[go: up one dir, main page]

HU229968B1 - Sztreptokokkusz oltóanyag - Google Patents

Sztreptokokkusz oltóanyag Download PDF

Info

Publication number
HU229968B1
HU229968B1 HU0200367A HUP0200367A HU229968B1 HU 229968 B1 HU229968 B1 HU 229968B1 HU 0200367 A HU0200367 A HU 0200367A HU P0200367 A HUP0200367 A HU P0200367A HU 229968 B1 HU229968 B1 HU 229968B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
protein
polysaccharide
vaccine
mpl
adjuvant
Prior art date
Application number
HU0200367A
Other languages
English (en)
Inventor
Carine Capiau
Marguerite Deschamps
Pierre Michel Desmons
Craig Antony Joseph Laferriere
Jan Poolman
Jean-Paul Prieels
Original Assignee
Smithkline Beecham Biologicals S.A
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GBGB9906437.0A external-priority patent/GB9906437D0/en
Priority claimed from GBGB9909077.1A external-priority patent/GB9909077D0/en
Priority claimed from GBGB9909466.6A external-priority patent/GB9909466D0/en
Priority claimed from GBGB9916677.9A external-priority patent/GB9916677D0/en
Application filed by Smithkline Beecham Biologicals S.A filed Critical Smithkline Beecham Biologicals S.A
Publication of HUP0200367A2 publication Critical patent/HUP0200367A2/hu
Publication of HU229968B1 publication Critical patent/HU229968B1/hu
Priority to HUS1500040C priority Critical patent/HUS1500040I1/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
    • A61K39/092—Streptococcus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/095—Neisseria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/102—Pasteurellales, e.g. Actinobacillus, Pasteurella; Haemophilus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/16—Otologicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6068—Other bacterial proteins, e.g. OMP
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6075—Viral proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/831—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving capsular polysaccharide of bacterium, e.g. polyribosyl ribitol phosphate

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

A találmány tátgyát bakteriális polisaacharid-antigéu oltóanyagok. ások gyártása Is sz· ilyet? pobssaebsridok gyógyhatású anyagokban történő alkalmazása képezik.
Közelebbről a találmány tárgyát három összefüggő megvalósítási mód kepezb í. --- kortiugáít pnettmokcmkusz-entigéní, dpikussn pnesistokotítusz: konjngált poiiszacharid-anugén tartalmazó oltóanyagok, Strepíócöoixt-jmmíik íehétjeantigénael és opcionálisan Thl-indufcáló adjutánssal kiszerelve; & - specifikus, előnyős pneamokokknsz konjugátumok Thl-adjuvánssai kiszerelve; és 3« ··· bakteri^ális.poliszachariá konjagáíumok általában H. influenzáé D proteinjéhez honjugálva.
A Sfeepfíieceejis pnaawonme Gram-pozitiv bóktérimü, amely jsleatós morbíaíttísért es mortalitásért (különösen fiatalokban és idősekben) felelős, és olyan invazív betegségeket ekoz, mint például a tüdőgyulladás, bakíerémía és agyhártyagyulladás, és ko ionizációval kapcsolatos betegségeket, mmt például áz tértit középfülgyulladás. A pneutnokokkusz-eredettí tüdőgyulladás aránya az Amerikai 'Egyesült Áíbmokban a 60 évnél idősebb személyek között körülbelül 3 és § között van 1Ő00Q0 emberre számítva, Az esetek 2ö%~ában ez bafeterémíáboz és más manifesztáclókhoz, mint például sgyhányagynlfedós vezet, közel 3S3ís-&s mortalitást arábítya; még antibiotikumos kezelés mellett is.
A pseumbkkakkttszí kémiailag kapcsolt poliszacharid burkolja be, amely szcrotípos-speciftást eredményez, 90 ismert pneumokokkusz szorotipas van. és a burok a ptteamökokkuszok: víruleseiájápák alapvető megbátározó faktora, mivelá bárók nemcsak védi a feakténtitb: belső felszíneit a komplementrebdszertöl, hsáéra önmagában scve gyenge immu»Ogén tt A pojszachmidök T-sqtexibí t&ggeden aobgénék, és nem prosesszálhatók és nem dolgozhatók fei MHC-moiekoiákon T~sejtekkei való kölcsönhatáshoz, Azonban á&maíiv mechanizmuson kérésztől stimulálhatják az immunrendszert,ami a B-ssjíek felszíni receptorainak keresztkötésével történik.
Számos kísérlet megmutatta, hogy az· invazív psaumskökktiszos betegségek okéul védelem fegjobiw a feurókrs specifikus ellenanyagok mennyiségével korrelál, és: a védelem szérotlpus-speeífkus,
Poíiszachariö-a-ttígénöu alapuló oltóanyagok jól ismertek a szakirodalomban. A négy emberi alkSií35<3^áSJ'S is. ©itgédéíyezett köze tartozik á 5öúíhw#ö »y?bí Vs-poliszaefearídja, a Jítato/jMtö· ,T</íííVf?zue PRP-polisz&chariája. az A, C, W135 es ¥ szerospwkat tartalmazó fettavaísas tsesmgökokkusz oltóanyag, és a 23-vaiens pneuotokokkusz oltóanyag, amely az 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, S, 9N, 9V, 1ÖA, |1A, 12F, 14, 15B, I7F, 1SC, I9A, 19F, 20, 22F, 23F és 33 szerotíppssktt&k mégfefelő políszüehsridból áll (amelyek a vérből Izolált pnemnokükksszökttsk legalább 98%-áf teszik ktf
Az utóbbi három oltóanyag légúti fertőzéseket okozó baktéífeísok ellen nyújt védettséget, amelyek komoly .morbiditást és mortalitási eredményeznek csecsemőkben, viszont ezsro öltóatryagökirt -nem engedélyezték 2 évnél fiatalabb gyermekek esetén történő alkalmazásra, tűivel nem kellően immunogének ebben a korosztályban [Féltőin és mtsai., N. Esgi. 3. Med. 310,1361-1566, old. (1934)j. A «Sírepíocoecas· p?iá«mo«w az invazív bakteriális betegségek és középfelsyttíladfes; leggyakoribb oka csecsemők és kisgyermekek körében. Az idősek hasonlóképpen gyenge választ fejlesztésiek ki pseutuokokkaszoltóanyagokra [Rögbmann és mtsai., J. Gerontol 42, 265-2?ö, old. t?987)J, innen van a bakteriális tüdőAkt a s z ámu r. k: 9 52 2 7 - 3 0 ? 2A/LT ζ ~ gyulladás megnövekedőit elóforásiása ebben a populáeioban [Verghese és Berk, Medlaine (Saliteeres) 62,271-285. old. (I9S3)}.
Λ csecsemőkben váló ímmunogenitás hiányának. leküzdésére tervezett stratégiák közé tartozik a poítocharidsksi^ nagy' ímtnunogéo fehérjékhez való kapcsolása, melyek mellékes T-sejtes segítséget syőjtezfc, és amelyek Immunológiai memóriát váltanak ki azokkal a poltszacharld-ajxtigénekkel szemben, amelyekhez kofoűgálva vannak. Pnetnnokokkusz konmgált gllkoprotem oltóanyagtíkát jelenleg is tesztelnék biztonság, mmwoogemlss és batékoovság szempontjából kfoőnbőzÖ koröszlályokhsrt.
Az alábbiak az 1., pseiwmkokfatsz poiiszaehartd-ohóattyagekat tartalmazó megvalósítási mádra vonatkoznak.
A 23-válens köírjugálaílazí pöemnokokkusz-oltóarivag széleskörű variációt mutat a klinikai hatékonyság fercWén, O'lÁíOi 8i:%-ig;[Fedson és mtsai., Arch. Intem. Med-· 154, 2531-2535. old. (1994)}, A hatékonyság az Immunizált kockázati csoporttal - mint például idősek, Bodgkm-féfe betegség, lépeltávolitás, sarlósejtes betegség és ognmntaglobulmémiák ÍFtne és mtsai., Arcán Intern. Med. 154, 2666-2677. old, (1994)} látszik összefüggni, és a betegség tnanifesztaeíö(ávál Is. A 23-valéns oltóanyag nem mulat védettséget psm:m?,okokkusz-eredetü tüdőgyulladás (bizonyos magás kockázató esoposfokbtu:, mim például sz Idősek) és középfülgyulladás elten.
Tehát szükség van javított ptmnmokolíknsz-oltóaóyag-készftményekrc, előnyösen olyanokra, sntelyek batásösabbak a pnoamokökkttszAsetegségék (ktiiSöSses hidőgyulladás) megelőzésére és enyhítésére az idősek és kisgyermekek körében.
Az- alábbiak a 2,»kiváfesztoít píiemmökokkusz poltszsobárid-köítjugátnmokat és 3D-Wt készítménveke; tartalmazó megvalósítási tnódra vonatkoznak.
Általánosan elfogadott,, hogy a ksreskedetó forgalomban kapható ptmumofeekfcosz-oifoarsyag véáóbatékoayságu tőbbé-kevéabé áz: itnmmaizáiássál kiváltott pllenanyag-konoentrácíóvaí függ óssze; válóban, a 23 polsszaeharidot kizárólag ar cgsos .omponens pollsztteharidok tamaeógeuitása alapján engedélyezték (Williams és totsák, Msw York Aeaccmy of Seienses, 241-249, old. (1995)]. Tehát a poeumokokkosz-poíiszaeháríöök elleni ekemtnyagválssz további fokozása növelheti azon csecsemők és idősek százalékát, akik védő szintő ellenanyaggal reagálnak a pofezacharid vagy poliszaeharídkonjugátam első oltására, és csökkentheti a dózist és a .SSsre^zococm zmesnwfoő alfa! okozott fertőzések elleni védő immunitás kiváltásához szükséges oltások számát.
A 2S. század kezdete óta a katatök nagyszámét vegyülettei kísérleteztek, amelyek antigénekhez adva javítják azok immunogsmtását ohóasyng-kéézktnényekben (összefoglalás: Powell és Newmafc» „Vseeine Design - the Snhunrt. aaá Adjávant Ápproaoh”, 7. fejezet. ,,Á compendioru of Vacclée Adjuvants and £xcipients<!, kiad,; Plenaro Press NY' (1995)}. Sok nagyon hatásos, de szignifikáns helyi es szisztémás káros reakciót oko2, ami kizárja alkalmazásukat emberi öltőaayag-készdményekben. Az alumímum-alapö adjavansok (mint példán5 alum. alnmminm-kidroxjd,. aiamfeium-foszfat}, amelyeket először 192ő~fean írtak le, tnaradnsk tsz Amerikát Egyesült Államokban engedélyezett emberi oltóanyagban slkalmazötí kizárólagos immunológiai adruvansok.
Az alumíniutn-alapú adjuvánsök az adjovánsok hordozó osztályának példái, amelyek a kiváltott „depó-hatás·*5 révén műkődnek. Az antigén az adjnváns felszínére adszorbeálódik, és amikor a készítményt injektálják, az adjuváns és sz antigén nem oszlik sze; azonnal a véráramban, hanem a készítmény megmarad az injekció helyi környezetében, és jobban kifejezett imnrunválaszt eredményez.. Az ilyen hordozó adjuvíirsseksafc további ismert előnye, hogy alkahnasak a lebomlásra érzékeny antigének, példánl poíiszaeharid-antigéríek stabilizálására.
A 30-MPL a nem-hordozó sdtnWtsnk példája. Teljes; neve ő-ö-dezaed-mosofószlbril Spid & (vagy 3-De-O-acii-mooofoszforii lipid A, vagy 3-<Xdezae3k4Mn«oföszbrtl lipid Aj, és azért nevezik SD-MFL-nek, mer; ez kifejezi, hogy a 3, hely a redukáló végen lévő gklkózatnmbaí; de-O-acetiláit. Az elöálihását a GB 2220211. számú szabadéba! irat tárja fel. Kémiailag 4-, 5- vagy ó-aeilái; lánccal rendelkező S-deacii-mopofoszforil lipid A keveréke. .Az 1990-es évek elején készítették el, amikor a hóid A 4’monotőszfotsl származékának ÍMPk) 3-O-doadláiására szolgáló eljárás Olyan molekulát eredményezett, amelynek wieilásn tovább gyengsit a az immőnstimalálő aktivitás változása nélkül.
A 3D-MPL-; magában, vagy előnyösen depó-dpusú hordozó adjavánsokkal, mint példánl almnimttm-httfeoxiddal, aiammium-fosziáttel vagy olaj-víz emulziókkal kombinálva alkalmazták adjavánském. Az ilyen készítményekben a 3I>MPL és az aaftgéa ugyanazon fészeoskábsn hálálható, ami lehetővé teszi az antigén és itmöunstimutáhs szignálok hatásosabb célba juttatását, Vizsgálatok kimutatták, bogy a 3DMPL képes tovvá-bb fokozni az aiutmadszörbeáíf antigén Immusogenttásá; [Thoelert és rntsai,, Vaeeine lé, 708-714. old. (199F>; BP §89 454 Bj, számú európai szabadalmi irat]. Az ilyen kombinációk előnyösek a szakirodalomban adszorpcióra hajlamos (például bakteriális poliszaeharid-konjugátirmoö antigének számára is, áltól az atomra való adszorpció az aístigeá stahíllzálásánsk kedvez. Legtöbbször kicsapott alumíttium-aiapú adjuvánsoknt aikalmaznttk, mivel jelenleg kizárólag özek vannak engedélyezve emberi öitó&öyagbán. Bmfek ntegíelelően a SÖ^MFt-t almúdsm-alspá stdjuyánsssl kombinálva tartalmazó oltóanyagok előnyben vannak részesítve a szakirodalomban a kifejlesztésük könnyűsége és a piacra való bevezetésük sebessége miatt.
A nem 3-deaclialt MFLA vizsgálták adjűvépskéaí számos monovslens pobszaeharid-kst^ugátuni ohóanyag-atttigénnel. Az MPL sóoldatban való együttes injekciója fokozta aszérum eHenanyagválsszát négy mottovalens poliszacharid-konjugámtsna: pneutnokokkusz FS őB-tetanuszAoxoid, pneutsokbkknsz FS 1.2-d.íftéria-tóxoid, és S. «hw 5. típus és S. wws 8, íip&s, F&eWösirmw onrwgwsu A. jelű <*otevnu.hoz komugálva ÍSctmeenmn c»míst.t .j Immunolögv 54?, Ί >6-2140 o'd {lCí9Ítt A tokozott válaszról azt gotsdoiiák, hegy antigés-spéciSms, WL olaj -vls «moháéban (hordozó típusú. adjttváns) következetesen fokozta az MPL sőoídáthan lévő hatását, amiatt,, hogy az WL és az antigén ugyanazoh részecskében volt jelen, és ezt más pöiis^teliarid-kanjogdínm; oltóanyagok esetén is optimális beadási rendszerének tartották.
Devi és rntsai. [infect, immun. 59 ,3790-3707. old. <1991 )j vizsgálták a nem 3-deacetíláit MFL adjnváns hatását sooldathm, TTusősjógáli Qypíoeoeeus btaofepóliszachariddal egér ellonanyagválssm. Amikor az MFL-t egyidejűleg alkalmazták a koújtigálommal, csupán csekély növekedés volt a poiiszacbaridra adott ig.M- és IgG-specifikus •válaszban;azonban az MPL-nek sokkal nagyobb hatást; volt, amikor 2 nappal a konjugátum után adták bs 4 / o'van immunizálási sóma alkalmazásának a gyakorlatiassága, amely az, MPL bcadásársnk késleltetését igényli az antigénhez képest, különösen csecsemők esetében, kérdéses. Az MPL adjuváns hatása poíiszachatidokk&l és poliszscharíd-fehctje kenjugátnmokkst készltmoey-Nggőnck tűnik, Az MPL-nck megfelelő, ktssü-ielszabaóalásó bejuttató rendszerbe (pékkó ~ 4 ~ uí hordozé sd|w>s; -alkalmazása) való beépítése tartós :a«$wáas hatást biztosít, és megkerüli az időzítés ás késlékew beadás problémáját
Összefoglalva, a technika állása ágy tanítja, hogy bizonyos poliszacharld vagy políszacharldkoújtigátum antigének, ahol MPL vagy 3D-MPL aa aájuwfes, előnyösen alktemazhteők birrdozó Mjuvánsssl (például álmmmbm-aiapó adjuvánsokfcal) együtt, annak erdekébeó, hogy tnaktmállzáljük az mmmmtimuláló hatást
Meglepő módon azt találtak, hogy bizonyos poeomókokkusz pöbszaeharld-köc-jogámmok esetén az oltöanyag-készJhnény itsssunogenltása szignifikánsan nagyobb, amikor az antigént egyedül 3D-MPLilel szereljük ki, tolni 3D-MPL-lsl és hordozó adjutánssal ínnnt például alumínium-alapú adjuvánsokkal} együtt. Továbbá a snegiigtell Javaíás független az : alkalmazott 3D-MPL koneemrációjáról, és attól hogy az adott konjugútum tnosovalens készítményben van-e, vagy kombinálva polívaiens készítményt alkotva.
Az alábbiak a 3., bakteriális pohszaebaríd-próteín D konjegáíemokaí tartalmazó megvalósítási módra vonatkoznak.
Mist ahogyan fel említettük, pökszaefesrid-snílgén alapú oltóanyagok jól ismertek a szsktroátelomban. Az fent említett engedélyezett pttSszaobartá-oltóanyagok demonstrált klinikai hatékonysága különböző. A Ví-políszacinsrkkoltóaayag becsült hatékonysága 55% és 77% között var, tenyészettel igazolt tífusz megelőzésére [Plotkla és Cam, Áré. Intem. Med 155,2293-2299. oki, {1995}], Λ menímgekokkasz C-pöliszacharid-oltóanyag hatékonysága 79%-nak hízöövJt járványos körülmények között [Öe Ws és mtsai,, Ball, Work! Health Orgart, 74, 407-411. old, (1996 íj. A 23-valens pneumokokknsz-oltóanyag széles vadáelót mutatott klinikai hatékonyság terén, 0%-tőÍ Sl%-ig (Fedssn és mtsai.. Arab, hitem. Mecl. i59, 2531-2555, old. (1994)], Mint ahogy fel: «mlítettük, elfogadott lény, hogy -a pneutsokokkttszölíósnyag hatékonysága töhbé-kevésbé az immtaszálásssl kiváltott e&énortj’ag-kotteentráelővol függ esssze.
Az immunizálás pofezaehsridós megközelítésével kápesoiates problémák között w &?, a tény , hogy a poliszacharldok önmagukban gyenge immasegenek. Áz hrtmunoge-ntías ezen hiányának leküzdésére tervezett stratégiák közé tartozik a políszaeharídökaak nagy rmmtmogén fehérjékhez való kapcsolása, átnelyek melíékes T-sejtes segítséget nyújtanak,
Ezen jelentősen ímnsmogéíy jelenleg általánosan alkalmazott hordozók példái közé tartozik a diiféria-töxoíd (DT vagy a CKM197 mstáss}, tettetwtökoid (TT), kürtöscsiga („keybols bmpet”) hemoelanlnja (K.LH), és a taberkohn tisztított febérjeszársnazéka (PFD).
Áz általánosan alkalmazott hordozókkal kapcsolatos; problémák
Áz általánosan alkalmazott hordozók mindegyikével számos probléma kapcsolálös, köztük a kpsjügátnmok GMí* előállításában, és a konjngdtetok immuoológan jel lemzőtbén,
Azon hordozok általánosan elterjedt alkalmazásának es antt-pollszaebarld éllesáoyag-válaszok kiváltásábanvaló sikerük ellenére számos hátrányaik van. ismert például, hogy óz antigés-speelSkus tmmunválasz szspresszálható (eplíóp-szapresszsö} a hordozó, jelen esetben tetasasz-tostín ellen Irányaié korábbi ellenanyagok jelet?léte által [Di Jóim és mtsai,, Láncét 2, 1415-141S. old. (19&9}j. Az emberek esetében a populáció nugyoa magas százalékának va» korábbról jelenlévő immunitása DT és TT ellett, mivel ntíisszertlen immunizálják az embereket ezen antigénekkel. Az Egyesült Királyságba» például a gyermekét 95%-a kap DTF-okóauyagök amelymind DT-í, mfeá T7~t Wdlmaz. Más szerzők állati modellekben írták Is peptid-ohöaayago'm az epköp-sznpresszlö problémáját (Sad és mtsai:., Mnnmológy 74,225-227. old. {i 99I); Schutze és mtsai., j. Immunoi. 135,2519-2322. öld. (-WS
Ezenfelül az olyan oltóanyagoknál, amelyek rendszeres megerősítést Igényelnek, a jelentősen immurtogén hordozók, min- például DT és TT alkalmazása valószínt! módon szupresszálja a poiiszachaőd elletsi ellonanyag-válaszr néhány injekció után. Ezen többszörös itnmonizációt nem kívánatos reakciók is kísérhetik, mint példást késlshetett típusú hiperérzékenység („áel&yed type hypeíresponsiveness’', DTH).
A ΚΤ,Η-ról ismert, hatásos immunogén, és már alkalmazták hordozóként IgE-papéidekbez «mbeni klinikai vizsgálatokban. Azonban néhány káros reakciót :(DTB~szerS reakciók, vagy IgEérzékenyiiéx), vahmint ellenanyag elleni eilenanyag-reakeiőkat is megfigyeltek.
Tehát a hordozófehérjék kiválasztása poliszacharíd-alapó ofeóanyaghoz megköveteli -a minden betegben működő hordozó (széles MHC-íelismeré$i szükségessége, az anti-poltszacharid ellenanyagválaszok -magas szintje, és a hordozó ellesi alacsony ellenanyag-válasz közti egyensúlyt,
A poliszaehari-d-alapu ohóstnyagökbaa korábban: alkalmazót· hordozóknaktornát számos hátránya van. Ez. különösen igy van kombmáh oltóanyagok esetében, ahol as ephóp-szapresszlő különlegesen problémás, ha ngyanazt a hordozót alkalmazzák különböző pohszaehsrid-antígénekb&z. A. W0:98/51339, szarná semzeiközt közzétételi; irat szerim több hordozót alkalmaznák kombinált oltóanyagokban ezen hálás elkerttiésnsk megkísérlésére.
A találmány tárgyút itoiisaadtarlá/pölipeprid-abpö ímmunogén késziünényefc élóálhtásáin slkah mnzoíí hordozó képezi^ ame ly ne m szenved a test emllteit hátrányoktól.
A. faiáhnány tárgya /faswtopMítí protein £> Óésjéjo (BE 0 594 4W B. szántó európai szabadalmi irat), vagy annak hogmenset poilszséband-alapa immanogós késziteények, köztük ohóAz alábbiak az 1,., pseamokekkusz pohszacharld-oltóanyagokat tartxdmszö megvalósítási módra vonatkoznak.
A taióimáhy tárgyal: képezi: olióanyag-készítsnény, amely legalább egy (előnyösen kosjagáit) Sb'ppnwsmns pscmmmka; pölisaachartd-antigéoh és Sb-gpfemzw pvmmsm?me fóhétjeantígéni, vagy annak Immanolögiailag teikcionális ekvivalensst tartsteazzn, opcionálisén Thi-ádjóvshssal (olyan adjovánssai., amely Thi tnrntnnválsszt vált kr). Előnyösen tsz oltóanyag-készítmény mind a poeumohükkusz fehérjét, mind a íhl-adjuvánst tartalmazza. A találmány szerinti készítmények különösen alkalmasak az Időskori tödögyulladás kezelésére.
A pneumokokkusz pölísmchmid-ohöanyagok (konjugáitak vágó·' snitt) nem biztos, hogy képesek megvédem a füdőgyaiiadas elles az idős pepídáeiő esetében, amelyben ezen betegség előfordulása nagyon magas, A pnenmokbkkesz elleni védekezés kulesmeehauízmnsa az opszonoísgoeitózis (hömorálís Bsójtek és hetrtroSi sejtek által közvetített: sseméisy, amelyet a pnenmökökkasz poiiszaeharid elleni ellenanyagok termelése okoz, miáltal a hakiőrmm végül iagocitózísra kerül), azonban a részt vevő opszoalkus meohsoizmusofc részei sem műkődnek az. idősekben, azaz példáéi a polimorf magva sejtek („polymotphtmnelear celT', PMN) szapefoxid előállítása, más reaktív omgéofajták előállítása, FMN mobilizálása, BM19 spopiózlsa, PMN defbrmálhatéságn, Áss ellenanyag-válaszok szintén hibásak leijeinek az idősebbéit.
A normálisai! elfogadott dogmával ellentétben az anti-burok-poltssachand ellenanyagok normális sslptje som bíztss, hogy hatásos a baktértutnok teljes kiürítésem, tóvei á pnepmokokkuszök ^tzdasejtskrt is megfámadhamak,elkerülve a? iínmöwndszer ézen ágat.
Meglepő módon ügy találtuk, hogy az írntnánrendszer sejt-közveftelt igának (példaal T-sejtok állal közvetíted íaaunitás) egyidejű ingerlése az útunpáreadw hümsfáiis ága (8-sejiek SM közvetítek) mellett szlaergetlkus hatást eredményez, amelyképes.fófowl a ^smnökőkkssz klörtllését a gszd^>ők Ez egy felismerés, amely segítheti a pno-mtokokkusz-fertbzes megelőzéséi (vagy kezeléséig általában, de különösen fontos lobot a tüdőgyulladás megelőzésében (vágj·- kezelésében) az idősekben, akikben a pídlszacharíd-alapü oliöányagok nem hatásosak.
.Azt találtak, hogy az ímmnarendszer mindkét ága szinergszálhat ezen a módon, ha (előnyösen konjugáit) pneamokokkusz polis2achandeí pneomosokkusz fehérjével (előnyösen a pneumokokkasz felszínén expresszált, vagy szekretálf vagy kieresztett fehérjével, amely processzálható és prezentálható a iertőzört emlőssejtek felszínén 1. és U. osztályba tartozó MHC kontemsábas) .adunk be. Bár & pneumokokkusz fehérje Ihdúkálhatja a sejtés immunitást magában is, azt találták, hogy egy Thl-indukáló adjhváms jelenlét® az olfóanyag-kiszerelésbes segíti az immonrwfezer ezen ágát, ős meglepő módon t©»· vább faközza az immunrendszer két ága közír szinergiát.
Az alábbiak a X, kiválasztott pnssmokokkítsz pohszacfesrtd-koníugátamőkat ős dö-MEt készítmésyekpt Wahúazó mogvalőskási sssődtn vosatkorttak.
A találmány tárgyát antigén készítmény is képezi, amely «gy vagy több pnemnökekkusz poliszaebarid-koojagámmet tartalmaz. 3D-MPL adjuvártssal kiszerelve, alapjában véve alumínium-alapú adjavánstöl. menteseit, ahol legalább egy pneu»n^©kkm:^ímebadd-kím)ugáhire szignifikánsan immu* «ógénébb 3D-MPL-t tartalmazó készítményekben, mint ölyartőkhan, amelyek sD-MPL-r és aiondni»alapú adjutánst is tartalmaznak.
Előnyös megvalósítási módok szerint a találmány tárgyát antigén készifméttyek képezik, amelyek az alábbi pseamokokkasz.bttrok-poliszacharidok közűi egyet vagy többet tartalmaznak: 4, őB, 18Γ, 19F ss 22F szmtlppsók. Az ilyen készítményekben a poiiszacharidek mindegyike meglepő módon ímmnttögértebb egyedül AfAMPL-í tartalmazó készítményekben, 3D-MFM és ahrrninirnn^alapü adjuVW is tartátaaző készítményekhez hasonlítva.
Tehát a találmány egy megvalósítási módja szerint a találmány tárgyát 4, ffi, I8C, 19E vagy 23E szerotipasó, tmrmmogén fehérjéhez konjugáit ®sr^íp«ww prnswíonme bmok-pohszaehariáöt, és 3DMPL adjuvánst tartalmazó antigén készítmény képezi, ahol a készítmény álapjdbxm vévé mentes alwmimtr-aiapú adjuváasfól.
A találmány egv- második megvalósítási módja szermt a találmány tárgyát kombinált antigén készítmény képezi, amely alapjában véve mentes alntninlnm-aiapü adjuvánstóh és amely 3D-MPL adjuváitsí, és kettő vagy több pneumokokfcusz bttrok-poíiszaehartd-konjngámmot tartalmaz, amelyek a 4, öB, 1SC, J9F vagy 23F szerotípusok bármelyike.
Az alábbiak a 3,« bakteriális pohszachand-pnotoin B k&njagáítmmkat tartalmazó megvalósítási módra vonatkoznak.
A találmány tárgyát: poliszachmiö-kö^gSímn antigén képezi, amely patogétt bakléripmbőí származó pplíszneharidsantlgént: tartalmaz őytneípw proféin B Mtég^óbsz, vsgy annak tegmenséhez ksmjugálva. Szentéiül a találmány tárgyút képezik polivaleas készítmények, ahol egy vsgy tőid? pöliszácbsrid-antigén protein D-hez vas koájegáiva.
Az alábbiak az 1., pseunmkokkusz polbzaebarid-oítőapyagískat tartalmazó megvalósítási módra vonatkoznak,
A találmány tás^ya javított oltóanyag. előnyöse® idősek (és/vagy essmsemök ős: kisgyermekek) pneumokokkusz-fenózósének megelőzésére és enyhítésére.
A találmánnyal összefüggésben egy beteget idősnek tekintünk, ha 35 éves vagy annál Idősebb, tipikusan őö éves vagy idősebb, és általánosabban 65 évesaél idősebb,
Tehát a találmány egy WgysMsöássi módja szertár a találmány tárgya idősekben (és/vagy «seesernőkben és kisgyermekekben) való alkalmazásra megfelelő oltóanyag-készítmény, amely legalább egy 3rrepmeoec«.·? pöiiszsebarid-asílgént, és legalább egy' poemnömue fehérjeamigént tartalmaz.
A találmány egy nrásodik, elönyór tnegtaiősv&st módja szerbi a találmány tárgya (idősek tüdőgyulladásnak megelőzésére alka'mas) ölti ssny ag-keszítmény, amely legalább égy őrreproíáJöms gmanto/una poliszacharid-asögém, ős legalább egy- Aíregtítwöms pKeamosíse febőrjeatáigént, és Tkl adjavánsi tartalmaz.
Előreláthatóan: az oltóanyag: alkalmas, lehet pneaíuokokkösz-lertezések (példád kőzépőMgyalb· dás) kezelésére is a populáció más magas koekássató csoportjaiban, mint példáulcsecsemők és kisgyermekek,
A találmány égy harmadik megvsléát^i módja szerint a találmány tárgya olíőanyag-készítmősy, amely pneumokokkusz poiíszachand-antígént és Thi-adjuvánst tartalmaz.
/1 Zg/d/wnfrn’ seeAa.'j Őfreumc.vcoio pfnejmoume jSjoffeassfegriflf-^Hr/aié^á
Tipikusan a találmány szerinti Str^ococeas oltóanyag (ciburosen komugúk) palrszaehsríd-antsgéneket tartalmazhat,. ahol a, pobszacharídok legalább 4 paewekokkasx szeretlpnsból számrazítsk. Előnyősén a négy szerottpus a őB. í 4, I9F és 23F. Előnyösebben legalább 7 szsrohpus w a készítményben, például a 4. 6B, 9V. 14. tdc, 19F és 23F szeroőpusből származók. Még előnyösebbért legalább i i szerotipus van. a. keszitWnj ben, például egy megvalósítási mód szerint a készítmény tartalmaz: 1, 3, 4, 5, 6B:, 7F, .$¥, 14, 13C, I9F ős 23F szerotípusből származó (előnyösen koniugált) htuofcfmiiszaeharidökat, A találmány egy előnyős, megvalósítási módja szerint legalább 13 (előnyösen: konjugálí) gollszaeharíd-tmtígéni van a készífensnybeb:, búr további soliszaefesnd-antigének, például 23-vulens (mist például 1, 2, 3. 4, 5,6B, 7F, 8,9N, ÓV, 10A, 1IA, 12F, 14, 158, 17F, 18C, 19A, I9F, 20,22F, 23F és 33) készítmény szintén a találmány tárgykörébe tartozik.
Idősek immunizálására (például tüdőgyulladás megelőzésére) előnyős a 8 és I2F szerotípusok felvétele (és legelőnyösebben a 15 és 22 szerotipuseké is) a fent feltárt 11-valens oltóanyagba, 15-wfens oltóanyagot kialakítva, míg csecsemők vagy kisgyermekek esetén (ahol a középirilgyulladás a tő gond), előnyősép a bA és 19A szerotípusokat vesszük fel 13-valens oltóanyag kialakítására.
Tüdőgyulladás idős (55 év feietn'.! poptdámóban ős középBlgyulladds csecsemők (IS hónapos korig) és kisgyermekek (tipikusan IS hónaptól 5 évesig) körében történő megelőzésére és javítására a találmány előnyös megvalósítási módja a feltárt multivaless Ffremőc’oemó' /wxwjkw'ím’ poliszachandokat
Sfeeptoeomri föb&jéyel, vagy arrnak. íhmüínelógkdisg hmkcronális ekvivafehsével femihinální.
A lakás szerinti érielentben „Isttstunföldgiaiíag ferskeismálís ekvivalens'’ alatt fehérje olyan peptidjét ertják, amely a lefess szertsd felfetjék legalább egy epitöpját fertaksazza. llyea epttöpok jeiistn» zöen feEzlnj ksretíségbek, magasan megteöWk és képesek baktériumölő ellenanyag-választ felváltani, vagy' toxikus hatásokat megelőzni á gazdában, A funkcionális eksdvalens a lefeás szerinti fehérje fegtdább 15, és előnyösen 31) vagy több összefüggő nminosavásak felei meg. Legelőnyösebben a fehérje feagmenser, deléeíői. mint példán! annak íran£zmemhrán-deléníös variánsai (azaz & fehérje extraceílulúrts dörnénjéaek: az áikáilnnzásá), fűztők, kémkdlsg vagy genetikailag détosiSkáfe származékok és hasonlók alkalmazhatók azzal a kikötéssel, hegy alapvetően: ugyanolyan Inbnonválaszt képesek, kiváltam, mars a natív fehérje.
Előnyős fehérjék azok a psenmeknkknsz fehérjék, amelyek a pnetmtokefekssz külső felszínére kkettek (a gazda immunrendszere képesek azok»'» felismerni legalább az életciklusuk egy része során), olyan fehérjék, amelyeke; a pttenmokokkusz szekretái vagy kiereszt, Legelőnyösebben a fehérje
SSr^ococoas jMeu/wniae toxin. adhezin, kétkomponensű jeltovábbító vagy iíppprofeírs, vagy annak húmnnoiógiaikig funkcionális ekvivalense.
Különösen előnyös fehérjék nem korlstaö példái közé tartoznak ilyen kombinált oltóanyagban a (előnyösen kémiailag vagy «rotációval detoxifikáíi) pneumolízin [Mitehell és mtsai., Nucieic Aeids Kés. 18,. 4019, old. (1991)}; Mitekéi! és mtsai.. Einehem. Bíophys. Ásta fŐÖ7, 67-72. éld. (1989)( WO 96/1)5859,, WÖ9W8Ó9M. és WO 99/83884« számú nemzetközi közzétételi fe&tökj; PspA és tmssámesnhtán-defetáh variánsai (5 804 193. számú amerikai egyesüli államokbeli szabadalmi kát); EsgC és mahszmesnhrás-defetáh variánsai (WO 97Ό9994. számú nemzetközi közzétételi irat); PsáA és transzmembrán-delsták variánsai jBerry és Pair®, infeeí, hmnan. 64, 5255-5262. old, (I996)j; pneuínokokkmsz, kelln-kötö fehérjék és írgnszmembrá?t-deletáh variánsai; ChpA tmuszmembrán-defeíák variánsai (WO 9741151. WÖ 99/51266, számú nemzetközi közzététel; festők); glíeeraideb.id-3-fezfátdebidrogenáz [infect. immun. 64.3544, old. {1996}]; 1-ISP7Ö (Wö 9Ő/4Ö928. szántó, nemzetközi közzétételt irat): PcpA (Sanchez-Beato és mtsai., fEMS Mierofeíal Lett 164,207-214, öld. (1998)1; M-szerü fehérje, SB szabadalma bejeiesíés, EE δ 837 110; és adhezfeí-18627, SB szabadalmi bejelentés, EE 0 834 56$.
A leírás bán: alkalmazott fehérjék előnyösen a pneamohzm, PssA, EspA, PspG, CbpA bármelyike, vagy kettő vagy több kombinációja. .A leírás ismerteti az: ilyen fehérjék immunológísiiag feakslonsife: ekvivalensei a fenti defi hí elő szerbit.
A készítményben a fehérje segíthet a feneutnokakkusz-beíegség elleni T-sejtek által közvetített immunválasz kiváltásában - ami különösen szükséges tüdőgyulladás elleni védelemben -, amely együttműködik azinrnsmtrendszer Immorális ágával a pnemrmkokkusz imvázlőjának gátlásában, és stimtnalj j az opszoaofegoefeőzisí.
A febérjeantígéh alkalmazásának további előnyei közé tartozik további antigének prezentálása az öpsZijnc-fagoettözis foiy&tnaunrm -« a Kktctürs adbez o gr « t (ba edhez rí a\a manódét '.am tox;,; semfegesitése (ha toxíni alkalmazunk).
Brasvk srisgiátakissri agy rssagvakiskáo! ssstsd szsssásss a assáirsssiasy tárgya -Szí-i-y:^· í::?<.^ <??í< yaasvaoMx? ssisóassyaa. orz;> Ágasabb stágy, sMsryóáür; Ag&iáhb bén apfesyösabbssa iagaiább sszsírsagy szarorasosbó; szásAsazó MfegUí psseísmoksskkyfez yoliszadsasásj aakgásst, ás iaasiáhss agy. <;·-? vioavóssos kotsb Xovyas.zzzv-s y!vz.z/v;v,v íasrásáás sartaisssaz. A sAsssriok ogytkv vibssyesvss oavassiohzsss vagy TsasA vagy PspA vagy ChpA í'kgviooyosabboa dotoysiskák grsssissdsSzissy EkvgM; kstrsshksáeóS Agasábss prssítsssS'Oitzstsf vagy íKissk származékát és PsoA-s Sssr-ahssaz.
Moss ahvgysa fest aoshivaösz az sssasossizákk pohszaohasáíMs svogkózasávsávo; kaystsoAios yrohiássAk agysks? az a rásty, fegy a ssohszasávisárAk össssagvkbaa gyarsga^ áísroaooaarsak. AzAt. hogy sbsPAvsvkvshíksk ;:-zoss; a MAwkioádöksss borvfezötaháfjákhoz kossjagábsApsk. awfyek osotiákM á'Azssvs sagkságát nybbaaaC Τνζ: dósvök hogy s stdátsssássy szőri; a tdks-Asazoss pohszbakarsáttkA hyoss hordozóíáhásáához kspcsotgrk, Press partUzstohaPd^itrsstssssögáiSsk sdösPkssára ;aAdag ákasássosass askakrisízors: hordozók páAós közá ósMszik a dsrkárA-· ás tosa-sarzáossoA (szT: AT CP.MM7 ás Ti'), körsosásiga (,Tvyh«A kssspsA) hossaöesassAáa. (K;LH)S: M í?;v«XyM<k? ÖMPCAíx ás ís sahsrkisiiys s;$zi iroi; AbásjasziSrsssazáka. Sppf)).
Azosrhao sszsiessok prodáma kotsasobáos azoss áissslássosass alkalmazott tsorsÁzök ;s-sksdi?gyrkávei (1ásd as „Az óAsIMsösssss; alkalmazóit S;ordezékkas kspesóíafe probRssták szakaszra
A iaAfsssássy tárgy ás íz? asz; ogy skbrybss tssogyssAstsásí tssóA szóróst sav -st hssrdtszó prsUszsohzrkisb&ssss isrisrsrsssssgáss korssbaskosók elÓáPkasáSssa vasi alkáhs-ássssA, asrasy ssatss szassvod ozoss hsksÁsy októl. A pstastasokokkaaz oáPszsíátasásPídiipk sísshsassrsgáss kászasaástyvk (vagy tskóastyagok) viooyös hordozója a tbazvíyróaar ás/A-víszz? proíods D sekásráy:· (EP 0 Sód 6; 0 B, ordasa vadasi szishadakssí Irat). vagy sassak hagravszi!. Az aiksbstaAisss: tssvgAAA isagstsarsook khzá íastazstsk sog stó ?-ság öpsdpvkas: hordozó Iroysssoosak EkMyósv;; a psotoM D skstorasss; s irhássá iáAvrsrdrsátss iE-as órstajtssazhafis.
A písvsssssokokktssz pabsztabasád sovsthbs «Mssyós hordozása sssaga a pssassrssoksskksssz Ahágz tss oas ahogy & Jhsov atokokkasz Abásá á k' szokoszbass dr őarapok),
A saiáiss;say szokosi okóassvagak Sasa §Ássytksazs zstAvárta · aisSisasó. Magividó adMvdsssok körá tartoznak aAssshssMrS-'Sikk, rozst yátdássl akssraoisass· Sodrorid gri (atasss) vagy aAstthshísssAeszPsh dv kdök tssst, vas vagy vsak sós is aikarsssazhoMk, vagy ászt;Ah tiroziss vagy acodiák ookrísig kahössosaas vagy asssossossd szarsssazsasoa ooiazodsaskhsk vagy pobs'oszsarassal: okihssaáass ssssszssssszsóia.
Az sdbsvásss ssóssyóaoss Ths tlpsssö válasz k;vakoia az Asstsrsssvkhssz siiíEközysálMts ágássak sagk sására.
áAkórsaA?yyr<váALZt«.:yrfetásvyá
A TEl áspissá sshóksssak srsagao ssssazrarsvivia hsystrssoa kadvozstf a sóh-közvotkssís itssssstasvásasz kivákásÁsak asAás assssgár;ro, sóig a Tho-síoassA vkokiossk ssragaS: koisvesstsAsAjii Asdzsvos kvasozro a basstoráibs ssosrsrsssyábsz ktvakásárask az srstigásrrs.
Pontos, hogy osssAkazzdssk assta, hogy a Thk- ás Ttö-sípusó ssossssísvásasz srságkitPsrsböztsíáss stassr abszosát. A v&hssógbao agy ágyáss olyáss srsssysssísvístaszk toposz ki. asvXyvs vfebsozbass. Thá -rssk, vagy ThA srak sshatassk ;v. Azrsssbssi: sgrssks'ass tsáisysbsto;; a obxskihok rsstiárgah sssy sssódoa BgyáAsrshá vorsssk ahogyísss bioasssakss ás CotTsssass (Astststai Rsvsosv of fiSriSrssrsoiogy 7, MA s73. óid (19kP)) Akták agár OfM-pözskv T'Sgk ksósstskbass Pksgytssríár;y;ss;ó; a ThiOtpsssá vdkssszok a P· Sssrs ósvitai: fNP-y ás Η..·Τ v AskirnvsrssviásvvA kassvo;Sárosát: Más, gyaksasss a ThTAiisrsaá írssrsssasyáiaszÁivátístsáva; kozvvSsvssa; kast- 10 esoltttos eitokineket, ·η1η· például az ΙΕ-12-t nem T-sejtek termelnek, Ezzel ellentétben a Tb2-tipnsá. válaszok (1.-4, 1L-5, 11-6 és 11-Jö szekréciójával kapcsolatosak. Az elstót^a/Thl-tspasá választ előidéző megfelelő adjuváns-rendszerek közé tartoznak a monofoszfbril ítptd A és származékai, különösen 3-de-Oaetl-monofoszfoiíl llpsd A, és mosoibszfenJ lipid A, előnyösen 3-de-0-aeiEmnt5ofoszforil lipid: A katnblnáeldis alumínium sóval.
Javított rendszer monioftóforil ítptd A és szapoaia-tórmazék kombinációját tartalmazza, elő* nyösen OS2; és 3D-MPL kontbináeiója. a WÖ 94/1)0153, számú nemzetközi közzétételi irat fehárása szerint, vagy kevésbé reagáló készlhnényl, ahol a QS2i-et koleszterinnel gyengítjük a WO 96/33739. szarná nemzetközi közzétételt irat feltárása szerint,
Knlöpöscs hatásos adjuváns; kiszerelést tár lel WO 95/17218, szántó nemzetközi közzétételi irat, amely :QS2lA, 3O-MFík-t és tökoferolt tartalmaz olaj-yfe ewlziobsn, amely egy·' előnyös kiszerelés,
Előnyősén az oltóanyag tartalmaz továbbá egy szaponínt, előnyösebben QS21-;. A kiszerelés előnyösen ísrtslotazhat olaj-víz emulziót és íokofersk(WÖ 95/17218, számú nemzetközt közzétételi Irat k
A találmány tárgyát képezi továbbá eljárás ohóanyag-kiszeralés előállítására. amely szerint taláhríársy szerinti fehérjét gyégy67 szerészeki.elfögndható kötőanyaggal, mint például 3D«MPL«Jel keverünk,
Meíiláiaifen Cp<3~t tartalmazó ollgonukieotídok (WÖ 96/02555. számú nemzetközi közzétételi irat) .tótién előnyös fednkáiőszerej s Thl-típsíső immunválasznak, és megfelelőek találmány szerinti ab kalírtazásrs.
A találmány verődj különösen előnyős feészktséuyek tartalmaznak egy vagy főbb kostjagáíi anenmskökka:;z pobszaeharidöt, egy vagy több pneumokökkw:. fehérjei es W-adjutánst A sejtközWtWd válasz kiváltása pneumokokfcasz fehérje által (mint sfeogy fent leírtak), és az snmrnnrendszer két ága közti egyúJttniüködés elősegitijető ilyen Thl-aájnváns alkátautzásaval, különösen hatásos oltóanyagot ereátnényezve pneumokokkusz-betegség ellen állatában, és ferttos módon az idősek pneúmokbkknsz íöőSgyöll&dása ellen.
A találmány további megvalósítási ofed szerint a találmány tárgya a feltárt Immunogén vágy oltóanyag, gyógyászaim történő alkalmazásra.
Még sgy további megvalőskási mód szedni a találmány tárgya készítmény,, amely pneamoknkkasz poiisztóarid-ko^ugátumöt és, Thl-adjuvánsl (előnyösen 3©-MP:t-í> tartalmaz, amely képes szerökonverzisraj: vagy bwörábs ellenanyag-válasz kiváltására a pöliszaebartd-atttlgén Asá a nem reagá lók popyláéiöjúban,
A populáció !8-38W-a ismert módon nem reagál; pollszadháriil rnmmnízáiásra (nem reagál az oltésanyagb&n lévő szerotípusok több mint 5ő%~ám) ÍKonradsett és mtsai,, Scaná. J. immunoi. 48, 251. old, (1994); Rodriguez és mtsai., JIO 173, 1347, old, (1996)j. Ez dőferáölhat konjugált oltóanyagokkal is [Moshez és mtsai., Clin, Int, Dis. 27, 1487. old. <1998)1. Ez különösen komoly lehet a popalácső magas kockázató részeiben (csecsemők, kisgyermekek és idősek).
Azt: feklkuk, feögy konjugált pneaínokokkssz nolisztóorid (amely hajteös abesosy válaszra egy bizonyos populációban) és Tbl-adjuváus (lásd az „A találmány szerinti Tb I -adjuvá-rsok” szakaszt) kombinációja meglepő módon felülkerekedhet ezen a -asm reagáló állapota». Előnyösen 3D-,MPI.-t kell alkalmaznunk, legelőnyösebben 3D-MPi..-t aiamininm-alapó adjuváns nélkül (ami még jobb választ biz-osö). A találmány tárgyát képezik tehát ilyen készhsjéttyek, és továbbá Thí-adjuváns. alkalmazása a pof^charid-aadgóm® sem reagáló egy.<nekben piteumökökkusz-betegség elleni kezelésére vagy sitól való védshnérti alkalmas kosingált gseámfeakkm políszaehsriiAmulgéuekoí tariaéinazó gyógysze? gyártására.
Bgy megvalósítási mód szerint sdori egy eljárás tüdőgyulladás megelőzésére vsgy javhására tdös eniheritsn, amely szerint az oltóanyag biztonságos és hatásos mennyiségét Adjuk. be δ leírás szerint idős betegnek, amely oltóanyag Ssrajo/oeoceasr pHeüifianiae poHszaehariá-aötígéni: és akár I'hl -adjuvánst, akár pnenmokokkősz fehérjét (előnyösen mindkettőt) tartalmaz.
Bgy további megvalósítást mód szerint adott egy eljárás kSzÓp&lgyalladás megelőzésére vsgy javítására csecsemőkben vagy kisgyennekskhen, amely szerint az oltóanyag biztonságos és hatásos meny-: nyiségéi adjuk be a bírás szerint csecsemőnek vagy kisgyermeknek, amely oltóanyag 5>epíoc<?e<w jwwm póhszachnrid-sntlgént. és akár Wi-adjsVánst, akár ptwokokkusz fehérjét (előnyösen mindkettőt) tajtahnaz.
A fent leltári garasokban: a pöííszacbarid-anrigén: előnyösen: peílszaebaríd-fehdrie-köajngábím:ksní van jelen.
A találmány szeríhb oltóanyag-preparáímnok fertőzésre fogékony emlős védelmére vagy kezelésére alkateazbatöb az ókrinyag: srisristnás vagy «yáteáriyal beadásával. Ezen beadási módok közé tartöznak. intramuszkaiáris, ímjaperitóasáiis, istradermábs vagy szubkután injekciók; vagy nyálkahártyái beadás a szójüreg/bélrendszeri, légúti, hugyívan szenekbe. Az intraaazális beadás tüdőgyulladás vagy középiklgyulladks kezelésére előnyös (mivel a pnetmuíkokkusz orr-garatííregi bevitele hatásosabban megelőzhető, így a fertőzés a legkorábbi fázisban gyengíthető).
A konjogálí antigén; mennyiségét minden olióanyag-dozisháa ágy válaszuk meg, feogy védő immunválasztváltson ki tipikus oltóanyagokban szignifikáns káros hatások néfed, &z a msmtyiság változhat az alkalmazott specifikus hmnatogéntől és a prezentációtól függően. Általában várhatóan minden dózisAU-W ng pollszacharidot tartalmaz, előnyösen 0,1-50 pg--ot előnyösebben ö,l~!0 ngmt, legelőnyösebben 1-5 ng-ot
Áz- oltóanyag fehérjetsrtalnnA pkns&a az: Í~íö8 ng tartományban lehet, előnyösed S-SÖ gg> legíipikossbhan 5-2$ pg.
Egy adott oltóanyag komponenseinek: optimális mennyiségét .az alanyokban megfigyelt tnegteíetó rnmmnválayzskát magában foglaló szokásos vizsgálatékkal áilapitbasjuk meg, Az elsődleges Immunizálást követően: az alanyok egy vagy több megerősítő immunizálást kaphatnak megfefeiő .időfeözőriként,
Az oltóanyag-előállítási általánosan a „Yaccme Design the Subunit and Admvant Approach jszerk.: .Pow&U és Newman, kiad.; Pfenura Press NY (199S)j dtnö könyv tárja fel. A Ixposzómákba való bezárási Fallerton (4 235 §27, száma amerikai egyesüli államokbeli szabadalmi irat) tárja fel.
Az alábbiak: a 2„ kiválasztott pncamökokkusz poliszacharid-konjugáruraokat és 2D-MPL. készítményeket tartalmazó megvalósítási módra vonatkoznak.
A találmány szerinti értelemben „a találmány szersrat pneumokokkusz poiiszaeharidkonjugatumok” kifejezés alatt a Srrep/ococcus pwomowoe burok-polis2ae^sdok olyan fenjaaátamatt értjük, amelyek immumnumebbek 'JD-MPh-í tartalmazó készllményekben,. mint 3fe-lriPh-t alumíniumϊ ·*>
2.Ζ aíapá adjtxeánsokkst egyW tartalmazd készdiwéayekbsn (példád 4, őB> 18C, 1EF vagy 23E sserodpas kerjtígátumai}.
A találmány szerinti értelemben «alapjában véve ídwsmnn-i-afepá: adjsvánstöl mostes” kifejezés alatt olya» készítmény! ériünk, amely nem tartalmaz elegendő ahtaaíbiusn-alapö adjuvánst {például áinmí«iuoi»hidroxido?, és előnyösen sfemtóm*íosa®s$ ahhoa, hogy a találmány szerinti poeumokökknsz polisz?.cbarid-k<mkígáírím rmmünogenkásának: bármilyen osökkésését eredményezze ekvivalens készítményhez képest, amely 3D~MPL-i iartslínaz hozzáadott alumínium-alapú ttdjuváns nélkül. Előnyősén az igsttigénhstású készlttsény lényegében 315-MPE-t tartalmazó adjuvánst keli, hogy tartalmazzon. A. dózisonként hozzáadok aiutntntasv-aiapá adjuváns mennyisége előnyösen kevesebb, mist SG pg, előnyösebben kevesebb, mint 3Ő ng, mégelőnyösebben kevesebb, mim 10 ga kell, hogy legyem és legelőnyösebben nem adunk atemínlutn-glapb adjsvánst a találmány szerinti aniigenfetiásű készítményhez,
A találmány céljaira annak meghatározását, bogy egy pímumbkokfetsz poliszsebartd-konjugátu® szignifikánsan hntnunőgésebfe-e 3D-MPl.~f lartabstazó kessitményekbett, mini zlWPL-i áktmímnraalapb adjnvúttsökkai együtt mrtáltsazé készítményekben, & 2< példa feltárása szerint kell megvalósítani Annak a jele, hogy egy készítmény szlgmfekátw! immunogénehb, amikor egyedül 3iö-MPE-t tartalmaz, egyedid Gfe-MPk-t tartalmazó és 3D-MPk~t aíammium-feszfát adjuvánssa} egyöíí tartaíntazó ekvivalens kHrtííhény közötti GMC ígCí-kenoentrábié aránynak nagyobbnak kell lennie, mint :2»; előnyösen mini 5, előnyösebben ntbA 7, még előnyösebben nádi 9, és legelőnyösebben mitrt 14,
Az immunizálás poliszaeharldos megközelítésével kapcsolatos problémák közön van az a tény, hogy a pobszaebarídek önmagukban gyenge nnnmnogének. Az tmmunogenUás ezen hiányának leküzdésére tervezett straíégták közé tartozik: a pobszaehaddokn&k nagy unraunogén hordozófehérjékhez valé kapesetés», amelyek nJ.eke« T-scuex segítséget nvéjtarx\ F'tmyós. hogy .» taülmárs szerint alkalmazott peíiszaeharídokat horddzőfehérjébez kapcsoljuk, anteiy mellékes T-sejles segítséget nyújt. ilyen alkalmazható hordozók példát közé tartozik a dirtérla-, mutáns diftéría- és tetanusz-tővbid (DT, DT CRbííP? és TT), kürtösesiga (,Aeyhole iimpet”) hemcctanioja (KÉS), a tuberkulin tisztított fehérjeszártnazéks (PPD), és ,Vg«-Sírn« OMPC-je,
Legelőnyösebben a /«y/ueHzaa protein D fehérjéjét (PPG 594 610 8. számú európai szabadalmi hat s. vagy annak öngmensett a&aim&zzúfe(lásd a következő szakaszba találmány 3-,, bakföriálís poliszsehadd-profeb D könjügáíütttöknt tartalmazó megvalósítási módjáról) itbmttnogén bsmfezófehégések a találmány szerinti pucutnökskktísz pöíisztíeísartdökltöz.
Egy megvalósítási mód szerint a találmány szerinti aníigéohatású készítmény pnetunokokknsz 4es poliszacharid szerosípnsf (PS| tartalmaz femmnogéa fehérjéhez konjugáiva és 3D-MPL adjuvánssa! kiszerelve, ahol a készümétíy alapjában véve aínmínmm-aíapü adjuvánstól mentes. További megvalósítást módok szerbit az snítgénhatásá készítmény PS bö-t, PS ISC-t, PS IPE-et: vagy Pb 23F~et tartalmaz immttnogén fehérjéhez konjngálv» és 3D-MPL adjuvánssa! kiszerelve, ahol a készíítaény alapjábatt véve afembbörü-aiapú aőjnvánstéi mentes.
A találmány ruég további megvalósítási módja szerint a taláitnany tárgya kombinált antigénhatásö készítmény, amely két vagy több pneamokokkusz poliszat&arid-kmijugúiumot tartalmaz a ES 4, PS 68, PS 1SC, PS 19P és PS 23F közül 3D-MPL adjuvánssaí kiszerelve, ahol a készítmény alapjában véve alam in intn- alapú adjnváestö 1 mentes.
- 13 A találmány szerinti pneumokokkusz poHszachariá-konjögtemk Immunogesításőta® befolyásolja szignifikánsan más pneumokokkusz políszacfearid-kőajugátumokkal való kombinálás {lásd a 3, példát). Ennek megfelelően a találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint a találmány tárgya kombinált auíigénfeatású készítmény, amely egy vagy több, találmány szerinti pnenmokokknsz poliszaeharidköhidgastmoí tartalmaz «gy vágy íöbb, további találmány szer-ntl pneumokokknsz poliszaeharidkobjogáíbonnal kemhmálvá, ahol a kézzkmény íD-MPLadjávánssaí kiszerelve, de alapjában véve aímrdnnim-aiapó adjuvánsfel mentes.
A találmány további előnyős megvalósítási módjai szerint a találmány tárgya kombinált aníigénhaiásá készítmény, amely legalább egy, de előnyösen 2, 3, 4, Vágy mind az 5 psoumokekknsz poiiszacharid-konjagáttmtíst tartalmazza a PS 4, PS 6B, PS 1 SC, PS 19P és FS 23F körill, és ezctífelöl más pneomskokkasz poliszaeharidAonjugáímnot bármilyen kombinációját tartalmazza, ahol a készítmény 3D-MPE adjuvánssal kiszerelve, de alapjában véve alumínium-alapú adjuvánstól mentes,
A találmány szerinti Strígsúseoeesskombinációs «ígéshatásö készímfeny tipikusan konjugált poílszscharid-antigéneket lartalmuzhaL amelyek legalább négy, bét, tizenegy, bzenfeámm, tizenöt vagy huszonhárom szerotípusböl szármáznák .(lásd az ,A feiálmásy szerinti Strepíócoceus pnoumosíae póllszacharíd-atstígének” szakaszt feni a szeroíípusok előnyős kömbfeásióhoz, a kezelendő betegségtől feggőeak
A találmány szerinti sarigénbatású kdsritaenyeket előnyösen oltóanyag-készítményekben alkalmazzuk psetm-okokktísz-fertózések megelőzésére (vagy kezelésére), különösen idősekben, csecsemőkben és kisgyermekekben,
A találmány : további megvalósítási módjai közó tartoznak; a festi asfigénbatáső készítmények biztosítása gyógyászatban történő alkalmazásra; és a fenti antigéhhatásó készítmények egyákének alkalmazása pnenmokokkösz-betegség megelőzésére (vagy kezelésére} alkalmas gyógyszer gyártásában.
TSdŐgyzíliaőás idős <55 év telein) populációban és középdllgyoiladás csecsemők (IS hónapos korig) és kisgyermekek {tipikusan í S hőnígkől 5 évesig) körében történő megdŐzésére(Iávííására egy' további előnyős megvalósítási mód a feltárt maltivalens Strepíöcoez'áy /gtgtMtte poliszacbaridok Nwmeíwíoí riaeínórnnme fehérjével, vagy annak inammolőgisilag fefeketös&hs ekvivalensével történő kombinálása (lásd a „Pnetmmkokkusz felfesj^” szakaszt fent az előnyös fehérjékhezés fehérje kombinációkhoz).
Az eddig felíárl: ánügéttolásá: készkmányek (és oltóanyagok) előnyösen lioii’izákak s felhasználásig, amikor azokat oldószerrel rögtönözve rekonstlmáliuk Legelőnyösebben azokat ŐD-MPL jelenlétében bolilízáiluk, és sóoídaltal rekossstituáljúk,
A készítmények líoílllzálása stabilabb készittnényt eredményez (például megakadályozza a poliszseharid-amigének lebomlását), A folyamat meglepő módón még magasabb ellenanyag-liíert okoz a pneumokokkusz poliszseh&ridok ellen. Er különösen szigniSkáosoak hízoayuh a PS öB koujugátumokra. Tehát a találmány egy másik megvalósítási módja PS SS kmtlugámmot tartalmazó lioiüizák: atúlgénhatású készítmény 3D-MPL adjuváttnsal és alapjában véve alumínium-alapú adjnvártsíól mentesen.
Az oltóanyagok előállbásáről bővebben lásd a íesít „A találmány szerinti oltőahyágpreparátutnok szakaszt í-b'liM.Jli
Az a lábasak á 3.
bsskiezsáks pee$z;sebasdl-proA A D kösxjAÁsassekel: iasds Assza Asg-asAss;dd asidra vínsspkxsznak,
A kaAbksáb. öitAapyage>kra xslé Arekves előnye a beteg késsyelssetlessségéssek csökkeaséze a tervezés esezkönssyltése. és, a tesdpía Peüéezéséaak bszUabásssi azekhsse ezzel egy ás t lér az eliőassydg hedikeeyságá esek kssss eséssel·;: a. keekázssta (Idsssi fest az ep kúp -szrsps essasd sárgy Haséi a bordezssiekésjék uhzelt sAaboezáiiév;!: kssgesAasbaA Ezáltal; vidsryös Hítsse olyas: sskösiaysz-kosrAAéesslk elAsIlsiésa. ;e-seIvek íkiűzi tessoek & papaié Ab igéssyeiaek. és emeÖőtt íxa mnWatk Sostssíisssoidgsal zavard haláéi a kora·· AASASxk közös:. Ezen etöiiybkeí eiérbsAjök: ss iaiéhaápy szes'insi ssssíistissogéá kdszdsriétsycikkel (vagy sütő»»ysgokksis), aaseiyek kösöaösest eldssyöaek kozssbirsah eA-aayagrA beadására ssaazas koskazaísls esopörSokbssv sssbst példás; e;;ees»;rsek. líbsgyetíiseksk vagy hősek,
A t&ldkrsarsy tárgyat képes! Aesvaeyhső-s /Aseeeroe P»oseh E lebésyéh, vagy esősek Eagsrseaseg gídizzsetwhoslaph imsmmogén készítmények, kössük ekőanyagék hordozóiakéi:!. Az alkaisstazbsra osegEbejö Iksymei'Ísek közé tsdezeak & segítő ?-sed epkőpekaí besdezd Shigissesssek, hdsrydsest a groleso D kazAxas a S'ébés le N verseieábs Isa-él SarsAsv-zhada.
A prsssels; Ö é/öees· ssA/h.? h.áhesámss sgD-köh íebésáéle (EE 0 S94 o i0 E, szássh «isrésgas sssábsdalssti kai) és pednoíálss eoraüssogée.
A i&lálesssoy táígykssdbe :ast;s AvszO grotelsz D-bsss kosdtígálarho poihszaehssrídök sxa kor!esesd példás kdéé saziestk a döbíSiíSAA öydsz Vs-pötsszaebsirídia, ts-sessistgiákokkstsz pvhszacharsdek (ködök az Á, C, ávséő és V kpAik és s E-esoppsáos íőéáísaőkökkáss: pöbszaeharidok és sosidosítöd pokszavharsdol·;.?, Erzysdsbaoioas modos polkzaeles-kisk. Ezxepsvesreiv·» ΡΖίχΟζϋΖορ pobszsebarldek, Ah'íAAöoÁAS AaisiswÁA psálíszaePasáshk, zsbköbakiérimsz podszaebAtshk, példáéi dAosJíhAszbsh PÁAAAssk? psdíszaehssrsehk (mint példásd snarisüshrssödsdsiikhk, behálózok, isdkoisssv, sosmsoizsapkázots a-ablsaszlikáiSiA, ezek boska, és: arabhogszkskishsrk), ékríVveoievχ íse<:ybí'ía<zaz pokszaeh&rldstk, aíA dplzdlhsíé (bziZSStyAs/XS AéAeíOO;.· beOpbliZSSie AtS IshA. é/is;:?.>;··.piSAA iAÁeAzA b hiszek· polkzarba-ldla. édvoéeóA zorbozAEís dpopobssáebarsöok, ÓdopsEiZ ívoívA bpopobssaeb&rÍsdok, Ayspezíissoiiíe ,?;>A Hpepep;kAhsssfoahká;s A.PPA;. rákkal: kapsrsolstsás (IDA Gs Iz gsssg! Azsdoz or aorta! kapcsolatos Phobkdb kölostiises· ss 'Γ-ζ-zábge·?. os a s;s:!aíi!T-E'&sstsaéss, és a Hl v-vel kapcsolatos ptdsszKeEarsd, astseiy szesdezesbec a 'Γ-Ε-aotsyéasse! tököst.
A pohszaohasdbst háreslízAS Esvén ehásással kapnsoíhatpsk a köídözOíehés-Absiz, példáéi Lrkhlte (4 kAAAé. zzássto amerikai egyesült ábiszssokbeh szabaösbsás kai) és Asssstor és orisak (4 474 757, szásná:
aseesákas egyesül? ádastsokbeb szabaáakstl Aatt ellásd»» szesásti. Ehssyöseís CGAd-koriasszaGs: végzösxk sWO 9 Adásé 8. sadsssd z assza közi közzel élek hat).
.··'.?: l-Aassöeisaseilla-sda-spadhakse-setsasdiaraberA (GDAd) ess·;bálé ceagcsssi elössydsez: alkah· madzssk pss?IsksAsAiÖ-fehés)»AeppsváWaök szisdéziséee; A siandAo reaksiA viszoaylap savba köeödsséssyek közön haphasjak Azre, sikerűivé az alkelskas ρii···a ésvékeay peaseaehassdok hiözeliAsét Esess saiesézsa lePdevé lesz; ss hahezéldkééehez sü-sésö köayedaa ka|>öi>dláat,
A píídszsnhss'idüs vlzbes; xpgy ssiekkildssp eldiek lek A GDAP-b seetonitiiölxsp elppA lel., és SkOAsal a pelsszsseksa-kl-elkáiidsssa A)-A. A CDaP ;s pöbszssebsakl ksdeÍZskssíepe-balvsd reagál eAssáiésdsA alköAa, Az akiAás A s lépés aAa ess ars; adjak a horiieadrshésjét a seak Uéeisgyhez.. A liaasek eeesse· esssspöi'isas seaaélp-sk az akti vak pislssaseisandéslai kövasezs sa;?araa-kikésr ajksdva,
A. kapcsolási reakciót követően gliein nagy feleslegét adjuk a reetóóeíegyhsz tt maradók aktivált csoportok lekötéséhez. Ezután a terméket géisztiriük a reagálatian hordozótehésje és maradók reagensek eltávolítására, Bőnek megfelelően a találmány tárgya eljárás poiiszaeharid-profeís D kösjsgaísf mk cloáh lítására, amely során a políszaeharid aktiváljuk és a poliszachsridot protein D-hez kapcsoljuk.
A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint a találmány tárgyát ímmusogés készitóhy (vagy oltóanyag) kiszerelés képezi Sn-e^rwíeca®.jmemomea? fertőzések otégákaddlyozására.
Az, á .fesaáwbmush amellyel a gneumokökknszok a tüdőbe, gerincvelői folyadékba és a vérbe jutnak, alig érijük, A normális tüdőlöghólyagokat elérő baktériumok növekedését gátolja azok viszonylagos szárazsága és az léghőlyagok makro-'ági ainak aktivitása. Bármilyen anatómiai vagy élettani változás ezen koordinált védnkszo-meehaniztmisok megváltoztatására & tüdő fertőzésre való fogékonyságát tóközzá., A S'ír^Uföseeusyjőeavió'Wóie sejtfalának fontos szerepe a tüdő iéghőlyagaloak gyulladásának előidézése [Gltiespie és mtsaí., l&í 65, 3936. old. (1997)1,
Tipikusan a találmány szerinti Strepfeícmeaís eltoanyág: próteirt D-körgúgáíümokaí tartalmaz, amelyek legalább négy, hét, tizenegy, tizenhárom, tizenöt vagy tezoshárortt szemtipusből származnak. Lásd az „A találmány szerinti Streptococcus pneumoniae poliszacharid^ntigének szakaszt feuta szerotipusok előnyős kombteáctőho?,, a kezelendő betegségtől függően.
A találmány egy további megvalósítási módja szerint a találmány tárgya A'ktíssMs máutegdtöfe oltóanyag; előnyösen az: A, C, WI35 és : Y szsrodpusökbői, Afebsmoa bakteriális agyháriyágyuiladás egyik feglönídsabb oka. Esés organizmusok szénhidrát harisa vmiteseíát meghatározó tényezőként működhet, és vé dő édesauyagok célpontja. A szénhidrátok mmdazonúlta! jól Ismert módon gyettge hntáiihogének fttsd gyertsekekhen, A. látáhiteny iárgya kthönöseh megfelelő bordozófthérje ezen poíiszacfearidok szfenóra, protein D, amely olyan T-seit-epitópokat biztosít, amelyek aktiválhatják: a Tsejtes: választ az aúhgén-speclhkns B-sejtes prollferáció és érés segítéséhez, valamint .az immuneldgtai .memória mduk&lásához,
A találmány egy más wgvgjósiiási módja szerint a találmány tárgya Bfemopkífes m?fee8smé b burek-pöltszaolwid (PtePj-profein 13 kösjfigáhmr,
A tsíálmáay tárgykörébe fertőznek kombinált oltóanyagok ls>: melyek különböző kórokozók köre elten oyüitansk védettséget A protein D hordozó meglepően alkalmas- hordozóként kombinált elíéattyagökhan, ahol több pohszueharíd-antigéní konjagábnk. Mint ahogyan: fent említettük, epítópszuprösszjő előfordulása valószínű, ha ugyanazt a hordozót alkalmazzák különböző pohszaeteridamtgésekhez, A WGW51.339. szátná nemzetközt közzététel; iratban olyan készítményeket tárnak fél, amelyek megkísérlik minimalizálni ezt a zavaró hutást a készitutenybest SdvA péd&Wháíidök egy részének DT-hez, a maradéknak TT-hez való konjugálásával.
Meglepő módon úgy találtuk, hogy a protein D különösen alkalmas az ilyen epiíöp-szupressziős hatások minimalizálására kombinált oltóanyagokban. Egy- kombinációban egy vagy több poliszecharidot kedvezően protein FJ-hez konjágálhatunk, és előnyösen az összes antigént protein D-hsz konjngáikaijuk az ilyen kombinált sbówag^basElőnyős kombináció olyan oltóanyagot tartalmaz. amely .Yebserfe mmfepgöók C és Y (és előnyösen A) szeretspusa általi fertőzés ellen nyújt védelmet, ahoi Y és C (és legelőnyösebben .A) szerotipus égy vagy több poliszaeharid-antigénjét protein D-bez. kapcsoltjuk.
//<zamopáóM pollszaeharid-alapú oltóanyagot (PRP kottjugálva előnyöse® d'T-hez,
DT-hez vagy CRM197-hez, vagy legelőnyösebben protein D-hez) Is kiszerelhetünk a fenti kombinált oitóaáysgokkal.
Számos gyermekgyógyászati oltóanyagot kombinát; oltóanyagként adnak be manapság. hogy csökkentsék a gyereknek adandó oltások szamát. Ezért gyermekgyógyászati ©kőanyagokhoz egyéb anb'« gésefc is kiszerelhetek a találmány szerinti oltóanyagokkal. Például a találmány szerinti oltóanyagok kiszerelhetők, vagy külön, de egyídóben beadhatók jól ismert trivalens kotnbhtált oltóanyagokkal, amelyek dMéria-toxidot (DT). tetao«a»4oxoidbt (TT) és penusssász kötuponenst [tipikusan detoxíükáít psrtPSsztsz-tóxoidot (FT)] és fonalas hsnsagglntlniní (FHA) tartalmaznak opcionális psrtacsm&i (PRN) és/vagy aggluüninnel, például a kereskedelmi forgalomban kapható (NFANTRlX«DTParM (SmithKbneSeechasn Dfelögieais), amely DT, TT, PT, FHA és PRN antigénekét fertafaaz, vagy egész sejtes pertnsssíisz komponenssel, például a SnYtltKlineBeccham Bsologscals által forgalmazott TrítAnríx™.. A kombinált. oltóanyag tartalmazhat más antigént is, mint példáni hepatitisz B felszíni antigént (BbsAg), pölisviras-aníígénekef (példáni ínaktivált trismlens puli© vtres ~ IFV), ófermre/fe oreönsrekífb? kólsö membrán fehérjéket, nem tipizálható íTagmnpbóW fepsrerew febénákeí, M menbtghkák R küWmerébrán fehérjéket.
Előnyős caíferhuöő fehétjesntigének példái, amelyek kombistáil. oltóanyagban lobéiltok: (különösért középfölgyailadás megelőzésére): OMP106 [WO 97/4173 L (Aníex) és WO 96/34960. szántó nemzetközi közzétételi irat (PMC)I; LbpÁ és LbpS [WO 98/55606. szántó nemzetközi közzétételt irat (PMC)l; TpbA és TpbB [WO 97‘) ?785. es WO 97/32989. szánni nemzetközi közzétételi írat (PMC)j; Copö (Heimáten és mtsai., Intect. hámon. öt, 2ÖÖ3-2Ö1Ö. old, (1993)]; U«pAl/2 (WO93/03701, szántó nemzetközi közzétételt irat (Xlnfeersky of Texas® és ÖrnpCO, Nem tipizálható tfamopAdvs ?*$%&&&& antigének példát, amelyek kombinált oltóanyagban lehetnek (különösen középfülgyulladás megelőzésére): íhnhrfe fehérje [5 766 búk, szántó amerikai egyesült államokbeli szabadalmi irat (Öhio Slafe Researe.h Foundation)] és abból származó pepitánk fúziói (például LSl(t) peptidTúzíók, 5 843 464. számú amerikai, egyesük államokbeli szabadalmi Írat (ÖSUj vagy WO 9W64067. számú nemzetköz! közzétételt int]; OMP26 [WÖ 97/01638, szárító nemzetközi közzétételi irat (Cortecs)]; Pó [EF281 673. számú európai szabadalmi írat (State Umversitv of New Yorki}; TbpA és TbpB; Hsa; Mmwl,2; Hap; és Dió,
A találmány tárgykörébe tartozó előnyös gyermekgyógyászati oltóanyagok:
a) M C poijszachand-kortlogátum: és /Msmppö&íí úpítaÍZsc ó poltszaeharíd-konjugátutn, opcionálisan ,Y. wcnfegú'.tóm A es-vagy Y poliszacharid-konjugátummal, feltéve, hogy legalább egy poiiszaeharid-atúigén, és előnyösen az összes protein O-hez van kenj agáb a.
b) /fe a) pont szerinti oltóanyag, plusz DT, TT, pertusszisz komponens (előnyöseit PT, FIM és PRN), bepat Hisz B felszító aatlgőa és IPY (inaktivált trivalens políovlros oltóanyag).
s). őtrsyjíooöemtí psewmmm; polkzaeharid-zstígénsk protein D-hez kon jógáivá,
d) A e) pont szerinti oltóanyag, plusz egy vagy több Brarlb mítóf-Malss és/vsgy nem tipizálható J%íí?»jo/í6í/í#5 r«/?Ken?öe antigén.
Az összes fenti kombinált oltóanyagnak hasznára válhat protont D hordozóként való alkalmazása. Nyilvánvalóm! minél több hordozót alkalmazunk egy' kombinál? oiroaxtyagbar, ípéiöául eoitőp-szupresszió elkerülésére), aonát drágább és- öönyoioit3.hh a végső ©Üősnyag. A kómbináil oltóanyag összes pöiiszaehand-anbgébjének, vagy többségüknek protein D-hez konjugálása tehát jelentős előnnyel jár, tüdőgyulladás tóős <55 öv fcutő poputácsonms ős kózép:ülg\uhadás csecsemők, M kisgyermekek körében történő megelőzésére a taíülmüny előnyős megvalósítás? módja a feltárt mukivatens Sír^tócoccaí p»eíe»í?«í«e pöteastasdok-proíem D konjugánanokat StM/xmeoccHs iwtiw fehérjével, vagy annak immunolegiaílag tünkoionálls ekvivalensévei kombinálni. Lásd az „A taláímányszafW pneumokokkusz fehérjük* szakaszt fent áss előnyös fehérjékhez és fehérje kombinációkhoz, amelyekéi Ilyen komblnáeiskban alkalmaátatonkj,
Ennek megfelelően a találmány tárgya immuhegén készítmény. amely J^öcombywamös&e. poliszsefearid-proteín D konjngáttnnot és ámep/öehee»,’? ^«wiostöe fehégeantigént tartalmaz.
A találmány szerinti poliszacharid-profeb D kotóugátatnok előnyösen adjuvánns&l együtt szere* pelnek a találmány szerinti oltőariysg-k.tszerelésekhsu. Megfelelő adjuvánsok közé tartoznak aluminiumsófe, mint például sksntete-htároxtd gél (altira) vagy·· ainminiuts-feszfát, de kalcium, vas vagy cink sóit is alkalmazhattok, vagy aceíiiálí iirozin vagy acetiláh cukrok, kalionösaa vagy abionósart származtatott poliszaoharidok vagy polifoszfáKések oldhatatlan szuszpenzióját.
Időskori ©kőanyagok esetében előnyős, ha a kiválasztott adjnváss Thl -típosó válasz preferencialis Indukálőszere.
Thl-adjtsvfesókrÖl bővebben lásd az „A találmány szerintiThl -adjuvássők,, szakaszt.
Á találmány egy további megvalósítási módja szerint s találmány tárgya a feltárt imthtmogén vagy oltóanyag,, gyógyászatban történő alkalmazásra,
A. konjugátuntöt tarSáteaző ©Itóáoyag előállításául és ibeaáásáről bővebben lásd a femi „A találmány szenntl okőauyag-prepm-átnntok” szakasz?.
Protein EM előnyösen alkalmazzuk középfblgysllaáás elleni oltősnysgban is, mivel ötmmgábas egy olyan fanmunogén, amely képes B-sejtek által közvetített védelmet kiváltani nem tipizálható Bhmw/jőihísí fe/ljígosne (hifii) síién. Az ntfil eláraszthatja. ágazdasejfeket, és «lkenllhe?j a feijéíjössíigéö által kiváltott, B-sejiek által közvetített hatásokat. Meglepő módon tólátaik sg)’ atal a protein D hatásosságának növelésére: (akár önmagában, akár hordozóként poliszsófearlá számára) középfülgyulladás eilstri ©hóanyag antigénjeként. Est úgy értük ek hogy a protein LM adjuvánssai együtt adtak be oly módon, hogy erős Thl-választ indukáltunk az alanyban oly módon, hogy az immunrendszer sejt-közvetített ágának opnmalízáltuk protein ö ellen. Ezt meglepő módon protein ö-t és Th 1 -adjuvánst (előnyösen 3D-MPL~t) tartalmazó lieltlizáit készítmény alkalmazásával értük el, amelyet röviddel beadás előtt rekosstlíuákunk, A· utótó-an táigs it ke^zm lehat Mén Leszúrnom <Λ s, e, ams kw< jmtvk előállta? a tp.őtem ΓΜ és TbI-adjováhst íaríaierazé elegy líoftlizátásávslh és ilyen készítmények aik&hnazáas. középlSigytt&dáS: kezelésére.
Tágabb értelemben elképzelhető, hogy immortogén hottlízálása Thl -adjováns (lásd az „A Satálmáoy szerinti Thl-adínvánsok” szakaszt), előnyösen 313-MBL jelenlétében általában fokozza az immonogén elleot Immunválaszt. A találmány íebát alkalmazható bármilyen imrnuoögénhex, amelyre erősebb Thl immunválasz szükséges. Ilyen anmunogének bakteriális, vlrálís és tumoros fehérjestnogenekeí, valamint sájáísuyagMlle©; fehérjéket és peptídeket taríalmsKbak,
Szabadalmi példák
Az alábbi példákkal a találmányt részletesebben ss heorutaljuk, azonban az oltalmi köré nem kívánjuk 3 bemutató» megvalósítási módokra korlátozni.
& pAeíízmzfí&se fess roivpídsszsc Parki
A U-v&lens oltóanyag-jelölt tartalmazza az I, 3, 4, 5, 68, 7F, 9V, 14. ISC. 19F és 23F szerotsposó bprök-poltszadharidokak amelyeket lényegében az EP 72S {3, számú oaröpás szabadalmi Irat feltárása alapján kászlteítSak. el, Minden políszseharídot a CDAP kémia alkalmazásával (WÖ 95208348, számú nemzetköziközzétételi írat) aktiváltok és .módosítottunk, és a hwdozófebárjéhez kotpugáltank. Az összes poliszachaíísöt natív förmájában kónjugáítuk, kivéve a 3-zs szerotípust (amelynek. méretét esök7/ozA?-íí/eó4z/<*,·
A választott boxtezöíéhérjs zekombmáss protein D m tipizálható tfaeampOw hgTaers ím-ból» A eoA-ban expresszálvs,.
PROTEIN D OTRESSZÍÓJA
Wöífí?íopAd«s fa/?«r«z«e jtröfeAi tf
Protein © expresszáójának genetikai kouWukdója
Kimdísiásí anyagok ,4 povem ÍM SAAM 8.YS'
A protein D ángyén konzervált a tf influenzáé összes vzeroiípusábau és nem tipizálható törzseiben, A: teljes protein O-gént kódoló DNS-szskvenciút tartalmazó pNIC348-vektort Dr Á, Forsgreen-tŐl (Department of Medical Microbiology, Universíty of Lund, Malmö General Ftospkal, Malmö, Sweden) szereztük be, A protein D DNS-szekvenciáját lásson és misei. [falóéi. tapas. 59, 119-125. old. (1991)] publikálták.
A í>ö/G7 íS^zawAR vekfpr
A. pMűl ekpreászles toktat a pSR322 (Cröss és mtsal,, 1985) szánnazéha, amelybe D bakteriofág eredetű transzkripciós és transzlációs szabályozóelemeket építettünk he (Schatztsan és mísak, 1983), Ezenfelül az ampicillin rezlsztenciagént teamjein rezistfenslagésre cseréltük kit
Az AA55A, á<ú,’ för-s
Az AR38 A eoA törzset N99 PlAaggal való transzdskcíójávnl állítottuk elő, antélyet előzőleg SASÖÖ-szórmazékon tenyésztettünk (galE;:TN10, lambdaKíf CÍ857 Alii). Az N99 és SA50Ö Dr. Martin Rosenberg laboratóriumából (National insdtute of Health) származó ói eoZ? törzsek.
zt pA#GÍ ÉSQszessjM? veámr
A protein D termeléséhez a fehérjét kódoló DNS-t pMGl expressziős vektorba klónoztok. Ezen píaznnd iambdafág DNS-bói származó szignálokat basznál a beillesztett ideges gének transzktfpciójánák és transzlációjának irányítására. A vektor PL promöterL ÖL operátort és két hasznosítás; helyei (Null. és NuíR) tartalmaz a msszkrípciós polaritást hatások enyhítésére N-íehérje alkalmazása esetén (Gross és torsai,, 19S5), A FL~pronótert tartalmazó vektorokat lizogén £ cob gazdába juttatják a piazmld DNS stabilizálására. Lizogén gazdatörzsek replikát: io-hiányos lambdafág DNS~t tartalmaznak a genomba integrálódva (Schatzman és snísak, 1982). A krotnoszómálís í&tshdttísg DNS irányítja a aí represszoríNtérle szintéziséi, amely a vektor ÖE-represszznahóz kötődik és megakadályozza az RNS-poümeráz kötődéséi a PL-premőtethez, és szállal a:feeülmt«tl gén iranszkrtpeióját Az AR58 expressztós törzs cl-génje hőmérsékletre érzékeny mutánst tartalmaz, ily módon a PL-úknyitott transzkripciót bőmérsékleí váltással szabályozhatjuk, azaz a tenyészet hőmérsékletének emelése inaktivétja a represzszort és az Idegen fehérje szintézise ittegfaduk Ezen expmssztós rendszer lehetővé teszi idegen fehérjék szabályozott szintézisét, különösen szókét, amelyek toxlkusak tehernek a sejt számára (Shimafaka és Rósenfeerg, 1981),
Az AAhfd £ aeb kW
A protein D hordozó tenne.exers alkalmazóit A&58 Ínségén £. cpA törzs a szokványos NIH £ ooíÍ N99-es KI2 törzs származoka (T \u galK.2 iacZ thr). Hibás lizögen lambőafágót (galE::TNIÖ, lambd&Kír CÍ857 AH 1) tartalmaz Λ KT' íenor.pu.- megakadályozza. a gazda makromoleknia-szimézisének kikapcsolását. A e857 mutáció a ci-represszcr hőmetsékiet-érzékeny zavarát okozza, A ΔΗ1 deléció éltévsiftja a lambdafág jobboldali operonját és s gazda bio, uvr3 és ehi.A lókuszart, Az: AR58 £, eoö törzset N99 Ρí-taggal való transzdakdójával slhtottnk elő, amelyet előzőleg SASOÖ-származeko?'. tenyésztettünk (galE::TN10, lambda&ii' c!857 ΔΗ1). A hibás iizogénN99-bc való beépítését ietramkhoen szeíektálfnk a TNIE-Srasszpozon jelénléle révén, amely terraciklin-reziszíeneml kódol a szomszédos galE-génben, .4 pA/ófóf DFPzö-ve&tor áousfí'fíáddjs
Az inilaenzavtrus nem szerkezeti Si -fehérjéiéi fpMGNSl) kódoló gént tartalmazó pMGl-vektort alkalmaztuk a pMGMPPPrD megkonstruálásához. A protein D-gént PCR-rel ampliőkáhuL a pHíC348vsktorhói (Janson és mtsai., 1991), az 5’ és 3’ végeken sorrendben Neo 1 és Xba 1 restrikciós helyeket tartalmazó PCR-láocinditőkkal. Az Nco I/Xba I íragmenst ezután pMGNS 1 -be illesztettük be Nco 1 és Xba 1 helyek köztiig így olyan fúziós fehérjét botsunk létre, amely tartalmazza az SÍ-fehérje NAsrmmáiís 81 aminosava mőgÖts a protein D-t. Ezt a vektort pMGNSl PrD-nek jelőlfök.
A fent feltárt konstrukció alapján állítottuk elő a végső konstrukciót a protein D espressziójához. A pMGNS 1 Frö-feöi eltávolltonunk egy 8;un Bi/Sam Hl íragmeost. Ez eltávolítja ez MSI kódoló régióját az Él-terminális első három aminosava kivételével, A vektor réligáciöiát követően az alábbi N-íermlnáiis aminoxav-szokveneiájó fúziós fehérjét kódoló gént áiiitotfnnk elő:
—MDF SSHSSNMANT-------NS5 protein D
A protein> nem tartalmaz vezető pepiidet vagy H-tertnlnáks oiszteist, amelyhez aortnálisan lipidek kapcsolódnak. Tehát a fehérje se nm expresszálődík a perip&msáka, se nem módosul ilpidszámmzékká, hanem oldható alakban & eitcplszmábaó marad.
A végső mPG-MDFPrD konstrukciói az AR58 gazd&törzsbe jutteöük be hösokk révén 37'C-on. A plazmidot tartalmazó baktériumokat kasamim· jeinelétében szelektáltuk. A protein D-t tartalmazó DNS-iszert jelenlétét az izolált plazmld DNS kiválasztott esdonukleázokkal való emésztésével igazoltuk:. A fskombiuAüs £, oo/r törzset EGD-l-sek nevezzük,
A protein D expressziöja a. lomEda PL-promóter ős ÖE-operátőr szabályozása alatt áll Az AR58 gazdatörzs hőmérsek tel-érzékeny cí-geat tartalmaz, rw.j gátóbu a kmbda Irt, »oi \aio í,\pressziol aia•csanyt hőmérsékletett .az GiAhez való kötődés révén. Ha egyszer a hőmérsékletet .megemeljük, cf felszabadat az Ok-röh és a protein D expresszálódik. A fettttetttáiás végén a sejteket töményítjök és fagyasztják.
Az összegyűjtött sejtek extrakc iáját és a protein D flsAilását sz alábbiak szerint végeztük. A fagyasztott sejttcttyészef-csapadékot felolvasztottuk és újra fólszttszpesdáituk sejtíeitárő oldatban (citráípuffer, pH:-';b,Ö) OD«ío«6Ö értékre. A szuszpenzíőt kátózer ámyomtuk jnagasöyemásti homogén tzátoron I 000 bar nyomással. A sejt-enyészet homogenizátöíaát. centrifttgálássa! derítettük, és a sejttőnneléket szűréssel távolítottak el. Az első Tisztítási lépésben a szőrt üzátuntoí karioncserélö kromatográfiás oszlopra (Sf Sepftörose Fost Fów) vittük tel. A Protein D ionos kölcsönhatással kötődik sz oszlöptöltethez, és az elóciós puffer ionerejénok lépcsős emelésével eluálódik.
Egy második tisztítási lépésben a szennyezéseket nnioncserélö krotödíografras (g ^jferose Fdrr F&nvj töltetett tartottuk vissza. A Protein D nem kötődik a töltethez, és az srióiyáhan. dsszegtdljfhetö,
Mindkét kromatográfiás lépésben a írakesóazedést GD alapján követtük. Az anloneserélő oszlopkríítttatográfiíí átfölyöját, amely a tisztított protein D-t tartakuazza, sltrattltrácjöval tdÍöésyítetttlk.
A protein D-t tartalmazó altrafiltrétrtmot végül ö,2 pm-es membránon szűrtük.
Ó'ésrórt mrkc/ök
AMvdíekf ds köpe.mőAí /íeatófkr
Az aktiválási és kapcsolást körülmények specifikusak minden egyes poliszacharidrs. Ezeket az 1, táhiázatbanodjAk meg, A natív peliszaehsridokaí (kivéve a PS3-at} 2 M N&Cl-bad vagy vízben oldottuk lel az isjeketózáshoz. Az optimális pobszachand-koneenrrácíóí az-összes szerotípusra értékeltük.
ΙΌ0 mg/tnl«es aojtorattíics törzsoIda-bél CI>AP-t (a CDAP/PS arány Ö,?5 tng/mg) adtunk a poliszzehaj-íd-oidatboz. 105 perc elteltével 0,2 M trieliiatöfct adtünkhozzá a spselfíkus aktiválási pH elérésére, A poliszacharid aktiválását ezen apfí-n végeztük, 2 percig 25‘C-on. Protein D-t (a mennyiség a kezdeti 'PWD arány-tői higg) adtunk az aktíváit poMszaekaridhoz, és a kapcsolási reakciót a specifikus pH-η végeztük I óráig. Ezűtétt n reakeföt ghsbnet állítottuk le, 30 percig 25’C-on és éjszakán keresztül dte-Ott,
A konjögátantokat géisz&éssei tisztítottuk Ö,2 M NaCMel ekvliibrálí WO? gelszőrő oszlop alkalmazásával.
Az eínáit frakciók szénhidrát- és fehérje-tartalmát meghatároztuk. A konjugátumöí tartalmazó frakciókat összeötttőttük, és sterilre szőrtők ö.22 pm-es sterilizáló membrános, A konjugatum prepttrátumok FSlfehétje arányát meghatároztak.
Míadett kttujttgátutttot jellemeztünk, és azok teljesítették a 2. táblázatban leírt előírásokat A pöliszucbat-id-íartalmsí égg/ml} rezorrinol-teszStek a fehérjetartalmat (pg/ml) Lowrv-íéle teszttel mértük. A kapott PS/fehérle arányt (w/w) a koncentrációk arányával határoztük meg.
A poliszacharid aktiválása CDAF-vel cíanát-esoportokm épít ki a poilszaeharldon, és DMA? (4dimetilammopiridin) szabadul fei. A reziduális DMAP-tart&lmat specifikus. SB-rtélkííejleszlett vizsgálati eljárással határoztuk meg.
Szabad pohszachnrsd tartatom (%}:
A 4X-on tárolt és 3?*C-on 7 napig tartott ko:sjss.gátsrmok Szabad pohszaoharid-tartalr-mt a felüíúszóból határoztuk meg, amelyet α-PO ellenanyagokkal és telíted ansmónhan-ssnsSáttal való fekubálússak majd eenMfogálássalkapbsík.
A szabad poilszáeharld msghatátozhsáhpz: tt-PDAt-PS enzimes immunológiai vizsgálati eljárást (ELISA) sikalotazhmk; A konjttgátw hiányát szintén n-PDltr-PS ELíSA-val rnértök, A szabad polsszacharid aíenoylségések csökkenése javított boningéit oltóanyagét eredményez.
A síi górt hatás:
Ugyasezéís kessjísgátumok andgénbalhsáí szendmcs-ELiSA eljárással elemeztük, amfelyben a befogó és detektáló ellenanyagok sorrendben o~P5 és u-FD váltak.
Szabad feltérje tartalom (%);
A „szabad rezlduális protein D-í a mrnta SDS-kezeiéséveijáró ellátás alkalmazásával határoztuk meg. A konjugá&anoi 10 percig melegítettük ÍOú'C-on ö,l% SDS jelenlétében, és SEü-í-lPLC gé&slhó oszlopra {ASTÍ 3dő:7-Ph<á7..) vittük lei. Mivel a protein D átmér, fennáll annak;a kockázata, hegy túlbecsüljük a „szabad” protein D szintjét a szerkezet disszociációja miad SDS hatására.
A meiéknlanséret meghatározását -SEOfíPLC gélsz&ó oszlopon (21SÁ áódd-FhWé) végeztük el.
Á stabilitást SEC-HPLC géiszürő oszlopon (ΓΧ& őööd-Fd'A£) mértük 4’C~on tárolt és 37’C-on napig tartott konjugátnmokkai.
Atl -valsns oltóanyag jellemzései .&· 2, táblázatban adjak meg,
A fehéfjedronjtjgáíttmokat uimsdmtmt-feszfáíra abszorbeálhatjuk és ósszeöníkétjük a kész oltóanyag kialakításához, ímmmmgén konmgá&anokat állítottunk eló, amelyekről azóta bebizonyosodott, hogy egy Ígéretes oltóanyag komponensek feltártuk a legjobb minőségű konjógák ptseamokokkusz késztermékhez az optimalizált CDAP-körüiményekst mind a 11 kosnponens esetében. A fenti javított (optimalizált) CDAPeijáróssal kapható pneurnokokkosz poiiszaehísrid-korgugátumok í függetlenül a hordozófeberiotöl. de előnyösen protein D-vel) tehát & találmány továííbí ntegvalositási módját képezik.
2, példa — .feyífotí adj óvás? snk hatásának taotslmá ayözása a IMwlétss psettmokoldensz FSFl> kossjtsgált ni
PatkányeseesemŐkéí Immanizáhsshka í l -vsfests pnsomokokknsz PS-PD oltóanyaggal, minden egyes (az. 1. példa eljárása szerint előállított) pollszachartd 0,2 pg-os dózisával, és az alábbi adjuvánskiszereléssel: semmi, AlPlX, 3D-MPL. 3D-MFL AIPCh-on.
Az egyedül JD-MPL-t tartalmazó kiszerelés statisztikusan (és szegi epe módon) inmtsnogénébb volt (legnagyobb GMC IgG), mint a többi kiszerelések 11 -bői 5 antigénre;. Ez igaz vöt mind magas, intsd alacsony 3D-MPL-koncenöációkra.
Az opszmsöfegocitózís megerősítette a GMC-eredméayeket.
Anyagok és eljárások /wfenfed/urt sd/drda
Különböző anyáiéi származó. véietlenszeníen választott csecsemő OFA patkányokat 7 napos korban immunizáltunk elsődleges ölíássto Kel; további megerősítő oltást adtnúk 14 és 28 nappal később. Az 56, napon vért vettonk <2S nappal a 3.oltást .kővetően). Minden oltóanyagot szubkután adtunk be, és okóanyag-esöpcefenként 10 patkányt ntoshtotzionk.
A patkányokat 11-vutcrts pséumokokkusz konjugált oltóanyaggal immunszóltok, amely az alábbi políszacharid szerotípusokat tartalmazta protein Ebre konjugálva: 1, 3, 4, 5. 68, ?F, 9V, 14, Í8C, 19F ás 2?F,
AAcerebb
A feSfönbózö javított adjuvánsok hatásnak larmltoártyozására a konjugátom dózisát állandó szinten Imtottuk, ŐJ ug minden poFstocharídbói, és az. AlPÖ* és 3D-MPL adjm/ánsohü különböző dózisokban és kornhíuációkban szereltük ki, beleértve az sdgrváns néiltoli esetet Is, Ezeket a. 3,. táblázatban soroljuk, fel reiereneiakéto sorszámozva, .•toMoz/mto APi'A rt?
A koncentrált, adszorheáii ntonó valenseket az; alábbi eljárás; szerint állítottak élőt 58 ug AÍPCkröt {pB~5.1> kevertünk 5 pg kenjnsák poliszaebariddal 2 órán keresztül. A pH-ί 5,I-re állítottak be,. Ős tsz «legyet további 16 órán át hagytok. 1500 aM NaCI-r adtunk az eiegyhez s sokoueeníráciő 150 ntM-ta való beáiliiasahoz 5 perc múlva 5 mg/ml P-tonosieSanoit adtunk az eiegyhez. További 38 pere eitoltével a píkt ό,ί-rc állítottuk be, és több mint bárom napig hagytak á'C-ott.
<Wd$zíT<tfc dód/ífrdss
Három oldószert állitoitonk elő 158 mM NaGilS mg/ml fesasietanoifean,
A: 1 mg/ml A1PO<
3: 3G-MPL AlPÖ^-es, sorrendben 258 és 1888 pg/ml, iöntogaráuy 5:28
C: 3D-MFL AlPCh-on, söwníben 561 és 1888 pg/ml, tömegarány 58:>39
Asőmróed/? //-rtzfenv e/nő/ktosg
A 1.1 koncentrál» aászorheák FS-PD monovalensl a helyes árnyékban összekevertük. .Az AlPÖ^ktogósziiésí m A jelű oldószerként adtok, Ahol szükséges, 3D-MPL-Í vagy* vizes oldatként iwts adszsrbeált, alábbi 1. á·), vagy 3 vagy C jeilí oldószerként (3D-MPL AlPsA-ori érszurbeáíva 2 dózisban, alábbi 2. ot) adtok az eiegyhez.
A ,«í
A kombinált adszorbeáh konjugáíumokhoz vizes oldatként adtok a 3FA-MP1 -t. 10 periig kcn-rtok & i: 1-vaiéns élcggyeíés áAAos tároltuk beadásig.
3B~MPL-i. eióadszorbeálíak AIPÖ<-ra a kombinált adszorbeált konjogátotnokhoz. történő hozzáadás előtt (3 és C jelű oldószer). 1 mi oldószer előállításához 3D-MPL vizes szuszpenzióját (250 vagy 561 ug) 1 mg AlPO<4al íl 58 mM NaCi-bsn, pH~6.3) kevertük 5 percig szobahőmérsékleten. Ezt az oldatot hígitottok NaCÍ pl-toó, 1/fenoxiem.uolUd, és inkubáituk éjszakán ár 4°C-<m.
Atom s?A«tor&?íí& I í-wtoss rtotonr rug edÖOAAstí
A tizenegy·' PS-PD konjugáttrtsot a megfelelő arányokban kevertük és 150 snM NaCÍ, pH-ÖJ/fguoztsiaitoi püffed hígítóitok. Ahol szükséges, 3 D-MPL-t adtunk az. oldathoz (nem adszorbeáits.
Az összes oháshoz: szükséges kBznrelésst: 18 nappal az első beadás előtt készítettük eb £OSA
ELÍSA eljárást végeztünk a patkány IgG mérésére (aá ELÍSA eljárás végzésére vonatozó WBÖ Munkaériekezlet szerinti eljárás alkalmazásával) ókrepfococeas pnímwo??ine burok-poliszacbaridjaí elleni IgG-ellenanyagok nmsvlségéoek meghatározására szérumban. Lényegében a tutkfbíitei’lemézt közvetlenül vontuk be tisztftett barok-poliszachariddal. A szérummdüákat elöittkuháltük az összes pt-eomokokkuszban közös sajttál pnliszacnaridddai CC-anyag), ami az EF 72513 Bt, számú európai szabadalmi irat feltárása szerint tisztított gneumokokknsz poiiszachandban körülbelül i5,5toban jelen van. Jackson líntnuoolabörsíories Ine.-tÓl származó reagenseke· alkalmaztunk a kötött egér IgG detektálására, A dtrálási görbéket belső standardokhoz vsszouyjtotntk (monokíonális ellenanyagok) log-log egyenlettel modellezve, A szátnitásokat Fo/íáfear /ke szoftverrel végeztük. Ezen eredmények maximális abszolút tubája várhatóan egy 2-es faktoron belül vas. A relativ hiba kisebb, mint 30%.
öpveímty'ífgoefto/v
Az: opszostfers litereket a 3, ŐS, 7F, 3.4, 1ÜF és 23F szeroilpusökra határozzunk: ínég a CI3Géljárás („SiröpíZícooesa pneaínoófee Öpsnnopbagoeytosis ttsiog öiíTsrentisted HLóO eells, version: l.i) glkalmazásávaL tisztüuttemberi FMN-nel és myúfesecssmő komplementtel, Módosításként házilag előállítsd pneamokukkusz-törzseket alkaknazmnk, és a fagocháló I-ÍLőO-seHeket íiszídntl emberi neütroil FMN-nel (nagymértékű korreláció van e két fágseitsló sejt között) helyetiestóíak. Ezenfelül 3 mm-es $veggyöngyókes adtunk a mikrobterlemezekítez tt keverés növelésére, és ez lehetővé tette a fágotííafeaktértoz arány csökkentéséi, amisek az ajánlott értéke 400 volt.
Eredmények /^<í-,ío.vee«írto>':lá
A minden szeretlpnsrá és PÍ>rs meghatározett IgG-koseenöáeiók geontédtküs átlagát 4~ 1Ö. táblázatokban mutatjuk be, A ŐB,. 14,. 19F és 23F szeroílgusra a korábbi tétotyalcös kiszereléssel kapod eredményeket is be-xmtaíjuk összebasoülitásképpen,
A legmagasabb IgG-koneemráciökat kiemeltük a 4-10. táblázatokban. A statisztikai pfertekeköt a 313-MFL es 3D-M8LZAlPO.t készítmények között a 11. táblázatban mutatják he. Á 4, adjuváns-kisZsrelés .<«» abszorbeált konjugánanok magas dózisé 313-MFL-vel) adja a legmagasabb GMC-értéket 11 -böl 9 esetben, 13-ből 5 esetben az alacsony dózist) MFL a második kgimmunogcnebb kiszerelés. Ezenfelül az sdjeváns alkalmazása magasabb GMC-értéket ad, mint a sserotipuspk dózisának módosítása (adatokat sem közlünk). és ez statisztikusan szlgniftkárts a 4, 6B, 7F, ÍFC és 23F szérotípusökradpsG.ÖS 95%-®s kónltdencfe-lniemitatísal),
C^!szorsi?/a^befíWs
Az összeöntöh szérumok opszenotagoeítőzis eredményeit a 3, ŐB, 7F. i-L Í9F és 23F szem! inasokra a 4-8. táblázatokban mutatják be, A legtöbb esetben ezen opszosikus titerek alátámasztják a GMC IgG-értéket. Valóban, az IgG-koncemráclővsl való korreláció nagyobb, a»nt 85%-aŐS, IFF és 23 F szeronpttsra (adatukat sert? közlünk). A 3-as srerotípas esetén fentos megegyeznünk,hogy 'csak a Jö-MPL-csoport váltott ki küszöbérték feletti opszo-tiktts aktivitást.
Következtetések
Ebben s kísérletben váratlan vak, begy tt 3D-MPL egyedüli alkalmazása vakja ki a legmagasabb igöAöwmrációt.
Az adjnvóos vákezsatásával kapón maximális GMF leG-értékét ősssekasönllmbuk: a FS-dóáis módosításával kapott maximális CMC IgC-értékkei, és azt falábuk. h<tgy a 3B-btPL sssgnífíkásm magasabb választ vált ki 1 i -hói 5 szerotipsssal.
A 11. táblázatban a 3O-NÍPL és 3D-MPL/A1PO4 készítmények összchasonlitásál matatjuk be (a kiszerelési eljárást és a 3 O-MPL dózisát feasortiií jók össze), a poliszaebarid-konj-rgátnmnk közül5 szignifikánsan javak az immunogeaitás tekintetében., amikor csak 3D-MFL4el volt kiszerelve, 3D-MPL és A1FO, helyett: FS 4, PS 68, PS 18C, FS 191“ és FS 23F.
3. példa - A kombináció hatásának Usulntásyozása PS 4, PS 68, FS Í8C, FS 19F és FS 23F konjegát nmok immunugenkására felnőtt patkányokban
Felnőtt patkányokat hrtmumzáltunk pneumokokkusz pöliszatharid-protcin D konjüálí oltőanyagokfcaí vagy ktdón-ksiön, vagy kombinálva moitivalens készlhnésybeti (létra-, penta-, bepta- és dekáváIsns). Patkányok tizes csoportjait knmanizáltuk kétszer 28 nap különbséggel, és vért vettünk a 28, ős. 42. napon (14 nappal a második dózis márt),
A szérumukat FLíSA-vai teszteltük pneunsokökkusz pöiiszaeharidok elleni IgO-ellesauyagekra. Minden kenjngátam specifikus IgG-ellenanyag termeléséi váltotta ki sz EUSA-val valö «térés alapján, A 12 táblázatot a saosov&feas FS 6B, FS I8C, FS 1FF és FS 23P protein D-k&pjdgátumok' kombinálásának a hatását mutatjuk be azok immnöögenííásáru felhőit patkányokban, az IgG-kohcentrácié^ mérése alapján 14 nappal a 2. dózis otán.
Minden mintán statisztikai elemzést végeztünk annak méghstfeezássr, hogy a kostbioáció nyomás kiafakah elteanyng-koncenrtáciö különbségek: Szignibkánsakve, Á PS 6B, FS 18G, PS I9F és FS 2SP protein B-konjagátonok bármelyikének kombinálása nem változtatta meg szignifikánsán azok immunögoaitását.
T Táblázat: FS-protem D femjugá turnék specifikus aktiválási, konjugálást ás reake bf-leá tiltási kS r S toé nye i
Szerotlpos S 3 4 5 68 7F
PS kané, (mg/ml) 2,0 3,0 2,0 7,5 5,4 3,0
FS oldat 2M NaCi 2M NaCi H;O Í-í,0 2M NaCi 2M NaCi
PO fenne, (mg/ml) 5,0 5,0 5.0 5,0 5,0 5,0
Kezdeti FS/FO arány t>vrt*} 1/1 1/1 1/1 l/l 1/t 1/1
COÁP konc. (sng/mg FS) 0,75 0,73 0,75 0,75 0,75 9,75
pHs/pHk/pHj 9/9/9 0/0/9 9/9/9 9/9/9 9/9/9 9/9/9
Szerotípos W 14 JSC Í9F 23F
- 2« 3. Táblázat: A U-vshms pneumokofekusz PS-PB-vel patkáayesecsemőkbea tesztelt aájm'fes
7. Táblád; Á őB-s szeretIpes geometrikus igíí állagkooceatráelója. szerokooverzlójs és átlagos opszosskas litere 2$ nappal paíkányeseesernők 3. humanizáláséi követően különböző aájováasokat tartalmazó Ϊ í-vakms PS-FÍ9 oltóanyaggal (és ősszebaseolítás a teiravaleus Immaolzá lássál)
«tó g
tó sí
Sí tó
ÍS '53 <jC
SS ,<» 'St et tó s* tó tó e&
§
SS
JSS $&
$ tói>
tó **» fc* <tó »»
N
SS sjc s*
SS >>
tó.' tó 'tó tó
J tó fc* &
tó
Jtó
T§ tó·· tó «* •fc» tó tó tó g
tó <&
<ajC fc* >tó •Í5 »« fcfc
Sft
J •fc» tó
SS *« jss 'tói •fc* u
tó
SS *s
Stó tó w
ss itó
N ί» vSk tó ’g tó<
tó «* fc<
<tó >&* sa tós tó* 'tó
Ή v$
>·&
vü«
Cu &
SS e
ÜU
3» «&
>«M<
SS ox>
>*<
{SS $
w £3 £$* gj7 C? r.J. cA § &* <8$
SS *$ $5 '*«* sí:
Ss·
SS <5 ΐ$ £
$3 '**·>
<»· «
SS **
SS &
&>
CS
SS as c2 *3 '58 ίφ *&
*»
Φ «
$
H oí «<
«&.
8ú
w.
íSS
Ú
S* <«
Sí* <<
<*}
JÖ
Í~
9, Táblázat: Az 1-es, 4-«s ás 5-ős szeröíípus; geometrikus Ig-G áűagkööeeoízádéja és szerökonvergjöja 2g nappal paskánycseesemök 3. immunizálását kővetően W&ibőző adjavánsokat tartalmazó 11-vaibm FS-F& oltóanyaggal
H, Táblázat; Statisztikai srigíOfOiaacía <p~érték), miszerint bizonyos j tajiigátamok imatuHbge&M&g jávutt-e egyedit! 3Β»ΜΡί,-0«8 kiszerelve a 3!3tágast, (Mit alatti g-ésiek erdsen sztgaittkáss,.1, si ás 2- sást a kiszerelés módját jelű ik
Szero-tipus 50 μ« 3D-MPL - SD-MPLÁAIPO,, 5 ag 3D-MPL - 3D-MPX/A1PO4
1, üt 2, át 1. út 2, át
1 0,3 0,05 0,070 0,11
3 0,075 0,01 0,27 0,008
4 : 0,002 0,0003 0,02 0,003
3 ^7 Ö.04 0,002 0,1 0,12
............»<ς · ....... 6B 0,001 0,0001 0,001 0,0006
7r 0,13 0.Í3 0,01 0,005
§V 0,02 0,02 0,1 0,04
74 0,65 0,21 0,3 Ö,6ő
!8C 0,0808 0,0002 0,006 0,004
19F 0,0009 0,006 0,21 0,04
23P 0,002 0,0004 0,0 = 0,0004
2. Táblázol; Geometrikus IgG átlagkoneentráetók (pg/ml) 14 nappal felsőit patkányok 2. hnsswni» zálásái liővetóen, 1,0pg poliszodra rlá-proiein D kosiugstum alkalmazásával egyedSI vágy kombihsWvsn leiravalens, pestavaiens, hepinvalens vagy dektsvaiens oitóanyssgbnn, .Az átlátok 5 különálló kkörint kombinált eredmények
Szerotípus 4 ÓB 18C 19F 23 F
Oltóanyag H T 1-1 T' T
Egyedül 9,3 8,11 15 5,2 2,5
Kombinálva 4 8,23 3,7 3,7 2,3
T: Kombinálva tetraválens ff) (FS ŐS, 14, 19F, 23F), pestav&Iens (T plusz FS 3), heptavalens (Η) (7 plusz FS 4, 9V és 1ÜÜ), és dekavatóns (H plusz FS 1, 5 és 7F) kombninált oltóanyagban.14: Kombinálva heptavalens: (Hj <T plusz FS 4, 9¥ és 180, és: dekavaiens (H plusz FS 1, 5 ás 7F) kombinált oltóanyagban.
< példa - Fnennmlizirtnek ás 3B»MPL-snlí a PO-kenj agáit ll-vaiens poliszáéba ridöhöanysgbnz történő hnzzáadásászk a jótékony hatása paenmokokknszos íödő-kolonlzádó ellen
Ff?no7«t?k'j/n-spem/?áa5 ífesszo Jg&' ΙΊΑ94 mtógatása
Aájs'í.«;rp Nune mskrotíterlemezeket vöbhtók be 2 óráit keresztül 37vG-ort, 108 pg/mérdtóly 2 pg/ml koncentrációjú, FBS-ben hígítót: rekömbináss nativpsenmolizisoei (PEY), A lemezeket feátomszor mostok 0,9% NaCk 0,05% Twees-20 puferel, Azután anti-PLY referencisszérum kétszeres hígítást sorozatát (PBS/0,85% Twoen-20 púderben, 108 pl/ntérbhelyl adtok a lemezekhez standard görbeként (ő?Ö ng/ml IgG-vel kezdve). és szérumrasutáka; í 1/1 G-szeres hígítástól kezdve) Inkubákonk 50 percig 28'Cma rázás mellett A lenti módon való mosás után PBS/G,05% Tween-20 paffcrben 5800-szeresre hígított (100 ol/tnéröheiyl per&zidázzal konjugált kecske anti-egér-ígG-t Gackson) inkubákunk 30 percig 2öC-on rázás mellen. Mosás után g lemezeket 15 percig inkubáltuk szobahőmérsékleten .188 plónéröhely ksrtntsiö: pufereí (8A tsgórd ÖPÖÁ és 0,85% Η/.), 108 tnM eurátpuflerben, pH“4,5). A kimutatást 50 pi/márűbely 1 N I4CI hozzáadásával állítottuk Is, Ás opi lkai denzitásekaí £btav (Molecaiat Devices) álfeabatósával olvastuk le 490 és Ő20 nm-en. Az elienanysg-titerr Ó-paraméteres matematikai eijárásssl számítottuk WtóAfer Pro szoftver alkalmazásával.
Bemofes-gdíldS
Ezt a vizsgálati eljárást a szérmn ellenanyagok azon képességének mérésére végeztük, hogy gátolják a pnenmolizin (FLY) hemoiitlkns aktivitását, Á koleszterin (ami fogékony a PLY-vel való kölcsönhatásra) eltávolítására a szénanmlntákaí kétszer kezel lük az alábbi fttódófe: azonos térfogatú kloroformmal kevertük azokat, majd 45 percig inkubáltuk rázás mellen A felölűszókat 10 perc, 1008 rpm centrifugálás teán összegyűjtöttük. A koleszterinmeates szérumokat hlghottuk (kétszeres sorozathigltss 1 mM dltietréltól, 8,81%: BSA, 15 mM Tris, 150 tnM MaCl, pHA?,? pofebes) FÓ-tsérőbdyss: jtókrotítórleírÍezen (fene), 58 uk 4 HU Otemollzb egység) FtY-4 tartalmazó oldatot adtuk minden mérőhelyhez, és 15 percig inkubáiittk 37“C-on. Azután 100 μ! juh vörösvértestet (1%-os oldat) adtunk a lemezekhez 30 percig 3?C-ott lö perc, 1000 rptn eestrliugáklsf követően a miölásaökat (150 pí) összegyűjtöttük és egy másik §6~mért%e;ye» nukrmiterleníszre tettük az optikai deszitás: leoivaaásáitoz 405 nm-en, Az eredményekét felexöponsi hígítást ikerben fejeztskki.
Fnsemw/fetft ádmári dgfo.v//fkd/dsa
Rekombináns natív prssurnolizmt (PLY) diaiizáltnnk 5Ö mM foszfát, 500 mM NaCl, pK-7,6 nttfferml. szemben. Az Összes következő lépést 39,5’C-on hajtottak végre epiződszerü keverés mellett. Az első napon 10% Tween-SO (D'250 v.'v). 57.4 mM N-acetyi-tríptolán <H3ÖÖ v-v) pH-^7.6. 2.2 M glícin foszfát poftbrben (1/100 v/v), és 10% formaldehid foszfát, püffedten (3/100 v/v) elegyet adtunk a RLYölöafböz. A 2, és 3. napon megint 10% formaldehid-oldatot adtunk, sorrendben 3/100 υ·ύ és 2/100 v/v aranyban A ?~’C-on történő inkubálast a 7, napig folytattuk, epiződszerü keverés mellett Végezetül a PLY-t 50 mM foszlik 5Ő0 mM NaCl, pH~7,ő pufíetrel szentben di&bzáhuk, A PLY teljes inaktiválását a
Hét hetes nőstény Oh f-egereket: intmuazáilisan oltottunk érzéstelenítés alatt 5x1 ff GFU egéthezadaptáit öB-s szerötlpssá A. pssernowae-val. A tüdőket 6 órával a fertőzés után eltávolitottuk és homogenizáltuk (Ultramar, 24ŐÖ0 rpm, 4C-on) &W& (T148, Oibcos tápoldaíban. A födbbootogeotzátnm.ok tízszeres sorozathtgi'sását tény őszi ettük 37'C-on éjszákért keresztéi, élssztSktvonattál kiegészített THB-ag&rt tartalmazó Petriosészéken, A pttetmmkokknszos tüdőfoíözésf CFWegér egységben határoztuk meg, logaritmikus súlyozott átlagként. A ksnaf&tási határ 2,14 lóg CFH/egér volt,
4/A példa üD~/W£ ftűtfúm .orii'ígínenmoöz/o ímsztmívd/ssezp
Bobon a. példában a 3D-MFL adjaváns alkalmazásának hatását értékeltük a natív rekombtöüns pnoumoitztem (PL Vj J, Patou, Childresís Hosphnt, NorfhÁöeláiöe,, Awraka), és kémiai úton detoxtfikálí változatára (DPLYs adott immunválaszra. A kémiai detoxíhkáisát a fenti módos hajtottak végre.
Hat hetes nőstény ökí/ö/C-egerok tizes csoportjait sstmmaszkulfeisau inmtaMzáhank a 0,. 14. és 2L napon 1 pg FEY-vat v&gy DFLY-vei, amely vagy A: 100 pg ÁlPO4-ett vagy S: IÖ0 pg ÁlPCÁ plusz5 pg 3D-MPL-Í p-ds-Ö-aeeliláit-monoítkszibrii lipid A, Ribi Immtmoehem) tartábnazott Az LA és 18 ábrán a 3. oltást követő EL1SA IgG-és hemolízis-gáíiási titerekef matatjuk be.
Akármelyik antigénnel ís, a, legjobb immunválaszt a 3D~M8t-lsi kíegésx&zít kiszsrgfssekksi immunizált állasokban kaptuk. Érdekes módos a Í38LY ugyanarmyira volt isommogés mint a PLY, lm AlPÖ,,/3D~MPL-iei együtt adtuk he, és .gyssugébb ónumsogéu vök az. AlPfk-kiazerelésbeíi, Ez matatta a 3D-MPL előnyös képességét a detoxiükáfe pneumonzin ellent ellenanyag-válasz javihásfe
Pneiunolszint tartalmazó készítményekben előnyösebb lehet a kémiai úton dstoxifikáit pnearoolizin alkalmazása, mint mutációval deioxiítkáh pnettnmhziné. Ennek az az oka, hogy az eddig kapott dstoxifikáit mutánsoknak utég van rcziduális toxinaktívitása, de a kémiai úton detoxíükált gsmiunöíiztrmek nincs. Tehát általában a találmány egy másik megvalósítás: utódjának számít kémiai úton detöuthkált imoumtshsmt (v&gy pnenmolísis-ínutánst) tartalmazó készítmény, oltóanyagban történő alkalmazásra, amennyiben Ihl-sdjsvásssai, előnyösen 3D~MPI..-lel együtt adjuk he, ilyen készinnétsvek a taíálmáuy tárgyát képezik, A kémiai úton áetóxifikált poeamoíizin ellem immunválasz növelésére szolgáló ~ 39 eljárás, amely Th 1 -adjuváns (előnyösön 3D-MFL) készíitsésyhez való adását tartalmazza, ssúrféa elképzelhető.
4/S példa éMsaonoAsö? íö.sy<íugüc;í ?».v;dos és 3P-AÍPI mptóvdos Aosxá#<!^d««V&*köí$ Arbbzu a PD-Áöíj/Mgefc //'-va/ess pYjfAzozA'nróí-oirdunvog védt? AűZásoríágáráí ŐS szexottpííSSöí fuíröaaíiítííij© /b«<zrón' Ο/7-egfíreá rWoáe/att&dáfcd&üK
Ebben s példában a li-valen» políszacharid-proleín 13 konjugátumot, legyengített mutáns pöemooiizin-rnttígéttt (8dB, WO 90/06951. számú nemzetközi közzétételi irat), és A1PÖ* és 3D-MPL adj uváss okát tartalmazó oltóanyag proBbkttksts hatékonyságát értékeltük, ©sszébssöaltfva a. klasszikus .AtPCp-adszötbeátt 1 l-yskmx poliszáeharié-prorem D-kosjugáíum kiszereléssel.
Négy hetes nőstény ÖEl-egersk 12-es csoportjait szubkután srsnusizátefak a 0.. és 14, napos az: alábbi Kszerelssekhök A; 50 gg A1PÖ<; B: szsrottpusonként 0,1 μη PS-t tartalmazó il~valeos protein Okosjugáit poltszaeharid-obéanyag; -t- 50 gg A1PO«; vagy C: szerodpusosként 0,1 pg PS~t tartalmazó 11váiens proleiá D-köajugáit poliszacharid-oltóanyag v 10 με PáB (.1, Paton, Ciiildren's 1-lospítái, Nortb Atlétáidé, Austinba) + 50 gg AIPO< * 5 gg 3D-MPL (Emi ternnmochemj. A fertőzést a 21. napos végeztük a fend leírás szerint.
Mist ahogy az: IC ábrán: benurtattsk, a PdB-vei és .AS*O« * MPk-lei kiegészitött 11-valens pfdiswlwíd-konjtigátunt oltóanyag nagyért szignifikáns (p<0,00?) védelmet nyújtott ta fekete téglalapok mutatják az: aritmetikai átlagot). Ezzel ellentétben a 11 -estess pokszaobaridékotuugsttus oltóanyag/ AlFCE kiszereléssel immunizált állatokban nem Egyeltünk meg szignifikáns védelmet. Ez az eredmény bebizonyította, hogy a pnsumoltziu-anttgén (tnég a legyengítetté is) és a 3D-MPL adiuváns hozzáadása: jayfíoítá a 1i-válens polisaacharid-konjugátttó oltóanyag hatásosságát tüdőgyulladás ellen.
4/C példa zt AS yébOőím femmaoíf védbÁrs immmm/ögm? mggA?kdöí
A 4B példában cott-tott, Icgv eugúott mutáns pneumohztnsel sPdB) es 313-MPL-iel kiegészített f 1-valens polrszaeharld-konjugátum oltóanyag általi: védelem Immunológiai megfelelőinek megállapítás^ érdekében megmértük a ferttós· előtti, őB poltszacharldra és PdB-ro adott szerolögiai ellenanyagválaszokat, a fenti leírás szerint.
Azután az edenanyag-titereket a megfelelő állatok fertőzés után 6 arával: begyűjtött tttdejébeo mért haktériam-kolóniaszámokltozhasónlitőttak.. Az R-értekéket logflog lineáris regresszióval: számítottuk.
A számított RNériéfcfe sorrendben E,18 és 0^02 voltak znti-PdB és attíi-őS ellenanyagválaszokra. Ez a korreláoló hiányát mutatta a Immorális tmtnuttválaszés a védőtető között mindkét antigénre:. Az árú 1-68 ellenatty&gditerek sem voltak szígmEkártsan Idtlőnbözőek a 1 l-valens konjugálí oltóanyaggal immunizált csoportokban (GMT - 0.3.18 sg?)sl). vagy a FdB-vel és 3D~MPl.-iel kiegészített ugyanilyen oltóanyagokban (GMT ~ 0,458 ng/ml ?. Tehát a védelem C-kiszereléssel látott javulása nem kizárólag a 68-pollszáehaztd elleni magasabb ellenanyag-válasznak a következménye.
Együttesen az eredmények azt sugallják, hogy a védelmet nem egyedül a immorális immunválasz kSssvéiitéíte, hanem a PöB-auíigén 3D-MPL jelenlétében indukált sejt-kőzvetttett immunitása is. Ez további támogatást adott a fehétjeantigénfekjoek és hatásos adjnváns(ok)nak a pneurrsokokkusz polisza* eharid-kottjugótom oltóauya^roz. való hozzáadáséhoz,: ily módon összehangolva az jMMSta mindkét ágát az optimális védőiem elérésére.
5. |febia ~ Az immun rendszer mindkét ágának együtiusökődése posutnolhsktnei aktívan ionnunizáíi, és psieantnkokksrsx ES dfeas ekcsaoyagokksi passzívan hunsnnszáU egerekben
SZA pélsln.....Passzívan hsadon sntÍ-őB-pohxzaeh&riá-sliensoyag (anti-FS) tüdőgyolladás elles védő koneeinráeiőifeak megtalálása.
Oltóaoysg-csoporíok: Egerek oég\ iő-os csoportsát passzívan homun.izáítunk (mkageriíosieáKsaíi) a -1. napon 100 μΐ hígítás San patkány antí-pötíszaóhsrid anriszéíaíntnai az alábbi esaportokbao. (összesen 64 egér)
Aílulok; 64 fefe CD-/-egér (Cfearles Riyer. Csnadn), tömegük hörüíbefeí 3S g (körüíbeiüi lő belesek).
Érzéstelenítés: Az egereket feöfkfermai í.5%) plusz O;-vei (1 L/perc) érzéstelenítettük, ötgfeizoarsok: Az: A. pncnísombé' N1387 törzset iő-os szsrotipes) 5% lóvérreí kiegészített, íríptikázös szőja-agar (TSA ) csészékről gyűjtöttük össze, és 6 tnl PBS-feen feíszuszpeodálíuk. A fertőzést közvetlenül megelőzően 1 mi baktérfen-szuszpes-ziót 9 ml lehűtött, olvasztott tápagarba s 8BL> hígitoítünk, és 41 'C-on tartottunk. Az egerek körülbelül 10 CFUfegér dózist kaptok 50 pí térfogatban.
Fertőzés: A 0. napon az egereket erzéstelenttettttk a fent leírt módszerrel, és S, xfeeWö>we N1387 törzzsel fertőztük (S0 pl lehűtött fekténum-sznszpenzsovab intra-hronhtáln» hccsepegtetésseí, sem sebészi fetratracfeeáhs esőhevezeiéssél. ess az ehára»t Uoodont és Berry [Antunicrvh Ag. Ghemolkerap. 43, 29. old, (1999)] tárták fel.
Minták: A fertőzés ötén a 3. napon csoportonként: 8 egeret feláláozhntk Gö>-í:oladsgolássa!, és a tüdőket kivágtuk és hbmogeoizáltak 1 ml PBS«be», Tízszeres sorozatbigitást készítettünk EBS-bea az életképes hnktéríífeök számának meghatározására. A mintákat bárom párhuzamosban {20 pl) 5% lóvéméi kiegésziteíi TÉÁ-ésészékrs oltottak, és 37’C-oa snköbáfeuk éjfeakáó keresztül a kiértékelés előtt. Az egerek további esoportjál áldezbfe fel s 7. napén és a nhbíákát a festi mádon értékeltük.
Rred-sérivek
IgC-koncentráció ípg/ml) a patkány.szérumban |
Baktériömszám (lóg CFUMdő) fertőzés után
6,7 *0,7 (1/7) ,27 0.7(5/8)
6,9 ;é 1,8 (4/7) 4,8 7 1,4 (2/8) C3 a“T*5“(3?9>“
6,5 *9,7 (1/7)
RJZoR'W)
1$ÁteÖ(3/g)
A záíéjsibeh lévő számok a mintavétel ideje előtt elpusztult állatok számát jelzik.
Következtette:
Általában nem volt szigslfikásó különbség egyik kezelési csoportból izolált báktértömszám között sem, Ez azt mulatja, hogy az anti-poíiszaehadd nem nyújtott mérhető védelmet 5 pg/ml koncentrációig, azt is beleértve.
Éz hasonló althoz, amit néhány emberi klinikai vizsgálaíhah mcgitgyeilsk, azaz: az aatigollsztíókaríd elégtelen pneumokokkuszos tüdőgyulladás elleni védelemre bizonyos populációkban,
S/B példa - PEY (pneamobzin) aktív beadásával íadjuvánsssl és anélkül) nyújtott védelem meghatározása, és szinergia sznboptnuáiis aóti-PS-eilenanyaggal,
BÜÉlb
Állatok: 128 hét? CD-/-egér (Charles Kiver. St, Constant, Quebec, Canaáak 6 hetes ;írmunizS' sáskor, It) hetes fertőzéskor. Az állatok tömege körülbelül 20 g volt ó hetesen, és körülbelül 38 g 10 hetes korban, immunizálás: Egerek hat ló-us csoportját szubktmbt injekcióval immunizáltunk a -22. és -14, napon 198 pl öltőanyaggal az alábbiak szerint, (összeses 128 egér). Pdö-t (WO 90.4)6951. számú nemzetközi közzétételt Irat) Dr, X Pálon, Atsstmíia szívességéből, SD-MPL-tKíbi/Corixa cégtől szereztük be,
A ~1, napon specifikus: esopsmokat (lásd az alábbi íábiázatöt) passzívan immunizáltunk (islraparttoseáiísan 109 pl) 4,26 pg/lní keocenírneioíú egér aníi-pöliszachatid-eílenanyagga: (4 tnl 3 pg/ml oldat κ 1,3 ml 2 pg'ml oldat);
J-4 |
-5 100 pl, se. | MPL/AiFOsió'fÖ· lööpk ip a-PS
j-ó 100 μϊ, se. MPt/A!PÖ< (5-'50}
Fertőzés; ÁS, napos zz egereket érzéstelenítettük (3% izoll uránnal plusz 1 L/perc Oj-veli, Bakténum-mokülüípokat A ^mswamae NI387 törzs ső-os szerotipüs) 3% lóvérrel kiegészített, tripíikázos szója-agar (ISA) csészékről való összegyűjtésével állítottunk elő, 6 mi PBS-ben felszuszpendálva. Tízszeres hígítást készítettünk ti mi plusz 9 ml) lehűtött, olvasztott tápsgarrai 1.4; C-on tartva) közvetlenül a fertőzést megelőzően Az egereket iíitra-bronhlális becsepegtetéssek nem sebészi íotratracbeális csöőevezeíéssel fertőztök, és azok körülbelül ló6 CFU'egér dózist kaptak 5§ μϊ térfogatban, Ezt sz eljárást Wőóönut és Berry t Antimicrob Ag, Cttemotberap. 43,29, old, (1999)) tárlak; fel
Minták; A fertőzés ntátt a 72 órával csoportonként 8 egeret feláldoztunk COj-telsdagolással és a tüdőket kivágtuk és homogenizáltuk 1 mi PBS-ben. Tízszeres sorpzaíhigftást készítettünk PBS-ben az életképes baktériumok számának meghatteozásóra, A mintákat három párhuzamosban (20 pl) 5% lővőrrel kiegészített. TSA-csészékre öltöttek, és 37C~on hkubáltelc éjszakán: keresztül a kiértékelés előtf. Az egerek további csoportját áldoztuk fel a Á napon és a mintákat a íéntí módon értékeltük.
Az^íoleteínsése
Az összehasonlító kezelés kfeengtelések tnéröszáma a baktériumok száma volt a tüdőben 3 és 7 nappal a fertőzés után. Az eredményeket csoportok átlagaként fejeztek ki szórással A statisztikai elemzést Síadéní-lele teszttel végeztük, ahol á.8sőS’Uél kisebb F-értéket tartottuk szignifikáns^^ gKtáÉteüvgk íWítel rt/értócét «tón
A balaárítnttszánmk az; i -4 csoportban szignifikánsan (p<S,05) alacsonyabbak voltak, matt az 14) csoportban.
A: bakténtuttszámsk az 1.-4 esoporíbátt szignifikánsan (p<fkÜS) alacsonyabbak voltak, ínint az 1-5
JŐŐ -ibsb d a t&txés ortte
A baltán mn-zán.ok minden csoportban kőrülheitli két nagyságrenddel alaesottyabhak voltak a & napos,,mítü a 3. naponta, fertőzés felbomlását mutatva.
A baktőridmszátaők az I »2 csöportbaít szignifikánsan. (p«ö,ö5) alacsonyabbak voltak, nttef az i -5 csoportéin.
Csoport J; 3. nap 8.nap j
i lóg CF'U/tüdo Szórás lóg CELí/tUdö 1 Szórás Ϊ }
1-1 1 $,93 Ml 5,23 1 1,28 j
1-2 6.59 1,25 4.08 t 1,34 |
« 1 7,09 0,8 5,32 ;,2ő
i-4 j 6,09 1,43 4,46 § 2,32
1-5 ;l 7,19 0,89 5,42 ΐ 1.05
w j δ,68 1,1,4 5 5,01 : :l. 1,48
Mint ahogy feöí demosSS'ákuk, qoedál áz autl-poliszaeharld-ellennsyag (l-S csoport) nem nyújt védelmet a pnenutókokkuszok növekedésé ellen a tSdőben. A FdS és AlPO^-adjuváas szintén nem biztosit védéhneí, de a h. napon van egy trend a védelemre, ha a PdB-t 3D-MPL-leí kotnbtdáljdk {1 -2 csoport).
A 3, napos; a legsztgníhkánsahbaa védeti csoport, az 1 -4 csoport, mind á három komponenst Wmintázta, PdS-i, 3í3-M'BL-l és passzívan beadott aíttj-poiiszaehítrid-ellenanyagct, Ezt a következtetést a mortalitásiadatok ts alátámasztják. Az 1-4 csoportban 2/8 átlát pusztait el az 1-5 és 1-3 csoportok 5Ί0 halálozásával ősszehsstmWa.
Ok étkeztetés:
Mi ve l a kísérletet passzívon immunizált állatokkal végeztek. a pnenmol izindcl és M’PL-le! való aktív immunizálás színergetikus hatása pest leltei a poliszaeharid-antigén ellent ellenanyagok szintjében bekövetkező növekedés következménye.
Mivel az állatokat csak passzlvao íínmuálzáltak pueunsokokknsz polisz&eharid ellen, a 8. napra az ilyen ellenanyagok nagyrészt eltűntök vsh& a gazdából.
Még így is sztgndskáns vsdelent '-átható pneomekokkttszos tüdőgyulladás ellen a pneumoiizin v 3D«MPL»tó; mmrumizát csoportokban, és különösen apaeamollzln * 3D-MPL~leI -t- passzívan beadott anti-poliszaobartd-sllsnspyaggaí Inrosmizált csoportokban, mutatva ezen kombináció színergetikus Itatását.
jls az adtirpólitíZacharid Itutupstzálásií aktívan hajtottuk volna végre (előnyösen konjugálí pöliszsehariddál),. a hatás még; kitbjezotiehb lett volna, mivel a B-sejtes memória hatása és az ttói-PS elien&nyagök állandó szintje hozzáadódott volna az immtmválasz együtiznáködéséhéz (lásd például az IC ábrát, ahol; számos, pohszschsriddál és fehérjével aktívan immunizált állatban hem volt kimutatható haktérínm a íbdőkhen a fertőzés otán).
A ptmemokokkttsz-fertőzés ellent védőimet szeMipus-speelfikus ellenanyagok. közvetítik opszöttofagoeitőzis révén* Feltételezhető, hogy az ellenanyag-koncettírácíó növekedése nagyobb fokó védelmet etedínénysz, és ezáltal sok energiát fordítottak a honmráh's immunválasz fokozásának útjainak .megtalálására. Az egyik sikeresen alkalmazott stratégia kilóikat elővizsgálatokban konjagált oltóanyagok esetén mttnutssílmuláiö adjnvánsok alkalmazása [összefoglalás: Poolman és mtsal,, „Carbobydrate-Bssed — 4 4 ~
Báototiai Vaccittesfe „líouöbook of Espmmmnmi Pbannaeologyfe szerkz Perimans és. Wlgseii, kiad,: Springnr-Veriag. Heiddberg, Ö (1998)).
Az ebben a szakaszban feltárt adatok: & legnióöbl., klinika! mintákat alkalmazó kísérlet eredményeit mutatják be, klinikáé: vizsgalatokat utánzására tervezett eljárásban.
Eljárás:
Egyéves 5«/ó/í2-egereker immunizáltunk a pneumokokkusz poíiszachand-proteiu. D-konjugátum oltóanyag embert dózisának l/lö-ével, vagy a 23-valens egyszerű poHszacbaHá-ofeóaoyaggal. Az alkalmazott oltóanyagok a DSPOöfe DSP013 vagy DSPO54 sorszámú klinikai tninták voltak, amelyek sorrendben a l l-valeos konjugált oltóanyag $B és 23 P szeroHpus 1 meg dózisának, és a többi szerntlpus5 meg dózisának, a I i-vaiens konjugált oltóanyag 0,1 meg dózisának. vagy a 11-vafens kuujsgált oltóanyag 0,1 meg dózisának 5 meg 3D-M?E-lel feleltek meg. Az összes 11-valnus konjugált oltóanyagot SO pg ATO> adjnvánssal is kiszereltük,
Egerek 20-as csoportjait inunenizáimk mtranmszknSárisan. Az alábbi táblázatban felsorolt csoportok oltását a 8. és 21. napon, végczrtlk. A 35, napod (14 nappal áz második dózis után) teszt vérezteiést hajtottunk végre.
Táblázat: Sgyévss Rs/W-egerek immunizálás! terve pneumoköfekusz poilszaeharid-prötem Ökonjítgátum oltóanyag klinikai mintába!
Csoport ti, nap Oltóanyag 1. dózis 21. nap Oltóanyag 2. dózis Egerek szánta
1 Pneutnovax-23 2,5 meg Púder 28
2a 11 -vaiens Pn-PD fel meg Puffer 20
2b 1 ί-vafens Pn-PD fel meg 11-vaiens Pn-PD 0,1 tneg 20
3a 11 -vaiens Pn-PD -r MPL 0,1 mege 5 meg Putfer 28
3b 11 -vaiens Pu-PD -· MPL 0,1 meg s- 5 meg 1 t-valens Pn-PD ·;· MPL 0,1 meg ·? 5 meg 20
4a 11-vaiens Pn-PD 1/8,5 meg Puffer 28
4b i 1-vak-ns Pn-PD 1/0,5 meg i1-vaiens Pn-PD i/0,5 meg 20
Kontroll Pnffer ......... ............................. 28
A szérttótokas BÚSA eljárással vizsgáltok jvneumokokkus? poliszsebsfidok ellem Igöellenanyagok jelenlétére á CDC/WHÖ konszenzusos ehanbn követve, azaz a szérum; sejtfalpohszachnriddai tOöénd semlegesítését köveiden. Az EOSA-i szeretipus-^eeihkus ígGi moseklonálls eíienanyagokkal kaiibrálhík ügy, hagy mcg/mi egységű eiiesanj^g-kencentrációkat kapjunk.
Az Oászebaspslhásók statisztikai elemzését tWáTAT wsto 5.0 bem alkalmazásával számitöítűk. Az ANÖVA-slemzést: a.S&gM® eljárással végeztük leg-transziorrnák igö-knaeentrációkon. A szeróktmverzids arányok pármskénti összéhasonlhását hisher-leie egzakt teszttel végeztük.
Bredmények:
A 11 szerotspus és protein D ellen 14 nappal a másvdlk immunizálás után kiváltott GMC fgGértéket és 9559-ns konfidusuia-intervaih-mot az alábbi táblázatban matatjuk be. Ahol 9554-os konfidenciaimervaihwd sem leheted számtant a. szmknnwziás arányi moteljuk be.
Az 1. csoport mutatja az. eg/sznré poltewhariáokksi v&ld mmtusizálás hatását, amelyek sormáHsán csak IgM termelését váltják ki állatokba®. A legtöbb IgG-koncendáció a kimutatási küszöb alatt'w mindazonáltal a /te/h/Oegerek képesek voltak IgG-· termelni néhány pneumokoklmsz políszaeharid elten, nevezetesen & 3, 19F és: 14 szemíipusnk ellen.
A tenjugált ohőanyagnkkal való hmnmnzálás magas szeroknnvérziós aránya IgG-ellenapyag-: termelést t altod ki az összes χ/erotipus ellen, a 23F Kivételével,
IMzls-fhggé választ (2. a 4, csoporttal szemben) osak a. ?'f és 19F szerotipssoknái ügyeltünk meg, de ezek nem voltak statisztikusan szignifikánsak. Fokozottabb választ Egyeltünk meg két dózis után (b csoportok az a csoportokkal szemben) & 3, bB, ?F és W szeröltpusók és protein 13 esetében, és ezek slatiszfikusan szignifikánsak voltak sok esetben mindhárom kiszerelésre,
A. legérdekesebb a 3D-MPL· hatása, A 313-MPL-vei kiszerelt oltóanyag kér dózisa (3 b csoport) váltja ki a specifikus IgG legmagasabb GMC-értékét, és ez statiszfiknsan szignifikáns az össze szetpfipwa a 23F kivételével, amely esetén szignifikánsan magasabb volt« szerokonverziós arány (p 0,02, 3b csoport a 2b csoporttal szemben, Fisher-fele egzakt teszt),
Táblázat: Kiválasztod pBeotnokokkaszszerolípasíok és protein D IgG-konceniráeiá geometrikus átlaga és 95% korsfídeneia-mtervaitema egyéves Pu/b/C-egérhen 14 nappal a Π-vaíeas PS-PD konjagáit oltóanyaggal iórtéltS immuttizálás után
Csoport í 2a 2b 3 a 3h 4a 4b
Szerotipus GMíigöj ugmí (9598 KI) i GMjlgGj kg /ml (95% Κ.Γ; GMflgGl pg/ml (95% KI) ÜMjlgGj pg /«ti (95% Ki) GMpgG] pg Oni <95% KI) GM(IgGj ug /ml (95% KI) GM(lgG) pg /ml (95% KI)
3 0,24 (0,16-0,0) | 0,18 (0,11-0,27) (5,84 (0,47-1,5) 0,72 (0,51-1,0) 4,84 (3,0-7,9) 0,22 (0,14-0,35) 0,95 (0,19-1,8)
.....O.......... 0,02 o 0.04 8/19# 0,19 (0,09-0,41) 0,14 (0,07-0,27) 0,74 ¢0.29-1,91 0,09 (0,05-0,16) 0,11 (0,05-0,23)
?F 0,04 0(20# 0,07 (0,04-0,12) 0.19 (0,10-0,39) 0,15 (0,10-0,22) 0,97 (0,49-2,0) 0,09 (0,06-0,14) 0,45 (0,20-1,02)
14 0,15 3/20# 4,5 (2,5-8,1) 6,2 (3,6-10,5) 12,9 : (7,8-21,2) 13,6 (9,4-19,7) 4,0 12,0-8.0) 6,9 (4,6-10,6):
19F 1,2 6,7 12,1 10,1 58,5 5,9 22,0
(0,56-2,6) (3,6-12,5) (7,6-19,3) (5,5-13,5) (42-01) (3,5-9,9) (16,0-30,2)
23F 0,07 Ö,OS Ö,Ö8 0,07 0,17 0,06 0,10
i COS 3/20» 2/194 2/10» u 2b~ 1,13~ 4/204
PD* 0,25 5,2 11,9 13,5 93,0 10.0 33,7
1/20,4 (3J-b,3i (6,9-20,7) (9,5-19,0) <49,1-195· ¢0,4-18,4) (21,3-70/3):
*EUZmi egységben; #smokonverziós arány, kétszeres szórássala negatív kontroli átlaga felett Lásd az ulözö táblázatot a csoportok definícióját dieíően.
Az itt feltárt adatok demnnsüáljék;, hogy a 3D-MPL hozzáadása a li-vate pneurnekokkúsz: pölíkáaeharid-protein D-konjugátum oltóanyaghoz fokozta az immunválaszt idős Aö/W-egerekben az összes vizsgált szeíótipns esetében.
A legtöbb esessen az oltóanyag két dózisa magasabb geomeírlkas Igö-átlágkonoentráelót váltott ki mist egy dózis, Mi vel ez sem; volt megfigyelhető az egyszerű poliázaeharjd-öltsáöyag álkaimazásávah mag emberekben sem, igy ez a T-sejt-ÜlggŐ «-amunválasz és az immunológiai memóriát kiváltása jelének tekinthető.
Az adatok alátámasztanak egy Tbl-adiovsosssl (előnyösen 3D-MPI,-íel) együtt beadott köojúgsh pneumnkokiusz poiiszaehítrid oltóanyagot aikaietazó beadást sémák ahol az az adjuváttsos oltóanyagnak legalább két dózisát, adtuk be, elónyőssa 1-12 hél, iégelőnyősebbea 3 hét Idókőzzéi Áz ilyen beadási séma a találmány egy további megvalósítási módját képezi.
A kísérletben alkalmazott egerek érzéketlenek a PS 23-ra (egyszerű vagy kosjogáh). Érdekes modort, bár a pniiszseharid ellent elleosayag-kíweotráeió alacsony maradi az alkalmazott oltóanyagkészítménytől függédentü, sokkal több egér válaszolt a PS23-ra, amikor 3D~MPL.-t alkalmaztunk adjuváuskent (a szerokonverzíó szignifikánsait magasabb). Thl-adjuváns, előnyösen 3D-MPL alkalmazása köujugák píieemokol«kosz-pobs,meharld,olsst fartahoazó oltóaeyag-készhtnenyekben az oltott egyén pnemttökokkusz-pohszacbarjdrs való erzékelfenségének ebyhitésére a találmány még vgy további megvalósítási módját képezi.
7, példa - Alemer/a mmriasgOkí G-pnhszuehurid-protem D-konjcgótcm (PSG-PD;
A; PROTEIN » EXPRESSZIÓáA
Mint áz 1. példában feitártnk,
B: C-POL1SZAOÍARIÖ GYÁRTÁSA
A poiíszacharid C-csoportjának forrása azΛ'. ímm;.ygííít/f,v € 11 törzse. Ezt klasszikus fermentálást módszerekkel fermentáljuk (EP 72513. számú európai szabadalmi hat), A konjugálást eljárásban alkalmazott száraz por alakú poliszacharidok azonosuk a A-fenr-ern-v-szal (SS Síolugicals s.a,).
A Ci 1-törzs egy alikvotját ibioíyasrtottak, és a szuszpemdö 0,1 ml-ér élesztöklvnuat dlalizátuntmal 110%. v vi kiegészített :\fa:?iÍer Amze« táptalajt tartalmazó petriesészére kentük, és 23-25 érát iúkebákoh 36‘Con vtzgózzel tel (tett inkubátorban,
A icRzmt tenyészete* ezrom npv leRzuszpendOtak stcrezált íertrertác os íapkö/egKo, és ezzel a szaszpetrzióval beoltottunk egy ée^/xA,vonat dializátummal (10%. v/v) kiegészített ,%«δ«· ATmon tápközégeí és steril üveggyöngyöket iadabwó Ro&s-edéeyí. A Mmr-edény 23-25 órán kérésziül Sé-'C-ób
- 4 <
vízgőzzel tslífert lnfeihátorbau: történő Inkabálását Wetöen a felszínt tenyészsfet újra feiszuszpesdáltuk ÍÖ mi steril femtentácíós fápközegbsn, és «zen azuszpenzió 0,2-0,3 mi-ét átohottrik 12 másik >W$&r íristöá tápközegeí tartshnazó ftonr-edénybe.
A 23-25 órán kérésztől 3ő'C-on vízgőzzel telített Inkubátorba® történő ínknhálást követően a felszínt tenyészetet ójra felszuszpendáltuk 10 ml steril fermentációs íápközcgbeo, A baktériinst-szuszpenzlől supaiako lombikba összeőntötrük.
Ezstt szuszpenzih azután aszeptikusán átvittük a fertnentorha steril fecskendők alkalmazásával
A rnemugokokhasz fensentáclöját negarív nyomású üszizszobában lévő fermcntorokban végeztük; A férmentáoió a taUbaa 10-12 óra ehehével teljes, és körülbelül 10iö haktéríum/ntl-nek (azaz a korai stacionárius szakasznak) felel meg. és a pH emelkedésével detektáljuk.
Ebben az állapotban a teljes táptalajt hővel inaktiváijak í 12 pete 56'C-on) a centrifugáíás előtt. Az Inaktiválás előtt és után a táptalajból mistül veszünk, és A/aetfer íVíóíoí? petrícsészére kenjük.
C; PS- nSZTÍTÁS
A tisztítás többlépéses folyamat az egész fermentációs iáptsbjóü végrehajtva. A tisztítás első fázisában az inaktíváli tenyészetet eentrilugálássai derítjük, és a felíduszét begyűjt jük,
A poliszacharid-tisrtítás kvnferner-asninósiüntsóval (eetilóriínetibántmőmum-brömtd, GTA^ Cétvalon R) történő kiesapáWí alapul. A CTAB oldhatatlan komplexet képez poliamonokka;, mint például poliszácbaridokkal,:jmkleisssvaláiaf és fehérjékkel, a p!-jük:,ol függően. Az Ionosán szabályozott reakciót követően ezen eljárás alkalntazfeató szennyezések (alacsony vezetőképesség) vagy peliszaeharidők (maga·; vezetőképesség) kiesapására.
A derített féiüiüő»)han: íáiólhatő poftszachaiááokat kovalőld -(CeTlis* 545) hordozóként való álksimszásáva) csapjuk ki, oldhatatlan inért anyag keleikezésének elkeráiése végett a klesapásfökAfezílíSseh során.
A'. .OíerfftíftridA' C-peAswóőtriiSffesaÁ· íózíMsi
L lépés: ék PSC-CTAB komplexet rögzítjük Cellte® 545 hordozón, és eltávolítjuk a sejüörmeiékekep rmkletosavakaf és fehérjéket 0,05% CTAB mosással,
2, lépés: A PS-t eluáljuk 50% etanolial. Az első zavaros és szennyezéseket és LSP-t tartalmazó frakciókat eldobjuk. A következő frakciókban a PS jelenlétét fíokkníáciös teszttel ellenőrizzük,
3, lépés: A PSC-C'fAB komplexei újra rögzítjük Célúé® 545 hordozón, és eltávolítjuk a kisebb ppklemsavakat és fehérjéket 0,05% CTAB mosással,
4, lépés: A PS-t eluáljuk 50% etanolial, Az első zavaros frakciókat eldobjuk. A következő frakciókhan a PS jelenlétét Bokkalációs teszttel ellenőrizzük,
Az eluáíumot szűrjük és a nyers pobsznebarídot tartalmazó szűrletet összégyüjtjük. A pöííszaeharidot kicsapjuk a szőriéiből etanol S0% végkoncentrácíóban való hozzáadásával. Azatáu a poíiszacharidof fehér porként visszanyerj Ók, vákuumban szárítjuk, és -20'C-on Járatjuk.
Bt CBAP-KÖNJUGÁLÁS .«'C & Pö áOT/xfgí&feő
A PSC és PD konjugálásához a CDAP konjugáeiős módszert részesítettük előnyben a klasszikus CNIár-akts váláshoz és kapcsoló-molekulán keresztül fehérjéhez történő kapcsoláshoz képest. A pölíszaehandof először cisnilátássa! akiivájjük l-ciano-4~düssí:lláminopíridiníaínrteírafluöröberáJtaÍ
- <18 ~ (CDAP); A CDAP vlzoldható elaniláló reagens, amelyben s clatso-esöpott elektrofllságst megnövelt a CNBr-hez képest, lehetővé léve a eianháló reakció vtszesylag estyhe körülrttények közti végrehajtását. Az aktiválás «Ián a pnllszuebsridot közvetlenül kapcsolhatjuk a hnróozöfebétjéitez annak amino-csoportjam keresztül bármiféle kapcsökVamfekála alkalmazása nélkül, Λ reagaíatkm elabátésAer-esuportökat glickmel való alapos reakcióval mgálíaáajuk et A kóttmgátum előállításába® szereplő lépések száma csökkent, es az a jegfóntessbb, hogy potenciálisan bstáöaoget. kapcsefo-snslcknlák nincsenek jelen a végtermékben.
A -pöliszachand CDAF-vai történő aktiválása ciasál-csííportot épít he a peliszacterklfea, és dimetilaminopiridin (DMAP) szabadni fel, A cianát-esoport reagál a fehérje mmsö-esopurtjaival az aktiválást követő kapcsolást reakcióban, ésfeadsamm-csöporitá alakul át /WC írtává Ah ó F.WWW
Az aktiválást és kapcsolási 2.5 'C-en végezzük.
120 mg FS-tsldtmk legalább 4 órán keresztül WFl-ben 1 injektálható víz. „Water fef irtjeeflcm’’),
CDAP-oldatot {.100 mgünt frissen készítve acetonitrilben) adunk a políszaeharid-oldathoz 0,75 CDAWFS (WsV) arány elérésig.
perc 30 másodperénél a píí-taz aktiválás! pH-ra <pH~lŐ) emeljük tríetilamin bözzáadásával, és stabilizáljuk a PD hozzáaádásáig.
perc 30 másodpercnél MaCl-rá sdrnrk az elegyhez: 2M végkoncesfeáeióban, peronéi tisztított FD-t adunk as elegyhez 1,5/1 PD/FS arányban; a pH-t azonnal a kapcsolási pl-i-ra (pK-::10 állítjuk be. Az oldatot I órá- állni hagyjuk a pH szabályozása mellett.
,-4 mrtert MM* ml 2 M gíicin-oiáatot aárttk a FS/Pfö/GDAP elegyhez, A pH-t a leállítás! pH-ra (pH~8,á) állítjuk be, A reakcióé legye; 30 percig kevertstjük a munkabómérsékleteb, majd éjszakás keresztül 2-iFC-ó» folyamatos- lassú keveréssel.
/W-FBfApírtfeu
Szűrés után (5 WW a PD-PS-koitjugáhsmöt hidegszobában tisztítjuk géiszürő krosnatográtlával Sbr/uenó ,$7s%W3?-töhefen a klsmolekulák (beleértve az DMAP-t) és a koxtjugáiatlan PD eltávolítása végett Héeló; ISO atM NaCl, pH-6,5; követés; UV2&Ö nm, pH és vezetőképesség.
A reakciókomponensek különböző molekulamérete szerint először a PS-FD-konjygáíunt eluálódik, majd a szabad PD és végül a DMAF. A DMAB-bnl (PS) és pBCA-val (fehérje) detektált konjugátumot tartalmazó frakciókat összeöntjük, Az; összeöntdtt frakciókat sterilen szűrjük (0,2 gm).
E; ABSZORBEÁLT PSC-PÖ-KÖNJUGÁTUM OLTÓANYAG KISZERELÉSE
AfPíC AUUVöSö
Á FSC-FD-konjiugábsn AÍPO<-ea való adszurbeálásásak optimalizáláshoz az AIB<M mossuk a PO./'—koncentráció csökkentésére:
- az AlPO4-t 150 tsrt-l HaCL-lel mossuk és centrifugáljuk (négy-szert;
- tt csapadékot újra íelszuszpendáljuk 150 uiM NaCI-ban és szűrjük (18 pm); és
- a szurieteE bével sterilizáljak, ezt a mosott AiPCfet W'AP-nek („washed autocksved phosphate, mosott autPkláyozott feszfát) nevezzük.
K&zere/ésí eri4«r.->
A PSC-PD-konjugádan nagy mennyiségét AlPO$ WAP-ta adszorbeáltek ts végtermék kiszerelését megelőzően. Az A1PO, WAP-ot ESC-PD-vei kevertük 5 percig szobafeömérsékteten. A .pH-t SJ-rs állítottuk, és az elegyet további IS órát kevertük szobaliéméreékkten. hlaCi-oldatet adimA az: elegéhez 1.50 tnM korsc^feáéíétek ss a& elegyel 5 percig kevertük szöbabómórsékléies. d-fenoxietfsnólt adtunk S mg/ml kcncenmáesöbsn Ős az elegyet 15 pervtg kevertük ssofeahámérséktetete majd apriAőJ-re áiihotmk.
kegsó áriaareiésrióirir - ESC-ED: ló pgPS
- AIPO,: WAÍ>: 0,25 mg ?
-KaCh ISttmM
- 2-fes©xietanoí: 2.5 mg
- injektálható viz: 0,5 ml-re
- őtk ó.l
Ft EREKL1MKAI főFOEAtÁC1ÓK
FöífSrtnív5sívd-,lfjuíi<gdte>s fet,»;<r«i?g;?í?;7dro egérl&e»
A PSC-PD-kottjugáüsn itnmmsogen húsát ő~8 hetes Zfo/ó/C-egerekfeen állapítottuk meg. A sima (nem abszorbeált) kenjugtotteí vagy az AIPO<-ra abszorbeált konjugátumot monovalens: oltóanyagként Infektáhuk, Az indákéit anri-ESC-eltesanyagokat ELlSA-val tnérnik. míg a futtkemsáíis eSesabyőgökat hakterieid-íesritelelemeztük,.mindkét eljárást a CíX? (Centere fór Dtsease Contre) ásdEreven/ion, Atlanta, VSA) eljárása szerint, A dózis-hatás és adfuváns t'AIEOC hatásának megáíiapífesára elvégzett két különböző kísérlet eredményeit tnutatjok be,
Ddris-áfeis áriórií??'
Ebben a kísérletben a PSC-EO-konjugátumot kétszer injektáltuk £rriCC-égerekbe, két bet ídókőzzel..Négy különböző AlPfri-rm kiszerelt konjugáíutn-dóztslalkalmaztunk: 0,1; 0,5; 2,5 és 9,5 ug/állat. Az egereket (csogortöufeéní SQ-et) a 14, (14 nappal az első oltás ntán), a 28. (14 nappal a második oltás után), és a 42 (28 nappal a második, okás alánt veregettük. Az ELlSA-val méri C-poiiszaeharid-specíítkus ellenanyagok geometrikus adagéit tOMC) ug igG ml-ben fejeztük ki, őszülő» ígG referenciaként való alkalmazásával. A bakteriad ellenanyagokat összeömöít szérumokon mertük, és a litereket a haksériarrtők 50%-át ólpwriíahí képes hígítás réciprókaként feleztük ki, Λ1, wefesgíridri Cl 1 törzsét: alkabhazya nvá loseesemö-kompletnent jelen létében ?\ kapott dóm-hatás telítést mutat a 2.5 μ§-ο§ dózistól kezdve. Az eredmények azt jelzik, hogy jó megerősítő hatás van az első oltást követé 14. tsap és a második oltást követő 14, nap között, 28 nappala rníssodik oltás után az ellenanyag-szintek legalább ekvivalensek a 14 nappal a második oltás mámhoz képest. A baktericid eiietranyagAherek összihangbas vannak a:<B.,iSA~vai kapott kortesnháeíökkai, és megerősítik a PSC-FB-korjttgátem immmtögenhását.
Ebben; a kísérteiben AlPO«~on kiszerelt PSC-PD-konjugátun egy miotuját wseáknk, 3 sima f adjuváns nélküli) konj'ugáíumof Injektáltuk össrebasonlltásképpen, Csoportonként 19 egeret «.etszer íttlekíáltunk. két hét időközzel szubkután utón, 2 ag komugsőjanmal. Az egereket a 14. (14 nap-k az első oltás után), a 28. (14 nappal a második oltás utáni es a 42 (28 nappal a második oltás irtán) vémztértük, és EUSA- és funkcionális etlenanYag-tittrekei mért ónk tcsttk 14 nappal a második oltás után es 28 nappal a második okát; a bakierteid-teszthezA Az AlPfk-kiszerele» lö-szer magasabbig terjedő ellenanyagisiereket váll ki anem-ádjuvártsos kíszsnrtésskkel összehasonlítva,
AlpveífeWírtseá
Az stabbí általános következtetéseket vonhatjuk te a fent feliárt/klsérléteX eredményeiből;
A PSC-FD-konjugátum emlékező választ sáli ki, demonstrálva, hogy· a konjugálí PSC T-sejtDlggd antigénné válik,
- Az ELISA-val mért antl-PSC-eilenonyag koncentráció) jói korrelálnak a bskiericíd-elienanyágtiterekkek mutatva, hogy a PSC-PB-konjagúrummai kiváltott ertenanystgok működőképesek a; Áéísrnefn we«mg('?órt.t C-szerocsoportjávai szemben
- Kőrölbeltíi 2,5 (tg AMÁ-on adszntbsáli kenjugátum látszólag: optimális immunválaszt vált fel egerekbe;·.
- A CDAF-reakeiő megrélelé eljárásnak látszik smmmogén PSC-PD-kotp «gátőrnek előállításúra.
8. példa - A. .wAmgri» A-széroesoportjdból steámazó pölí^sebadd-prnfetn Blíonjugáinm elöáliliás;;
Poliszacharld-A (PSA) száraz porát oldottuk egy órán keresztül 8,2 M Naö oldatban 8 ms/ml végkóneeptrációra. Azután & pB~t 6-os értékre állítottak vagyHCI-lel, vagy bíaQB-val, és az oldal hőmérsékletéi 23’C-on szabályoztuk. 9,75 mg CDAP-t /mg PSA (109 mg/ml oldatként acetonltrllben) adtunk a FSA-oldatboz. 1,5 pete elteltével (a pií szabályozása stelkül) 0,2 M NsOK-t adtunk az elegybez, és 10-eS pH-t kaptunk, 2,5 perccel később protein D-t (S tng/tnl-re koncentrálva) adtunk az elegybez, körülbelül 1 PD/PSA aránynak megfelelően. A 18-es pH-t tartottuk a kapcsolási idő alatt, ami 1 óra volt. Azután 18 mg glieint (2 M, pB--~9,0) /mg FSA adtunk az elegybez, és á pll-i szabályoztnk 9,0-ra, 3(1 percig 25C-on. Az elegyet azután 4C-on tartottuk éjszakán át, mielőtt gélsz&Ó kromatogrártávál tisztítottuk (Sepnotvj^ a PhortRaeia-íblb Először a konjagátum eluálődtk, majd a reagálatlan PD és a melléktermékek (BMAP. glicin, sók), A konjugátumot összegyűjtöttük, és sterilizáittik 0,2, pm-es szűréssel Őhrtopot'í?metnbránon (Sar-orms).
9. példa - Ν 7. és %, pAWnm efóWfed fermdfefe őr mW jelfenízése
A fő tnfejíkmságokaf az alábbi táblázatban foglaljuk össze:
No. kon ingáin® leírása Fehérje és PS tartalom spgAtil) PS/fehérje arány fiv/w) Szabad fehérje (%) Szabad PS : 1%
1 PSC-PD NaOlí-vai szab. pH PD: 210 PS:308 1AW <2 g-9
2 PSC-PD TEA-va! szab. pH. PD: 230 PS:351 1/0,65 <2 5-ö
3 PSA-PD NaOH-vnl szab, pH FD: 159 PS: 149 1/1,07 j 5 5-9
/?? vő··,::? erédfeémfeá £tf/Z>/C-egerek« alkalmaztunk állati modeiiként á koniugáfemok: immssogenitásának vizsgálatára. A konjugátumokat vagy A!POrrc vagy Al(OH>$-ni adszorbeóituk (10 pg PS-t 500 pg Af'-ra), vagy Rém adszorbeáituk, A?, eg<. reket az alábbiak szerint oltottuk: kél oltás két hetes időközzel (2 pg PS/oltás).
Ezen eredményekbe! az a következtetést vönkatjnk fe először, hogy a szabad PS nagyban belelyúsolju az immunválaszt. Jobb ersfetfenyekei: kaptunk ÍÖTfená! kevesebb FSA fátfelmazó koöjngátumokkal A fenti javítások s CnAP-eijátásra tehát a találmány további tnegvalősífesi máőját képezik.
A kiszerelés is fontos. AlPO, látszik a iegntegfeielőbb adjtsvánssak ehbest a modellben. A köípagáínmok megerősítő hatást váltanak ki, sori «m figyelhető meg az egyedül injektált políszaeharidokhai, fövfe&eifeZzsek
A Ai memAgkííffe A és C poiiszaubaridjajnakkönlagátömalt állítottuk elő sorreadbes 1 és Ö,6-P,7 (va'w) ps·'fehérje aránnyal. A szabad PS ás szabad bórdózéfekétje sorrendben IWs és 15% afett volt A poüszachaná kitermelés magasabb, mint 70%. A, fenti javított: ÜDAP-sijárássai kapható FSA es PC konjngátnísok ííliggeflenui a bordozdfehérjetők de előnyösen protein D-vel) tehát a találmány további megvalósítási módját képezik, fii, példafi, /.u/Tnenzíze b-bő! származó pofiskaehafed-pröfem fi-krmj egálom előállítása fi. á$W««Mr az agyhártyagyulladás egyik fö oka a két évesnél fiatalabb gyermékekben, A fi influenzáé hurok-poÖszaehsridja (PRP) tetaníjsz-tosoid-konjugátunskénl jól ismert fi. Robbins által kifejlesztőd reakniővs! komugalva). A CÖAP stkatazása javított rsakeső, Az alábbi s PRP (előnyösen Pi> hez valő) konjugálásakor talált optimális kórőfefenyek leírása.
A konjugálás: reakciót befolyásoló paraméterek az alábbiak:
* A poiiszaeharid kiiaduiási koncosöáeiója (aminek kettős hatása lehet a szabad polixzaebsríd végső szintjére és a steril szűrést lépésre), » A hordozófehérje kiindulási koncetitráolója, * A poiiszacharidfehérie kiindulási aránya (aminek szintén. kettős hatása lehet szabad políszaeháíid végső szintjére és a steril szűrési lépésre), * Az alkalmazott CDAP mennyisége ^általában nagy feleslegben alkalmazzuk), * A rsakoiőhömsrsékle! (ami befolyásolhatja a poliszacharíd lebomlását, a reakció ki~ nefikáját, és a reaktív csoportok isbofnlását), * Az aktiválás és kapcsolás pi-i-ja, * A reakció leállításának pH -ja (a reziduális DMAP szintjét befolyásolja).
* Az aktiválás, kapcsolás és leáll hás ideje, :Úsy találtuk, hegy a három legkritikusabb paraméter a végtermék ntmőségések optimalizálására; a poiíszachand.· fehérje kiindulási aránya,; a poiiszacharld kiindulási koscen&áclója; és a kapcsolás pH'-ja,
Ezért egy 3-paraméteres reakció-rendszert tervezünk a bárom fenti körülménnyel a három -engeÍven. A középpontok (és a kísérleti tartományok) a?, alábbiak voltak: FS/fehérle arány; 1 /1 (»0,3/1); [?S|: 5 mg-'ml (±2 tng’m?}; es kapcsolási pH; 8,0 (.s 1.0).
A kevésbé 'ényeges; paramétereket az alábbiakban rögzltsftűk: 3Ö mg petíszaefearidoi alkalmaztunk; hőmérséklet 25*C; (CDAPj ~ 8,75 mg/mg ÉS; a pH-f 0(2 M biaÖH-val állítottak; aktiválási pH 9y5; aktiválás ideje 1,5 perc; kapcsolás Ideje 1 óra; [fehérjei - 10 mg/ml; leállítást pH 0,0; leállítás ideje 1 Óra; PS oldásának ideje az oldószerben: I óra 2. M NaCÍ-ben; tisztítás Sepűnery/ S4f?í?//A-oszlopon ISO mM NaCI-lel 12 em/óra folyási sebességgel, és steril szűrés P2d szűrón 5 ml/perc sebességgel.
A vizsgáit adatok a fenti reakcío-rendítzeírel elbáliitott tetnjékek optimalizált körülményeinek meghatározásánál az alábbiak voltak:: folyamat adatok - maximális kitermelés; szűrés után, maximális beépített fehérje-szint; és temték-mlnőség;. adatok - FS/fehérje végső aránya, szabad ÉS szintje, szabad feltérje színije, minimum rezídaátis DMA.? (CDAP lebomlási terméke- sz-nt
A szőre? Jío»
A szátrés utánÁhozátnot befolyásoló tényező a khndaiúsr [Pb], és « kapcsolási pHl és akösáídási ÉS/tohérje arány kölcsönhatása. Alacsony (ÉSj-nál kiess a kölesSmsatss a két uróbbi tényezővel, és mindig jó szüritetöség az eredmény (körülbelül 95% az összes termékre), Azonban magas kooeömsóeíőknái: a sziuhetoség csökken l.a a pH és a kiindulási arány tsö (magás [ÉS], legkisebb arány, legalacsonyabb pH 99% szürhetöség; de magas 1FS], legmagasabb arány és pH 19% szürhetöség).
A PS/fehérje végső aránya a kiindulási arányhoz képest a kapcsolás hatékonyságának a tnérőszáma. Magas [PSj-nál a pH nem befolyásolja az. arányok arányát. Azonban -a kiindulási arány igen (1,75 alacsony kiindulási atáayaái, 1,26 magas kiindulási aránynál). Alacsony [ÉS]-nál az arányok aránya fogna g> óbb részben alacsonyabb, azonban a pi-l-nak ott nagyobb hutása van (alacsony pH, alacsony arány 53
0,96; alacsony pH, magas arány ~ 0,8; magas pH, alacsony arány -- 1,4- és magas pH, magas arány ~ 0,02).
A végső arány a kiindulási arányáéi ás [FSjrtól függ. A legnagyobb végső arányokat a magas kiindulási arány ás magas [PS] kortíbisáciőjával kápttik. A pH hatáss a végső arányra nem annyira szignifikáns,. -mint -az alacsony [FS j, ,$W<íd & szösze
A legkisebb mennyiségű szabad protein D-t magas pH-nái és magas (FSI&M Szeltük »5óg & szint (;,(:-hoz közelíti, A magas (FSj hatása különösen kifejezetté válik, smikor a pH alacsony, A kiindulási arány növelése egy késit járni csak irozzá a szabad protein: O szintjének növekedéséhez.
Fe-áfebős SAH?
A kiindulási aránynak nincs szignifikáns hatása. Ezzel étieméiben a DMAE szintje növekszik a (FSj-val és csökken, amikor a pH-ί emeljük.
ÁFvuákezrerdsek
A iégálőoyösebb konjugálása körülmények tehát az alábbiak kapcsolást pH - 9^0- (FS) « y ragími; és kiindulási arány ~ l/l, ilyen körülmények mellett a végtermék tulajdonságai az alábbiak;
Végső arány FS/fehérje FS hozam szűrés után (%) Arányok aránya SzaMd protein 15 (%) DMAF szint (ngí' l ő pg FS)
érték tartomány érték tartomány érték tartomány érték tartomány érték tartomány
1.10 0,91-1,30 92,6 50-138 1,16 1,03-1,29 0,71 0-10,46 4,95 2,60-7,80
A lenti javkort (optimalizált} CDAP-eljárással kapható FFF-koajogátumok (függetlenül: a hordozőléhérjéiől, de előnyősén protein H-veí) tehát a találmány további megvalósítási urnáját képezik.
Π, példa: Frotein 0 mint antigén - hogyan javíthatjuk a nem tipizálható //, ö?/&guw elüsd: védő hatékonyságát áD-MPk-tel való kiszerelés révén
Nőstény SíEMAegerekef (csoportonként iö-et) immrmizátetk (imramuszkaiárisáu) a H-valens paeumokokkusz poliszacbsnd-proteín D-konjngámm olfőaoyaggat először 2Ö kétes kórban (D0), majd másodszor két héttel később (1)14). A második immunizálás után 7 nappal vért vetőink, A protein S etlni ellenanyag-litereket IgG 1, IgG2a és lgG2b típusú ellenanyagok mennyiségének vonatkozásában mértük.
Fagv:asztva-szárított H-valens oltóanyagot (AIPO4 nélkül) állítottunk elő a koujuaám-nok 15,75% laktózzal v&ló kombinálása révén, 15 perc keveréssel szobahőmérsékleten, a pH-t 6,1 «0,1-re állítva, és lioi'íiizáituk (a ciklus ákalában -69’C-on kezdtük, fokozatosan -24’C-ra állimuuk 3 óra alatt, majd tartottuk ezt a bőméinek lelet 18 órán keresztül, utána fokozatosan -16‘C-ra állítottuk 1 óm alatt, majd tartottuk ezt a hőmérsékletet 6 órán keresztül, utána fokozatosan 34’C-ra állítottuk 3 óra alatt, majd tartottuk ezt a hőmérsékletei 9 őrén keresztet).
A kiszerelések: es s iioklizstunrökat rekenstituálö oldatok összetételét a 13, táblázatban mutáljuk be.
A legjellegzetesebb mérés Tbl-tAíssú sejl-köztentetí Immunválasz bekövetkeztem ismert módon a korreláció az lgG2a-ellenanyagok szintjével. Mint ahogyan az adatokból láthatjuk, meglepően nagy lgG2a-kottceotráctó emelkedés az eredménye annak, hogy a protein Da W -aápnAssssl (ebben az esetben 3 D-MPL-?«O együtt itoftltzáltuk
,sv '•',ν·.

Claims (9)

  1. SZABADALMI IGÉB'VBÖBTDK
    í. inenuaegéo készlteétty, amely több pofea.el!arid4teoiogáttsm antigént tartateaz, amelyek a Aa<???söpSSíiX PgtoswzHe protein D fehérjéjéhez vagy ans;ak seghő I'-sejt epíiópoksó tartalmazó iragrneosébex koptugált gatögén baktétinttrböl származó pt>|jazapba?ki-aotfeé»feői állnak.
  2. 2. .Az t. igénypont: szerinti ororínnogén készlooény, amely ponszaoh;rtid-a.nligé;zké:nt ΒοήηοηοίΜ pyhí Vj-potlszaehorlíltik, íneniogokokkusz poiiszaobandok, B-esopenos mexsmgokokktm· poliszachorláek és módosított gohszaehszidok, 5z<fp^4>wcjar ítareas peliszítoharldok, Mrgprtnzoz'ss ogoMoíloe poiiszaobsrióok, StzsgyeeoeeKs -peliszaehatridok, nbkebaktétintncík pobszaehetidísk, Cryproeeeoas nenpírnníns poiiszsotoiáok, .oeot tipizálható AgznígphíZKr íítBaenana ílpopotiszáelraridek, Aosr??oyóB«s ífpwozög b hurok-po&zaeharldok, Aforaxs/ór οοίΖοίτο/Α HpopohszaeMrfeok, BétgaBo so??;?ífe lipepoziszaeharidok, vagy 7íyp««o.vőma erők i:ipógöprtáoibsztbglikau (LPPG) bármelyikéi tartglmzzs·.
    T A 2, igénypont szerinti rounenogén késztíiínfey, amely legalább négy khvyrtoooooízs pneínsosDo szsrotlpos ptíliszaoharlB-astigéírfeit hatalmazza.
  3. 4. A 2, igénypotst szerinti itungmogén készítmény,· amelyben a protein fEhoz kosbtgálí fenérjsantigének az $«w ínonPtglrkB? A, C vagy V szarotlpnsslnak koinbioáoiölábói származnak.
  4. 5. Az 1. igénypont szerinti isntnnnogén IDsziishény, amely á Hóa»m/?.hÖíz$’ η??οη?ί?ζοο b, a n-enfegokokaosz C és a ínoningnkokkusz ¥ kopiogátí borok-poliszockstidlart tartalmazza, ahol a kőnk;·· gált bozok-pokszaehariboíniígéísek Ai OyAonaara protein D fehérjéiéhez vannák komogálva, azzal a kikötéssel, begy a /Αηοηορ/ΡΡοί /g/Bíenzóí? ρ burgk-pobszseharklia fetannsz-toxolétíoz -vaxs konjugáivn.
    ö, Az: 1, igénypont szerinti óntnonogén készítmény, amely -a Srephocoams. r?nns?Ko;?íoe, a· rnsomopóíDs gyAiensoíí b. a oeeningokokkusz C es a maaiagokokkasz Y koomgáit burokpoiiazadísrlojsií tartalmazza, ahol a boningéit btank-gíohszaobarlp'-sníígénak a rá adtass? protein. .0. fehérjéiéhez vannak kotgogáivs, azzal: a kikötéssel, hegy a BoemophibíS Oytííem-os ö borok·' pelsszaebsritbö tetant’szAoxoidbez vaxs koojogál va,
  5. 7, Az előző Igénypontok bármelyike szerinti nuíuunogéo készítmény, amely adjovánst is tartalmaz, ih A 7. Igénypont szerinti iutuumogén készítmény, amelyben -a poilazneoarló-protein Xbkotsjagámm.
    antigének alőmioium-foszfáim vannak adszorheálva.
  6. 9. A 7. igénypont szerinti mmnamgénkészítmény, amely abiaváosként egy Th I -válasz prefereociális in elokálöszoréi tartalmazza.
    ii), A ih igénypont szerinti lonnnnegétt készítmény, amely edjovánsként az alábbiak legalább egyikét tartalmam: 3D-WL, szggonin immwtimtíiámt vagy Immunérimulúns hatásé CpG-ollgonoklnelitk
  7. 11, Az előzik igénypoíztok öílzureiyike szerinti Ingnonogén készíiraeny. gyógyszerként töriétíö alkalmazásra.
    Is Az I-tb. igénypontokPárntslylke szerinti iotomnngén készítményt tartalmazó ohósúyag.
  8. 13, Eljárás több patogén feáktériton ellent ioanormgén készítmény dőáihtáafe ozzai feifeenzv,·.
    a esíggén baktárinsnokbél potlszsehorid-aniigéoeket izolálunk; a perez sóinál Ónkat akti váljak;
    a .peBszachandokat a .% protein D fehérjéjéhez. koitjngáljuk; és a konjugáH pol i szacharidokat összekeverjük.
  9. 14, Az előző igénypontok bármelyike szerinti nntntmogén készítmény hslésos mennyiségének alkalmazása p&fogén bakterimmnál való fertőzés ipegsiózésére vagy kezdésére szolgáló gyógyszer gyártására.
HU0200367A 1999-03-19 2000-03-17 Sztreptokokkusz oltóanyag HU229968B1 (hu)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HUS1500040C HUS1500040I1 (hu) 1999-03-19 2015-07-14 Sztreptokokkusz oltóanyag

Applications Claiming Priority (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB9906437.0A GB9906437D0 (en) 1999-03-19 1999-03-19 Vaccine
GB9906437.0 1999-03-19
GBGB9909077.1A GB9909077D0 (en) 1999-04-20 1999-04-20 Novel compositions
GB9909077.1 1999-04-20
GBGB9909466.6A GB9909466D0 (en) 1999-04-23 1999-04-23 Vaccines
GB9909466.6 1999-04-23
GB9916677.9 1999-07-15
GBGB9916677.9A GB9916677D0 (en) 1999-07-15 1999-07-15 Vaccine
PCT/EP2000/002468 WO2000056360A2 (en) 1999-03-19 2000-03-17 Vaccine against antigens from bacteriae

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUP0200367A2 HUP0200367A2 (en) 2002-05-29
HU229968B1 true HU229968B1 (hu) 2015-03-30

Family

ID=27451884

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0200373A HU228499B1 (en) 1999-03-19 2000-03-17 Streptococcus vaccine
HU0200664A HUP0200664A2 (en) 1999-03-19 2000-03-17 Streptococcus vaccine
HU0200367A HU229968B1 (hu) 1999-03-19 2000-03-17 Sztreptokokkusz oltóanyag
HUS1500040C HUS1500040I1 (hu) 1999-03-19 2015-07-14 Sztreptokokkusz oltóanyag

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0200373A HU228499B1 (en) 1999-03-19 2000-03-17 Streptococcus vaccine
HU0200664A HUP0200664A2 (en) 1999-03-19 2000-03-17 Streptococcus vaccine

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HUS1500040C HUS1500040I1 (hu) 1999-03-19 2015-07-14 Sztreptokokkusz oltóanyag

Country Status (32)

Country Link
US (8) US20030147922A1 (hu)
EP (6) EP2277535A3 (hu)
JP (4) JP2002540074A (hu)
KR (3) KR100798212B1 (hu)
CN (3) CN100339130C (hu)
AR (3) AR022965A1 (hu)
AT (3) ATE387214T1 (hu)
AU (3) AU750762B2 (hu)
BE (1) BE1025464I2 (hu)
BR (4) BRPI0009163B8 (hu)
CA (3) CA2366152A1 (hu)
CY (3) CY1107561T1 (hu)
CZ (3) CZ20013378A3 (hu)
DE (4) DE122009000054I1 (hu)
DK (2) DK1163000T3 (hu)
ES (3) ES2300255T3 (hu)
FR (1) FR10C0008I2 (hu)
HK (3) HK1043728B (hu)
HU (4) HU228499B1 (hu)
IL (5) IL145044A0 (hu)
LU (1) LU91652I2 (hu)
MX (1) MXPA01009452A (hu)
MY (2) MY125202A (hu)
NL (1) NL300415I1 (hu)
NO (4) NO330532B1 (hu)
NZ (3) NZ513840A (hu)
PL (3) PL203917B1 (hu)
PT (2) PT1163000E (hu)
SI (2) SI1162999T1 (hu)
TR (3) TR200102736T2 (hu)
TW (3) TWI286938B (hu)
WO (3) WO2000056358A2 (hu)

Families Citing this family (289)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US20030157129A1 (en) * 1995-06-23 2003-08-21 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Vaccine comprising a polysaccharide antigen - carrier protein conjugate and free carrier protein
US7078042B2 (en) * 1995-09-15 2006-07-18 Uab Research Foundation Pneumococcal surface protein C (PspC), epitopic regions and strain selection thereof, and uses therefor
PT909323E (pt) 1996-01-04 2007-06-04 Novartis Vaccines & Diagnostic ''bacterioferritina de helicobacter pilori''
FR2763244B1 (fr) 1997-05-14 2003-08-01 Pasteur Merieux Serums Vacc Composition vaccinale multivalente a porteur mixte
US20010016200A1 (en) 1998-04-23 2001-08-23 Briles David E. Pneumococcal surface protein C (PspC), epitopic regions and strain selection thereof, and uses therefor
DE69932717T2 (de) 1998-05-22 2007-08-09 Ottawa Health Research Institute, Ottawa Methoden und produkte zur induzierung mukosaler immunität
US6797275B1 (en) * 1998-12-04 2004-09-28 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method of immunizing humans against Salmonella typhi using a Vi-rEPA conjugate vaccine
DE122009000054I1 (de) * 1999-03-19 2009-12-31 Glaxosmithkline Biolog Sa Impfstoff gegen bakterielle antigene
GB9925559D0 (en) * 1999-10-28 1999-12-29 Smithkline Beecham Biolog Novel method
GB0108364D0 (en) * 2001-04-03 2001-05-23 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine composition
GB0022742D0 (en) * 2000-09-15 2000-11-01 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
NZ594877A (en) 2000-10-27 2012-07-27 Novartis Vaccines & Diagnostic Nucleic acids and proteins from streptococcus groups A & B
GB2370770B (en) * 2001-01-03 2005-06-01 Simon Connolly Uses of Streptococcus Vaccines
US7082569B2 (en) 2001-01-17 2006-07-25 Outlooksoft Corporation Systems and methods providing dynamic spreadsheet functionality
KR100947757B1 (ko) 2001-01-23 2010-03-18 아벤티스 파스퇴르 다가 수막구균 폴리사카라이드―단백질 접합체 백신
ATE503493T1 (de) 2001-02-23 2011-04-15 Glaxosmithkline Biolog Sa Influenza vakzinzusammensetzungen zur intradermaler verabreichung
GB0107661D0 (en) 2001-03-27 2001-05-16 Chiron Spa Staphylococcus aureus
GB0107658D0 (en) 2001-03-27 2001-05-16 Chiron Spa Streptococcus pneumoniae
GB0109297D0 (en) * 2001-04-12 2001-05-30 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
GB0115176D0 (en) 2001-06-20 2001-08-15 Chiron Spa Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines
US8481043B2 (en) 2001-06-22 2013-07-09 Cpex Pharmaceuticals, Inc. Nasal immunization
GB0118249D0 (en) 2001-07-26 2001-09-19 Chiron Spa Histidine vaccines
GB0121591D0 (en) 2001-09-06 2001-10-24 Chiron Spa Hybrid and tandem expression of neisserial proteins
AR045702A1 (es) 2001-10-03 2005-11-09 Chiron Corp Composiciones de adyuvantes.
EP2335723A1 (en) 2001-12-12 2011-06-22 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Immunisation against chlamydia trachomatis
GB0130215D0 (en) * 2001-12-18 2002-02-06 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
WO2003070909A2 (en) 2002-02-20 2003-08-28 Chiron Corporation Microparticles with adsorbed polypeptide-containing molecules
MXPA04011248A (es) * 2002-05-14 2005-02-17 Chiron Srl Vacunas mucosales en combinacion para la meningitis bacteriana.
GB0302218D0 (en) 2003-01-30 2003-03-05 Chiron Sri Vaccine formulation & Mucosal delivery
DE60328481D1 (de) * 2002-05-14 2009-09-03 Novartis Vaccines & Diagnostic Schleimhautapplizierter impfstoff, der das adjuvanz chitosan und menigokokkenantigene enthält
GB0220194D0 (en) 2002-08-30 2002-10-09 Chiron Spa Improved vesicles
EP2351579B1 (en) 2002-10-11 2016-09-21 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Polypeptide vaccines for broad protection against hypervirulent meningococcal lineages
EP2314604A3 (en) * 2002-10-15 2011-05-25 Intercell AG Nucleic acids coding for adhesion factors of group B streptococcus, adhesion factors of group B streptococcus and further uses thereof
AU2003278166B2 (en) 2002-11-01 2009-01-29 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Immunogenic composition
PT1565478T (pt) 2002-11-12 2017-11-14 The Brigham And Women`S Hospital Inc Vacina de polissacáridos para infeções estafilocócicas
US20070059329A1 (en) 2002-11-15 2007-03-15 Nathalie Norais Unexpected surface proteins in meningococcus
GB0227346D0 (en) 2002-11-22 2002-12-31 Chiron Spa 741
EP1578954A4 (en) 2002-12-11 2010-08-11 Coley Pharm Group Inc 5'-CPG NUCLEIC ACIDS AND USE METHOD
EP2263687B1 (en) 2002-12-27 2015-03-25 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Immunogenic compositions containing phospholipid
FR2850106B1 (fr) * 2003-01-17 2005-02-25 Aventis Pasteur Conjugues obtenus par amination reductrice du polysaccharide capsulaire du pneumocoque de serotype 5
CN101926988B (zh) 2003-01-30 2014-06-04 诺华疫苗和诊断有限公司 抗多种脑膜炎球菌血清组的可注射性疫苗
MXPA05009351A (es) 2003-03-07 2006-03-08 Wyeth Corp Conjugados de polisacarido-proteina portadora adhesina superficial de estafilococo para inmunizacion contra infecciones nosocomiales.
KR101052996B1 (ko) * 2003-03-13 2011-07-29 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 박테리아 세포용해소에 대한 정제 공정
EP1608369B1 (en) 2003-03-28 2013-06-26 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Use of organic compounds for immunopotentiation
ES2328697T5 (es) 2003-06-02 2017-07-25 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Composiciones inmunogénicas basadas en micropartículas que comprenden toxoide adsorbido y un antígeno que contiene un polisacárido
JP4738339B2 (ja) 2003-10-02 2011-08-03 ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス エスアールエル 複数の髄膜炎菌血清群についての液体ワクチン
GB0323103D0 (en) 2003-10-02 2003-11-05 Chiron Srl De-acetylated saccharides
GB0406013D0 (en) 2004-03-17 2004-04-21 Chiron Srl Analysis of saccharide vaccines without interference
GB0409745D0 (en) 2004-04-30 2004-06-09 Chiron Srl Compositions including unconjugated carrier proteins
NZ550533A (en) 2004-04-30 2010-02-26 Novartis Vaccines & Diagnostic Meningococcal conjugate vaccination comprising N. meningitidis and diphtheria toxin
GB0500787D0 (en) 2005-01-14 2005-02-23 Chiron Srl Integration of meningococcal conjugate vaccination
US7444197B2 (en) * 2004-05-06 2008-10-28 Smp Logic Systems Llc Methods, systems, and software program for validation and monitoring of pharmaceutical manufacturing processes
GB0410866D0 (en) 2004-05-14 2004-06-16 Chiron Srl Haemophilius influenzae
GB0411387D0 (en) 2004-05-21 2004-06-23 Chiron Srl Analysis of saccharide length
GB0413868D0 (en) 2004-06-21 2004-07-21 Chiron Srl Dimensional anlaysis of saccharide conjugates
JP2008504292A (ja) 2004-06-24 2008-02-14 ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス， インコーポレイテッド 免疫増強用の化合物
WO2006115509A2 (en) 2004-06-24 2006-11-02 Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. Small molecule immunopotentiators and assays for their detection
US20090317420A1 (en) 2004-07-29 2009-12-24 Chiron Corporation Immunogenic compositions for gram positive bacteria such as streptococcus agalactiae
GB0424092D0 (en) 2004-10-29 2004-12-01 Chiron Srl Immunogenic bacterial vesicles with outer membrane proteins
CN101107007B (zh) 2005-01-27 2011-08-17 奥克兰儿童医院及研究中心 对脑膜炎奈瑟球菌所致疾病具有广谱保护作用的gna1870囊泡疫苗
GB0502095D0 (en) 2005-02-01 2005-03-09 Chiron Srl Conjugation of streptococcal capsular saccharides
DK2351772T3 (en) 2005-02-18 2016-09-05 Glaxosmithkline Biologicals Sa Proteins and nucleic acids from meningitis / sepsis-associated Escherichia coli
SG164344A1 (en) 2005-02-18 2010-09-29 Novartis Vaccines & Diagnostics Srl Immunogens from uropathogenic escherichia coli
GB0505518D0 (en) 2005-03-17 2005-04-27 Chiron Srl Combination vaccines with whole cell pertussis antigen
CN104815327A (zh) * 2005-04-08 2015-08-05 惠氏有限责任公司 多价肺炎球菌多糖-蛋白质缀合物组合物
US20070184072A1 (en) 2005-04-08 2007-08-09 Wyeth Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
US7955605B2 (en) 2005-04-08 2011-06-07 Wyeth Llc Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
US7709001B2 (en) * 2005-04-08 2010-05-04 Wyeth Llc Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
SG175456A1 (en) 2005-04-18 2011-11-28 Novartis Vaccines & Diagnostic Expressing hepatitis b virus surface antigen for vaccine preparation
UA95237C2 (uk) 2005-06-27 2011-07-25 Ґлаксосмітклайн Байолоджікалз С.А. Імуногенна композиція
EP2308505A3 (en) 2005-09-01 2011-11-30 Novartis Vaccines and Diagnostics GmbH Multiple vaccines including serogroup C meningococcus
GB0522765D0 (en) 2005-11-08 2005-12-14 Chiron Srl Combination vaccine manufacture
EP2360175B1 (en) 2005-11-22 2014-07-16 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Norovirus and Sapovirus virus-like particles (VLPs)
GB0524066D0 (en) 2005-11-25 2006-01-04 Chiron Srl 741 ii
TWI457133B (zh) * 2005-12-13 2014-10-21 Glaxosmithkline Biolog Sa 新穎組合物
PT1973564T (pt) * 2005-12-22 2017-01-24 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vacina compreendendo conjugados polissacarídicos capsulares de streptococcus pneumoniae
GB0607088D0 (en) 2006-04-07 2006-05-17 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
US8617565B2 (en) * 2006-01-17 2013-12-31 Arne Forsgren et al. Surface exposed Haemophilus influenzae protein (protein E; pE)
CN101024079B (zh) * 2006-02-17 2012-02-01 福州昌晖生物工程有限公司 肺炎链球菌多糖-外膜蛋白结合疫苗及制备方法
KR20150038626A (ko) * 2006-03-17 2015-04-08 더 거버먼트 오브 더 유나이티드 스테이츠 오브 아메리카 에즈 레프리젠티드 바이 더 세크러테리 오브 더 디파트먼트 오브 헬스 앤드 휴먼 서비시즈 복합 다가 면역원성 콘쥬게이트의 제조 방법
US10828361B2 (en) 2006-03-22 2020-11-10 Glaxosmithkline Biologicals Sa Regimens for immunisation with meningococcal conjugates
DK2004225T3 (da) 2006-03-22 2012-08-06 Novartis Ag Programmer for vaccination med meningocockonjugater
GB0605757D0 (en) 2006-03-22 2006-05-03 Chiron Srl Separation of conjugated and unconjugated components
US8173657B2 (en) 2006-03-23 2012-05-08 Novartis Ag Imidazoquinoxaline compounds as immunomodulators
BRPI0710210A2 (pt) * 2006-03-30 2011-05-24 Glaxomithkline Biolog S A composição imunogênica, vacina, métodos para preparar a vacina, e para prevenir ou tratar infecção estafilocócica, uso da composição imunogênica, e, processo para conjugar oligassacarìdeo ou polissacarìdeo capsular
PE20080774A1 (es) * 2006-03-30 2008-08-08 Glaxosmithkline Biolog Sa Composicion inmunogenica que comprende pnag de estafilococos conjugada con una proteina portadora y polisacarido u oligosacarido capsular de s. aureus
TW200806315A (en) 2006-04-26 2008-02-01 Wyeth Corp Novel formulations which stabilize and inhibit precipitation of immunogenic compositions
US8808707B1 (en) 2006-05-08 2014-08-19 Wyeth Llc Pneumococcal dosing regimen
US20100015168A1 (en) * 2006-06-09 2010-01-21 Novartis Ag Immunogenic compositions for streptococcus agalactiae
GB0612854D0 (en) 2006-06-28 2006-08-09 Novartis Ag Saccharide analysis
US20100166788A1 (en) 2006-08-16 2010-07-01 Novartis Vaccines And Diagnostics Immunogens from uropathogenic escherichia coli
WO2008045852A2 (en) * 2006-10-10 2008-04-17 Wyeth Purification of streptococcus pneumoniae type 3 polysaccharides
GB0700136D0 (en) 2007-01-04 2007-02-14 Glaxosmithkline Biolog Sa Process for manufacturing vaccines
GB0700562D0 (en) 2007-01-11 2007-02-21 Novartis Vaccines & Diagnostic Modified Saccharides
AU2008267208B2 (en) 2007-06-26 2012-01-19 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine comprising streptococcus pneumoniae capsular polysaccharide conjugates
GB0713880D0 (en) 2007-07-17 2007-08-29 Novartis Ag Conjugate purification
GB0714963D0 (en) 2007-08-01 2007-09-12 Novartis Ag Compositions comprising antigens
EP2197485B1 (en) 2007-09-12 2015-11-11 GlaxoSmithKline Biologicals SA Gas57 mutant antigens and gas57 antibodies
ATE553774T1 (de) 2007-10-19 2012-05-15 Novartis Ag Meningokokkenimpfstoffformulierungen
EP2217250A4 (en) 2007-11-09 2011-01-05 California Inst Of Techn IMMUNOMODULATING COMPOUNDS AND RELEVANT COMPOSITIONS AND METHODS
ES2664753T3 (es) 2007-12-07 2018-04-23 Glaxosmithkline Biologicals Sa Composiciones de inducción de respuestas inmunes
GB0818453D0 (en) 2008-10-08 2008-11-12 Novartis Ag Fermentation processes for cultivating streptococci and purification processes for obtaining cps therefrom
PL2235046T3 (pl) 2007-12-21 2012-12-31 Novartis Ag Zmutowane formy streptolizyny O
EP2252326A4 (en) * 2008-02-01 2012-08-29 Newcastle Innovation Ltd VACCINE COMPOSITIONS
WO2009104097A2 (en) 2008-02-21 2009-08-27 Novartis Ag Meningococcal fhbp polypeptides
AU2009223613B2 (en) 2008-03-10 2014-09-25 Children's Hospital & Research Center At Oakland Chimeric factor H binding proteins (fHBP) containing a heterologous B domain and methods of use
EP2315747B1 (en) 2008-07-21 2017-12-06 The Brigham and Women's Hospital, Inc. Methods and compositions relating to synthetic beta-1,6 glucosamine oligosaccharides
SI2349520T1 (sl) 2008-10-27 2016-08-31 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Postopek čiščenja za ogljikohidrat iz Streptococcus skupine A
PE20110891A1 (es) 2008-12-09 2011-12-23 Pfizer Vaccines Llc Vacuna de peptido ch3 de ige
GB0822634D0 (en) 2008-12-11 2009-01-21 Novartis Ag Meningitis vaccines
GB0822633D0 (en) 2008-12-11 2009-01-21 Novartis Ag Formulation
JP2012512240A (ja) 2008-12-17 2012-05-31 ノバルティス アーゲー ヘモグロビン受容体を含む髄膜炎菌ワクチン
BRPI1005670A8 (pt) 2009-01-05 2017-12-26 Epitogenesis Inc composições adjuvantes e processos de uso.
AU2010204139A1 (en) 2009-01-12 2011-08-11 Novartis Ag Cna_B domain antigens in vaccines against gram positive bacteria
WO2010109324A1 (en) 2009-03-24 2010-09-30 Novartis Ag Combinations of meningococcal factor h binding protein and pneumococcal saccharide conjugates
NZ595234A (en) 2009-03-24 2013-12-20 Novartis Ag Adjuvanting meningococcal factor h binding protein
SG175092A1 (en) 2009-04-14 2011-11-28 Novartis Ag Compositions for immunising against staphylococcus aerus
WO2010132833A1 (en) 2009-05-14 2010-11-18 The Regents Of The University Of Michigan Streptococcus vaccine compositions and methods of using the same
CN102481352A (zh) 2009-06-22 2012-05-30 惠氏有限责任公司 金黄色葡萄球菌抗原的免疫原性组合物
SG177310A1 (en) 2009-06-22 2012-02-28 Wyeth Llc Compositions and methods for preparing staphylococcus aureus serotype 5 and 8 capsular polysaccharide conjugate immunogenic compositions
US8647621B2 (en) 2009-07-27 2014-02-11 Fina Biosolutions, Llc Method of producing protein-carbohydrate vaccines reduced in free carbohydrate
KR20130127547A (ko) 2009-07-30 2013-11-22 화이자 백신스 엘엘씨 항원성 타우 펩타이드 및 이의 용도
EP2470204B1 (en) 2009-08-27 2015-12-16 GlaxoSmithKline Biologicals SA Hybrid polypeptides including meningococcal fhbp sequences
MX2012002639A (es) * 2009-09-03 2012-03-14 Pfizer Vaccines Llc Vacuna de pcsk9.
EP2475385A1 (en) 2009-09-10 2012-07-18 Novartis AG Combination vaccines against respiratory tract diseases
CN102917730A (zh) 2009-10-27 2013-02-06 诺华有限公司 修饰的脑膜炎球菌fHBP多肽
BR112012010223A2 (pt) 2009-10-30 2016-12-06 Novartis Ag purificação de staphylococcus aureus tipo 5 e tipo 8 sacarídeos capsulares
GB0919690D0 (en) 2009-11-10 2009-12-23 Guy S And St Thomas S Nhs Foun compositions for immunising against staphylococcus aureus
CA2836153C (en) 2009-12-17 2016-06-21 Fina Biosolutions, Llc Chemical reagents for the activation of polysaccharides in the preparation of conjugate vaccines
AU2010334428B2 (en) 2009-12-22 2015-05-21 Celldex Therapeutics, Inc. Vaccine compositions
GB201003333D0 (en) 2010-02-26 2010-04-14 Novartis Ag Immunogenic proteins and compositions
GB201003922D0 (en) 2010-03-09 2010-04-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Conjugation process
ES2661569T3 (es) 2010-03-30 2018-04-02 Children's Hospital & Research Center At Oakland Proteínas de unión al factor H (fHbp) con propiedades alteradas y métodos de uso de las mismas
GB201005625D0 (en) 2010-04-01 2010-05-19 Novartis Ag Immunogenic proteins and compositions
DK2555753T3 (en) 2010-04-07 2018-11-26 California Inst Of Techn Vesicle for delivering a compound to a mucosal membrane as well as corresponding compositions, methods and systems
WO2011146910A1 (en) * 2010-05-20 2011-11-24 Round June L Antigen specific tregs and related compositions, methods and systems
EP2575988A1 (en) 2010-05-28 2013-04-10 Tetris Online, Inc. Interactive hybrid asynchronous computer game infrastructure
DK2575870T3 (en) 2010-06-04 2017-02-13 Wyeth Llc vaccine Formulations
EP2575868A1 (en) 2010-06-07 2013-04-10 Pfizer Vaccines LLC Ige ch3 peptide vaccine
WO2011154863A1 (en) 2010-06-07 2011-12-15 Pfizer Inc. Her-2 peptides and vaccines
US10478483B2 (en) 2010-06-25 2019-11-19 Glaxosmithkline Biologicals Sa Combinations of meningococcal factor H binding proteins
GB201101665D0 (en) 2011-01-31 2011-03-16 Novartis Ag Immunogenic compositions
US20130315959A1 (en) 2010-12-24 2013-11-28 Novartis Ag Compounds
EP2667852B1 (en) 2011-01-27 2016-11-09 GlaxoSmithKline Biologicals SA Adjuvant nanoemulsions with crystallisation inhibitors
CA2828844C (en) 2011-03-02 2020-07-14 Novartis Ag Combination vaccines with lower doses of antigen and/or adjuvant
GB201103836D0 (en) 2011-03-07 2011-04-20 Glaxosmithkline Biolog Sa Conjugation process
WO2012129483A1 (en) 2011-03-24 2012-09-27 Novartis Ag Adjuvant nanoemulsions with phospholipids
EP2511295A1 (en) 2011-04-15 2012-10-17 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Compositions for preventing and/or treating an infection by an HIV-1 virus
ES2686875T3 (es) 2011-05-06 2018-10-22 Aparin, Petr Gennadievich Exopolisacárido de la bacteria Shigella sonnei, método para producirlo, vacuna y composición farmacéutica que lo contienen
JP6499446B2 (ja) 2011-06-24 2019-04-10 エピットジェネシス・インコーポレーテッド 抗原特異的免疫モジュレーターとして選択担体、ビタミン、タンニンおよびフラボノイドの組み合わせを含有する医薬組成物
WO2013009564A1 (en) 2011-07-08 2013-01-17 Novartis Ag Tyrosine ligation process
GB201114923D0 (en) 2011-08-30 2011-10-12 Novartis Ag Immunogenic proteins and compositions
US9358284B2 (en) 2011-09-14 2016-06-07 Glaxosmithkline Biologicals Sa Methods for making saccharide-protein glycoconjugates
EP2757882B1 (en) 2011-09-22 2020-11-04 Merck Sharp & Dohme Corp. Imidazopyridyl compounds as aldosterone synthase inhibitors
MX354924B (es) 2011-11-07 2018-03-22 Novartis Ag Molecula portadora que comprende un antigeno spr0096 y un spr2021.
DE102011122891B4 (de) 2011-11-11 2014-12-24 Novartis Ag Fermentationsmedium, das frei von tierischen Bestandteilen ist, zur Herstellung von Diphtherie-Toxoiden zur Verwendung bei der Impfung von Menschen
DE102011118371B4 (de) 2011-11-11 2014-02-13 Novartis Ag Zur Impfung von Menschen geeignete Zusammensetzung, die ein Diphtherie-Toxoid umfasst, sowie Verfahren zu deren Herstellung
GB2495341B (en) 2011-11-11 2013-09-18 Novartis Ag Fermentation methods and their products
EP2592137A1 (en) 2011-11-11 2013-05-15 Novartis AG Fermentation media free of animal-derived components for production of diphtheria toxoids suitable for human vaccine use
JP6084631B2 (ja) 2011-12-08 2017-02-22 ノバルティス アーゲー Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅ毒素ベースのワクチン
GB201121301D0 (en) 2011-12-12 2012-01-25 Novartis Ag Method
BR112014016223A8 (pt) 2011-12-29 2017-07-04 Novartis Ag combinações adjuvantes de proteínas de ligação de fator h meningocócico
MX2014010011A (es) 2012-02-24 2014-09-08 Novartis Ag Proteinas y composiciones de pilus.
EP2822586A1 (en) 2012-03-07 2015-01-14 Novartis AG Adjuvanted formulations of streptococcus pneumoniae antigens
CN104159603A (zh) 2012-03-08 2014-11-19 诺华股份有限公司 带有tlr4激动剂的联合疫苗
SA115360586B1 (ar) 2012-03-09 2017-04-12 فايزر انك تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها
US10279026B2 (en) 2012-04-26 2019-05-07 Glaxosmithkline Biologicals Sa Antigens and antigen combinations
KR102139959B1 (ko) 2012-04-26 2020-08-04 노파르티스 아게 항원 및 항원 조합물
KR102125658B1 (ko) 2012-05-04 2020-06-22 화이자 인코포레이티드 전립선 관련된 항원 및 백신 기재 면역치료 요법
WO2013174832A1 (en) 2012-05-22 2013-11-28 Novartis Ag Meningococcus serogroup x conjugate
KR102057217B1 (ko) * 2012-06-20 2020-01-22 에스케이바이오사이언스 주식회사 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물
EP2892553A1 (en) 2012-09-06 2015-07-15 Novartis AG Combination vaccines with serogroup b meningococcus and d/t/p
AR092897A1 (es) 2012-10-03 2015-05-06 Novartis Ag Composiciones inmunogenicas
SG11201502599TA (en) 2012-10-12 2015-05-28 Glaxosmithkline Biolog Sa Non-cross-linked acellular pertussis antigens for use in combination vaccines
US20140193451A1 (en) * 2012-10-17 2014-07-10 Glaxosmithkline Biologicals Sa Immunogenic composition
EP2908855B1 (en) * 2012-10-17 2017-06-28 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Immunogenic composition comprising 1 or more streptococcus pneumoniae capsular saccharide conjugates and a protein component comprising protein e and/or pila fromhaemophilus influenzae .
KR20140075201A (ko) * 2012-12-11 2014-06-19 에스케이케미칼주식회사 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물
KR20140075196A (ko) 2012-12-11 2014-06-19 에스케이케미칼주식회사 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물
CN105188747A (zh) 2013-02-01 2015-12-23 葛兰素史密斯克莱生物公司 包含toll样受体激动剂的免疫组合物的皮内递送
JP2016521284A (ja) 2013-05-10 2016-07-21 カリフォルニア インスティチュート オブ テクノロジー 大腸ガンのプロバイオティクスによる防止および処置
US20210145963A9 (en) 2013-05-15 2021-05-20 The Governors Of The University Of Alberta E1e2 hcv vaccines and methods of use
CN103386126B (zh) * 2013-06-25 2015-06-17 北京科兴生物制品有限公司 一种含肠道病毒抗原的多价免疫原性组合物
CA2923129C (en) 2013-09-08 2020-06-09 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
US11708411B2 (en) 2013-12-20 2023-07-25 Wake Forest University Health Sciences Methods and compositions for increasing protective antibody levels induced by pneumococcal polysaccharide vaccines
BR112016015835B1 (pt) 2014-01-21 2023-12-26 Pfizer Inc Processo de preparação de conjugados compreendendo polissacarídeos capsulares de streptococcus pneumoniae
US11160855B2 (en) 2014-01-21 2021-11-02 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
EP3607966A1 (en) 2014-01-21 2020-02-12 Pfizer Inc Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
EP3104877B1 (en) 2014-02-11 2020-01-22 The USA, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Pcsk9 vaccine and methods of using the same
MX373277B (es) 2014-02-28 2020-05-20 Glaxosmithkline Biologicals Sa Polipeptidos fhbp meningococicos modificados.
EP2921856B1 (en) * 2014-03-18 2016-09-14 Serum Institute Of India Private Limited A quantitative assay for 4-pyrrolidinopyridine (4-ppy) in polysaccharide-protein conjugate vaccines
CN104829711B (zh) * 2014-04-08 2018-04-03 北京天成新脉生物技术有限公司 脑膜炎球菌荚膜多糖单克隆抗体及其应用
CN106715464B (zh) 2014-07-23 2021-03-16 奥克兰儿童医院及研究中心 因子h结合蛋白变体及其使用方法
US9815886B2 (en) 2014-10-28 2017-11-14 Adma Biologics, Inc. Compositions and methods for the treatment of immunodeficiency
EP3034516A1 (en) 2014-12-19 2016-06-22 Novartis AG Purification of streptococcal capsular polysaccharide
FI3244917T3 (fi) 2015-01-15 2023-05-25 Pfizer Immunogeenisiä koostumuksia pneumokokkirokotteissa käytettäväksi
CN104548090B (zh) * 2015-01-27 2016-11-30 中国科学院过程工程研究所 一种β-葡聚糖修饰的脑膜炎多糖结合疫苗及其制备方法
WO2016184963A1 (en) 2015-05-19 2016-11-24 Innavirvax Treatment of hiv-infected individuals
WO2016201342A1 (en) 2015-06-10 2016-12-15 California Institute Of Technology Sepsis treatment and related compositions methods and systems
EP3109255A1 (en) 2015-06-26 2016-12-28 Institut National De La Recherche Agronomique Immunogenic composition
CN107849119A (zh) 2015-07-07 2018-03-27 阿费里斯股份公司 用于治疗和预防IgE介导的疾病的疫苗
KR102225282B1 (ko) 2015-07-21 2021-03-10 화이자 인코포레이티드 접합된 캡슐형 사카라이드 항원을 포함하는 면역원성 조성물, 그를 포함하는 키트 및 그의 용도
HK1248531A1 (zh) 2015-08-25 2018-10-19 巴比塔‧阿格拉沃尔 免疫调节组合物及其使用方法
CN117229414A (zh) 2015-10-08 2023-12-15 艾伯塔大学理事会 丙型肝炎病毒e1/e2异二聚体及其生产方法
GB201518684D0 (en) 2015-10-21 2015-12-02 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
WO2017085586A1 (en) 2015-11-20 2017-05-26 Pfizer Inc. Immunogenic compositions for use in pneumococcal vaccines
PE20181158A1 (es) 2015-12-04 2018-07-19 Dana Farber Cancer Inst Inc Vacunacion con el dominio alfa 3 de mica/b para el tratamiento del cancer
WO2017117539A1 (en) 2015-12-30 2017-07-06 Northwestern University Cell-free glycoprotein synthesis (cfgps) in prokaryotic cell lysates enriched with components for glycosylation
MX2018008797A (es) 2016-01-19 2018-11-29 Pfizer Vacunas contra el cancer.
WO2017175082A1 (en) 2016-04-05 2017-10-12 Gsk Vaccines S.R.L. Immunogenic compositions
WO2017220753A1 (en) 2016-06-22 2017-12-28 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
US10829795B2 (en) 2016-07-14 2020-11-10 Northwestern University Method for rapid in vitro synthesis of glycoproteins via recombinant production of N-glycosylated proteins in prokaryotic cell lysates
EP3493837B1 (en) 2016-08-05 2022-08-31 Sanofi Pasteur, Inc. Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
CA3031797A1 (en) 2016-08-05 2018-02-08 Sanofi Pasteur, Inc. Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
WO2018042015A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vaccines for neisseria gonorrhoeae
CN117801069A (zh) 2016-10-07 2024-04-02 恩特罗姆公司 用于癌症疗法的免疫原性化合物
IL296165B2 (en) 2016-10-07 2023-10-01 Enterome S A Immunogenic compounds for cancer treatment
WO2018104889A1 (en) 2016-12-06 2018-06-14 Glaxosmithkline Biologicals Sa Purification process for capsular polysaccharide
SI3570879T1 (sl) 2017-01-20 2022-06-30 Pfizer Inc. Imunogenska kompozicija za uporabo v pnevmokoknih cepivih
PE20191107A1 (es) 2017-01-31 2019-08-26 Pfizer Composiciones de neisseria meningitidis y metodos respectivos
US10259865B2 (en) 2017-03-15 2019-04-16 Adma Biologics, Inc. Anti-pneumococcal hyperimmune globulin for the treatment and prevention of pneumococcal infection
KR102101879B1 (ko) * 2017-03-15 2020-05-29 주식회사 엘지화학 다가 폐렴구균 백신 조성물
WO2018178265A1 (en) 2017-03-31 2018-10-04 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Immunogenic composition, use and method of treatment
WO2018178264A1 (en) 2017-03-31 2018-10-04 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Immunogenic composition, use and method of treatment
EP3634481A4 (en) 2017-06-10 2021-07-21 Inventprise, LLC. MULTIVALENT CONJUGATE VACCINES WITH BIVALENT OR MULTIVALENT CONJUGATE POLYSACCHARIDES THAT CONFIRM ENHANCED IMMUNOGENICITY AND AVIDITY
US10729763B2 (en) 2017-06-10 2020-08-04 Inventprise, Llc Mixtures of polysaccharide-protein pegylated compounds
CN110996994A (zh) 2017-08-14 2020-04-10 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 加强免疫应答的方法
EP3691677A4 (en) 2017-10-04 2021-07-07 Pogona, Llc COMPOSITIONS OF SACCHARIDE-POLYPEPTIDE CONJUGATES AND THEIR METHODS OF USE
US11116828B2 (en) 2017-12-06 2021-09-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Compositions comprising Streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates and methods of use thereof
AU2019215216B2 (en) 2018-02-05 2025-04-17 Sk Bioscience Co., Ltd. Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
SG11202006387QA (en) 2018-02-05 2020-07-29 Sanofi Pasteur Inc Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
WO2019173438A1 (en) 2018-03-06 2019-09-12 Stc. Unm Compositions and methods for reducing serum triglycerides
WO2019197563A2 (en) 2018-04-11 2019-10-17 Enterome S.A. Immunogenic compounds for treatment of fibrosis, autoimmune diseases and inflammation
HUE060791T2 (hu) 2018-04-11 2023-04-28 Enterome S A Antigén peptidek rák megelõzésére és kezelésére
AU2019256218B2 (en) 2018-04-18 2025-10-16 Sk Bioscience Co., Ltd. Streptococcus pneumoniae capsular polysaccharides and immunogenic conjugate thereof
JP7446279B2 (ja) 2018-07-19 2024-03-08 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム 乾燥多糖を調製するための方法
CA3107077A1 (en) 2018-08-07 2020-02-13 Glaxosmithkline Biologicals Sa Processes and vaccines
US11260119B2 (en) 2018-08-24 2022-03-01 Pfizer Inc. Escherichia coli compositions and methods thereof
JP7551618B2 (ja) 2018-12-12 2024-09-17 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム Ｏ－結合型グリコシル化のための修飾キャリアタンパク質
WO2020121159A1 (en) 2018-12-12 2020-06-18 Pfizer Inc. Immunogenic multiple hetero-antigen polysaccharide-protein conjugates and uses thereof
GEP20247633B (en) 2018-12-19 2024-06-25 Merck Sharp & Dohme Llc Compositions comprising streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates and methods of use thereof
KR20210116512A (ko) * 2019-01-11 2021-09-27 노쓰웨스턴유니버시티 원핵생물 세포 용해물에서의 생체접합체 백신 합성
US12397014B2 (en) 2019-02-05 2025-08-26 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Polysaccharide compositions for use in treating filariasis
WO2020165711A1 (en) 2019-02-11 2020-08-20 Pfizer Inc. Neisseria meningitidiscompositions and methods thereof
JP7239509B6 (ja) 2019-02-22 2023-03-28 ファイザー・インク 細菌多糖類を精製するための方法
CA3136278A1 (en) 2019-04-10 2020-10-15 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens, kits comprising the same and uses thereof
US20220221455A1 (en) 2019-04-18 2022-07-14 Glaxosmithkline Biologicals Sa Antigen binding proteins and assays
US12521443B2 (en) 2019-05-10 2026-01-13 Glaxosmithkline Biologicals Sa Conjugate production
EP4010014A1 (en) 2019-08-05 2022-06-15 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Immunogenic composition
MX2022001489A (es) 2019-08-05 2022-03-02 Glaxosmithkline Biologicals Sa Proceso para la preparacion de una composicion que comprende un polipeptido de proteina d.
CA3155669A1 (en) 2019-09-27 2021-04-01 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
MX2022004598A (es) 2019-10-16 2022-09-23 Enterome S A Compuestos inmunogenicos para el tratamiento del cancer suprarrenal.
MX2022005252A (es) 2019-11-01 2022-06-08 Pfizer Composiciones de escherichia coli y metodos de las mismas.
DK4021487T5 (da) 2019-11-15 2024-07-29 Enterome S A Antigene peptider til forebyggelse og behandling af b-celle malignitet
WO2021099982A1 (en) 2019-11-22 2021-05-27 Glaxosmithkline Biologicals Sa Dosage and administration of a bacterial saccharide glycoconjugate vaccine
US20220409539A1 (en) * 2019-12-30 2022-12-29 Fraunhofer Usa Inc. Particles for multi-dose delivery
US20230085173A1 (en) 2020-02-21 2023-03-16 Pfizer Inc. Purification of saccharides
PE20230170A1 (es) 2020-02-23 2023-02-01 Pfizer Composiciones de escherichia coli y sus metodos
CN111588847B (zh) * 2020-05-18 2023-05-26 广州中医药大学(广州中医药研究院) 一种含有单磷酸化的脂质a与糖抗原的缀合物及其制备方法和应用
US20230250142A1 (en) 2020-06-12 2023-08-10 Glaxosmithkline Biologicals Sa Dock tag system
WO2022035816A1 (en) 2020-08-10 2022-02-17 Inventprise, Llc Multivalent pneumococcal glycoconjugate vaccines containing emerging serotype 24f
IL302362A (en) 2020-10-27 2023-06-01 Pfizer ESCHERICHIA COLI preparations and their methods
US12138302B2 (en) 2020-10-27 2024-11-12 Pfizer Inc. Escherichia coli compositions and methods thereof
CA3200602A1 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Pfizer Inc. Immunogenic compositions for use in pneumococcal vaccines
CA3200968A1 (en) 2020-11-10 2022-05-19 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
US12357681B2 (en) 2020-12-23 2025-07-15 Pfizer Inc. E. coli FimH mutants and uses thereof
WO2022178196A1 (en) 2021-02-19 2022-08-25 Sanofi Pasteur Inc. Meningococcal b recombinant vaccine
EP4294433A1 (en) 2021-02-22 2023-12-27 GlaxoSmithKline Biologicals SA Immunogenic composition, use and methods
EP4070814A1 (en) 2021-04-07 2022-10-12 Lama France Sars-cov-2 polypeptides and uses thereof
PE20240090A1 (es) 2021-05-28 2024-01-16 Pfizer Composiciones inmunogenas que comprenden antigenos de sacarido capsular conjugados y sus usos
EP4346893A2 (en) 2021-05-28 2024-04-10 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
EP4433080A1 (en) 2021-11-18 2024-09-25 Matrivax, Inc. Immunogenic fusion protein compositions and methods of use thereof
CA3247998A1 (en) 2022-01-13 2023-07-20 Pfizer Inc. Immunogenic compositions based on conjugated capsular saccharidic antigens and their uses
US20250163484A1 (en) 2022-02-25 2025-05-22 Pfizer Inc. Methods for Incorporating Azido Groups in Bacterial Capsular Polysaccharides
CN119522232A (zh) 2022-03-31 2025-02-25 恩特姆生物科学公司 用于预防和治疗癌症的抗原肽
AU2023268745A1 (en) 2022-05-11 2024-11-07 Pfizer Inc. Process for producing of vaccine formulations with preservatives
WO2024110827A1 (en) 2022-11-21 2024-05-30 Pfizer Inc. Methods for preparing conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
KR20250107930A (ko) 2022-11-22 2025-07-14 화이자 인코포레이티드 접합된 피막 사카라이드 항원을 포함하는 면역원성 조성물 및 그의 용도
CN120513083A (zh) 2022-12-01 2025-08-19 辉瑞大药厂 肺炎链球菌缀合物疫苗制剂
EP4661911A1 (en) 2023-02-10 2025-12-17 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
WO2024201324A2 (en) 2023-03-30 2024-10-03 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
KR20250169621A (ko) 2023-04-14 2025-12-03 화이자 인코포레이티드 접합된 피막 사카라이드 항원을 포함하는 면역원성 조성물 및 그의 용도
WO2024224266A1 (en) 2023-04-24 2024-10-31 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
WO2025109417A1 (en) 2023-11-21 2025-05-30 Panacea Biotec Limited Immunogenic composition of haemophilus influenzae conjugated to protein d
WO2025133971A1 (en) 2023-12-23 2025-06-26 Pfizer Inc. Improved methods for producing bacterial capsular saccharide glycoconjugates
WO2025186705A2 (en) 2024-03-06 2025-09-12 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
WO2025191415A1 (en) 2024-03-11 2025-09-18 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated escherichia coli saccharides and uses thereof
WO2025219904A1 (en) 2024-04-19 2025-10-23 Pfizer Inc. Improved methods for producing glycoconjugates by reductive amination in aprotic solvent
CN120404993B (zh) * 2025-07-03 2025-10-03 成都迈科康生物科技有限公司 一种检测样本中mpl的方法及其相关应用

Family Cites Families (58)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4235877A (en) 1979-06-27 1980-11-25 Merck & Co., Inc. Liposome particle containing viral or bacterial antigenic subunit
US4372945A (en) 1979-11-13 1983-02-08 Likhite Vilas V Antigen compounds
IL61904A (en) 1981-01-13 1985-07-31 Yeda Res & Dev Synthetic vaccine against influenza virus infections comprising a synthetic peptide and process for producing same
BE889979A (fr) 1981-08-14 1982-02-15 Smith Kline Rit Procede de preparation de polysaccharides bacteriens capsulaires antigeniques purifies, produits obtenus et leur utilisation
US5360897A (en) * 1981-08-31 1994-11-01 The University Of Rochester Immunogenic conjugates of streptococcus pneumonial capsular polymer and toxin or in toxiad
US4761283A (en) * 1983-07-05 1988-08-02 The University Of Rochester Immunogenic conjugates
US4882317A (en) * 1984-05-10 1989-11-21 Merck & Co., Inc. Covalently-modified bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers and methods of preparing such polysaccharides and conjugataes and of confirming covalency
US5173294A (en) 1986-11-18 1992-12-22 Research Foundation Of State University Of New York Dna probe for the identification of haemophilus influenzae
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
CA2005704C (en) * 1988-12-16 2003-02-11 James C. Paton Pneumolysin mutants and pneumococcal vaccines made therefrom
SE466259B (sv) 1990-05-31 1992-01-20 Arne Forsgren Protein d - ett igd-bindande protein fraan haemophilus influenzae, samt anvaendning av detta foer analys, vacciner och uppreningsaendamaal
NZ239643A (en) * 1990-09-17 1996-05-28 North American Vaccine Inc Vaccine containing bacterial polysaccharide protein conjugate and adjuvant (c-nd-che-a-co-b-r) with a long chain alkyl group.
CA2059692C (en) * 1991-01-28 2004-11-16 Peter J. Kniskern Pneumoccoccal polysaccharide conjugate vaccine
US5476929A (en) 1991-02-15 1995-12-19 Uab Research Foundation Structural gene of pneumococcal protein
US6592876B1 (en) 1993-04-20 2003-07-15 Uab Research Foundation Pneumococcal genes, portions thereof, expression products therefrom, and uses of such genes, portions and products
US5552146A (en) 1991-08-15 1996-09-03 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions relating to useful antigens of Moraxella catarrhalis
NZ253137A (en) 1992-06-25 1996-08-27 Smithkline Beecham Biolog Vaccine comprising antigen and/or antigenic composition, qs21 (quillaja saponaria molina extract) and 3 de-o-acylated monophosphoryl lipid a.
WO1994006465A1 (en) * 1992-09-16 1994-03-31 The University Of Tennessee Research Corporation Antigen of hybrid m protein and carrier for group a streptococcal vaccine
US5776468A (en) 1993-03-23 1998-07-07 Smithkline Beecham Biologicals (S.A.) Vaccine compositions containing 3-0 deacylated monophosphoryl lipid A
EP1300156A3 (en) 1993-05-18 2003-05-07 The Ohio State University Research Foundation Otitis media vaccine
JP3828145B2 (ja) 1993-09-22 2006-10-04 ヘンリー エム．ジャクソン ファウンデイション フォー ザ アドバンスメント オブ ミリタリー メディスン 免疫原性構成物の製造のための新規シアン化試薬を使った可溶性炭水化物の活性化方法
GB9326253D0 (en) 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
US5866135A (en) * 1994-04-21 1999-02-02 North American Vaccine, Inc. Group A streptococcal polysaccharide immunogenic compositions and methods
JP3468773B2 (ja) 1994-07-15 2003-11-17 ザ ユニバーシティ オブ アイオワ リサーチ ファウンデーション 免疫調節オリゴヌクレオチド
US5565204A (en) * 1994-08-24 1996-10-15 American Cyanamid Company Pneumococcal polysaccharide-recombinant pneumolysin conjugate vaccines for immunization against pneumococcal infections
US5681570A (en) * 1995-01-12 1997-10-28 Connaught Laboratories Limited Immunogenic conjugate molecules
EP0824360A1 (en) * 1995-04-17 1998-02-25 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Induction and enhancement of the immune response to polysaccharides with bacterial lipoproteins
UA56132C2 (uk) * 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини
US6440425B1 (en) 1995-05-01 2002-08-27 Aventis Pasteur Limited High molecular weight major outer membrane protein of moraxella
US5843464A (en) 1995-06-02 1998-12-01 The Ohio State University Synthetic chimeric fimbrin peptides
KR19990022742A (ko) 1995-06-07 1999-03-25 샤르레 아. 테시에르 스트렙토코커스 속 유래의 hsp70 계열의 쇼크 단백질
US5736533A (en) * 1995-06-07 1998-04-07 Neose Technologies, Inc. Bacterial inhibition with an oligosaccharide compound
ATE205724T1 (de) 1995-06-07 2001-10-15 Smithkline Beecham Biolog Vakzine mit einem polysaccharide antigen- trägerprotein konjugat und freien trägerprotein
GB9513074D0 (en) 1995-06-27 1995-08-30 Cortecs Ltd Novel anigen
US6290970B1 (en) 1995-10-11 2001-09-18 Aventis Pasteur Limited Transferrin receptor protein of Moraxella
US6090576A (en) 1996-03-08 2000-07-18 Connaught Laboratories Limited DNA encoding a transferrin receptor of Moraxella
SE9601158D0 (sv) 1996-03-26 1996-03-26 Stefan Svenson Method of producing immunogenic products and vaccines
DE69735715T2 (de) 1996-05-01 2007-03-29 The Rockefeller University Cholin-bindendes Protein, welches als gegen Pneumokokken gerichtetes Vakzin verwendet wird
US6245335B1 (en) * 1996-05-01 2001-06-12 The Rockefeller University Choline binding proteins for anti-pneumococcal vaccines
US7341727B1 (en) 1996-05-03 2008-03-11 Emergent Product Development Gaithersburg Inc. M. catarrhalis outer membrane protein-106 polypeptide, methods of eliciting an immune response comprising same
JPH102001A (ja) * 1996-06-15 1998-01-06 Okajima Kogyo Kk グレーチング
US5882896A (en) 1996-09-24 1999-03-16 Smithkline Beecham Corporation M protein
US5882871A (en) 1996-09-24 1999-03-16 Smithkline Beecham Corporation Saliva binding protein
FR2763244B1 (fr) * 1997-05-14 2003-08-01 Pasteur Merieux Serums Vacc Composition vaccinale multivalente a porteur mixte
ATE380867T1 (de) 1997-06-03 2007-12-15 Sanofi Pasteur Ltd Lactoferrinrezeptorgen von moraxella
EP0998557A2 (en) 1997-07-21 2000-05-10 North American Vaccine, Inc. Modified immunogenic pneumolysin, compositions and their use as vaccines
US6224880B1 (en) * 1997-09-24 2001-05-01 Merck & Co., Inc. Immunization against Streptococcus pneumoniae using conjugated and unconjugated pneumoccocal polysaccharide vaccines
GB9727262D0 (en) * 1997-12-24 1998-02-25 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
US20050031638A1 (en) * 1997-12-24 2005-02-10 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Vaccine
US6709658B1 (en) * 1998-02-12 2004-03-23 Wyeth Holdings Corporation Pneumococcal vaccines formulated with interleukin-12
KR100794394B1 (ko) 1998-04-07 2008-01-15 메디뮨 인코포레이티드 백신용 폐렴 구균의 콜린 결합성 단백질의 유도체
GB9812613D0 (en) 1998-06-11 1998-08-12 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
WO2000010599A2 (en) 1998-08-19 2000-03-02 North American Vaccine, Inc. IMMUNOGENIC β-PROPIONAMIDO-LINKED POLYSACCHARIDE PROTEIN CONJUGATE USEFUL AS A VACCINE PRODUCED USING AN N-ACRYLOYLATED POLYSACCHARIDE
JP4689044B2 (ja) * 1998-12-21 2011-05-25 メディミューン，インコーポレーテッド ワクチン用の肺炎連鎖球菌タンパク質と免疫原断片
DE122009000054I1 (de) * 1999-03-19 2009-12-31 Glaxosmithkline Biolog Sa Impfstoff gegen bakterielle antigene
GB9909077D0 (en) * 1999-04-20 1999-06-16 Smithkline Beecham Biolog Novel compositions
GB0022742D0 (en) * 2000-09-15 2000-11-01 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
CN201252175Y (zh) * 2008-08-04 2009-06-03 富士康(昆山)电脑接插件有限公司 线缆连接器组件

Also Published As

Publication number Publication date
DE60038166D1 (de) 2008-04-10
KR20020000549A (ko) 2002-01-05
NO20014323L (no) 2001-11-14
US20150079125A1 (en) 2015-03-19
LU91652I9 (hu) 2019-01-03
AU750788B2 (en) 2002-07-25
US9168313B2 (en) 2015-10-27
CY1107390T1 (el) 2010-07-28
CY2009014I1 (el) 2010-07-28
CA2366314A1 (en) 2000-09-28
LU91652I2 (fr) 2010-10-13
CZ303653B6 (cs) 2013-01-30
TWI286938B (en) 2007-09-21
IL145044A (en) 2007-03-08
SI1163000T1 (sl) 2008-06-30
CZ20013380A3 (cs) 2002-03-13
DK1163000T3 (da) 2008-04-28
AR022963A1 (es) 2002-09-04
NL300415I2 (hu) 2016-12-13
DE60032120T2 (de) 2007-09-20
CN1391481A (zh) 2003-01-15
TR200102739T2 (tr) 2001-12-21
ES2275499T3 (es) 2007-06-16
NZ513841A (en) 2001-09-28
US8926985B2 (en) 2015-01-06
CZ301445B6 (cs) 2010-03-03
DE122009000054I1 (de) 2009-12-31
US20060093626A1 (en) 2006-05-04
KR20020000785A (ko) 2002-01-05
MXPA01009452A (es) 2002-08-06
EP1162998A2 (en) 2001-12-19
HUS1500040I1 (hu) 2018-05-28
AU3430700A (en) 2000-10-09
MY125202A (en) 2006-07-31
NO330532B1 (no) 2011-05-09
WO2000056360A3 (en) 2001-01-25
PL204890B1 (pl) 2010-02-26
ES2339737T3 (es) 2010-05-25
CY1107561T1 (el) 2013-03-13
IL145043A0 (en) 2002-06-30
CZ20013378A3 (cs) 2002-03-13
CN1351503A (zh) 2002-05-29
EP1162999B1 (en) 2006-11-29
HU228499B1 (en) 2013-03-28
WO2000056360A2 (en) 2000-09-28
NO2011014I1 (no) 2011-09-19
US20060002961A1 (en) 2006-01-05
EP1880735A2 (en) 2008-01-23
JP2002539273A (ja) 2002-11-19
BRPI0009163B8 (pt) 2021-05-25
ATE387214T1 (de) 2008-03-15
TWI281403B (en) 2007-05-21
NZ513842A (en) 2004-05-28
CN1192798C (zh) 2005-03-16
EP2277535A2 (en) 2011-01-26
AU3291900A (en) 2000-10-09
DE60032120D1 (de) 2007-01-11
CA2366152A1 (en) 2000-09-28
CN100339130C (zh) 2007-09-26
BE1025464I2 (hu) 2019-03-06
US20050031646A1 (en) 2005-02-10
NL300415I1 (nl) 2009-12-01
WO2000056359A3 (en) 2001-02-01
EP2277535A3 (en) 2011-03-09
AR022965A1 (es) 2002-09-04
SI1162999T1 (sl) 2007-04-30
BR0009166A (pt) 2001-12-26
PL355264A1 (en) 2004-04-05
US20030147922A1 (en) 2003-08-07
EP1162999A2 (en) 2001-12-19
NO20014323D0 (no) 2001-09-05
HK1043731B (en) 2009-01-23
BR0009154A (pt) 2001-12-26
NO20014322D0 (no) 2001-09-05
AU750762B2 (en) 2002-07-25
TR200102735T2 (tr) 2002-04-22
IL145044A0 (en) 2002-06-30
JP4846906B2 (ja) 2011-12-28
CZ20013379A3 (cs) 2002-03-13
JP2002540074A (ja) 2002-11-26
NZ513840A (en) 2004-02-27
HUP0200664A2 (en) 2002-06-29
NO20014325L (no) 2001-11-14
HK1043728A1 (en) 2002-09-27
BR0009163A (pt) 2001-12-26
MY125387A (en) 2006-07-31
NO2011014I2 (no) 2011-08-30
PL355180A1 (en) 2004-04-05
EP1880735A3 (en) 2008-03-12
PT1163000E (pt) 2008-03-20
US20100291138A1 (en) 2010-11-18
CY2009014I2 (el) 2010-07-28
PL355178A1 (en) 2004-04-05
IL145045A0 (en) 2002-06-30
FR10C0008I2 (fr) 2012-10-26
DE60043930D1 (de) 2010-04-15
JP5551579B2 (ja) 2014-07-16
DK1162999T3 (da) 2007-03-26
AR022964A1 (es) 2002-09-04
US20100119544A1 (en) 2010-05-13
HUP0200373A2 (en) 2002-06-29
EP1776962A1 (en) 2007-04-25
KR20020001785A (ko) 2002-01-09
WO2000056359A2 (en) 2000-09-28
US20110217329A1 (en) 2011-09-08
TWI235064B (en) 2005-07-01
JP2011057713A (ja) 2011-03-24
NO330736B1 (no) 2011-06-27
WO2000056358A2 (en) 2000-09-28
PL203917B1 (pl) 2009-11-30
KR100798212B1 (ko) 2008-01-24
IL145043A (en) 2007-06-17
CN1191852C (zh) 2005-03-09
HUP0200367A2 (en) 2002-05-29
ATE346608T1 (de) 2006-12-15
HK1043731A1 (en) 2002-09-27
EP1162998B1 (en) 2010-03-03
NO20014325D0 (no) 2001-09-05
FR10C0008I1 (fr) 2010-03-26
DE60038166T2 (de) 2009-03-12
NO20014322L (no) 2001-11-14
BRPI0009163B1 (pt) 2019-04-09
TR200102736T2 (tr) 2002-04-22
AU750913B2 (en) 2002-08-01
ATE459373T1 (de) 2010-03-15
CA2365296A1 (en) 2000-09-28
HK1043730A1 (zh) 2002-09-27
PT1162999E (pt) 2007-02-28
AU3813600A (en) 2000-10-09
CN1351501A (zh) 2002-05-29
WO2000056358A3 (en) 2001-01-04
CA2366314C (en) 2012-01-10
JP2002540075A (ja) 2002-11-26
HK1043728B (en) 2007-06-22
EP1163000B1 (en) 2008-02-27
KR100642044B1 (ko) 2006-11-10
EP1163000A2 (en) 2001-12-19
ES2300255T3 (es) 2008-06-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU229968B1 (hu) Sztreptokokkusz oltóanyag
ES2385100T3 (es) Composición de vacuna multivalente con dosis reducida de Haemophilus influenzae de tipo B
RU2721128C2 (ru) Иммуногенные композиции, содержащие конъюгированные антигены капсульного сахарида, наборы, содержащие эти композиции, и их применения
ES2384065T3 (es) Composición de vacuna multivalente
JP7074793B2 (ja) 髄膜炎菌ワクチン
ES2608048T3 (es) Vacunas polipeptídicas para protección amplia contra linajes meningocócicos hipervirulentos
Ellis Vaccines: New approaches to immunological problems
EA012506B1 (ru) Иммуногенная композиция
JP2012512240A (ja) ヘモグロビン受容体を含む髄膜炎菌ワクチン
JP2024507828A (ja) Ｂ群髄膜炎菌組換えワクチン
ZA200107638B (en) Vaccine.
ZA200300755B (en) Multivalent vaccine composition.
HK1055244B (en) Multivalent vaccine composition
HK1055244C (en) Multivalent vaccine composition
HK1114012A (en) Vaccine
BRPI0017607B1 (pt) Método para a produção de uma composição imunogênica

Legal Events

Date Code Title Description
HC9A Change of name, address

Owner name: GLAXOSMITHKLINE BIOLOGICALS S.A., BE

Free format text: FORMER OWNER(S): SMITHKLINE BEECHAM BIOLOGICALS S.A., BE

AA1S Information on application for a supplementary protection certificate

Free format text: PRODUCT NAME: VACCINE COMPRISING A PLURALITY OF PNEUMOCOCCAL POLYSACCHARIDE CONJUGATE ANTIGENS WHICH CONSIST OF PNEUMOCOCCAL POLYSACCHARIDE ANTIGENS CONJUGATED TO PROTEIN D FROM HAEMOPHILUS INFLUENZAE; REGISTRATION NO/DATE: EU/1/09/508 20090330

Spc suppl protection certif: S1500040

Filing date: 20150714

Expiry date: 20200317

FG4S Grant of supplementary protection certificate

Spc suppl protection certif: S1500040

Filing date: 20150714

Expiry date: 20200317

Extension date: 20240331