HU202112B

HU202112B - Process for producing medical compositions comprising substituted pyrimidine nucleotide as active ingredient

Info

Publication number: HU202112B
Application number: HU893367A
Authority: HU
Inventors: Saad George Rahim; Dorothy Jane Martin Purifoy
Original assignee: Wellcome Found
Priority date: 1986-12-15
Filing date: 1987-12-14
Publication date: 1991-02-28
Also published as: CS275398B2; PT86356B; NZ222898A; HU200932B; LV5273A3; GB8629892D0; FI941523L; CS916187A2; PH24104A; PL269462A1; JPS63165397A; PL158050B1; NO167576C; DK169991D0; EP0272065B1; PT86356A; NO167576B; PL160322B1; FI941523A7; DK169991A

Description

A találmány tárgya eljárás hatóanyagként 5szubsztituált pirimidin-nukleozidot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására.

A találmány szerint előállított gyógyszerkészítmények előnyösen alkalmazhatók herpes vírus fér- 5 tőzés kezelésére vagy megelőzésére.

ASNS vírusok közé tartozó herpes csoportbeliek okozzák a leggyakoribb vírusos megbetegedéseket.

Ebbe a csoportva tartozik a herpes simplex vírus (HSV), a varicella zoster (VZV), a cytomegalovirus 10 (CMV) és az Epstein-Barr vírus (EBV)·

A varicella zoster vírus okozza a bárányhimlőt és az övsömört. A bárányhimlő az immunitás nélküli gazdában kialakuló elsődleges betegség, amely gyermekeknél általában enyhe lefolyású és hólyagos ki- 15 ütés és láz jellemzi. Az övsömör a fenti betegség visszatérő forrná ja, amely korábban varicella zoster vírussal fertőzött felnőtteknél jelentkezik Az övsömör klinikai megnyivánulása az idegfájdalom és hólyagos bőrkiütés, amely féloldalasán és dermatomá- 20 lisan oszlik el. A gyulladás elterjedése bénuláshoz és görcsökhöz vezethet. Ha ez az agyhártyára is kiterjed, kóma jelentkezhet. Immunhiányos betegnél a VZV súlyos, akár halálos betegséget okozhat. A VZV súlyos következményekkel járhat továbbá 25 olyan betegeknél, amelyek átültetés után vagy rosszindulatú daganatképződés elleni kezelés miatt immunreakciót csökkentő gyógyszerkészítényeket szednek, valamint veszélyes komplikációkkal járhat AIDS betegeknél. 30

Más herpes vírusokhoz hasonlóan a vírus CMV fertőzés esetén is egy életen keresztül aszervezetben marad és az elsődleges fertőzést követően a vírus éveken keresztül lappanghat. A klinikai hatás a haláltól és súlyos betegségektől (kisfejűség, máj-lép- 35 megnagyobbodás, sárgaság, viselkedési zavarok) kezdve fejlődési visszamaradottságon, légzőszervi érzékenységen és fülfertőzésen keresztül a szimptómák teljes hiányáig terjed. AIDS betegknél a halál egyik elsődleges oka a CMV fertőzés, mivel a felnőtt 40 népesség mintegy 80%-a látens formában fertőzött és ez immunhiányos betegeknél aktiválódhat.

Az Epstein-Barr vírus (EBV) Pfeiffer-féle mirigylázt okoz, és kiváltó oka lehet még az orrgaratráknak, immunoplasztikus nyirokszövctdaganat- 45 nak, Burkítt-féle límf ómának és hajleukómának.

Kísérleteket végeztük herpes vírus fertőzés nukleozid analógokkal történő kezelésére. Intermedierként alkalmazható a 2’-dezoxi-5-etinil-uridin, amelynek szintézisét Barr és munkatársai: J. Chem. 50

Soc. Perkin Trans. 1,1263/1978/ ismerteti. Avegyület ín vitro vírus elleni hatását tehénhimlő és herpes simplex ellen vizsgálták (például Walker és munkatársai: NucleicAcid Rés., Special Pub. No. 4, 1978,1 601020, számú nagy-britanniai szabadalmi leírás), 55 de humán gyógyászatban hasznosítható hatást nem mutattak ki.

A86 305 297. számú európai szabadalmi bejelentésben a 2^,-dezoxí-5-etiníl-urldin és gyógyászatilag alkalmazható származékai felhasználását ismerte- 60 tik cytomegalovirus (CMV) vagy varicella zoster vírus (VZV) által okozott humán vírusos fertőzések kezelésére vagy megelőzésére.

Meglepő módon azt találtuk, hogy bizonyos, 5helyzetben telítetlen csoporttal szubsztituált piri- 65 midin-nukleozidok a gyógyszerteráplában előnyösen alkalmazhatók bizonyos vírusos fertőzések kezelésére. A vegyületek előnye, hogy in vitro sejttenyésztéses toxlcitásvizsgálatok szerint viszonylag alacsony toxlcitással rendelkeznek

Bizonyos 5-szubsztituált nukleozidok, így a 2’dezoxi-5-etínil-citidín, 2’-dezoxi-5-(l-propinll)uridin, 1 -(béta-D-arabÍno-furanozü)-5-etiníl-uracil, 1 -(béta-D-arabino-furanozil)-5-propinü-uracü, 1 -(béta-D-arabíno-furanozil)-5-etínü-citozin, amelyeka találmány értelmében VZV, CMV és EBV fertőzések kezelésére alkalmazhatók ismertek (J. Med. Chem., 26(5), 661-666 /1983/, J. Med. Chem., 26(9), 1252-1257 /1983/, Antimicrobial. Agents Chemother. 17(6), 1030-1031 /1980/,NucleicAcid Symp. Ser. 9,103-106 /1981/, Biochem. Parmacol. 32(4), 726-729/1983/) mint herped vírus elleni szerek azonban egy adott vegyület herpes családba tartozóvírus elleni potenciális hatása nem következtethető a csoportba tartozó másik vírussal végzett korábbi vizsgálatokból. így nem lehetséges annak a megjóslása, hogy egy olyan vegyület, amely bizonyos hatást mutat HSV ellen, azonos, vagy jobb hatást fog mutatni VZV, CMV és/vagy EBV ellen.

Az említett pirimidin-nukleozidok az (I) általános képlettel ábrázolhatok, a képletben

R * jelentése oxocsoport vagy iminocsoport,

R² jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport,

R⁴ jelentése hidrogénatom vagy hidroxücsoport, azzal a megszorítással, hogy

a) R* jelentése oxocsoport és R⁴ jelentése hidrogénatom, ha R² jelentése metilcsoport, vagy

b) R⁴ jelentése hidroxilcsoport, ha R^jelentése hidrogénatom és R¹ jelentése oxocsoport.

Különösen jelentős vírus elleni hatással, elsősorban VZV elleni hatással rendelkeznek a következő vegyületek

2’-dezoxi-5-(l-propinü)-citidín, l-(béta-D-arabino-furanozil)-5-propinil-citozi

n.

Jelentős vírus elleni hatással, elsősorban VZV és bizonyos esetekben CMV ésEBV elleni hatással rendelkeznek továbbá a következő vegyületek

2'-dezoxi-5-etínil-cítidin,

2’-dezoxi-5-( 1 -propinil)-urídm, l-(béta-D-arabmo-furanozíl)-5-etlnU-uracU, l-(béta-D-arabino-furanozü)-5-propíníl-uracü, l-(béta-D-arabino-furanozil)-5-etinil-citozin.

A hatóanyagok bármüyen ismert módon adagolhatók amely a kezelt beteg állapotának figyelembevételével alkalmazhatók. így adagolhatók orális, rektális, nazális, topikus (így bukkális vagy szublinguális), vaginális és parenterális (így szubkután, intramuszkuláris, intravénás, intradermális, intrapekális és cpiturális) úton.

A hatóanyag szükséges mennyisége egy sor faktortól, például a kezelt beteg állapotától függ, és ezek figyelembevételével szakember által könnyen meghatározható. A megadott indikációknál a hatékony dózis általában0,1-250mg/kg testtömeg, előnyösen

1-100 mg/kg testtömeg, elsősorban 5-30 mg/kg testtömeg naponta. Az optimális napi dózis mintegy 15 mg/kg testtömeg (ellenkező értelmű megjelölés hiányában a megadott dózis az alapmolekulára vonatkozik, só- és észter-származékok esetén a

-2HU202112B mennyiséget megfelelően növelni kell). A szükséges napi dózis kívánt esetben 2, 3, 4 vagy több részre osztva adagolható. Ezeket a részleteket dózisegység, például 1-100 mg, előnyösen 20-500 mg, elsősorban 100-400 mg hatóanyagot tartalmazó dózisegység formájában adagoljuk.

A találmány szerint előállított gyógyszerkészítmény legalább egy hatóanyagot és egy vagy több megfelelő hordozóanyagot és más gyógyszerészeti segédanyagot tartalmaz.

A készítményt adagolásra, így orális, rektális, nazális, toplkus (péládul bukkális vagy szublínguális), vaginálís vagy parenterális (például szubkután, intramuszkuláris, intravénás, intradermális, intratekális, és epidurális) adagolásra alkalmas formára hozzuk. A készítményt általában dózisegység formájában állítjuk elő, és az előállításhoz felhasználható bármely ismert gyógyszerészeti eljárás. Az eljárás legfontosabb lépése, hogy az egy vagy több segédanyagot tartalmazó hordozót a hatóanyaggal elegyítjük. Általában úgy járunk el, hogy a hatóanyagot alaposan elkeverjük a folyékony hordozóanyaggal vagy finoman eloszlatott szilárd hordozóanyaggal, és kívánt esetben a készítményt formáljuk.

Orális adagolásra alkalmas készítmény az előre meghatározott hatóanyag mennyiséget tartalmazó kapszula, ostya vagy tabletta, valamint por vagy granulátum, továbbá vizes vagy nemvizes folyadékban felvett oldat vagy szuszpenzió, valamint olaj-a-vízben vagy víz-az-olajban típusú emulzió. A hatóanyag alkalmazható végül pirula, elektuárium vagy paszta formájában.

A tablettát préseléssel vagy olavasztással állítjuk elő, amelyhez egy vagy több segédanyagot alkalmazunk. A préselt tablettához a szabadon folyó formában, így por vagy granulátum alakjában levő és kívánt esetben kötőanyagot, például povidont, zselatint vagy hidroxi-propil-metil-cellulózt, csúsztatószert, inért hígítóanyagot, konzerválószert, szétesést elősegítő anyagot (például nátrium-keményítő-glikolátot, cross-povidont vagy nátrium-karboxi-metil-cellulózt), felületaktív anyagot vagy diszpergálószert tartalmazó készítményt megfelelő berendezésen préseljük Öntött tabletta előállításához az inért folyékony hígítóanyaggal megnedvesített porított hatóanyagot megfelelő berendezésen mintákba öntjük

A tabletta kívánt esetben bevonható vagy például megfelelő mennyiségű hidroxi-propü-metil-cellulóz felhasználásával nyújtott hatású készítménnyé alakítható.

A szem vagy más külső szövet, például száj vagy bőr fertőzésének kezelésére helyi adagolási kenőcsöt vagy krémet alkalmazunk, mely a hatóanyagot például 0,075-20 tömeg%, előnyösen 0,2-15 tömegei, elsősorban 0,5-10 tömeg% mennyiségben tartalmazza. Kenőcs előállításához a hatóanyagot paraffinos vagy vízzel elegyedő kenőcsalappal, míg krém előállításához olaj-a-vízben típusú krémalappal elegyítjük

A krémalap vizes fázisa kívánt esetben legalább 30 tőmeg% polialkobolt, vagyis két vagy több hidroxilcsoportot tartalmazó alkoholt, így propilénglikolt, bután-l,3-diolt, mannitolt, szorbitolt, glice4 rolt, polietilénglikolt, vagy ezek elegyét tartalmazza. A helyi adagolásra alkalmas készítményben a hatóanyagot olyan adalékanyaggal keverjük, amelylehetővé teszi a bőrön vagy más szöveten keresztül történő felszívódást. Ebből a célból előnyösen alkalmazható például a dimetil-szulfoxid és analógjai.

Az emulziós készítmények olajos fázisát önmagában ismert módon állítjuk elő, és elsősorban zsírt és/vagy olajat, valamint legalább egy emulgeálószert tartalmaz. A hidrofil emulgeálószer mellett előnyösenlipofü emulgeálószert isalkalmazunk, amely stabilizálószerként is hat. Az emulgcálószerek, adott esetben a stabilizálószerrel együtt, úgynevezett emulgcálóviaszt képeznek, amely az olajjal és/vagy zsírral együtt úgynevezett emulgeáló kenőcsalapot képez, amely azonos a krémkészítmény olajos fázisával.

A találmány szerint előállított készítményekhez emulgeálószerként vagy emulziós stabílízálószerként előnyösen alkalmazható a Tween 60, Span 80, cetosztearü-alkohol, mirisztil-alkohol, glíceril-monosztearát és nátrium-lauril-szulfát.

A készítményhez alkalmazott olaj vagy zsír kiválasztása az elérni kívánt hatástól függ, amelynek során kozmetikai hatások is f igyelembevchetők, mivel a hatóanyag oldékonysága a gyógyszerészeiben alkalmazott legtöbb olajban viszonylag alacsony. Előnyösen alkalmazható a nem-zsíros, nem színezett és lemosható krém, amely megfelelő konzisztenciájú ahhoz, hogy ne folyjon el a tubusból vagy más tartóedényből. Előállításához előnyösen alkalmazhatók az egyenes vagy elágazó szénláncú, monovagy dibázikus alkü-észterek, így diizoadipát,izocetil-sztearát, kókuszzsírsavak propüénglikol-diésztere, izopropil-mirisztát, decil-oleát, izopropil-palmitát, butil-sztearát, 2-etil-hexil-palmitát vagy elágazó szénláncú észterek elegyei, így Crodalmol CAP. Ezek alkalmazhatók önmagukban vagy egymással kombinálva. Alkalmazhatók továbbá magas forráspontú lipidek, így fehér lágy paraffin és/vagy folyékony paraffin, valamint ásványi olaj.

A szem helyi kezelésére alkalmazható továbbá a szemcsepp, amely a hatóanyagot oldott vagy szuszpendált formában tartalmazza megfelelő hordozóanyag, előnyösen vizes oldószer jelenlétében. A hatóanyag mennyisége általában 0,5-20 tömeg%, előnyösen 0,5-10 tömeg%, elsősorban mintegy 1,5 tömeg%.

A száj helyi kezelésére alkalmazható még a hatóanyag mellett ízesítőanyagot, így szukrózt, akáciát vagy tragakant tartalmazó cukorka, a hatóanyag mellett inért bázist, így zselatint vagy glicerint, továbbá szukrózt és akáciát tartalmazó pasztilla, végül a hatóanyag mellett megfelelő folyékony hordozószert tartalmazó szájvíz.

Rektális adagolásra alkalmazható a megfelelő hordozóanyagot, így kakóvajat vagy szalicilátot tartalmazó szuppozitórium.

Nazális adagoláshoz hordozóanyagként mintegy 20-500 μ szemcseméretű port alkalmazunk A készítmény adagolásához a tartóedenyt az orrhoz közel tartjuk és közvetlenül felszippantjuk. Orrspray vagy orresepp előállításához folyékony hordozóanyagot alkalmazunk, például vizes vagy olajos oldószert.

-3HU 202112Β

Vaginális adagoláshoz alkalmazható készítmény a pesszárium, tampon, krém, gél, paszta, hab és spray, amelyek a hatóanyag mellett önmagában ismert hordozóanyagot tartalmaznak.

Parenterális adagoláshoz alkalmazható készít- 5 mény vizes vagy nem-vizes steril-injekciót oldat, amely antioxidánst, puffért, bakteriosztatikumot és izotonizáló oldatot tartalmazhat, valamint vizes és nemvizes steril szuszpenzió, amely szuszpendálószert és vastagítószert tartalmazhat. A készítményt 10 dózisegységenként vagy több egységet tartalmazó dózis formájában szereljük ki, amely lehet ampulla vagy fiola, valamint fagyasztva szárított (liofilizált) készítmény, amelyet közvetlenül a f elhasználás előtt steril, folyékony hordozószerrel, például injekciós 15 célra alkalmas vízzel elegyítünk. Szükség eseténrőgtönzött injekciós oldat vagy szuszpenzió állítható elő sterü por, granulátum vagy tabletta készítményből is.

A készítményeket előnyösen a napi dózis vágyán- 20 nak egy részét tartalmazó dózisegység formájában szereljük ki.

Az (I) általános képletű hatóanyagot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállításához alkalmazható komponensek köre nem korlátozódik a fent emlí- 25 tett alkotóelemekre, hanem felhasználható más, gyógyszerészeiben alkalmazható segédanyag is, így például orális adagolásra alkalmas készítményeknél ízesítőszer.

A hatóanyagok előállíthatók a hasonló szerkeze- 30 tű vegyületek előállítására ismert eljárásokkal analóg módon (például 1 601 020. számú nagy-britanniai szabadalmi leírás vagy Robins M J. és Barr P J.:

J. Org. Chem., 481854-1862/1983/).

A hatóanyagok előállítása során például úgy já- 35 runkel, hogy

A. (Π) általános képletű vegyületet, a képletben

R jelentése a fenti,

M²^és M³ jelentése hidroxil védőcsoport,

R⁴ a jelentése hidrogénatom vagy védett hidro- 40 xilcsoport,

Z jelent&e lehasadó csoport,

-C-C-R² általános képletű csoport kialakítására alkalmas vegyülettel reagáltatunk, a képletben

R² jelentése a fenti, vagy 45

Β. (ΙΠ) általános képletű vegyületet, a képletben

Q jekntése lehasadócsoport,

X, R , Μ¹, M² és Ra jelentése a fenti, a Q csoportot aminocsoportra cserélő reagensre reagáltatunk, majd az adott esetben jelenlevő védő- 50 csoportokat eltávolítjuk.

Az A) eljárás során (Robins M J. és Barr P J.: J.

Org. Chem., 48,1854/1983/) az 5-halogénezett nukleozidot, igya 2*-dezoxi-5-jód-uridintmegfelelővédett formában, például arilcsoport, péládul alkano- 55 ilcsoport vagy aroilcsoport, így p-toluil-csoport vagy trialkil-szilil-csoport, így trimetü-szilil-csoport, amikoris M vagy R⁴a védőcsoportként előnyösen szilil védőcsoportot alkalmazunk katalizátor, például palládium-katalizátor jelenlétében 60 megfelelően védett acetilénnel, így trimetil-szüilacetílénnel kapcsoljuk szerves bázis, így trietil-amin és egy másik fémkatalizátor, például réz(I)-só jelenlétében szobahőmérsékletnél magasabb, így 50 ’C hőmérsékleten, amelynek során védett acetilén- 65 nukleozidot kapunk. Palládium katalizátorként előnyösen alkalmazható a bisz(trifenü-foszfin)-palládium-diklorid, réz katalizátorként a réz-jodid. A kívánt vegyületet a védőcsoportok eltávolításával, például metanolban alkoholos bázissal, így nátriummetoxiddal végzett kezeléssel kapjuk.

A védőcsoportok savas vagy lúgos hidrolízissel távolíthatók el, az acilcsoportok eltávolítására előnyösen lúgos hidrolízist, míg a szililcsoportok eltávolítására előnyösen savas hidrolízist alkalmazunk.

AB) eljárás során a Q lehasadócsoport előnyösen heterociklusos csoport, így 1,2,4-triazol-l-il-csoport vagy halogénatom, így klóratom, amelynek eltávolításához a (III) általános képletű vegyületet előnyösen ammóniával reagáltatjuk

A (ΓΠ) általános képletű vegyületek előállíthatók például a megfelelő 4-oxo-vegyület és a Q lehasadó csoport bevitelére alkalmas reagens, például 1,2,4triazol reakciójával kondenzálószer, így 4-klór-fenil-foszfodiklorid jelenlétében például lúgos oldószerben, előnyösen piridinben, illetve a 4-oxo-vegyület és tionil-klorid dimetü-fonnamidban történő reagáltatásával.

A kiindulási anyagként alkalmazott vegyületek ismert vegyületekból önmagában ismert módon előállíthatók (például Nucleic Acid Chemistry: Improved New Synthetic Procedures, Methods and Techniques, Ed. L.B. Townsend és R.S. Tipson, Wiley Interscience /1978/ és Nucleoside Analogues: Chemistry, Biology and Medical Applications Ed. R.T. Wlaker.E. deClerq ésF. Eckstein,NATO Advanced Study Institute, Plenum Press/1979/).

Az A) eljárás során a (Π) általános képletű vegyületek, elsősorban a Z helyén halogénatomot, így jódatomot és Ra helyén védett hidroxilcsoportot tartalmazó (Π) általános képletű vegyületek előállíthatók Schinazi és munkatársai módszerével (J. Med. Chem., 22(20), 1273/1979/).

A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör korlátozása nélkül a következő példákkal vüágítjuk meg.

1. példa

2’-Dezoxi-5-propinil-uridin

a) 2’-Dezoxi-3’,5’-di-O-p-toluol-5-propiniluridin

1,11 g (2,0 mmól) 3’,5’-di-O-p-toluil-2’-dezoxi5-jód-uridint (Can. J. Chem. 60,554/1982/), 30 mg réz-jodidot, 30 mg bisz(trifenil-foszfin)-palládium(Ö)-kloridot és 80 ml száraz trietil-amint száraz nitrogénatmoszféra alatt keverünk és a keverékbe 15 percen keresztül pr opingázt vezetünk. Az elegyet három órán keresztül 50 ’C hőmérsékleten keverjük, majd lehűtés után a fehér szilárd anyagot kiszűrjük és diklór-metánban felvesszük. Az oldatot kétszer 50 ml 2 tömeg%-os dinátrium-etüén-diamin-tetraecetsawal mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk. Amaradékot diklór-metén/etanol 1:2 elegyből átkristályosítva 0,63 g (63%) cím szerinti vegyületet kapunk fehér kristályok formájában. Olvadáspont: 238-241 ’C.

b) 2’-Dezoxi-5-propinil-uridin-hemihidrát

0,6 g (1,2 mmól) a) lépés szerinti vegyület 18 ml 0,2 mól/l, metanolos nátrium-metoxidban (nátriumból és metanolból) frissen előállítva) felvett olda-4HU 202112Β

Ί tát 2 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük. Az oldatot részletesen adagolt Dowex 50(H) ioncserélő gyanta segítségével pH - 4-5 értékre állítjuk. A gyantát kiszűrjük és metanollal mossuk. A szűrletet bepároljuk és a maradékot vízzel és éterrel kirázzuk. A vizes fázist éterrel mossuk, majd bepároljuk. A maradékot etanollal eldőrzsöljük, a kapott szilárd anyagot kiszűrjük, éterrel mossuk. így 0,18 g (55%) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspont 194— 196’C.

Elemanalízis:

számolt C 52,36% H 5,49% N 10,23% talált C 52,35% H 5,13% N 10,23%.

2. példa

2’-Dezoxi-5-etinil-citidin

250 mg (0,66 mmól) 2c) példa szerinti vegyület 3,0 ml dioxán/tömény vizes ammónia/víz 3:2:1 elegyben felvett oldatát 24 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük. Ezután további 1,0 ml 880 ammóniát adunk hozzá és további 4 órán keresztül keverjük. Az oldatot bepároljuk és a maradékot etanollal tovább pároljuk Amaradékot etanollal eldörzsöljük, a kapott szilárd anyagot kiszűrjük és éterrel mossuk így 120 mg (72%) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspont: 162-165 ’C.

Etanolból átkristályositva analitikai tisztaságú terméket kapunk, amelynek olvadáspontja 190193 ’C.

Elemanalízis:

számolt C 52,58% H 5,22% N 16,73% talált C 52,80% H 5,20% N 16,38%.

3. példa l-(béta-D-Arabino-furanozil)-5-etinil-uracil

a) Cr,2’-Anhidro-uridtn g (0,04 mól) uridint 20 ml meleg, száraz dimetil-formamidban oldunk és hozzáadunk 11,4 g (0,06 mól) difenü-karbonátot és 0,2 g nátrium-hidrogén-karbonátot. Az oldatot a széndioxid fejlődés befejeződéséig (mintegy 30 perc) 150 ’C hőmérsékleten keverjük Hűtés után 200 ml éterre töltjük intenzív keverés közben. A kapott szilárd anyagot kiszűrjük, éterrel mossuk és metanolból átkristályosítjuk így 7,2g (80%) cím szerinti vegyületet kapunk fehér kristályok formájában. Olvadáspont 235-240 ’C.

\3)l-(béta-D-Arabino-furanozil)-uracil

7,0 g (0,03 mól) a) lépés szerinti vegyületet 585 ml etanol/víz 1:1 elegyben oldunk és 41 ml 1 mól/1 koncentrációjú nátrium-hidroxidot adunk hozzá. Az elegyet 2 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd részletekben adagolt Dowex 50(H) ioncserélő gyantával pH - 4-5 értékre állítjuk A gyantát kiszűrjük és 100 ml etanol/víz 1:1 eleggyel mossuk Aszűrletet szárazra pároljuk és a maradékot etanolból átkristályositjuk így 5,51 g (75%) cím szerinti vegyületet kapunk fehér kristályok formájában. Olvadáspont: 220-223 ‘C.

z)l-(béta-D-Arabino-furanozil)-5-jód-uracil

3,0 g (12,3 mmól) b) lépés szerinti vegyületet, 3,0 g (11,8 mmól) jódot, 15 ml kloroformot és 30 ml 1 mól/1 koncentrációjú salétromsavat 2 órán keresz8 tül keverés és visszafolyatás közben forralunk Lehűtés után a kristályos szilárd anyagot elválasztjuk, és a jódfelesleget éterrel kimossuk. A szilárd anyagot vízből átkristályosilva 2,55 g (56%) cím szerinti vegyületet kapunk fehér kristályok formájában. Olvadáspont 191-193 ’C (bomlik).

d) 5-Jód-l-(2^,,3’,5'-tri-O-p-toluoil-béta-Darabino-furanozil)-uracil

2,76 g (17,85 mmól) p-toluoil-klorid 5,0 ml diklór-metánban felvett oldatát 0 ’C hőmérsékleten cseppenként száraz nitrogénatmoszféra alatt 2,0 g (5,4 mmól) c) lépés szerinti vegyület 20 ml száraz piridinben felvett oldatához adagoljuk Az oldatot 5 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd szárazra pároljuk. A maradékot metanollal eldörzsöljük és a fehér szilárd anyagot kiszűrjük, éterrel mossuk. így 2,65 g (67%) cím szerinti vegyületet kapunk Olvadáspont 214-216 ’C.

e) 5-Trimetil-szilil-etinil-l-(2’,3’,5’-tri-O-ptoluoil-béta-D-arabino-furanoziI)-uracil

1,45 g (2 mmól) d) lépés szerinti vegyületet, 30 mg réz-jodidot, 30 mg bisz(trifenil-foszfin)-palládium(II)-kloridot, 80 ml száraz trietil-amint és 0,6 g (6 mmól) trimetil-szilil-acetilént száraz nitrogénatmoszféra alatt 3 órán keresztül 50 ’C hőmérsékleten keverünk. Alchűtött szuszpenziót szárazra pároljuk és a sötét maradékot diklór-metánban felvesszük. Az oldatot kétszer 50 ml 2 tömeg%-os vizes dinátrium-etilén-diamin-tetraecetsawal és 50 ml vízzel mossuk. Az oldatot magnézium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk a maradékot etanolból átkristályosítjuk. így 1,03 g (82%) cím szerinti vegyületet kapunk fehér kristályok formájában. Olvadáspont 197-199’C.

f) l-(béta-D-Arabino-furanozil)-5-etinil-ura cil

1,0 g (1,59 mmól) e) lépés szerinti vegyületet 30 ml 0,2 mól/1, metanolos nátrium-metoxidban (nátriumból és metanolból frissen előállítva) oldunk és 3 órán keresztül szobahőmérsékleten keverünk. Ezután részletekben adagoltuk Dowex 50(H) ioncsrélő gyantával pH - 4-5 értékre állítjuk. A gyantát kiszűr jük és metanollal mossuk A szűrletet szárazra pároljuk és a maradékot vízzel és éterrel kirázzuk. A vizes fázist éterrel mossuk, majd szárazra pároljuk A maradékot két részletben etanollal bepároljuk, majd etanollal eldörzsöljük. A kapott szilárd anyagot szűrjük és éterrel mossuk. így 0,30 g (70%) cím szerinti vegyületet kapunk, amely 200 ’C felett bomlik

Elemanalízis:

számolt C 49,25% H4,52%N10,45% talált C 49,40% H 4,71%N 10,29%.

4. példa

5-Etinil-Í-(2’,3’,5’-tri-O-acetil-béta-D-arabin o-furanozil)-uracil

0,35 g (1,3 mmól) 5f) példa szerinti vegyületet, 2,0 ml száraz piridint és 0,49 g (4,7 mmól) ecctsav-anhidridet 16 órán keresztül szobahőmérsékleten keverünk A kapott tiszta oldatot szárazra pároljuk és a maradékot etanollal bepároljuk Etanolból átkris5

-5HU 202112Β tályosítva 0,4 g (89%) cím szerinti vegyületet kapunk, enyhén sárga négyszögletes kristályok formájában. Olvadáspont 174-176 ’C.

Elemanalízis:

számolt C 51,78% H 4,60% N 7,10% talált C 52,06% H 4,43% N 7,05%.

5. példa l-(béta-D-Arabino-furanozil)-5-etinil-citozin

a) 5-Etinil-l-(2,3-5-trio-O-acetil-béta-Darabino-furanozil)-4-(l,2,4-triazol-l-il)-pirím idin-2(lH)-on

0,6 g (1,5 mmól) 6. példa szerinti 5-etinil-l(2’,3’5’-tri-0-acetü-béta-D-arabino-furanozil)-u racilt, 0,33 g (4,8 mmól) 1,2,4-triazolt és 0,8 ml (4,8 mmól) foszfonil-diklorid-p-klór-fenil-észtert 20 ml száraz piridinben 72 órán keresztül keverjük. A kapott sötét oldatot szárazra pároljuk és a maradékot szilikagélen etil-acetát/hexán 9:1 eleggyel eluálva oszlopkromatográfiásan tisztítjuk. így 0,44 g kívánt terméket kapunk (könnyen bomlik), amely közvetlenül felhasználható.

b) l-(béta-D-Arabino-furanozil)-5-etinil-citozin

0,44 g (0,9 mmól) a) lépés szerinti vegyület 12 ml dioxán/880 ammónia/víz 3:2:1 elegyben felvett oldatát 48 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd bepároljuk A kapott olajat szilikagélen metanol/metilén-klorid 1:4 eleggyel eluálva oszlopkromatográfiásan tisztítjukAtermékfrakciókat egyesítjük és bepároljuk A kapott szilárd anyagot etanolból átkristályosíjtuk. Így 0,03 g cím szerinti vegyületet kapunk, amely 223 ’C hőmérsékleten bomlik

Elemanalízis a Ci 1H13N3O5 X 0.3H2O összegképlet alapján:

számolt: C 48,46% H 4,993% N 15,42% talált: C 48,22% H 4,889% N 14,99%.

A következő példákban a hatóanyagként (I) általános képletű vegyületet tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítását mutatjuk be.

A példa

Tabletta

Hatóanyag 100 mg

Laktóz 200 mg

Keményítő 50 mg

Poli(vinil-pirrolidon) 5 mg

Magnézium-sztearát 4 mg

359 mg

A tablettát a megadott komponensekből nedves granulálással, majd préseléssel kapjuk

B példa Szemcsepp

Hatóanyag	0,5 g
Nátrium-klorid, analitikai tisztaságú	0,9 g
Tiomerzál	0,001 g
Desztillált víz, ad	100 ml
PH	7,5

C példa

Tabletta

A következő I és Π összetételeket a komponensek povidon oldattal végzett nedves granulálásával, majd magnézium-sztearát hozzáadása után préseléssel kapjuk

I összetétel mg/tabletta	mg/tabletta
(a) hatóanyag	250	250
(b) Laktóz B.P.	210	26
(c) povidon BP. (d) nátrium-	15	9
keményítő-glikolát	20	12
(e) magnézium-sztearát	5	3
	500	300
II. összetétel
(a) hatóanyag	250	250
(b) laktóz	150	-
(c) Avicel PH 101	60	26
(d) povidon B.P. (e) nátrium-	15	9
keményítő-glikolát	20	12
(f) magnézium-sztearát	5	3
	500	300
III. összetétel
hatóanyag		100
laktóz		200
keményítő		50
povidon		5
magnézium-sztearát		4 359

AIV. és V. összetételeket az összekevert komponensekközvetlen préselésével kapjuk Az V. összetételben alkalmazott laktóz közvetlen préseiére alkalmas.

IV. összetétel mg/kapszula hatóanyag 250 előzselatinozott keményítő NF15 150 400

V összetétel hatóanyag 250 laktóz 150

Avicel 100 500

VI. összetétel (nyújtón hatású készítmény)

A készítményt a komponensek povidon oldattal történő nedves granulálásával kapjuk, majd magnézium-sztearát hozzáadása után préseljük

	mg/tabletta
(a) hatóanyag (b) hidroxi-propil-metil-cellulóz	500
(Metoccl K4M Prémium)	112
(c) laktóz B.P.	53
(d) povidon B.P.C.	28
(e) magnézium-sztearát	7 700

A hatóanyag felszabadulásához 6-8 óra szüksé-6HU202112B ges, teljes felszívódás 12 óra.

D. példa

Kapszula

I. összetétel

A készítmény előállításához a C példa IV. összetételében megadott komponenseket összekeverjük és kétrészes kemény zselatin kapszulába töltjük. A Π. összetételt hasonló módon állítjuk össze.

II. összetétel (a) hatóanyag (b) laktóz B.P.

(c) nátrium-keményítő-glikolát (d) magnézium-sztearát mg/kapszula

250

143

420

III. összetétel (a) hatóanyag 250 20 (b) Macrogol 4000 BP 350

600

A készítmény előállításához a Macrogol 4000 BP-t megolvasztjuk, a hatóanyagot az olvadékban 25 diszpergáljuk és az olvadékot kétrészes kemény zselatin kapszulába töltjük.

IV. összetétel hatóanyag lecitin Arachisolaj mg/kapszula

250 30

100 100 450

A kapszula előállításához a hatóanyagot lecitin- 35 ben és arachis olajban diszpergáljuk, majd a diszperziót lágy zselatin kapszulába töltjük.

V. összetétel (nyújtott hatású készítmény)

A nyújtott hatású kapszula készítmény dőállítá- 40 sához az a, b és c komponenseket extruder segítségével extrudáljuk, majd szferonizáljuk és szárítjuk A száraz szemcséket a hatóanyag felszabadulását lassító membránnal (d) vonjuk be és kétrészes kemény zselatin kapszulákba töltjük Az összetételt mg/kap- 45 szula mértékegységben adjuk meg.

(a) hatóanyag (b) mikrokristályos cellulóz (c) laktóz BP (d) etil-cellulóz	mg/kapszula 250 125 125 13 513
E példa Injektálható készítmény
Hatóanyag steril, pirogénmentes foszfát puffer (pH-7,0)	0,200 g adlOml.

F példa

Intramuszkuláris injekció

Hatóanyag 0,20 g benzil-alkohol 0,10 g

Glukofurol75 1,45 g injekciós viz ad 3,00 ml.

A hatóanyagot glikofurolban oldjuk, hozzáadjuk a benzil-alkoholt és oldódás után vízzel 3 ml-re töltjük. Az elegyet steril mikropórusos szűrőn szűrjük és steril 3 ml-es üvegfiolába töltjük.

G példa

Szirup szuszpenzió

Hatóanyag 0,2500 g szorbitol oldat 1,5000 g glicerol 2,0000 g diszpergálható cellulóz 0,0750 g nátrium-benzoát 0,0050 g ízesítőanyag,Peach 17.42.3169 0,0125 ml desztillált víz ad 5,0000 ml.

A nátrium-benzoátot a desztillált víz eghy részében oldjuk és hozzáadjuk a szorbitol oldatot. Ahatóanyagot hozzáadjuk és diszpergáljuk. A glicerolban diszpergáljuk a vastagítószert (diszpergálható cellulózt). A két diszperziót elegyítjük és desztillált vízzel a kívánt térfogatra töltjük. Fokozott kenőhatáshoz további vastagítőszert adagolunk.

H példa Szuppozitórium

Hatóanyag (63 pjn)* 250 mg/szuppozitórium

Kemény zsír BP (WitepsolH15,

Dynamit NoBel) 1770 mg/szuppozitórium

2020 mg/szuppozitórium * - A hatóanyagot poralakban használjuk, amely legalább 90%-ban legfeljebb 63 pm szemcseátmérőjű.

AWitepsolH151/5-drészétgőzfűtésesedényben 45 ’C hőmérsékleten megolvasztjuk. A hatóanyagot

200 pm-es szűrőn átszitáljuk, az olvadékhoz adjuk és egyenletes diszperzióvá keverjük A hőmérsékletet 45 ‘C értéken tartva hozzáadjuk a szuszpenzióhoz a maradék Witepsol H15-öt és homogén keverékké keverjük A szuszpenziót 250 pm-es rozsdamentes acélszitán átszűrjük és keverés közben hagyjuk 40 ’C hőmérsékletre hűlni. 38-40 ’C közötti hőmérsékleten 2,02 g keveréket megfelelő műanyag mintába öntjük. Aszuppozitóriumot hagyjuk szobahőmérsékletre hűlni.

I példa Pesszárium

A hatóanyagot a foszfát puffer nagy részében oldjuk (35-40 ’C), majd a kívánt térfogatra töltjük és steril mikropórusos szűrőn steril 10 ml-es üvegfiolába szűrjük, végül steril dugóval lezárjuk

Hatóanyag (63 pm) Vízmentes dextróz Burgonyakeményítő

Magnézium-sztearát

250 mg/pesszárium 380 mg/pesszárium 363 mg/pesszárium mg/pesszárium

-ΊHU202112B

1000 mg/pesszárium

A fenti komponenseket közvetlenül összekeverjük és közvetlen préseléssel pesszáriumot készítünk.

Vírus elleni hatás és toxicitás mérése

Humán citomegtalovírust (HCMV) vizsgálunk egyrétegű MRC5 sejteken (humán embrió tüdősejtek) vagy Detroit 532 sejteken (humán fityma kötőszöveti sejtek). A hatóanyag aktivitását a vértestek 10 számának csökkenésével vizsgáljuk, amelynek során az egyrétegű sejtet HCMV szuszpenzióval fertőzzük, majd a vírusnak a tenyészeten történő elterjedésének megakadályozására gélformájú agaróz táptalajjal fedjük le. Különböző koncentrációjú ha- 15 tóanyagot adagolunk a felső agaróz tápréteghez. A vértestek számát minden hatóanyagkoncentrációnál a kontroll százalékában fejezzük ki és dózisfüggő görbén ábrázoljuk. Erről a görbéről az 50%-os gátló hatáshoz szükséges koncentrációt (ICso) határoz- 20 zukmeg.

MRC5 sejteken hasonló módon varicella zoster vírust (yZN) vizsgálunk, azzal a különbséggel, hogy az agaróz fedőréteget elhagyjuk

A következő vizsgálathoz vírustermelő sejteket 25 (P3HR-1) 14 napon keresztül a hatóanyaggal kezelünk, majd a sejtenkéntiEBV genom másolat számát EBV specifikus c-RNS-DNS hibridizációval határozzukmeg.Nonoyama ésPaganomódszerével (Natúré: New Biology Vol. 233,103-104 /1971/) Epste- 30 in-Barr vírust vizsgálunk A megadott IC50 értékek az EBV genom sejtenkénti számának 50%-os csökkenéséhez szükséges koncentrációt jelölik

Sejttoxicitá9t vizsgálunk a sejt fejlődés gátlásának mérésével. Verő sejtek egybefüggő tenyészetét 35 különbözőkoncentrációjú hatóanyaggal kezeljük és a sej tek életképességét naponta vizsgáljuk tetrazólium festés (MIT) segítségével. A sejtek életképességének 96 órán kereszt ül történő 50%-os csökkenéséhez szükséges koncentrációt CCID50 érték alakjában adjuk meg.

A mérési eredményeket az alábbi táblázat tartalmazza:

Ható ICso(pM) CCIF50(pM) anyag VZV ICso(pM) 96 óra ICso(pM) példa- HCMV alatt EBV száma

1. 1,0 16 500

3. 15 20 300

0,1

Claims

Eljárás hatóanyagként (I) általános képletű 5szubsztituált pirimidin-nukleozidot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, a képletben

R: jelentése oxocsoport vagy iminocsoport,

R² jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport,

R⁴ jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcspport, azzal a megszorítással, hogy

a) R¹ jelentése oxocsoport és R⁴ jelentése hidrogénatom, ha R² jelentése metilcsoport, vagy

b) R⁴ jelentése hidroxilcsoport, ha Rjelentése hidrogénatom és R¹ jelentése oxocsoport, azzal jellemezve, hogy az ismert módon előállított (I) általános képletű vegyületet gyógyszerészeti célra alkalmas hordozóanyaggal és egyéb gyógyszerészeti segédanyaggal keverjük, és a keveréket varicella zoster vírus, cytomegalo vírus vagy Epstein Barr vírus által okozott fertőzés kezelésére alkalmas készítménnyé alakítjuk.