HU222888B1

HU222888B1 - Anilid vegyületek alkalmazása I típusú allergiás betegségek megelőzésére és kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmények előállítására

Info

Publication number: HU222888B1
Application number: HU9701910A
Authority: HU
Inventors: Yukio Amano; Yuko Mizushima; Kenji Ogata
Original assignee: Hoechst Pharmaceuticals & Chemicals K.K.
Priority date: 1994-10-17
Filing date: 1995-10-04
Publication date: 2003-12-29
Also published as: CA2202904C; DE69518159D1; FI971584A7; ES2148561T3; CA2202904A1; ZA958708B; FI971584A0; WO1996011682A1; NO315928B1; TW429146B; AU3618695A; NO971743L; HUT77135A; ATE194912T1; NO971743D0; KR100365064B1; DE69518159T2; GR3034413T3; IL115617A; EP0787491A1

Abstract

A találmány tárgya (I) általános képletű anilidvegyületek(I) – a képletben R1 jelentése trifluor-metil- vagy cianocsoport, vagyhalogénatom, R2 jelentése hidrogénatom vagy egyenes, vagy elágazóláncú 1–4 szénatomos alkilcsoport és R3 jelentése (II) vagy (III)általános képletű csoport – (II) (III) a képletekben R4 jelentése egyenes vagy elágazó láncú 1–4szénatomos alkilcsoport, egyenes vagy elágazó láncú 2–6 szénatomos al-kinilcsoport vagy 3–6 szénatomos cikloalkilcsoport – vagy valamelysztereoizomerje vagy fiziológiásan elfogadható sója alkalmazása Itípusú allergiás betegségek megelőzésére vagy kezelésére alkalmasgyógyszerek előállítására. ŕ

Description

A találmány anilidvegyületek alkalmazására vonatkozik I típusú allergiás betegségek megelőzésére és kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmények előállításánál.

Az allergiás betegségeket I-IV típusú betegségcsoportokba oszthatjuk. A betegségek szempontjából az I típusú allergiás betegségek közé tartozik a szénanátha, asztma, atopiás dermatitis, és más hasonlók, a II típusú betegségek közé tartoznak az autoimmun hemolitikus anémia, autoimmun trombopenia, és más hasonlók, a III típusú betegségek közé tartozik a bakteriális endocarditis, a szisztémás lupus erythematosus és más hasonlók, a IV típusúak közé tartozik a tubercolosis, leishmaniasis, listeriosis és más hasonlók.

Az I típusú allergiás betegséget kiváltó mechanizmusokat általánosságban az alábbiakban részletezzük. Ha különböző allergének, így például pollenek, atkák és más hasonlók perkután vagy a légzőszervek, vagy az emésztőszervek nyálkahártyáin keresztül az élő szervezetbe jutnak, az ezen allergénekkel szembeni E-immunoglobulin (a továbbiakban IgE) képződik, és ez az IgE a basophiliás leukocitákhoz vagy hízósejtekhez kötődik receptoron keresztül. Ha ismételten allergén kerül oda, ahol IgE kötődik a basophiliás leukocitákhoz vagy hízósejtekhez receptoron keresztül, azaz érzékenyített körülmények közé kerül, az allergén az érzékenyített basophiliás leukocitákhoz vagy hízósejtekhez kötődhet, amelyekről kémiai közvetítők, így például hisztamin, leukotrién, szerotonin és más hasonlók szabadulhatnak fel. Ezek a felszabadult anyagok a légzőtraktus és a véredények sima izmainak összehúzódását indukálhatják, továbbá vazopermeabilitás-gyorsítást, a légzőtraktusban a nyálkahártyák ödémáját, valamint nyálkahártyakiválást gyorsító hatást fejthetnek ki, és így kialakulhatnak az I típusú allergiás tünetek, így például a bronchiális asztma, dermális bőrgyulladás és más hasonlók (Immunology Illustrated (eredeti, 2. kiadás: a fordítást felülvizsgálta Tomio Tada).

Az allergiás betegségek kezelésére például széles körben alkalmazzák a következőket: kémiai közvetítők felszabadulását gátló anyagok, ilyen például az Intal® (Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd., generic név: Disodium cromoglycate), kémiaiközvetítő-felszabadulást gátló és antagonisztikus szerek, így például Celtec® (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd., generic név: Oxatomide), Rizaben® (Kissei Pharmaceutical Co., Ltd., generic név: Tranilast), valamint szintetikus adrenokortikális hormonok, így például prednisolon. Ezen gyógyszerek hatásmechanizmusa az, hogy gátolják a kémiai közvetítők felszabadulását, amelyek az allergiás tüneteket váltják ki, vagy antagonizálják a kémiai közvetítőket, és így megakadályozzák, hogy ez a kémiai közvetítő a megfelelő receptorhoz kötődjön. Alkalmazhatók továbbá gyulladásgátló vagy immunoszupresszív hatású adrenokortikális hormonok is. Ezen gyógyszerekkel kapcsolatos problémák, hogy ezek egyszerűen csak a tünetek kezelésére alkalmasak, akkor kezdik szedni, amikor az allergének már a szervezetbe kerültek és a tünetek kialakultak, de magát az allergiás hajlamot, amelyet a magas vér-IgE-érték jellemez, egyáltalán nem kezelik.

A találmányunk célja gyógyszerkészítmények biztosítása, amelyek radikálisan képesek megakadályozni vagy gyógyítani az I típusú allergiás betegségeket azáltal, hogy gátolják az IgE kialakulását, amely a közvetlen kiváltója az I típusú allergiás betegségeknek.

A fentiek alapján a találmányunk (I) általános képletű anilidvegyület

vagy annak valamely sztereoizomeqének, vagy fiziológiailag elfogadható sójának alkalmazására vonatkozik I típusú allergiás betegségek megelőzésére és kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmények előállításához, - amely képletben

R, jelentése trifluor-metil- vagy cianocsoport, vagy halogénatom,

R₂ jelentése hidrogénatom vagy egyenes, vagy elágazó láncú 1 -4 szénatomos alkilcsoport és

R₃ jelentése (II) vagy (III) általános képletű csoport -

a képletekben

Rí jelentése egyenes vagy elágazó láncú 1-4 szénatomos alkilcsoport, egyenes vagy elágazó láncú 2-6 szénatomos alkinilcsoport vagy 3-6 szénatomos cikloalkilcsoport -.

Az I típusú allergiás betegségek megelőzésére vagy kezelésére ezen találmány szerinti készítményeket adagoljuk a humán egyedeknek vagy emlősöknek.

A fenti (I) általános képletnél az R1-R4 szubsztituensek jelentésében a halogénatom lehet fluor-, klór-, bróm- vagy jódatom, előnyösen klór- vagy brómatom. Az egyenes vagy elágazó láncú 1-4 szénatomos alkilcsoport lehet például metil-, etil-, η-propil-, izopropil-, η-butil-, iozobutil-, terc-butil-csoport, előnyösek az egyenes vagy elágazó láncú 1-2 szénatomos alkilcsoportok.

Az egyenes vagy elágazó láncú 2-6 szénatomos alkinilcsoport lehet például etinil-, propargil-, l-metil-2propinil-, 2- vagy 3-butinil-, l-metil-2-butinil-, 3-, 4vagy 6-hexinilcsoport, különösen előnyösek a 2-4 szénatomos alkinilcsoportok. A 3-7 szénatomos cikloalkilcsoport lehet például ciklopropil-, ciklobutil-, ciklopentil-, ciklohexil- vagy cikloheptilcsoport, különösen előnyösek a 3-5 szénatomos cikloalkilcsoportok. Rj jelentése előnyösen trifluor-metil-csoport, klórvagy brómatom vagy cianocsoport, R₂ jelentése előnyösen hidrogénatom, metil- vagy etilcsoport, R₃ jelentése izoxazolcsoport vagy egy (II) vagy (III) általános képletű csoport, amelyben R₄ jelentése metil-, etil-, propil-, alkil-, 2-butenil-, propargil-, 2-butinil-, ciklopropil2

HU 222 888 Β1 vagy ciklobutilcsoport. Előnyösként említjük például a következő (I) általános képletű vegyületek körébe tartozó vegyületeket:

5-metil-izoxazol-4-karbonsav-N-(4-trifluor-metil)anilid (generic név: leflunomide),

N-(4-trifluor-metil-fenil)-2-ciano-3-hidroxi-krotonamid (A vegyület),

2-ciano-3-ciklopropil-3-oxo-N-metil-(4-klór-fenil)propionamid (C vegyület),

2-ciano-3-ciklopropil-3-oxo-(4-ciano-fenil)-propionarnid (D vegyület),

2-ciano-3-oxo-N-[4-(trifluor-metil)-fenil]-6-heptinamid (E vegyület).

A leflunomidről ismert, hogy a farmakológiailag aktív (A) vegyületté alakul gyors metabolizmus révén az adagolást követően.

A leflunomid LD₅₀-értéke (po.) 445 mg/kg egerek és 235 mg/kg patkányok esetében (Investigators’s Broschure, Version 3: Lefulnomide (HWA 486), 1989. október, javítva 1991. augusztus). A korábbi vizsgálatokkal, amelyeknél beteg állatokat alkalmaztak, kimutatták, hogy a leflunomid és a fentiek szerinti (A) vegyület hatással van az autoimmun betegségekre, így például az ízületi reumára, szisztémás lupus erythematosusra és más hasonlókra (Japanese Patent Laid Open to Public No. Sho 62-72614, Bartlett, R. és munkatársai, Springer Sémin Immunopathol (1993), 14: 381-394). Ismert továbbá, hogy a leflunomid inhibíciós hatású hízósejteknél hisztaminfelszabadulásra. (Bartlett, R. és munkatársai, Springer Sémin Immunopathol (1993), 14: 381-394). Ennek alapján várható, hogy a leflunomid inhibíciós hatású a kémiai közvetítők felszabadulására az allergiás betegségeknél felhasználásra kerülő szokásos terápiás szerekhez hasonlóan.

A fentiekben említett C-D vegyületeket a 288048/1993 számú közzétett japán szabadalmi bejelentésben, a fentiekben említett E vegyületet az EPA 551230 számú szabadalmi bejelentésben ismertetik, és ismert, hogy ezek gyulladásgátló hatásúak.

Az elvégzett igen sokrétű vizsgálatok alapján felismertük, hogy az (I) általános képletnek megfelelő anilidvegyületek hatásosan képesek az IgE termelődését gátolni, amely közvetlen kiváltója az I típusú allergiás betegségeknek, és ezzel a találmány célkitűzését elértük.

Közelebbről, azt találtuk, hogy ha a fentiek szerinti (I) általános képletnek megfelelő anilidvegyületeket Brown Norway (BN)-patkányoknak adagoljuk, amelyekről ismert, hogy állati modellként szolgálnak az I típusú allergiás betegségeknél, ezek a vegyületek jelentős mértékben gátolják az IgE-termelődést BN-patkányoknál, következésképpen kiváló hatást fejtenek ki, mint terápiás szer az I típusú allergiás betegségek esetén. Mint már azt a fentiekben említettük, az I típusú allergiás betegségekre ismert gyógyszerek fő hatásmechanizmusa a kémiai közvetítők felszabadulásának gátlásán alapszik, és nem gátolják magát az IgE-termelődést.

Ennek megfelelően a találmányunk elsődleges célja a fentiek szerinti (I) általános képletű anilidvegyületek új alkalmazása az I típusú allergiás betegségek megelőzésénél vagy gyógyításánál.

A találmány további célja gyógyszerkészítmények biztosítása az I típusú betegségek megelőzésére vagy kezelésére, amelyek hatóanyagként a fenti (I) általános képletnek megfelelő anilidvegyületeket tartalmazzák gyógyszerészetileg elfogadható hordozóval vagy hígítóval együtt.

A fentieket, valamint a találmány egyéb jellemzőit a továbbiakban részletesen ismertetjük.

A fenti (I) általános képletű anilidvegyületek klinikai napi dózisa felnőtteknél függ az adagolás módjától, a beteg korától, testtömegétől és a tünetektől és általában az értéke 5-20 mg. A leflunomidot 500 vagy még több esetben alkalmazták külföldön terápiás szerként reumás arthritis kezelésére és a szerzett tapasztalatok alapján a szokásos dózisa a fenti, azaz 5-20 mg/beteg/nap, és ez nem okoz mellékhatást, toxicitást és más hasonlókat.

Az adagolás történhet intravénásán, intramuszkulárisan, orálisan, rektálisan és más egyéb módon, az intravénás csepegtető adagolásnál intravénás csepegtetőinjekcióként is alkalmazható a szokásos vénás injekció mellett.

A leflunomidot tartalmazó gyógyszerkészítményeket a szokásos ismert módon állítjuk elő a szokásos hordozók, adjuvánsok, adalékok alkalmazásával.

Az injekciózható készítmények lehetnek például porított készítmények. Ebben az esetben alkalmas vízben oldható töltőanyagot, például mannit, szacharóz, maltóz, laktóz, glükóz, fruktóz stb. közül egyet vagy többet adagolunk, és a kapott keveréket oldjuk vízben. Az így nyert oldatot fiolákba vagy ampullákba töltjük, fagyasztva szárítjuk, majd lezárva nyeljük a készítményt. Ezek adagolhatok továbbá nazálisán vagy tüdőn keresztül finom aeroszolkészítmény formájában is, szisztémás adagolás esetén.

Az orális készítmények lehetnek a szokásos tabletták, kapszulák, granulátumok, finom granulátumok, porok, valamint enterális bevonatú készítmények.

Az enterális bevonatú készítményeknél kívánt esetben adagolhatunk különböző adalékokat, így például töltőanyagokat, például mannitot, szacharózt, laktózt, maltózt, keményítőt, kovasavanhidridet, kalcium-foszfátot stb., csúsztatóanyagokat, például talkumot, magnézium-sztearátot stb., kötőanyagokat, például karboxi-metil-cellulózt, metil-cellulózt, zselatint, akácmézgát stb., dezintegrátorokat, így például kalcium-karboxi-metilcellulózt stb., ezekkel tablettákat, granulátumokat, finom granulátumokat stb. alakítunk ki. Ezután ezeken egy vagy több enterális bevonóanyaggal bevonatos készítményt alakítunk ki, ilyen anyagok például a következők: cellulóz-acetát-italát, hidroxi-propil-metil-cellulóz-ftalát, hidroxi-propil-metil-cellulóz, acetil-szukcinát, poli(vinil-alkohol)-ftalát, sztirol, maleinsavanhidrid kopolimer, sztirol-maleinsav-kopolimer, metil-metakrilát-metakrilsav-kopolimer, metil-akrilát-metakrilsavkopolimer stb., adagolhatunk ezen készítményekhez továbbá színezőanyagot, például titán-oxidot stb. Az így nyert enterális bevonatú granulátumokat vagy finom granulátumokat továbbá még kapszulákba is tölthetjük, így enterális bevonatú kapszulákat nyerünk.

A kapszulák, amelyeket ismert módon állítunk elő, lehetnek enterális bevonatnak, amelyeket a fentiek sze3

HU 222 888 Bl rinti enterális bevonattal látunk el és lehetnek enterális bevonatú kapszulák is, amelyekhez a fentiek szerinti enterális bevonatot alkalmazzuk önmagában vagy zselatinnal együtt.

Kúpok előállításához például a következőket alkalmazhatjuk: lipofil bázisok, így például szemiszintetikus bázisok kakaóvajjal elkeverve, alifás savak trigliceridjei és más hasonlók, alifás savak monogliceridjeivel vagy alifás savak digliceridjeivel elkeverve különböző arányban vagy hidrofil bázisok, így például polietilén- 10 glikol vagy glicero-zselatin és más hasonlók, ezeket melegítéssel való megolvasztás után adagoljuk, egyenletesen elkevetjük, majd a kapott keveréket a megfelelő formába öntve alakítjuk ki a kúpokat.

A találmány szerinti megoldást a korlátozás szándéka nélkül közelebbről a következő példákkal illusztráljuk.

1. példa

Az (I) általános képletű vegyületek hatásának tanulmányozása tojásfehérje-albuminnal (ÓVA) kiváltott I típusú allergiás betegségekre patkányoknál A kísérletnél 7 hetes nőstény BR/Crj patkányokat alkalmaztunk, ezeket az alábbiakban leírt módon OVAval érzékenyítettük.

A kísérleti állatoknak az adagolás napján (0 nap) intraperitoneálisan 10 ml/kg mennyiségben 10 mg/kg OVA-t és 300 mg/kg alumínium-hidroxidot adagoltunk. Az érzékenyítést követő 3., 7. és 9. napon vérmintát vettünk, a szérumot elválasztottuk, és meghatároztuk az IgE-koncentrációt. Az érzékenyítés után 10 nappal 60 mg/kg mennyiségben OVA-t adagoltunk fizioló5 giai sóoldatban oldva a patkányoknak a farokvénába, így anafilaktikus sokkot idéztünk elő. Az anafilaktikus sokk előidézése előtt majd után a juguláris vénából vérmintát vettünk, majd elválasztottuk a plazmát, és meghatároztuk a hisztamin mennyiségét.

A hatóanyagot 1%-os karboxi-metil-cellulózban (CMC) szuszpendáltuk és ismételten orálisan naponta egyszer a 0-9. napokon adagoltuk. A dózis 2 mg/kg vagy 10 mg/kg volt az A-E vegyületek esetén és 2 mg/kg prednisolon (generic név) esetén, amelyet kont15 rollként alkalmaztunk. Mindegyik állatot lemértük reggel egyszer hetente, majd a hatóanyagot a testtömegnek megfelelő mennyiségben adagoltuk. Az oldószeres kontrollcsoportnak 1%-os CMC-oldatot adtunk. Nem gyógyszeres csoportokat és nem kezelt csoportokat ala20 látottunk ki. A nem kezelt csoportokat nem kezeltük. A vizsgálati csoportokba 6 patkány tartozott.

Az (I) általános képletű anilidvegyületek hatását a BN-patkányokra a túlélési arány alapján határoztuk meg, mértük az IgE-szintet a szérumban és a hiszta25 minszintet a plazmában az ÓVA adagolásával előidézett anafilaktikus sokk előtt és után.

A kapott eredményeket a következő 1. táblázatban foglaljuk össze.

1. táblázat

OVA-érzékenyített patkány anafilaktikus modelleken vizsgált hatás

Érzékenyítés	Adagolt vegyület	Dózis (mg/kg)	Állatok száma	Túlélési arány (%)
	-	-	6	100
ÓVA	1% CMC	-	5	0
ÓVA	Leflunomid	2	6	100
ÓVA	A vegyület	10	3	33
ÓVA	C vegyület	10	6	100
ÓVA	D vegyület	10	6	100
ÓVA	E vegyület	10	5	100
ÓVA	Prednisolon	2	6	0

A fenti eredményekből kitűnik, hogy az ÓVA- és 1% CMC-csoportok és az ÓVA- és prednisolon(2 mg/kg) csoportok esetén mindegyik állat elpusztult az anafilaktikus sokkot követő 20 perc-2 órán belül, míg a nem kezelt kontrollcsoport esetén, az ÓVA- és 50 C-E vegyületcsoportok esetén (10 mg/kg), valamint az

ÓVA- és leflunomid- (2 mg/kg) csoportok esetén mindegyik állat életben maradt bármilyen anafilaktikus sokk nélkül.

Az IgE-szint meghatározását a szérumban házilag kialakított szendvics típusú ELISA rendszerrel végeztük. Az eredményeket a 2. táblázatban foglaljuk össze.

2. táblázat

IgE-szint BN-patkányok szérumában 9 nappal az OVA-érzékenyítés után

I Érzékenyítés	Adagolt vegyület	Dózis (mg/kg)	Állatok száma	IgE-mennyiség tog/ml±SD)
-	-	-	6	4,3±2,4
I ÓVA	1% CMC	-	5	296,7±96,0

HU 222 888 Bl

2. táblázat (folytatás)

Érzékenyítés	Adagolt vegyület	Dózis (mg/kg)	Állatok száma	IgE-mennyiség (Mg/ml ±SD)
ÓVA	Leflunomid	2	6	0,4±0,l
ÓVA	A vegyület	10	3	0,3±0,0
ÓVA	V vegyület	10	6	0,5±0,l
ÓVA	D vegyület	10	6	0,6±0,l
ÓVA	E vegyület	10	5	0,4±0,l
1 ÓVA	Prednisolon	2	6	148,1 ±72,0

SD: standard eltérés

A fenti eredményekből kitűnik, hogy az ÓVA- és 1% 15 CMC-csoportok esetén extrém magas, 296,7 pg/ml értékű az IgE-mennyiség 9 nappal az érzékenyítés után, míg a nem kezelt kontrollcsoportnál ez az érték 4,7 pl/ml.

A szérum-IgE-szint a prednisolonkezelt csoportnál 148,1 pg/ml. Ezen csoportokhoz viszonyítva a szérum- 20 IgE-szint a leflunomidkezelt csoportnál 0,4 pg/ml értékre csökkent a 2 mg/kg dózisú csoportnál és 0,3-0,6 pl/ml értékre csökkent az A-E vegyületeket 10 mg/kg dózisban kapott csoportnál. Ebből kitűnik, hogy az (I) általános képletű anilidvegyületek tökéletesen gátolják a szérum-IgE-szint-növekedését 2-10 mg/kg dózisban az antigénes érzékenyítés után.

Ezután mértük a plazmahisztaminszinteket az OVAadagolással előidézett allergiás sokk előtt és után, az ÓVA adagolását követő 10. napon, ezt alkalmaztuk mint allergiás reakciók paraméterét. A kapott eredményeket a 3. táblázatban foglaljuk össze.

3. táblázat

Plazmahisztaminszintek az ÓVA által előidézett allergiás sokk kiváltása előtt és után az OVA-adagolást követő 10. napon

Érzékenyítés	Adagolt vegyület	Dózis (mg/kg)	Állatok száma	Hisztamin mennyisége (Mm±SD)
OVA-adagolás előtt	OVA-adagolás után
-	-	-	6	0,2±0,l	0,1 ±0,0
ÓVA	1% CMC	-	5	0,3±0,l	29,1 ±9,2
ÓVA	Leflunomid	2	6	0,2±0,l	0,l±0,l
ÓVA	A vegyület	10	3	0,2±0,l	0,1 ±0,0
ÓVA	C vegyület	10	6	0,3 ±0,2	0,l±0,0
ÓVA	D vegyület	10	6	0,4±0,2	0,6±0,5
ÓVA	E vegyület	10	5	0,3±0,l	0,1 ±0,0
ÓVA	Prednisolon	2	6	0,6±0,4	23,6±9,8

SD: standard eltérés

A fenti eredményekből kitűnik, hogy a sokk kiváltása után a plazma hisztaminszintje kifejezett mértékben növekedett az ÓVA- és 1% CMC-csoportoknál, valamint a prednisoloncsoportoknál, míg a plazma hisztaminszintjében növekedés nem volt megfigyelhető a nem kezelt kontrollcsoportoknál és az (I) általános képletű anilidvegyületekkel kezelt csoportoknál. Ismert, hogy a hisztaminfelszabadulást egy antigénnek az IgEérzékenyített bazophiliás leukocitákhoz vagy hízósejtekhez való kötődése indukálja. Ennek megfelelően úgy gondoljuk, hogy ennél a vizsgálatnál az OVA-ra specifikus IgE antitestek nagy mennyiségben képződtek az ÓVA adagolására, ami allergiás sokkot válthat ki, valamint nagy mennyiségű hisztamin felszabadulását váltja ki az ÓVA- és 1% CMC-kezelt, valamint a prednisolonkezelt csoportoknál. Úgy gondoljuk továb45 bá, hogy az (I) általános képletű vegyületek teljes mértékben meggátolták az IgE képződését az ÓVA-val érzékenyítés után, ami az ÓVA, valamint a nagy mennyiségű hisztaminfelszabadulás által kiváltott anafilaktikus sokk teljes gátlását eredményezi.

2. példa

A minimális hatásos dózis vizsgálata leflunomid esetén

A kísérlethez nőstény, 7 hetes BN/Cij patkányokat alkalmaztunk, az OVA-val való érzékenyítést a következőképpen végeztük. 10 mg/kg OVA-t és 300 mg/kg alumínium-hidroxidot (Alum) adagoltunk intraperitoneálisan az adagolás napján (0. nap). Az érzékenyítést követő 3., 5., 7. és 9. napon vérmintát vettünk, a szérumot elválasztottuk, és meghatároztuk az IgE-koncentrá5

HU 222 888 Bl ciót. Ezután 60 mg/kg OVA-t adagoltunk fiziológiás sóoldatban oldva a patkányok farokvénájába az allergiás sokk kiváltására.

Az állatoknak orálisan a 0-9. napon hatóanyagot adagoltunk 1%-os karboxi-metil-cellulózban (CMC) szusz- 5 pendálva. A leflunomin dózisa 0,5, 1 és 2 mg/kg. A csoportokba tartozó minden kísérleti állatot megmértünk hetente egyszer reggel, és a hatóanyagot a testtömegnek megfelelő mennyiségben adagoltuk. Az oldószer kontrollcsoportnak 1% CMC-oldatot adagoltunk. Nem kezelt csoportokat is kialakítottunk kontrollcsoportként, ezeknél semmi kezelést nem alkalmaztunk. A vizsgálatot csoportonként 6 patkányon végeztük. A kapott eredményeket a következő 4. táblázatban foglaljuk össze.

4. táblázat

Leflunomid hatása OVA-érzékenyített patkány allergiás modelleken

Érzékeny! tés	Adagolt vegyület	Dózis	Állatok száma	Túlélés száma (%)
-	-	-	6	100
ÓVA	1% CMC	-	6	0
ÓVA	Leflunomid	0,5	5	0
ÓVA	Leflunomid	1	4	100
ÓVA	Leflunomid	2	6	100

A fenti eredményekből kitűnik, hogy minden állat elpusztult az allergiás sokkot követő 20 perc-2 órán belül az ÓVA- és 1% CMC-kezelt csoportoknál, az OVAés leflunomid- (0,5 mg/kg) kezelt csoportoknál, míg minden állat életben maradt bármiféle allergiás sokk 25 nélkül a nem kezelt kontrollcsoportnál és az ÓVA- és leflunomid- (1 mg/kg) kezelt, valamint az ÓVA- és leflunomid- (2 mg/kg) kezelt csoportnál. Az eredményeket az 5. táblázatban foglaljuk össze.

5. táblázat

Szérum IgE-szint BN-patkányoknál az OVA-adagolást követő 9. napon

Érzékenyítés	Adagolt vegyület	Dózis	Állatok száma	IgE-mennyiség ^g/ml±SD)
-	-	-	6	3,6±1,4
ÓVA	1% CMC	-	6	491,5±184,3
ÓVA	Leflunomid	0,5	5	357,7± 119,0
ÓVA	Leflunomid	1	4	0,8±0,l
ÓVA	Leflunomid	2	6	0,4±0,l

SD: standard eltérés

A fenti adatokból kitűnik, hogy a szérum IgE-szintje az ÓVA- és 1% CMC-kezelt csoportnál és az OVAés leflunomid- (0,5 mg/kg) kezelt csoportnál extrém magas, 491,5 pg/ml, illetve 357,7 pg/ml az OVA-adagolást követő 9. napon, míg 3,6 pg/ml a nem kezelt csoportnál. Ezekkel összehasonlítva a szérum-IgE-szint az 45 ÓVA- és leflunomid- (1 mg/kg) kezelt csoportnál az ÓVA- és leflunomid- (2 mg/kg) kezelt csoportnál 0,8 pg/ml, illetve 0,4 pg/ml értékre csökkent. A fenti eredményekből kitűnik, hogy a leflunomid képes meggátolni a szérum-IgE-szint növekedését az antigénnel 50 való érzékenyítést követően.

Készítmény-előállítási példák
1. példa Porok Alkotók neve	Mennyiség
Leflunomid	200 mg
Laktóz	700 mg
Kukoricakeményítő	100 mg

A leflunomidot 60 mesh lyukbőségű szitán átszitáljuk, majd 50 mesh lyukbőségű szitán átszitált laktózzal és 120 mesh lyukbőségű szitán átszitált kukoricakeményítővel elkeverjük, egy V típusú keverőben. így nyerjük a kívánt porkészítményt.

3. példa

Tabletták

Alkotók neve Mennyiség

Fentiek szerinti C vegyület 20 mg

Laktóz 41 mg

Kukoricakeményítő 30 mg

Karboxi-etil-cellulóz 8,5 mg

Kalcium-metil-cellulóz 25 cp 1,5 mg

Magnézium-sztearát 1,0 mg

A C vegyületet, a laktózt, a kukoricakeményítőt és a karboxi-metil-cellulóz-kalciumot egy V-típusú keverőben elkeverjük, a kapott keveréket vizes metil-cellulóz-oldattal összegyúrjuk, a keveréket granuláljuk és 60 °C-on szárítjuk. A szárított granulátumot magnézium-sztearáttal elkeverjük, majd tablettázzuk.

HU 222 888 Bl

Ipari alkalmazhatóság

Az (I) általános képletű vegyületek a találmány értelmében jelentős mértékben gátolják az IgE termelődését, ami az I típusú allergiás betegségek kiváltója és ily módon meggátolja az I típusú allergiás betegségek kialakulását. Ennek megfelelően a találmány szerinti anilidvegyületek alkalmazhatók az I típusú allergiás betegségek megelőzésére vagy kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmények előállítására.

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. (I) általános képletű anilidvegyületek r₂

Rí--^N-^C0R3 (I)

- a képletben

R] jelentése trifluor-metil- vagy cianocsoport, vagy halogénatom,

R₂ jelentése hidrogénatom vagy egyenes, vagy elágazó láncú 1 -4 szénatomos alkilcsoport és R₃ jelentése (II) vagy (III) általános képletű csoport - a képletekben

R, jelentése egyenes vagy elágazó láncú 1-4 szénatomos alkilcsoport, egyenes vagy elágazó láncú

2- 6 szénatomos alkinilcsoport vagy 3-6 szénatomos cikloalkilcsoport vagy valamely sztereoizomeije, vagy fiziológiásán elfogadható sója alkalmazása I típusú allergiás betegségek megelőzésére vagy kezelésére alkalmas gyógyszerek előállítására.

2. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás olyan (I) általános képletű vegyületekre, amelyek képletében

Rj jelentése trifluor-metil-csoport, halogénatom vagy cianocsoport,

R₂ jelentése hidrogénatom vagy egyenes, vagy elágazó láncú 1-4 szénatomos alkilcsoport,

R₃ jelentése (II) vagy (III) általános képletű csoport, a képletekben

Rj jelentése egyenes vagy elágazó láncú 1-2 szénatomos alkil-, 2-4 szénatomos alkinil- vagy

3- 5 szénatomos cikloalkilcsoport.

3. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás a következő (I) általános képletnek megfelelő vegyületekre vonatkozóan:

5-metil-izoxazol-4-karbonsav-N-(4-trifluor-metil)anilid,

N-(4-trifluor-metil-fenil)-2-ciano-3-hidroxi-krotonamid,

2-ciano-3-ciklopropil-3-oxo-N-metil-(4-klór-fenil)-propionamid,

2-ciano-3-ciklopropil-3-oxo-(4-ciano-fenil)-propionamid,

2-ciano-3-oxo-N-[4-(trifluor-metil)-fenil]-6-heptinamid.