HK40086025B

HK40086025B - 抗人nr1抗体衍生物

Info

Publication number: HK40086025B
Application number: HK62023074486.9A
Authority: HK
Inventors: 久保聪司; 菅野敦夫; 山宿大介; 鬼头拓也; 前田雅志; 三原拓真
Original assignee: 阿里亚利斯治疗公司
Priority date: 2020-05-27
Filing date: 2021-05-26
Publication date: 2025-08-29

Description

抗人NR1抗体衍生物

技术领域

本发明涉及在药物组合物中用作活性成分的抗人NR1抗体衍生物。

背景技术

针对神经细胞的自身抗体和疾病之间的关系最近已然清晰。针对神经细胞的自身抗体被称为抗神经元抗体，并且它被认为是神经系统疾病(如自身免疫性脑炎)的病因。近年来，针对细胞表面和突触抗原的新型抗神经元抗体相继被鉴定。其中许多是针对神经细胞或其相关分子上表达的受体或通道的抗体(Journal of Clinical and ExperimentalMedicine(IGAKU NO AYUMI),2015,第25卷,第5期,第497-503页/Neuro-oncol.2014.,第16卷,第771-778页)。

2007年，Dalmau等人发现，在具有并发卵巢畸胎瘤的独特临床病程的脑炎中，存在于患者血液和脊髓液中的针对细胞表面抗原的自身抗体是针对NMDA(N-甲基-D-天冬氨酸)受体(以下简称“NMDAR”)的NR1(也称为GluN1)亚单位的抗体，并且将这种脑炎命名为“抗NMDAR脑炎”。在自身免疫性脑炎中，抗NMDAR脑炎是最常见的自身免疫性脑炎之一，并且其临床表现定义明确。在患有抗NMDAR脑炎的患者中，通常首先出现精神症状，随后出现各种神经症状，包括记忆障碍、言语障碍、定向障碍、癫痫发作、自主神经症状、中枢性换气不足和不自主运动。抗NMDAR脑炎的发病机理进展迅速，并且在一些情况下，病程严重，在发现初始症状后数周内需要强化治疗，其中治疗持续数月至一年以上。患者脊髓液中的抗NR1抗体滴度反映了所述病程。抗NMDAR脑炎很少发生在儿童、老年人和男性中，但在年轻女性中更常见。据报道，许多患有所述疾病的女性并发卵巢畸胎瘤(Lancet Neurol.,2013,第12卷,第157-165页)。

在病理学上，据报道，在患有抗NMDAR脑炎的患者脑中观察到IgG沉积和NMDAR表达减少(Acta Neuropathol.,2009,第118卷,第737-743页，非专利文献1)。另一方面，由于在患者脑中没有观察到细胞毒性T细胞或补体的沉积(Acta Neuropathol.,2009,第118卷,第737-743页)，因此假设NR1抗体单独影响病理形成。体外实验报道了患者来源的NR1抗体与NMDAR交联并内在化NMDAR以减少突触后膜中的NMDAR(非专利文献1)。此外，由于抗NMDAR脑炎的症状与对健康对象施用NMDAR拮抗剂(氯胺酮和苯环己哌啶)时观察到的症状相似，因此认为患者体内NR1抗体对NMDAR的内化以及随之而来的突触后膜中NMDAR簇的减少导致NMDAR的功能下降，从而引起抗NMDAR脑炎症状。

在抗NMDAR脑炎的肿瘤相关病例中，建议进行早期肿瘤切除和免疫疗法。作为免疫疗法，使用类固醇脉冲疗法、血浆置换和免疫球蛋白疗法。在难治性病例中，施用环磷酰胺脉冲疗法或利妥昔单抗(其是抗CD20抗体)。然而，由于疾病的严重性和病程的延长，并不是所有患者都具有良好的预后。据报道，完全或接近完全恢复仅占75％，而25％仍然严重残疾或死亡(Lancet Neurol.,2008,第7卷,第1091-1098页)。

目前针对抗NMDAR脑炎的治疗并不能特异性地控制或去除导致病理状态的自身抗体。

NMDAR是一种谷氨酸受体，主要在中枢神经系统中表达，并且与记忆和学习有关。NMDAR是一种离子通道偶联受体，其允许阳离子(如钠、钾和钙离子)通过与作为配体的谷氨酸结合而渗透。NMDAR具有四个亚单位，由两组异二聚体NR1和NR2组成。存在四种类型的NR2：NR2A、NR2B、NR2C和NR2D。NR2亚单位中存在用于谷氨酸的结合位点。

作为抗NR1单克隆抗体，已经报道了M68(非专利文献2)、MAB363(非专利文献3)、R1JHL(非专利文献4)和D65B8(非专利文献5)。另外，已经报道了与人NR1的N-末端位点结合并抑制与t-PA相互作用的单克隆抗体(专利文献1)。此外，已经鉴定了几种来源于抗NMDAR脑炎患者的抗NR1单克隆抗体(非专利文献6，专利文献2)。一种分离的抗NMDAR脑炎患者来源的抗NR1抗体在体外减少了NMDAR聚集并抑制了来源于小鼠海马的原代神经元中的NMDAR功能(非专利文献6)。

另一方面，没有报道抗人NR1抗体或其衍生物在患有抗NMDAR脑炎的患者中显示出治疗效果。

现有技术文献

[专利文献]

专利文献1：WO2014/187879

专利文献2：WO2017/029299

[非专利文献]

非专利文献1：[Journal of Neuroscience,(J.Neurosci.)],(USA),2010；30(17):5866-5875

非专利文献2：[Science(Science)],(USA),2016；352(6288):982-986

非专利文献3：[Journal of neurodegenerative diseases(J.Neurodegener.Dis.)],(UK),2014；文章ID:938530

非专利文献4：[JCI Insight(JCI Insight)],(USA),2019；4(15):e127736

非专利文献5：[Experimental Neurology(Exp.Neurol.)],(USA),2017；289:31-45

非专利文献6：[Brain(Brain)],(UK),2016；139(10):2641-2652

发明内容

本发明要解决的问题

本发明解决了提供用于治疗患有抗NMDAR脑炎的患者的新型治疗剂的问题。

用于解决问题的手段

本发明人在生产用于治疗患有抗NMDAR脑炎的患者的新型治疗剂方面进行了大量研究。首先，本发明人从来源于抗NMDAR脑炎患者的对NMDAR具有高结合活性的抗人NR1抗体克隆的序列信息产生了单臂抗人NR1抗体，并且发现当在体外与人NMDAR结合时，所述单臂抗人NR1抗体恢复了由患者来源的致病性NR1抗体引起的人NMDAR的细胞表面表达水平和功能(实施例1-4)。此外，基于这些发现，本发明人还产生了多个单臂抗人NR1抗体，其表现出比致病性NR1抗体更高的结合亲和力，这显著恢复了由致病性抗人NR1抗体引起的NMDAR的细胞表面表达水平和功能(实施例5-10)。此外，本发明人发现，与对照抗体相比，新获得的单臂抗人NR1抗体显著改善了抗NMDAR脑炎动物模型的症状(实施例12)。因此，本发明人完成了本发明。

根据本发明，提供以下发明作为医学和工业上有用的物质或方法，例如：

一种选自以下(1)至(5)中任一项的单臂抗人NR1抗体：

(1)一种包含重链可变区和轻链可变区的单臂抗人NR1抗体，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:2的氨基酸编号26至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:2的氨基酸编号52至58的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:2的氨基酸编号97至109的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:4的氨基酸编号26至33的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:4的氨基酸编号51至53的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ IDNO:4的氨基酸编号92至100的氨基酸序列组成的CDR3；

(2)一种包含重链可变区和轻链可变区的单臂抗人NR1抗体，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:6的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:6的氨基酸编号50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:6的氨基酸编号99至110的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:8的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:8的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ IDNO:8的氨基酸编号89至98的氨基酸序列组成的CDR3；

(3)一种包含重链可变区和轻链可变区的单臂抗人NR1抗体，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:10的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:10的氨基酸编号50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:10的氨基酸编号99至111的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:12的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:12的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ IDNO:12的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3；

(4)一种包含重链可变区和轻链可变区的单臂抗人NR1抗体，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:14的氨基酸编号31至36的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:14的氨基酸编号51至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:14的氨基酸编号99至108的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:16的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:16的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ IDNO:16的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3；

(5)一种包含重链可变区和轻链可变区的单臂抗人NR1抗体，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:18的氨基酸编号31至36的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:18的氨基酸编号51至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:18的氨基酸编号99至108的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:20的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:20的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ IDNO:20的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3。

选自以下(1)至(5)中任一项的如[1]所述的单臂抗人NR1抗体：

(1)一种单臂抗人NR1抗体，其包含由SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列组成的重链可变区，和由SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列组成的轻链可变区；

(2)一种单臂抗人NR1抗体，其包含由SEQ ID NO:6中所示氨基酸序列组成的重链可变区，和由SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列组成的轻链可变区；

(3)一种单臂抗人NR1抗体，其包含由SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列组成的重链可变区，和由SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列组成的轻链可变区；

(4)一种单臂抗人NR1抗体，其包含由SEQ ID NO:14中所示氨基酸序列组成的重链可变区，和由SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列组成的轻链可变区；

(5)一种单臂抗人NR1抗体，其包含由SEQ ID NO:18中所示氨基酸序列组成的重链可变区，和由SEQ ID NO:20中所示氨基酸序列组成的轻链可变区。

选自以下(1)至(5)中任一项的如[1]所述的单臂抗人NR1抗体：

(1)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:2的氨基酸编号26至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:2的氨基酸编号52至58的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:2的氨基酸编号97至109的氨基酸序列组成的CDR3，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:4的氨基酸编号26至33的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:4的氨基酸编号51至53的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:4的氨基酸编号92至100的氨基酸序列组成的CDR3；

(2)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:6的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:6的氨基酸编号50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:6的氨基酸编号99至110的氨基酸序列组成的CDR3，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:8的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:8的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:8的氨基酸编号89至98的氨基酸序列组成的CDR3；

(3)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:10的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:10的氨基酸编号50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:10的氨基酸编号99至111的氨基酸序列组成的CDR3，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:12的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:12的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:12的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3；

(4)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:14的氨基酸编号31至36的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:14的氨基酸编号51至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:14的氨基酸编号99至108的氨基酸序列组成的CDR3，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:16的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:16的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:16的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3；

(5)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:18的氨基酸编号31至36的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:18的氨基酸编号51至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:18的氨基酸编号99至108的氨基酸序列组成的CDR3，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:20的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:20的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:20的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3。

选自以下(1)至(5)中任一项的如[3]所述的单臂抗人NR1抗体：

(1)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区由SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列组成，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区由SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列组成；

(2)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区由SEQ ID NO:6中所示氨基酸序列组成，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区由SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列组成；

(3)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区由SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列组成，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区由SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列组成；

(4)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区由SEQ ID NO:14中所示氨基酸序列组成，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区由SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列组成；

(5)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区由SEQ ID NO:18中所示氨基酸序列组成，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区由SEQ ID NO:20中所示氨基酸序列组成。

如[1]至[4]中任一项所述的单臂抗人NR1抗体，其包含Fc区，所述Fc区包含LALA突变(L234A和L235A)。

如[1]至[4]中任一项所述的单臂抗人NR1抗体，其包含Fc区，所述Fc区包含杵臼突变。

如[1]至[4]中任一项所述的单臂抗人NR1抗体，其包含Fc区，所述Fc区包含LALA突变(L234A和L235A)和杵臼突变。

如[6]或[7]所述的单臂抗人NR1抗体，其中所述杵臼突变是形成Fc区的一个Fc多肽中的T366W突变，以及形成Fc区的另一个Fc多肽中的T366S、L368A和Y407V突变。

如[1]至[8]中任一项所述的单臂抗人NR1抗体，其中所述单臂抗人NR1抗体是人抗体或人源化抗体。

一种单臂抗人NR1抗体，其包含由SEQ ID NO:22中所示氨基酸序列组成的重链、由SEQ ID NO:24中所示氨基酸序列组成的轻链，以及由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽。

一种单臂抗人NR1抗体，其包含由SEQ ID NO:26中所示氨基酸序列组成的重链、由SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列组成的轻链，以及由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽。

一种单臂抗人NR1抗体，其包含由SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列组成的重链、由SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列组成的轻链，以及由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽。

一种单臂抗人NR1抗体，其包含由SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列组成的重链、由SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列组成的轻链，以及由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽。

一种单臂抗人NR1抗体，其包含由SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列组成的重链、由SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列组成的轻链，以及由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽。

一种单臂抗人NR1抗体，其中所述单臂抗人NR1抗体与包含由SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列组成的轻链可变区的抗人NR1抗体竞争性地结合人NR1，并且抑制由来源于抗NMDAR脑炎患者的致病性抗人NR1抗体引起的NMDAR细胞内化。

如[1]至[15]中任一项所述的单臂抗人NR1抗体，其中所述单臂抗人NR1抗体是翻译后修饰的。

如[16]所述的单臂抗人NR1抗体，其中所述翻译后修饰是N-末端重链可变区的焦谷氨酰化和/或C-末端重链赖氨酸的缺失。

一种包含以下(a)和/或(b)中所列出核苷酸序列的多核苷酸：

(a)编码如[1]的(2)至(5)和[2]的(2)至(5)中任一项所述的单臂抗人NR1抗体的重链可变区的核苷酸序列；

(b)编码如[1]的(2)至(5)和[2]的(2)至(5)中任一项所述的单臂抗人NR1抗体的轻链可变区的核苷酸序列。

一种包含以下(a)和/或(b)中所列出核苷酸序列的多核苷酸：

(a)编码如[3]的(2)至(5)和[4]的(2)至(5)中任一项所述的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列；

(b)编码如[3]的(2)至(5)和[4]的(2)至(5)中任一项所述的单臂抗人NR1抗体的轻链的核苷酸序列。

一种包含以下(a)和/或(b)中所列出核苷酸序列的多核苷酸：

(a)编码由SEQ ID NO:26中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列；

(b)编码由SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列。

一种包含以下(a)和/或(b)中所列出核苷酸序列的多核苷酸：

(a)编码由SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列；

(b)编码由SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列。

一种包含以下(a)和/或(b)中所列出核苷酸序列的多核苷酸：

(a)编码由SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列；

(b)编码由SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列。

一种包含以下(a)和/或(b)中所列出核苷酸序列的多核苷酸：

(a)编码由SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列；

(b)编码由SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列。

一种包含以下(a)和/或(b)中所列出核苷酸序列的多核苷酸：

(a)编码如[15]所述的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列；

(b)编码如[15]所述的单臂抗人NR1抗体的轻链的核苷酸序列。

一种包含多核苷酸的表达载体，所述多核苷酸包含以下(a)和/或(b)中所列出的核苷酸序列：

(a)包含编码如[1]的(2)至(5)和[2]的(2)至(5)中任一项所列出的单臂抗人NR1抗体的重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸；

(b)包含编码如[1]的(2)至(5)和[2]的(2)至(5)中任一项所列出的单臂抗人NR1抗体的轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸。

(a)包含编码如[3]的(2)至(5)和[4]的(2)至(5)中任一项所列出的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸；

(b)包含编码如[3]的(2)至(5)和[4]的(2)至(5)中任一项所列出的单臂抗人NR1抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸。

如[25]或[26]所述的表达载体，其进一步包含含有编码Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸。

一种表达载体，其包含以下(a)和/或(b)中所列出的多核苷酸，以及包含编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸：

(a)包含编码由SEQ ID NO:22中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸；

(b)包含编码由SEQ ID NO:24中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸。

一种表达载体，其包含以下(a)和/或(b)中所列出的多核苷酸：

(a)包含编码由SEQ ID NO:26中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸；

(b)包含编码由SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸。

一种表达载体，其包含以下(a)和/或(b)中所列出的多核苷酸：

(a)包含编码由SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸；

(b)包含编码由SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸。

一种表达载体，其包含以下(a)和/或(b)中所列出的多核苷酸：

(a)包含编码由SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸；

(b)包含编码由SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸。

一种表达载体，其包含以下(a)和/或(b)中所列出的多核苷酸：

(a)包含编码由SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸；

(b)包含编码由SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸。

如[29]至[32]中任一项所述的表达载体，其进一步包含多核苷酸，所述多核苷酸包含编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列。

一种表达载体，其包含以下(a)至(f)中所列出的包含核苷酸序列的多核苷酸：

(a)包含编码如[15]所述的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸；

(b)包含编码如[15]所述的单臂抗人NR1抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸；

(c)包含编码如[15]所述的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸，和包含编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸；

(d)包含编码如[15]所述的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸，和包含编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸；

(e)包含编码如[15]所述的单臂抗人NR1抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸，和包含编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸；

(f)包含编码如[15]所述的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸、包含编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和包含编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸。

一种宿主细胞，其用选自以下(a)至(d)的一种或多种表达载体转化：

(a)包含含有编码如[1]的(2)至(5)和[2]的(2)至(5)中任一项所列出的单臂抗人NR1抗体的重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(b)包含含有编码如[1]的(2)至(5)和[2]的(2)至(5)中任一项所列出的单臂抗人NR1抗体的轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(c)包含含有编码如[1]的(2)至(5)和[2]的(2)至(5)中任一项所列出的单臂抗人NR1抗体的重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸，和含有编码所述抗体的轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(d)包含含有编码如[1]的(2)至(5)和[2]的(2)至(5)中任一项所列出的单臂抗人NR1抗体的重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码所述抗体的轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体。

(a)包含含有编码如[3]的(2)至(5)和[4]的(2)至(5)中任一项所列出的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(b)包含含有编码如[3]的(2)至(5)和[4]的(2)至(5)中任一项所列出的单臂抗人NR1抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(c)包含含有编码如[3]的(2)至(5)和[4]的(2)至(5)中任一项所列出的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸，和含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(d)包含含有编码如[3]的(2)至(5)和[4]的(2)至(5)中任一项所列出的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，和包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体。

一种宿主细胞，其用选自以下(a)至(i)的一种或多种表达载体转化：

(a)包含含有编码如[3]的(1)至(5)和[4]的(1)至(5)中任一项所列出的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(b)包含含有编码如[3]的(1)至(5)和[4]的(1)至(5)中任一项所列出的单臂抗人NR1抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(c)包含含有编码如[3]的(1)至(5)和[4]的(1)至(5)中任一项所列出的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(d)包含含有编码如[3]的(1)至(5)和[4]的(1)至(5)中任一项所列出的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体、包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(e)包含含有编码如[3]的(1)至(5)和[4]的(1)至(5)中任一项所列出的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(f)包含含有编码如[3]的(1)至(5)和[4]的(1)至(5)中任一项所列出的单臂抗人NR1抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸，以及含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(g)包含含有编码如[3]的(1)至(5)和[4]的(1)至(5)中任一项所列出的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(h)包含含有编码如[3]的(1)至(5)和[4]的(1)至(5)中任一项所列出的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(i)包含含有编码如[3]的(1)至(5)和[4]的(1)至(5)中任一项所列出的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸、含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体。

(a)包含含有编码由SEQ ID NO:22中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，和包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(b)包含含有编码由SEQ ID NO:22中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(c)包含含有编码由SEQ ID NO:24中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(d)包含含有编码由SEQ ID NO:24中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(e)包含含有编码由SEQ ID NO:22中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:24中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(f)包含含有编码由SEQ ID NO:22中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码由SEQ ID NO:24中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(g)包含含有编码由SEQ ID NO:22中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码由SEQ ID NO:24中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(h)包含含有编码由SEQ ID NO:22中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体、包含含有编码由SEQ ID NO:24中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(i)包含含有编码由SEQ ID NO:22中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸、含有编码由SEQ ID NO:24中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体。

一种宿主细胞，其用选自以下(a)至(m)的一种或多种表达载体转化：

(a)包含含有编码由SEQ ID NO:26中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(b)包含含有编码由SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(c)包含含有编码由SEQ ID NO:26中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(d)包含含有编码由SEQ ID NO:26中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，和包含含有编码由SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(e)包含含有编码由SEQ ID NO:26中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(f)包含含有编码由SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(g)包含含有编码由SEQ ID NO:26中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，和包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(h)包含含有编码由SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，和包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(i)包含含有编码由SEQ ID NO:26中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(j)包含含有编码由SEQ ID NO:26中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码由SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(k)包含含有编码由SEQ ID NO:26中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码由SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(l)包含含有编码由SEQ ID NO:26中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体、包含含有编码由SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(m)包含含有编码由SEQ ID NO:26中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸、含有编码由SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体。

(a)包含含有编码由SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(b)包含含有编码由SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(c)包含含有编码由SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(d)包含含有编码由SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，和包含含有编码由SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(e)包含含有编码由SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(f)包含含有编码由SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(g)包含含有编码由SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，和包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(h)包含含有编码由SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，和包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(i)包含含有编码由SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(j)包含含有编码由SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码由SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(k)包含含有编码由SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码由SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(l)包含含有编码由SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体、包含含有编码由SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(m)包含含有编码由SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸、含有编码由SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体。

(a)包含含有编码由SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(b)包含含有编码由SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(c)包含含有编码由SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(d)包含含有编码由SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，和包含含有编码由SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(e)包含含有编码由SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(f)包含含有编码由SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(g)包含含有编码由SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，和包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(h)包含含有编码由SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，和包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(i)包含含有编码由SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(j)包含含有编码由SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有包含由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码由SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(k)包含含有编码由SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码由SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(l)包含含有编码由SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体、包含含有编码由SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(m)包含含有编码由SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸、含有编码由SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体。

(a)包含含有编码由SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(b)包含含有编码由SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(c)包含含有编码由SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(d)包含含有编码由SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，和包含含有编码由SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(e)包含含有编码由SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(f)包含含有编码由SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(g)包含含有编码由SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，和包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(h)包含含有编码由SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，和包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(i)包含含有编码由SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(j)包含含有编码由SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码由SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(k)包含含有编码由SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码由SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(l)包含含有编码由SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体、包含含有编码由SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(m)包含含有编码由SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸、含有编码由SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体。

(a)包含含有编码如[15]所述的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(b)包含含有编码如[15]所述的单臂抗人NR1抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(c)包含含有编码如[15]所述的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(d)包含含有编码如[15]所述的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，和包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(e)包含含有编码如[15]所述的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(f)包含含有编码如[15]所述的单臂抗人NR1抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(g)包含含有编码如[15]所述的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，和包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(h)包含含有编码如[15]所述的单臂抗人NR1抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，和包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(i)包含含有编码如[15]所述的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(j)包含含有编码如[15]所述的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(k)包含含有编码如[15]所述的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(l)包含含有编码如[15]所述的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体、包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(m)包含含有编码如[15]所述的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸、含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体。

一种用于产生单臂抗人NR1抗体的方法，其包括培养如[35]至[43]中任一项所述的宿主细胞，并表达构成单臂抗人NR1抗体的多肽。

一种药物组合物，其包含如[1]至[17]中任一项所述的单臂抗人NR1抗体和药学上可接受的赋形剂。

如[45]所述的药物组合物，其中所述药物组合物用于治疗抗NMDAR脑炎。

一种治疗抗NMDAR脑炎的方法，其包括施用治疗有效量的如[1]至[17]中任一项所述的单臂抗人NR1抗体。

如[1]至[17]中任一项所述的单臂抗人NR1抗体，其用于治疗抗NMDAR脑炎。

如[1]至[17]中任一项所述的单臂抗人NR1抗体在产生用于治疗抗NMDAR脑炎的药物组合物方面的用途。

一种选自以下(1)至(4)中任一项的单价抗人NR1抗体衍生物：

(1)一种包含重链可变区以及轻链可变区的单价抗人NR1抗体衍生物，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:6的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:6的氨基酸编号50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:6的氨基酸编号99至110的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:8的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:8的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:8的氨基酸编号89至98的氨基酸序列组成的CDR3；

(2)一种包含重链可变区以及轻链可变区的单价抗人NR1抗体衍生物，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:10的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:10的氨基酸编号50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:10的氨基酸编号99至111的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:12的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:12的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:12的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3；

(3)一种包含重链可变区以及轻链可变区的单价抗人NR1抗体衍生物，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:14的氨基酸编号31至36的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:14的氨基酸编号51至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:14的氨基酸编号99至108的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:16的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:16的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:16的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3；

(4)一种包含重链可变区以及轻链可变区的单价抗人NR1抗体衍生物，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:18的氨基酸编号31至36的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:18的氨基酸编号51至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:18的氨基酸编号99至108的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:20的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:20的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:20的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3。

一种选自以下(1)至(4)中任一项的单价抗人NR1抗体衍生物：

(1)一种单价抗人NR1抗体衍生物，其包含由SEQ ID NO:6中所示氨基酸序列组成的重链可变区，和由SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列组成的轻链可变区；

(2)一种单价抗人NR1抗体衍生物，其包含由SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列组成的重链可变区，和由SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列组成的轻链可变区；

(3)一种单价抗人NR1抗体衍生物，其包含由SEQ ID NO:14中所示氨基酸序列组成的重链可变区，和由SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列组成的轻链可变区；

(4)一种单价抗人NR1抗体衍生物，其包含由SEQ ID NO:18中所示氨基酸序列组成的重链可变区，和由SEQ ID NO:20中所示氨基酸序列组成的轻链可变区。

一种单价抗人NR1抗体衍生物，其中所述抗体与包含由SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列组成的轻链可变区的抗人NR1抗体竞争性地结合人NR1，并且抑制由来源于抗NMDAR脑炎患者的致病性抗人NR1抗体引起的NMDAR细胞内化。

一种多肽，其包含编码如[50]至[52]中任一项所述的单价抗人NR1抗体衍生物的核苷酸序列。

一种表达载体，其包含如[53]所述的多核苷酸。

一种宿主细胞，其用如[54]所述的表达载体转化。

一种用于产生单价抗人NR1抗体衍生物的方法，其包括培养如[55]所述的宿主细胞，并表达构成单价抗人NR1抗体衍生物的多肽。

一种药物组合物，其包含如[50]至[52]中任一项所述的单价抗人NR1抗体衍生物和药学上可接受的赋形剂。

如[57]所述的药物组合物，其中所述药物组合物用于治疗抗NMDAR脑炎。

一种治疗抗NMDAR脑炎的方法，其包括施用治疗有效量的如[50]至[52]中任一项所述的单价抗人NR1抗体衍生物。

如[50]至[52]中任一项所述的单价抗人NR1抗体衍生物，其用于治疗抗NMDAR脑炎。

如[50]至[52]中任一项所述的单价抗人NR1抗体衍生物在产生用于治疗抗NMDAR脑炎的药物组合物方面的用途。

本发明的效果

本发明的单价人NR1抗体衍生物可以通过与来源于抗NMDAR脑炎患者的致病性抗人NR1抗体竞争性地结合NMDAR并且抑制NMDAR内化而用作治疗剂。

附图说明

图1示出了来源于P003-102的致病性抗人NR1抗体P003-102和单臂抗人NR1抗体(ABN-5)与表达NMDAR的HEK细胞的结合活性。纵轴表示结合活性(ΔGeoMFI：添加测试抗体时的几何平均荧光强度和未添加测试抗体(仅荧光标记的第二抗体)时的几何平均荧光强度之间的差异)，并且横轴表示抗体浓度。

图2示出了实施例5中分离的新型小鼠抗人NR1抗体对致病性抗人NR1抗体P003-102与人NR1结合的抑制活性。纵轴表示小鼠抗人NR1抗体对生物素标记的P003-102与人NR1蛋白结合的抑制活性(抑制率)。横轴表示抗体浓度。

图3示出了人源化单臂抗人NR1抗体与表达NMDAR的HEK细胞的结合活性。纵轴表示几何平均荧光强度(GeoMFI)，并且横轴表示抗体浓度。

图4示出了ABN-2、ABN-4和ABN-5对致病性抗人NR1抗体P003-102的抑制活性。纵轴表示生物素标记的P003-102对与人NR1蛋白结合的抑制活性(抑制率)，并且横轴表示抗体浓度。

图5示出了由致病性抗人NR1抗体混合物引起的ABN-2对细胞表面上NMDAR表达水平的拯救效应。纵轴表示表达NMDAR的HEK细胞的细胞表面上的NR1表达率(％)，并且横轴表示抗体浓度。

图6示出了ABN-2对由致病性抗人NR1抗体P003-102引起的NMDAR离子通道功能下降的拯救效应。纵轴表示由NMDA刺激引起的钙离子内流，并且横轴表示抗体浓度。

图7示出了ABN-2对普通狨猴(下文称为“狨猴”)的治疗效果，其中通过连续脑室内施用致病性抗人NR1抗体P003-102诱导了抗NMDAR脑炎样症状。第0天是开始向对照抗体施用组(P003-102+对照抗体，n＝3)和ABN-2施用组(P003-102+ABN-2，n＝9)中的狨猴施用P003-102的那一天。从第14天(第14天)至第28天(第28天)，连续14天脑室内施用对照抗体或ABN-2。图7左边、中间和右边的纵轴分别表示异常评定量表(ARS)，其是由帕金森病统一量表(UPDRS,Behav.Brain Res.2008,第194卷,第152-161页)修改而来的。分别地，图7的左边显示了对照抗体施用组和ABN-2施用组在第0天的ARS，图7的中间显示了在第14天的ARS，并且图7的右边显示了在第28天的ARS。

图8示出了ABN-2对普通狨猴的治疗效果，其中针对ABN-2施用组(P003-102+ABN-2)中的每个个体，通过连续脑室内施用致病性抗人NR1抗体P003-102诱导了抗NMDAR脑炎样症状，作为ARS随时间的变化。

图9示出了单臂抗体的示意图。

具体实施方式

以下是本发明的详细说明。

抗体(或免疫球蛋白)分子是由多个单位构成的糖蛋白。存在五种类别的抗体：IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。所有类别共有的抗体分子的基本结构是Y形四链结构，其包括两条分子量为50,000至70,000的重链和两条分子量为20,000至30,000的轻链。重链通常由包含约440个氨基酸的多肽链组成，并且根据类别具有特征性结构，它们被称为Igγ、Igμ、Igα、Igδ和Igε，分别对应于IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。此外，IgG具有IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的亚类，并且对应的重链分别称为Igγ1、Igγ2、Igγ3和Igγ4。轻链通常由包含约220个氨基酸的多肽链组成，并且已知两种类型：L型和K型，分别称为Igλ和Igκ。这两种类型的轻链可以与任何类型的重链配对。抗体分子基本结构的肽组成由两条相同的重链和两条相同的轻链组成，各自通过二硫键和非共价键连接，并且抗体分子的分子量为150,000至190,000。

抗体分子在重链中有四个链内二硫键(在Igμ和Igε中有五个)并且在轻链中有两个，每100至110个氨基酸残基形成一个环。它们在环之间的构象是相似的，并且被称为结构单元或结构域。重链和轻链两者都位于N-末端处的结构域，即使样品来自同一动物种类的同一类别(亚类)，也具有不同的氨基酸序列并且被称为可变区。重链和轻链的每个N-末端结构域分别被称为“重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)”。可变区下游的C-末端结构域的氨基酸序列对于每个类别或亚类几乎是恒定的，并且被称为“恒定区”。重链恒定区(CH)从N-末端侧进一步分为三个结构域：CH1、CH2和CH3。轻链恒定区被称为“CL”。

在抗体的Y形结构中，对应于Y形下半部中竖线的部分被称为“Fc(片段，可结晶)区”。Fc区由两个“Fc多肽”组成。Fc多肽由重链的CH2和CH3结构域组成。另一方面，在抗体的Y形结构中，在Y形结构的上半部中，对应于构成V形部分的对角线的部分被称为“Fab(片段，抗原结合)区”。Fab区由重链和轻链(VL和CL)的VH和CH1结构域组成。抗体在由两个Fab区构成的V形的尖端部分(抗原结合位点)处与抗原结合。重链的Fab区和Fc区通过称为铰链区的区域连接。此外，抗体的两条重链是二硫键连接的。

“抗原结合位点”由VH和VL构成，并且对抗原的结合特异性由该位点处的氨基酸序列决定。另一方面，生物学活性(如与补体和各种Fc受体表达细胞的结合)反映了每个Ig类别的恒定区的结构差异。轻链和重链可变区的可变性已被理解为限于三个小的高变区，其存在于两条链中，并且被称为“互补决定区(CDR)”并在氨基酸序列中具有相对大的变化。另一方面，可变区的其余部分被称为框架区(FR)，其由FR1至FR4组成，并且氨基酸序列的变化相对较小。

在重链和轻链的每个N-末端中有三个CDR，顺序为“CDR1”、“CDR2”和“CDR3”，由约5至10个氨基酸残基组成。特别地，已知重链的CDR有助于与抗原结合。另外，在CDR1至CDR3中，已知CDR3的贡献是最大的。

本文所用抗体的氨基酸残基编号可以根据它们的编号系统，通过指定卡巴特编号或EU索引来定义(Kabat,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,1991,NIH出版物编号91-3242)。

本文中的“抗体衍生物”是包含至少一条衍生自全长免疫球蛋白分子的多肽链的分子，其具有抗原结合活性。代表性的抗体衍生物包括单链可变区片段(scFv)、Fab片段、Fab'片段和F(ab')2片段。“scFv”是由通过接头连接的VH和VL组成的单价抗体衍生物。“Fab片段”是单价抗体衍生物，其由包含VH、CH1结构域和铰链区中一部分的轻链和重链片段组成。“F(ab')2Fab'片段”是单价抗体衍生物，其由包含VH、CH1结构域和铰链区中一部分的轻链和重链片段组成，并且铰链区的该部分包含构成重链之间S-S结合的半胱氨酸残基。术语“单价”意指包含一个抗原结合位点。

“单臂抗体”也是一种类型的抗体衍生物。在本文中，“单臂抗体”是包含一个Fab区和一个Fc区的单价抗体衍生物，其中Fab区与Fc区中两个Fc多肽之一连接。Fab区和一个Fc多肽可以经由铰链区或肽接头连接。在一个实施方案中，单臂抗体包含一条重链(VH、CH1结构域、铰链区、Fc多肽(CH2结构域和CH3结构域))、一条轻链(VL和CL)和Fc多肽(图9)。在一个实施方案中，单臂抗体是包含一条重链、一条轻链和Fc多肽的单臂抗体，其中将铰链区添加到Fc多肽(图9-左边)。在一个实施方案中，单臂抗体是由一条重链、一条轻链和Fc多肽组成的单臂抗体，其中CH1结构域经由铰链区与Fc多肽连接(图9-中间)。在一个实施方案中，单臂抗体是由一条重链、一条轻链和Fc多肽组成的单臂抗体(图9–右边)。在一个实施方案中，单臂抗体可以具有通过铰链区部分中重链之间的S-S键结合的两个Fc多肽(图9-左边和中间)，或者这两个Fc多肽可以在一个或两个Fc多肽中包含经修饰的残基或添加的半胱氨酸残基，以允许它们彼此结合(图9-右边)。

本文中的“抗人NR1抗体”意指与人NR1结合的抗体。它是否与人NR1结合可以使用熟知的用于测量结合活性的方法来确定。用于测量结合活性的方法包括，例如，酶联免疫吸附测定(ELISA)。如果使用ELISA，例如，将可以通过参考GenBank登录号NP_015566.1中所示的氨基酸序列产生的人NR1蛋白的全长或部分多肽在ELISA板上固相化，并且在通过添加测试抗体反应后，将其与第二抗体(如用酶如辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗IgG抗体)反应。在反应后，通过使用检测其活性的试剂等进行洗涤操作和活性测量来鉴定第二抗体的结合，可以确认测试抗体是否与人NR1结合。作为具体的评价方法，例如，可以使用以下实施例5中描述的方法。

除了抗人NR1之外，本发明的抗人NR1抗体还包含与来源于另一种动物的NR1结合(例如，抗猴NR1)的抗体，只要所述抗体与人NR1结合。

<本发明的单臂抗人NR1抗体>

在本文中，“单臂抗人NR1抗体”是与人NR1结合的单臂抗体。

本发明的单臂抗人NR1抗体包含选自以下(1)至(5)中任一项的单臂抗人NR1抗体：

(2)一种包含重链可变区和轻链可变区的单臂抗人NR1抗体，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:6的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:6的氨基酸编号50至60的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:6的氨基酸编号99至110的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:8的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:8的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ IDNO:8的氨基酸编号89至98的氨基酸序列组成的CDR3；

在一个实施方案中，本发明的单臂抗人NR1抗体是选自以下(6)至(10)中任一项的单臂抗人NR1抗体：

(6)一种单臂抗人NR1抗体，其包含由SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列组成的重链可变区，和由SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列组成的轻链可变区；

(7)一种单臂抗人NR1抗体，其包含由SEQ ID NO:6中所示氨基酸序列组成的重链可变区，和由SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列组成的轻链可变区；

(8)一种单臂抗人NR1抗体，其包含由SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列组成的重链可变区，和由SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列组成的轻链可变区；

(9)一种单臂抗人NR1抗体，其包含由SEQ ID NO:14中所示氨基酸序列组成的重链可变区，和由SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列组成的轻链可变区；

(10)一种单臂抗人NR1抗体，其包含由SEQ ID NO:18中所示氨基酸序列组成的重链可变区，和由SEQ ID NO:20中所示氨基酸序列组成的轻链可变区。

在一个实施方案中，本发明的单臂抗人NR1抗体是选自以下(1)至(5)中任一项的单臂抗人NR1抗体：

(6)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区由SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列组成，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区由SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列组成；

(7)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区由SEQ ID NO:6中所示氨基酸序列组成，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区由SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列组成；

(8)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区由SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列组成，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区由SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列组成；

(9)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区由SEQ ID NO:14中所示氨基酸序列组成，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区由SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列组成；

(10)一种包含重链、轻链以及Fc多肽单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区由SEQ ID NO:18中所示氨基酸序列组成，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区由SEQ ID NO:20中所示氨基酸序列组成。

作为衍生本发明的单臂抗人NR1抗体的CH1结构域和FC多肽的重链恒定区，可以选择Igγ、Igμ、Igα、Igδ或Igε恒定区中的任一种。例如，Igγ可以选自Igγ1、Igγ2、Igγ3或Igγ4。在一个实施方案中，本发明的单臂抗人NR1抗体包含衍生自Igγ1恒定区的CH1结构域和Fc多肽。在一个实施方案中，本发明的单臂抗人NR1抗体包含衍生自人Igγ1恒定区的CH1结构域和Fc多肽。

作为本发明的单臂抗人NR1抗体的CL，可以选择Igλ或Igκ恒定区中的任一种。在一个实施方案中，本发明的单臂抗人NR1抗体包含作为Igk恒定区的CL。在一个实施方案中，本发明的单臂抗人NR1抗体包含作为人Igκ恒定区的CL。

本发明的单臂抗人NR1抗体的重链恒定区可以具有降低抗体依赖性细胞毒性活性或补体依赖性细胞毒性活性的突变。L234A表示根据人Igγ1恒定区中的EU指数，在氨基酸位置234处用丙氨酸取代亮氨酸。L235A表示根据人Igγ1恒定区中的EU指数，在氨基酸位置235处用丙氨酸取代亮氨酸。具有L234A和L235A氨基酸突变(下文称为“LALA突变”)的人Igγ1恒定区包括，例如，由SEQ ID NO:22中氨基酸编号121至450的氨基酸序列组成的人Igγ1恒定区。已知所述突变降低所述抗体的抗体依赖性细胞毒性活性和补体依赖性细胞毒性活性(Mol.Immunol.,1992,第29卷,第633-639页/J.Immunol.,2000,第164卷,第4178-4184页)。另外，在小鼠抗体中，已知IgG1中的D265A氨基酸突变降低所述抗体的抗体依赖性细胞毒性活性和补体依赖性细胞毒性活性(J.Immunol.,2008,第181卷,第6664-6669页/Nat.Med.,2000,第6卷,第443-446页)。如果要在小鼠模型中观察抗体依赖性细胞毒性活性或补体依赖性细胞毒性活性降低的抗体的效果，可以使用具有D265A氨基酸突变抗体的小鼠抗体代替具有LALA突变的人抗体。

基于已知技术的其他突变也可以被引入本发明的单臂抗人NR1抗体的重链恒定区中。例如，本发明的单臂抗人NR1抗体可以具有基于杵臼技术的突变(下文称为“杵臼突变”)。杵臼技术是一种通过用较大的侧链(旋钮)取代一条重链的CH3区中存在的氨基酸侧链，并用较小的侧链(孔)取代另一条重链的CH3区中存在的氨基酸侧链，使得旋钮位于孔内，由此促进重链的异二聚化，从而有效获得所期望异二聚化抗体分子的技术(Nature,1994,第372卷,第379-383页/Nature Biotech.,1998,第16卷,第677-681页/J.Mol.Biol.,1997,第270卷,第26-35页/Proc.Natl.Acad.Sci.USA,2013,第110卷,第E2987-E2996页)。

在一个实施方案中，本发明的单臂抗人NR1抗体包含具有L234A和L235A氨基酸突变(LALA突变)的Fc区。

在一个实施方案中，本发明的单臂抗人NR1抗体包含具有杵臼突变的Fc区。

在一个实施方案中，本发明的单臂抗人NR1抗体包含具有L234A和L235A氨基酸突变(LALA突变)和杵臼突变的Fc区。

在一个实施方案中，本发明的单臂抗人NR1抗体的杵臼突变是形成其Fc区的一个Fc多肽中的T366W突变和形成其Fc区的另一个Fc多肽中的T366S、L368A和Y407V突变(参见WO1998/050431)。

本文中的“人抗体”是指具有人免疫球蛋白氨基酸序列的抗体。本文中的“人源化抗体”是指其中除了CDR之外的一些、大部分或所有氨基酸残基被衍生自人免疫球蛋白分子的氨基酸残基取代的抗体。可以通过参考例如美国专利号5225539和美国专利号6180370等来产生人源化抗体。

在一个实施方案中，本发明的单臂抗人NR1抗体是人抗体或人源化抗体。

在一个实施方案中，本发明的单臂抗人NR1抗体是包含以下的单臂抗人NR1抗体：由SEQ ID NO:22中所示氨基酸序列组成的重链、由SEQ ID NO:24中所示氨基酸序列组成的轻链，以及由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽。

包含SEQ ID NO:22中所示氨基酸序列的重链具有LALA突变，并且所述突变位于SEQ ID NO:22中氨基酸编号237和238处的丙氨酸残基中。

由SEQ ID NO:22中所示氨基酸序列组成的重链具有杵臼突变(T366S、L368A和Y407V)，并且所述突变位于SEQ ID NO:22中氨基酸编号369处的丝氨酸残基、氨基酸编号371处的丙氨酸残基和氨基酸编号410处的缬氨酸残基中。

由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽具有LALA突变，并且所述突变位于SEQ ID NO:42中氨基酸编号9和10处的丙氨酸残基中。包含SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列的Fc多肽也具有杵臼突变(T366W)，并且所述突变位于氨基酸编号141处的色氨酸残基中。

在一个实施方案中，本发明的单臂抗人NR1抗体是包含以下的单臂抗人NR1抗体：由SEQ ID NO:26中所示氨基酸序列组成的重链、由SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列组成的轻链，以及由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽。

在一个实施方案中，本发明的单臂抗人NR1抗体是包含以下的单臂抗人NR1抗体：由SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列组成的重链、由SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列组成的轻链，以及由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽。

在一个实施方案中，本发明的单臂抗人NR1抗体是包含以下的单臂抗人NR1抗体：由SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列组成的重链、由SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列组成的轻链，以及由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽。

在一个实施方案中，本发明的单臂抗人NR1抗体是包含以下的单臂抗人NR1抗体：由SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列组成的重链、由SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列组成的轻链，以及由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽。

像由SEQ ID NO:22中所示氨基酸序列组成的重链一样，由SEQ ID NO:26、30、34和38中所示氨基酸序列组成的重链也具有LALA突变和杵臼突变(T366S、L368A和Y407V)。

在一个实施方案中，本发明的单臂抗人NR1抗体与包含由SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列组成的轻链可变区的抗人NR1抗体竞争性地结合人NR1，并且抑制由来源于抗NMDAR脑炎患者的致病性抗人NR1抗体引起的NMDAR受体细胞内化。

在本文中，两种抗体“竞争性地”结合同一抗原蛋白意指这两种抗体各自结合的抗原蛋白上的表位是相同的，或者这两种抗体各自结合的抗原蛋白上的表位的一部分是共同的，或者与该抗原蛋白上的表位结合的抗体之一改变了抗原蛋白的三维结构，该抗原蛋白包含另一抗体在所述抗原蛋白上结合的表位部分，从而导致所述另一抗体将不再能够与所述抗原蛋白上的表位部分结合。

例如，本领域技术人员可以获得多个单臂抗人NR1抗体，所述抗体是基于用人NR1多肽免疫小鼠或大鼠获得的抗体而产生的。然后，根据实施例3-5等中公开的方法，在本文中，通过使用包含由SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列组成的轻链可变区的抗人NR1抗体进行筛选，并且选择与抗人NR1抗体竞争性地结合人NR1并抑制由致病性抗人NR1抗体引起的NMDA受体细胞内化的抗人NR1抗体，可以从获得的多种抗人NR1抗体中选择单臂抗人NR1抗体。

“与包含由SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列组成的轻链可变区的抗人NR1抗体竞争性地结合人NR1的单臂抗人NR1抗体”包括，例如，ABN_1-1-175、ABN_1-178.3、ABN_3-385、ABN_3-502及其衍生物，它们被鉴定为本文实施例5中描述的ELISA竞争性测定的结果。

“与包含由SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列组成的轻链可变区的抗人NR1抗体竞争性地结合人NR1并且抑制由来源于抗NMDAR脑炎患者的致病性抗人NR1抗体引起的NMDAR受体细胞内化的单臂抗人NR1抗体”包括，例如，ABN_1-175、ABN_1-178、ABN_3-385、ABN_3-502或包含实施例1中描述的P003-102的抗原结合位点的单臂抗体，或更具体地，本文实施例2或实施例6中产生的单臂抗人NR1抗体ABN-1至-5。

当抗体在细胞中表达时，已知它们经历翻译后修饰。翻译后修饰的示例包括由羧肽酶切割重链C-末端赖氨酸，通过焦谷氨酰化、糖基化、氧化、脱酰胺和糖化等用焦谷氨酸修饰重链和轻链N-末端谷氨酰胺或谷氨酸。已知此类翻译后修饰发生在各种抗体中(J.Pharm.Sci.,2008,第97卷,第2426-2447页)。

由翻译后修饰产生的本发明的单臂抗人NR1抗体的示例包括经历了重链可变区的N-末端焦谷氨酰化和/或重链C-末端赖氨酸缺失的单臂抗人NR1抗体。本领域已知通过N-末端焦谷氨酰化或C-末端赖氨酸缺失进行的此类翻译后修饰不影响抗体的活性(Anal.Biochem.,2006,第348卷,第24-39页)。

在一个实施方案中，单臂抗人NR1抗体由翻译后修饰产生。

在一个实施方案中，单臂抗人NR1抗体由本发明单臂抗人NR1抗体的重链可变区的N-末端焦谷氨酰化和/或重链C-末端赖氨酸缺失的翻译后修饰产生。

基于本文公开的本发明单臂抗人NR1抗体的VH和VL序列信息等，本发明的单臂抗人NR1抗体可以由本领域技术人员使用本领域熟知的方法容易地产生。本发明的单臂抗人NR1抗体可以通过例如以下“用于产生本发明的单臂抗人NR1抗体的方法，以及由此产生的单臂抗人NR1抗体”中描述的方法产生，但不限于此。

如果需要，则本发明的单臂抗人NR1抗体在进一步纯化后，通过标准方法配制，并且可以用于治疗抗NMDAR脑炎等。

<本发明的多核苷酸>

本发明的多核苷酸包括包含编码本发明单臂抗人NR1抗体的重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸和包含编码本发明单臂抗人NR1抗体的轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸。

在一个实施方案中，本发明的多核苷酸是包含以下(a)和/或(b)中描述的序列的多核苷酸：

(a)选自以下(a-1)至(a-4)的编码单臂抗人NR1抗体的重链可变区的核苷酸序列：

(a-1)包含由SEQ ID NO:6的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQID NO:6的氨基酸编号50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:6的氨基酸编号99至110的氨基酸序列组成的CDR3的重链可变区；

(a-2)包含由SEQ ID NO:10的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQID NO:10的氨基酸编号50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:10的氨基酸编号99至111的氨基酸序列组成的CDR3的重链可变区；

(a-3)包含由SEQ ID NO:14的氨基酸编号31至36的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQID NO:14的氨基酸编号51至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:14的氨基酸编号99至108的氨基酸序列组成的CDR3的重链可变区；

(a-4)包含由SEQ ID NO:18的氨基酸编号31至36的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQID NO:18的氨基酸编号51至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:18的氨基酸编号99至108的氨基酸序列组成的CDR3的重链可变区；和/或

(b)选自以下(b-1)至(b-4)的编码单臂抗人NR1抗体的轻链可变区的核苷酸序列：

(b-1)包含由SEQ ID NO:8的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQID NO:8的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:8的氨基酸编号89至98的氨基酸序列组成的CDR3的轻链可变区；

(b-2)包含由SEQ ID NO:12的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQID NO:12的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:12的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3的轻链可变区；

(b-3)包含由SEQ ID NO:16的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQID NO:16的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:16的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3的轻链可变区；

(b-4)包含由SEQ ID NO:20的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQID NO:20的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:20的氨基酸编号89至98的氨基酸序列组成的CDR3的轻链可变区。

在一个实施方案中，本发明的多核苷酸是包含以下(a)和/或(b)中描述的核苷酸序列的多核苷酸：

(a-1)由SEQ ID NO:6中所示氨基酸序列组成的重链可变区；

(a-2)由SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列组成的重链可变区；

(a-3)由SEQ ID NO:14中所示氨基酸序列组成的重链可变区；

(a-4)由SEQ ID NO:18中所示氨基酸序列组成的重链可变区；和/或

(b-1)由SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列组成的轻链可变区；

(b-2)由SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列组成的轻链可变区；

(b-3)由SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列组成的轻链可变区；

(b-4)由SEQ ID NO:20中所示氨基酸序列组成的轻链可变区。

(a)选自以下(a-1)至(a-4)的编码单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列：

(a-1)包含重链可变区的重链，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:6的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:6的氨基酸编号50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:6的氨基酸编号99至110的氨基酸序列组成的CDR3；

(a-2)包含重链可变区的重链，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:10的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:10的氨基酸编号50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:10的氨基酸编号99至111的氨基酸序列组成的CDR3；

(a-3)包含重链可变区的重链，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:14的氨基酸编号31至36的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:14的氨基酸编号51至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:14的氨基酸编号99至108的氨基酸序列组成的CDR3；

(a-4)包含重链可变区的重链，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:18的氨基酸编号31至36的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:18的氨基酸编号51至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:18的氨基酸编号99至108的氨基酸序列组成的CDR3；和/或

(b)选自以下(b-1)至(b-4)的编码单臂抗人NR1抗体的轻链的核苷酸序列：

(b-1)包含轻链可变区的轻链，所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:8的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:8的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:8的氨基酸编号89至98的氨基酸序列组成的CDR3；

(b-2)包含轻链可变区的轻链，所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:12的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:12的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:12的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3；

(b-3)包含轻链可变区的轻链，所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:16的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:16的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:16的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3；

(b-4)包含轻链可变区的轻链，所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:20的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:20的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:20的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3。

在一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含以下(a)和/或(b)中描述的核苷酸序列：

(a-1)包含由SEQ ID NO:6中所示氨基酸序列组成的重链可变区的重链；

(a-2)包含由SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列组成的重链可变区的重链；

(a-3)包含由SEQ ID NO:14中所示氨基酸序列组成的重链可变区的重链；

(a-4)包含由SEQ ID NO:18中所示氨基酸序列组成的重链可变区的重链；和/或

(b-1)包含由SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列组成的轻链可变区的轻链；

(b-2)包含由SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列组成的轻链可变区的轻链；

(b-3)包含由SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列组成的轻链可变区的轻链；

(b-4)包含由SEQ ID NO:20中所示氨基酸序列组成的轻链可变区的轻链。

(a)编码由SEQ ID NO:26中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列；和/或

编码由SEQ ID NO:26中所示氨基酸序列组成的重链的多核苷酸包括，例如，包含SEQ ID NO:25中所示核苷酸序列的多核苷酸。

编码由SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列组成的轻链的多核苷酸包括，例如，包含SEQ ID NO:27中所示核苷酸序列的多核苷酸。

(a)编码由SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列；和/或

包含编码由SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸包括，例如，包含SEQ ID NO:29中所示核苷酸序列的多核苷酸。

包含编码由SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸包括，例如，包含SEQ ID NO:31中所示核苷酸序列的多核苷酸。

(a)编码由SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列；和/或

包含编码由SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸包括，例如，包含SEQ ID NO:33中所示核苷酸序列的多核苷酸。

包含编码由SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸包括，例如，包含SEQ ID NO:35中所示核苷酸序列的多核苷酸。

(a)编码由SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列；和/或

包含编码由SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸包括，例如，包含SEQ ID NO:37中所示核苷酸序列的多核苷酸。

包含编码由SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸包括，例如，包含SEQ ID NO:39中所示核苷酸序列的多核苷酸。

在一个实施方案中，本发明的多核苷酸可以进一步包含编码Fc多肽的核苷酸序列，并且在一个实施方案中，本发明的多核苷酸可以包含编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列。

在一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含以下(a)和/或(b)和(c)中描述的核苷酸序列：

(a)编码由SEQ ID NO:22中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列；

(b)编码由SEQ ID NO:24中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列。

(c)编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列。

包含编码由SEQ ID NO:22中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸包括，例如，包含SEQ ID NO:21中所示核苷酸序列的多核苷酸。

包含编码由SEQ ID NO:24中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸包括，例如，包含SEQ ID NO:23中所示核苷酸序列的多核苷酸。

在一个实施方案中，本发明的多核苷酸是包含编码单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列和/或编码单臂抗人NR1抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸，其中所述抗体与包含由SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列组成的轻链可变区的抗人NR1抗体竞争性地结合人NR1，并且抑制由来源于抗NMDAR脑炎患者的致病性抗人NR1抗体引起的NMDAR细胞内化。

本发明的多核苷酸可以由本领域技术人员基于其核苷酸序列并且通过使用本领域熟知的方法容易地产生。例如，本发明的多核苷酸可以通过利用本领域已知的基因合成方法来合成。可以使用的此类基因合成方法包括本领域技术人员已知的各种方法，如WO90/07861中描述的用于合成抗体基因的方法。

<本发明的表达载体>

本发明的表达载体包括包含含有编码单臂抗人抗体的重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体、包含含有编码单臂抗人抗体的轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码本发明单臂抗人抗体的重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体。此外，本发明的表达载体包括包含含有编码本发明单臂抗人抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体、包含含有编码本发明单臂抗人抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码本发明单臂抗人抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体。本发明的表达载体可以包含含有编码Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸。

在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链可变区包含由SEQID NO:2的氨基酸编号26至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:2的氨基酸编号52至58的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:2的氨基酸编号97至109的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:4的氨基酸编号26至33的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:4的氨基酸编号51至53的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:4的氨基酸编号92至100的氨基酸序列组成的CDR3。在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链可变区由SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列组成，并且所述轻链可变区由SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列组成。在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链包含含有由SEQ ID NO:2的氨基酸编号26至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:2的氨基酸编号52至58的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:2的氨基酸编号97至109的氨基酸序列组成的CDR3的重链可变区，并且所述轻链包含含有由SEQ ID NO:4的氨基酸编号26至33的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:4的氨基酸编号51至53的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:4的氨基酸编号92至100的氨基酸序列组成的CDR3的轻链可变区。在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链包含由SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列组成的重链可变区，并且所述轻链包含由SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列组成的轻链可变区。在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链由SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列组成，并且所述轻链由SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列组成。

在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链可变区包含由SEQID NO:6的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:6的氨基酸编号50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:6的氨基酸编号99至110的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:8的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:8的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:8的氨基酸编号89至98的氨基酸序列组成的CDR3。在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链可变区由SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列组成，并且所述轻链可变区由SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列组成。在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链包含含有由SEQ ID NO:6的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:6的氨基酸编号50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:6的氨基酸编号99至110的氨基酸序列组成的CDR3的重链可变区，并且所述轻链包含含有由SEQ ID NO:8的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:8的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:8的氨基酸编号89至98的氨基酸序列组成的CDR3的轻链可变区。在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链包含由SEQ ID NO:6中所示氨基酸序列组成的重链可变区，并且所述轻链包含由SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列组成的轻链可变区。在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链由SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列组成，并且所述轻链由SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列组成。

在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链可变区包含由SEQID NO:10的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:10的氨基酸编号50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:10的氨基酸编号99至111的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:12的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:12的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:12的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3。在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链可变区由SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列组成，并且所述轻链可变区由SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列组成。在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链包含含有由SEQ ID NO:10的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQID NO:10的氨基酸编号50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:10的氨基酸编号99至111的氨基酸序列组成的CDR3的重链可变区，并且所述轻链包含含有由SEQ ID NO:12的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:12的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:12的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3的轻链可变区。在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链包含由SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列组成的重链可变区，并且所述轻链包含由SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列组成的轻链可变区。在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链由SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列组成，并且所述轻链由SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列组成。

在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链可变区包含由SEQID NO:14的氨基酸编号31至36的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:14的氨基酸编号51至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:14的氨基酸编号99至108的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:16的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:16的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:16的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3。在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链可变区由SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列组成，并且所述轻链可变区由SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列组成。在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链包含含有由SEQ ID NO:14的氨基酸编号31至36的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQID NO:14的氨基酸编号51至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:14的氨基酸编号99至108的氨基酸序列组成的CDR3的重链可变区，并且所述轻链包含含有由SEQ ID NO:16的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:16的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:16的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3的轻链可变区。在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链包含由SEQ ID NO:14中所示氨基酸序列组成的重链可变区，并且所述轻链包含由SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列组成的轻链可变区。在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链由SEQ ID NO:34中所示的氨基酸序列组成，并且所述轻链由SEQ ID NO:36中所示的氨基酸序列组成。

在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链可变区包含由SEQID NO:18的氨基酸编号31至36的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:18的氨基酸编号51至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:18的氨基酸编号99至108的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:20的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:20的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:20的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3。在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链可变区由SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列组成，并且所述轻链可变区由SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列组成。在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链包含含有由SEQ ID NO:18的氨基酸编号31至36的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQID NO:18的氨基酸编号51至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:18的氨基酸编号99至108的氨基酸序列组成的CDR3的重链可变区，并且所述轻链包含含有由SEQ ID NO:20的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:20的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:20的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3的轻链可变区。在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链包含由SEQ ID NO:18中所示氨基酸序列组成的重链可变区，并且所述轻链包含由SEQ ID NO:20中所示氨基酸序列组成的轻链可变区。在一个实施方案中，本发明的表达载体包含含有编码重链的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码轻链的核苷酸序列的多核苷酸，所述重链由SEQ ID NO:38中所示的氨基酸序列组成，并且所述轻链由SEQ ID NO:40中所示的氨基酸序列组成。

在一个实施方案中，本发明的表达载体可以进一步包含含有编码Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸。在一个实施方案中，本发明的表达载体可以进一步包含含有编码SEQ IDNO:42中所示Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸。

在一个实施方案中，本发明的表达载体是包含含有编码单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，其中所述抗体与包含由SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQID NO:4中所示氨基酸序列组成的轻链可变区的抗人NR1抗体竞争性地结合人NR1，并且抑制由来源于抗NMDAR脑炎患者的致病性抗人NR1抗体引起的NMDAR细胞内化。

在一个实施方案中，本发明的表达载体是包含含有编码单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸和/或含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和所述抗体的Fc多肽的表达载体，其中所述抗体与包含由SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列组成的轻链可变区的抗人NR1抗体竞争性地结合人NR1，并且抑制由来源于抗NMDAR脑炎患者的致病性抗人NR1抗体引起的NMDAR细胞内化。

用于表达本发明多核苷酸的表达载体包括但不限于可以在各种宿主细胞如真核细胞(例如动物细胞、昆虫细胞、植物细胞和酵母)和/或原核细胞(例如大肠杆菌)中表达包含编码本发明单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸、包含编码本发明单臂抗人NR1抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸，或包含编码Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，所述Fc多肽与重链结合以形成Fc区，并且产生由它们编码的多肽。这种表达载体包括，例如，质粒载体、病毒载体(例如，腺病毒和逆转录病毒)等。在一个实施方案中，pEE6.4或pEE12.4(Lonza)可以用作表达载体。

本发明的表达载体可以包含与本发明的多核苷酸可操作地偶联的启动子。用于在动物细胞中表达本发明多核苷酸的启动子包括，例如，病毒来源的启动子(如CMV、RSV和SV40)、肌动蛋白启动子、EF(延伸因子)1α启动子、热休克启动子等。用于在细菌(例如，大肠杆菌)中表达本发明多核苷酸的启动子包括，例如，trp启动子、lac启动子、λPL启动子、tac启动子等。用于在酵母中表达本发明多核苷酸的启动子包括，例如，GAL 1启动子、GAL 10启动子、PH05启动子、PGK启动子、GAP启动子、ADH启动子等。

当使用动物细胞、昆虫细胞或酵母作为宿主细胞时，本发明的表达载体可以包括起始密码子、终止密码子、增强子序列、编码本发明的单臂抗人NR1抗体或其重链或轻链的基因的5'和3'非翻译区、分泌信号序列、剪接点、多腺苷酸化位点或可复制单位等。当使用大肠杆菌作为宿主细胞时，本发明的表达载体可以包括起始密码子、终止密码子、终止子区域和可复制单位。根据目的，本发明的表达载体可以包括通常使用的选择性标志物(例如，四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因、卡那霉素抗性基因、新霉素抗性基因和二氢叶酸还原酶基因)。

<本发明的转化宿主细胞>

本发明的转化宿主细胞包含具有本发明表达载体的转化宿主细胞。本发明的转化宿主细胞包括选自以下(1)-(4)的宿主细胞：

(1)具有表达载体的转化宿主细胞，所述表达载体包含含有编码本发明单臂抗人NR1抗体的重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸；

(2)具有表达载体的转化宿主细胞，所述表达载体包含含有编码本发明单臂抗人NR1抗体的轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸；

(3)具有表达载体的转化宿主细胞，所述表达载体包含含有编码本发明单臂抗人NR1抗体的重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸，和含有编码所述抗体的轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸；

(4)具有包含含有编码本发明单臂抗人NR1抗体的重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，和包含含有编码所述抗体的轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体的转化宿主细胞。

本发明的转化宿主细胞还包括选自以下(a)-(d)的宿主细胞：

(a)具有表达载体的转化宿主细胞，所述表达载体包含含有编码本发明单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸；

(b)具有表达载体的转化宿主细胞，所述表达载体包含含有编码本发明单臂抗人NR1抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸；

(c)具有表达载体的转化宿主细胞，所述表达载体包含含有编码本发明单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸，和含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸；

(d)具有包含含有编码本发明单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，和包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体的转化宿主细胞。

在一个实施方案中，包含在上述(a)-(d)中的宿主细胞中的表达载体可以进一步包含含有编码Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸。在一个实施方案中，上述(a)-(d)中的宿主细胞可以进一步包含表达载体，所述表达载体包含含有编码Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸。

本发明的转化宿主细胞的示例包括具有包含编码本发明单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸、包含编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体的转化宿主细胞；具有包含含有编码本发明单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体、包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体和包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体的转化宿主细胞；以及具有包含含有编码本发明单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体和包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体的转化宿主细胞。

在一个实施方案中，本发明的宿主细胞是具有选自以下(a)-(d)的表达载体的转化宿主细胞：

(a)包含含有编码如以下(1)至(8)中任一项所列出的本发明的单臂抗人NR1抗体的重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(b)包含含有编码如以下(1)至(8)中任一项所列出的本发明的单臂抗人NR1抗体的轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；(c)包含含有编码如以下(1)至(8)中任一项所列出的本发明的单臂抗人NR1抗体的重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(d)包含含有编码如以下(1)至(8)中任一项所列出的本发明的单臂抗人NR1抗体的重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码所述抗体的轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体：

(1)一种包含重链可变区和轻链可变区的单臂抗人NR1抗体，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:6的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:6的氨基酸编号50至60的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:6的氨基酸编号99至110的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:8的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:8的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ IDNO:8的氨基酸编号89至98的氨基酸序列组成的CDR3；

(2)一种包含重链可变区和轻链可变区的单臂抗人NR1抗体，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:10的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:10的氨基酸编号50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:10的氨基酸编号99至111的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:12的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:12的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ IDNO:12的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3；

(3)一种包含重链可变区和轻链可变区的单臂抗人NR1抗体，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:14的氨基酸编号31至36的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:14的氨基酸编号51至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:14的氨基酸编号99至108的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:16的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:16的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ IDNO:16的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3；

(4)一种包含重链可变区和轻链可变区的单臂抗人NR1抗体，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:18的氨基酸编号31至36的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:18的氨基酸编号51至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:18的氨基酸编号99至108的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:20的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:20的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ IDNO:20的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3；

(5)一种单臂抗人NR1抗体，其包含由SEQ ID NO:6中所示氨基酸序列组成的重链可变区，和由SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列组成的轻链可变区；

(6)一种单臂抗人NR1抗体，其包含由SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列组成的重链可变区，和由SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列组成的轻链可变区；

(7)一种单臂抗人NR1抗体，其包含由SEQ ID NO:14中所示氨基酸序列组成的重链可变区，和由SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列组成的轻链可变区；

(8)一种单臂抗人NR1抗体，其包含由SEQ ID NO:18中所示氨基酸序列组成的重链可变区，和由SEQ ID NO:20中所示氨基酸序列组成的轻链可变区。

在一个实施方案中，本发明的宿主细胞是具有选自以下的表达载体的转化宿主细胞：

(a)包含编码如以下(1)至(8)中任一项所列出的本发明的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(b)包含编码如以下(1)至(8)中任一项所列出的本发明的单臂抗人NR1抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(c)包含含有编码如以下(1)至(8)中任一项所列出的本发明的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(d)包含含有编码如以下(1)至(8)中任一项所列出的本发明的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体和包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体：

(1)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:6的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:6的氨基酸编号50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:6的氨基酸编号99至110的氨基酸序列组成的CDR3，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:8的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:8的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:8的氨基酸编号89至98的氨基酸序列组成的CDR3；

(2)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:10的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:10的氨基酸编号50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:10的氨基酸编号99至111的氨基酸序列组成的CDR3；所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:12的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:12的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:12的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3；

(3)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:14的氨基酸编号31至36的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:14的氨基酸编号51至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:14的氨基酸编号99至108的氨基酸序列组成的CDR3；所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:16的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:16的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:16的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3；

(4)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:18的氨基酸编号31至36的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:18的氨基酸编号51至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:18的氨基酸编号99至108的氨基酸序列组成的CDR3；所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:20的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:20的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:20的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3；

(5)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区由SEQ ID NO:6中所示氨基酸序列组成，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区由SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列组成；

(6)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区由SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列组成，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区由SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列组成；

(7)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区由SEQ ID NO:14中所示氨基酸序列组成，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区由SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列组成；

(8)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区由SEQ ID NO:18中所示氨基酸序列组成，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区由SEQ ID NO:20中所示氨基酸序列组成。

在一个实施方案中，本发明的宿主细胞是具有选自以下(a)-(i)的表达载体的转化宿主细胞：

(a)包含含有编码如以下(1)至(10)中任一项所列出的本发明的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体和包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(b)包含含有编码如以下(1)至(10)中任一项所列出的本发明的单臂抗人NR1抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体和包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(c)包含含有编码如以下(1)至(10)中任一项所列出的本发明的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(d)包含含有编码如以下(1)至(10)中任一项所列出的本发明的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体、包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(e)包含含有编码如以下(1)至(10)中任一项所列出的本发明的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(f)包含含有编码如以下(1)至(10)中任一项所列出的本发明的单臂抗人NR1抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸以及含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(g)包含含有编码如以下(1)至(10)中任一项所列出的本发明的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(h)包含含有编码如以下(1)至(10)中任一项所列出的本发明的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(i)包含含有编码如以下(1)至(10)中任一项所列出的本发明的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸、含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体：

(1)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:2的氨基酸编号26至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:2的氨基酸编号52至58的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:2的氨基酸编号97至109的氨基酸序列组成的CDR3；所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:4的氨基酸编号26至33的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:4的氨基酸编号51至53的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:4的氨基酸编号92至100的氨基酸序列组成的CDR3；

(2)一种包含重链、轻链和Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:6的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQID NO:6的氨基酸编号50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:6的氨基酸编号99至110的氨基酸序列组成的CDR3；所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区包含由SEQ IDNO:8的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:8的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:8的氨基酸编号89至98的氨基酸序列组成的CDR3；

(3)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:10的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:10的氨基酸编号50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:10的氨基酸编号99至111的氨基酸序列组成的CDR3；所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:12的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:12的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:12的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3；

(4)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:14的氨基酸编号31至36的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:14的氨基酸编号51至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:14的氨基酸编号99至108的氨基酸序列组成的CDR3；所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:16的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:16的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:16的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3；

(5)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:18的氨基酸编号31至36的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:18的氨基酸编号51至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:18的氨基酸编号99至108的氨基酸序列组成的CDR3；所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:20的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:20的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:20的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3；

(10)一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区由SEQ ID NO:18中所示氨基酸序列组成，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区由SEQ ID NO:20中所示氨基酸序列组成。

(c)包含含有编码由SEQ ID NO:24中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，和包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

在一个实施方案中，本发明的宿主细胞是具有选自以下的一种或多种表达载体的转化宿主细胞：

(l)包含含有编码由SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体、包含含有编码由SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的多核苷酸序列的表达载体；

(m)包含含有编码由SEQ ID NO:30所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸、含有编码由SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体。

(l)包含含有编码由SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体、包含含有编码由SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的多核苷酸序列的表达载体；

(l)包含含有编码由SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体、包含含有编码由SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的多核苷酸序列的表达载体；

在一个实施方案中，本发明的宿主细胞是具有编码单臂抗人NR1抗体的重链和/或轻链的表达载体的转化宿主细胞，所述单臂抗人NR1抗体与包含由SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列组成的轻链可变区的抗人NR1抗体竞争性地结合人NR1，并且抑制由来源于抗NMDAR脑炎患者的致病性抗人NR1抗体引起的NMDAR细胞内化，其中，本发明的宿主细胞是具有选自以下的一种或多种表达载体的转化宿主细胞：

(a)包含含有编码所述抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(b)包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(c)包含含有编码所述抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(d)包含含有编码所述抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，和包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(e)包含含有编码所述抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(f)包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(g)包含含有编码所述抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，和包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(h)包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，和包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(i)包含含有编码所述抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(j)包含含有编码所述抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(k)包含含有编码所述抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(l)包含含有编码所述抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体、包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(m)包含含有编码所述抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸、含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体。

转化宿主细胞没有特别的限制，只要它与所使用的表达载体相容，并且能够用一种或多种表达载体转化，并且表达抗体。转化宿主细胞包括，例如，各种细胞，如本发明技术领域中常用的天然细胞或人工建立的细胞(例如动物细胞(例如CHOK1SV1细胞)、乱伦细胞(例如Sf9)、细胞(例如大肠杆菌等)、酵母(酵母属、毕赤酵母属等)等)。在一个实施方案中，培养的细胞，如CHOK1SV细胞、CHO-DG44细胞、HEK293细胞和NS0细胞等可以用作宿主细胞。

转化宿主细胞的方法包括磷酸钙法、电穿孔法等。

<用于产生本发明单臂抗人NR1抗体的方法，以及由此产生的单臂抗人NR1抗体>

产生单臂抗人NR1抗体的方法包括培养本发明的转化宿主细胞、表达单臂抗人NR1抗体和产生单臂抗人NR1抗体的方法。在一个实施方案中，产生本发明单臂抗人NR1抗体的方法包括培养选自以下(a)-(e)的宿主细胞，并表达单臂抗人NR1抗体：

(a)用表达载体转化的宿主细胞，所述表达载体包含含有编码本发明单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸、含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸；

(b)用包含含有编码单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体转化的宿主细胞；

(c)用包含含有编码单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体转化的宿主细胞；

(d)用包含含有编码单臂抗人NR1抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体，以及包含含有编码所述抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体转化的宿主细胞；

(e)用包含含有编码本发明单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体、包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体和包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体转化的宿主细胞。

产生本发明单臂抗人NR1抗体的方法不受特别限制，只要所述方法包括培养本发明的转化宿主细胞，并表达单臂抗人NR1抗体。

可以通过已知方法培养转化宿主细胞。适当选择培养条件，例如，温度、培养基的pH和培养时间。如果宿主细胞是动物细胞，则培养基如包含大约5-20％的胎牛血清的MEM培养基(Science,1959,第130卷,第432-437页)、DMEM培养基(Virology,1959,第8卷,第396页)、RPMI1640培养基(J.Am.Med.Assoc.,1967,第199卷,第519页)、199培养基(Exp.Biol.Med.,1950,第73卷,第1-8页)等可以用作培养基。培养基的pH为例如大约6-8，并且定期在大约30-40℃下进行大约15-336小时，必要时通风和搅拌培养。如果宿主细胞是昆虫细胞，则可以例如将包含胎牛血清的培养基如Grace培养基(Proc.Natl.Acad.Sci.USA.,1985,第82卷,第8404页)等用作培养基。培养基的pH为例如大约5-8，并且定期在大约20-40℃下进行大约15-100小时，必要时通风和搅拌培养。如果宿主细胞是大肠杆菌或酵母，则包含例如营养源的液体培养基适合作为培养基。营养培养基包含例如，转化宿主细胞生长所需的碳源、无机或有机氮源。碳源包括例如葡萄糖、葡聚糖、可溶性淀粉和蔗糖等，而无机或有机氮源包括例如铵盐、硝酸盐、氨基酸、玉米浆、蛋白胨、酪蛋白、肉提取物、大豆粉和马铃薯提取物等。如果需要，它可以包含其他营养物(例如，无机盐(例如，氯化钙、磷酸二氢钠、氯化镁)和维生素)、抗生素(例如，四环素、新霉素、氨苄青霉素、卡那霉素)等。培养基的pH为例如大约5-8。如果宿主细胞是大肠杆菌，则可以例如将LB培养基和M9培养基(Molecular Cloning,Cold Spring Harbor Laboratory,第3卷,A2.2)等用作培养基。培养基定期在大约14-43℃下进行大约3-24小时，必要时进行通风和搅拌。如果宿主细胞是酵母，则可以例如将伯克霍尔德基本培养基(Proc.Natl.Acad.Sci.USA.,1980,第77卷,第4505页)等用作培养基。培养定期在大约20-35℃下进行大约14-144小时，必要时进行通风和搅拌。通过上述培养可以表达本发明的单臂抗人NR1抗体。

除了培养转化宿主细胞并表达本发明的单臂抗人NR1抗体之外，产生本发明单臂抗人NR1抗体的方法还可以包括从转化宿主细胞中回收、分离或纯化单臂抗人NR1抗体。分离或纯化的方法包括，例如，利用溶解度的方法，如盐析和溶剂沉淀法；利用分子量差异的方法，如透析、超滤和凝胶过滤；利用电荷的方法，如离子交换色谱法和羟基磷灰石色谱法；利用特异性亲和力的方法，如亲和色谱法；利用疏水性差异的方法，如反相高效液相色谱法；以及利用等电点差异的方法，如等电点电泳等。在一个实施方案中，可以通过各种色谱法，例如使用蛋白A柱或蛋白G柱的柱色谱法来纯化培养上清液中积累的抗体。

在产生本发明单臂抗人NR1抗体的方法中，通过分别在单臂抗人NR1抗体的重链的CH3和与重链组合并形成Fc区的Fc多肽的CH3中引入杵臼突变，可以有效地获得单臂抗人NR1抗体。

本发明的单臂抗人NR1抗体还包括用产生本发明单臂抗人NR1抗体的方法产生的单臂抗人NR1抗体。

<本发明的药物组合物等>

本发明的药物组合物包含含有本发明的单臂抗人NR1抗体的组合物和药学上可接受的赋形剂。本发明的药物组合物可以用本领域常用的赋形剂，即药物赋形剂或药物载剂等，通过常用的方法制备。这些药物组合物的剂型包括，例如，肠胃外剂型如注射、滴注等，并且所述药物组合物可以通过静脉内施用、皮下施用等施用。在配制药物组合物时，根据这些剂型的赋形剂、载剂、添加剂等可以在药学上可接受的范围内使用。

本发明的药物组合物可以包含多种本发明的单臂抗人NR1抗体。例如，本发明包含不具有C-末端赖氨酸缺失和N-末端焦谷氨酰化的单臂抗人NR1抗体，和/或具有C-末端赖氨酸缺失和N-末端焦谷氨酰化的单臂抗人NR1抗体。

在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含选自以下(1)至(5)中任一项的单臂抗人NR1抗体和/或由单臂抗人NR1抗体的翻译后修饰产生的单臂抗人NR1抗体：

(3)一种包含重链可变区、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:10的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:10的氨基酸编号50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:10的氨基酸编号99至111的氨基酸序列组成的CDR3，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:12的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:12的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:12的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3；

(4)一种包含重链和轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:14的氨基酸编号31至36的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:14的氨基酸编号51至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:14的氨基酸编号99至108的氨基酸序列组成的CDR3，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:16的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:16的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:16的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3；

(1)一种单臂抗人NR1抗体，其包含含有由SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列组成的重链可变区的重链、含有由SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列组成的轻链可变区的轻链，以及Fc多肽；

(2)一种单臂抗人NR1抗体，其包含含有由SEQ ID NO:6中所示氨基酸序列组成的重链可变区的重链、含有由SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列组成的轻链可变区的轻链，以及Fc多肽；

(3)一种单臂抗人NR1抗体，其包含含有由SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列组成的重链可变区的重链、含有由SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列组成的轻链可变区的轻链，以及Fc多肽；

(4)一种单臂抗人NR1抗体，其包含含有由SEQ ID NO:14中所示氨基酸序列组成的重链可变区的重链、含有由SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列组成的轻链可变区的轻链，以及Fc多肽；

(5)一种单臂抗人NR1抗体，其包含含有由SEQ ID NO:18中所示氨基酸序列组成的重链可变区的重链、含有由SEQ ID NO:20中所示氨基酸序列组成的轻链可变区的轻链，以及Fc多肽。

在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含含有由SEQ ID NO:22中所示氨基酸序列组成的重链、由SEQ ID NO:24中所示氨基酸序列组成的轻链和由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，和/或由单臂抗人NR1抗体的翻译后修饰产生的单臂抗人NR1抗体。

在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含含有由SEQ ID NO:26中所示氨基酸序列组成的重链、由SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列组成的轻链和由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，和/或由单臂抗人NR1抗体的翻译后修饰产生的单臂抗人NR1抗体。

在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含含有由SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列组成的重链、由SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列组成的轻链和由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，和/或由单臂抗人NR1抗体的翻译后修饰产生的单臂抗人NR1抗体。

在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含含有由SEQ ID NO:34中所示氨基酸序列组成的重链、由SEQ ID NO:36中所示氨基酸序列组成的轻链和由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，和/或由单臂抗人NR1抗体的翻译后修饰产生的单臂抗人NR1抗体。

在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含含有由SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列组成的重链、由SEQ ID NO:40中所示氨基酸序列组成的轻链和由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，和/或由单臂抗人NR1抗体的翻译后修饰产生的单臂抗人NR1抗体。

在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含与包含由SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列组成的轻链可变区的抗人NR1抗体竞争性地结合人NR1，并且抑制由来源于抗NMDAR脑炎患者的致病性抗人NR1抗体引起的NMDAR细胞内化的单臂抗人NR1抗体，和/或由单臂抗人NR1抗体的翻译后修饰产生的单臂抗人NR1抗体。

本发明的单臂抗人NR1抗体的剂量根据疾病状况、患者年龄或待使用的剂型而不同。例如，可以使用约0.001mg/kg至100mg/kg的剂量。此外，可以调整和配制对应于这种剂量的本发明单臂抗人NR1抗体的剂量。

本发明的药物组合物可以用作抗NMDAR脑炎的治疗剂。

本发明包括用于治疗的单臂抗人NR1抗体的药物组合物，其包含本发明的单臂抗人NR1抗体和药学上可接受的赋形剂。此外，本发明包括一种治疗抗NMDAR脑炎的方法，所述方法包括施用治疗有效量的本发明的单臂抗人NR1抗体。此外，本发明包含用于治疗抗NMDAR脑炎的本发明的单臂抗人NR1抗体。此外，本发明包括本发明的单臂抗人NR1抗体在制造用于治疗抗NMDAR脑炎的药物组合物中的用途。

<本发明的单价抗人NR1抗体衍生物>

在本发明的说明书中，“单价抗人NR1抗体衍生物”是与人NR1结合的单价抗体衍生物，其包含来源于抗人NR1抗体的人NR1抗原结合位点。本发明的单价抗人NR1抗体衍生物包含，例如，来源于抗人NR1抗体的scFc、Fab片段、F(ab')2片段等。

本发明的单价抗人NR1抗体衍生物是包含选自以下(1)至(4)中任一项的重链可变区和轻链可变区的单价抗人NR1抗体衍生物：

(1)一种包含重链可变区和轻链可变区的单价抗人NR1抗体衍生物，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:6的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:6的氨基酸编号50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:6的氨基酸编号99至110的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:8的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:8的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQID NO:8的氨基酸编号89至98的氨基酸序列组成的CDR3；

(2)一种包含重链可变区和轻链可变区的单价抗人NR1抗体衍生物，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:10的氨基酸编号31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:10的氨基酸编号50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:10的氨基酸编号99至111的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:12的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:12的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:12的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3；

(3)一种包含重链可变区和轻链可变区的单价抗人NR1抗体衍生物，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:14的氨基酸编号31至36的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:14的氨基酸编号51至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:14的氨基酸编号99至108的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:16的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:16的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:16的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3；

(4)一种包含重链可变区和轻链可变区的单价抗人NR1抗体衍生物，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:18的氨基酸编号31至36的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:18的氨基酸编号51至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:18的氨基酸编号99至108的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:20的氨基酸编号24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:20的氨基酸编号50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:20的氨基酸编号89至97的氨基酸序列组成的CDR3。

在一个实施方案中，本发明的单价抗人NR1抗体衍生物是包含选自以下(5)至(8)中任一项的重链可变区和轻链可变区的单价抗人NR1抗体衍生物：

(5)一种单价抗人NR1抗体衍生物，其包含由SEQ ID NO:6中所示氨基酸序列组成的重链可变区，和由SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列组成的轻链可变区；

(6)一种单价抗人NR1抗体衍生物，其包含由SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列组成的重链可变区，和由SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列组成的轻链可变区；

(7)一种单价抗人NR1抗体衍生物，其包含由SEQ ID NO:14中所示氨基酸序列组成的重-链可变区，和由SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列组成的轻链可变区；

(8)一种单价抗人NR1抗体衍生物，其包含由SEQ ID NO:18中所示氨基酸序列组成的重链可变区，和由SEQ ID NO:20中所示氨基酸序列组成的轻链可变区。

本发明的单价抗人NR1抗体衍生物包括与包含由SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列组成的轻链可变区的抗人NR1抗体竞争性地结合人NR1，并且抑制由来源于抗NMDA受体脑炎患者的致病性抗人NR1抗体引起的NMDAR内化的单价抗人NR1抗体衍生物。如<本发明的单臂抗人NR1抗体>一节所述，本发明的单价抗人NR1抗体衍生物可由本领域技术人员获得。

可以对本发明的单价抗人NR1抗体衍生物进行修饰，以提高其体内稳定性。所述修饰包括，例如，聚乙二醇化。

本发明进一步包括编码所述抗体衍生物的多核苷酸、包含所述多核苷酸的表达载体、由所述表达载体转化的宿主细胞、产生所述抗体衍生物的方法、包含所述抗体衍生物的药物组合物、所述抗体衍生物在制造所述药物组合物中的用途，以及用所述抗体衍生物治疗抗NMDAR脑炎患者的方法。

这里提供了具体实施例以提供对本发明的进一步理解；然而，提供这些实施例是为了说明的目的，而不是为了限制本发明。

实施例

除非另有说明，否则根据熟知的方法实现以下实施例中描述的步骤。此外，关于使用可商业获得的试剂盒或试剂等的实施例部分，除非另有说明，否则根据所附方案进行实验。

(实施例1：获得来源于抗NMDAR脑炎患者的抗体)

基于专利文献2中描述的序列信息(参见所述文献的权利要求1和实施例的描述)，根据常规方法制备具有与所述专利文献中描述的从抗NMDAR脑炎患者分离的抗体相同的重链可变区和轻链可变区的抗人NR1单克隆抗体(003-109、007-168、007-169、007-124、007-142、008-218、P003-102，下文称为“致病性抗人NR1抗体”)。特别地，将编码重链多肽的多核苷酸插入pcDNA3.4(Thermo Fisher Scientific)中以制备表达载体，其中重链多肽含有添加到致病性抗人NR1抗体的重链可变区序列的N-末端部分的信号序列，以及添加到其C-末端部分的CH1序列、铰链序列和Fc序列。类似地，将编码多肽的多核苷酸插入pcDNA3.4中以制备表达载体，其中编码所述多肽的多核苷酸的轻链可变区序列含有添加到致病性抗人NR1抗体的N-末端部分的信号序列，和添加到其C-末端部分的CH1序列。将表达载体转染到ExpiCHO-S细胞(Thermo Fisher Scientific，A29127)中，并且根据常规方法获得抗体。

通过流式细胞术测量来评价上述七种致病性抗人NR1抗体的结合活性。该流式细胞术测试(贝克顿-迪金森公司(Becton,Dickinson and Company)，FACS Verse)在表达NMDAR的HEK细胞(如下所述)中进行(与实施例7中相同)。结果，所有七种致病性抗人NR1抗体均在表达NMDAR的HEK细胞中显示出高结合活性。P003-102(具有由SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列组成的重链可变区，和由SEQ ID NO:4中所示氨基酸序列组成的轻链可变区)在表达NMDAR的HEK细胞中显示出最高的结合活性(数据未显示)。

注意，实施例中使用的表达NMDAR的HEK细胞是表达人NMDAR(NR1/NR2B)的HEK细胞系(Charles River Laboratories，CTN6121)，并且，除非另有说明，否则将其在37℃和50％CO2存在下使用含有10％ FBS(GE Healthcare Life Sciences，SH30070.03)、50单位/mL青霉素-链霉素(青霉素-链霉素，Thermo Fisher Scientific，15070063)、0.5mg/mL遗传霉素(遗传霉素，Thermo Fisher Scientific，10131027)、0.005mg/mL杀稻瘟菌素(杀稻瘟菌素，InvivoGen，ant-bl-05)和0.1mg/mL吉欧霉素(吉欧霉素，Thermo Fisher Scientific，R25001)的DMEM/F12(Thermo Fisher Scientific，11320033)(下文称为“表达NMDAR的HEK细胞培养基”)进行培养。

(实施例2：确认单臂致病性抗人NR1抗体P003-102的NMDAR结合活性)

制备了来源于P003-102的单价抗人NR1抗体衍生物，其显示出高稳定性和对表达NMDAR的HEK细胞的最高结合活性。

基于在先专利文献(WO1998/050431)的描述制备了来源于P003-102的单价抗人NR1抗体。特别地，制备了抗体重链表达载体，其中将编码在P003-102的重链的恒定区中具有杵臼突变(下文称为“KIH突变”)的重链多肽(SEQ ID NO:22)的多核苷酸(SEQ ID NO:21)插入pcDNA3.4中。制备了FC表达载体，其中FC多肽(SEQ ID NO:42)编码多核苷酸(SEQ IDNO:41)，其中将KIH突变和上述KIH突变插入pcDNA3.4中。制备了抗体轻链表达载体，其中将编码P003-102的轻链多肽(SEQ ID NO:24)的多核苷酸(SEQ ID NO:23)插入pcDNA3.4中。根据常规方法，通过将抗体重链表达载体、抗体轻链表达载体和FC表达载体这三种载体转染到ExpiCHO-S细胞中，并纯化在细胞中表达的抗体分子，获得了具有来源于P003-102的抗原结合位点的单价抗体(单臂抗体)(下文称为“ABN-5”)。

如实施例1所述，在表达NMDAR的HEK细胞中，通过流式细胞术测试来评价ABN-5对人NMDAR的结合活性。ABN-5(一种单臂抗体)显示出对在HEK细胞中表达的NMDAR的结合活性，尽管它弱于P003-102(一种二价抗体)(图1)。此外，ABN-5显示出比其他六种致病性抗人NR1抗体更高的与人NMDAR的结合活性(数据未显示)。

(实施例3：通过致病性抗人NR1抗体将NMDAR内化到细胞中)致病性抗人NR1抗体通过在细胞表面上交联NMDAR来诱导NMDAR的内化。结果，报道了细胞表面上NMDAR的表达水平降低(非专利文献1)。实施例1中制备的致病性抗人NR1抗体也降低了HEK细胞的细胞表面上NMDAR的表达水平。

通过用含有10％经透析的FBS(Thermo Fisher Scientific，26400-044)、50单位/mL青霉素-链霉素、2.0μg/mL四环素(四环素，Sigma-Aldrich，T7660)和0.2mM美金刚(Memantine)(美金刚，Sigma-Aldrich，M9292)的Neurobasal(Neurobasal)培养基(ThermoFisher Scientific，21103049)(下文称为“诱导培养基”)置换NMDAR表达细胞培养基，将表达NMDAR的HEK细胞培养过夜。添加浓度为100μg/mL的致病性抗人NR1抗体007-142。在添加所述抗体后24小时，通过使用FACS Verse的流式细胞术测量评价细胞表面上NMDAR的表达水平。从前向散射光(FSC)和侧向散射光(CCS)信号的2D扩展的点图中，通过门控提取单细胞，随后是HEK细胞或对应于表达NMDAR的HEK细胞的一组细胞。测量提取的细胞组的每5000个细胞的几何平均荧光强度(GeoMFI)并用于评价。作为相同同种型的对照抗体，使用内部抗KLH抗体(3G6)。当添加到培养基中时，007-142将细胞表面上NMDAR的表达降低至低于50％(数据未显示)。

(实施例4：通过预先添加ABN-5维持在HEK细胞中表达的NMDAR的功能)

通过以下两种评价方法来确定ABN-5(一种单臂抗体)是否可以拯救由致病性抗人NR1抗体引起的细胞表面上NMDAR表达水平的降低以及NMDAR的功能减退。

首先，评价ABN-5对NMDAR表达水平的抑制作用。经由连续稀释将不同浓度的ABN-5添加到表达NMDAR的HEK细胞的培养基中过夜。在添加后2小时，将007-142(一种致病性人NR1抗体)以100μg/mL的浓度添加到培养基中，并且通过流式细胞术测量以及实施例3来评价添加007-142后24小时细胞表面上NMDAR的表达水平。007-142将HEK细胞的细胞表面上的NMDAR表达水平降低至低于50％。然而，007-142在细胞表面上的NMDAR表达水平被ABN-5以浓度依赖性方式恢复(数据未显示)。

为了评估ABN-5是否可以通过P003-102抗体防止NMDAR的功能减退，将钙内流用作表达NMDAR的HEK细胞的指标。特别地，经由连续稀释将不同浓度的ABN-5添加到在处理前培养过夜的表达NMDAR的HEK细胞的培养基中。在添加ABN-5 15分钟后，将P003-102以0.1μg/mL的浓度添加到培养基中。将ABN-5培养6小时。在去除培养基后，将100μL/孔的FLIPR钙6测定试剂盒(Molecular Device，R8190)的制备溶液添加到ABN-5中，并培养2小时。使用最终浓度为30μM的NMDA(TOCRIS，0114)来刺激NMDAR。使用FLIPR钙6测定试剂盒(MolecularDevices，R6133)，通过荧光成像板读数器(Molecular Devices，FLIPR TETRA)来测量细胞内钙浓度。结果，向培养基中添加P003-102抗体导致表达NMDAR的HEK细胞上的NMDAR功能减退，并且所述功能减退以浓度依赖性方式被ABN-5抑制(数据未显示)。

从以上可以看出，单臂抗人NR1抗体和致病性抗人NR1抗体两者均与细胞表面NMDAR结合。然而，与致病性抗人NR1抗体不同，单臂抗人NR1抗体不诱导NMDAR的内化。此外，单臂抗人NR1抗体拮抗地作用于致病性抗人NR1抗体，并且通过维持细胞表面上NMDAR的表达水平来防止致病性抗人NR1抗体引起的NMDAR功能减退。

(实施例5：分离拮抗地针对致病性抗人NR1抗体P003-102的与人NR1结合的鼠抗体)

首先，分离有效结合P003-102并强烈结合人NR1的抗人NR1抗体，以产生对人NMDAR具有比ABN-5更强结合活性的单臂抗人NR1抗体。

特别地，通过使用BALB/cAJc1小鼠和Jcl:BDF小鼠(两者均购自日本CLEA)分离出对人NR1具有高结合活性的鼠抗体。根据常规方法，将人NR1蛋白与引发免疫反应的佐剂一起注射到小鼠体内。通过以下方法制备用于免疫的人NR1蛋白。

通过基因工程化技术，将接头、HisTag序列(His*8)、AviTag序列(亲合力)和编码终止密码子的核苷酸序列添加到编码人NR1胞外结构域的多核苷酸(SEQ ID NO:43，对应的氨基酸序列在SEQ ID NO:44中显示)的3'末端，并插入pcDNA3.1(Thermo FisherScientific)中，并且成为人NR1和HisTag的融合蛋白(下文称为“人NR1-His蛋白”)的表达载体。将表达载体转染到Expi293F细胞(Thermo Fisher Scientific，A14528)中。从培养上清液中纯化人NR1-His蛋白。

在根据常规方法用纯化的人NR1-His蛋白和佐剂注射小鼠几次后，从小鼠脾脏或淋巴结收集淋巴细胞。

使用Alexa Fluor 647抗体标记试剂盒(Thermo Fisher Scientific，A20186)对人NR1-His蛋白进行荧光标记。基于在先非专利文献(BMC Biol.,2012,第10卷,文章号80)的描述，用细胞分选仪(Becton Dickinson，FACSmelody)分选来自小鼠淋巴细胞的与荧光标记的人NR1-His蛋白结合的B细胞。按照所述方法，克隆编码从分选的B细胞中提取的抗体的核酸，并用于产生与人NR1结合的小鼠抗体。使用人NR1-His蛋白，并且按照常规方法(具体条件与下述ELISA竞争性测定的条件相同)进行ELISA结合测定，用于评价产生的小鼠抗体的NR1结合活性。结果，可以分离出比P003 -102抗体对人NR1具有更高结合活性的大量小鼠抗体(数据未显示)。

进行ELISA竞争性测定以确定哪种抗体对来自分离小鼠的P003-102具有拮抗活性。具体地，将15μL人NR1-His蛋白溶液(1μg/mL，在Tris缓冲盐水(本文称为“TBS”)中)添加到384孔板(Thermo Fisher Scientific，460372)中，并在4℃下孵育过夜。然后，取出人NR1-His蛋白溶液，并将其用包含TBS的0.5％吐温-20(NIPPON GENE，310-07375)(称为“TBS-T”)洗涤。在洗涤后，添加50uL的Blocking One(Nacalai Tesque,Inc.，03953-95)，并在室温下孵育1小时或更长时间。如上所述除去封闭溶液并洗涤。将15uL浓度为100,000ng/mL至0.1ng/mL的小鼠抗人NR1抗体(含有5％ BlockingOne的TBS-T)或对比抗体(P003-102)添加到每个孔中，并在室温下孵育10至20分钟。

使用生物素标记试剂盒-NH2(DOJINDO和LK03)对P003-102进行生物素标记。添加15uL生物素标记的P003-102(600ng/mL，在稀溶液中)，并在室温下孵育1小时。在洗涤后，将15μL添加到使用稀释剂稀释8,000倍的HRP标记的链霉亲和素(Funakoshi Co.,Ltd.，21130)中，并在室温下孵育30分钟。在洗涤后，将15μL添加到BM化学发光ELISA底物(POD)(Roche Diagnotics 11 582 950001，其是一种化学发光检测试剂，用于在多标记板读数器(PerkinElmer，2103EnVision)中测定化学发光)中。抑制率的范围为比较抗体的100,000ng/mL测量值为100％到0ng/mL测量值为0％。通过四参数逻辑曲线拟合分析抑制率。通过以下计算公式计算每个样品的抑制率。

抑制率(％)＝(1-(样品测定值-100％测定值)/(0％测定值-100％测定值))x100，并且将抑制率为负值的样品视为0％。

分析了对生物素标记的P003-102具有拮抗活性的抗小鼠抗人NR1单克隆抗体。在抗小鼠抗人NR1抗体中，ABN_1-175、ABN_1-178.3、ABN_3-385和ABN_3-502对P003-102显示出较强的拮抗活性。特别地，ABN_1-178.3和ABN_3-502对P003-102的拮抗活性最强(图2)。

(实施例6：用于产生本发明的单臂抗人NR1抗体的方法)由于四种小鼠抗NR1单克隆抗体(ABN_1-175、ABN_1-178.3和ABN_3-385、ABN_3-502)对P003-102显示出强拮抗活性，因此产生了人源化单臂抗人NR1抗体。

ABN_1-175、ABN_1-178.3、ABN_3-385或ABN_3-502的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的氨基酸序列是使用在先非专利文献(前面的Biosci.,2008,第13卷,第1619-1633页)中描述的技术设计的。基于熟知的技术，从人种系的框架数据库中多重选择人抗体框架序列，所述人抗体框架序列具有与基于模板人抗体的小鼠抗体的VH和VL框架区(FR)的氨基酸序列高度同源的氨基酸序列，作为VH和VL中互补决定区(CDR)氨基酸的移植地点。使用该序列信息，设计了来自一种小鼠抗体的多种人源化抗体的氨基酸序列。由实施例5中获得的氨基酸序列确定CDR序列，并参考卡巴特数据库(“Sequences of Proteins ofImmunological Interest”，美国卫生与公众服务部(US Department of Health andHuman Services)、美国政府印务局(US Government Printing Office))。此外，ABN-5(实施例2)是分别通过与具有KIH突变体的恒定区序列组合而产生的来自每只小鼠的多种人源化单臂抗人NR1单克隆抗体。这些人源化单臂抗人NR1单克隆抗体是由人源化ABN_1-175、ABN_1-178.3、ABN_3-385和ABN_3-502中任一个的一个重链多肽和一个轻链多肽以及一个Fc多肽组成的单臂抗体。

(实施例7：测量人源化单臂抗人NR1抗体的NMDAR结合活性)

使用表达NMDAR的HEK细胞，在流式细胞术试验中评价产生的人源化单臂抗人NR1单克隆抗体的结合活性。

将表达NMDAR的HEK细胞诱导过夜并收集。在回收后，每1.5x10⁵个细胞计数，添加人源化单臂抗人NR1抗体和来源于小鼠抗体的ABN-5，起始浓度为30ug/mL并连续稀释3倍以产生11个不同浓度，并且与细胞在4℃下孵育30分钟。在染色后，将细胞以1,200rpm沉淀5分钟，并除去上清液。在向细胞中添加2％经透析的FBS后，将细胞离心并沉淀。在除去上清液后，用2％经透析的FBS将PE标记的抗人IgG抗体(Jackson ImmunoResearch Laboratories，109-116-098)稀释100倍，并在4℃下添加到细胞中30分钟。在染色后，如上所述将细胞离心并沉淀。在去除上清液后，将细胞悬浮在2％经透析的FBS中，并且重复二次染色后的步骤。如实施例3中所述测量流式细胞术(FACS Verse)。使用FlowJo(Becton Dickinson，版本10.0.8)，由显示PE荧光强度值的GeoMFI分析与细胞表面NMDAR结合的每种抗体。

结果是一致的，实施例6中产生的多种人源化单臂抗人NR1抗体比P003-102抗体对NMDAR的结合更强。例如，与ABN-5相比，来源于小鼠抗体ABN_1 -178.3来源的三种类型的人源化单臂抗人NR1抗体(ABN_178-m1、ABN_178-m2、ABN_178-m3)对NMDAR的结合非常强(图3)。

代表性的人源化单臂抗人NR1抗体选自基础小鼠抗人NR1抗体ABN_1-1-175、ABN_1-1-178.3、ABN_3-385ABN_1-178.3和ABN_3-385以及ABN_3-502，分别命名为ABN-1、ABN-2(与上述ABN_178-m3相同的抗体)、ABN-3和ABN-4。实施例2中描述的ABN-5以及每种新产生的人源化单臂抗人NR1抗体的VH、VL、重链、轻链和Fc多肽的氨基酸序列和核苷酸序列在表1中示出(在表1中，重链、轻链、Fc多肽、氨基酸序列和核苷酸序列分别缩写为HC、LC、Fc、AA和NA)。

表1

SEQ ID NO:2中所示的VH的CDR1、CDR2和CDR3，分别由SEQ ID NO:2的氨基酸编号26至34、52至58和97至109的氨基酸序列组成。SEQ ID NO:4中所示的VL的CDR1、CDR2和CDR3，分别由SEQ ID NO:4的氨基酸编号26至33、51至53和92至100的氨基酸序列组成。

SEQ ID NO:6中所示的VH的CDR1、CDR2和CDR3，分别由SEQ ID NO:6的氨基酸编号31至35、50至66和99至110的氨基酸序列组成。SEQ ID NO:8中所示的VL的CDR1、CDR2和CDR3，分别由SEQ ID NO:8的氨基酸编号24至34、50至56和89至98的氨基酸序列组成。

SEQ ID NO:10中所示的VH的CDR1、CDR2和CDR3，分别由SEQ ID NO:10的氨基酸编号31至35、50至66和99至111的氨基酸序列组成。SEQ ID NO:12中所示的VL的CDR1、CDR2和CDR3，分别由SEQ ID NO:12的氨基酸编号24至34、50至56和89至97的氨基酸序列组成。

SEQ ID NO:14中所示的VH的CDR1、CDR2和CDR3，分别由SEQ ID NO:14的氨基酸编号31至36、51至66和99至108的氨基酸序列组成。SEQ ID NO:16中所示的VL的CDR1、CDR2和CDR3，分别由SEQ ID NO:16的氨基酸编号24至34、50至56和89至97的氨基酸序列组成。

SEQ ID NO:18中所示的VH的CDR1、CDR2和CDR3，分别由SEQ ID NO:18的氨基酸编号31至36、51至66和99至108的氨基酸序列组成。SEQ ID NO:20中所示的VL的CDR1、CDR2和CDR3，分别由SEQ ID NO:20的氨基酸编号24至34、50至56和89至97的氨基酸序列组成。

为了评价ABN-2、ABN-4和ABN-5对人NMDAR的结合活性，进行了表面等离子体共振(SPR)分析。将Biacore T200(GE Healthcare)用于该SPR分析。

使用抗人IgG(人抗体捕获试剂盒)将人抗体捕获试剂盒(GE Healthcare，BR-1008-39)固定到CM5传感器芯片(GE Healthcare，BR-1005-30)和胺偶联试剂盒(GEHealthcare，BR-1 000-50)上。

将1号流道用作参照，并且没有人源化单臂抗人NR1抗体与该流道结合。在HBS-EP+缓冲液(GE Healthcare，BR-1006-69)中制备了浓度为2、5和10μg/mL的人源化抗人NR1抗体，在另一股流(2号、3号和4号)中分别以10μL/min的流速添加50秒，并且使抗体固化。然后，在2分钟内以50μL/min的流速添加在HBS-EP+缓冲液中稀释至0.5μg/mL的人NR1-His蛋白。测量人源化单臂抗人NR1抗体和人源化NR1-His蛋白的结合。在以50μL/min的流速添加HBS-EP+缓冲液5分钟后，测量人源化单臂抗人NR1抗体和人NR1-His蛋白的解离。通过用1:1结合模型分析、计算结合速率常数(ka)和解离速率常数(kd)并用kd除以ka来计算解离常数(KD)。最后，对于人源化单臂抗人NR1抗体的KD值，在该抗体的固相条件下使用10μL/mL的KD值。

作为SPR分析的结果，ABN-2的KD(M)为6.92E-10，其在ABN-2、ABN-4和ABN-5中具有最高的针对人NR1-His蛋白的结合活性。ABN-2、ABN-4和ABN-5针对人NR1-His蛋白的KD值在图2中示出。ABN-2和ABN-4的KD值远小于ABN-5的KD值。

表2

	ABN-2	ABN-4	ABN-5
				KD(M)	6.92E-10	8.78E-10	1.97E-07

(实施例8：ABN-2、ABN-4和ABN-5对P003-102的竞争性结合活性)

以与实施例5类似的方式，通过ELISA竞争性测定测量ABN-2、ABN-4和ABN-5与人NR1针对P003-102的竞争性结合活性。结果表明，在与NMDAR结合方面，ABN-2对P003-102的拮抗活性强于ABN-4和ABN-5。(图4)。

(实施例9：通过添加ABN-2、ABN-4和ABN-5恢复NMDAR的细胞表面表达水平)

为了评价ABN-2和ABN-5对致病性抗人NR1抗体如P003-102等引起的细胞表面NMDAR内化的抑制作用(抑制NMDAR内化)，使用流式细胞术评价NMDAR内化。

使用诱导培养基，以表3中所示的浓度制备用于刺激NMDAR内化的致病性抗人NR1抗体混合物。

表3

以20μL/孔将致病性抗人NR1抗体混合物添加到96孔板(IWAKI，3860-096)中。在诱导培养基中以2.5x10⁶个细胞/mL制备表达NMDAR的HEK细胞，并以60μL/孔接种，并且在37℃和5％ CO₂的条件下培养过夜。添加20μL/孔的连续稀释的ABN-2或ABN-5并孵育过夜，连续稀释3倍以产生10个不同的测量点。然后在ABN-2处理组中用ABN-2处理回收的细胞，在ABN-5处理组中使用P003-102，在4℃下以5.0μg/mL各自进行30分钟的初级染色。在染色后，将细胞以1,200rpm沉淀5分钟。除去上清液，并将包含D-PBS(-)的2％经透析的FBS添加到细胞中。在添加D-PBS后，将细胞离心并除去上清液。使用包含D-PBS(-)的2％经透析的FBS稀释100倍的PE标记的抗人IgG抗体，在4℃下进行30分钟的二次染色。在染色后，如上所述将细胞离心并除去上清液。将细胞悬浮在包含D-PBS(-)的2％经透析的FBS中，并且重复二次染色后的步骤。如实施例3中所述，使用FACA Verse测量流式细胞术。使用流式细胞术分析软件FlowJo，通过GeoMFI测定PE荧光强度值来分析细胞表面上的NMDAR表达水平。

将细胞表面上的NMDAR表达水平评价为细胞表面NR1表达率。细胞表面NR1表达率使用表达NMDAR的HEK细胞的PE荧光强度作为指标，并且基于在没有致病性抗人NR1抗体混合物的条件下用ABN-2和P003-102染色时的100％值和用同型对照抗体(3G6，一种内部产生的抗KLH抗体)染色时的0％值计算相对值。

当使用ABN-2和ABN-5时，细胞表面NR1表达率在图5中示出。对于细胞表面NMDAR表达水平的致病性抗人NR1抗体依赖性降低，ABN-2显示出比ABN-5高得多的恢复效果。对于细胞表面NMDAR表达水平的致病性抗人NR1抗体依赖性降低，ABN-4也显示出高恢复效果，尽管低于ABN-2(数据未显示)。

(实施例10：ABN-2和ABN-4对NMDAR功能恢复的评价)测量细胞钙浓度以评价ABN-2和ABN-4对抗由致病性抗体P003-102引起的NMDAR功能减退的效果。

将100uL表达NMDAR的HEK细胞以1.5x105个细胞/孔接种于测定培养基(包含0.2mM美金刚、10％ FBS的NeuroBasal培养基)中的聚-D赖氨酸包被的96孔板(Corning，356640)中。在37℃和5％CO2的条件下孵育过夜后，向每个孔中添加25uL在上述测定培养基中稀释至最终浓度为1μg/mL的P003-102。在37℃和5％ CO₂的条件下孵育15分钟后，向每个孔中添加25uL稀释至最终浓度为10至0.01μg/mL的ABN-2。在37℃和5％ CO₂的条件下孵育6小时后，除去培养基。如实施例4所述，将制备的溶液的100ul FLIPR钙6测定试剂盒(MolecularDevice，R8190)添加到每个孔中，并在37℃和5％ CO₂的条件下孵育2小时。使用FLIPRTETRA测量Ca²⁺内流。使用Ca²⁺内流作为指标来评价NMDAR的功能。

结果表明ABN-2对P003-102诱导的NMDAR功能减退具有剂量依赖性抑制作用(图6)。还使用ABN-4和ABN-5进行了相同测试。ABN-4显示出比ABN-2更弱的抑制作用(数据未显示)。

(实施例11：制备P003-102和ABN-2用于动物测试)

制备实施例12中使用的P003-102和ABN-2。

制备P003-102的表达载体。对于P003-102的重链表达，将编码由P003-102的重链可变区序列(SEQ ID NO:2)、CH1序列、铰链序列和FC序列组成的重链多肽(SEQ ID NO:46)的多核苷酸(SEQ IDNO:45)与编码信号序列(MEWSWVFLFFLSVTTGVHS；SEQ ID NO:49)的多核苷酸的3'侧连接，并且将连接的多核苷酸插入GS载体pEE6.4(Lonza)中。此外，对于P003-102的轻链表达，将编码其中轻链可变区序列(SEQ ID NO:4)和CL序列被添加到编码信号序列(MSVPTQVLGLLLLWLTDARC；SEQ ID NO:50)的多核苷酸的3'侧的多肽(SEQ ID NO:48)的多核苷酸(SEQ ID NO:47)连接，并且将连接的多核苷酸插入GS载体pEE12.4(Lonza)中。用NotI-HF(New England Biolabs，R3189L)和PvuI-HF(New England Biolabs，R3150L)对这些GS载体进行限制性酶处理。用DNA连接试剂盒(Ligation-Convenience Kit，NIPPONGENE，319-05961)进行这些限制性酶处理片段的连接。构建含有重链和轻链的两种基因的双GS载体(DGV)。进行DGV在CHO-K1SV细胞(Lonza)中的转染，并制备表达P003-102的稳定细胞系。根据常规方法，从细胞的培养上清液中纯化P003-102。

对于ABN-2的重链表达，将编码其中具有ABN-2的重链可变区序列(SEQ ID NO:10)、CH1序列、铰链序列和KIH突变的FC序列被添加到编码信号序列(MEWSWVFLFFLSVTTGVHS；SEQ ID NO:49)的多核苷酸的3'侧的重链多肽(SEQ ID NO:30)的多核苷酸(SEQ ID NO:29)连接，并且将连接的多核苷酸插入GS载体pEE6.4中。此外，对于ABN-2的轻链表达，将编码其中轻链可变区序列(SEQ ID NO:12)和CH1序列被添加到编码信号序列(MSVPTQVLGLLLLWLTDARC；SEQ ID NO:50)的多核苷酸的3'侧的多肽(SEQ ID NO:32)的多核苷酸(SEQ ID NO:31)插入GS载体pEE12.4中。用NotI-HF和PvuI-HF对这些GS载体进行限制性酶处理。用Mighty Mix进行这些限制性酶处理片段的连接，并构建含有重链和轻链的两种基因的双GS载体(DGV)。此外，对于添加了与重链多肽的KIH突变配对的KIH突变的FC多肽(SEQ ID NO:42)的表达，将编码所述FC多肽的多核苷酸(SEQ ID NO:41)与编码信号序列(MEWSWVFLFFLSVTTGVHS；SEQ ID NO:49)的多核苷酸的3'侧连接，并且将连接的多核苷酸插入GS载体pEE 12.4中。进行了包含编码DGV和Fc多肽的多核苷酸的两种类型pEE12.4表达载体的转染，并制备了表达ABN-2的稳定细胞系。根据常规方法，从细胞的培养上清液中纯化ABN-2。

(实施例12：制备抗NMDAR脑炎样狨猴模型，并评价ABN-2对狨猴模型的治疗效果)

用普通狨猴(下文称为“狨猴”)制备抗NMDAR脑炎模型，并在所述模型中评价ABN-2的治疗效果。如实施例11所述，通过P003-102的被动免疫制备所述模型。为了进行P003-102的输注，在异氟烷麻醉(Mylan Inc.，871119)下，将绒猴固定到具有人工呼吸器(SHINANO，SN-480-7)的脑立体定向仪(NARISHIGE，SR-6C-HT)上。将套管(Plastics One(注册商标)，813220PSPCLC)放置在脑室内的靶标处(A/P：3.5mm，M/L：±0.0mm，Dept：6.95mm(距硬脑膜))。关于放置套管的靶标，使用狨猴脑图(狨猴脑的立体定位图，NCBI Bookshelf ID：NBK55612)作为参考。接下来，连接脑室内的套管和微型输液泵(PRIMETECH，iPRECIO(注册商标)SMP-200)。将所述泵设置在不影响行为观察的夹克口袋(内部)处。在脑室内放置套管后，使PBS(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation，045-29795)从微型输液泵以2μL/小时的流速流出一周。随后，将所述泵换成装有P003-102(5,000μg/mL)的微型输液泵，并且以2μL/小时(10μg/小时)的流速将P003-102输入脑室中。将该时间点设置为施用第0天。P003-102的单一处理已经进行了14天。随后，将所述泵换成装有等量P003-102和治疗性抗体(ABN-2)(每种2,500μg/mL)的混合物的微型输液泵。将这两种类型的抗体以4μL/小时(每种10μg/小时)的流速输入脑室14天。将经处理的绒猴组称为“ABN-2施用组”(n＝9)。将用对照抗体(3G6，其是一种内部抗KLH抗体)处理的绒猴组称为“对照抗体施用组”(n＝3)。进行了以下观察。

观察异常行为的方法

在向脑室中施用P003-102之前(第0天)、在开始施用P003-102后的第14天(第14天)，以及在与P003-102一起施用ABN-2或对照抗体后的第14天(第28天)，在预定时间用摄像机记录约5分钟的视频。基于所述视频，使用狨猴版本的异常评定量表(异常评定量表：ARS)来评价异常行为评分，所述量表是一种改进的帕金森病统一评定量表(UPDRS，BehavBrain Res.,2008,第194卷,第152-161页)。该评价由一名在盲法条件下观察狨猴行为方面经验丰富的人员进行。ARS是一种最高分为22分的评分方法，其使用心理异常列表(注意力、动机、恐惧/焦虑)和行动障碍列表(随意运动的速度、运动的协调性、跳跃的存在与否、刻板行为、手臂和腿的异常)作为评价指标。

用ARS评价异常行为：

公认的是，自从将P003-102施用到狨猴的脑室中后，ARS值增加(数据未显示)。与第0天相比，ARS值(异常行为的表达)在第14天显著增加(在图7的中间)。在ABN-2施用组中，在第28天观察到ARS值显著降低。另一方面，对照抗体施用组甚至在第28天也显示出高ARS值(在图7的右边)。与对照抗体施用组相比，ABN-2施用组显示出由P003-102诱导的异常行为的显著改善(由ARS值的降低指示)。图8显示了第0天、第14天和第28天ABN-2施用组的每个个体狨猴的ARS的转变。

预期本发明的单价抗人NR1抗体衍生物可用于治疗抗NMDAR脑炎。此外，产生本发明的多核苷酸、表达载体、转化宿主细胞和抗体的方法可用于产生抗人NR1抗体衍生物。

序列表纯文本

在“人工序列”的情况下，在以下序列表中的数字标题<223>中给出了描述。具体地，序列表中SEQ ID NO:1和3中所示的序列是密码子优化的核苷酸序列，其编码ABN-5的重链可变区和轻链可变区。SEQ ID NO:5和7中所示的核苷酸序列编码ABN-1的重链可变区和轻链可变区。序列表中SEQ ID NO:9和11中所示的核苷酸序列编码ABN-2的重链可变区和轻链可变区。序列表中SEQ ID NO:13和15中所示的核苷酸序列编码ABN-3的重链可变区和轻链可变区。序列表中SEQ ID NO:17和19中所示的核苷酸序列编码ABN-4的重链可变区和轻链可变区。SEQ ID NO:6、8、10、12、14、16、18或20中所示的每个氨基酸序列分别是由SEQ IDNO:5、7、9、11、13、15、17或19中所示核苷酸序列编码的重链可变区或轻链可变区的氨基酸序列。SEQ ID NO:21和23中所示的核苷酸序列编码ABN-5的重链和轻链。SEQ ID NO:25和27中所示的核苷酸序列编码ABN-1的重链和轻链。SEQ ID NO:29和31中所示的核苷酸序列是编码ABN-2的重链和轻链的核苷酸序列。SEQ ID NO:33和35中所示的核苷酸序列编码ABN-3的重链和轻链。SEQ ID NO:37和39中所示的核苷酸序列编码ABN-4的重链和轻链。SEQ IDNO:22、24、26、28、30、32、34、36、38或40中所示的氨基酸序列分别是由SEQ ID NO:21、23、25、27、29、31、33、35、37或39中所示核苷酸序列编码的重链或轻链的氨基酸序列。SEQ IDNO:41中所示的核苷酸序列编码ABN-1-5的Fc多肽，并且SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列是由SEQ ID NO:41中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列。SEQ ID NO:43中所示的核苷酸序列编码实施例5中用于产生人NR1-His蛋白的人NR1的胞外结构域。SEQ ID NO:46中所示的氨基酸序列是由SEQ ID NO:45中所示核苷酸序列编码的P003-102的重链的氨基酸序列。SEQ ID NO:48中所示的氨基酸序列是由SEQ ID NO:47中所示核苷酸序列编码的P003-102的轻链的氨基酸序列。SEQ ID NO:49中所示的氨基酸序列是用于表达P003-12和ABN-2的重链以及实施例11中使用的Fc多肽的信号序列。SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列是用于表达实施例11中使用的P003-12和ABN-2的轻链的信号序列。

序列表

<110> 阿里亚利斯治疗公司

<120> 抗人NR1抗体衍生物

<130> A21009A00

<150> JP2020-092105

<151> 2020-05-27

<160> 50

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 360

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 经密码子优化的

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(360)

<400> 1

cag gtc cag ctg caa gag tct ggc cct gga ctg gtc aag cct tct ggc 48

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly

1 5 10 15

acc ctg tct ctg aca tgt gct gtg tcc ggc ggc tcc atc tcc tcc tct 96

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

aat tgg tgg tct tgg gtc cga cag cct cct ggc aaa gga ctg gaa tgg 144

Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

atc ggc gag atc tac cac tcc ggc aac acc aac tac aac ccc agc ctg 192

Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

aag tcc aga gtg acc gtg tcc gtg gac aag tcc aag aac cag ttc tcc 240

Lys Ser Arg Val Thr Val Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

ctg aag ctg acc tct gtg acc gct gcc gat acc gcc gtg tac tac tgt 288

Leu Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

gct aga gat gtg tct ggc gga gtg aat tgg ttc gat cct tgg ggc cag 336

Ala Arg Asp Val Ser Gly Gly Val Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln

100 105 110

ggc aca ctg gtt acc gtg tcc tct 360

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 2

<211> 120

<212> PRT

<213> 智人

<400> 2

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Val Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Val Ser Gly Gly Val Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 3

<211> 330

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 经密码子优化的

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(330)

<400> 3

aac ttt atg ctg acc cag cct cac tcc gtg tcc gag tct cca ggc aag 48

Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys

1 5 10 15

acc gtg acc atc tcc tgt acc aga tcc tcc ggc tct atc gcc tcc aac 96

Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Ala Ser Asn

20 25 30

tac gtg cag tgg tat cag cag agg cct ggc tct gct cct acc acc gtg 144

Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala Pro Thr Thr Val

35 40 45

atc tac gag gac aac cag agg cct tct ggc gtg ccc gat agg ttc tct 192

Ile Tyr Glu Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

ggc tcc atc gac tcc tct tcc aac tcc gcc tct ctg acc atc agc ggc 240

Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly

65 70 75 80

ctg aaa acc gag gac gag gcc gac tac tac tgc cag tcc tac gac tct 288

Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser

85 90 95

tcc acc gtg gtg ttt ggc ggc gga aca aag ctg aca gtg ctg 330

Ser Thr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 4

<211> 110

<212> PRT

<213> 智人

<400> 4

Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Ala Ser Asn

20 25 30

Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala Pro Thr Thr Val

35 40 45

Ile Tyr Glu Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly

65 70 75 80

Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser

85 90 95

Ser Thr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 5

<211> 363

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 小鼠抗体/人源化的

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(363)

<400> 5

gaa gtt cag ctg gtt cag tct ggc gcc gaa gtg aag aag cct ggc gag 48

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

tcc ctg aag atc tcc tgc aaa ggc tcc ggc tac acc tac acc agc tac 96

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Tyr Thr Ser Tyr

20 25 30

tgg atg aac tgg gtc cga cag atg cct ggc aaa ggc ctg gaa tgg atg 144

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

ggc aga atc gac ccc tac gac tcc gag aca cac tac gac cag aaa ttc 192

Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Asp Gln Lys Phe

50 55 60

aag gac caa gtg acc ctg agc gtg gac aag tcc atc tcc acc gct tac 240

Lys Asp Gln Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

ctg cag tgg tcc tct ctg aag gcc tct gac acc gcc atg tac tac tgt 288

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

gct ggc ggc atc acc acc atc ctc ggc ggc tac ttt gat tac tgg ggc 336

Ala Gly Gly Ile Thr Thr Ile Leu Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

cag ggc aca ctg gtc acc gtt tct tcc 363

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 6

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的构建体

<400> 6

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Tyr Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Asp Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Gln Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Gly Gly Ile Thr Thr Ile Leu Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 7

<211> 327

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 小鼠抗体/人源化的

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(327)

<400> 7

gac atc cag atg acc cag tct cca tcc tct ctg tcc gcc tct gtg ggc 48

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

gac aga gtg acc atc acc tgt aga gcc agc cag gac atc tcc aac tac 96

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

ctg aac tgg tat cag cag aag ccc ggc aag gcc cct aag ctg ctg atc 144

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

tac tac acc tct cgg ctg cac tct ggc gtg ccc tct aga ttt tct ggc 192

Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

tcc ggc tct ggc acc gac tat acc ctg aca atc tcc agc ctg cag cct 240

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

gag gac ttc gcc acc tac tat tgc cag cag ggc aac acc ctg cct cca 288

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Pro

85 90 95

tac aca ttt ggc cag ggc acc aag gtg gaa atc aag cgt 327

Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 8

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的构建体

<400> 8

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Pro

85 90 95

Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 9

<211> 366

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 小鼠抗体/人源化的

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(366)

<400> 9

gaa gtg cag ctg gtt gaa tct ggc ggc gga ttg gtt cag cct ggc gga 48

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

tct ctg aga ctg tcc tgc aag gct tct ggc tac gcc tac acc tcc tac 96

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Tyr Thr Ser Tyr

20 25 30

tgg atg aac tgg gtc cga cag gct cct ggc aaa gga ctc gtg tgg gtc 144

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val

35 40 45

gga aga atc gac ccc tac gac tcc gag aca cac tac aac cag aag ttc 192

Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

aag gac cgg ttc acc ctg agc gtg gac aag gcc aag tct acc acc tac 240

Lys Asp Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Lys Ala Lys Ser Thr Thr Tyr

65 70 75 80

ctg cag atg aac tcc ctg aga gcc gag gac acc gcc gtg tac tat tgc 288

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

gct acc ctg atc acc aca ctg aga ggc gag ggc gcc atg gaa tat tgg 336

Ala Thr Leu Ile Thr Thr Leu Arg Gly Glu Gly Ala Met Glu Tyr Trp

100 105 110

gga cag gga acc ctg gtc acc gtg tcc tct 366

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 10

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的构建体

<400> 10

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Tyr Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Lys Ala Lys Ser Thr Thr Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Leu Ile Thr Thr Leu Arg Gly Glu Gly Ala Met Glu Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 11

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 小鼠抗体/人源化的

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(324)

<400> 11

gac ctg cag atg acc cag tct cct tcc agc ctg tct gcc tct gtg ggc 48

Asp Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

gac aga gtg acc atc aca tgc aag gcc agc cag gac gtg aac acc gcc 96

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala

20 25 30

gtt gct tgg tat cag cag aag cct ggc aag gcc cct aag ctg ctg atc 144

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

tac tgg gcc tcc acc aga cat acc ggc gtg ccc tct aga ttc tcc ggc 192

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

tct ggc tct ggc acc gac tat acc ctg aca atc tcc agc ctg cag cct 240

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

gag gac ttc gcc acc tac tac tgc cag cag cac tac agc acc cct ttc 288

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Phe

85 90 95

acc ttt ggc cag ggc acc aag gtg gaa atc aag cgt 324

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 12

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的构建体

<400> 12

Asp Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 13

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 小鼠抗体/人源化的

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(357)

<400> 13

cag gtt cag ctg caa gag tct ggc cct ggc ctg gtc aag cct tcc gaa 48

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

aca ctg tcc ctg acc tgc agc gtg acc ggc tac tct atc acc tcc gac 96

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

tac tac tgg cac tgg atc aga cag cct cca ggc aaa ggc ctg gaa tgg 144

Tyr Tyr Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

atc gcc tac atc aga tac gac ggc cgg aac gac tac aac ccc agc ctg 192

Ile Ala Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Arg Asn Asp Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

aag aac aga gtg acc atc agc cgg gac acc tcc aag aac cag ttc tcc 240

Lys Asn Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

ctg aag ctg tcc tcc gtg acc gct gct gat acc gcc gtg tac tac tgc 288

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

gcc aga gag gac tac ggc tcc tcc tcc ttt gat tac tgg ggc cag ggc 336

Ala Arg Glu Asp Tyr Gly Ser Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

acc ctg gtc acc gtt agt tct 357

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 14

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的构建体

<400> 14

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Tyr Tyr Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Ala Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Arg Asn Asp Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Asn Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Asp Tyr Gly Ser Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 15

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 小鼠抗体/人源化的

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(324)

<400> 15

gac atc cag atg acc cag tct cca tcc tct ctg tcc gcc tct gtg ggc 48

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

gac aga gtg acc atc acc tgt cgg gcc tcc gag aac atc tac tcc aac 96

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

ctg gcc tgg tat cag cag aag cct ggc aag gct cct aag ctg ctg gtg 144

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val

35 40 45

tac gcc gct acc aat ctg gct gat ggc gtg ccc tct aga ttc tcc ggc 192

Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

tct ggc tct ggc acc gac tat acc ctg aca atc tcc agc ctg cag cct 240

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

gag gac ttc gcc acc tac tac tgc cag cac ttc tgg gac agc cct cca 288

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Asp Ser Pro Pro

85 90 95

acc ttt ggc cag ggc acc aag gtg gaa atc aag cgt 324

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 16

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的构建体

<400> 16

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val

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Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

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<210> 17

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 小鼠抗体/人源化的

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(357)

<400> 17

cag gtt cag ctg caa gag tct ggc cct ggc ctg gtc aag cct tct cag 48

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

acc ctg tct ctg acc tgc agc gtg acc ggc tac tcc atc acc tcc gac 96

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

tac tac tgg cac tgg atc aga cag cct cca ggc aaa ggc ctg gaa tgg 144

Tyr Tyr Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

atc gcc tac atc aga tac gac ggc cgg aac gac agc aac ccc agc ctg 192

Ile Ala Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Arg Asn Asp Ser Asn Pro Ser Leu

50 55 60

aag aac aga gtg acc atc agc cgg gac acc tcc aag aac cag ttc tcc 240

Lys Asn Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

ctg aag ctg tcc tcc gtg acc gct gct gat acc gcc gtg tac tac tgc 288

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

gcc aga gag gac tac gcc tcc tcc tcc ttt gat tac tgg ggc cag ggc 336

Ala Arg Glu Asp Tyr Ala Ser Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

acc ctg gtc acc gtt agt tct 357

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 18

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的构建体

<400> 18

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Tyr Tyr Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Ala Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Arg Asn Asp Ser Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Asn Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Asp Tyr Ala Ser Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 19

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 小鼠抗体/人源化的

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(324)

<400> 19

gac atc cag atg acc cag tct cca tcc tct ctg tcc gcc tct gtg ggc 48

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

gac aga gtg acc atc acc tgt cgg cct tcc gag aac atc tac tcc aac 96

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

ctg gcc tgg tat cag cag aag cct ggc aag gct cct aag ctg ctg gtg 144

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val

35 40 45

tac gcc gct acc aat ctg gct gat ggc gtg ccc tct aga ttc tcc ggc 192

Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

tct ggc tct ggc acc gac tat acc ctg aca atc tcc agc ctg cag cct 240

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

gag gat atc gcc acc tac tac tgc cag cac ttc tgg gac agc cct cca 288

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Asp Ser Pro Pro

85 90 95

acc ttt ggc cag ggc acc aag ctg gaa atc aag cgt 324

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 20

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的构建体

<400> 20

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val

35 40 45

Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Asp Ser Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 21

<211> 1350

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 经修饰的抗体

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1350)

<400> 21

cag gtc cag ctg caa gag tct ggc cct gga ctg gtc aag cct tct ggc 48

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly

1 5 10 15

acc ctg tct ctg aca tgt gct gtg tcc ggc ggc tcc atc tcc tcc tct 96

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

aat tgg tgg tct tgg gtc cga cag cct cct ggc aaa gga ctg gaa tgg 144

Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

atc ggc gag atc tac cac tcc ggc aac acc aac tac aac ccc agc ctg 192

Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

aag tcc aga gtg acc gtg tcc gtg gac aag tcc aag aac cag ttc tcc 240

Lys Ser Arg Val Thr Val Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

ctg aag ctg acc tct gtg acc gct gcc gat acc gcc gtg tac tac tgt 288

Leu Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

gct aga gat gtg tct ggc gga gtg aat tgg ttc gat cct tgg ggc cag 336

Ala Arg Asp Val Ser Gly Gly Val Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln

100 105 110

ggc aca ctg gtt acc gtg tcc tct gct tct acc aag gga ccc tct gtg 384

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

ttc cct ctg gct cct tcc agc aag tct acc tct ggt gga acc gct gct 432

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

ctg ggc tgc ctg gtc aag gat tac ttt cct gag cct gtg aca gtg tcc 480

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

tgg aac tct ggt gct ctg aca tcc ggc gtg cac acc ttt cca gct gtg 528

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

ctg cag tcc tct ggc ctg tac tct ctg tcc tct gtc gtg acc gtg cct 576

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

tct agc tct ctg ggc acc cag acc tac atc tgc aac gtg aac cac aag 624

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

cct tcc aac acc aag gtg gac aag aag gtg gaa ccc aag tcc tgc gac 672

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

aag acc cac acc tgt cct cca tgt cct gct cca gaa gct gct ggc ggt 720

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly

225 230 235 240

ccc tcc gtt ttc ctg ttt cca cct aag cct aag gac acc ctg atg atc 768

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

tct cgg acc cct gaa gtg aca tgc gtg gtg gtg gat gtg tcc cac gag 816

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

gat ccc gaa gtg aag ttc aat tgg tac gtg gac ggc gtg gaa gtg cac 864

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

aac gcc aag acc aag cct aga gag gaa cag tac aac tcc acc tac aga 912

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

gtg gtg tcc gtg ctg acc gtg ctg cac cag gat tgg ctg aac ggc aaa 960

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

gag tac aag tgc aag gtg tcc aac aag gcc ctg cct gct cct atc gaa 1008

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

aag acc atc tcc aag gct aag ggc cag cct cgg gaa cct cag gtt tac 1056

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

aca ctg cct cca tct cgg gac gag ctg acc aag aat cag gtg tcc ctg 1104

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

tct tgc gcc gtg aag ggc ttc tac cct tct gat atc gcc gtg gaa tgg 1152

Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

gag tcc aac ggc cag cct gag aac aac tac aag aca acc cct cct gtg 1200

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

ctg gac tcc gac ggc tca ttc ttc ctg gtg tcc aag ctg aca gtg gat 1248

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

aag tct cgg tgg cag cag ggc aac gtg ttc tcc tgt tct gtg atg cac 1296

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

gag gcc ctg cac aac cac tac acc cag aag agt ctg tct ctg tcc cct 1344

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

ggc aag 1350

Gly Lys

450

<210> 22

<211> 450

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的构建体

<400> 22

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Val Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Val Ser Gly Gly Val Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly Lys

450

<210> 23

<211> 648

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 经修饰的抗体

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(648)

<400> 23

aac ttt atg ctg acc cag cct cac tcc gtg tcc gag tct cca ggc aag 48

Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys

1 5 10 15

acc gtg acc atc tcc tgt acc aga tcc tcc ggc tct atc gcc tcc aac 96

Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Ala Ser Asn

20 25 30

tac gtg cag tgg tat cag cag agg cct ggc tct gct cct acc acc gtg 144

Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala Pro Thr Thr Val

35 40 45

atc tac gag gac aac cag agg cct tct ggc gtg ccc gat agg ttc tct 192

Ile Tyr Glu Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

ggc tcc atc gac tcc tct tcc aac tcc gcc tct ctg acc atc agc ggc 240

Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly

65 70 75 80

ctg aaa acc gag gac gag gcc gac tac tac tgc cag tcc tac gac tct 288

Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser

85 90 95

tcc acc gtg gtg ttt ggc ggc gga aca aag ctg aca gtg ctg ggc cag 336

Ser Thr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln

100 105 110

cct aag gcc aat cct acc gtg aca ctg ttc cct cca tcc tcc gag gaa 384

Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu

115 120 125

ctg cag gct aac aag gct acc ctc gtg tgc ctg atc tcc gat ttt tac 432

Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr

130 135 140

cct ggc gct gtg acc gtg gct tgg aag gct gat gga tct cct gtg aag 480

Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys

145 150 155 160

gcc ggc gtg gaa acc acc aag cct agc aag cag tcc aac aac aaa tac 528

Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr

165 170 175

gcc gcc tcc tcc tac ctg tct ctg acc cct gaa cag tgg aag tcc cac 576

Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His

180 185 190

cgg tcc tac tct tgc caa gtg acc cat gag ggc agc acc gtg gaa aag 624

Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys

195 200 205

aca gtg gcc cct acc gag tgc tct 648

Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210 215

<210> 24

<211> 216

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的构建体

<400> 24

Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Ala Ser Asn

20 25 30

Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala Pro Thr Thr Val

35 40 45

Ile Tyr Glu Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly

65 70 75 80

Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser

85 90 95

Ser Thr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln

100 105 110

Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu

115 120 125

Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr

130 135 140

Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys

145 150 155 160

Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr

165 170 175

Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His

180 185 190

Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys

195 200 205

Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210 215

<210> 25

<211> 1353

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 小鼠抗体/人源化的

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1353)

<400> 25

gaa gtt cag ctg gtt cag tct ggc gcc gaa gtg aag aag cct ggc gag 48

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

tcc ctg aag atc tcc tgc aaa ggc tcc ggc tac acc tac acc agc tac 96

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Tyr Thr Ser Tyr

20 25 30

tgg atg aac tgg gtc cga cag atg cct ggc aaa ggc ctg gaa tgg atg 144

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

ggc aga atc gac ccc tac gac tcc gag aca cac tac gac cag aaa ttc 192

Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Asp Gln Lys Phe

50 55 60

aag gac caa gtg acc ctg agc gtg gac aag tcc atc tcc acc gct tac 240

Lys Asp Gln Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

ctg cag tgg tcc tct ctg aag gcc tct gac acc gcc atg tac tac tgt 288

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

gct ggc ggc atc acc acc atc ctc ggc ggc tac ttt gat tac tgg ggc 336

Ala Gly Gly Ile Thr Thr Ile Leu Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

cag ggc aca ctg gtc acc gtt tct tcc gct agc acc aag gga ccc agc 384

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

gtg ttc cct ctg gct cct tcc agc aag tct acc tct ggc gga aca gct 432

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

130 135 140

gct ctg ggc tgc ctg gtc aag gac tac ttt cct gag cct gtg acc gtg 480

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

tcc tgg aac tct ggc gct ctg aca tct ggc gtg cac acc ttt cca gct 528

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

gtg ctg cag tcc tcc ggc ctg tac tct ctg tcc tct gtc gtg acc gtg 576

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

cct tcc agc tct ctg gga acc cag acc tac atc tgc aat gtg aac cac 624

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

195 200 205

aag cct tcc aac acc aag gtg gac aag aag gtg gaa ccc aag tcc tgc 672

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys

210 215 220

gac aag acc cac acc tgt cct cca tgt cct gct cca gaa gct gct ggc 720

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly

225 230 235 240

gga cct tcc gtg ttt ctg ttc cct cca aag cct aag gac acc ctg atg 768

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

atc tct cgg acc cct gaa gtg acc tgc gtg gtg gtg gat gtg tct cac 816

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

260 265 270

gag gac cca gaa gtg aag ttc aat tgg tac gtg gac ggc gtg gaa gtg 864

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

cac aac gcc aag acc aag cct aga gag gaa cag tac aac tcc acc tac 912

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

aga gtg gtg tcc gtg ctg acc gtg ctg cac cag gat tgg ctg aac ggc 960

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

aaa gag tac aag tgc aag gtg tcc aac aag gcc ctg cct gct cct atc 1008

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

325 330 335

gaa aag acc atc tcc aag gcc aag ggc cag cct agg gaa ccc cag gtt 1056

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

tac acc ttg cct cca tct cgg gac gag ctg acc aag aac cag gtg tcc 1104

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

ctg tct tgt gcc gtg aag ggc ttc tac ccc tcc gat atc gct gtg gaa 1152

Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

tgg gag agc aat ggc cag cct gag aac aac tac aag aca acc cct cct 1200

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

gtg ctg gac tcc gac ggc tca ttc ttc ctg gtg tcc aag ctg aca gtg 1248

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

gat aag tcc aga tgg cag cag ggc aac gtg ttc tcc tgc agc gtg atg 1296

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

cac gag gcc ctg cac aat cac tac aca cag aag tct ctg tct ctg agc 1344

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

ccc ggc aag 1353

Pro Gly Lys

450

<210> 26

<211> 451

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的构建体

<400> 26

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Tyr Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Asp Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Gln Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Gly Gly Ile Thr Thr Ile Leu Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys

210 215 220

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 小鼠抗体/人源化的

<220>

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

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35 40 45

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tcc ggc tct ggc acc gac tat acc ctg aca atc tcc agc ctg cag cct 240

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Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Pro

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180 185 190

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<210> 28

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的构建体

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<220>

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<210> 30

<211> 452

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的构建体

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<210> 31

<211> 642

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 小鼠抗体/人源化的

<220>

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Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

tac aag tgc aag gtg tcc aac aag gcc ctg cct gct cct atc gaa aag 1008

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

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ttg cct cca tct cgg gac gag ctg acc aag aat cag gtg tcc ctg tct 1104

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Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

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Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

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gac tcc gac ggc tca ttc ttc ctg gtg tcc aag ctg aca gtg gac aag 1248

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

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tcc aga tgg cag cag ggc aac gtg ttc tcc tgc tct gtg atg cac gag 1296

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

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Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

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Lys

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<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的构建体

<400> 34

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1 5 10 15

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Lys Asn Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Asp Tyr Gly Ser Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser

355 360 365

Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

Lys

<210> 35

<211> 642

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 小鼠抗体/人源化的

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(642)

<400> 35

gac atc cag atg acc cag tct cca tcc tct ctg tcc gcc tct gtg ggc 48

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

gac aga gtg acc atc acc tgt cgg gcc tcc gag aac atc tac tcc aac 96

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

ctg gcc tgg tat cag cag aag cct ggc aag gct cct aag ctg ctg gtg 144

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val

35 40 45

tac gcc gct acc aat ctg gct gat ggc gtg ccc tct aga ttc tcc ggc 192

Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

tct ggc tct ggc acc gac tat acc ctg aca atc tcc agc ctg cag cct 240

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

gag gac ttc gcc acc tac tac tgc cag cac ttc tgg gac agc cct cca 288

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Asp Ser Pro Pro

85 90 95

acc ttt ggc cag ggc acc aag gtg gaa atc aag cgt acg gtg gcc gct 336

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

cct tcc gtg ttc atc ttc cca cct tcc gac gag cag ctg aag tcc ggc 384

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

aca gct tct gtc gtg tgc ctg ctg aac aac ttc tac cct cgg gaa gcc 432

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

aag gtg cag tgg aag gtg gac aat gcc ctg cag tcc ggc aac tcc caa 480

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

gag tct gtg acc gag cag gac tcc aag gac agc acc tac agc ctg tcc 528

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

tcc aca ctg acc ctg tcc aag gcc gac tac gag aag cac aag gtg tac 576

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

gct tgc gaa gtg acc cac cag ggc ctg tct agc cct gtg acc aag tcc 624

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

ttc aac cgg ggc gag tgc 642

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 36

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的构建体

<400> 36

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val

35 40 45

Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Asp Ser Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 37

<211> 1347

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 小鼠抗体/人源化的

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1347)

<400> 37

cag gtt cag ctg caa gag tct ggc cct ggc ctg gtc aag cct tct cag 48

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

acc ctg tct ctg acc tgc agc gtg acc ggc tac tcc atc acc tcc gac 96

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

tac tac tgg cac tgg atc aga cag cct cca ggc aaa ggc ctg gaa tgg 144

Tyr Tyr Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

atc gcc tac atc aga tac gac ggc cgg aac gac agc aac ccc agc ctg 192

Ile Ala Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Arg Asn Asp Ser Asn Pro Ser Leu

50 55 60

aag aac aga gtg acc atc agc cgg gac acc tcc aag aac cag ttc tcc 240

Lys Asn Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

ctg aag ctg tcc tcc gtg acc gct gct gat acc gcc gtg tac tac tgc 288

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

gcc aga gag gac tac gcc tcc tcc tcc ttt gat tac tgg ggc cag ggc 336

Ala Arg Glu Asp Tyr Ala Ser Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

acc ctg gtc acc gtt agt tct gct agc acc aag gga ccc agc gtg ttc 384

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

cct ctg gct cct tcc agc aag tct acc tct ggc gga aca gct gct ctg 432

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

ggc tgt ctg gtc aag gac tac ttc cct gag cct gtg acc gtg tcc tgg 480

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

aac tct ggc gct ctg aca tct ggc gtg cac acc ttt cca gct gtg ctg 528

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

cag tcc tcc ggc ctg tac tct ctg tcc tct gtc gtg acc gtg cct tcc 576

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

agc tct ctg gga acc cag acc tac atc tgc aat gtg aac cac aag cct 624

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

tcc aac acc aag gtg gac aag aag gtg gaa ccc aag tcc tgc gac aag 672

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

acc cac acc tgt cct cca tgt cct gct cca gaa gct gct ggc ggc cct 720

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro

225 230 235 240

tcc gtg ttt ctg ttc cct cca aag cct aag gac acc ctg atg atc tct 768

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

cgg acc cct gaa gtg acc tgc gtg gtg gtg gat gtg tct cac gag gat 816

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

ccc gaa gtg aag ttc aat tgg tac gtg gac ggc gtg gaa gtg cac aac 864

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

gcc aag acc aag cct aga gag gaa cag tac aac tcc acc tac aga gtg 912

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

gtg tcc gtg ctg acc gtg ctg cac cag gat tgg ctg aac ggc aaa gag 960

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

tac aag tgc aag gtg tcc aac aag gcc ctg cct gct cct atc gaa aag 1008

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

acc atc tcc aag gct aag ggc cag cct cgg gaa cct cag gtg tac aca 1056

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

ttg cct cca tct cgg gac gag ctg acc aag aat cag gtg tcc ctg tcc 1104

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser

355 360 365

tgt gcc gtg aag ggc ttc tac cct tcc gat atc gcc gtg gaa tgg gag 1152

Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

tcc aat ggc cag cca gag aac aac tac aag aca acc cct cct gtg ctg 1200

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400

gac tcc gac ggc tca ttc ttc ctg gtg tcc aag ctg aca gtg gac aag 1248

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

tcc aga tgg cag cag ggc aac gtg ttc tcc tgc tct gtg atg cac gag 1296

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

gcc ctg cac aac cac tac acc cag aag agt ctg tct ctg tcc cct ggc 1344

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

aag 1347

Lys

<210> 38

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的构建体

<400> 38

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Tyr Tyr Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Ala Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Arg Asn Asp Ser Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Asn Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Asp Tyr Ala Ser Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser

355 360 365

Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

Lys

<210> 39

<211> 642

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 小鼠抗体/人源化的

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(642)

<400> 39

gac atc cag atg acc cag tct cca tcc tct ctg tcc gcc tct gtg ggc 48

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

gac aga gtg acc atc acc tgt cgg cct tcc gag aac atc tac tcc aac 96

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

ctg gcc tgg tat cag cag aag cct ggc aag gct cct aag ctg ctg gtg 144

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val

35 40 45

tac gcc gct acc aat ctg gct gat ggc gtg ccc tct aga ttc tcc ggc 192

Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

tct ggc tct ggc acc gac tat acc ctg aca atc tcc agc ctg cag cct 240

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

gag gat atc gcc acc tac tac tgc cag cac ttc tgg gac agc cct cca 288

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Asp Ser Pro Pro

85 90 95

acc ttt ggc cag ggc acc aag ctg gaa atc aag cgt acg gtg gcc gct 336

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

cct tcc gtg ttc atc ttc cca cct tcc gac gag cag ctg aag tcc ggc 384

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

aca gct tct gtc gtg tgc ctg ctg aac aac ttc tac cct cgg gaa gcc 432

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

aag gtg cag tgg aag gtg gac aat gcc ctg cag tcc ggc aac tcc caa 480

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

gag tct gtg acc gag cag gac tcc aag gac agc acc tac agc ctg tcc 528

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

tcc aca ctg acc ctg tcc aag gcc gac tac gag aag cac aag gtg tac 576

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

gct tgc gaa gtg acc cac cag ggc ctg tct agc cct gtg acc aag tcc 624

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

ttc aac cgg ggc gag tgc 642

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 40

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的构建体

<400> 40

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val

35 40 45

Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Asp Ser Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 41

<211> 666

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 经修饰的Fc片段

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(666)

<400> 41

tgc cct cca tgt cct gct cca gaa gcc gct ggc gga ccc tct gtg ttt 48

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

1 5 10 15

ctg ttc cct cca aag cct aag gac acc ctg atg atc tct cgg acc cct 96

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

20 25 30

gaa gtg acc tgc gtg gtg gtg gat gtg tct cac gag gat ccc gaa gtg 144

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

35 40 45

aag ttc aat tgg tac gtg gac ggc gtg gaa gtg cac aac gcc aag acc 192

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

50 55 60

aag cct aga gag gaa cag tac aac tcc acc tac aga gtg gtg tcc gtg 240

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

65 70 75 80

ctg acc gtg ctg cac cag gat tgg ctg aac ggc aaa gag tac aag tgc 288

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

85 90 95

aag gtg tcc aac aag gcc ctg cct gct cct atc gaa aag acc atc tcc 336

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

100 105 110

aag gct aag ggc cag cct cgg gaa cct cag gtt tac aca ctg cct cca 384

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

115 120 125

tct cgg gac gag ctg acc aag aat cag gtg tcc ctg tgg tgc ctg gtc 432

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val

130 135 140

aag ggc ttc tac cct tcc gat atc gcc gtg gaa tgg gag tcc aat ggc 480

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

145 150 155 160

cag cct gag aac aac tac aag acc aca cct cct gtg ctg gac tcc gac 528

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

165 170 175

ggc tca ttc ttc ctg tac tcc aag ctg aca gtg gac aag tct cgg tgg 576

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

180 185 190

cag cag ggc aac gtg ttc tcc tgt tct gtg atg cac gag gcc ctg cac 624

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

195 200 205

aac cac tac acc cag aag tcc ctg tct ctg tcc cct ggc aaa 666

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

210 215 220

<210> 42

<211> 222

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的构建体

<400> 42

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

1 5 10 15

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

20 25 30

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

35 40 45

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

50 55 60

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

65 70 75 80

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

85 90 95

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

100 105 110

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

115 120 125

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val

130 135 140

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

145 150 155 160

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

165 170 175

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

180 185 190

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

195 200 205

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

210 215 220

<210> 43

<211> 1176

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 经密码子优化的

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1176)

<400> 43

atg tca acg atg agg ctc ctg acc ctt gct ctg ctg ttc agc tgc tca 48

Met Ser Thr Met Arg Leu Leu Thr Leu Ala Leu Leu Phe Ser Cys Ser

1 5 10 15

gtt gcc agg gct gct tgt gac ccc aaa atc gtg aac att ggc gcc gtg 96

Val Ala Arg Ala Ala Cys Asp Pro Lys Ile Val Asn Ile Gly Ala Val

20 25 30

ctg tct acc aga aag cac gag cag atg ttt agg gaa gcc gtg aac cag 144

Leu Ser Thr Arg Lys His Glu Gln Met Phe Arg Glu Ala Val Asn Gln

35 40 45

gca aac aag agg cat ggg tct tgg aaa att cag ctg aat gca acc tct 192

Ala Asn Lys Arg His Gly Ser Trp Lys Ile Gln Leu Asn Ala Thr Ser

50 55 60

gtg aca cac aag cca aat gcc att caa atg gca ctg tcc gtc tgc gag 240

Val Thr His Lys Pro Asn Ala Ile Gln Met Ala Leu Ser Val Cys Glu

65 70 75 80

gac ttg att agc agc cag gtt tac gcc ata ctc gtg agc cat cct ccc 288

Asp Leu Ile Ser Ser Gln Val Tyr Ala Ile Leu Val Ser His Pro Pro

85 90 95

acg ccc aat gac cac ttc act cca act cct gtt tcc tat acc gct ggc 336

Thr Pro Asn Asp His Phe Thr Pro Thr Pro Val Ser Tyr Thr Ala Gly

100 105 110

ttt tac cgg att cct gtc ttg ggc ctc acc aca aga atg agt atc tac 384

Phe Tyr Arg Ile Pro Val Leu Gly Leu Thr Thr Arg Met Ser Ile Tyr

115 120 125

agt gac aag agc ata cac ctg agt ttc ctc cgc act gtg cct ccc tat 432

Ser Asp Lys Ser Ile His Leu Ser Phe Leu Arg Thr Val Pro Pro Tyr

130 135 140

agt cac cag tcc tct gtg tgg ttc gaa atg atg agg gtc tac tcc tgg 480

Ser His Gln Ser Ser Val Trp Phe Glu Met Met Arg Val Tyr Ser Trp

145 150 155 160

aat cac atc att ctg ttg gtg tcc gat gac cac gaa gga cgt gca gcc 528

Asn His Ile Ile Leu Leu Val Ser Asp Asp His Glu Gly Arg Ala Ala

165 170 175

cag aaa agg ctg gaa act ctg ctc gaa gaa cga gag tca aaa gcg gaa 576

Gln Lys Arg Leu Glu Thr Leu Leu Glu Glu Arg Glu Ser Lys Ala Glu

180 185 190

aag gtg ctg caa ttc gac cca gga aca aag aac gtc act gcg ttg ctg 624

Lys Val Leu Gln Phe Asp Pro Gly Thr Lys Asn Val Thr Ala Leu Leu

195 200 205

atg gag gca aaa gag ctg gaa gca cgg gtg atc atc ctc agc gca tca 672

Met Glu Ala Lys Glu Leu Glu Ala Arg Val Ile Ile Leu Ser Ala Ser

210 215 220

gag gac gat gcc gcc act gtg tat cga gct gct gcg atg ctg aat atg 720

Glu Asp Asp Ala Ala Thr Val Tyr Arg Ala Ala Ala Met Leu Asn Met

225 230 235 240

aca ggg tcc ggc tac gtc tgg ctt gtc ggc gag aga gag att agc ggt 768

Thr Gly Ser Gly Tyr Val Trp Leu Val Gly Glu Arg Glu Ile Ser Gly

245 250 255

aat gct ctg cgg tat gct ccc gat ggc atc ttg ggg ctt cag ctc atc 816

Asn Ala Leu Arg Tyr Ala Pro Asp Gly Ile Leu Gly Leu Gln Leu Ile

260 265 270

aat ggc aag aac gaa agc gcc cat att tct gac gcc gtt ggg gta gta 864

Asn Gly Lys Asn Glu Ser Ala His Ile Ser Asp Ala Val Gly Val Val

275 280 285

gcc caa gca gtt cac gag ctg ctt gag aag gag aac ata acc gat cca 912

Ala Gln Ala Val His Glu Leu Leu Glu Lys Glu Asn Ile Thr Asp Pro

290 295 300

cct aga ggg tgt gtg ggg aac acc aac att tgg aaa aca gga ccg ctg 960

Pro Arg Gly Cys Val Gly Asn Thr Asn Ile Trp Lys Thr Gly Pro Leu

305 310 315 320

ttc aaa cga gtt ctg atg tct agc aag tat gct gat ggc gtg aca ggc 1008

Phe Lys Arg Val Leu Met Ser Ser Lys Tyr Ala Asp Gly Val Thr Gly

325 330 335

aga gtg gag ttc aac gag gat ggt gat cgg aaa ttt gct aac tac agc 1056

Arg Val Glu Phe Asn Glu Asp Gly Asp Arg Lys Phe Ala Asn Tyr Ser

340 345 350

att atg aat ctg caa aat cgc aaa ctg gta cag gtt ggg ata tac aat 1104

Ile Met Asn Leu Gln Asn Arg Lys Leu Val Gln Val Gly Ile Tyr Asn

355 360 365

gga acc cac gtg atc ccg aac gac cgg aag ata atc tgg cct gga ggc 1152

Gly Thr His Val Ile Pro Asn Asp Arg Lys Ile Ile Trp Pro Gly Gly

370 375 380

gaa acg gag aaa ccc cgc ggt tat 1176

Glu Thr Glu Lys Pro Arg Gly Tyr

385 390

<210> 44

<211> 392

<212> PRT

<213> 智人

<400> 44

Met Ser Thr Met Arg Leu Leu Thr Leu Ala Leu Leu Phe Ser Cys Ser

1 5 10 15

Val Ala Arg Ala Ala Cys Asp Pro Lys Ile Val Asn Ile Gly Ala Val

20 25 30

Leu Ser Thr Arg Lys His Glu Gln Met Phe Arg Glu Ala Val Asn Gln

35 40 45

Ala Asn Lys Arg His Gly Ser Trp Lys Ile Gln Leu Asn Ala Thr Ser

50 55 60

Val Thr His Lys Pro Asn Ala Ile Gln Met Ala Leu Ser Val Cys Glu

65 70 75 80

Asp Leu Ile Ser Ser Gln Val Tyr Ala Ile Leu Val Ser His Pro Pro

85 90 95

Thr Pro Asn Asp His Phe Thr Pro Thr Pro Val Ser Tyr Thr Ala Gly

100 105 110

Phe Tyr Arg Ile Pro Val Leu Gly Leu Thr Thr Arg Met Ser Ile Tyr

115 120 125

Ser Asp Lys Ser Ile His Leu Ser Phe Leu Arg Thr Val Pro Pro Tyr

130 135 140

Ser His Gln Ser Ser Val Trp Phe Glu Met Met Arg Val Tyr Ser Trp

145 150 155 160

Asn His Ile Ile Leu Leu Val Ser Asp Asp His Glu Gly Arg Ala Ala

165 170 175

Gln Lys Arg Leu Glu Thr Leu Leu Glu Glu Arg Glu Ser Lys Ala Glu

180 185 190

Lys Val Leu Gln Phe Asp Pro Gly Thr Lys Asn Val Thr Ala Leu Leu

195 200 205

Met Glu Ala Lys Glu Leu Glu Ala Arg Val Ile Ile Leu Ser Ala Ser

210 215 220

Glu Asp Asp Ala Ala Thr Val Tyr Arg Ala Ala Ala Met Leu Asn Met

225 230 235 240

Thr Gly Ser Gly Tyr Val Trp Leu Val Gly Glu Arg Glu Ile Ser Gly

245 250 255

Asn Ala Leu Arg Tyr Ala Pro Asp Gly Ile Leu Gly Leu Gln Leu Ile

260 265 270

Asn Gly Lys Asn Glu Ser Ala His Ile Ser Asp Ala Val Gly Val Val

275 280 285

Ala Gln Ala Val His Glu Leu Leu Glu Lys Glu Asn Ile Thr Asp Pro

290 295 300

Pro Arg Gly Cys Val Gly Asn Thr Asn Ile Trp Lys Thr Gly Pro Leu

305 310 315 320

Phe Lys Arg Val Leu Met Ser Ser Lys Tyr Ala Asp Gly Val Thr Gly

325 330 335

Arg Val Glu Phe Asn Glu Asp Gly Asp Arg Lys Phe Ala Asn Tyr Ser

340 345 350

Ile Met Asn Leu Gln Asn Arg Lys Leu Val Gln Val Gly Ile Tyr Asn

355 360 365

Gly Thr His Val Ile Pro Asn Asp Arg Lys Ile Ile Trp Pro Gly Gly

370 375 380

Glu Thr Glu Lys Pro Arg Gly Tyr

385 390

<210> 45

<211> 1350

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 致病性抗人NR1抗体

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1350)

<400> 45

cag gtc cag ctg caa gag tct ggc cct gga ctg gtc aag cct tct ggc 48

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly

1 5 10 15

acc ctg tct ctg aca tgt gct gtg tcc ggc ggc tcc atc tcc tcc tct 96

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

aat tgg tgg tct tgg gtc cga cag cct cct ggc aaa gga ctg gaa tgg 144

Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

atc ggc gag atc tac cac tcc ggc aac acc aac tac aac ccc agc ctg 192

Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

aag tcc aga gtg acc gtg tcc gtg gac aag tcc aag aac cag ttc tcc 240

Lys Ser Arg Val Thr Val Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

ctg aag ctg acc tct gtg acc gct gcc gat acc gcc gtg tac tac tgt 288

Leu Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

gct aga gat gtg tct ggc gga gtg aat tgg ttc gat cct tgg ggc cag 336

Ala Arg Asp Val Ser Gly Gly Val Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln

100 105 110

ggc aca ctg gtt acc gtg tcc tct gct tct acc aag gga ccc tct gtg 384

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

ttc cct ctg gct cct tcc agc aag tct acc tct ggt gga acc gct gct 432

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

ctg ggc tgc ctg gtc aag gat tac ttt cct gag cct gtg aca gtg tcc 480

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

tgg aac tct ggt gct ctg aca tcc ggc gtg cac acc ttt cca gct gtg 528

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

ctg cag tcc tct ggc ctg tac tct ctg tcc tct gtc gtg acc gtg cct 576

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

tct agc tct ctg ggc acc cag acc tac atc tgc aac gtg aac cac aag 624

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

cct tcc aac acc aag gtg gac aag aag gtg gaa ccc aag tcc tgc gac 672

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

aag acc cac acc tgt cct cca tgt cct gct cca gaa ctg ctc ggc ggt 720

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

ccc tcc gtt ttc ctg ttt cca cct aag cct aag gac acc ctg atg atc 768

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

tct cgg acc cct gaa gtg aca tgc gtg gtg gtg gat gtg tcc cac gag 816

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

gat ccc gaa gtg aag ttc aat tgg tac gtg gac ggc gtg gaa gtg cac 864

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

aac gcc aag acc aag cct aga gag gaa cag tac aac tcc acc tac aga 912

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

gtg gtg tcc gtg ctg acc gtg ctg cac cag gat tgg ctg aac ggc aaa 960

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

gag tac aag tgc aag gtg tcc aac aag gcc ctg cct gct cct atc gaa 1008

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

aag acc atc tcc aag gct aag ggc cag cct cgg gaa cct cag gtt tac 1056

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

aca ctg cct cca tct cgg gac gag ctg acc aag aat cag gtg tcc ctg 1104

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

acc tgc ctc gtg aag ggc ttc tac cct tct gat atc gcc gtg gaa tgg 1152

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

gag tcc aac ggc cag cct gag aac aac tac aag aca acc cct cct gtg 1200

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

ctg gac tcc gac ggc tca ttc ttc ctg tac tcc aag ctg aca gtg gat 1248

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

aag tcc cgg tgg cag cag ggc aac gtg ttc tct tgt tct gtg atg cac 1296

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

gag gcc ctg cac aac cac tac acc cag aag agt ctg tct ctg tcc cct 1344

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

ggc aag 1350

Gly Lys

450

<210> 46

<211> 450

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的构建体

<400> 46

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Val Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Val Ser Gly Gly Val Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly Lys

450

<210> 47

<211> 648

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 致病性抗人NR1抗体

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(648)

<400> 47

aac ttt atg ctg acc cag cct cac tcc gtg tcc gag tct cca ggc aag 48

Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys

1 5 10 15

acc gtg acc atc tcc tgt acc aga tcc tcc ggc tct atc gcc tcc aac 96

Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Ala Ser Asn

20 25 30

tac gtg cag tgg tat cag cag agg cct ggc tct gct cct acc acc gtg 144

Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala Pro Thr Thr Val

35 40 45

atc tac gag gac aac cag agg cct tct ggc gtg ccc gat agg ttc tct 192

Ile Tyr Glu Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

ggc tcc atc gac tcc tct tcc aac tcc gcc tct ctg acc atc agc ggc 240

Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly

65 70 75 80

ctg aaa acc gag gac gag gcc gac tac tac tgc cag tcc tac gac tct 288

Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser

85 90 95

tcc acc gtg gtg ttt ggc ggc gga aca aag ctg aca gtg ctg ggc cag 336

Ser Thr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln

100 105 110

cct aag gcc aat cct acc gtg aca ctg ttc cct cca tcc tcc gag gaa 384

Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu

115 120 125

ctg cag gct aac aag gct acc ctc gtg tgc ctg atc tcc gat ttt tac 432

Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr

130 135 140

cct ggc gct gtg acc gtg gct tgg aag gct gat gga tct cct gtg aag 480

Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys

145 150 155 160

gcc ggc gtg gaa acc acc aag cct agc aag cag tcc aac aac aaa tac 528

Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr

165 170 175

gcc gcc tcc tcc tac ctg tct ctg acc cct gaa cag tgg aag tcc cac 576

Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His

180 185 190

cgg tcc tac tct tgc caa gtg acc cat gag ggc agc acc gtg gaa aag 624

Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys

195 200 205

aca gtg gcc cct acc gag tgc tct 648

Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210 215

<210> 48

<211> 216

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的构建体

<400> 48

Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Ala Ser Asn

20 25 30

Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala Pro Thr Thr Val

35 40 45

Ile Tyr Glu Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly

65 70 75 80

Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser

85 90 95

Ser Thr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln

100 105 110

Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu

115 120 125

Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr

130 135 140

Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys

145 150 155 160

Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr

165 170 175

Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His

180 185 190

Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys

195 200 205

Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210 215

<210> 49

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的构建体

<400> 49

Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly

1 5 10 15

Val His Ser

<210> 50

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的构建体

<400> 50

Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr

1 5 10 15

Asp Ala Arg Cys

20

Claims

1.一种包含重链可变区和轻链可变区的单臂抗人NR1抗体，所述重链可变区包含由SEQID NO:10的氨基酸31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:10的氨基酸50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:10的氨基酸99至111的氨基酸序列组成的CDR3，并且所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:12的氨基酸24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ IDNO:12的氨基酸50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:12的氨基酸89至97的氨基酸序列组成的CDR3。

2.根据权利要求1所述的单臂抗人NR1抗体，其是一种单臂抗人NR1抗体，其包含由SEQID NO:10中所示氨基酸序列组成的重链可变区，和由SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列组成的轻链可变区。

3.根据权利要求1所述的单臂抗人NR1抗体，其是一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区包含由SEQ ID NO:10的氨基酸31至35的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:10的氨基酸50至66的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:10的氨基酸99至111的氨基酸序列组成的CDR3，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区包含由SEQ ID NO:12的氨基酸24至34的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:12的氨基酸50至56的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:12的氨基酸89至97的氨基酸序列组成的CDR3。

4.根据权利要求3所述的单臂抗人NR1抗体，其是一种包含重链、轻链以及Fc多肽的单臂抗人NR1抗体，所述重链包含重链可变区，所述重链可变区由SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列组成，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区由SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列组成。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的单臂抗人NR1抗体，其中Fc区根据Eu编号包含LALA突变L234A和L235A。

6.根据权利要求1至4中任一项所述的单臂抗人NR1抗体，其中Fc区包含杵臼突变。

7.根据权利要求1至4中任一项所述的单臂抗人NR1抗体，其中Fc区根据Eu编号包含LALA突变L234A和L235A和杵臼突变。

8.根据权利要求1至4中任一项所述的单臂抗人NR1抗体，其中所述单臂抗人NR1抗体是人抗体或人源化抗体。

9.一种单臂抗人NR1抗体，其包含由SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列组成的重链、由SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列组成的轻链，以及由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽。

10.一种包含以下(a)和/或(b)中的核苷酸序列的多核苷酸：

(a)编码根据权利要求1或权利要求2所述的单臂抗人NR1抗体的重链可变区的核苷酸序列；

(b)编码根据权利要求1或权利要求2所述的单臂抗人NR1抗体的轻链可变区的核苷酸序列。

11.一种包含以下(a)和/或(b)中的核苷酸序列的多核苷酸：

(a)编码根据权利要求3或权利要求4所述的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列；

(b)编码根据权利要求3或权利要求4所述的单臂抗人NR1抗体的轻链的核苷酸序列。

12.一种包含以下(a)和/或(b)中的核苷酸序列的多核苷酸：

13.一种包含多核苷酸的表达载体，所述多核苷酸包含以下(a)和/或(b)中所述的核苷酸序列：

14.一种包含多核苷酸的表达载体，所述多核苷酸包含以下(a)和/或(b)中所述的核苷酸序列：

15.根据权利要求13或14所述的表达载体，其进一步包含含有编码Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸。

16.一种表达载体，其包含根据以下(a)和/或(b)中的多核苷酸：

17.根据权利要求16所述的表达载体，其进一步包含多核苷酸，所述多核苷酸包含编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列。

18.宿主细胞，其用选自以下(a)至(c)的表达载体转化：

(a)包含含有编码根据权利要求1或权利要求2所述的单臂抗人NR1抗体的重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(b)包含含有编码根据权利要求1或权利要求2所述的单臂抗人NR1抗体的轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(c)包含含有编码根据权利要求1或权利要求2所述的单臂抗人NR1抗体的重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体和包含含有编码所述抗体的轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体。

19.宿主细胞，其用选自以下(a)至(c)的表达载体转化：

(a)包含含有编码根据权利要求3或权利要求4所述的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(b)包含含有编码根据权利要求3或权利要求4所述的单臂抗人NR1抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(c)包含含有编码根据权利要求3或权利要求4所述的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体和包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体。

20.宿主细胞，其用选自以下(a)至(d)的表达载体转化：

(a)包含含有编码根据权利要求3或权利要求4所述的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体和包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(b)包含含有编码根据权利要求3或权利要求4所述的单臂抗人NR1抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体和包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(c)包含含有编码根据权利要求3或权利要求4所述的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体、包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体和包含含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(d)包含含有编码根据权利要求3或权利要求4所述的单臂抗人NR1抗体的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体、包含含有编码所述抗体的轻链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码所述抗体的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体。

21.宿主细胞，其用选自以下(a)至(j)的表达载体转化：

(d)包含含有编码由SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体和包含含有编码由SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(g)包含含有编码由SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体和包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(h)包含含有编码由SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体和包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(i)包含含有编码由SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体和包含含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体；

(j)包含含有编码由SEQ ID NO:30中所示氨基酸序列组成的重链的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码由SEQ ID NO:42中所示氨基酸序列组成的Fc多肽的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体和包含含有编码由SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列组成的轻链的核苷酸序列的多核苷酸的表达载体。

22.一种用于产生单臂抗人NR1抗体的方法，其包括培养根据权利要求18-21中任一项所述的宿主细胞，以表达构成所述单臂抗人NR1抗体的多肽的步骤。

23.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至11中任一项所述的单臂抗人NR1抗体和药学上可接受的赋形剂。

24.根据权利要求23所述的药物组合物，其为用于治疗抗NMDAR脑炎的药物组合物。

25.根据权利要求1至11中任一项所述的单臂抗人NR1抗体在制备用于治疗抗NMDAR脑炎的药物组合物中的用途。