fenil-, 2-metil-fenil-, 3-klór-4-fluor-fenil-, 3-klór-fenil-, 2-(metoxi-karbonil)-fenii-, 2-karboxi-fenil-, 2-metil-4-klór-fenil-, 2-bróm-fenil-, 2-piridil-, 2-(hidroxi-metil)-fenii-, 4-fluor-fenil-, 2-metil-4-fluor-fenil-, 2-klór-4-fluor-fenil-, 2,4-difluor-fenil·-, 2-hid68.195/BE ΐβ :, ···:’· • »·* *** * 4 roxi-4-fluor-fenil- vagy 2-(hidroxi-metil)-4-fluor-fenil-csoport.
Egy másik előnyös megoldás értelmében X jelentése tio-, oxi-, szulfonil-, szulfinilcsoport, -N(R)-, -C (R)2~ általános képletű csoport vagy karbonilcsoport. Legelőnyösebben X jelentése tiocsoport.
Egy további előnyös megoldás szerint n értéke 1, és A jelentése nitrogénatom.
Egy ismét további előnyös megoldás értelmében Y mindegyikének jelentése szénatom.
Egy még előnyösebb találmány szerinti megoldás szerint Y mindegyikének jelentése szénatom, és az Y komponensekhez kapcsolódó R jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport.
A találmány szerinti inhibitorok néhány egyedi példáját az alábbi táblázatban mutatjuk be.
68.195/BE
If
1. táblázat (la) és (Ib) általános képletű vegyületek
68.195/BE
1. táblázat (folytatás)
Vegy. száma Szerkezet Vegy. száma Szerkezet
11. o cW )—' o / X in 12. N S P
13. CH3 N S 14. / \ x W—A z)—u Ő / \ / r—y y—Z \_/ \ /) '--( 7Z“Z ö σ
15. X o cn—^ ö ΛΧ ö ° 16. η<^οι Cl
17 . u. f / \ / r —z '^“x \—z u. oz 18. N<s^N. JL5- J — N S HjC^^CH,
68.195/BE > J Sí
1. táblázat (folytatás)
Vegy. száma Szerkezet Vegy. száma Szerkezet
19. n I <J / \ r ω—G η— o ö pí fi—V- fi—Z ff— ö ° 20. o 2“x /=\ // \ / \ Z—fi -fi Q O> ;--O \ / I
21. ϋ ' u CHÍ '—( λ—z ö ° 22. ο Ti (Tb / \ / zw )----' ή -n ω
23. ci^^S^^ci 24. N ? F
25. o -. {>b V V θ-·/ 26. ,hL J* 1 CH,
68,195/BE
1. táblázat (folytatás)
68.195/BE
1. táblázat (folytatás)
Vegy. száma Szerkezet Vegy. száma Szerkezet
35. N S F 36. u. η V) - o/O ő x \ / \ / o >—< y—z ) '--- \— z o
37. N.X -N^ JJ N s 38. u. ö ö M / \ / ΤΓλ /,— z Q-t> ö °
39. IL ω .-A fS LO<> X=< N— Z ö ° 40. ω ω——u. ö <HZ d5~v^~5 /—z ö °
41. O Q <í^ v# cn Ο-/Ά-Ο “ \ / I \—·ι / w TI 42. N<x JJ -----
68.195/BE
1. táblázat (folytatás)
6Θ.195/BE
V
1. táblázat (folytatás)
A találmány kiterjed a p38 protein kináz fentiekben ismertetett (la) általános képletű inhibitorainak az előállítási eljárásaira is. Az eljárások során egy (II) általános képletű vegyületet — amelynek képletében valamennyi változó jelentése azonos a találmány szerinti inhibitoroknál meghatározottakkal — egy (Ha) általános képletű kilépőcsoport-reagenssel· — amelyben R' jelentése a fentiekben meghatározott, Li, L2 és L3 jelentése egymástól függetlenül kilépőcsoport — vagy egy (Ilb) általános képletű kilépőcsoport-reagenssel — amelyben L2 és L2 jelentése a fentiekben meghatározott — reagálhatunk.
A reakcióban alkalmazott kilépőcsoport-reagenst önmagában vagy egy társoldószerrel, például toluollal, feleslegben adjuk a
68.195/BE reakciókeverékhez. A reakciót 25 °C és 150 °C közötti hőmérséklet-tartományban hajtjuk végre.
A találmány szerinti p38 inhibitorok előállításában felhasználható (Ha) általános képletü kilépőcsoport-reagensek körébe tartoznak — egyebek mellett — például a következő vegyületek: N, W-dimetil-formamid-dimetil-acetál, trimeti1-ortoformíát, N, N-dimetil-formamid-dietil-acetál és más hasonló reagensek. A találmány szerinti inhibitorok előállítására alkalmazott (Ha) általános képletü kilépőcsoport-reagens előnyösen N, AZ-dimeti 1-formamid-dimetil-acetál.
A találmány szerinti p38 inhibitorok előállításában felhasználható (Ilb) általános képletü kilépőcsoport-reagensek körébe tartoznak — egyebek mellett — például a következő vegyületek: foszgén, 1,1'-karbonil-diimidazol, dietil-karbonát és trifoszgén.
A találmány szerinti vegyületek még előnyösebb előállítási eljárásai során olyan (II) általános képletü vegyületeket alkalmazunk, amelyekben valamennyi változó jelentése a fentiekben meghatározott még előnyösebb és legelőnyösebb találmány szerinti vegyületek esetén megadott változók jelentésével azonos.
Mivel az Rí forrása a kilépőcsoport-reagens (C-R' vagy C=O) , Rí jelentése természetesen a reagens szerkezetétől függ. Emiatt azokban a vegyületekben, amelyekben R^ jelentése hidroxicsoport, az alkalmazott reagensnek (Ilb) általános képletü vegyületnek kell lennie. Hasonlóan, ha Rí jelentése hidrogénatom vagy 1-3 szénatomos alkilcsoport, kilépőcsoport-reagensként (Ha) általános képletü vegyületet kell alkalmazni. Azoknak az inhibitorok
68.195/BE nak az előállításához, amelyekben Rx jelentése 1-3 szénatomos alkoxicsoport, először előállítunk egy olyan vegyületet, amelyben Rx jelentése hidroxicsoport, majd ezt követően a hidroxicsoportot standard módszerekkel alkilezzük, például úgy, hogy a hidroxicsoportot N, N-dimetil-formamidban előbb nátrium-hidriddel, majd metil-jodiddal vagy etil-jodiddal reagáltatjuk.
A találmány szerinti (la) általános képletű vegyületek közvetlen prekurzorait [azaz a (II) általános képletű vegyületeket] az alábbi reakcióvázlatokon látható szintézisekkel állíthatjuk elő.
Az [A] reakcióvázlat szerinti 1. és 2. lépés felcserélhető. A kiindulási nitril is helyettesíthető egy megfelelő savval vagy észterrel. A nitril helyett egy másik megoldás értelmében egyéb, jól ismert látens karboxil- vagy karboxamid-származékokat is alkalmazhatunk {lásd a [B] reakcióvázlatot}. A szakterületen jól ismert védőcsoport-lehasitási és funkcionalizálási eljárások alkalmazásával különféle karbonsavakat, karboxil-észtereket, oxazolinokat vagy oxazolidinonokat is beépíthetünk a reakcióvázlatba .
Az [A] reakcióvázlat {és az alábbi [B] reakcióvázlat} 1. lépésében alkalmazott bázis például nátrium-hidrid, nátrium-amid, lítium-diizopropil-amid (LDA), lítium-(hexametil-diszilazid) vagy más olyan, nem-nukleofil bázis lehet, amely deprotonálja a nitrilhez viszonyított a-pozíciót.
A HX-Q2 általános képletű vegyületnek a reakcióvázlat szerinti egyetlen lépésben történő hozzáadását két lépésben is megvalósíthatjuk, amelynek során először egy védett vagy nem védett X
63.195/BE
4.
származékot, majd a következő lépésben egy Q2 származékot adunk a reakciókeverékhez.
A [B] reakcióvázlatban Z jelentése karboxicsoport, -COOR' , -CON(R' )2 általános képletű csoport, oxazolinil-, oxo-oxazolidinil- vagy cianocsoport. R' jelentése a fentiekben meghatározott.
Egy további találmány szerinti megoldás az (Ib) általános képletű p38 inhibitorok előállítási eljárásaira vonatkozik. Az eljárások során egy (III) általános képletű vegyületet — amelynek képletében valamennyi változó jelentése azonos a találmány szerinti inhibitoroknál meghatározottakkal — egy fentiekben meghatározott (Ha) vagy (Ilb) általános képletű kilépőcsoportreagenssel reagáltatunk.
Az alábbiakban bemutatjuk az (Ib) általános képletű p38 inhibitorok két teljes szintézisének a reakcióvázlatait.
A [C] reakcióvázlat szerint egy Qi-szubsztituált származékot az álcázott amidcsoportnak megfelelő Z csoporthoz viszonyított α-pozíció deprotonálásához bázissal, például nátrium-hidriddel, nátrium-amiddal, litium-diizopropil-amiddal (LDA), lítium-(hexametil-diszilazid)-dal vagy más nem-nukleofil bázissal reagáltatunk. Egy másik megoldás értelmében Z egy karbonsavat, karboxil-észtert, oxazolin vagy oxazolidinont jelent. A deprotonálás eredményeként nyert aniont ezt követően egy palládiumkatalizátor jelenlétében egy nitrogént hordozó, két kilépőcsoportot vagy látens kilépőcsoportot tartalmazó heterociklusos vegyülettel reagáltatjuk. Ilyen vegyület például a 2,6-diklór-piridin.
A 2. lépésben a Q2 gyűrűs csoportot építjük be. Ezt a műveletet számos, a szakterületen jól ismert reakció alkalmazásával
68.195/BE végrehajthatjuk, amelynek eredményeként biaril-vegyületeket nyerünk. Az egyik ilyen eljárás szerint az 1. lépésben előállított piridin-intermediert egy aril-litium-vegyülettel reagáltatjuk. Egy másik megoldás értelmében a piridin-intermedier aril-halogenid részét palládium(0)-katalizátor jelenlétében fémorganikus arilvegyülettel, például aril-sztannánnal vagy aril-boronsavval reagáltatjuk.
A 3. lépésben az amidvegyület kialakításához a 2 csoportból lehasítjuk a védőcsoportot és/vagy a Z csoportot funkcionalizáljuk. Amennyiben Z egy karbonsavból, karboxil-észterből, oxazolinonból vagy oxazolidinonból származó csoportot jelent, az amid kialakításához különféle, a szakterületen jól ismert védőcsoport-lehasitási és funkcionalizációs eljárásokat alkalmazhatunk. Végül a 4. lépésben a végtermék kialakításához az amidvegyületet ciklizáljuk, amelynek során önmagukban vagy egy szerves oldószerben olyan reagenseket használhatunk, amilyen például egy N,N-dimetil-formamid-acetál vagy más ehhez hasonló vegyületek.
Hasonló a 4. reakcióvázlat is, azzal az eltéréssel, hogy először egy biaril-intermediert állítunk elő a Qi kiindulási vegyüiettel végzett reakció előtt.
A találmány további tárgyát képezik az olyan p38 inhibitorok, amelyek hasonlóak a fenti (la) és (Ib) általános képletű vegyületekhez, amelyekben azonban a Qi szubsztituenst hordozó gyűrűben a C=N kötés redukált formában van. Ezeket az inhibitorokat az (Ic) és (Id) általános képletek mutatják be, amelyekben A, Qi, Q2, R, R' , X és Y jelentése, valamint n értéke azonos az (la) és (IB) általános képletű vegyületeknél meghatározottakkal. A defies. 195/SE niciók kiterjednek a változók valamennyi esetére (azaz a alapjelentésekre, valamint az előnyös, a még előnyösebb és a legelőnyösebb jelentésekre). R5 jelentése hidrogénatom, -C(R')2OH, -C(O)R , -C(O)OR , -C (R' ) 2OPO3H2 általános képletű csoport, -PO3H2 képletű csoport és az utóbbi sói.
Amennyiben R jelentése hidrogénatomtól eltérő, az így kapott vegyületek feltehetően prodrog (elővegyület) formák, amelyeknek in vivo kell hasadniuk ahhoz, hogy olyan vegyuleteket nyerjünk, 5 amelyekben R jelentése hidrogénatom.
Az egyik előnyös megoldás értelmében az (Ic) általános képletű vegyületekben A jelentése előnyösen nitrogénatóm, n értéke előnyösen 1, és X jelentése előnyösen tiocsoport (-S-) . Az (Ic) vagy az (Id) általános képletű vegyületekben Qt és Q2 jelentése előnyösen ugyanaz, mint az (la) és (Ib) általános képletű vegyületekben lévő változóknál megadott azonos csoportok jelentése.
Az (Ic) és (Id) általános képletű vegyuleteket közvetlenül előállíthatjuk az olyan (la) vagy (Ib) általános képletű vegyületek redukciójával, amelyek az R2 helyzetben hidrogénatomot, 1-3 szénatomos alkilcsoportot vagy 2-3 szénatomos alkenil-, illetve alkinilcsoportot tartalmaznak (azaz amelyekben Ri = R' ) .
(la) (le)
68.195/BE
Az (la) vagy (Ib) általános képletű vegyületeket diizobutil-aluminium-hidrid vagy ezzel ekvivalens reagens feleslegével reagáltatva alakíthatjuk át a gyűrűben redukált formájú — az előbbi sorrendnek megfelelően — (le) vagy (Id) általános képletű vegyületekké.
Egy hidrogénatomtól eltérő jelentésű R° komponenst úgy alakíthatunk ki a gyűrű nitrogénatomján, hogy a fenti (Ic) vagy (Id) általános képletű vegyületeket egy vagy több megfelelő reagenssel reagáltatjuk. Ilyen típusú módosításokat a példák között ismertetünk részletesen.
A találmány szerinti (Ic) általános képletű inhibitorok néhány egyedi példáját az alábbi táblázatban mutatjuk be.
68.195/BE
2. táblázat (Ic) általános képletű vegyületek
68.195/BE
2. táblázat (folytatás)
68,195/BE
2. táblázat (folytatás)
68.195/BE
2. táblázat (folytatás)
68.195/BE
2. táblázat (folytatás)
68.195/BE
2. táblázat (folytatás)
Az előbbieken kívül a találmány további tárgyát képezik az olyan (Ie), (If), (lg) vagy (Ih) általános képletű p38 inhibitorok is, amelyekben A, Qi, Q2, Ri R' , X és Y jelentése, valamint n értéke azonos az (la) és (IB) általános képletű vegyületeknél meghatározottakkal. A definíciók kiterjednek a változók valamennyi esetére (azaz a alapjelentésekre, valamint az előnyös, a
68.195/BE még előnyösebb és a legelőnyösebb jelentésekre). Még előnyösebben az (le) általános képletű vegyületekben Q2 jelentése szubsztituálatlan fenilcsoport.
Q3 jelentése 5-6 tagú aromás karbocikusos vagy heterociklusos csoport, vagy 8-10 tagú, aromás karbociklusos gyűrűket, aromás heterociklusos gyűrűket vagy egy aromás karbociklusos gyűrűből és egy aromás heterociklusos gyűrűből álló kombinációt tartalmazó biciklusos csoport. A Q3 gyűrűi a következők közül egymástól függetlenül kiválasztott 1-4 csoporttal és/vagy atommal szubsztituáltak: halogénatom; 1-3 szénatomos alkilcsoport, amely adott esetben -NR' 2r -OR' , -CO2R' vagy -CONR' 2 általános képletű csoporttal szubsztituált; 1-3 szénatomos alkoxicsoport, amely adott esetben -NR' 2r “OR' / -CO2R' vagy -CONR' 2 általános képletű csoporttal szubsztituált; -NR' 2 általános képletű csoport; trifluor-metoxi-; trifluor-metil-; nitrocsoport; -CO2R' ; -CONR' 2; -SR' ; -S(O>2N(R' )2 általános képletű csoport; (trifluor-metil) 4 4
-tio-; cianocsoport; -N (R' )C(O)R ; -N(R' )C(O)OR ;
44444
-N (R' ) C (0) C (0) R ; -N (R' ) S (0) 2R ; -N (R' ) R ; -N(R)2; -OR; -0C(0)R általános képletű csoport; -OP(O)3H2 képletű csoport; vagy -N=C-N(R' )2 általános képletű csoport.
Az egyik előnyös megoldás értelmében Q3 2-4-szeresen szubsztituált, ahol a szubsztituensek közül legalább egy orto-helyzetben van a Q3 komponensnek az inhibitor további részéhez kapcsolódó pontjához viszonyítva. Amennyiben Q3 egy biciklusos csoportot jelent, az orto-helyzetű két szubsztituens az inhibitor molekula további részéhez legközelebbi (közvetlenül kapcsolódó) gyűrűn helyezkedik el. Az adott esetben jelen lévő további két szubsz68. 195/BE
tituens a gyűrűk bármelyikén elhelyezkedhet. Még előnyösebben az orto-pozíciók mindegyikében van egy említett szubsztituens.
Egy másik előnyös megoldás szerint Q3 egy monociklusos karbociklusos csoportot jelent, amelyben mindkét orto-pozició egymástól függetlenül halogénatommal vagy metilcsoporttal szubsztituált. Egy további előnyös megoldás értelmében Q3 a következő csoportok közül egymástól függetlenül kiválasztott egy vagy két további szubsztituenst tartalmaz: -NR'2, -OR' , -CO2R' általános 4 4 képletű csoport, cianocsoport, -N(R' )C(O)R , -N(R' )C(O)OR ,
-N (R' ) C (0) C (0) R4, -N(R' )S(O)2r\ -N(R' )R4, -N(R4)2, -OR4, -OC(O)R4 általános képletű csoport, -OP(O)3H2 képletű csoport, vagy -N=C-N(R' )2 általános képletű csoport.
Előnyösen Q3 az alábbi 3. táblázatban felsorolt (le) általános képletű vegyületekben lévő Q3 csoportok, vagy az alábbi 4. táblázatban felsorolt (lg) általános képletű vegyületekben lévő Q3 csoportok közül kerül kiválasztásra.
Az ezen a területen jártas szakember számára nyilvánvaló, hogy az (le) általános képletű vegyületek bizonyos találmány szerinti (la) és (Ic) általános képletű p38 inhibitorok közvetlen prekurzorai (azaz ahol Qi = Q3) . Az ezen a területen jártas szakember számára az is könnyen felismerhető, hogy az (lg) általános képletű vegyületek bizonyos találmány szerinti (Ib) és (Id) általános képletű p38 inhibitorok közvetlen prekurzorai (azaz ahol Qi = Q3) . Ebből következően az (le) általános képletű inhibitorok előállítása leírható a fenti [A] és [B] reakcióvázlattal, ha a Qi szubsztituenseket Q3 komponensekkel helyettesítjük. Ehhez hasonlóan, a Q2 szubsztituenseket Q3 komponensekkel
68.195/BE helyettesítve a [C] és [D] reakcióvázlattal írhatjuk le az (lg) általános képletű inhibitorok szintézisét is.
Az (If) és (Ih) általános képletű inhibitorok előállítását az [EJ és [F] reakcióvázlat mutatja be. Az (Ih) általános képletű vegyületek szintézisét az [F] reakcióvázlat írja le. Például egy kiindulási dibróm-származékot, így 2,6-dibróm-piridint, bázis, például nátrium-hidrid jelenlétében egy aminnal reagáltatva a megfelelő 2-amino-6~bróm-származékot nyerjük. Az utóbbi, intermediert egy palládiumkatalizátor jelenlétében egy fenil-boronsav-analóggal (egy Q2-boronsavval) reagáltatva a megfelelő diszubsztituált származékot állítjuk elő, amit ezt követően a végtermékké acilezhetünk. Az eljárás első két lépésének a sorrendje felcserélhető .
Anélkül, hogy elméleti magyarázatot kívánnánk adni, véleményünk szerint az (le) és (lg) általános képletű inhibitorokban lévő Q3 gyűrű kettős orto-szubsztitúciója, valamint az (If) és (Ih) általános képletű inhibitorokban lévő Qi gyűrűhöz közvetlenül kapcsolódó nitrogénatom jelenléte „kisimítja („flattening) a molekulát, elősegítve ezáltal a p38 hatékony gátlását.
A találmány szerinti (le) általános képletű inhibitorok egyik előnyös példájában A jelentése szénatom, n értéke, X jelentése tiocsoport, Y mindegyikének jelentése szénatom, R mindegyikének jelentése hidrogénatom, Q3 jelentése 2,6-diklór-fenil-csoport, és Q2 jelentése fenilcsoport (201. vegyület). A találmány szerinti (lg) általános képletű inhibitorok egyik előnyös példájában Q3 jelentése 2, 6-diklór-fenil-csoport, Q2 jelentése fenilcsoport, Y mindegyikének jelentése szénatom, és R mindegyikének jelentése
68.195/BE
- 39 - : .- • · * · · « » • *4 · hidrogénatom (202. vegyület). A találmány szerinti (lg) általános képletű inhibitorok további előnyös példáit az alábbi 4. táblázatban soroljuk fel.
A találmány szerinti (Ih) általános képletű inhibitorok előnyös példáit az alábbi 5. táblázatban mutatjuk be. Ugyancsak előnyösek azok az (Ih) általános képletű vegyületek, amelyekben Ql jelentése a 2-es és 6-os helyzetben egymástól függetlenül klór- vagy fluoratommal szubsztituált fenilcsoport; Y mindegyikének jelentése szénatom; R mindegyikének jelentése hidrogénatom; és Ű2 jelentése 2-metil-fenil-, 4-fluor-fenil-, 2,4-difluor-fenil-, 2-(hidroxi-metil)-4-fluor-fenil- vagy 2-metil-4-fluor-fenil-csoport.
Az alábbi táblázatokban bemutatunk néhány egyedi (le), (lg) és (Ih) általános képletű inhibitort.
68.195/BE •j
3. táblázat (Ie) általános képletű inhibitorok
68.195/BE
4. táblázat (lg) általános képletű inhibitorok
Vegy. száma Szerkezet Vegy. száma Szerkezet
202./ 301. ✓^^✓Cl Cl Ás. N 302. ✓s^.CI Cl Ás ✓OH
303. ✓. ✓ Cl ΓΤ χ Cl Ás As. ljLX CHj 304. 0 x” \ / z y=z/ O=/ 2=/ U —ö
305. ✓s ✓ Cl íl II ° Cl Ás 306. ✓d O< x p Ás. 1 Γ
307 . “—VI ff g y=z \=o ,—/ zz / \ I ín/ / o X 308. Xy N JL* ^Ss Á A' Cl h2n -Nk O XO
309. ✓<S^ 0Ι\χ^\, Á^s Á Ás. Cl HjN 310. ✓\^ Cl\^s- ✓Ás. Jí Ás. Cl cr h2n
68.195/BE
68.195/BE
68.195/BE
4. táblázat (folytatás)
68.195/BE
4. táblázat (folytatás)
Vegy. száma Szerkezet Vegy. száma Szerkezet
347. y—s xL^ cí / H.N Cl 348. _vOOO ^.χ^ ·χΛ>. Cl Π HjN 0 0
349. X^^CI Cl^f^ nhj 350. ^ci 1 ll 0 r--\ Cl xk OoC
351. x^ xCI 1 ll 0 Cl XX 1 Γ 1 — 0H 352. x^ xCI ÍV Ϊ ^[^STZX^NH2 Cl CH,
353. x^xci NHJ F xíV L k & 354. x-^ xCI ÍV i Cl xK
68.195/BE
4. táblázat (folytatás)
Vegy. száma Szerkezet
355. ^Cl ΓΤ X Cl N
357. Ή £ λ \ 7“X O AZ /=□ 2 o r^\ x 1 o
359. ^-C1 1 II 0 γ/γ/Μ Cl .xX /N^ .x\ N H:
361. o—4 λ \ /-· \ 5=Ζ /=° /=\ z / \ X (\ /)--O “ >X ff X •η
Vegy. száma Szerkezet
356. ÖC A Cl I I s v~^
358. -A rvH / z / ° r=\ 2. f \ X V--fi 'z ő
360. ^\>-cl NH, OH Cl N. .X /OH 1 |N 1
362. ^-Cl 1 ll 0 OuO
68.195/BE
4. táblázat (folytatás)
68.195/BE
4. táblázat (folytatás)
Vegy. száma Szerkezet Vegy. száma Szerkezet
373. ✓^ ✓& ll |i 0 374. ✓s. ✓Cl ΓΥ fi
Cl ✓A Cl As. FK N x F
||
375. ✓~s ✓ Cl iCX a 376. ^ci CX A
γΑ^ΝΗ, Y^Y^NH,
Cl As. i N 9’ Cl As. Γ ιϊ ✓CH,
377. -Cl CT £ 378. íl 0
ΥγΑ OH
Cl As. ✓CH, I 1 1 ci ✓A r^N r Γ ιϊ 1
379. ✓s. ✓ Cl fOC A 380. ✓Cl CT A
J^yNH. γί!!^χγ^ΝΗ,
Ο ✓A r^ N F L1 AF ci ✓A n
XA OH
381. ✓5^ ✓'CH, 382. ✓Cl ll i' °
γγ^ΝΗ,
CH, Ak Cl ✓A N
01^^ Cl
68.195/BE
4. táblázat (folytatás)
Vegy. száma Szerkezet Vegy. száma Szerkezet
383. ^.ci 0 384 . ^Cl íl °
χ^^Χ^χ ^NH, ^γ5ί5ηρ^ΝΗ,
Cl '|NF Cl N
[ÍJ N'^>J^X^5s;,
385. .Cl 0 386. Χ^ϊΧ01
'SYX^NH, ^Ύ;:::^>|Κν'ΝΗ2
Cl t^'N ci N OH
387. .Cl 1 0 388. rv í
NH, ^fTf^NH,
Cl fí’^N L ΙΪ F Up '^'F Cl .F
F
F F F F
389. .Cl Ί 0 390. ^ci í] qT 0
*NH, q —CH, 7?íí:^xF<'nh,
Cl o·^ ci ^F
68.195/BE
4. táblázat (folytatás)
Vegy. száma Szerkezet Vegy. száma Szerkezet
391. CQ. ΊΓ NH’ Cl Λρ N F—p-F 392. ^ci ex i ci ^zA. N k>^k^YCI Cl
393. Í| Y 0 CH, X.<^a Ja ÖT NH’ i ci Jx I 1 1 XXs·: 394. ^ci íl ίΧ ° ci -íA ^oh I I 1 Aj^Ap
395. ^Cl CX I ητ^ηρ^ΝΗ, Cl Jx 1 iN k^k^^cH, 396. UL 1 \ / z °=/ 2=\ ö y—λ M-ü
397. οΟχ lX a Y|> Cl k^kjx^^ 398. Cl CX A Cl Jx N Cl Líí I. α^ύ
68.195/BE
5. táblázat (Ih) általános képletű inhibitorok
68.195/BE
4. táblázat (folytatás)
68. 195/BE
A találmány szerinti p38 inhibitorok aktivitását in vitro, in vivo vagy egy sejtvonalon vizsgálhatjuk. Az in vitro vizsgálatok során az aktivált p38 kináz aktivitásának vagy ATPáz aktivitásának a gátlását határozzuk meg. További in vitro vizsgálatok során elvégezhetjük az inhibitor p38-hoz történő kötődési képességének mennyiségi meghatározását, amelynek során a kötődés előtt radioizotóppal jelöljük az inhibitort, izoláljuk az inhibitor/p38 komplexet, majd meghatározzuk a kötött radioizotóp mennyiségét, vagy kompottitív kísérletet végzünk, ahol új inhibitorokat ismert radioligandokhoz kötött p38-cal inkubálunk.
A találmány szerinti vegyületek gátló hatásának sejttenyészet-vizsgálataival meghatározhatjuk az inhibitorral kezelt teljes vérben vagy sejtfrakcióiban termelt TNF, IL-1, IL-6 vagy IL-8 mennyiségét, majd az így nyert értékeket összehasonlítjuk a negatív kontroliokkal kezelt sejtek esetén kapott eredményekkel. Az említett citokinek mennyiségét kereskedelmi forgalomban beszerezhető ELISA készletek alkalmazásával határozhatjuk meg.
A találmány szerinti p38 inhibitorok gátló hatásának meghatározására alkalmas in vivo vizsgálatok egyikében ismert módon [J. C. Boehm et al., J. Med. Chem., 39, 3929-3937 (1996)] Mycobacterium butyricum-mai indukált adjuváns arthritisben szenvedő patkányok esetén a hátsó láb ödémájának a szuppresszióját mérjük. A találmány szerinti p38 inhibitorokat az arthritis, a csont reszorpció, az endotoxin sokk és az immun funkció állatmodelljeiben is vizsgálhatjuk [A. M. Badger et al., J. Pharmacol. Experimental Therapeutics, 27 9, 1453-1461 (1996)].
A p38 inhibitorokat vagy gyógyszerészetileg elfogadható sói
68.195/BE kát állatoknak vagy embereknek történő beadásra alkalmas gyógyszerkészítményekké formálhatjuk. A találmány további tárgyát képezik az olyan gyógyszerkészítmények, amelyek egy p38-mediált állapot kezelése vagy megelőzése szempontjából hatásos mennyiségben egy p38 inhibitort, valamint gyógyszerészetileg elfogadható hordozót tartalmaznak.
A jelen leírásban alkalmazott „p38-mediált állapot kifejezés magában foglal minden olyan betegséget vagy más káros állapotot, amelyről ismert, hogy abban a p38 szerepet játszik. Az említett kifejezés kiterjed az olyan állapotokra, amelyekről ismert, hogy azokat az IL-1, a TNF, az IL-6 vagy az IL-8 túlzott képződése okozza. Az ilyen állapotok körébe tartoznak — egyebek mellett — például a következők: gyulladásos betegségek, autoimmun betegségek, destruktív csontrendellenességek, proliferatív rendellenességek, fertőzéses betegségek, neurodegeneratív betegségek, allergiák, stroke esetén előforduló reperfusio/ischaemia, szívrohamok, angiogén rendellenességek, szervi hypoxia, vascularis hyperplasia, kardiális hipertrófia és trombin-indukált vérlemezke-aggregáció. Ebbe a körbe tartoznak ezenkívül a prosztaglandin endoperoxidáz szintetáz-2-vel kapcsolatos állapotok is.
A találmány szerinti vegyületekkel kezelhető vagy megelőzhető gyulladásos betegségek közé tartozik — egyebek mellett — például az akut hasnyálmirigy-gyulladás, a krónikus hasnyálmirigy-gyulladás, az asztma, az allergia, valamint a felnőtt légzőszervi distressz szindróma.
A találmány szerinti vegyületekkel kezelhető vagy megelőzhető autoimmun betegségek közé tartoznak — egyebek mellett — például
68.195/BE a következők: glomerulonephritis, rheumatoid arthritis, szisztémás lupus erythematosus, scleroderma, krónikus pajzsmirigygyulladás, Graves-féle betegség, autimmun gastritis, diabétesz, autoimmun haemolyticus anaemia, autoimmun neutropenia, thrombocytopenia, atopic dermatitis, krónikus aktív hepatitis, myasthenia gravis, sclerosis multiplex, gyulladásos bélbetegség, colitis ulcerosa, Crohn-féle betegség, psoriasis vagy graft versus host betegség .
A találmány szerinti vegyületekkel kezelhető vagy megelőzhető destruktív csontbetegségek közé tartozik — egyebek mellett — például az ostoeporosis, az osteoarthritis és a myeloma multiplex-szel kapcsolatos csontrendellenesség.
A találmány szerinti vegyületekkel kezelhető vagy megelőzhető proliferatív betegségek közé tartoznak — egyebek mellett — például a következők: akut mielogén leukémia, krónikus mielogén leukémia, metasztatikus melanoma, Kaposi-féle szarkóma és myeloma multiplex.
A találmány szerinti vegyületekkel kezelhető vagy megelőzhető angiogén betegségek közé tartoznak — egyebek mellett — például a szolid tumorok, az ocularis neovascularisatio és a csecsemőkori haemoangiomák.
A találmány szerinti vegyületekkel kezelhető vagy megelőzhető fertőzéses betegségek közé tartozik — egyebek mellett — például a szepszis, a szeptikus sokk és a shigellosis.
A találmány szerinti vegyületekkel kezelhető vagy megelőzhető vírusos betegségek közé tartozik — egyebek mellett — például az akut hepatitis fertőzés (ezen belül a hepatitis A, a hepatitis B
68.195/BE és a hepatitis C fertőzés), a HÍV fertőzés és a CMV retinitis.
A találmány szerinti vegyuletekkel kezelhető vagy megelőzhető neurodegenerativ betegségek közé tartoznak — egyebek mellett — például a következők: Alzheimer-féle betegség, Parkinson-féle betegség, cerebralis ischaemiák és traumás sérülés által okozott neurodegenerativ betegségek.
A „p38-mediált állapotok körébe tartoznak ezenkívül a következők is: stroke esetén előforduló reperfusio/ischaemia, szívrohamok, ischaemia myocardii, szervi hypoxia, vascularis hyperplasia, kardiális hipertrófia és trombin-indukált vérlemezke-aggregáció.
Az előbbieken túlmenően a találmány szerinti p38 inhibitorok gátolni képesek az indukálható proinflammatoricus proteinek, például a prosztaglandin endoperoxidáz szintetáz-2 (PGHS-2) vagy más néven ciklooxigenáz-2 (COX-2) kifejeződését. Ily módon a „p38-mediált állapotok további csoportját alkotják a következők: ödéma, analgesia, láz és fájdalom, például neuromuscularis fájdalom, fejfájás, rákos fájdalom, fogfájás és arthriticus fájdalom.
A találmány szerinti p38 inhibitorokkal kezelhető vagy megelőzhető betegségeket a betegségért feltehetően felelős citokineknek (IL-1, TNF, IL-6, IL-8) megfelelően is csoportosíthatjuk.
Ennek megfelelően az IL-l-mediált betegségek vagy állapotok körébe tartoznak — egyebek mellett — például a következők: rheumatoid arthritis, ostoearthritis, stroke, endotoxemia és/vagy toxikus sokk szindróma, endotoxin által indukált gyulladásos reakció, gyulladásos bélbetegség, tuberkulózis, atherosclerosis,
68. 195/BE izomsorvadás, cachexia, psoriaticus arthritis, Reiter-féle szindróma, köszvény, traumás arthritis, rubella arthritis, akut synovitis, diabétesz, pancreaticus β-sejt betegség és Alzheimer-féle betegség.
A TNF-mediált betegségek vagy állapotok körébe sorlhatók — egyebek mellett — például a következők: rheumatoid arthritis, rheumatoid spondylitis, osteoarthritis, köszvényes arthritis és egyéb ízületi gyulladásos állapotok, szepszis, szeptikus sokk, endotoxikus sokk, Gram-negatív szepszis, toxikus sokk szindróma, felnőtt légzőszervi distressz szindróma, cerabralis malária, krónikus tüdőgyulladás, szilikózis, pulmonalis sarcoidosis, csontreszorpciós betegségek, reperfusiós sérülés, graft versus host reakció, allograft rejectio, fertőzés következtében fellépő láz és izomfájdalom, fertőzés következtében fellépő másodlagos cachexia, AIDS, ARC vagy rákos daganat, keloidképződés, hegszövetképződés, Crohn-féle betegség, colitis ulcerosa vagy pyresis. Ugyancsak TNF-mediált betegségek a vírusos ferőzések, például a HIV-, CMV-, influenza- és herpeszfertőzések, valamint az olyan állatgyógyászati vírusfertőzések, amilyenek például a lencsevírusfertőzések, ezen belül — egyebek mellett — a következő vírusok által okozott betegségek: fertőző ló anaemia vírus, kecske arthritis vírus, visna vírus vagy maedi vírus (juh progresszív pneumonia vírus). Az állatgyógyászati vírusfertőzések körébe tartozik ezenkívül a macska immunodéiiciencia vírus, szarvasmarha immunodéiiciencia vírus vagy kutya immunodéiiciencia vírus.
Az IL-8-mediált betegségek vagy állapotok körébe tartoznak a masszív neutroiil-infiltrációval jellemezhető betegségek, ami
68.195/BE lyenek például a következők: psoriasis, gyulladásos bélbetegség, asztma, cardialis vagy renalis reperfusiós sérülés, felnőtt légzőszerv! distressz szindróma, trombózis és glomerulonephritis.
A találmány szerinti vegyületeket ezenikvül helyileg (topikálisan) is felhasználhatjuk IL-1 vagy TNF által okozott vagy súlyosbított állapotok kezelésére vagy megelőzésére. Az ilyen állapotok körébe tartoznak — egyebek mellett — például a következők: ízületi gyulladás, ekcéma, psoriasis, a bőr gyulladásos állapotai, például napfény által okozott felégés, a szem gyulladásos állapotai, például kötőhártya-gyulladás, pyresis, fájdalom és egyéb gyulladással kapcsolatos állapotok.
A találmány szerinti vegyületeken kívül a találmány szerinti vegyületek gyógyszerészetileg elfogadható sóit is felhasználhatjuk a fentiekben azonosított rendellenességek kezelésére vagy megelőzésére szolgáló gyógyszerkészítményekben.
A találmány szerinti vegyületek gyógyszerészetileg elfogadható sóinak körébe gyógyszerészetileg elfogadható szervetlen vagy szerves svakból és bázisokból származó sók tartoznak. Az alkalmas savakból képezett sók példái közé — egyebek mellett — a következő tartoznak: acetát-, adipát-, alginát-, aszpartát-, benzoát-, benzolszulfonát-, hidrogén-szulfát-, butirát-, cifrát-, kámforát-, kámforszulfonát-, ciklopentil-propionát-, diglükonát-, dodecil-szulfát-, etánszulfonát-, formiát-, fumarát-, glükoheptanoát-, glicerofoszfát-, glikolát-, hemiszulfát-, heptanoát-, hexanoát-, hidroklorid-, hidrobromid-, hidrojodid-, 2-hidroxi-etánszulfonát-, laktát-, maleát-, malonát-, metánszulfonát-, 2-naftil-szulfonát-, nikotinét-, nitrát-, oxalát-, palmi
68.195/BE tát-, pektinát-, perszulfát-, 3-fenil-propionát-, foszfát-, pikrát-, pivalát-, propionát-, szalicilát-, szukcinát-, szulfát-, tartarát-, tiocianát-, tozilát- és undekanoátsók. A találmány szerinti vegyületek és gyógyszerészetileg elfogadható savaddiciós sóik szintézisében intermedierekként alkalmazható sók előállítására más olyan savakat, például oxálsavat is felhasználhatunk, amelyek egyébként önmagukban gyógyszerészetileg nem elfogadhatók .
A megfelelő bázisokkal képezett sók körébe tartoznak — egyebek mellett — például a következők: alkálifémsók, például nátrium- és káliumsók, alkáliföldfémsók, például magnéziumsók, ammóniumsók és tetrakisz(1-4 szénatomos alkil)-ammónium-sók. A találmány kiterjed a leírásban ismertetett vegyületek bármely bázikus nitrogénatomot tartalmazó csoportjának kvaternerizációjával nyerhető származékaira is. Kvaternerizálással vízben vagy olajban oldható vagy diszpergálható termékeket állíthatunk elő.
A gyógyszerkészítményekben felhasználható, gyógyszerészetileg elfogadható hordozók körébe — egyebek mellett — például a következők tartoznak: ioncserélők, alumínium-oxid, alumínium-sztearát, lecitin, szérumproteinek, például humán szérumalbumin, pufferanyagok, például foszfátok, glicin, szorbinsav, kálium-szorbát, telített növényi zsírsavak részleges gliceridkeverékei, víz, sók vagy elektrolitok, például protamin-szulfát, dinátrium-hidrogén-foszfát, kálium-hidrogén-foszfát, nátrium-klorid, cinksók, kolloid kovasav, magnézium-triszilikát, poli (vinil-pirrolidon), cellulózalapú anyagok, polietilénglikol, nátrium- (karboxi-metil)-cellulóz, poliakrilátok, viaszok, polietilén
63.195/BE
-poli (propilén-oxi) -blokk, polimerek, polietilénglikol és lanolin (gyapjúzsir) .
A találmány szerinti gyógyszerkészítményeket például orálisan, parenteralisan, inhalációs spray alkalmazásával, helyileg (topikálisan), rectalis, nasalis, buccalis, vaginalis úton vagy implantált rezervoár útján adhatjuk be. A jelen leírásban alkalmazott „parenteralis kifejezés szubkután, intravénás, intramuszkuláris, intraarticularis, intrasynovialis, intrasternalis, intrathecalis, intrahepaticus, intralaesiós és intracranialis injekciós vagy infúziós technikákat jelöl. A készítményeket előnyösen orálisan, intraperotonealisan vagy intravénásán adjuk be.
A találmány szerinti gyógyszerkészítmények például steril injektálható készítmény, így steril injektálható vizes vagy olajos szuszpenzió formájában lehetnek. Az ilyen szuszpenziót alkalmas diszpergáló- vagy nedvesítőszerek, illetve szuszpendálószerek alkalmazásával, a szakterületen ismert módszereknek megfelelően formálhatjuk. A steril injektálható készítmény nemtoxikus, parenteralisan elfogadható hígító- vagy oldószerrel készített oldat vagy szuszpenzió, például 1,3-butándiolos oldat is lehet. A találmány szerinti készítményekben felhasználható, elfogadható vivőanyagok közül megemlíthető — egyebek mellett — a víz, a Ringer-oldat és az izotóniás nátrium-klorid-oldat. Ezenkívül oldószerként vagy szuszpendálószerként szokásosan steril zsírosított (kaumpondált) olajokat használunk.' Erre a célra akármilyen enyhén zsírosított olajat alkalmazhatunk, így például szintetikus mono- és diglicerideket is felhasználhatunk. A zsírsavak, például az olajsav és gliceridszármazékai, továbbá a ter es .195/BE mészetes, gyógyszerészeti szempontból elfogadható olajok, például az olívaolaj vagy a ricinusolaj, különösen pedig ezek poli(oxi-etil)-ezett származékai jól felhasználhatók az injektálható készítményekben. Az ilyen olajos oldatok vagy szuszpenziók hoszszú szénláncú alkohol hígítószert vagy diszpergálószert, például (karboxi-metil)-cellulózt vagy a gyógyszerészetileg elfogadható dózis formákban, például emulziókban vagy szuszpenziókban szokásosan alkalmazott egyéb hasonló diszpergálószereket tartalmazhatnak. A formáláshoz ezenkívül egyéb, a gyógyszerészetileg elfogadható szilárd, folyékony vagy más dózisformák előállításában általánosan alkalmazott felületaktív anyagokat, például Tweenvagy Span-féleségeket és/vagy további hasonló emulgeálószereket vagy a biológiai hozzáférhetőséget fokozó anyagokat is felhasználhatunk .
A találmány szerinti gyógyszerkészítményeket orális úton bármely orálisan elfogadható dózisformában, egyebek mellett például kapszulák, tabletták, vizes szuszpenziók vagy oldatok formájában beadhatjuk. Az orális beadásra szolgáló tabletták esetén a szokásosan alkalmazott hordozók közé tartozik a laktóz és a kukoricakeményítő. Jellegzetesen lubrikánsokat, például magnézium-sztearátot is alkalmazunk. Az orális beadásra szolgáló kapszulák esetén higítószerként például laktózt és szárított kukoricakeményítőt használunk. Amennyiben az orális alkalmazáshoz vizes szuszpenziókra van szükség, a hatóanyagot emulgeáló- és szuszpendálószerekkel kombináljuk. Kívánt esetben édesítő- és/vagy ízesítő- és/vagy színezőszereket is alkalmazhatunk.
A vegyületeket kúpok formájában rectalis úton is beadhatjuk.
68.195/BE
- 62 - ; ·* ···· ·»»· .· • · * · * » ♦··· · ·· ♦·* »* • ·· — » .i*.
Ezeket a készítményeket úgy állíthatjuk elő, hogy a hatóanyagot olyan, alkalmas nem-irritáló vivőanyagokkal keverjük össze, amelyek szobahőmérsékleten szilárd halmazállapotúak, de a rectum hőmérsékletén folyékonyak, és így a kúpok a rectumban megolvadva szabaddá teszik a hatóanyagot. Az ilyen vivőanyagok körébe tartoznak — egyebek mellett — például a következők: kakaóvaj, méhviasz és polietilénglikolok.
A találmány szerinti gyógyszerkészítmények topikális felhasználása különösen előnyös lehet azokban az esetekben, amikor a kezelés célpontja a topikális felvitel számára könnyen elérhető terület vagy szerv, például a szem, a bőr vagy az alsó béltraktus. Az említett területek és szervek kezelésére alkalmas topikális készítményeket könnyen előállíthatunk.
Az alsó béltraktus helyi kezelését például végbélkúpkészítményekkel (lásd fentebb) vagy beöntésre szolgáló kompozíciókkal végezhetjük. A találmány kiterjed a topikális felhasználásra szolgáló transdermalis tapaszokra is.
A helyi alkalmazáshoz a vegyületeket olyan, alkalmas kenőcsökké formálhatjuk, amelyek egy vagy több, a következőkben felsorolt anyaggal alkotott keverékekben szuszpendálva vagy oldva tartalmazzák a hatóanyagokat: ásványolaj, paraffinolaj, fehérvazelin, propilénglikol, poli (oxi-etilén)/poli(oxi-propilén) vegyületek, emulgeáló viasz és víz. Egy másik megoldás értelmében a vegyületeket olyan, alkalmas lóciókká vagy krémekké formálhatjuk, amelyek egy vagy több, a következőkben felsorolt anyaggal alkotott keverékekben szuszpendálva vagy oldva tartalmazzák a vegyületeket: ásványolaj, szorbitán-monosztearát, poliszorbát
68.195/BE * .««· . · • * * * · »·1. :··. , *, „· ,' * »» <w . ... β
60, cetil-észter-viasz, cetearil-alkohol, 2-oktil-dodekanol, benzil-alkohol és víz.
A szem esetén történő topikális alkalmazáshoz, illetve a szemészeti felhasználáshoz a vegyületeket izotóniás, pH-beállított steril nátrium-klorid-oldattal készített mikronizált szuszpenziókká vagy előnyösen izotóniás, pH-beállított steril nátrium-klorid-oldattal készített oldatokká formálhatjuk. Az ilyen készítmények adott esetben prezervatívumot, például benzil-alkónium-kloridot is tartalmazhatnak. Egy további megoldás értelmében a vegyületeket kenőcsökké, például vazelines kenőcsökké formálhatjuk.
A találmány szerinti gyógyszerkészítmények beadhatók nasalis aeroszolokkal vagy inhaláció útján is. Az ilyen kompozíciókat a gyógyszerészeti formálás területén jól ismert módszerek segítségével állítjuk elő, mégpedig benzil-alkohol vagy más alkalmas tartósítószerek, a biológiai hozzáférhetőség javítása érdekében abszorpciós promotorok, fluor-szénhidrogének és/vagy más szokásos szolubilizáló- vagy diszpergálószerek alkalmazása mellett, nátrium-klorid-oldattal képezett oldatok formájában.
Az egyetlen dózist tartalmazó formák előállítása során az adott esetben hordozókkal összekevert p38 inhibitor mennyisége függ a kezelendő befogadószervezettől és az egyedi beadási módtól. A készítményeket előnyösen úgy formáljuk, hogy a betegnek az inhibitor 0,01-100 mg/testtömeg-kg/nap dózisát adhassuk be.
Hangsúlyozni kívánjuk, hogy egy adott beteg esetén a konkrét dózisok és kezelési előírások számos tényezőtől függenek, így — egyebek mellett — például a következő faktorok befolyásolják a
68.195/BE
- 64 - :
··· ·** * * * dózisok nagyságát és a kezelés menetét: az alkalmazott egyedi vegyület aktivitása, a kor, a testtömeg, az általános egészségi állapot, a nem, a táplálkozás, a kezelés időtartama, a hatóanyag-kombináció, a kezelendő betegség súlyossága, a kezelőorvos véleménye, valamint a kezelendő betegség jellege. Az inhibitor mennyiségét ezenkívül a készítmény egyedi összetétele is befolyásolja .
A találmány további tárgyát képezi egy eljárás p38-mediált állapotok kezelésére vagy megelőzésére, amelynek során egy betegnek beadjuk a fentiekben ismertetett gyógyszerkészítmények egyikét. A jelen leírásban alkalmazott „beteg kifejezés állatokra, előnyösen emberekre vonatkozik.
A találmány szerinti eljárást előnyösen gyulladásos betegségek, autoimmun betegségek, destruktív csontrendellenességek, proliferativ rendellenességek, fertőzéses betegségek, neurodegeneratív betegségek, allergiák, stroke esetén előforduló reperfusio/ischaemia, szívrohamok, angiogén rendellenességek, szervi hypoxia, vascularis hyperplasia, kardiális hipertrófia és trombin-indukált vérlemezke-aggregáció kezelésére vagy megelőzésére alkalmazzuk.
Egy további megoldás értelmében a találmány szerinti inhibitorokat IL-1-, IL-6-, IL-8- vagy TNF-mediált betegségek vagy állapotok kezelésére vagy megelőzésére alkalmazzuk. Az ilyen állapotokat a fentiekben ismertetjük.
A kezelendő vagy megelőzendő egyedi p38-mediált állapottól függően további olyan hatóanyagokat is beadhatunk a találmány szerinti inhibitorokkal együtt, amelyeket az adott állapot keze68.195/BE
lésére vagy megelőzésére szokásosan alkalmaznak. Például proliferatív betegségek kezelése esetén a találmány szerinti p38 inhibitorokat kemoterápiás szerekkel vagy más anti-proliferatív hatóanyagokkal kombinálhatjuk.
A további hatóanyagokat egy többszörös adagolási rend részeként a találmány szerinti p38-inhibitort tartalmazó készítményektől elkülönítve is beadhatjuk. Egy másik megoldás értelmében ezek a hatóanyagok a p38 inhibitorokkal egyetlen készítménnyé összekeverve egy egységes dózisforma részét is képezhetik.
A találmány jobb megértése érdekében az alábbiakban példákon keresztül mutatjuk be a találmányt. A példák csak illusztratív jellegűek, a találmány oltalmi körét, illetve terjedelmét nem korlátozzák.
A következő 4 példában néhány (la) általános képletű vegyület előállítását ismertetjük.
1. PÉLDA
A p38 inhibitor 1. vegyület előállítása
A. lépés
N
1,17 g (30 mmol) 90 %-os nátrium-amid 20 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készített szuszpéhziójához szobahőmérsékleten hozzáadtuk 2,92 g (25,0 mmol) benzil-cianid 10 ml vízmentes tetra-
68.195/BE
hidrofuránnal készített oldatát. A keveréket 30 percen keresztül szobahőmérsékleten kevertettük, majd hozzáadtuk 3,70 g (25,0 mmol) 3,6-diklór-piridazin 10 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készített oldatát. A reakciókeveréket 30 percen át kevertettük, majd meghígítottuk telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal. A vizes keveréket etil-acetáttal extraháltuk, a fázisokat elkülönítettük, majd a szerves réteget vízzel és telített, vizes nátrium-klorid-oldattál mostuk, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk, szűrtük és vákuumban betöményítettük.
A maradékot szilikagélen kromatografálva tisztítottuk, amelynek során eluensként 30:70 térfogatarányú etil-acetát/hexán oldószerelegyet alkalmaztunk. Fehér, szilárd anyag formájában és 54 3-os kitermeléssel 3,71 g (16,20 mmol) terméket nyertünk.
B. lépés
N
0,14 g (6,0 mmol) 95 %-os nátrium-hidrid 10 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készített szuszpenziójához szobahőmérsékleten hozzáadtunk 0,66 g (6,0 ml) tiofenolt. Ezt követően a keveréket 10 percen át kevertettük, hozzáadtuk 1,31 g (5,72 mmol) A. lépés szerinti termék 20 ml abszolút etanollal készített oldatát, a reakciókeveréket keverés közben egy órán keresztül visszafolyató hűtő alatt forraltuk, majd lehűtöttük és vákuumban betöményítet
68.195/BE tűk. A maradékot meghígítottuk 10 ml 1 M vizes nátrium-hidroxid-oldattal, majd a keveréket metilén-dikloriddal extraháltuk. A szerves fázist vízzel és telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk és vákuumban betöményítettük.
A maradékot szilikagélen kromatografálva tisztítottuk, amelynek során eluensként 20:80 térfogatarányú etil-acetát/hexán oldószerelegyet alkalmaztunk. Fehér, szilárd anyag formájában és 40 %-os kitermeléssel 0,66 g (2,19 mmol) terméket nyertünk.
C. lépés
N
1. elövegyület
0,17 g (0,69 mmol) B. lépés szerinti termék és 5 ml tömény kénsav keverékét egy órán keresztül 100 °C-on melegítettük. Ezt követően az oldatot lehűtöttük, majd telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal a pH-t 8-ra állítottuk be. A keveréket metilén-dikloriddal extraháltuk, majd a szerves fázist vízzel és telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk és vákuumban betöményítettük. Narancssárga olaj formájában és 100 %-os kitermeléssel 0,22 g (0,69 mmol) 1. elővegyületet nyertünk. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ (ppm): 7,7 (d) , 7,5 (d) , 7,4 (m) , 7,3-7,2 (m) . D. lépés
68.195/BE
1. elővegyület ·· 1. VEGYÜLET
0,22 g (0,69 mmol) C. lépés szerinti termék és 0,18 g (1,5 mmol) N, N-dimetil-formamid-dimetil-acetál 5 ml toluollal készített oldatát egy órán keresztül 100 °C-on melegítettük. Lehűtés után a képződött szilárd anyagot kiszűrtük, majd meleg etil-acetátban feloldottuk. A terméket dietil-éter cseppenkénti hozzáadásával precipitáltuk, majd kiszűrtük és dietil-éterrel mostuk. Sárga, szilárd anyag formájában 0,038 g 1. vegyületet nyertünk (amelynek szerkezete az 1. táblázat végén látható). LH-NMR (500 MHz, CDC13) 5 (ppm): 8,63 (s) , 7,63-7,21 (m) , 6,44 (d) .
2. PÉLDA
A p38 inhibitor 2. vegyület előállítása
A. lépés
A fenti első intermediert az 1. példa A. lépésében ismertetett eljáráshoz hasonlóan állítottuk elő, amelynek során kiindulási vegyületként (4-fluor-fenil)-acetonitrilt alkalmaztunk. 15
68.195/BE %-os kitermeléssel 1,4 g (5,7 mmol) kívánt terméket nyertünk.
B. lépés
N
A fenti intermediert az 1. példa B. lépésében ismertetett eljáráshoz hasonlóan állítottuk elő. 56 %-os kitermeléssel 0,49 g (1,5 mmol) kívánt terméket nyertünk.
C. lépés
Z.N N
F.
o nh2
2. elővegyület
A fenti intermediert az 1. példa C.
lépésében ismertetett eljáráshoz hasonlóan állítottuk elő. 45 %-os kitermeléssel 0,10 g (0,29 mmol) 2. elővegyületet nyertünk.
1H-NMR (500 MHz, CDC13) δ (ppm): 7,65-7,48
7,47-7,30
7,29-7,11 (m) , 7,06-6,91
5,85 (széles s).
D. lépés
2. VEGYÜLET
68.195/8E
I
A 2. vegyületet (amelynek szerkezete az 1. táblázatban látható) a 2. elővegyületből, az 1. példa D. lépésében ismertetett eljáráshoz hasonlóan állítottuk elő. 0,066 g kívánt terméket nyertünk. 1H-NMR (500 MHz, CDC13) δ (ppm): 8,60 (s), 7,62-7,03 (m), 6,44 (d) .
3. PÉLDA
A p38 inhibitor 6. vegyület előállítása
A. lépés
Cl III Cl II
N N
A 6. vegyület szintézisének első intermedierét az 1. példa A. lépésében ismertetett eljáráshoz hasonlóan állítottuk elő, amelynek során kiindulási vegyuletként (2,6-diklór-fenil)-acetonitrilt alkalmaztunk. 28 %-os kitermeléssel 2,49 g (8,38 mmol) kívánt terméket nyertünk.
B. lépés
N
A 6. vegyület szintézisének következő lépését az 1. példa B. lépésében ismertetett eljáráshoz hasonlóan hajtottuk' végre. 91
68.195/BE %-os kitermeléssel 2,82 g (7,6 mmol)
C. lépés kívánt terméket nyertünk.
Az utolsó intermediert, azaz a 6. elővegyületet az 1. példa
C. lépésében ismertetett eljáráshoz hasonlóan állítottuk elő. 85 %-os kitermeléssel 0,89 g (2,3 mmol) kívánt terméket nyertünk.
LH-NMR (500 MHz, CD3OD) Ő (ppm) : 7,5-7,4 (dd) , 7,4 (m) , 7,3 (d) ,
7,2 (m), 7,05 (d).
D. lépés
6. elővegyület
6. VEGYÜLET
A 6. vegyület (amelynek szerkezete az 1. táblázatban látható) előállításának utolsó lépését az 1. példa D. lépésében ismerte tett eljáráshoz hasonlóan hajtottuk végre, amelynek eredményeként 0,06 g kívánt terméket nyertünk. 1H-NMR (500 MHz, CDC13) δ (ppm): 8,69 (s) , 7, 65-7,59 (d) , 7,58-7,36 (m) , 7,32-7,22 (m) ,
6,79 (d) , 6, 53 (d) .
4. PÉLDA
A p38 inhibitor 5. vegyület előállítása
68.195/BE
A. lépés
Az 5. vegyület szintézisének első intermedierét az 1. példa A. lépésében ismertetett eljáráshoz hasonlóan állítottuk elő, amelynek során kiindulási vegyületként (2,4-diklór-fenil)-acetonitrilt alkalmaztunk. 49 %-os kitermeléssel 3,67 g (12,36 mmol) kívánt terméket nyertünk.
B. lépés
Az 5. vegyület szintézisének második intermedierét az 1. példa B. lépésében ismertetett eljáráshoz hasonlóan állítottuk elő.
92 %-os kitermeléssel 3,82 g (9,92 mmol) ki tünk. C. lépés XXaJ IX XX N 0 vánt terméket nyer- Xj XX nh2 5. elövegyület
68.195/BE
Az utolsó intermediert, azaz az 5. elővegyuletet az 1. példa
C. lépésében ismertetett eljáráshoz hasonlóan állítottuk elő. 92 %-os kitermeléssel 0,10 g (0,24 romol) kívánt terméket nyertünk.
^-NMR (500 MHz, CD3OD) δ (ppm): 7,9 (d) , 7,7 (d) , 7,6-7,5 (dd) ,
7,4-7,3 (m), 2,4 (s).
D. lépés
5. VEGYÜLET
5. elővegyület
Az 5. vegyület (amelynek szerkezete az 1. táblázatban látható) előállításának utolsó lépését az 1. példa D. lépésében ismertetett eljáráshoz hasonlóan hajtottuk végre, amelynek eredményeként 0,06 g kívánt terméket nyertünk. 1H-NMR (500 MHz, CDC13) Ö (ppm): 8,64 (s) , 7,51-7,42 (m) , 7,32-7,21 (m) , 6,85 (d) , 6,51 (d), 2,42 (s) .
A megfelelő kiindulási vegyületek alkalmazásával hasonló módon további találmány szerinti (la) általános képletű vegyuleteket állíthatunk elő.
5. PÉLDA
Egy (Ib) általános képletű p38 inhibitor vegyület előállítása
Az alábbi példában egy találmány szerinti (Ib) általános képletű p38 inhibitor előállítását mutatjuk be.
A. lépés ' .
68.195/BE
NC
1. lépés
1) bázis
Cl
1,1 ekvivalens 90 %-os nátrium-amid vízmentes tetrahidrofuránnal készített szuszpenziójához szobahőmérsékleten hozzáadtuk 1,0 ekvivalens (2,6-diklór-benzil)-cianid vízmentes tetrahidrofuránnal készített oldatát. A keveréket 30 percen keresztül szobahőmérsékleten kevertettük, ezt követően hozzáadtuk 1 ekvivalens 2,β-diklór-piridin vízmentes tetrahidrofuránnal készített oldatát, majd a reakció előrehaladását vékonyréteg-kromatográfiával nyomon követtük. Amikor a reakció befejeződött, a reakciókeveréket meghígítottuk telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd a keveréket etil-acetáttal extraháltuk. A fázisokat elkülönítettük, majd a vizes réteget vízzel és telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk, szűrtük és vákuumban betöményítettük. A maradékot szilikagélen kromatografálva tisztítottuk, amelynek eredményeként a tiszta terméket nyertük.
B. lépés
68.195/BE ekvivalens 4-fluor-bróm-benzol vízmentes tetrahidrofuránnal készített és -78 °C-ra hűtött oldatához hozzáadtunk 2 ekvivalens hexános terc-butil-litium-oldatot. A reakciókeveréket 30 percen keresztül kevertettük, ezt követően hozzáadtuk 1 ekvivalens A. lépés szerinti termék vízmentes tetrahidrofuránnal készített oldatát, majd a reakció előrehaladását vékonyréteg-kromatográfiával nyomon követtük és lassan szobahőmérsékletre melegítettük. A reakciót víz hozzáadásával leállítottuk, majd a keveréket metilén-dikloriddal extraháltuk. A szerves fázist vízzel és telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk és vákuumban betöményítettük. A maradékot szilikagélen kromatografálva tisztítottuk, amelynek eredményeként a tiszta terméket nyertük.
C. lépés
A B. lépés szerinti termék és tömény kénsav keverékét egy órán keresztül 100 “C-on melegítettük. Ezt követően az oldatot lehűtöttük, majd telített, vizes nátrium-hidrogén~karbonát-oldattal a pH-t 8-ra állítottuk be. A keveréket metilén-dikloríddal extraháltuk, majd a szerves fázist vízzel és telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szul
68.195/BE fát felett szárítottuk és vákuumban betöményítettük. A maradékként kapott nyers terméket szilikagélen gyorskromatografálva tisztítottuk.
D. lépés
F p38 inhibitor vegyület ekvivalens C. lépés szerinti termék és 2 ekvivalens N, N-dimetil-formamid-dimetil-acetál toluolos oldatát, egy órán keresztül 100 °C-on melegítettük. Lehűtés után a keveréket szűrtük, majd a kiszűrt anyagot feloldottuk meleg etil-acetátban. A terméket dietil-éter cseppenkénti hozzáadásával precipitáltuk, majd kiszűrtük és dietil-éterrel mostuk. Az így nyert (Ib) általános képletű p38 inhibitort szilikagélen kromatografálva tisztítottuk .
A megfelelő kiindulási vegyületek alkalmazásával hasonló módon további találmány szerinti (Ib) általános képletű vegyületeket állíthatunk elő.
6. PÉLDA
A p38 inhibitor 103. vegyület előállítása .195/BE
Az alábbi példában egy találmány szerinti (Ic) általános képletű vegyület jellegzetes előállítását mutatjuk be.
A. lépés
A p38 inhibitor 12. vegyületet lényegében a 4. példa szerinti eljárásnak megfelelően állítjuk elő, azzal az eltéréssel, hogy a B. lépésben ebben az esetben 4-fluor-tiofenolt alkalmazunk. B. lépés
A 12. vegyületet szobahőmérsékleten feloldottuk 5 ml vízmentes tetrahidrofuránban, az oldathoz hozzáadtunk 5 ml (5 mmol) 1 M toluolos diizobutil-alumínium-hidrid-oldatot, ezt követően a reakciókeveréket egy órán keresztül szobahőmérsékleten kevertettük, majd meghígítottuk etil-acetáttal. A reakciót kálium-nátrium-tartarát—tetrahidrát (Rochelle-só) hozzáadásával leállítottuk, majd a fázisokat elkülönítettük. A szerves réteget vízzel és telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk, szűrtük és vákuumban betöményitettük. A maradékként kapott nyers 103. vegyületet szilikagélen kromatografáltuk, amelynek során eluensként 2:98 térfogatarányú metanol/metilén-diklorid oldószerelegyet alkalmaztunk. 50 %-os kitermeléssel 210 mg tiszta 103. vegyületet nyertünk. 1H-NMR (500 MHz, CDC1J δ (ppm): 7,51 (m, 1H) , 7/38 (d, 2H) , 7,20 (t,
68.195/BE
2H) , 7,08 (t, 2H) , 6,70 (széles s, 1H) , 6,30 (dd, 2H) , 5,20 (s,
2H) .
7. PÉLDA
A p38 inhibitor 201. vegyület előállítása
A. lépés
5,9 g (31,8 mmol) (2,β-diklór-benzil)-nitrilt szobahőmérsékleten feloldottunk 20 ml N, N-dimetil-formamidban, majd hozzáadtunk 763 mg (31,8 mmol) nátrium-hidrádét, amelynek eredményeként egy világossárga oldatot nyertünk. Tizenöt perc elteltével az oldathoz hozzáadtuk 5,0 g (21,1 mmol) 2,5-dibróm-piridin 10 ml N, N-dimetil-formamiddal készített oldatát, majd a keverékhez hozzáadtunk 3 mmol tetrakisz(trifenil-foszfin)-palládium(0) reagenst. Az oldatot 3 órán keresztül visszafolyató hűtő alatt forraltuk, majd szobahőmérsékletre hűtöttük és meghígítottuk etil-acetáttal. A szerves fázist elkülönítettük, vízzel és telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk, szűrtük és vákuumban bepároltuk. A maradékként olaj formájában kapott nyers terméket gyorskromatográfiás oszlopon tisztítottuk, amelynek során eluensként 10:90 térfogatarányú etil-acetát/hexán oldószerelegyet alkalmaztunk. Fehér,
68.195/BE
szilárd anyag formájában, 84 %-os kitermeléssel 5,8 g kívánt terméket nyertünk.
B. lépés
194,8 mg (0,57 mmol) A. lépésben előállított bromidot feloldottunk 15 ml xilolban, amjd az oldathoz hozzáadtunk 200 μΐ (0,587 mmol) (fenil-tio)-sztannánt és 25 mg tetrakisz(trifenil-foszfin)-palládium (0) reagenst. Az oldatot egy éjszakán keresztül visszafolyató hűtő alatt forraltuk, majd lehűtettük, szűrtük és vákuumban bepároltuk. A maradékként kapott nyers terméket szilikagélen kromatografáltuk, amelynek során eluensként metilén-dikloridot alkalmaztunk. Sárga olaj formájában, 72 %-os kitermeléssel 152 mg tiszta terméket nyertünk.
C. lépés
201. vegyület
1,2 g (3,37 mmol) B. lépésben előállított nitril terméket feloldottunk 30 ml jégecetben. Az oldahoz hozzáadtunk előbb 120 μΐ (6,67 mmol) vizet, majd 760 μΐ (6,91 mmol) titán (IV)-kloridot
68.195/BE
(az utóbbi reagens hozzáadása exoterm reakciót eredményez) . Ezt követően az oldatot 2 órán keresztül visszafolyató hűtő alatt forraltuk, majd lehűtöttük és 1 M sósavoldatra öntöttük. A vizes fázist metilén-dikloriddal extraháltuk, a metilén-dikloridos oldatokat egyesítettük, 1 M vizes nátrium-hidroxid-oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk, majd rövid szilikagéloszlopon szűrtük. Az oszlopot először az elreagálátlan kiindulási vegyület eltávolítása érdekében metilén-dikloriddal mostuk, majd a 201. vegyület kinyeréséhez etil-acetáttal elváltuk. Az etil-acetátot lepárolva 77 %-os kitermeléssel 1,0 g 201. vegyületet nyertünk.
8. PÉLDA
A p38 inhibitor 110. vegyület előállítása
A. lépés
3,76 g (11,1 mmol) kiindulási nitrilt feloldottunk 20 ml jégecetben. Az oldathoz hozzáadtunk 22,2 mmol titán(IV)-kloridot és 22,2 mmol vizet, ezt követően a reakciókeveréket egy órán keresztül visszafolyató hűtő alatt forraltuk, majd lehűtöttük és víz/etil-acetát keverékre öntöttük. A szerves fázist elkülönítettük, telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk, szűrtük és vákuumban
68.195/BE
bepároltuk. A maradékként kapott nyers terméket szilikagélen kromatografáltuk, amelynek során eluensként 5:95 térfogatarányú metanol/metilén-diklorid oldószerelegyet alkalmaztunk. Sárga hab formájában, 70 %-os kitermeléssel 2,77 g tiszta terméket nyertünk .
B. lépés
1,54 g (4,3 mmol) A. lépésben előállított amidot feloldottunk 20 ml toluolban. Az oldathoz hozzáadtunk 1,53 g (12,9 mmol) N, N-dimetil-formamid-dimetil-acetált, a képződött oldatot 10 percen át melegítettük, majd szobahőmérsékletre hűtöttük és vákuumban bepároltuk. A maradékot szilikagélen kromatografáltuk, amelynek során eluensként 2:98 -> 5:95 térfogatarányú metanol/metilén-diklorid oldószergradienst alkalmaztunk. Az igy nyert anyagot feloldottuk forró etil-acetátban, majd az oldatot hagytuk lehűlni. Sárga, szilárd anyag formájában és 600 mg mennyiségben (40 %-os kitermeléssel) izoláltuk a kikristályosodott tiszta terméket. Az anyalúgból további 800 mg terméket tudtunk kinyerni.
C. lépés
DiBAL
68.195/BE
369 mg (1 mmol) B. lépésben nyert bromidot feloldottunk 10 ml tetrahidrofuránban, az oldathoz hozzáadtunk 4 ml (4 mmol) 1,0 M diízobutil-alumínium-hidrid-oldatot, ezt követően a reakciókeveréket 10 percen keresztül szobahőmérsékleten kevertettük, majd a reakciót 1 ml metanol hozzáadásával leállítottuk. A keverékhez telített, vizes kálium-nátrium-tartarát-oldatot adtunk, majd etil-acetáttal extraháltuk. A szerves fázist elkülönítettük, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk és bepároltuk. A maradékot szilikagélen kromatografáltuk, amelynek során eluensként 1:99 -> 3:97 térfogatarányú metanol/metilén-diklorid oldószergradienst alkalmaztunk. Csillogó, narancssárga, szilárd anyag formájában és 85 mg mennyiségben (23 %-os kitermeléssel) nyertük a kívánt terméket. D. lépés
110. vegyület ,2 mg (0,1 mmol) C. lépésben előállított bromidot feloldottunk 12 ml xilolban, az oldathoz hozzáadtunk előbb 0,19 mmol tiofenolt, majd 0,19 mmol (tributil-ón)-metanolátot. Az így nyert oldatot 10 percen keresztül visszafolyató hűtő alatt forraltuk, majd hozzáadtunk 0,020 mmol tetrakisz(trifenil-foszfin)-palládium(0) reagenst. A reakciókeveréket melegítettük, miközben folyamatosan figyeltük a bromid kiindulási vegyület eltűné
68.195/BE sét. Ezt követően a reakciókeveréket szobahőmérsékletre hűtöttük, majd rövid szilikagéloszlopon szűrtük. Az ón-reagens feleslegének eltávolítása érdekében az oszlopot először metilén-dikloriddal mostuk, majd a p38 inhibitor kinyeréséhez 5:95 térfogatarányú metanol/etil-acetát oldószereleggyel eluáltuk. A szűrletet betöményitettük, majd a maradékot 5:95 térfogatarányú metanol/etil-acetát oldószereleggyel szilikagélen ismét kromatografáltuk. 52 %-os kitermeléssel 20 mg 110. vegyületet nyertünk.
9. PÉLDA
A p38 inhibitor 202, vegyület előállítása
A. lépés
Pd(PPb3)4
2,32 g (12 mmol) (2,6-diklór-benzil)-nitrilt szobahőmérsékleten feloldottunk 10 ml N, W-dimetil-formamidban, majd az oldathoz hozzáadtunk 12 mmol nátrium-hidridet. Tizenöt perc elteltével a sárga oldathoz hozzáadtuk 2,36 g (10 mmol) 2, 6-dibróm-piridin 5 ml N, N-dimetil-formamiddal készített oldatát, majd 1,0 mmol tetrakisz(trifenil-foszfin)-palládium(0) reagenst adtunk a keverékhez. Ezt követően a reakciókeveréket 3 órán keresztül visszafolyató hűtő alatt forraltuk, majd szobahőmérsékletre hű
68.195/BE töttük és meghígítottuk etil-acetáttal. A szerves fázist elkülönítettük, vízzel és telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk és vákuumban bepároltuk. A maradékként kapott olajat szilikagéloszlopon gyorskromatografáltuk, amelynek során eluensként 10:90 térfogatarányú etil-acetát/hexán oldószerelegyet alkalmaztunk. Fehér, szilárd anyag formájában, 42 %-os kitermeléssel 1,45 g kívánt terméket nyertünk.
B. lépés
1,77 g (5,2 mmol) A. lépésben előállított brómvegyületet feloldottunk 20 ml toluolban, az oldatot gázmenetesítettük, majd nitrogénatmoszféra alá helyeztük és hozzáadtuk előbb 950 mg (7,8 mmol) fenil-boronsav 4 ml etanollal készített oldatát, majd 1,73 g (14 mmol) nátrium-karbonát 4 ml vízzel készített oldatát. A reakciókeveréket egy órán keresztül visszafolyató hűtő alatt forraltuk, majd szobahőmérsékletre hűtöttük és meghígítottuk etil-acetáttal. A keveréket vízzel és telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mostuk, majd a szerves fázist vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk, szűrtük és vákuumban betöményítettük. A maradékot szilikagélen kromatografálva tisztítottuk,
68.195/BE amelynek során eluensként 30:70 térfogatarányú etil-acetát/hexán oldószerelegyet alkalmaztunk. Fehér, szilárd anyag formájában, %-os kitermeléssel
1,56 g kívánt terméket nyertünk.
C. lépés
kénsav
700 mg (2,07 mmol) B. lépés szerinti nitrilt feloldottunk 10 ml tömény kénsavban, majd az oldatot egy órán keresztül 80 °C-on melegítettük. Ezt követően a reakciókeveréket szobahőmérsékletre hűtöttük, majd 6 M vizes nátrium-hidroxid-oldattal a pH-t 8-ra állítottuk be. A keveréket etil-acetáttal extraháltuk, a szerves fázist elkülönítettük, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk és vákuumban bepároltuk. Sárga hab formájában, 84 %-os kitermeléssel 618 mg 202. vegyületet nyertünk.
10. PÉLDA
A 410. vegyület előállítása
A. lépés
Br
F
68.195/BE
Egy lánggal kiszárított 100 ml-es gömblombikba bemértünk 50 ml vízmentes tetrahidrofuránt, hozzáadtunk előbb 2,28 g (93,8 mmol) magnéziumforgácsot, majd egyetlen jódkristályt. A világosbarna oldathoz ezt követően hozzáadtuk 10,0 ml (79,1 mmol) 2-bróm-5-fluor-toluol 1,5 ml-es részletét, majd az oldatot refluxhőmérsékletre melegítettük. A barna szín elhalványult és a reflux a külső hőforrás eltávolítása után is fennmaradt, jelezve Grignard-reagens képződését. Amikor a forrás intenzitása gyengült, a reakciókeverékhez hozzáadtuk a bromid további 1,0-1,5 ml-es részletét, amelynek hatására intenzív forrás indult meg. A folyamatot addig ismételtük, amíg a bromis teljes mennyiségét beadagoltuk. A reakció teljes lejátszódásának érdekében az olívazöld oldatot külső hőforással további egy órán keresztül viszszafolyató hűtő alatt forraltuk. Ezt követően az oldatot jégfürdőben lehűtöttük, majd fecskendővel hozzáadtuk 9,3 ml (81,9 mmol) trimetil-borát 100 ml tetrahidrofuránnal készített és -78 °C-ra hűtött oldatához. A Grignard-reagens beadagolása után a lombikot kivettük a hűtőfürdőből, majd az oldatot egy éjszakán keresztül szobahőmérsékleten kevertettük. A szürkésfehér szuszpenziót 300 ml vízre öntöttük, majd az illékony komponenseket vákuumban lepároltuk. A maradékhoz hozzáadtunk 400 ml 2 M sósavoldatot, majd a tej fehér keveréket egy órán át szobahőmérsékleten kevertettük. Fehér, szilárd anyag precipitálódott. A keveréket dietil-éterrel extraháltuk, majd a szerves oldatot vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk és vákuumban bepároltuk. Fehér, szilárd anyag formájában és 11,44 g mennyiségben (94 %-os kitermeléssel) nyertük a boronsavat.
68.195/BE
B. lépés
Egy 100 ml-es gömblombikban 7,92 g (33,4 mmol) 2,6-dibróm-piridint feloldottunk 50 ml vízmentes toluolban, majd az így nyert tiszta, színtelen oldathoz hozzáadtunk 5,09 g (33,1 mmol) A. lépésben előállított (4-fluor-2-metil-fenil)-boronsavat, amelynek hatására egy fehér szuszpenzió képződött. A szuszpenzióhoz hozzáadtunk előbb 17,45 g (37,2 mmol) tallium-karbonátot, majd katalitikus mennyiségű (150 mg) tetrakisz(trifenil-foszfin)-palládium (0) reagenst. A reakciókeveréket egy éjszakán keresztül visszafolyató hűtő alatt forraltuk, ezt követően lehűtöttük, majd rövid szilikagéloszlopon szűrtük. Az oszlopot metilén-dikloriddal mostuk, majd a szűrletet bepároltuk. A maradékként kapott fehér, szilárd anyagot feloldottuk minimális mennyiségű 1:1 térfogatarányú metilén-diklorid/hexán oldószerelegyben, majd az oldatot rövid szilikagéloszlopon kromatografáltuk, amelynek során eluensként 30:70 térfogatarányú metilén-diklorid/hexán oldószerelegyet alkalmaztunk. Fehér, szilárd anyag formájában, 74 %os kitermeléssel S,55 g 2-bróm-6-(4-fluor-2-metil-fenil)-piridint nyertünk. C. lépés
68.195/BE
Egy 50 ml-es gömblombikban 550 mg (2,07 mmol) B. lépésben előállított 2-bróm-6-(4-fluor-2-metil-fenil)-piridint feloldottunk 30 ml vízmentes tetrahidrofuránban. Az így nyert tiszta, színtelen oldathoz hozzáadtunk előbb 2,14 ml (2,14 mmol) 1 M 2,6-difluor-anilin-oldatot, majd 112 mg (2,79 mmol) 60 tömeg%-os ásványolajos nátrium-hidrid-diszperziót. Enyhe melegedés mellett gázfejlődést tapasztaltunk. Az oldatot egy éjszakán keresztül visszafolyató hűtő alatt forraltuk, ezt követően lehűtöttük, majd 10 tömeg%-os vizes ammónium-klorid-oldatra öntöttük. A vizes keveréket metilén-dikloriddal extraháltuk, a szerves oldatot vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk és vákuumban bepároltuk. A termék és a kiindulási vegyület keverékéből álló barna olajat rövid szilikagéloszlopon kromatografáltuk, amelynek során eluensként 1:1 térfogatarányú metilén-diklorid/hexán oldószerelegyet alkalmaztunk. Színtelen olaj formájában és 262 mg mennyiségben (40 %-os kitermeléssel) nyertük a 2-(2,6-difluor-fenil)-6-(4-fluor-2-metil-fenil)-piridint. D. lépés
63.195/BE
Egy 100 ml-es gömblombikban 262 mg (834 mmol) C. lépésben előállított 2-(2,6-difluor-fenil)-6-(4-fluor-2-metil-fenil)-piridint feloldottunk 30 ml vízmentes kloroformban. Az így nyert tiszta, színtelen oldathoz hozzáadtunk 1,0 ml (11,5 mmol) (klór-szulfonil)-izocianátot, majd a világossárga oldatot egy éjszakán keresztül szobahőmérsékleten kevertettük. Ezt követően a reakciókeverékhez hozzáadtunk 30 ml vizet, amelynek hatására erőteljes gázfejlődés közben egy exoterm reakció játszódott le. A vizes keveréket egy éjszakán keresztül kevertettük, ezt követően a szerves fázist elkülönítettük, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk és vákuumban bepároltuk. A termék és a kiindulási vegyület keverékéből álló barna olajat rövid szilikagéloszlopon kromatografáltuk, amelynek során eluensként 10:90 térfogatarányú etil-acetát/metilén-diklorid oldószerelegyet alkalmaztunk. A visszanyert kiindulási vegyülettel azonos körülmények között megismételtük a fenti reakciót és tisztítást, amelynek eredményeként összesen 205 mg mennyiségben (69 %-os kitermeléssel) nyertük a fehér, szilárd anyag formájában lévő karbamidot.
11. PÉLDA
A 138. vegyület előállítása
68.195/BE
106 mg (0,25 mmol) 103. vegyületet feloldottunk 0,5 ml tetrahidrofuránban, az oldathoz hozzáadtunk 35 μΐ (0,25 mmol) trietil-amint, majd az így nyert keverékhez feleslegben (45 mg) 37 tömeg%-os vizes formaldehidoldatot adtunk. A reakciókeveréket egy éjszakán keresztül szobahőmérsékleten keverhettük, majd rotációs vákuumbepárlóval csökkentett nyomás alatt bepároltuk. A maradékot feloldottuk metilén-dikloridban, majd az oldatot gyorskromatográfiás szilikagéloszlopra vittük. Az oszlopot 2:98 térfogatarányú metanol/metilén-diklorid oldószereleggyel eluálva 70 %-os kitermeléssel 78 mg tiszta terméket izoláltunk.
12. PÉLDA
A 103. vegyület elővegyületeinek az előállítása
A. lépés
103. vegyület foszfát-elővegyülete ekvivalens 138. vegyületet feloldunk metilén-dikloridban, az oldathoz hozzáadunk előbb 1 ekvivalens trietil-amint, ezt követően 1 ekvivalens (dibenzil-foszfonil)-kloridot, majd az oldatot szobahőmérsékleten kevertetjük, miközben vékonyréteg-kromatográfiás úton figyeljük a kiindulási vegyület fogyását. A metilén-dikloridos fázist meghígítjuk etil-acetáttal, az oldatot 1 M
68.195/BE sósavoldattal, telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, majd szárítjuk és rotációs vákuumbepárlóval betöményítjük. A maradékként kapott nyers terméket szilikagélen tisztítjuk. A tiszta terméket ezt követően feloldjuk metanolban, majd a dibenzil-észter védőcsoportokat 10 tömeg%-os palládium/szén katalizátor jelenlétében végzett hidrogénezéssel eltávolítjuk. Amikor a folyamatos megfigyelés szerint a reakció teljessé vált, a katalizátort Celite'''’ rétegen kiszűrjük, majd a szűrletet rotációs vákuumbepárlóval betöményítve a foszfát-terméket nyerjük.
B. lépés
210 mg (1,05 mmol) 103. vegyületet feloldottunk 2 ml tetrahidrofuránban, majd az oldatot nitrogénatmoszférában -50 °C-ra hűtöttük. A lehűtött oldathoz hozzáadtunk előbb 1,1 mmol lítium-(hexametil-diszilazid)-ot, majd 1,13 mmol (klór-acetil)-kloridot. A reakciókeveréket kivettük a hűtőfürdőből, hagytuk szobahőmérsékletre melegedni, ezt követően meghigitottuk etil-acetáttal, majd víz hozzáadásával leállítottuk a reakciót. A szerves fázist telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mostuk, szárítottuk és rotációs vákuumbepárlóval szárazra pároltuk. A maradékként kapott nyers terméket szilikagélen gyorskromatografál
68.195/BE tuk, amelynek során eluensként 25:75 térfogatarányú etil-ace tát/hexán oldószerelegyet alkalmaztunk. 70 %-os kitermeléssel
172 mg tiszta terméket nyertünk, amit további tisztítás nélkül használtunk fel a következő reakciókban.
C. lépés
F
103. vegyület (dimetil-amino)-acetil-elővegyülete
Az előbbi lépésben előállított (klór-acetil)-vegyületet feloldjuk metilén-dikloridban, majd az oldathoz feleslegben dimetil-amint adunk. A reakció lefutását vékonyréteg-kromatográfiával nyomon követkjük, majd amikor a reakció teljessé válik, az illékony komponenseket eltávolítjuk. Maradékként a kívánt termé két nyerjük.
13. PÉLDA
A 34. és 117. vegyület előállítása
A. lépés
1) tiokarbamid, reflux
2) bázis, 2,5-difiuor-nitro~ Cl -benzol
F
NÖ2
68. 195/BE
300 mg (1,0 mmol) 5. példa A. lépésben előállított nitrilt feloldottunk 10 ml etanolban, majd az oldathoz hozzáadtunk 80,3 mg (1,05 mmol) tiokarbamidot. A reakciókeveréket 4 órán keresztül visszafolyató hűtő alatt forraltuk. A vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálat szerint ekkorra a kiindulási vegyület teljesen átalakult. A reakciókeveréket lehűtöttük, ezt követően az illékony komponenseket csökkentett nyomás alatt eltávolitottuk, majd a maradékot feloldottuk 10 ml acetonban.
Az acetonos oldathoz hozzáadtunk előbb 110 μΐ (1,01 mmol) 2,5-difluor-nitro-benzolt, majd 200 mg (1,45 mmol) kálium-karbonátot és 400 μΐ vizet. A reakciókeveréket egy éjszakán keresztül szobahőmérsékleten kevertettük, majd meghígítottuk metilén-dikloriddal, és az oldatot vattarétegen szűrtük. Az illékony komponenseket csökkentett nyomás alatt eltávolitottuk, a maradékot pedig szilikagélen gyorskromatografáltuk, amelynek során eiuensként 10:90 -> 25:75 térfogatarányú etil-acetát/hexán oldószergradienst alkalmaztunk. 33 %-os kitermeléssel 142 mg kívánt terméket nyertünk.
B. lépés
NCh NO2
142 mg (0,33 mmol) A. lépés szerinti nitril terméket összeke vertünk 2 ml tömény kénsavval, a reakciókeveréket egy órán ké ss .195/BE resztül visszafolyató hűtő alatt forraltuk, ezt követően szobahőmérsékletre hűtöttük, majd meghigitottuk etil-acetáttal. A keveréket telített, vizes kálium-karbonát-oldattal óvatosan semlegesítettük, majd a fázisokat elkülönítettük. A szerves réteget vízzel és telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mostuk, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk, szűrtük, majd szárazra pároltuk. A 85 %-os kitermeléssel nyert 127 mg maradékot további tisztítás nélkül használtuk fel a következő lépésben. C. lépés
n°2 34. vegyület NCh
127 mg (0,28 mmol) B. lépésben nyert amidot feloldottunk 3 ml tetrahidrofuránban, majd az oldathoz hozzáadtunk 110 μΐ (0,83 mmol) N, N-dimeti1-formamid-dimetí1-acetált. A reakciókeveréket 5 percen keresztül visszafolyató hűtő alatt forraltuk, ezt követően szobahőmérsékletre hűtöttük, majd az illékony komponenseket vákuumban eltávolítottuk. A maradékot szilikagélen gyorskromatografáltuk, amelynek során eluensként 2,5:97,5 térfogatarányú metanol/metilén-diklorid oldószerelegyet alkalmaztunk. 92 %-os kitermeléssel 118 mg tiszta 34. vegyületet nyertünk. D. lépés
68.195/BE
117. vegyület NH?
34. vegyület NOj
100,8 mg (0,22 mmol) 34.
oldatához hozzáadtuk 103 mg vegyület 3,4 ml benzollal készített (0,44 mmol) nikkel(II)-klorid—hexa hidrát 1,68 ml 1:1 térfogatarányú benzol/metanol oldószereleggyel készített oldatát. Az így nyert oldatot 0 °C-ra hűtöttük, majd hozzáadtunk 49 mg (1,3 mmol) nátrium-[tetrahidrido-borát] (1-) reagenst. A reakciókeveréket keverés közben hagytuk szobahőmérsékletre melegedni, majd vákuumban bepároltuk. A maradékot szilikagélen gyorskromatografáltuk, amelynek során eluensként 2:98 térfogatarányú metanol/metilén-diklorid oldószerelegyet alkalmaztunk. 25 %-os kitermeléssel 21 mg tiszta 117. ve gyületet nyertünk.
14. PÉLDA
Az 53. és 142. vegyület előállítása
A. lépés
A fenti reakció termékét az 1. példa B. lépésében ismertetett
68.195/BE eljárásnak megfelelően állítottuk elő, amelynek során kiindulási vegyületként 359 mg (1,21 mmol) klór-piridazin-származékot és
176 mg (1,21 mmol) 2,4-difluor-tiofenolt alkalmaztunk. A nyers terméket szilikagélen gyorskromatografáltuk, amelynek eredménye ként 92 %-os kitermeléssel 451 mg kívánt terméket nyertünk.
B. lépés
A fenti reakciót az 1. példa C. lépésében ismertetett eljá rásnak megfelelően hajtottuk végre, amelynek során 451 mg kiin dulási vegyületet és 5 ml tömény kénsavat alkalmaztunk. 90 %-os kitermeléssel 425 mg jelzett terméket nyertünk.
C. lépés
A fenti reakciót az 1. példa D. lépésében ismertetett eljárásnak megfelelően hajtottuk végre, amelynek során 410 mg (0,96 mmol) kiindulási amidot és 3 mmol N, ΛΓ-dimetil-formamid-dimetil-acetált alkalmaztunk. 75 %-os kitermeléssel 313 mg 53. vegyüle
68.195/BE tét nyertünk.
D. lépés
213 mg (0,49 mmol) 34. vegyületet feloldottunk 10 ml tetrahidrofuránban, az oldatot 0 °C-ra hűtöttuk, majd hozzáadtunk 0,6 ml (0,6 mmol) 1 M tetrahidrofurános boránoldatot. A reakciókeveréket 30 percen keresztül kevertettük, majd a reakciót víz hozzáadásával leállítottuk. A vizes keveréket etil-acetáttal extraháltuk, a szerves fázist elkülönítettük, majd vízzel és telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mostuk, szárítottuk és rotációs vákuumbepárlóval betöményítettük. A maradékot szilikagélen kromatografalva tisztítottuk, amelynek során eluensként 1:99 —> 5:95 térfogatarányú metanol/metilén-diklorid oldószergradienst alkalmaztunk. Ennek eredményeként 57 %-os kitermeléssel 125 mg 142. vegyületet nyertünk.
15. PÉLDA
A p38 kináz rovarsejtekbe történő klónozása
A korábbiakban két illeszkedő humán p38 kináz variánst (CSBP1 és CSBP2) azonosítottak. A CSBP2 cDNS kódoló szakaszának egy HeLa sejtkönyvtár (Stratagene) templátként történő alkalmazásával végzett erősítéséhez (amplifikálásához) specifikus oligonuk
68.195/BE leotid primereket használtunk. A polimeráz láncreakciós terméket a pET-15b vektorba (Novagen) klónoztuk. A pVL-(His)6~p38 baculovirus transzfer vektort úgy állítottuk össze, hogy a pVL1391 plazmid (Pharmingen) komplementer helyeibe a pET15b-(His)g-p38nak egy Xbal-BamHI fragmentumát szubklónoztuk.
A 23 csoportos pepiidből (MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMLE, ahol LVPRGS egy trombin hasítás helyet jelent) álló rekombináns protein szintézisét irányitó pVL- (His)6~p38 plazmid a p38 N-terminálisához illeszkedik, amit a DNS szekvencia-meghatározása és a kifejezett protein N-terminális szekvencia-meghatározása bizonyított. Spodoptera frugiperda (Sf9) rovarsejtek egyrétegű tenyészetét egy T-lombikban 27 °C hőmérsékleten 10 1 magzati borjúszérummal kiegészített TNM-FH médiumban (Gibco BRL) tartottuk fenn. Log fázisú Sf9 sejteket Lipofectin (Invitrogen) alkalmazásával Autographa califonica nuclearis polyhedrosis virus lineáris vírus DNS-sel (Pharmingen) és pVL-(his)6~p38 transzfer vektorral ko-transzfektáltunk. Az egyedi rekombináns baculovirus kiónokat 1 %-os alacsony olvadáspontú agarózzal végzett plakk próbával tisztítottuk.
16, PÉLDA
A rekombináns p38 kináz kifejezése és tisztítása
Egy rázólombikban 27 °C hőmérsékleten Excel-405 proteinmentes médiumban (JRH Bioscience) Trichoplusia ni (Tn-368) High-Five™ sejteket tenyésztettünk szuszpenzióban. Az 1,5 χ 10θ sejt/ml sűrűségű sejteket 5-ös infekciós multiplicitás mellett megfertőztük a fentiekben ismertetett rekombináns baculovirussal. A re
68.195/BE kombináns p38 kifejeződésének mennyiségét nyúl anti-p38 antitest (Santa Cruz Biotechnology) alkalmazásával végzett immunfestéssel (immunoblotting) figyeltük meg. A sejttömeget 72 órával a fertőzés után nyertük ki, amikor a p38 kifejeződése elérte a maximális értékét.
A (His)6-tal kiegészített p38-at kifejező sejtekből álló fagyasztott sejtpasztát 5 térfogatrész A. bufferben [50 mM nátrium-dihidrogén-foszfát (pH 8,0), 200 mM nátrium-klorid, 2 mM 2merkapto-etanol, 10 % glicerin és 0,2 mM (benzi1-szulfonil)-fluorid (PMSF)] felolvasztottuk. A sejtek mikrofluidizátorban végzett mechanikus roncsolása után a lizátumot 30 percen keresztül 30 000 x g értékkel centrifugáltuk. A felülúszót részletenként 3-5 órán keresztül 4 °C-on Talon™ (Clontech) fémaffinitású gyantával inkubáltuk, amelynek során a gyantát 1 ml gyanta/2-4 mg várt p38 aránynak megfelelő mennyiségben alkalmaztuk. A gyantát 500 x g értékkel végzett centrifugálással kiülepítettük, majd az A. puffer részleteivel óvatosan mostuk. A gyantát felszuszpendáltuk, ezt követően egy hozzávetőleg 2,6 χ 5,0 cm-es oszlopba töltöttük, majd 5 mM imidazolt tartalmazó A. pufferrel mostuk.
A (His)6~p38-at 100 mM imidazolt tartalmazó A. pufferrel eluáltuk, majd 2 liter B. pufferrel [50 mM HEPES (pH 7,5), 25 mM β-glicero-foszfát, 5 % glicerin, 2 mM DL-ditio-treit (DTT)] szemben egy éjszakán keresztül 4 °C-on dializáltuk. 1,5 egység trombin (Calbiochem)/mg p38 hozzáadásával és 20 °C-on végzett 2-3 órás inkubálással eltávolítottuk a Hisg részt. A trombint 0,2 mM PMSF hozzáadásával hatástalanítottuk, majd az egész mintát egy 2 ml-es benzamidin-agaróz (American International Chemical) osz
68.195/BE
100 lopra töltöttük.
A lejövő frakciót közvetlenül egy 2,6 χ 5,0 cm-es, előzetesen 0,2 mM PMSF-et tartalmazó B. pufferben ekvilibrált Q-Sepharose (Pharmacia) oszlopra vezettük. A p38-at egy 20 oszloptérfogatú, 0,6 M nátrium-kloridot tartalmazó B. pufferig terjedő lineáris gradienssel eluáltuk. A proteint tartalmazó frakciókat egyesítettük és C. pufferrel [50 mM HEPES (pH 7,5), 5 % glicerin, 50 mM nátrium-klorid, 2 mM DL-ditio-treit (DTT), 0,2 mM (benzil-szulfonil)-fluorid (PMSF)] szemben egy éjszakán keresztül 4 ’Con dializáltuk.
A dializált proteint Centriprep (Amicon) alkalmazásával 3-4 ml-re tömény!tettük, majd egy 2,6 * 100 cm-es Sephacryl S-100HR (Pharmacia) oszlopra vittük. A proteint 35 ml/óra áramlási sebességgel eluáltuk. A fő csúcsnak megfelelő frakciókat egyesítettük, 20 mM DTT-re beállítottuk, 10-80 mg/ml koncentrációra tömény!tettük, majd -70 °C-on részletekben lefagyasztottuk, illetve azonnal felhasználtuk.
17, PÉLDA
A p38 aktiválása
A p38 úgy aktiváltuk, hogy 0,5 mg/ml p38-at 10 mM magnézium-kloridot, 2 mM ATP-t és 0,2 mM nátrium-vanadátot tartalmazó B. pufferben 20 °C-on 30 percen keresztül 0,005 mg/ml DD-kettős mutáns MKK6-tal kombináltunk. A aktivációs keveréket ezt követően egy 1,0 χ 10 cm-es MonoQ oszlopra (Pharmacia) töltöttük, majd egy 20 oszloptérfogatú, 1,0 M nátrium-kloridot tartalmazó B. pufferig terjedő lineáris gradienssel eluáltuk. Az aktivált p38
68.195/BE
101 az ADP és az ATP után eluálódott. Az aktivált p38 csúcs alá tar tozó frakciókat egyesítettük, majd a nátrium-klorid eltávolítása érdekében 0,2 mM nátrium-vanadátot tartalmazó B. pufferrel szemben dializáltuk. A dializált proteint 4,0 M törzsoldat hozzáadásával 1,1 M kálium-foszfát-koncentrációra állítottuk be, majd egy 1,0 * 10 cm-es, előzetesen 1,1 M dikálium-hidrogén-foszfátot tartalmazó D. pufferben (10 % glicerin, 20 mM β-glicero-foszfát, 2,0 mM DTT) ekvilibrált HIC (Rainin Hydropore) oszlopra töltöttük. A proteint egy 20 oszloptérfogatú, 50 mM dikálium-hidrogen-foszfátot tartalmazó B. pufferig terjedő lineáris gradienssel elváltuk. A fő csúcsként eluálódó kétszeresen foszforilált p38at tartalmazó frakciókat egyesítettük és 0,2 mM nátrium-vanadátot tartalmazó B. pufferrel szemben dializáltuk. Az aktivált p38-at -70 °C-on tároltuk.
18, PÉLDA p38 gátlási vizsgálatok
A. Az EGF receptor peptid foszforilációjának gátlása
A vizsgálatot 10 mg magnézium-klorid, 25 mM β-glicero-foszfát, 10 % glicerin és 100 mM HEPES összetételű puffer jelenlétében (pH 7,6) végeztük. Egy jellegzetes IC50 meghatározáshoz előállítottunk egy olyan törzsoldatot, amely tartalmazta az összes fenti komponenst, valamint 5 nM koncentrációban az aktivált p38at. A törzsoldatot részletekre osztva fiolákba töltöttük. Minden egyes fiolába rögzített térfogatú dimetil-szulfoxidot vagy dimetil-szulfoxidos inhibitoroldatot töltöttünk (úgy, hogy a reakciókeverékben a dimetil-szulfoxid végkoncentrációja 5 -ő legyen),
68.195/BE
102 a fiolák tartalmát összekevertük, majd 15 percen keresztül szobahőmérsékleten inkubáltuk. Minden egyes fiolához 200 μΜ végkoncentrációban hozzáadtunk egy, a p38 által katalizált kináz reakcióban (1) foszforil-akceptorként funkcionáló EGF receptor peptidet (KRELVEPLTPSGEAPNQALLR). A kináz reakciót 100 μΜ ATP-vel iniciáltuk, majd a fiolákat 30 °C-on inkubáltuk. Harminc perccel később a reakciókat azonos térfogatú 10 tömeg%-os trifluor-ecetsav-oldattal (TFA) leállítottuk.
A foszforilált peptid mennyiségét HPLC analízissel határoztuk meg. A foszforilált és a nem-foszforilált peptid elválasztását fordított (reverz) fázisú kolonnán (Daltapak, 5 μm, C18 LOOD, part no. 011795), 0,1 térfogati trifluor-ecetsav-oldatot tartalmazó víz és 0,1 térfogat% trifluor-ecetsav-oldatot tartalmazó acetonitril kettős oldószergradiens alkalmazásával végeztük. Az inhibitorkoncentráció függvényében grafikusan ábrázoltuk a viszszamaradó aktivitás százalékos értékét, majd ennek alapján meghatároztuk az 50 %-os gátlást eredményező koncentrációt, azaz az IC50 értékét.
B. Az ATPáz aktivitás gátlása
A vizsgálatot 10 mg magnézium-klorid, 25 mM β-glicero-foszfát, 10 % glicerin és 100 mM HEPES összetételű puffer jelenlétében (pH 7,6) végeztük. Egy jellegzetes Ki meghatározáshoz inhibitor nélkül és az inhibitor két koncentrációjának a jelenlétében meghatároztuk az ΆΤΡ Km értékét az aktivált p38 reakció ATPáz aktivitásában. Előállítottunk egy olyan törzsoldatot, amely tartalmazta az összes fenti komponenst, valamint 60 nM koncentrációban az aktivált p38-at. A törzsoldatot részletekre osztva fio
68.195/BE
103 Iákba töltöttük. Minden egyes fiolába rögzített térfogatú dimetil-szulfoxidot vagy dimetil-szulfoxidos inhibitoroldatot töltöttünk (úgy, hogy a reakciókeverékben a dimetil-szulfoxid végkoncentrációja 2,5 % legyen), a fiolák tartalmát összekevertük, majd 15 percen keresztül szobahőmérsékleten inkubáltuk. A reakciót különféle koncentrációjú ATP-vel iniciáltuk, majd a fiolákat 30 °C-on inkubáltuk. Harminc perccel később a reakciókat 50 μΐ EDTA hozzáadásával (pH 8,0; 0, 1 M végkoncentráció) Leállítottuk. A p38 ATPáz aktivitás termékének, azaz az ADP-nek a mennyiségét HPLC analízissel határoztuk meg.
Az ADP-nek az ATP-től történő elválasztását fordított (reverz) fázisú kolonnán (Supelcosil, LC-18, 3 μω, part no. 5-8985), a következő összetételű kettős oldószergradiens alkalmazásával végeztük: A. oldószer - 0,8 mM (tetrabutil-ammónium)-hidrogén-szulfátot (Sigma Chemical Co., katalógusszám: T-7158) tartalmazó 0,1 M foszfátpuffér; B. oldószer - 30 térfogat% metanolt tartalmazó A. oldószer.
A Ki értéket az inhibitor- és ATP-koncentrációk függvényében felvett sebességi adatokból határoztuk meg. Az alábbi 6. táblázatban bemutatjuk néhány találmány szerinti inhibitor Ki értékét.
68.195/BE
104 6. táblázat
Vegyület száma Κι (μΜ)
1. >20
2. 15
3. 5,0
5. 2,9
6. 0,4
Egyéb találmány szerinti p38 inhibitorok is gátolják a p38 ATPáz aktivitását.
C. Az IL-1, TNF, IL-6 és IL-8 gátlása
LPS-stimulált PBMC-k termelése
Egy 20 mM inhibitor-törzsoldatból dimetil-szulfoxiddal sorozathígítást készítettünk. Legalább 6 sorozathígitást állítottunk elő. Ezt követően négyszeres inhibitor-törzsoldatokat készítettünk, amelynek során egy inhibitorhigitás 4 μΐ-ét hozzáadtuk 1 ml RPMI1640 médium/10 % magzati borjúszérum keverékhez. A négyszeres inhibitor-törzsoldatok 80 μΜ, 32 μΜ, 12,8 μΜ, 5,12 μΜ, 2,048 μΜ, 0,819 μΜ, 0,328 μΜ, 0,131 μΜ, 0,052 μΜ, 0,021 μΜ stb. koncentrációban tartalmazták az inhibitort. A négyszeres inhibitor-törzsoldatokat a felhasználásig 37 °C-on előmelegítettük.
Egy 4 ml vért és a csőbe töltéshez elegendő, magnéziumion- és kalciumion-mentes DPBS-t tartalmazó Vacutainer CPT-ben (Becton & Dickinson), 1500 χ g értékkel 15 percen keresztül végzett centes. 195/BE ~ 105 ' · :· -?··?
• · · ·· · 4··· rifugálással az egyéb sejtektől friss humán vér felülúszó sejteket szeparáltunk. A Vacutainerben lévő gradiens tetején elhelyezkedő perifériális egymagvú vérsejteket (PBMC) eltávolítottak, majd RPMI1640 médium/10 % magzati borjúszérum keverék kétszer mostuk. Tíz percen keresztül 500 χ g értékkel végzett centrifugálással kinyertük a PBMC-ket. A teljes sejtszámot Neubauer sejtkamra alkalmazásával határoztuk meg, majd a sejtek koncentrációját sejttenyésztő médiumban (10 Ú magzati borjúszérummal kiegészített RPMI1640) 4,8 χ 10β sejt/ml értékre állítottuk be.
Egy másik megoldás szerint a vizsgálatban közvetlenül antikoagulánst tartalmazó teljes vért használtunk.
Egy 96-vájatú sej ttenyésztő lemez vájataiba bemértünk 100 μΐ sejtszuszpenziót vagy 100 μΐ teljes vért. Ezt követően a sejtekhez hozzáadtunk 50 μΐ négyszeres inhibitor-törzsoldatot. Végül 50 μΐ Lipopoliszacharid (LPS) termelő törzsoldatot adtunk a vájatokhoz (16 ng/ml sejttenyésztő médium), amelynek eredményeként a vizsgálatban az LPS végkoncentrációja 4 ng/ml volt. A vivőanyag kontroll végső vizsgálati térfogatát 50 μΐ sejttenyésztő médium hozzáadásával ugyancsak 200 μΐ-re egészítettük ki. Ezt követően a PBMC sejteket vagy a teljes vért 5 térfogat% szén-dioxidot tartalmazó párásított atmoszférában egy éjszakán keresztül (12-15 órán át) 37 °C-on inkubáltuk.
A következő napon a sejteket rázógépen összsekevertük, majd 5 percen keresztül 500 χ g értékkel centrifugáltuk. A sejttenyészet-felülúszókat kinyertük, majd ELISA-val a gyártó előírásainak megfelelően az IL-lb (E & D Systems, Quantikine kits, #DBL50), a TNF-α (BioSource, KHC3012), az IL-6 (Endogén, #EH268.195/BE
106 -
-IL6) és az IL-8 (Endogén, #EH2-IL8) mennyiségére nézve analizáltuk. Az ELISA adatok alapján dózis-válasz görbéket szerkesztettünk, amelyekből meghatároztuk az IC50 értékeket.
Az alábbi 7. táblázatban azokat az eredményeket mutatjuk be, amelyeket a különféle találmány szerinti p38 inhibitorok esetén a fenti A. bekezdésben ismertetett kinéz vizsgálatban („Kinéz), az LPS-stimulált PBMC-k esetén végzett IL-1 és TNF vizsgálatokban („sejt), illetve a teljes vér esetén végzett IL-1, TNF és IL-6 vizsgálatokban („TV) nyertünk.
7. táblázat
Vegy. száma Kináz IC50 Sejt IL-1 IC50 Sejt TNF IC50 TV IL-1 ic50 TV TNF ICso TV IL-6 IC50
2 . + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
3. 4- N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
5. 4- N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
6. + + 4-4- 4- N.M. N.M. N.M.
7. + 4- N.M. N.M. N.M.
8. + 4- 4- N.M. N.M. N.M.
9. 4- 4- 4- N.M. N.M. N.M.
10. 4- N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
11. + + 4- N.M. N.M. N.M.
12 . 4-4- 4-4- + + 4- + +
13. + + 4- N.M. N.M. N.M.
14. 4- 4-4- + N.M. N.M. N.M.
15. + 4-4- 4-4- N.M. N.M. N.M.
68.195/BE
107 -
7. táblázat (folytatás)
Vegy. száma Kináz IC50 Sejt IL-1 IC50 Sejt TNF ic50 TV IL-1 IC50 TV TNF ic50 TV IL-6 IC50
16. + + + + + N.M. N.M. N.M.
17. + + + N.M. N.M. N.M.
18. + + + N.M. N.M. N.M.
19. + + + N.M. N.M. N.M.
20. + + + + N.M. N.M. N.M.
21. ++ ++ + N.M. N.M. N.M.
22. + + + N.M. N.M. N.M.
23. ++ 4· + -1- + + t-
24. ++ ++ + + + + N.M.
25. + + ++ +· N.M. N.M. N.M.
26. + ++ + + + + + +
27. ++ + + + + +
28. + + ++ + + N.M. N.M. N.M.
29. ++ ++ ++ N.M. N.M. N.M.
30. + + + N.M. N.M. N.M.
31. + + N.M. N.M. N.M.
32. ++ + ++ + + +
33. ++ ++ ++ + + +
34. + + 4“ N.M. N.M. N.M.
35. ++ ++ + + + +
36. + + + + +
37. ++ ++ + + + +
38. +++ +++ ++ ++ + + 4-4-
39. ++ + 4* N.M. N.M. N.M.
40. 4-4- ++ + N.M. N.M. N.M.
68.195/BE
108 7. táblázat (folytatás)
Vegy. száma Kináz IC50 Sejt IL-1 IC50 Sejt TNF IC50 TV IL-1 IC50 TV TNF IC50 TV IL-6 ic50
41. +++ ++ + + + + N.M. N.M. N.M.
42. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
43 . + + + + N.M. N.M. N.M.
44. + + + + N.M. N.M. N.M.
45. + + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
46. + + N.M. N.M. N.M.
47. + + + + + N.M. N.M. N.M.
48. + + + + + N.M. N.M. N.M.
49. + + +++ + + + F
50. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
51. ++ N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
52. + + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
53. ++ + + + + + + + + + + + + + + + 4-
101. ++ + + + +++ + + + +
102. +++ + + + + + + + 4· + + +
103. +++ + + + +++ + + + + +
104. + + ++ + +
105. ++ + + N.M. N.M. N.M.
106. +++ + + + + + + + ++ + +
107. ++ + + N.M. N.M. N.M.
109. +++ + + + ++ + 4- + +
108. +++ ++ + + + +++ + + +
110. ++ + + N.M. N.M. N.M.
111. ++ + + N.M. N.M. N.M.
112. ++ ++ + + + +
68.195/BE
109 7. táblázat (folytatás)
Vegy. száma Kináz ic50 Sejt IL-1 ic50 Sejt TNF ic50 TV IL-1 ic50 TV TNF ic50 TV IL-6 IC5o
113. 4-4-4- ++ + + + + + 4-
114. 4-4-4- ++ + +++ 4- 4- + + 4-4-4-
115. 4-4-4- + + + + + + + + 4-
116. 4-4-4- + + + + + + + 4-
117 . 4-4-4- + + + + + + ++ + + + + +
118. + + + + + + + 4- 4-
119. + + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
120. N.M. + + + + 4- 4-
121. 4-4- + + + + + + + 4· 4-
122 . + + + + + + 4- 4-
123. + + + + + + + 4- 4-
124 . + + + N.M. N.M. N.M.
125. + + + + + + + + + + 4- 4-
126. + ++ + N.M. N.M. N.M.
127. ++ + +++ + + + + + 4-4- 4-4-4-
128. 4- + + N.M. N.M. N.M.
129. + + + +++ + + + + + 4- 4-4-
130. + + + ++ + N.M. N.M. N.M.
131. + + + +++ + + + N.M. N.M. N.M.
132. + + + +++ ++ N.M. N.M. N.M.
133. + + + +++ +++ N.M. N.M. N.M.
134. + + + + + + N.M. N.M. N.M.
135. + + + ++ + + 4- +
136. + + + +++ +++ + 4- 4-4-
137. + + + +++ ++ + 4- 4-4-
68.195/BE
110 • · • *
7. táblázat (folytatás)
Vegy. száma Kináz IC50 Sejt IL-1 IC50 Sejt TNF IC50 TV IL-1 IC50 TV TNF IC50 TV IL-6 ic50
138. + + +++ + + + + +++
139. +++ + + + + + + +
140. + + + ++ + + + + + + + + +
141. +++ + + + + + + + + +
142. + + + + + + + + + + + + + + + 1- (- +
143. +++ + + + + + + + +
144. + + + ++ + + + + + + +
145. 4- 4· + ++ + + + + + + + + + + + + +
201. + + + + + 1- + + +
203. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
204 . + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
205. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
206. ++ + + N.M. N.M. N.M.
207. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
208. N.M. N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
209. N.M. + N.M. N.M. N.M. N.M.
202./ 301. + + + ++ + + + + 4
302. +++ +++ + + + + +
303. + + 4~ + + ' +
304 . + + + + + +
305. +++ +++ + + + +
306. ++ + + 4· + + +
307 . 4* + 4- ++ + + + +
308 . + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
68.195/BE
Ill 7. táblázat (folytatás)
Vegy. száma Kináz IC50 Sejt IL-1 IC50 Sejt TNF ic50 TV IL-1 ic50 TV TNF ic50 TV IL-6 ic50
309. ++ 4-4- + + 4- 4- 4-
310. ++ + 4- N.M. N.M. N.M.
311. + + + 4- N.M. N.M. N.M.
312. + 4· + ++ + + 4- 4-
313. 4-4- + 4- N.M. N.M. N.M.
314. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
315. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
316. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
317. + 4- 4- N.M. N.M. N.M.
318. 4-4- N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
319. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
320. +++ 4-4- 4-4- N.M. N.M. N.M.
321. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
322. 4-4- 4- 4- N.M. N.M. N.M.
323. 4-4- 4-4- 4-4- N.M. N.M. N.M.
324. 4-4- 4-4- 4- N.M. N.M. N.M.
325. 4*4 + + + + 4- + 4- 4- 4-
326. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
327. 4-4- N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
328 . + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
329. 4-4- 4-4* + 4- 4- +
330. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
331. 4- N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
332. 4-4- 4- + + 4- 4- 4-
333. + + 4- 4- N.M. N.M. N.M.
68.195/BE
- 112 -
7. táblázat (folytatás)
Vegy. száma Kináz ic50 Sejt IL-1 ic50 Sejt TNF ic50 TV IL-1 ic50 TV TNF ic50 TV IL-6 ic50
334. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
335. + 4- + + + + +
336. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
337. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
338. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
339. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
340. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
341. + + + + + + N.M. N.M. N.M.
342. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
343. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
344. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
345. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
346. 4· 4· + + + + +
347. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
348. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
349. + + + + + + +
350. + ++ + N.M. N.M. N.M.
351. + + + N.M. N.M. N.M.
352. + + N.M. N.M. N.M. N.M.
353. ++ + + N.M. N.M. N.M.
354. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
355. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
356. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
357. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
358. ++ 4- + N.M. N.M. N.M.
68. 195/BE
- 113 -
7. táblázat (folytatás)
Vegy. száma Kináz ic50 Sejt IL-1 ic50 Sejt TNF ic50 TV IL-1 ic50 TV TNF IC50 TV IL-6 IC50
359. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
360. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
361. + + + + + N.M. N.M. N.M.
362. + + + 4· + + + + + 4-
363. + + + ++ + + + 4“ + +
364. +++ +++ + + 4 + 1-
365. N.M. N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
366. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
367. N.M. N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
368. N.M. N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
369. N.M. N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
370. N.M. N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
371. N.M. N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
372. N.M. N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
373. N.M. N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
374. + + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
375. +++ N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
376. ++ + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
377. +++ N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
378. +++ N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
379. +++ N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
380. ++ N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
381. + + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
382. ++ + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
383. +++ N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
68.195/BE
114 - ♦ ·* *<
·♦·· · · *· ·* ·*
Ί. táblázat (folytatás)
Vegy. száma Kinéz ic50 Sejt IL-1 IC50 Sejt TNF ic50 TV IL-1 ic50 TV TNF ic50 TV IL-6 ic50
384. + + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
385. + + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
386. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
387. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
388. +++ N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
389. + + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
390. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
391. + + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
392. + + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
393. + + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
394. +++ N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
395. +++ N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
396. +++ N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
397. + N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
398. N.M. N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
399. +++ N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
1301. +++ N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
401. +++ + + ++ + + +
402. +++ +++ + + + + + +
403. +++ +++ +++ + + + +
404. +++ +++ +++ + + +
405. +++ +++ ++ N.M. N.M. N.M.
406. ++ + + + N.M. N.M. N.M.
407. ++ + N.M. N.M. N.M.
408 . +++ +++ ++ N.M. N.M. N.M.
68.195/BE
- 115
7. táblázat (folytatás)
Vegy. száma Kináz ic50 Sejt IL-1 IC50 Sejt TNF IC50 TV IL-1 IC50 TV TNF IC50 TV IL-6 IC50
409. + + + +++ + + + + + + +
410 . + + + +++ ++ + + + + + + +
411. + + + + + + + + + + + +
412 . N.M. N.M. N.M. N.M. N.M. N.M.
A kináz IC50 értékek esetén „+ + + jelentése <0,1 μΜ, „++ jelentése 0,1-1,0 μΜ, és jelentése > L, 0 μΜ. A celLuláris IL-1 és TNF értékek esetén „+ + + jelentése <0,1 μΜ, „ jelentése 0,1-0,5 μΜ, és „jelentése >0,5 μΜ. A teljes vérrel végzett vizsgálatok („ TV ) értékeinél „+++ jelentése <0,25 μΜ, „++ jelentése 0,25-0,5 μΜ, és „+ jelentése >0,5 μΜ. A 7. táblázatban „N.M. azt jelenti, hogy az adott esetben nem végeztünk meghatározást .
Egyéb találmány szerinti p38 inhibitorok is gátolják az EGF receptor peptid foszforilációját, valamint az IL-1, a TNF, az IL-6 és az IL-8 képződését LPS-stimulált PBMC-kben vagy teljes vérben.
D. Az IL-6 és IL-8 gátlása
IL-l-stimulált PBMC-k termelése
A vizsgálatot PBMC-kkel ugyanúgy végeztük, ahogyan azt a fentiekben ismertetettük, azzal az eltéréssel, hogy az LPS termelő törzsoldat helyett ebben az esetben 50 μΐ IL-lb termelő törzsoldatot (2 ng/ml sejttenyésztő médium) adtunk a vizsgálati keverékhez .
68.195/BE
- 116 « ** *1*0 ···· ·* • * · · 4 · • · ··· « A © · ··· · ft · ft t ' 9' »’ * »·»»
A sejttenyészet-felülúszókat kinyertük, majd ELISA-val a gyártó előírásainak megfelelően az IL-6 (Endogén, DEH2-IL6) és az IL-8 (Endogén, #EH2-IL8) mennyiségére nézve analizáltuk. Az ELISA adatok alapján dózis-válasz görbéket szerkesztettünk, amelyekből meghatároztuk az IC50 értékeket.
Az alábbi 8. táblázatban a p38 inhibitor 6. vegyület esetén nyert eredményeket mutatjuk be.
Vizsgált citokin ic50 (μΜ)
IL-6 0, 60
IL-8 0, 85
E. LPS-indukált prosztaglandin endoperoxidáz szintetáz-2 (PGHS-2 vagy COX-2) indukció gátlása PBMC-kben
Friss humán vér felülúszóból Vacutainer CPT-ben (Becton & Dickinson) végzett centrifugálással perifériális egymagvú vérsejteket izoláltunk. 15 χ IQ6 sejtet egy 10 % magzati borjúszérummal, 50 E/ml penicillinnel, 50 μg/ml streptomicinnel és 2 mM L-glutaminnal kiegészített RPMI 1640 médiumot tartalmazó 6-vájatú szövettenyésztő lemezre oltottunk. A vájatokhoz 0,2, 2,0 és 20 μΜ végkoncentrációban hozzáadtuk a fenti 6. vegyület dimetil-szulfoxiddal készített oldatát. Ezt követően az enzim kifejezésének megindításához 4 ng/ml végkoncentrációban LPS-t adtunk a vájatokhoz. A tenyészet végtérfogata vájatonként 10 ml volt.
Egy éjszakán keresztül 37 °C-on és 5 térfogat% szén-dioxidot
68.195/BE
117 tartalmazó atmoszférában végzett inkubálás után a sejteket lekapartuk, ezt követően centrifugáltuk, majd a felülúszót eltávolítottuk. A sejteket jéghideg DPBS-sel (Dulbecco-féle foszfátpufferelt fiziológiás sóoldat, BioWhittaker) kétszer mostuk. A sejteket jégen 10 percen keresztül 1 μΐ benzonázt (DNSáz, Merck) tartalmazó 50 μΐ hideg lizálópufferben [20 mM Tris-HCl, pH 7,2, 150 mM nátrium-klorid, 1 % Triton-X-100, 1 % dezoxi-kóisav, 0,1 ‘*5 SDS, 1 mM EDTA, 2 % aprotinin (Sigma), 10 μg/ml pepsztatin, 10 μg/ml leupeptin, 2 mM PMSF, 1 mM benzamidin, 1 mM DTT) Lizáltuk. Az egyes minták, proteinkoncentrációját a BCA vizsgálat (Pierce) és bovin-szérumalbumin (BSA) mint standard alkalmazásával határoztuk meg. Ezt követően az egyes minták proteinkoncentrációját hideg lizálópufferrel 1 mg/ml-re állítottuk be. 100 μΐ lizátumhoz hozzáadtunk azonos térfogatú 2xSDS PAGE töltőpuffért, majd a mintát 5 percen keresztül forraltuk. A proteineket (30 μg/sáv) méret szerint 4-20 % SDS PAGE gradiens géleken (Novex) frakcionáltuk, majd elektroforetikus úton (2 óra, 100 mA) 20 térfogat% metanolt tartalmazó Towbin transzfer pufferben (25 mM Tris, 192 mM glicin) nitro-cellulóz membránra vittük át. A membránt egy órán keresztül szobahőmérsékleten blokkolópufferrel (5 % zsírmentes száraz tejpor 0,1 % Tween-20-szal kiegészített DPBS-ben) előkezeltük és 0,1 % Tween-20-szal kiegészített DPBS-sel háromszor mostuk. A membránt monoklonális anti-COX-2 antitest (Transduction Laboratories) blokkolópufferrel készített 250-szeres hígításával egy éjszakán keresztül 4 °C-on inkubáltuk. Ezt követően a membránt 0,1 % Tween-20-szal kiegészített DPBS-sel háromszor mostuk, majd egy órán keresztül szobahőmérsékleten egér Ig
68.195/BE
118 hez kapcsolt torma peroxidáz-konjugált juh antiszérumnak (Amersham) a blokkolópufferrel készített 1000-szeres hígításával inkubáltuk. Ezután a membránt 0,1 % Tween-20-szal kiegészített DPBS-sel háromszor mostuk, majd egy ECL detektálórendszert (SuperSignal™ CL-HRP Substrate System, Pierce) használtunk a COX-2 kifejezésének mennyiségi meghatározásához.
Az előbbiekben ismertetett vizsgálat eredményei azt mutatják, hogy a 6. vegyület PBMC-kben gátolja az LPS-indukált PGHS-2 kifejezést .
68.195/BE

Claims (37)

119 SZABADALMI IGÉNYPONTOK
1 . Egy (la) vagy (Ib) általános képletű vegyület, amelynek képletében
Ql és Q2 mindegyikének jelentése egymástól függetlenül 5-6 tagú aromás karbocikusos vagy heterociklusos csoport, vagy 8-10 tagú, aromás karbociklusos gyűrűket, aromás heterociklusos gyűrűket vagy egy aromás karbocLklusos gyűrűből és egy aromás heterociklusos gyűrűből álló kombinációt tartalmazó biciklusos csoport; ahol
Ql a következők közül egymástól függetlenül kiválasztott. 1-4 csoporttal és/vagy atommal szubsztituált: halogénatom; 1-3 szénatomos alkilcsoport, amely adott esetben -NR' 2, -OR' / -CO2R' vagy -CONR' 2 általános képletű csoporttal szubsztituált; 1-3 szénatomos alkoxicsoport, amely adott esetben -NR' ír -OR' r -CO2R' vagy -CONR' 2 általános képletű csoporttal szubsztituált; -NR' 2 általános képletű csoport; trifluor-metoxi-; trifLuor-metil-; nitrocsoport; -CO2R' ;
- CONR'2; -SR' ; -S(O)2N(R' ) 2 általános képletű csoport; (tri4 fluor-metil)-tio-; cianocsoport; -N(R')C(O)R ;
- N (R' ) C (0) OR4; -N (R' ) C (0 ) C (0) R4; -N (R' ) S (0 ) 2R4; -N(R' ) R4;
4 4 4
- N(R ) 2; -OR ; -0C(0)R általános képletű csoport; -OP(O)3H2 képletű csoport; vagy -N=C-N(Rz )2 általános képletű csoport; és
Q2 a következők közül egymástól függetlenül kiválasztott egy vagy több csoporttal és/vagy atommal adott esetben legfeljebb négyszeresen szubsztituált: halogénatom; 1-3 szénato68.195/BE
120 mos, egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, amely adott
3 esetben -NR' 2, -OR' , -CO2R' t -S (0) 2N (R' ) 2, -N-C-N (R' ) 2r “R vagy -CONR' 2 általános képletű csoporttal szubsztituált; 1-3 szénatomos alkoxicsoport, amely adott esetben -NR' 2, -OR' , -CO2R' , -S (0) 2N (R' ) 2, -N=C-N(R')2, -R3 vagy -CONR' 2 általános képletű csoporttal szubsztituált; -NR' 2 általános képletű csoport; trifluor-metoxi-; trifluor-metil-; nitrocsoport;
- CO2R' ; -CONR' 2; -R3; -OR3; -NKR3; -N(R3)2; -SR ,· -C(O)R!;
3 3
-C(0)N(R' )R; -C(O)OR; -SR' ; -S(O)2N(R')2 általános képletú csoport; (trifluor-metil)-tio-csoport; -N=C-N(R' )2 általános képletű csoport; vagy cianocsoport;
R' jelentése hidrogénatom, 1-3 szénatomos alkilcsoport, 2-3 szénatomos alkenil- vagy alkinilcsoport, fenilcsoport, amely adott esetben a következők közül egymástól függetlenül kiválasztott 1-3 atommal és/vagy csoporttal szubsztituált: halogénatom, metoxi-, ciano-, nitro-, amino-, hidroxi-, metilés/vagy etilcsoport;
R jelentése 5-6 tagú aromás karbociklusos vagy heterociklusos csoport;
R jelentése adott esetben -N(R' )2, -OR' , -C02R' , -CON (R' )2 vagy -SO2N(R ) 2 általános képletű csoporttal szubsztituált 1-4 szénatomos alkilcsoport; vagy adott esetben -N(R')2, 2
-OR' , -CO2R' , -CON(R' )2 vagy -SO2N (R )2 általános képletű csoporttal szubsztituált, 5-6 tagú karbociklus vagy heterociklusos csoport;
X jelentése tio-, oxi-, szulfonil-, szulfinilcsoport, -S(0)2“ 2 2 2 2
-N(R)-, -N(R )-S (0)2-, -N (R )-C (0)0-, -0-C (0)-N (R ) - álta- ss .195/BE
121 lános képletű csoport, karbonilcsoport, -C(0)0-, -0-C(0)2 22 képletű csoport, -C(O)-N(R -N(R ) -C(0) -, -N(R )-,
- C(R ) 2~ vagy -C(OR ) 2- általános képletű csoport;
R mindegyikének jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 2222 22
- R , -N(R )2, -OR, -SR , -C(O)-N(R)2, -S(O)2-N(R)2 vagy 2
- C(O)-OR általános képletű csoport, ahol két szomszédos R szubsztituens adott esetben egymáshoz kapcsolódik, és azokkal az Y szubsztituensekkel együtt, amelyekhez kötődnek, 4-8 tagú karbociklusos vagy heterociklusos gyűrűt képeznek;
R^ jelentése hidrogénatom, 1-3 szénatomos alkilcsoport vagy 2-3 szénatomos alkenilcsoport, amelyek mindegyike adott esetben -N(R')2, -OR' , -SR' , -C(O)-N(R' )2, -S (0) 2-N (R' ) 2, -0(0)-OR' vagy -R3 általános képletű csoporttal szubsztituált;
Y jelentése nitrogénatom vagy szénatom;
A jelentése — ha jelen van — nitrogénatom vagy =C(R' )- általános képletű csoport;
n értéke 0 vagy 1; és
Rí jelentése hidrogénatom, 1-3 szénatomos alkilcsoport, hidroxicsoport vagy 1-3 szénatomos alkoxicsoport.
2. Egy (Ic) vagy (Id) általános képletű vegyület, amelyben
A, Qi, Q2, R, R' , X és Y jelentése, valamint n értéke azonos az (la) és (IB) általános képletű vegyületeknél meghatározottakkal; és
5 4 4
R jelentése hidrogénatom, -C (R' ) 20H, -C(0)R , -C(0)0R , —C (R' ) 2OPO3H2 általános képletű csoport vagy -PO3H2 képletű csoport.
3. Egy (Ie), (If), (lg) vagy (Ih) általános képletű vegyület,
68.195/BE
122 amelyben
A , Qu Q2, R, R' , X és Y jelentése, valamint n értéke az 1. igénypontban meghatározott; és
Qj jelentése 5-6 tagú aromás karbocikusos vagy heterociklusos csoport, vagy 8-10 tagú, aromás karbociklusos gyűrűket, aromás heterociklusos gyűrűket vagy egy aromás karbociklusos gyűrűből és egy aromás heterociklusos gyűrűből álló kombinációt tartalmazó biciklusos csoport, ahol Q3 a következők közül egymástól függetlenül kiválasztott 1-4 csoporttal és/vagy atommal szubsztituált: halogénatom; 1-3 szénatomos alkilcsoport, amely adott esetben -NR' 2, -OR' , -CO2R' vagy -CONR' 2 általános képletű csoporttal szubsztituált; 1-3 szénatomos alkoxicsoport, amely adott esetben -NR' 2, -OR' , -CO2R' vagy -CONR' 2 általános képletű csoporttal szubsztituált; -NR' 2 általános képletű csoport; trifluor-metoxi-; trifluor-metil-; nitrocsoport; -CO2R' ; -CONR' 2; -SR' ' -S(O)2N(R')2 általános képletű csoport; (trifluor-metil)4 4
- tio-; cianocsoport; -N(R' )C(O)R ; -N (R' )C(O)OR ;
4 4 4 4 4
- N (R' ) C (0) C (0) R ; -N (R' ) S (0) 2R ; -N(R')R; -N(R)2; -OR;
- OC(O)R általános képletű csoport; -OP(O)3H2 kepletu csoport; vagy -N=C-N(R' )2 általános képletű csoport.
4. Egy 1-3. igénypontok bármelyike szerinti vegyület, amelyben Qi jelentése 1-3-szorosan szubsztituált fenil- vagy piridilcsoport, ahol a szubsztituensek legalább egyike orto-helyzetű, és ahol a szubsztituensek egymástól függetlenül a következő atomok és/vagy csoportok közül kerülnek kiválasztásra: klór-, fluor-, brómatom, metil-, metoxi-, hidroxi-, trifluor-metil-, tri es .195/BE
123 fluor-metoxi-, propoxi-, amino-, 3,4-(metilén-dioxi)-, dimetil-amino-, (fenil-szulfonil)-amino-, {[(4-piridil)-metoxi]-karbonil}-amino-, (morfolinil-acetil)-amino-, [(dimetil-amino)-acetil] -amino-, (piperazinil-acetil)-amino-, (pirrolidinil-acetil)-amino-, (morfolinil-oxalil)-amino-, (piperazinil-oxalil)-amino-, (pirrolidinil-oxalil)-amino-, (dimetil-amino)-acetoxi- vagy 2-(dimetil-amino)-etoxi-csoport.
5. Egy 4. igénypont szerinti vegyület, amelyben Qt Legalább két szubsztituenst tartalmaz, amelyek mindegyike orto-helyzetben van.
6. Egy 4. igénypont szerinti vegyület, amelyben Qi jelentése
OCH3 f ’ ^C. * f * l οίγ^οοΗ3 h3c> f 0CH3 OCH3 =3 r r CH3 Η2Νύ^ ^X3CH3 f /
68.195/BE
124 -
68.195/BE
125 -
68.195/BE
126 -
képletű csoport.
7. Egy 6. igénypont szerinti vegyület, amelyben Qi jelentése 2-fluor-6-(trifluor-metil)-fenii-, 2,6-difluor-fenil-, 2,6-diklór-fenil-, 2-klór-4-hidroxi-fenil-, 2-klór-4-amino-fenii-, 2,6-diklór-4-amino-fenil-, 2,6-diklór-3-amino-fenil-, 2,6-dimetil-4-hidroxi-fenil-, 2-metoxi-3,5-diklór-4-piridil-, 2-klór-4,5-(metilén-dioxi)-fenii- vagy 2-klór-4-[(morfolino-acetil)-amino]-fenil-csoport.
8. Egy 1-3. igénypontok bármelyike szerinti vegyület, amelyben Q2 jelentése adott esetben 1-3-szorosan szubsztituált fenilvagy piridilcsoport, ahol a szubsztituensek egymástól függetlenül a következő atomok és/vagy csoportok közül kerülnek kiválasztásra: klór-, fluor-, brómatom, metil-, etil-, izopropil·-, metoxi-, hidroxi-, amino-, trifluor-metil-, trifluor-metoxi-, metil-tio-, karboxi-, metoxi-karbonil-, amino-metil-, dimetil-amino-, pirrolidinil-metil- és hidroxi-metil-csoport.
9. Egy 8. igénypont szerinti vegyület, amelyben Q2 jelentése
68.195/BE
127 -
68.195/BE
128 -
68 . 1 95/BE
129 -
képletű csoport, szubsztituálatlan 2-piridilcsoport vagy szubsztituálatlan fenilcsoport.
10. Egy 9. igénypont szerinti vegyület, amelyben jelentése fenii-, 2-izopropil-fenil-, 3,4-dimetil-fenil-, 2-etil-fenil-, 3-fluor-fenil-, 2-metil-fenil-, 3-klór-4-fluor-fenil-, 3-klór-fenil-, 2-(metoxi-karbonil)-fenii-, 2-karboxi-fenil-, 2-metil-4-klór-fenil-, 2-bróm-fenil-, 2-piridil-, 2-(hidroxi-metil)-fenii-, 4-f luor-fenil-, 2-metil-4-fluor-fenil-, 2-klór-4-f luor-fenil-, 2,4-difluor-fenil-, 2-hidroxi-4-fluor-fenil- vagy 2-(hidroxi-metil)-4-fluor-feni1-csoport.
11. Egy 1-3. igénypontok bármelyike szerinti vegyület, amelyben X jelentése tio-, oxi-, szulfonil-, szulfinilcsoport, -N(R)~, -c (R)2 - általános képletű csoport vagy karbonilcsoport.
12. Egy 10. igénypont szerinti vegyület, amelyben X jelentése tiocsoport.
13. Egy 1-3. igénypontok bármelyike szerinti vegyület, amelyben n értéke 1, és A jelentése nitrogénatom.
14. Egy 1-3. igénypontok bármelyike szerinti vegyület, amely
68.195/BE
130 ben Y mindegyikének jelentése szénatom.
15. Egy 14. igénypont szerinti vegyület, amelyben az Y-hoz kapcsolódó R mindegyikének jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport.
16. Egy 1. igénypont szerinti vegyület, amely az 1. táblázat szerinti 2., 3. vagy 5-53. vegyület közül kerül kiválasztásra.
17. Egy 2. igénypont szerinti vegyület, amely a 2. táblázat szerinti 101-145. vegyület közül kerül kiválasztásra.
18. Egy 3. igénypont szerinti vegyület, amelyben Qj 2-4szeresen szubsztituált, ahol a szubsztituensek közül legalább egy orto-helyzetben van a Q3 komponensnek az inhibitor további részéhez kapcsolódó pontjához viszonyítva.
19. Egy 18. igénypont szerinti vegyület, amelyben az ortopoziciók mindegyikében van egy egymástól függetlenül kiválasztott említett szubsztituens.
20. Egy 19. igénypont szerinti vegyület, amelyben Q3 monociklusos karbociklusos csoportot jelent, amelyben mindkét orto-pozició egymástól függetlenül halogénatommal vagy metilcsoporttal szubsztituált.
21. Egy 19. igénypont szerinti vegyület, amelyben Q3 az ortohelyzetű szubsztituenseken kívül a következő csoportok közül egymástól függetlenül kiválasztott egy vagy két további szubsztituenst is tartalmaz: -NR' 2, -OR' , -CO2R' általános képletű cso4 4 port, cianocsoport, -N (R' )C(O)R , -N (R' )C(O)OR ,
4 44444
-N(R' )C(O)C(O)R , -N(R' )S(O)2R , -N(R' )R , -N (R ) 2, -OR , -OC(O)R általános képletű csoport, -OP(O)3H2 képletű csoport, vagy -N=C-N (R' )2 általános képletű csoport.
68.195/BE
131 -
22. Egy 3. igénypont szerinti vegyület, amely egy (le) általános képletű vegyület, és amely a 3. táblázat szerinti 201. vagy 203-209. vegyület közül kerül kiválasztásra.
23. Egy 3. igénypont szerinti vegyület, amely egy (lg) általános képletű vegyület, és amely a 4. táblázat szerinti 202/301., 302-399. vagy 1301. vegyület közül kerül kiválasztásra.
24. Egy 3. igénypont szerinti vegyület, amely egy (Ih) általános képletű vegyület, és amely az 5. táblázat szerinti 401-412. vegyület közül kerül kiválasztásra.
25. Gyógyszerkészítmény, amely a p38 gátlása szempontjából hatásos mennyiségben egy 1-3. igénypontok bármelyike szerinti vegyületet, valamint gyógyszerészetileg elfogadható hordozót tartalmaz.
26. Eljárás gyulladásos betegségek, autoimmun betegségek, destruktív csontrendellenességek, proliferatív rendellenességek, fertőzéses betegségek, neurodegeneratív betegségek, allergiák, stroke esetén előforduló reperfusio/ischaemia, szívrohamok, angiogén rendellenességek, szervi hypoxia, vascularis hyperplasia, kardiális hipertrófia, trombin-indukált vérlemezke-aggregáció vagy prosztaglandin endoperoxidáz szintetáz-2-vel kapcsolatos állapotok betegekben történő kezelésére vagy megelőzésére, azzal jellemezve, hogy a betegnek beadunk egy 25. igénypont szerinti gyógyszerkészítményt.
27. A 26. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az eljárást akut hasnyálmirigy-gyulladás, krónikus hasnyálmirigy-gyulladás, asztma, allergia vagy felnőtt légzőszervi distressz szindróma kezelésére vagy megelőzésére alkalmazzuk.
68.195/BE
- 132 -
28. A 26. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az eljárást egy, a következő csoportból kiválasztott autoimmun betegség kezelésére vagy megelőzésére alkalmazzuk: glomerulonephritis, rheumatoid arthritis, szisztémás lupus erythematosus, scleroderma, krónikus pajzsmirigygyulladás, Graves-féle betegség, autimmun gastritis, diabétesz, autoimmun haemolyticus anaemia, autoimmun neutropenia, thrombocytopenia, atopic dermatitis, krónikus aktív hepatitis, myasthenia gravis, sclerosis multiplex, gyulladásos bélbetegség, colitis ulcerosa, Crohn-féle betegség, psoriasis vagy graft versus host betegség.
29. A 26. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az eljárást egy, a következő csoportból kiválasztott destruktív csontrendellenesség kezelésére vagy megelőzésére alkalmazzuk: ostoeporosis, osteoarthritis és myeloma multiplexszel kapcsolatos csontrendellenesség.
30. A 26. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az eljárást egy, a következő csoportból kiválasztott proliferatív betegség kezelésére vagy megelőzésére alkalmazzuk: akut mielogén leukémia, krónikus mielogén leukémia, metasztatikus melanoma, Kaposi-féle szarkóma és myeloma multiplex.
31. A 26. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az eljárást egy, a következő csoportból kiválasztott fertőzéses betegség kezelésére vagy megelőzésére alkalmazzuk: szepszis, szeptikus sokk és shigellosis.
32. A 26. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az eljárást egy, a következő csoportból kiválasztott vírusos betegség kezelésére vagy megelőzésére alkalmazzuk: akut
68.195/BE
133 -
hepatitis fertőzés, HIV fertőzés és CMV retinitis.
33. A 26. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az eljárást egy, a következő csoportból kiválasztott neurodegenerativ betegség kezelésére vagy megelőzésére alkalmazzuk: Alzheimer-féle betegség, Parkinson-féle betegség, cerebralis ischaemia és traumás sérülés által okozott neurodegenerativ betegség.
34. A 26. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az eljárást stroke vagy ischaemia myocardii esetén előforduló reperfusio/ischaemia, renalis ischaemia, szívrohamok, szervi hypoxia vagy trombin-indukált vérlemezke-aggregáció kezelésére vagy megelőzésére alkalmazzuk.
35. A 26. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az eljárást egy, a következő csoportból kiválasztott, prosztaglandin endoperoxidáz szintetáz-2-vel kapcsolatos állapot kezelésére vagy megelőzésére alkalmazzuk: ödéma, analgesia, láz vagy fájdalom.
36. A 35. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a fájdalom neuromuscularis fájdalom, fejfájás, rákos fájdalom, fogfájás és arthriticus fájdalom.
37. A A 26. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az eljárást egy, a következő csoportból kiválasztott angiogén rendellenesség kezelésére vagy megelőzésére alkalmazzuk: szolid tumorok, ocularis neovascularisatio vagy csecse-
A meghatalmazott:
Beíicza szabada mőkori haemoangiomák.
Szabad?
zetközi i/i^a tagja L . Z FUdabfe^, Ándrássy út 113. j.-r.m- Fav· u-iA.m
HU0001125A 1996-12-18 1997-12-17 Fused pyrimidine derivatives and their open chain analogues, pharmaceutical compositions thereof HUP0001125A3 (en)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US3428896P 1996-12-18 1996-12-18
US08/822,373 US5945418A (en) 1996-12-18 1997-03-20 Inhibitors of p38
US08/862,925 US6147080A (en) 1996-12-18 1997-06-10 Inhibitors of p38
PCT/US1997/023392 WO1998027098A1 (en) 1996-12-18 1997-12-17 SUBSTITUTED NITROGEN CONTAINING HETEROCYCLES AS INHIBITORS OF p38 PROTEIN KINASE

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUP0001125A2 true HUP0001125A2 (hu) 2000-10-28
HUP0001125A3 HUP0001125A3 (en) 2002-01-28

Family

ID=27364615

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0001125A HUP0001125A3 (en) 1996-12-18 1997-12-17 Fused pyrimidine derivatives and their open chain analogues, pharmaceutical compositions thereof

Country Status (28)

Country Link
US (1) US6147080A (hu)
EP (1) EP0951467B1 (hu)
JP (1) JP4171072B2 (hu)
CN (2) CN1153770C (hu)
AP (1) AP1136A (hu)
AT (1) ATE236165T1 (hu)
AU (1) AU738000B2 (hu)
BG (1) BG64533B1 (hu)
BR (1) BR9714415A (hu)
CA (1) CA2274825C (hu)
CZ (1) CZ299600B6 (hu)
DE (1) DE69720522T2 (hu)
DK (1) DK0951467T3 (hu)
EA (1) EA002855B1 (hu)
EE (1) EE04191B1 (hu)
ES (1) ES2202658T3 (hu)
HU (1) HUP0001125A3 (hu)
ID (1) ID21919A (hu)
IL (1) IL130349A0 (hu)
IS (1) IS5069A (hu)
NO (1) NO315047B1 (hu)
NZ (1) NZ336146A (hu)
PL (1) PL202464B1 (hu)
PT (1) PT951467E (hu)
SK (1) SK284578B6 (hu)
TR (1) TR199902194T2 (hu)
TW (1) TW521071B (hu)
WO (1) WO1998027098A1 (hu)

Families Citing this family (126)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7091181B2 (en) 1994-12-12 2006-08-15 Omeros Corporation Method of inhibition of pain and inflammation during surgery comprising administration of soluble TNF receptors
US6608060B1 (en) * 1996-12-18 2003-08-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of p38
JP2001520170A (ja) 1997-10-16 2001-10-30 ボード・オヴ・リージェンツ，ザ・ユニヴァーシティ・オヴ・テキサス・システム Ｎｆ−ａｔ３機能に関連した心肥大動物モデルと治療法
EP1037639A4 (en) 1997-12-19 2002-04-17 Smithkline Beecham Corp HETEROARYL-SUBSTITUTED IMIDAZOLE COMPOUNDS, THEIR PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS AND USES
MY132496A (en) 1998-05-11 2007-10-31 Vertex Pharma Inhibitors of p38
WO1999061039A2 (en) * 1998-05-22 1999-12-02 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Novel composition for modulating ischemic cell death
US6858617B2 (en) 1998-05-26 2005-02-22 Smithkline Beecham Corporation Substituted imidazole compounds
EP1277740A1 (en) * 1998-06-12 2003-01-22 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of p38
JP2002517486A (ja) 1998-06-12 2002-06-18 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ｐ３８のインヒビター
US6184226B1 (en) 1998-08-28 2001-02-06 Scios Inc. Quinazoline derivatives as inhibitors of P-38 α
AR023659A1 (es) 1998-09-18 2002-09-04 Vertex Pharma Un compuesto inhibidor de p38, una composicion farmaceutica que lo comprende y el uso de dicha composicion en el tratamiento y prevencion de estados patologicos
WO2000017175A1 (en) * 1998-09-18 2000-03-30 Vertex Pharmaceuticals Incorporated INHIBITORS OF p38
EP1261334A1 (en) * 1998-10-20 2002-12-04 Omeros Corporation Irrigation solution containing mapk inhibitors and their use for treating pain and inflammation
JP2002528506A (ja) 1998-11-04 2002-09-03 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション ピリジン−４−イルまたはピリミジン−４−イル置換ピラジン
UA73492C2 (en) 1999-01-19 2005-08-15 Aromatic heterocyclic compounds as antiinflammatory agents
JP2002537397A (ja) 1999-02-22 2002-11-05 ベーリンガー インゲルハイム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 抗炎症剤としての多環ヘテロ環式誘導体
WO2000055152A1 (en) 1999-03-12 2000-09-21 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Aromatic heterocyclic compounds as anti-inflammatory agents
CN1156452C (zh) 1999-03-12 2004-07-07 贝林格尔·英格海姆药物公司 作为消炎剂的化合物
JP2000281588A (ja) * 1999-03-30 2000-10-10 Sankyo Co Ltd ガンの予防又は治療薬及びそのスクリーニング方法
ATE323482T1 (de) * 1999-07-02 2006-05-15 Stuart A Lipton Verwendung von p38 mapk inhibitoren in der behandlung von augenkrankheiten
WO2001004115A2 (en) 1999-07-09 2001-01-18 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Novel process for synthesis of heteroaryl-substituted urea compounds
KR100537241B1 (ko) * 1999-10-21 2005-12-19 에프. 호프만-라 로슈 아게 Ｐ38 단백질 키나제의 억제제로서의 알킬아미노 치환된이중고리 질소 헤테로고리 화합물
WO2001029042A1 (en) * 1999-10-21 2001-04-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Heteroalkylamino-substituted bicyclic nitrogen heterocycles as inhibitors of p38 protein kinase
AU1783201A (en) 1999-11-23 2001-06-04 Smithkline Beecham Corporation 3,4-dihydro-(1h)quinazolin-2-one compounds as csbp/p38 kinase inhibitors
AU1782301A (en) 1999-11-23 2001-06-04 Smithkline Beecham Corporation 3,4-dihydro-(1h)quinazolin-2-one compounds as csbp/p39 kinase inhibitors
US6759410B1 (en) 1999-11-23 2004-07-06 Smithline Beecham Corporation 3,4-dihydro-(1H)-quinazolin-2-ones and their use as CSBP/p38 kinase inhibitors
US6525046B1 (en) 2000-01-18 2003-02-25 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Aromatic heterocyclic compounds as antiinflammatory agents
US6608052B2 (en) 2000-02-16 2003-08-19 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Compounds useful as anti-inflammatory agents
US7235551B2 (en) 2000-03-02 2007-06-26 Smithkline Beecham Corporation 1,5-disubstituted-3,4-dihydro-1h-pyrimido[4,5-d]pyrimidin-2-one compounds and their use in treating csbp/p38 kinase mediated diseases
MXPA02009319A (es) * 2000-03-22 2003-03-12 Vertex Pharma Inhibidores de p38.
WO2002014281A1 (en) * 2000-08-11 2002-02-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyridine derivatives as inhibitors of p38
PE20020506A1 (es) * 2000-08-22 2002-07-09 Glaxo Group Ltd Derivados de pirazol fusionados como inhibidores de la proteina cinasa
US7998507B2 (en) * 2000-09-21 2011-08-16 Elan Pharma International Ltd. Nanoparticulate compositions of mitogen-activated protein (MAP) kinase inhibitors
CN1847229B (zh) 2000-10-23 2011-05-04 史密丝克莱恩比彻姆公司 2，4，8-三取代-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮化合物
US6670357B2 (en) * 2000-11-17 2003-12-30 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating p38 kinase-associated conditions and pyrrolotriazine compounds useful as kinase inhibitors
US6867300B2 (en) * 2000-11-17 2005-03-15 Bristol-Myers Squibb Company Methods for the preparation of pyrrolotriazine compounds useful as kinase inhibitors
WO2002058695A1 (en) * 2000-12-20 2002-08-01 Merck & Co., Inc. (halo-benzo carbonyl)heterocyclo fused phenyl p38 kinase inhibiting agents
CN100376571C (zh) * 2001-02-12 2008-03-26 霍夫曼-拉罗奇有限公司 6-取代的吡啶并嘧啶类化合物
GB0112348D0 (en) * 2001-05-19 2001-07-11 Smithkline Beecham Plc Compounds
GB2375771A (en) * 2001-05-24 2002-11-27 Univ Leeds Decellularisation of tissue implant material
ATE415162T1 (de) * 2001-06-11 2008-12-15 Vertex Pharma Isochinolin-inhibitoren von p38
US20030066998A1 (en) 2001-08-02 2003-04-10 Lee Howard Wing Hoon Quantum dots of Group IV semiconductor materials
US6710366B1 (en) 2001-08-02 2004-03-23 Ultradots, Inc. Nanocomposite materials with engineered properties
US6819845B2 (en) 2001-08-02 2004-11-16 Ultradots, Inc. Optical devices with engineered nonlinear nanocomposite materials
US6794265B2 (en) 2001-08-02 2004-09-21 Ultradots, Inc. Methods of forming quantum dots of Group IV semiconductor materials
US7005669B1 (en) 2001-08-02 2006-02-28 Ultradots, Inc. Quantum dots, nanocomposite materials with quantum dots, devices with quantum dots, and related fabrication methods
GB0124939D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB0124931D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB0124941D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB0124938D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB0124934D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB0124932D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB0124936D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB0124933D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
EP1476840A4 (en) * 2002-01-11 2007-05-09 Vertex Pharma CRYSTALLINE STRUCTURES OF JNK INHIBITION COMPLEXES AND BINDING POCKETS THEREOF
JP2005519895A (ja) * 2002-01-18 2005-07-07 ファルマシア・コーポレーション Ｐ３８阻害剤としての置換ピリダジノン
EP2258687B1 (en) * 2002-02-12 2012-12-26 Glaxosmithkline LLC Nicotinamide derivates useful as P38 inhibitors
DE60319066T2 (de) 2002-02-25 2009-02-26 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc., Ridgefield 1,4-disubstituierte benzokondensierte cycloalkyl-harnstoffverbindungen zur behandlung von zytokinvermittelten erkrankungen
MXPA04009352A (es) * 2002-04-18 2005-01-25 Pharmacia Corp Terapia de combinacion para el tratamiento de la enfermedad de parkinson con inhibidores de ciclooxigenasa-2 (cox2).
EP1499320B1 (en) 2002-04-19 2007-08-22 Smithkline Beecham Corporation Novel compounds
AU2003231034B2 (en) * 2002-04-23 2009-03-05 Bristol-Myers Squibb Company Pyrrolo-triazine aniline compounds useful as kinase inhibitors
US7388009B2 (en) * 2002-04-23 2008-06-17 Bristol-Myers Squibb Company Heteroaryl-substituted pyrrolo-triazine compounds useful as kinase inhibitors
TW200306841A (en) * 2002-04-23 2003-12-01 Bristol Myers Squibb Co Aryl ketone pyrrolo-triazine compounds useful as kinase inhibitors
TW200400034A (en) * 2002-05-20 2004-01-01 Bristol Myers Squibb Co Pyrazolo-pyrimidine aniline compounds useful as kinase inhibitors
NZ537155A (en) * 2002-05-23 2006-09-29 Cytopia Pty Ltd Protein kinase inhibitors
ES2278170T3 (es) 2002-07-09 2007-08-01 BOEHRINGER INGELHEIM PHARMA GMBH &amp; CO.KG Composiciones farmaceuticas de anticolinergicos e inhibidores de la quinasa p38 en el tratamiento de enfermedades respiratorias.
GB0217757D0 (en) 2002-07-31 2002-09-11 Glaxo Group Ltd Novel compounds
WO2004050023A2 (en) 2002-11-27 2004-06-17 Dmi Biosciences, Inc. Treatment of diseases and conditions mediated by increased phosphorylation
GB0308186D0 (en) * 2003-04-09 2003-05-14 Smithkline Beecham Corp Novel compounds
GB0308201D0 (en) * 2003-04-09 2003-05-14 Smithkline Beecham Corp Novel compounds
GB0308185D0 (en) * 2003-04-09 2003-05-14 Smithkline Beecham Corp Novel compounds
ATE482200T1 (de) * 2003-05-01 2010-10-15 Bristol Myers Squibb Co Als kinaseinhibitoren geeignete arylsubstituierte pyrazolamidverbindungen
EP2251343A1 (en) 2003-05-15 2010-11-17 Arqule, Inc. Imidazothiazoles as p38-kinase-inhibitors
CA2528438A1 (en) * 2003-06-03 2005-01-06 Novartis Ag P-38 inhibitors
PL1641764T3 (pl) 2003-06-26 2011-12-30 Novartis Ag Inhibitory kinazy P38 na bazie 5-członowych heterocykli
WO2005007632A1 (en) * 2003-07-18 2005-01-27 Pharmacia Corporation Substituted pyridazinones as inhibitors of p38
CN101337944A (zh) 2003-07-25 2009-01-07 诺瓦提斯公司 p38激酶抑制剂
GB0318814D0 (en) * 2003-08-11 2003-09-10 Smithkline Beecham Corp Novel compounds
US7419978B2 (en) * 2003-10-22 2008-09-02 Bristol-Myers Squibb Company Phenyl-aniline substituted bicyclic compounds useful as kinase inhibitors
CN102127056B (zh) 2003-12-03 2013-08-21 Ym生物科学澳大利亚私人有限公司 微管蛋白抑制剂
GB0402143D0 (en) * 2004-01-30 2004-03-03 Smithkline Beecham Corp Novel compounds
WO2006010082A1 (en) 2004-07-08 2006-01-26 Arqule, Inc. 1,4-disubstituted naphtalenes as inhibitors of p38 map kinase
US7504521B2 (en) * 2004-08-05 2009-03-17 Bristol-Myers Squibb Co. Methods for the preparation of pyrrolotriazine compounds
US20060035893A1 (en) 2004-08-07 2006-02-16 Boehringer Ingelheim International Gmbh Pharmaceutical compositions for treatment of respiratory and gastrointestinal disorders
PE20060421A1 (es) 2004-08-12 2006-06-01 Bristol Myers Squibb Co Procedimiento para preparar un compuesto de pirrolotriazina anilina como inhibidores de cinasa
WO2006021848A1 (en) * 2004-08-27 2006-03-02 Ranbaxy Laboratories Limited Anti-inflammatory agents
US20080051416A1 (en) * 2004-10-05 2008-02-28 Smithkline Beecham Corporation Novel Compounds
CA2584368A1 (en) 2004-10-19 2006-04-27 Arqule, Inc. Synthesis of imidazooxazole and imidazothiazole inhibitors of p38 map kinase
PE20060777A1 (es) 2004-12-24 2006-10-06 Boehringer Ingelheim Int Derivados de indolinona para el tratamiento o la prevencion de enfermedades fibroticas
US20060178388A1 (en) * 2005-02-04 2006-08-10 Wrobleski Stephen T Phenyl-substituted pyrimidine compounds useful as kinase inhibitors
PE20061193A1 (es) 2005-03-25 2006-12-02 Glaxo Group Ltd DERIVADOS DE 3,4-DIHIDROPIRIMIDO[4,5-d]PIRIMIDIN-2-[1H]-0NA COMO INHIBIDORES DE QUINASA p38
UY29440A1 (es) 2005-03-25 2006-10-02 Glaxo Group Ltd Nuevos compuestos
EP1868612A4 (en) 2005-03-25 2010-03-24 Glaxo Group Ltd NOVEL CONNECTIONS
CN101495475A (zh) 2005-03-25 2009-07-29 葛兰素集团有限公司 制备吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮和3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮衍生物的方法
US20060235020A1 (en) * 2005-04-18 2006-10-19 Soojin Kim Process for preparing salts of 4-[[5-[(cyclopropylamino)carbonyl]-2-methylphenyl]amino]-5-methyl-N-propylpyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazine-6-carboxamide and novel stable forms produced therein
GB0512429D0 (en) * 2005-06-17 2005-07-27 Smithkline Beecham Corp Novel compound
US7473784B2 (en) * 2005-08-01 2009-01-06 Bristol-Myers Squibb Company Benzothiazole and azabenzothiazole compounds useful as kinase inhibitors
CN101273039A (zh) * 2005-08-12 2008-09-24 默克公司 可用作p38激酶抑制剂的杂二环化合物
BRPI0617948A2 (pt) 2005-10-28 2011-08-09 Takeda Pharmaceutical composto, pró-droga de um composto, agente farmacêutico, método para inibir uma metaloproteinase de matriz, e, uso de um composto
KR20080107408A (ko) * 2006-03-07 2008-12-10 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 키나제 억제제로서 유용한 피롤로트리아진 아닐린 전구약물화합물
EP2468717B1 (en) 2006-10-27 2013-11-20 Bristol-Myers Squibb Company Heterocyclic Amide Compounds Useful as Kinase Inhibitors
US7943617B2 (en) 2006-11-27 2011-05-17 Bristol-Myers Squibb Company Heterobicyclic compounds useful as kinase inhibitors
EP2131858A4 (en) * 2007-03-20 2011-11-23 Cadila Pharmaceuticals Ltd P38 INHIBITORS
EP1992344A1 (en) 2007-05-18 2008-11-19 Institut Curie P38 alpha as a therapeutic target in pathologies linked to FGFR3 mutation
EP2108641A1 (en) * 2008-04-11 2009-10-14 Laboratorios Almirall, S.A. New substituted spiro[cycloalkyl-1,3'-indo]-2'(1'H)-one derivatives and their use as p38 mitogen-activated kinase inhibitors
EP2111861A1 (en) 2008-04-21 2009-10-28 Ranbaxy Laboratories Limited Compositions of phosphodiesterase type IV inhibitors
WO2009155389A1 (en) * 2008-06-20 2009-12-23 Bristol-Myers Squibb Company Triazolopyridine compounds useful as kinase inhibitors
US8338604B2 (en) 2008-06-20 2012-12-25 Bristol-Myers Squibb Company Imidazopyridine and imidazopyrazine compounds useful as kinase inhibitors
WO2010038428A1 (ja) * 2008-09-30 2010-04-08 武田薬品工業株式会社 タキサン系抗がん剤の置き換え薬
US8450363B2 (en) 2009-02-06 2013-05-28 Elan Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of Jun N-terminal kinase
GB0902648D0 (en) 2009-02-17 2009-04-01 Argenta Discovery Ltd Pharmaceutical compounds and compositions
GB0908317D0 (en) * 2009-05-14 2009-06-24 Argenta Discovery Ltd Pharmaceutical compounds and compositions
WO2012031057A1 (en) 2010-09-01 2012-03-08 Bristol-Myers Squibb Company Bms- 582949 for the treatment of resistant rheumatic disease
EP2707369B1 (en) * 2011-05-09 2016-07-27 Eip Pharma, LLC Compositions and methods for treating alzheimer's disease
EP3553169B1 (en) 2011-12-28 2021-11-03 Kyoto Prefectural Public University Corporation Normalization of culture of corneal endothelial cells
CN103772392A (zh) * 2012-10-23 2014-05-07 杨子娇 一类治疗房角狭窄的化合物及其用途
JP6730701B2 (ja) 2013-11-14 2020-07-29 学校法人同志社 細胞増殖促進または細胞障害抑制による角膜内皮治療薬
US9579322B2 (en) 2014-07-09 2017-02-28 Eip Pharma, Llc Methods for treating neurologic disorders
DK3368052T3 (da) 2015-10-27 2022-03-14 Childrens Hospital Med Ct Anvendelse af mapk-hæmmere for at nedbringe tabet af hæmatopoietiske stamceller under ex vivo-dyrkning og -genmanipulation
US20190060286A1 (en) 2016-02-29 2019-02-28 University Of Florida Research Foundation, Incorpo Chemotherapeutic Methods
WO2019056003A1 (en) 2017-09-18 2019-03-21 Eip Pharma, Llc CO-CRYSTALS FROM NEFLAMAPIMOD (VX -745)
KR20200067170A (ko) 2017-10-05 2020-06-11 풀크럼 쎄러퓨틱스, 인코포레이티드 FSHD의 치료를 위하여 DUX4 및 하류 유전자 발현을 저감시키는 p38 키나제 저해제
US10342786B2 (en) 2017-10-05 2019-07-09 Fulcrum Therapeutics, Inc. P38 kinase inhibitors reduce DUX4 and downstream gene expression for the treatment of FSHD
SMT202200134T1 (it) 2018-03-08 2022-05-12 Incyte Corp Composti di amminopirazindiolo come inibitori di pi3k-y
US11046658B2 (en) 2018-07-02 2021-06-29 Incyte Corporation Aminopyrazine derivatives as PI3K-γ inhibitors
JP2022509271A (ja) * 2018-11-30 2022-01-20 シャンハイ ファーマシューティカルズ ホールディング カンパニー，リミティド 窒素含有ヘテロシクリル系化合物及びその組成物、製造方法並びに使用

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5716972A (en) * 1993-01-13 1998-02-10 Smithkline Beecham Corporation Pyridyl substituted imidazoles
IL110296A (en) * 1993-07-16 1999-12-31 Smithkline Beecham Corp Imidazole compounds process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
AU6691994A (en) * 1994-02-10 1995-08-29 Vladimir Ivanovich Ivanov Device for phono-electrophoresis
US5559137A (en) * 1994-05-16 1996-09-24 Smithkline Beecham Corp. Compounds
CA2210322A1 (en) * 1995-01-12 1996-07-18 Smithkline Beecham Corporation Novel compounds
US5717100A (en) * 1995-10-06 1998-02-10 Merck & Co., Inc. Substituted imidazoles having anti-cancer and cytokine inhibitory activity
ATE433446T1 (de) * 1995-10-06 2009-06-15 Merck & Co Inc Substituierte imidazole mit krebsremmender und cytokininhibierender wirkung
GB9523675D0 (en) * 1995-11-20 1996-01-24 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
ZA97175B (en) * 1996-01-11 1997-11-04 Smithkline Beecham Corp Novel substituted imidazole compounds.
WO1997044467A1 (en) * 1996-05-20 1997-11-27 Signal Pharmaceuticals, Inc. MITOGEN-ACTIVATED PROTEIN KINASE p38-2 AND METHODS OF USE THEREFOR
EP0906307B1 (en) * 1996-06-10 2005-04-27 Merck & Co., Inc. Substituted imidazoles having cytokine inhibitory activity
GB9613021D0 (en) * 1996-06-21 1996-08-28 Pharmacia Spa Bicyclic 4-aralkylaminopyrimidine derivatives as tyrosine kinase inhibitors
WO1998002430A1 (en) * 1996-07-11 1998-01-22 Pfizer Pharmaceuticals Inc. Pyridylpyrrole compounds useful as interleukin- and tnf antagonists
WO1998006715A1 (en) * 1996-08-09 1998-02-19 Smithkline Beecham Corporation Novel piperazine containing compounds
US5945418A (en) * 1996-12-18 1999-08-31 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of p38

Also Published As

Publication number Publication date
AP1136A (en) 2003-01-31
NO992960L (no) 1999-08-17
DE69720522T2 (de) 2003-11-27
EP0951467A1 (en) 1999-10-27
WO1998027098A1 (en) 1998-06-25
TW521071B (en) 2003-02-21
ID21919A (id) 1999-08-12
ES2202658T3 (es) 2004-04-01
CA2274825C (en) 2008-08-26
PT951467E (pt) 2003-08-29
CZ216399A3 (cs) 1999-09-15
IS5069A (is) 1999-06-07
DE69720522D1 (de) 2003-05-08
ATE236165T1 (de) 2003-04-15
AU5610598A (en) 1998-07-15
EE9900252A (et) 1999-12-15
EA199900559A1 (ru) 2000-02-28
CN1244867A (zh) 2000-02-16
NO992960D0 (no) 1999-06-17
TR199902194T2 (xx) 2000-06-21
CN1519240A (zh) 2004-08-11
CA2274825A1 (en) 1998-06-25
SK80599A3 (en) 2000-01-18
EP0951467B1 (en) 2003-04-02
BR9714415A (pt) 2000-04-18
CN1153770C (zh) 2004-06-16
PL334133A1 (en) 2000-02-14
NO315047B1 (no) 2003-06-30
US6147080A (en) 2000-11-14
NZ336146A (en) 2000-09-29
BG103575A (en) 2000-06-30
CN1284783C (zh) 2006-11-15
CZ299600B6 (cs) 2008-09-17
HUP0001125A3 (en) 2002-01-28
DK0951467T3 (da) 2003-07-21
EE04191B1 (et) 2003-12-15
AU738000B2 (en) 2001-09-06
JP4171072B2 (ja) 2008-10-22
SK284578B6 (sk) 2005-07-01
PL202464B1 (pl) 2009-06-30
EA002855B1 (ru) 2002-10-31
HK1023340A1 (en) 2000-09-08
JP2001506266A (ja) 2001-05-15
BG64533B1 (bg) 2005-06-30
IL130349A0 (en) 2000-06-01
AP9901565A0 (en) 1999-06-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HUP0001125A2 (hu) Kondenzált pirimidinszármazékok és nyílt láncú analógjaik, valamint az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények
US6632945B2 (en) Inhibitors of P38
US7598277B2 (en) Inhibitors of p38
US8338412B2 (en) Inhibitors of P38
AU2001283237A1 (en) Pyridine derivatives as inhibitors of p38
HK1023340B (en) Substituted nitrogen containing heterocycles as inhibitors of p38 protein kinase
MXPA00011076A (en) Heterocyclic inhibitors of p38
HK1034907B (en) Heterocyclic inhibitors of p38
KR20000069537A (ko) ｐ38 프로테인 키나아제의 저해제로서 치환된 질소를 함유하는헤테로사이클
HK1131783A (en) Heterocyclic inhibitors of p38

Legal Events

Date Code Title Description
FA9A Lapse of provisional patent protection due to relinquishment or protection considered relinquished