HU203827B - Process for conserving transplantable, in vitro cultivated epithelium shives - Google Patents
Process for conserving transplantable, in vitro cultivated epithelium shives Download PDFInfo
- Publication number
- HU203827B HU203827B HU884206A HU420688A HU203827B HU 203827 B HU203827 B HU 203827B HU 884206 A HU884206 A HU 884206A HU 420688 A HU420688 A HU 420688A HU 203827 B HU203827 B HU 203827B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- epithelial
- medium
- plates
- minutes
- cultured
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 13
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims description 9
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 title description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims abstract description 17
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 8
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 claims description 7
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 5
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 claims description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 claims description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 claims description 2
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 2
- AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N Thyrolar Chemical compound IC1=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC=C(O)C(I)=C1 AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims description 2
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 claims description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 claims description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 claims description 2
- 229940035722 triiodothyronine Drugs 0.000 claims description 2
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 claims description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 claims 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 abstract description 6
- 238000007710 freezing Methods 0.000 abstract description 5
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 7
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 6
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 6
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 4
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 4
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 3
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002338 cryopreservative effect Effects 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 238000002316 cosmetic surgery Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000000635 electron micrograph Methods 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005175 epidermal keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005081 epithelial layer Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000036074 healthy skin Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 235000019271 petrolatum Nutrition 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000002278 reconstructive surgery Methods 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 229940099259 vaseline Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/10—Preservation of living parts
- A01N1/16—Physical preservation processes
- A01N1/162—Temperature processes, e.g. following predefined temperature changes over time
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/10—Preservation of living parts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/10—Preservation of living parts
- A01N1/12—Chemical aspects of preservation
- A01N1/122—Preservation or perfusion media
- A01N1/125—Freeze protecting agents, e.g. cryoprotectants or osmolarity regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
- A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
- A61F2/02—Prostheses implantable into the body
- A61F2/10—Hair or skin implants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
- A61L27/60—Materials for use in artificial skin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Botany (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Description
A találmány tárgya sejtszövetek kritológiai konzerválása, közelebbről eljárás sejttenyésztéssel előállított epitélium-lemezkék hűtéssel történő kozerválására.
Annak ellenére, hogy a közelmúltban tapasztalható haladás az égett szövetek kezelésében (olyan szövetek, amelyekre jellemző, hogy elegendő mennyiségű fehérje denaturálődik ahhoz, hogy a sejtben sérülést vagy elhalást okozzon), az égési sérültek halálozási aránya még most is elfogadhatatlanul magas. A halálozási szint természetesen függ a beteg életkorától és a megégett testfelület százalékától. A halálozási arány a legmagasabb azokban az esetekben, amelyekben a testfelület 50-60%-a, vagy ennél nagyobb része harmadfokú égést szenved (vagyis olyan égést, amelynél a bőr teljes vastagságában elpusztul). Ezekben az esetekben azon felül, hogy a súlyos kardiovaszkuláris sokk miatt azonnali problémák is jelentkeznek, valamint fenyeget, ha nem is azonnal, a szepszis vagy a hidro-elektrolitikus gátlás, egy másik, bár valamelyest késletetett probléma a nagy testfelületen tapasztalható, bőr fedésének hiánya. Az ilyen hiányzó fedéssel vagy nyitott felületekkel az a nehézség, hogy ezen nem kezdenek el spontán módon helyreállni, mivel ezek a teljes vastagságukon keresztül elpusztultak vagy károsodtak.
Amikor a normális állapotban zárt epitélium-réteg megsérül, akkor egy krónikus patológiás körülmény keletkezik, amely a fentebb részletezett infekciós és metabolikus komplikációkkal együtt folyamatosan rontja a páciens helyi és általános állapotát. Ezeknek a problémáknak az együttes fellépése miatt az égett áldozat gyakran meghal.
Ebből nyilvánvaló, hogy amikor túl vannak a kezelés elsősegélynyújtó fázisán, akkor a fő orvosi problémát az jelenti, hogy a bőrhiányt a lehető leggyorsabban és leghatékonyabban pótolják. A hagyományosan elfogadtott orvosi gyakorlat szerint a sérül felületeket úgy fedik be, hogy egészséges, égést nem szenvedett területkről elvett, vastagságukban hasított szövetdarabokat (aztotranszplantátumokat) ültetnek át. Azonban, ha az égett felület meghaladja például a 6070%-ot, akkor általában nincs elegendő megfelelő donorszövet a transzplantációhoz. Ezen felül az autotranszplantátum donor helyén magán is pótlólagos felület keletkezik, ahol hiányzik a tökéletes bőrdedés. Ehhez a hátrányhoz járul még az a tény is, hogy az autotranszplantátum donor hely szintén hajlamos arra, hogy lassan gyógyuljon és így kóros gyógyult helyek maradhatnak vissza.
Orvosilag szintén elfogadott az a módszer, hogy a bőrhiány pótlására homológ bőrét, liofilizált heterológ bőrt (például sertésbőr), szintetikus, mesterséges bőrt és hasonlókat ültetnek át. Ezek a pótlóanyagok azonban, mivel allogének, elhalnak és spontán leválnak 1-6 hónapon belül, és ezeket adott esetben autológ szövetekkel kell helyettesíteni, tehát legjobb esetben is csak átmeneti megoldást jelentenek.
A közelmúltban a 4 016 036, a 4 304 866 és a 4 456 657 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokból vált ismertté az a módszer, amellyel bőr keratinocitákból nyert humán epitél-filmet lehet te2 nyészteni. Ezek a filmek természetesen autológok lehetnek, és ezért úgy lehet velük égett felületeket pótolni, hogy a későbbiekben sem töködnek ki és nem válnak el elhalás után. Ezekben az amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokban olyan módszereket ismertetnek, amelyek egészséges donorfelíiletről történő kis darabok (2-3 cm2-esek) eltávolításán alapulnak. A donor szövet felhasználásával kapott hámsejt szuszpenziót azután tenyésztik és a primer kultúra többszöri ámításával megnövelik. Amikor a másodlagos és a harmadlagos kultúrák egybefolyóvá válnak, akkor többrétegű epitélium-lemezkéket nyerhetünk ki.
Ezáltal néhány jelentős probléma megoldható, így az a gond, hogy a súlyosan égett beteg bőrén kevés az egészséges elvehető bőr, ezenkívül nem szükséges a költséges sertés, hulla vagy mesterséges bőr igénybevétele, amelyek nemcsak költségesek, de nem is állnak rögtön rendelkezésre, és amelyek alkalmazását az immunreakciók miatt egyébként is nagyon szigorú szabályok kötik.
A fent említett módszerekkel előállított keratinocita kultúrák azonban csak 3-4 hét alatt jutnak olyan megnővekedett stádiumba, hogy a filmlemezek kinyerhetőkké válnak. Más szóval ez azt jelenti, hogy az égési sérülést szenvedő beteg megégett felületei az első 3-4 hétben védelem nélkül maradnak. Természetesen ez a kezdeti periódus a legkritikusabb, ez alatt az idő alatt volna az egészséges bőr átültetése a legjótékonyabb hatású.
Ezenkívül a fenti amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokban ismertetett epitélium-lemezkéket néhány órán belül az elkészülésük után fel kellett használni, mivel nem volt számukra megfelelő konzerválás! módszer, amelynek segítségével a megnövelt epidermisz távolabbi felhasználási helyekre szállítható lett volna. Az irodalomból több kísérlet is ismertebb bőrminták hűtéssel való konzerválására. Lásd például May és munkatársai: „Cryopreservation of Skin Using an Insulated Heat Sínk Box Stored at -70 ’C”, Cryobiology, 22, 205-214 (1984); May és munkatársai: „Recent Developments in skin Banking and the Clinical Use of Cryopreserved Skin, 73(4), J. Med. Assoc. Ga., 75,233-236 (1984); Yang és munkatársai: „Growth of humán Mammary Epithelial Cells on Collagen Cell Surfaces”, Cancer Research, 41 (10), 4093-4100 (1981); Biagini és munkatársai: „Skin Storage in Liquid Nitrogén, An Ultrastructural Investigation”, Jomal of Cutaneous Pathology, 6,5-17 (1979); Tylor: „Cryopreservation of Skin: Discussion and comments”, Cryobiology 3 (2) (1966); Baxter Proceedings, 17 (6) 4, 112-120 (1985). Ezeken az irodalmi helyeken és egyéb utalásokban is az található, hogy a fagyasztott hámszövet sejtjeinek egy lényeges részre felengedés után képes a folytatólagos metabolizmusra. Azonban azoknak az epitélium-lemezkéknek, amelyeket autotranszplantációhoz vagy allotranszplantációhoz, valamint égési sérülések kezelésére kívánunk felhasználni, viszonylag nagy mennyiségben kell olyan sejteket tartalmazniuk, amelyek a hűtéssel való kon-21
HU 203 827 Β zerválás után mitózisra képesek. Tehát a lemezek erre a felhasználásra csak akkor rendelkeznek megfelelő biológiai tulajdonságokkal, ha képsek mitózisra és rétegelt differenciálódásra. Ezt a képességet mind ezideig nem sikerűit kimutatni a fagyasztottt, majd felengedett, tenyésztett epitélium-mintákban.
A fagyasztás és felengedés hatását a sejtek pusztulására tenyésztett, egybefolyó lemezekben, amelyeknek nincs hordozó bőranyaguk, nem lehet biztonságosan előre megjósolni.
A lemezek olyan sejtekből állnak, amelyeket a felületi fehérjék kapcsolnak össze és mindössze néhány sejt vastagságúak. Nem differenciálódnak teljesen rétegelt epidermisz formájában. A fagyasztás és a felengedés sejten belüli és sejtek közötti jégkristály képződéssel jár, valamint expanzióval és kontrakcióval, és mindezek előre meg nem jósolható hatást gyakorolnak az egyedi tenyésztett sejtekre és a lemezkékre mint egészre. Előnyös volna tehát fagyasztott tenyésztett bőrtranszplantátumok előállítása, mivel ezeket tárolni és szállítani lehet. Ez igen előnyös volna azon betegek számára, akik több transzplantációt igényelnek, mivel ez jobban összehangolhatóvá tenné a tenyésztést és a sebészeti beavatkozást A feladat megoldásával lehetségessé válna az úgynevezett „szövetbankok” kialakítása vagy egyéb olyan raktárak létrehozása, amelyek allogén expandált epidermiszt tárolnak, és amelyek szükség esetén igénybevehetők.
A fagyott állapotban azonnal rendelkezésre álló tenyésztett allotranszplantátumoknak számos klinikai alkalmazásuk lehetséges. Például azt találtuk, hogy súlyos másodfolú égési sérülések sokkal gyorsabban gyógyulnak, ha tenyésztett allotranszplantátumokba ültetik át őket Korlátozott, a bőrt teljes vastagságában ért sérülések, amelyek kúnikailag harmadfokú égésekként jelentkezhetnek, újry hámosíthatók voltak a recipiens keratinocitáival, amelyek növekedését és valószínűleg migrációját erősen stimulálta a tenyésztett allotranszplantátum.
A tenyésztett allotranszplantátumok többnyire felhasználhatók voltak, a vastagságban hasított meshtranszplantációknál használt donor helyeknél. Az eredmény az ilyen felületek szép gyógyulása már 4 nap után is.
Az ismertetett eljárás sikeresen használható in vitro tenyésztett nyálkahártya hűtéssel történő konzerválására is. Ezzel kapcsolatban megállapítottuk, hogy tenyésztett nyálkahártyát in vitro elő lehet állítani egy foggyökérhúzó műszerrel vett biopsziálból kiindulva ugyanazzal a módszerrel, mint amelyet a bőr keratinicitából kiinduló epitélium-film előállítására írtak le. Azt is tapasztaltuk, hogy az in vitro tenyésztett nyálkahártya sikeresen transzplantálható olyan betegekbe, akiknek orális nyálkahártya-transzplantációra van szükségük.
A találmány szerint előállított tenyésztett, hűtéssel konzervált hámlemezkék felengedés után állandó autotranszplantátumként vagy ideiglenes, jól gyógyuló allotranszplantátumként használhatók fel. Ezek felhasználásával bizonyos bőrsérülések nagyon jól kezelhetők, A találmány körébe tartozik olyan eljárás kidolgozása is, amely lehetővé teszi a tenyésztett bőrlemezkék szövetbankokban való tárolását, elosztását és ezt követő megfelelő alkalmazását olyan formában, amely megkönnyíti az orvos munkáját és amely hatékonyan felhasználható égési sérülések, fekélyek és egyéb sérülések kezelésénél. Ugyancsak a találmány körébe tartozik olyan stabilizált epitélium tenyészetek tárolása, amelyek mitózisra és rétegelt differenciálódásra képesek, permanens autotranszplantáció vagy ideiglenes allotranszplantáció elvégzéséhez. A találmányunk lényegét a következő leírásban rajzzal és igénypontokban világítjuk meg.
A találmány tárgya eljárás in vitro tenyésztett egybefolyó hámsejtekből álló transzplantálható epitélium-lemezkék konzerválására, amely abból áll, hogy a) in vitro tenyésztett epitélium-lemezkéket szobahőmérsékleten, kriokonzerválószert tartalmazó közegben 2-15 percig inkubálunk, majd ii) ezeket az epitélium-lemezeket legalább -80 *C-on lefagyasztjuk, oly módon, hogy a 0 ’C környezetében legfeljebb -2 ’C/perc hűtési sebességgel hűtjük. Előnyösen a lemezkék tenyésztett, egybefolyó keradnocita sejtekből állnak, még előnyösebben epidermális keratinocitákből.
A találmány szerinti eljárás lehetővé teszi a konzervált, tenyésztett epidermisz szállítását és ezáltal a hűtéssel konzervált tenyésztett allogén epidermiszbank létrehozását
A találmány szerinti eljárásnál a tenyésztett hámlemezkéket, amelyet egyébként transzplantálásra alkalmasak, olyan közegben inkubáljuk, amely hagyományos tápanyagot és egy kriokonzerválószert tartalmaz.
A lemezkéket először égy előre meghatározott időtartamon keresztül inkubáljuk, majd ezután hűtjük le a végső kb. -100 ’C-os hőmérsékletre. Az alkalmazott hűtési grádiens a kezdeti fázisban lassabb, a végső fázisban gyorsabb.
Az eljárással egy szállításra alkalmas stabilizált epitélium-sebellátó készítmény állítható elő, amely egy fagyasztott, egybefolyó, tenyésztett hámsejtekből álló lemezből áll, amely egy nemtapadó hordozóra van felvive. Felengedés után, amikor egy seb felületére alkalmazzák, az előállított sejtlemezke metabolikus szempontból megfelelő, mitózisra és rétegelt differenciálódásra alkalmas, így permanens autotranszplantációhoz vagy ideiglenes allotranszplantációhoz használható. Ez azt jelenti, hogy ha a lemezkék a páciensből származó hámsejtekből készültek, akkor alkalmazásuk állandó autotranszplantációt eredményez. Az ilyen humán hámsejtekből tenyésztett lemezek más humán pácienseknél történő alkalmazás esetén kitűnő, metabolikus szempontból megfelelő, jól gyógyuló, ideiglenes allotranszplantációt tesznek lehetővé.
A találmány szerinti eljárással előállított lemezeket rajzon is bemutatjuk. Az la. ábrán egy tenyésztett, humán epitélium-lemezkét mutatunk be optikai mikrofotográfián, a találmány szerinti eljárással történő kezelés előtt, az lb. ábrán az la. ábrán bemutatott tenyésztett epttá3
HU 203 827 Β lium-lemezkét mutatjuk be a találmány szerinti eljárással végzett kezelés és felengedés utón optikai mikrofotográfián, a
2. ábrán az lb. ábrán szereplő tenyésztett epitélium-lemezke elektronmikroszkóppal készített felvételét mutatjuk be.
A találmány szerinti eljárásnál olyan epitéliumfilm lemezkéket és hasonlókat használtunk, amelyeket a 4 016 036, a 4 304 866 és a 4 456 657. számú korábban már említett - amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírások szerint lehet előállítani, ezeket a szabadalmakat tehát jelen találmányunk kifejezetten magában foglalja. A lemezeket először stabilizáljuk olymódon, hogy azokat egy kriokonzerválószert tartalmazó közegben, előnyösen Dulbecco-féle tópközeget tartalmazó közegben inkubáljuk.
Az intracelluláris kriokonzerválószer koncentrációja az eljárás sikere szempontjából lényeges tényező. Előnyösen 8-15 tömeg% kriokonzerválószert alkalmazunk, amely előnyösen glicerin vagy dimetil-szulfoxid. Még előnyösebben 10 tőmeg% glicerint alkalmazunk kriokonzerválószerként. A lemezeket szobahőmérsékleten inkubáljuk, előnyösen 15 percnél rövidebb ideig. Azt találtuk, hogy az inkubációs idő bizonyos szempontból kritikus, mivel megállapítottuk, hogy az ilyen időtartam meghatározó mértékben hat a sejt életképességére és az átültetett keratinociták telepképző képességére. A különböző hosszúságú inkubációs időkkel végzett kísérletek azt mutatták, hogy a keratinociták telepképző képessége lényegesen csökken mind nagyon rövid inkubációs idők (2 percnél rövidebb idők), mind hosszú inkubációs idők (15 percnél hosszabb idők) esetén, míg a telepképző képesség Nagymértékben megnövekszik 4-7 perc közötti idők esetón, és 5-7 perc között maximumot ér el. A kriókonzerválószerből ekvivalens intracelluláris koncentrációt tudunk bevinni a sejtekbe, ha nagyobb koncentrációkat és rövidebb inkubációs időtartalmokat alkalmazunk, vagy kisebb koncentrációkat hosszabb inkubációs idő mellett
Az inkubációs után az epitélium-lemezkéket hűtési eljárásnak vetjük alá, amely közben a hőmérsékletet szigorúan szabályozzuk olymódon, hogy a hőmérsékletesés az eljárás elején kisebb, mint az eljárás végén. A lassabb hűtési grádienst, lassabbat, mint -2 ’C/perc, előnyösen lassabbat, mint -1 ’C/perc, alkalmazzuk a 0 ’C közvetlen környezetében, vagyis közvetlenül 0 ’C felett, a 0 ’C áthaladása alatt és a 0 ’C alatt. A fagyáspont alatt a további hűtést már gyorsabban is lehet végezni. Előnyős, ha a hűtést felfüggesztjük néhány percre, mielőtt a sejtek a fagyáspont alá hűlnének. A hűtés végén a már fagyasztott lemezkéket előnyösen legalább -80 ’C hőmérsékletig, még előnyösebben legalább -100 *C hőmérsékletig hűtjük. Különösen előnyös a következő fagyasztást program:
kiindulási hőmérséklet: +25 ’C
-5 ’C/perc-3 ’C-ig szünet 4 percig,
-1 ’C/perc-7 ’C-ig -25 ’C/perc-40 ’C-ig +15 °C/perc-25 ’C-ig
-2 ’C/perc-40 ’C-ig
-3 ”C/perc-100 ’C-ig.
Ebben az állapotban a kezelt epitélium-lemezkéket legalább három hónapig lehet tárolni anélkül, hogy morfológiai és funkciós jellemzői lényegesen megváltoznának. Valójában a találmány szerinti kezeléssel előállított epitélium-lemezkék mind morfológiai, mind átültethetőségi szempontból összemérhetők azokkal, amelyeket egyébként friss tenyészetekből hűtéssel végzett konzerválás nélkül lehet előállítani.
A lemezkéket előnyösen egyik oldalukon egy nem tapadó, előzetesen lefagyasztott hordozóanyagra visszük. Vazelinnel kezelt steril hagyományos géz nagyon alkalmas erre a célra. A hordozóanyag megkönnyíti a műveleteket a törékeny lemezkékkel, mind fagyott állapotban, mind felengedés utón. A hordozó ezen kívül hagyományos, ideiglenes fedőanyagként is szolgál a lemez számára, a sérült bőrfelületre történt alkalmazás után. Az la. ábrán mutatjuk be a lemezkét a találmány szerinti eljárással végzett kezelés előtt, míg az lb. ábrán azt a lemezkét mutatjuk be, amelyet a találmány szerinti hűtési eljárással már kezeltünk, felengedés után. Az lb. ábrán bemutatott lemezke tehát kész arra, hogy transzplantátumként használjuk. Mind az la. mind az lb. ábrán szereplő lemezkéket fixáltuk, vágtuk és hematoxilin eozinnal festettük. A 2. ábrán az in vitro tenyésztett, 1. ábrán bemutatott, epidermális lemezke elektronmikrofotográfiáját mutatjuk be. Ezekből a mikrofotogiáfiákból nyilvánvalóan kitűnik, hogy a találmány szerinti eljárással jó eredmény érhető el mind az alsó réteg sejtkonzerválása, mind az intercelluláris szerkezet konzerválása szempontjából.
A kezelt lemezek felhasználásakor elegendő, ha azokat néhány percig 37 ’C-on inkubáljuk, majd fiziológiás sóoldattal vagy megfelelő tápközeggel mossuk.
Az égett felületek fedésén kívül a konzervált epidermisz lemezkék egyéb területeken is hatékonyan felhasználhatók, például onkológiai, plasztikai vagy rekonstruktív sebészetben. A konzervált, in vitro tenyésztett nyálkahártya szintén felhasználható a szájsebészetben.
A kővetkezőkben a találmány szerinti eljárás egyik előnyös megvalósítását mutatjuk be egy példában, ezzel azonban nem szándékozunk a találmány oltalmi körét korlátozni.
Példa
A keratinocita tenyészetet a fent említett amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírások szerint állítjuk elő. Közelebbről a 4 016 036 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint előállított egybefolyó, szekunder keratinocita tenyészetet használjuk, amelyet leválasztunk a tenyésztő üvegéből, vazelinnel bevont gézre visszük és ott fém érsebészeti csipesszel rögzítjük a 4 304 866 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokban ismertetett módszerrel.
Ezeket a tenyésztett szövetdarabokat ezután steril
HU 203 827 Β körülmények között 12 x 20-as steril poliészter^jolietilén/alumínium zacskókba tesszük át (a zacskók a Gambro S.A. 18, Rue de Calais, 75885 Paris cég termékei), egy zacskóba három transzplantátumot helyezünk, ezután 100 ml tápközeget adunk a zacskókba. A tápközeg összetétele a következő:
Dulbeco által módosított Eagle tápközeg 541%
Ham-féle F12 271%
Borjú magzati szérum (FCS) 91%
Glicerin 101%
Glutamin 4 mM
Adenin l,8xlO'4M
Inzulin 5 mcg/ml
Transzferrin 5 mcg/ml
Trijód-tironin 2 x 10”9 M
Hidrokortizon 0,4 mcg/ml
Epidermális növekedési faktor lOng/ml
Penicillin-sztreptomicin 50U/ml.
A zsákokat ezután termikusán lezárjuk és szobahőmérsékleten 5-7 percig inkubáljuk. A zacskókat ezután megfelelő konténerbe helyezzük és így tesszük egy alkalmas programozható fagyasztóládába (egy ilyen fagyasztóláda Programozható Hőmérsékletszabályozó PTC-300 néven ismeretes és kereskedelmi forgalomban is kapható a Planer Products Ltd. cégnél). A szövetdarabokat ezután a következő fagyasztást program szerint fagyasztjuk:
kiindulási hőmérséklet: +25 ’C
-5’C/perc+3’C-ig szünet 4 percig,
-1 ’C/jperc-7 ’C-ig -25 ’C/perc-40 ’C-ig +15 ‘C/perc-25 ’C-ig -2’C/perc-40’C-igés -3'C/perc-100’C-ig.
Amikor a végső hőmérsékletet, a -100 ’C-ot elérjük, a műanyag zacskókat megfelelő fémkonténerbe helyezzük, amelyet előzetesen -80 ’C hőmérsékletűre hűtöttünk legalább 2 órával korábban. A fémkonténert ezután gyorsan behelyezzük egy -80 ’C-os fagyasztóládába.
A fagyasztott epitélium-lemezkéket tartalmzó zacskókat hosszabb távolságra is él lehet szállítani, az egyedüli feltétel, hogy a hőmérsékletnövekedéseket el kell közben kerülni. A fagyasztott lemezéket -80 ’C-on legalább 3 hónapig lehet tárolni. Ez alatt az idő alatt megőrzik morfológiai és funkcionális jellemző tulajdonságaikat.
Amikor a fagyasztott filmeket fel kell használni, akkor a zacskókat kivesszük a fagyasztóládából, azonnal 37 ’C-os vízfürdőbe helyezzük és 10 percig ezen a hőmérsékleten tartjuk. A zacskókat ezután néhány másodpercre 70%-os etanolba merítjük. Ezután nyitjuk ki steril körülmények között a zacskókat, kivesszük az epitélium-lemezkéket, azokat steril edényekbe helyezzük és gondosan mossuk tápközeggel vagy fiziológiás sóoldattal és felhasználjuk. A felhasználás során a sebet hagyományos módon készítjük elő annak érdekében, hogy a felengedett lemezkék sejtjei számára az a közvetlen érintkezéshez megfelelő szubsztrátum legyen. A lemezkéket úgy alkalmazzuk, hogy azokat felület-a-felülethez érintkezésben a sérült felületre helyezzük, a hordozóanyagot tesszük kívülre, és ezután a lemezkéket a hordozóanyagon keresztül enyhén megnyomogatjuk, hogy az pontosan a sérült felület alakjában megfelelő legyen. Nagyobb felületek esetén több lemezkét alkalmazunk.
Az ismertetett eljárásban a szakember természetesen különféle módosításokat hajthat végre, az ilyen módosítások véleményünk szerint találmányunk oltalmi körébe tartoznak.
Claims (7)
1. Eljárás epitélium-lemezkék konzerválására, azzal jellemezve, hogy
i) in vitro tenyésztett epitélium-lemezkéket szobahőmérsékleten, kriokonzerválószert tartalmazó közegben 2-15 percig inkubálunk, majd ii) ezeket az epitólium-lemezeket legalább -80 ’C-on lefagyasztjuk, oly módon, hogy a 0 ’C környezetében legfeljebb -2 'Cfoerc hűtési sebességgel hűtjük.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy kriokionzefválószerként glicerint vagy dimetilszuífoxidot alkalmazunk.
3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 8-15 tömeg% kriokonzerválószert adagolunk a tápközeghez.
4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az inkubálást szobahőmérsékleten 4-7 percig végezzük.
5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal j el lemezve, hogy közegként az alábbi összetételű tápközeget alkalmazzuk:
Dulbecco által módosított Eagle tápközeg 541%
Ham-féle F12 271%
Borjú magzati szérum 91%
Glicerin 101%
Glutamin 4 mM
Adenin Ι,δχΙΟ4 M
Inzulin 5gg/ml
Transzferrin 5 pg/ml
Trijód-tironin 2xl0’9 M
Hidrokortizon 0,4 pg/ml
Epidermális növekedési faktor lOng/ml
Penicillin-sztreptomicin 50U/ml.
6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jel lemez ve, hogy a következő fagyasztást programot alkalmazunk:
Kiindulási hőmérséklet: +25 ’C
-5 ’C/perc+3 ’C-ig szünet 4 percig,
-1’C/perc-7 ’C-ig -25 ’C/perc-40 ’C-ig +15’C/perc-25’C-ig -2 ’C/perc-40 ’C-ig -3 ’C/perc-lOO’C-ig.
7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy epitélium tenyészetként keratinocita tenyészetet alkalmazunk.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT8721005A IT1207525B (it) | 1987-06-23 | 1987-06-23 | Metodo per la preservazione difogli trapiantabili di epitelio coltivato in vitro vitale. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT51848A HUT51848A (en) | 1990-06-28 |
| HU203827B true HU203827B (en) | 1991-10-28 |
Family
ID=11175297
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU884206A HU203827B (en) | 1987-06-23 | 1988-06-15 | Process for conserving transplantable, in vitro cultivated epithelium shives |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5298417A (hu) |
| EP (1) | EP0296475B1 (hu) |
| JP (1) | JP2644024B2 (hu) |
| KR (1) | KR960009482B1 (hu) |
| AR (1) | AR240061A1 (hu) |
| AT (1) | ATE79720T1 (hu) |
| AU (1) | AU618012B2 (hu) |
| BR (1) | BR8807104A (hu) |
| CA (1) | CA1330541C (hu) |
| DE (1) | DE3874019T2 (hu) |
| DK (1) | DK81789A (hu) |
| ES (1) | ES2034034T3 (hu) |
| FI (1) | FI94147C (hu) |
| GR (1) | GR3006069T3 (hu) |
| HU (1) | HU203827B (hu) |
| IE (1) | IE61449B1 (hu) |
| IL (1) | IL86806A (hu) |
| IN (1) | IN167396B (hu) |
| IT (1) | IT1207525B (hu) |
| MX (1) | MX11997A (hu) |
| NO (1) | NO177211C (hu) |
| OA (1) | OA09038A (hu) |
| PT (1) | PT87789B (hu) |
| WO (1) | WO1988010068A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA884455B (hu) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5482834A (en) * | 1982-05-17 | 1996-01-09 | Hahnemann University | Evaluation of nucleic acids in a biological sample hybridization in a solution of chaotrophic salt solubilized cells |
| US5171660A (en) * | 1989-04-26 | 1992-12-15 | Cryolife, Inc. | Process of revitalizing cells and tissue prior to cryopreservation |
| DE3941873A1 (de) * | 1989-12-19 | 1991-06-20 | Jakob Dr Bodziony | Hohlfaser mit der beschichtung von zellen, die mehrjaehrige implantation in arterien und venen ermoeglichen |
| US5100676A (en) * | 1990-02-02 | 1992-03-31 | Biosurface Technology, Inc. | Cool storage of cultured epithelial sheets |
| DE4012079C2 (de) * | 1990-04-14 | 1997-11-06 | Jakob Dr Bodziony | Implantierbare Austausch- und Diffusionskammer |
| US5145770A (en) * | 1990-06-04 | 1992-09-08 | Biosurface Technology, Inc. | Cryopreservation of cultured epithelial sheets |
| US5192312A (en) * | 1991-03-05 | 1993-03-09 | Colorado State University Research Foundation | Treated tissue for implantation and methods of treatment and use |
| US6126935A (en) * | 1991-11-20 | 2000-10-03 | N.V. Innogenetics S.A. | Pellets obtained from cell cultures of keratinocytes and their use in wound healing |
| US6585969B1 (en) | 1991-11-20 | 2003-07-01 | N. V. Innogenetics S.A. | Non-viable keratinocyte cell composition or lysate for promoting wound healing |
| JPH0646840A (ja) * | 1992-08-04 | 1994-02-22 | Nippon Zenyaku Kogyo Kk | 細胞凍結保存液 |
| IT1263023B (it) * | 1992-11-09 | 1996-07-23 | Biostruttura epitelio-supporto tubulare e metodo per la sua preparazione. | |
| IT1256621B (it) * | 1992-12-04 | 1995-12-12 | Soluzioni crioprotettrici | |
| US5891617A (en) * | 1993-09-15 | 1999-04-06 | Organogenesis Inc. | Cryopreservation of harvested skin and cultured skin or cornea equivalents by slow freezing |
| US5518878A (en) * | 1993-09-15 | 1996-05-21 | Organogenesis Inc. | Cryopreservation of cultured skin or cornea equivalents with agitation |
| DE69532976T2 (de) * | 1994-03-14 | 2005-05-04 | Cryolife, Inc. | Herstellungsverfahren von gewebe zur implantation |
| ES2165436T3 (es) * | 1994-11-09 | 2002-03-16 | Celadon Science Llc | Apositos para cicatrizacion de heridas y metodos para su conservacion. |
| US5689961A (en) | 1996-01-30 | 1997-11-25 | Organogenesis Inc. | Ice seeding apparatus for cryopreservation systems |
| US6541028B1 (en) | 1997-01-17 | 2003-04-01 | Celadon Science, Llc | Methods for promoting healing of corneal resurfacing wounds |
| US6713084B1 (en) * | 1997-01-17 | 2004-03-30 | Celadon Science, Llc | Methods for promoting healing of skin resurfacing wounds |
| CA2404007A1 (en) * | 2000-03-24 | 2002-09-23 | Menicon Co., Ltd. | Method for cyropreservation of tissue equivalent and cyropreserved tissue equivalent |
| JP2004520828A (ja) * | 2000-12-27 | 2004-07-15 | オーテック・インターナショナル，インコーポレイテッド | 凍結保存された複合生体構築物の製造方法および該方法から得られる製造物 |
| DE10151296A1 (de) * | 2001-10-17 | 2003-04-30 | Boehringer Ingelheim Pharma | Keratinozyten verwendbar als biologisch aktive Substanz bei der Behandlung von Wunden |
| CA2474968A1 (en) * | 2002-01-31 | 2003-08-07 | Asahi Techno Glass Corporation | Cryopreservation medium for primate embryo stem cells and cryopreservation method |
| WO2004034887A2 (en) * | 2002-10-18 | 2004-04-29 | The General Hospital Corporation | Compositions, solutions, and methods used for transplantation |
| US20070185238A1 (en) * | 2006-02-06 | 2007-08-09 | No-Burn Investments, Llc | Paint with mold inhibitor and insecticide |
| CA2644091C (en) * | 2008-10-20 | 2015-12-15 | University Of Guelph | Embryo culture media containing thyroid hormone |
| WO2013174769A1 (en) | 2012-05-25 | 2013-11-28 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Use of keratinocytes as a biologically active substance in the treatment of wounds, such as diabetic wounds, optionally in combination with a dpp-4 inhibitor |
| EP3207122B1 (en) | 2014-10-14 | 2019-05-08 | FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. | Generation of keratinocytes from pluripotent stem cells and maintenance of keratinocyte cultures |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR1395002A (fr) * | 1963-03-01 | 1965-04-09 | Union Carbide Corp | Procédé de conservation de cellules |
| US3943993A (en) * | 1974-05-03 | 1976-03-16 | Smith Kendall O | Low temperature storage of surface attached living cell cultures |
| US3940943A (en) | 1975-01-22 | 1976-03-02 | The Curators Of The University Of Missouri | Multistage freezing system for preservation of biological materials |
| US4016036A (en) * | 1975-11-14 | 1977-04-05 | Massachusetts Institute Of Technology | Process for serially culturing keratinocytes |
| DE2715887A1 (de) * | 1977-04-09 | 1978-10-12 | Ayguen Suerayya Tahsin Prof Dr | Verfahren zur herstellung und konservierung von human-zellkulturen aus menschlichen foeten sowie nach diesem verfahren hergestellte human-zellkulturen fuer die intravenoese oder intramuskulaere anwendung beim menschlichen koerper |
| US4456687A (en) * | 1978-11-16 | 1984-06-26 | President And Fellows Of Harvard College | Agents for promoting growth of epithelial cells |
| JPS55501130A (hu) * | 1978-12-26 | 1980-12-18 | ||
| JPS6029471B2 (ja) * | 1979-08-16 | 1985-07-10 | 日機装株式会社 | 肝細胞の凍結方法 |
| US4304866A (en) * | 1979-11-14 | 1981-12-08 | Massachusetts Institute Of Technology | Transplantable sheets of living keratinous tissue |
| FR2493662A1 (fr) * | 1980-11-05 | 1982-05-07 | Rhone Poulenc Ind | Substrats metallises pour circuits imprimes et leur procede de preparation |
| US4673649A (en) * | 1983-07-15 | 1987-06-16 | University Patents, Inc. | Process and defined medium for growth of human epidermal keratinocyte cells |
| CA2000181A1 (en) * | 1988-10-14 | 1990-04-14 | Chung-Faye Chao | Process for producing cultured epidermal sheet, product and method of use |
-
1987
- 1987-06-23 IT IT8721005A patent/IT1207525B/it active
-
1988
- 1988-06-15 JP JP63505845A patent/JP2644024B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-06-15 WO PCT/EP1988/000532 patent/WO1988010068A1/en not_active Ceased
- 1988-06-15 AT AT88109528T patent/ATE79720T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-06-15 EP EP88109528A patent/EP0296475B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-06-15 AU AU19957/88A patent/AU618012B2/en not_active Ceased
- 1988-06-15 ES ES198888109528T patent/ES2034034T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-06-15 DE DE8888109528T patent/DE3874019T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1988-06-15 BR BR888807104A patent/BR8807104A/pt not_active IP Right Cessation
- 1988-06-15 HU HU884206A patent/HU203827B/hu not_active IP Right Cessation
- 1988-06-20 IL IL86806A patent/IL86806A/xx not_active IP Right Cessation
- 1988-06-22 ZA ZA884455A patent/ZA884455B/xx unknown
- 1988-06-22 IE IE188988A patent/IE61449B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-06-22 MX MX1199788A patent/MX11997A/es unknown
- 1988-06-22 PT PT87789A patent/PT87789B/pt not_active IP Right Cessation
- 1988-06-22 IN IN427/MAS/88A patent/IN167396B/en unknown
- 1988-06-22 AR AR311199A patent/AR240061A1/es active
- 1988-06-22 CA CA000570101A patent/CA1330541C/en not_active Expired - Fee Related
-
1989
- 1989-02-16 OA OA59526A patent/OA09038A/xx unknown
- 1989-02-20 NO NO890715A patent/NO177211C/no unknown
- 1989-02-21 FI FI890821A patent/FI94147C/fi not_active IP Right Cessation
- 1989-02-22 KR KR89700318A patent/KR960009482B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1989-02-22 DK DK081789A patent/DK81789A/da not_active Application Discontinuation
-
1991
- 1991-11-25 US US07/799,752 patent/US5298417A/en not_active Expired - Fee Related
-
1992
- 1992-10-23 GR GR920402392T patent/GR3006069T3/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU203827B (en) | Process for conserving transplantable, in vitro cultivated epithelium shives | |
| JP2722134B2 (ja) | 培養上皮細胞シートの凍結保存 | |
| EP0564786B1 (en) | Method for processing and preserving collagen-based tissues for transplantation | |
| KR100469661B1 (ko) | 이식용 무세포 진피층 및 이의 제조방법 | |
| JP4204784B2 (ja) | 組織等価物の凍結保存方法および凍結保存された組織等価物 | |
| Vischjager et al. | Function of cryopreserved arterial allografts under immunosuppressive protection with cyclosporine A | |
| EP1389078A4 (en) | METHOD FOR THE PRODUCTION OF CRYCONSERVED COMPOSED LIVING CONSTRUCTS AND PRODUCTS PRODUCED FROM THEM | |
| Babin et al. | Survival of implanted irradiated cartilage | |
| JP2002503678A (ja) | コラーゲンベース組織の処理および保存方法 | |
| Takeishi et al. | Experimental study of cryopreserved allogeneic transfer of vessel: preliminary report | |
| JPH09110601A (ja) | 培養上皮細胞シートの凍結保存 | |
| JPH0723779A (ja) | 表皮細胞シートの凍結保存用液 | |
| KR100688443B1 (ko) | 세포성 인공조직의 장기보관을 위한 무혈청성 동결보존액및 이를 이용한 세포성 인공조직의 동결보존방법 | |
| CN101522890A (zh) | 组织来源细胞的冷冻保存方法 | |
| Wang et al. | Metabolic activity and functional evaluation of cryopreserved dermal equivalent | |
| Peled et al. | Prolonged skin graft preservation with keratinocyte culture medium | |
| Mericka et al. | 7.2 BIOLOGICAL SKIN COVER: BANKING AND APPLICATION | |
| Oranratnachai | Cryopreservation of Human Embryos | |
| Lawrence | Do we need an artificial skin? | |
| KR20130105227A (ko) | 모서리 부분이 경사 처리된 무세포 진피조직 이식체 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |