HK40085586B - 哒嗪基噻唑甲酰胺类化合物 - Google Patents

Description

哒嗪基噻唑甲酰胺类化合物

本申请是申请日为2020年12月24日、申请号为202080011114.X(国际申请号为PCT/JP2020/048337)、发明名称为“哒嗪基噻唑甲酰胺类化合物”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及被期待作为药物组合物、二酰基甘油激酶ζ(DGKzeta)抑制剂有用的哒嗪基噻唑甲酰胺类化合物，例如涉及被期待作为与免疫细胞活化相关的癌症、或者对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的癌症的治疗用药物组合物、特别是对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的与免疫细胞活化相关的癌症的治疗用药物组合物的有效成分有用的哒嗪基噻唑甲酰胺类化合物。

背景技术

癌症免疫疗法作为成为继现有的外科治疗、放射线疗法、癌症药物疗法(化学疗法、分子靶向药)之后的第四根支柱的癌症治疗方法而受到关注。打开此道路的是抗细胞毒性T淋巴细胞抗原(CTLA)-4抗体(易普利姆玛(Ipilimumab))、抗PD-1抗体(纳武单抗(Nivolumab)、帕博丽珠单抗(Pembrolizumab))，CTLA-4和PD-1被称为免疫检查点分子，作为“接收抑制信号的共刺激分子”发挥功能。现在，抗PD-1抗体已被证明对以黑色素瘤、非小细胞肺癌为代表的多种癌症在临床上的有效性，应用正在扩大。另外，近年来，以除CTLA-4、PD-1以外的检查点分子作为靶标的抗体的开发在世界上正变得活跃。

DGK是将二酰基甘油(DAG)磷酸化而转化为磷脂酸(PA)的酶。在哺乳类中，存在10种亚型，从结构上的特征出发大致分成五种。为I型(α、β、γ)、II型(δ、η、κ)、III型(ε)、IV型(ζ、ι)、V型(θ)。所有的亚型在C末端侧具有同源性高的催化结构域，在分子内具有与蛋白激酶C(PKC)有同源性的C1结构域。认为C1结构域是与佛波酯/DAG结合的结构域(Int.J.Mol.Sci.2013,14:6649-6673)。

在T细胞中，因抗原刺激而活化的磷脂酶Cγ1(PLCγ1)由磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(PIP2)生成DAG和肌醇三磷酸(IP3)。生成的DAG将包含RAS、NF-κB、AKT通路的多个下游信号激活，达到T细胞活化。另一方面，IP3通过来自内质网的Ca²⁺释放将活化T细胞核因子(NFAT)信号激活，不仅参与T细胞的活化，还参与无反应性(anergy)的诱导。T细胞无反应性是指因抗原识别时的共刺激(CD28信号)降低或共刺激抑制而陷入的不完全的活化状态，成为即使再刺激也不应答的状态。

DGKα和DGKζ是T细胞内的两种主要的亚型，这些亚型分别调节抗原刺激下游的DAG信号的强度从而防止过量的T细胞活化。此外，DGKα和DGKζ促进T细胞无反应性，对T细胞的免疫耐受也发挥重要的作用(J Cell Sci.2013,126:2176-2186.,Crit RevImmunol.2013,33:97-118.、Immunol Rev.2008,224:249-264)。

此外，有报道称：缺失DGKζ的T细胞的活化对PD-1介导的抑制信号显示出抵抗性、并且对转化生长因子(TGF)-β、腺苷(Adenosine)、PGE2等PD-1非依赖性免疫抑制因子也显示出抵抗性(Cancer Res.2017,77:5676-5686.、Front Cell Dev Biol.2016,4:108.)。有报道称：过量表达PD-1分子的T细胞极度疲劳，处于这种状态时抗PD-1抗体是无效的。另外，TGF-β等免疫抑制因子被认为是抗PD-1疗法的抗性机制之一(Cancer Treatment Reviews2017,52:71-81)。有报道称：在NK细胞中，DGKζ将由活化受体刺激引起的NK细胞活化控制为负，在DGKζKO小鼠中主要组织相容性基因复合体(MHC)I类缺陷肿瘤的增殖得到抑制(JImmunol.2016,197:934-941)。

因此，在研制DGKζ抑制剂时，期待利用免疫细胞活化、特别是T细胞的活化的抗肿瘤作用。此外，有报道称抗PD-1抗体疗法的客观有效率依赖于癌症种类，但大致为30％(Front Immunol.2016,7:550.)，可预期DGKζ抑制剂对这样的抗PD-1抗体疗法抗性患者也有用。

专利文献1中公开了：R59022和R59499具有DGK抑制作用，缓和T细胞无反应性，增强免疫应答。

专利文献2中公开了：下述通式所表示的化合物具有trkA受体抑制作用，对治疗或预防与膀胱过度活动症相关的尿频、尿急等有用。

(式中的符号的含义请参考该公报)

但是，在专利文献2中，对于癌症的治疗用途以及对于包含以相邻的四个连续的取代基作为必需构成要素的苯基的本发明化合物没有具体公开。

专利文献3中公开了：下述通式所表示的化合物作为细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)等蛋白激酶抑制剂对治疗或预防增殖性疾病等是有用的。另外，专利文献3中公开了实施例199的化合物(以下表示为化合物C)。

实施例199

(式中的符号的含义请参考该公报)

但是，在专利文献3中，对于DGK以及对于包含以相邻的四个连续的取代基作为必需构成要素的苯基的本发明化合物没有具体公开。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：美国专利第7381401号说明书

专利文献2：国际公开第WO2007/123269号

专利文献3：国际公开第WO2008/054702号

发明内容

发明所要解决的问题

提供被期待作为药物组合物、例如DGKζ抑制剂有用的化合物，作为与免疫细胞活化相关的癌症、或者对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的癌症的治疗用药物组合物、特别是对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的与免疫细胞活化相关的癌症的治疗用药物组合物的有效成分有用的化合物。

用于解决问题的方法

本发明人对作为与免疫细胞活化相关的癌症、或者对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的癌症的治疗用药物组合物、特别是对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的与免疫细胞活化相关的癌症的治疗用医药组成物的有效成分有用的化合物进行了深入研究，结果发现，通常难以制造的包含以相邻的四个连续的取代基作为必需构成要素的苯基的、式(I)的哒嗪基噻唑甲酰胺类化合物具有优良的DGKζ抑制活性，从而完成了本发明。

即，本发明涉及式(I)的化合物或其盐、以及含有式(I)的化合物或其盐、以及一种以上药学上可接受的赋形剂的药物组合物。

(式中，

R¹为下述式(i)、(ii)、(iii)、(iv)或(v)，

R²为C_1-6烷基、C_3-5环烷基、-O-(C_1-6烷基)、甲磺酰基、卤代C_1-6烷基或卤素，

R³为i)被选自由C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、C_3-5环烷基、-O-(C_1-6烷基)、-O-(卤代C_1-6烷基)、氰基、硝基、甲磺酰基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的苯基；ii)被选自由C_1-6烷基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的C_3-8环烷基；iii)被选自由C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、C_3-5环烷基、-O-(C_1-6烷基)、-O-(卤代C_1-6烷基)、氰基、硝基、甲磺酰基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的吡啶基；iv)被选自由C_1-6烷基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的吡唑基；或者v)被C_1-6烷基取代或未取代的吡咯烷基，

R⁴为H或F，

L为键、CO、SO₂、O或NH，

X为CH₂、O或N-甲基，

Y为CH₂或O，

R^a为H或甲基，

R^b为H、甲基、乙基或-(CH₂)₂O-CH₃，

R^c为H、甲基或氧杂环丁烷基，

R^d为H、甲基、-(CH₂)₂OH、-(CH₂)₂O-CH₃或氧杂环丁烷基，

m为1或2，

n为1或2。)

需要说明的是，只要没有特别记载，本说明书中的某个化学式中的符号也用在其它化学式中的情况下，相同符号表示相同含义。

另外，本发明涉及含有式(I)的化合物或其盐的与免疫细胞活化相关的癌症或者对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的癌症的治疗用药物组合物、特别是对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的与免疫细胞活化相关的癌症的治疗用药物组合物。需要说明的是，该药物组合物包含含有式(I)的化合物或其盐的与免疫细胞活化相关的癌症或者对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的癌症的治疗剂、特别是对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的与免疫细胞活化相关的癌症的治疗剂。

另外，本发明涉及作为DGKζ抑制剂的式(I)的化合物或其盐、用于作为DGKζ抑制剂使用的式(I)的化合物或其盐、含有式(I)的化合物或其盐的DGKζ抑制剂、式(I)的化合物或其盐在制造与免疫细胞活化相关的癌症或者对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的癌症的治疗用药物组合物中的应用、特别是式(I)的化合物或其盐在制造对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的与免疫细胞活化相关的癌症的治疗用药物组合物中的应用、式(I)的化合物或其盐在治疗与免疫细胞活化相关的癌症或者对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的癌症中的应用、特别是式(I)的化合物或其盐在治疗对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的与免疫细胞活化相关的癌症中的应用、用于在与免疫细胞活化相关的癌症或者对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的癌症的治疗中使用中的式(I)的化合物或其盐、特别是用于在对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的与免疫细胞活化相关的癌症的治疗中使用的式(I)的化合物或其盐、以及包括向对象给药有效量的式(I)的化合物或其盐的步骤的与免疫细胞活化相关的癌症或者对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的癌症的治疗方法、特别是对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的与免疫细胞活化相关的癌症的治疗方法。需要说明的是，“对象”是指需要预防或治疗的人或其它动物，作为一个方式，为需要预防或治疗的人。

发明效果

式(I)的化合物或其盐具有DGKζ抑制作用，能够作为与免疫细胞活化相关的癌症或者对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的癌症的治疗剂、特别是对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的与免疫细胞活化相关的癌症的治疗剂使用。

具体实施方式

以下，对本发明进行详细说明。

在本说明书中，只要没有特别记载，下述术语具有如下所示的含义。下述定义用于明确所定义的术语，并非进行限定。在这里所使用的术语没有具体定义的情况下，该术语以对于本领域技术人员而言通常可接受的含义使用。

在本说明书中，“C_1-6烷基”是指直链或支链状的碳原子数从1到6(以下，简称为C_1-6)的烷基。例如有甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基等。作为一个方式，为C_1-3烷基；作为一个方式，为甲基或乙基；作为一个方式，为甲基；作为一个方式，为乙基。

“卤代C_1-6烷基”是指被1个以上的卤素取代的C_1-6烷基。作为一个方式，为被1～5个卤素取代的C_1-6烷基；作为一个方式，为被1～5个卤素取代的卤代C_1-3烷基；作为一个方式，为二氟甲基或三氟甲基；作为一个方式，为三氟甲基。

“C_3-8环烷基”是指C_3-8的饱和烃环基，可以具有交联，也可以形成螺环。例如有环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、双环[2,2,1]庚基、双环[3,1,0]己基、双环[3,1,1]庚基、螺[2,5]辛基等。作为一个方式，为C_3-5环烷基。作为C_3-5环烷基的一个方式，为环丙基、环丁基或环戊基；作为一个方式，为环丙基；作为一个方式，为环丁基；作为一个方式，为环戊基。

“卤素”是指F、Cl、Br、I，作为一个方式，为F或Cl；作为一个方式，为F；作为一个方式，为Cl。

“被……取代或未取代”是指未取代或者“被1个以上的取代基(例如，以下定义的取代基)取代”。取代只要是在该基团中通常存在氢的位置则可以为任意位置。作为一个方式，“被……取代或未取代”为“被1～5个取代基取代或未取代”，作为另一个方式，为“被1～3个取代基取代或未取代”。需要说明的是，在多个取代的情况下，它们的取代基可以相同，也可以不同。

另外，尽管没有具体记载组合，但一个或两个以上的方式可以组合成其它方式。即，所有方式都能够自由组合。

“免疫细胞活化”是指使具有抑制癌细胞的增殖或者使癌细胞缩小或消失的能力(以下称为抗肿瘤活性)的免疫细胞、特别是T细胞再活化；和/或使免疫细胞、特别是活化T细胞数增加。作为一个方式，为基于DGKζ抑制作用的免疫细胞活化。

“与免疫细胞活化相关的癌症”是指显示出免疫应答性的癌症，作为一个方式，为通过免疫细胞活化使得癌细胞的增殖被抑制或者癌细胞缩小或消失的癌症；作为一个方式，为通过免疫细胞活化使得癌细胞的增殖被抑制的癌症；作为一个方式，为通过免疫细胞活化使得癌细胞缩小或消失的癌症。另外，作为一个方式，为通过基于DGKζ抑制作用的免疫细胞活化使得癌细胞的增殖被抑制或者癌细胞缩小或消失的癌症；作为一个方式，为通过基于DGKζ抑制作用的免疫细胞活化使得癌细胞的增殖被抑制的癌症；作为一个方式，为通过基于DGKζ抑制作用的免疫细胞活化使得癌细胞缩小或消失的癌症。

可应用本发明的癌症没有特别限定，可以列举例如：小细胞肺癌、头颈癌、肾癌，卵巣癌、非小细胞肺癌、错配修复缺陷大肠癌、尿路上皮癌、黑色素瘤、肝细胞癌、胃癌和膀胱癌等。

“对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性”是指对抗PD-1抗体和/或抗PD-L1抗体疗法具有抗性。作为一个方式，为对抗PD-1抗体和抗PD-L1抗体疗法具有抗性；作为一个方式，为对抗PD-1抗体疗法具有抗性；作为一个方式，为对抗PD-L1抗体疗法具有抗性。具体而言，是指在基于抗PD-1抗体和/或抗PD-L1抗体的免疫疗法中从治疗开始初期起就无效(Primary resistance)或者从中途开始出现治疗抗性(Acquired resistance)而癌细胞再次增殖。

“对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的癌症”是指对抗PD-1抗体和/或抗PD-L1抗体疗法具有抗性的癌症。作为一个方式，为对抗PD-1抗体和抗PD-L1抗体疗法具有抗性的癌症；作为一个方式，为对抗PD-1抗体疗法具有抗性的癌症；作为一个方式，为对抗PD-L1抗体疗法具有抗性的癌症；作为一个方式，是指基于抗PD-1抗体和/或抗PD-L1抗体的免疫疗法从治疗开始初期起就无效(Primary resistance)或者从途中开始出现治疗抗性(Acquired resistance)而癌细胞再次增殖的癌症。

可应用本发明的癌症没有特别限定，可以列举例如小细胞肺癌、头颈癌、肾癌，卵巣癌、非小细胞肺癌、错配修复缺陷大肠癌、尿路上皮癌、黑色素瘤、肝细胞癌、胃癌和膀胱癌等中的对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的癌症。

“抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体”没有特别限定，可以列举例如选自纳武单抗(Nivolumab)、帕博丽珠单抗(Pembrolizumab)、阿特珠单抗(Atezolizumab)、匹地利珠单抗(Pidilizumab)、阿维单抗(Avelumab)和德瓦鲁单抗(Durvalumab)中的抗体。

以下示出本发明的式(I)的化合物或其盐的一个方式。

(1-1)R¹为下述式(i)、(ii)、(iii)、(iv)或(v)的化合物或其盐。

(1-2)R¹为下述式(i-a)、(ii-a)、(iii-a)或(v)的化合物或其盐。

(1-3)R¹为下述式(i)、(ii)、(iii)或(iv)的化合物或其盐。

(1-4)R¹为下述式(i-a)、(ii-a)或(iii-a)的化合物或其盐。

(2)R²为C_1-6烷基、C_3-5环烷基、-O-(C_1-6烷基)、甲磺酰基、卤代C_1-6烷基或卤素的化合物或其盐。作为一个方式，R²为卤代C_1-6烷基或卤素的化合物或其盐。作为一个方式，R²为卤代C_1-3烷基、F、Cl或Br的化合物或其盐。作为一个方式，R²为CF₃、F或Cl的化合物或其盐。作为一个方式，R²为CF₃的化合物或其盐。作为一个方式，R²为F的化合物或其盐。作为一个方式，R²为Cl的化合物或其盐。

(3-1)一种化合物或其盐，其中，R³为i)被选自由C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、C_3-5环烷基、-O-(C_1-6烷基)、-O-(卤代C_1-6烷基)、氰基、硝基、甲磺酰基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的苯基；ii)被选自由C_1-6烷基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的C_3-8环烷基；iii)被选自由C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、C_3-5环烷基、-O-(C_1-6烷基)、-O-(卤代C_1-6烷基)、氰基、硝基、甲磺酰基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的吡啶基；iv)被选自由C_1-6烷基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的吡唑基；或者v)被C_1-6烷基取代或未取代的吡咯烷基。

(3-2)一种化合物或其盐，其中，R³为i)被选自由C_1-6烷基、氰基、硝基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的苯基；ii)C_3-8环烷基；iii)吡啶基；iv)被C_1-6烷基取代或未取代的吡唑基；或者v)吡咯烷基。

(3-3)一种化合物或其盐，其中，R³为i)被选自由C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、C_3-5环烷基、-O-(C_1-6烷基)、-O-(卤代C_1-6烷基)、氰基、硝基、甲磺酰基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的苯基；或者ii)被选自由C_1-6烷基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的C_3-8环烷基。

(3-4)一种化合物或其盐，其中，R³为被选自由C_1-6烷基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的苯基或者C_3-5环烷基。

(4)R⁴为H或F的化合物或其盐。作为一个方式，R⁴为H的化合物或其盐。作为一个方式，R⁴为F的化合物或其盐。

(5)L为键、CO、SO₂、O或NH的化合物或其盐。作为一个方式，L为键、O或NH的化合物或其盐。作为一个方式，L为O或NH的化合物或其盐。作为一个方式，L为O的化合物或其盐。作为一个方式，L为NH的化合物或其盐。

(6)X为CH₂、O或N-甲基的化合物或其盐。作为一个方式，X为CH₂或N-甲基的化合物或其盐。作为一个方式，X为CH₂的化合物或其盐。作为一个方式，X为N-甲基的化合物或其盐。

(7)Y为CH₂或O的化合物或其盐。作为一个方式，Y为CH₂的化合物或其盐。作为一个方式，Y为O的化合物或其盐。

(8)R^a为H或甲基的化合物或其盐。作为一个方式，R^a为H的化合物或其盐。作为一个方式，R^a为甲基的化合物或其盐。

(9)R^b为H、甲基、乙基或-(CH₂)₂O-CH₃的化合物或其盐。作为一个方式，R^b为H或甲基的化合物或其盐。作为一个方式，R^b为H的化合物或其盐。作为一个方式，R^b为甲基的化合物或其盐。

(10)R^c为H、甲基或氧杂环丁烷基的化合物或其盐。作为一个方式，R^c为H或甲基的化合物或其盐。作为一个方式，R^c为H的化合物或其盐。作为一个方式，R^c为甲基的化合物或其盐。

(11)R^d为H、甲基、-(CH₂)₂OH、-(CH₂)₂O-CH₃或氧杂环丁烷基的化合物或其盐。作为一个方式，R^d为-(CH₂)₂OH或-(CH₂)₂O-CH₃的化合物或其盐。作为一个方式，R^d为-(CH₂)₂OH的化合物或其盐。作为一个方式，R^d为-(CH₂)₂O-CH₃的化合物或其盐。

(12)m为1或2的化合物或其盐。作为一个方式，m为1的化合物或其盐。作为一个方式，m为2的化合物或其盐。

(13)n为1或2的化合物或其盐。作为一个方式，n为1的化合物或其盐。作为一个方式，n为2的化合物或其盐。

(14)一种化合物或其盐，其为上述(1-1)～(13)所述的方式中不矛盾的任意的两个以上的组合。

作为上述(14)所述的组合，具体而言，例如可以列举以下方式。

(15)一种化合物或其盐，其中，R¹为下述式(i)、(ii)、(iii)、(iv)或(v)，

R²为C_1-6烷基、C_3-5环烷基、-O-(C_1-6烷基)、甲磺酰基、卤代C_1-6烷基或卤素，R³为i)被选自由C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、C_3-5环烷基、-O-(C_1-6烷基)、-O-(卤代C_1-6烷基)、氰基、硝基、甲磺酰基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的苯基；ii)被选自由C_1-6烷基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的C_3-8环烷基；iii)被选自由C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、C_3-5环烷基、-O-(C_1-6烷基)、-O-(卤代C_1-6烷基)、氰基、硝基、甲磺酰基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的吡啶基；iv)被选自由C_1-6烷基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的吡唑基；或者v)被C_1-6烷基取代或未取代的吡咯烷基，R⁴为H或F，L为键、CO、SO₂、O或NH，X为CH₂、O或N-甲基，Y为CH₂或O，R^a为H或甲基，R^b为H、甲基、乙基或-(CH₂)₂O-CH₃，R^c为H、甲基或氧杂环丁烷基，R^d为H、甲基、-(CH₂)₂OH、-(CH₂)₂O-CH₃或氧杂环丁烷基，m为1或2，n为1或2。

(16)如(15)所述的化合物或其盐，其中，R²为卤代C_1-6烷基或卤素，L为键、O或NH，X为CH₂或N-甲基，R^c为H或甲基，m为1。

(17)如(16)所述的化合物或其盐，其中，R¹为下述式(i-a)、(ii-a)、(iii-a)或(v)。

(18)如(17)所述的化合物或其盐，其中，R³为被选自由C_1-6烷基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的苯基或者C_3-5环烷基。

(19)如(18)所述的化合物或其盐，其中，R²为CF₃，R⁴为H，R^b为H或甲基，R^c为H。

作为上述(14)所述的组合，具体而言，例如可以列举以下方式。

(20)一种化合物或其盐，其中，R¹为下述式(i)、(ii)、(iii)或(iv)，

R²为卤代C_1-6烷基或卤素，R³为i)被选自由C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、C_3-5环烷基、-O-(C_1-6烷基)、-O-(卤代C_1-6烷基)、氰基、硝基、甲磺酰基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的苯基；ii)被选自由C_1-6烷基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的C_3-8环烷基；iii)被选自由C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、C_3-5环烷基、-O-(C_1-6烷基)、-O-(卤代C_1-6烷基)、氰基、硝基、甲磺酰基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的吡啶基；iv)被选自由C_1-6烷基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的吡唑基；或者v)被C_1-6烷基取代或未取代的吡咯烷基，R⁴为H或F，L为键、O或NH，X为CH₂、O或N-甲基，Y为CH₂或O，R^a为H或甲基，R^b为H、甲基、乙基或-(CH₂)₂O-CH₃，R^c为H、甲基或氧杂环丁烷基，R^d为H、甲基、-(CH₂)₂OH、-(CH₂)₂O-CH₃或氧杂环丁烷基，m为1或2，n为1或2。

(21)如(20)所述的化合物或其盐，其中，R¹为下述式(i)、(ii)、(iii)或(iv)，

R²为卤代C_1-6烷基或卤素，R³为i)被选自由C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、C_3-5环烷基、-O-(C_1-6烷基)、-O-(卤代C_1-6烷基)、氰基、硝基、甲磺酰基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的苯基；ii)被选自由C_1-6烷基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的C_3-8环烷基；iii)被选自由C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、C_3-5环烷基、-O-(C_1-6烷基)、-O-(卤代C_1-6烷基)、氰基、硝基、甲磺酰基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的吡啶基；iv)被选自由C_1-6烷基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的吡唑基；或者v)被C_1-6烷基取代或未取代的吡咯烷基，R⁴为H或F，L为O或NH，X为CH₂或N-甲基，Y为CH₂或O，R^a为H，R^b为H、甲基、乙基或-(CH₂)₂O-甲基，R^c为H或甲基，R^d为H、甲基、-(CH₂)₂OH、-(CH₂)₂O-CH₃或氧杂环丁烷基，m为1，n为1或2。

(22)如(21)所述的化合物或其盐，其中，R¹为下述式(i-a)、(ii-a)或(iii-a)。

(23)如(22)所述的化合物或其盐，其中，R³为被选自由C_1-6烷基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的苯基或者C_3-5环烷基。

(24)如(23)所述的化合物或其盐，其中，R²为CF₃，R⁴为H，R^b为H或甲基，R^c为H。

作为本发明中包含的具体化合物的例子，可以列举下述化合物或其盐。

N-{2-[(3S)-3-(氨基甲基)哌啶-1-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺、

N-{2-[(3S)-3-(氨基甲基)哌啶-1-基]-4-(3-氟苯氧基)-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺、

N-{2-[9-(2-甲氧基乙基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺、

N-{2-[(3S)-3-(氨基甲基)哌啶-1-基]-4-(2-氟苯氧基)-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺、

N-[4-(2-氟苯氧基)-2-{(3S)-3-[(甲基氨基)甲基]哌啶-1-基}-3-(三氟甲基)苯基]-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺、

N-{2-[(2R)-2-(氨基甲基)吡咯烷-1-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺、

N-{2-[(8R,8aS)-8-氨基六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺、和

N-{2-[(8R,8aS)-8-(二甲基氨基)六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺。

作为本发明中包含的具体化合物的例子，可以列举下述化合物或其盐。

N-{2-[(3S)-3-(氨基甲基)哌啶-1-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺、

N-{2-[(3S)-3-(氨基甲基)哌啶-1-基]-4-(3-氟苯氧基)-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺、

N-{2-[9-(2-甲氧基乙基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺、

N-{2-[(3S)-3-(氨基甲基)哌啶-1-基]-4-(2-氟苯氧基)-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺、

N-[4-(2-氟苯氧基)-2-{(3S)-3-[(甲基氨基)甲基]哌啶-1-基}-3-(三氟甲基)苯基]-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺、和

N-{2-[(2R)-2-(氨基甲基)吡咯烷-1-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺。

作为本发明中包含的具体化合物或其盐的例子，可以列举下述化合物或其盐。

N-{2-[(3S)-3-(氨基甲基)哌啶-1-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺单[(2E)-2-丁烯二酸]盐、

N-{2-[(3S)-3-(氨基甲基)哌啶-1-基]-4-(3-氟苯氧基)-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺单[(2E)-2-丁烯二酸]盐、

N-{2-[(3S)-3-(氨基甲基)哌啶-1-基]-4-(2-氟苯氧基)-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺单[(2E)-2-丁烯二酸]盐、

N-[4-(2-氟苯氧基)-2-{(3S)-3-[(甲基氨基)甲基]哌啶-1-基}-3-(三氟甲基)苯基]-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺单[(2E)-2-丁烯二酸]盐、和

N-{2-[(2R)-2-(氨基甲基)吡咯烷-1-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺单[(2E)-2-丁烯二酸]盐。

在式(I)的化合物中，根据取代基的种类，可以存在互变异构体、几何异构体。在本说明书中，式(I)的化合物或其盐有时仅以异构体的一种形态记载，但本发明也包括除此以外的异构体，还包含异构体的分离物或它们的混合物。

另外，式(I)的化合物或其盐有时具有不对称中心或轴不对称，会存在基于此的对映异构体(光学异构体)。式(I)的化合物或其盐还包含分离的各个(R)体、(S)体等对映异构体、它们的混合物(包含外消旋混合物或非外消旋的混合物)中的任一种。在一个方式中，对映异构体为“立体化学上纯净”。“立体化学上纯净”是指本领域技术人员实质上能够认定为立体化学上纯净的程度的纯度。作为其它方式，对映异构体例如是具有90％ee(对映异构体过量百分率，enantiomeric excess)以上、95％ee以上、98％ee以上、99％ee以上的立体化学纯度的化合物。

另外，式(I)的化合物的盐是指式(I)的化合物的药学上可接受的盐，根据取代基的种类，有时形成酸加成盐或与碱的盐。具体而言，可以列举与盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸、甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸((2E)-2-丁烯二酸)、马来酸、乳酸、苹果酸、苦杏仁酸、酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二甲苯酰基酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、天冬氨酸、谷氨酸等有机酸的酸加成盐、与钠、钾、镁、钙、铝等的无机碱、乙酰基亮氨酸等各种氨基酸和氨基酸衍生物的盐等。

此外，本发明还包含式(I)的化合物及其盐的各种水合物、溶剂化物以及它们的多晶型物质。

此外，本发明还包含式(I)所表示的化合物的药学上可接受的前药。药学上可接受的前药是指具有通过溶剂分解或在生理条件下可转化为氨基、羟基、羧基等的基团的化合物。作为形成前药的基团，例如可以列举Prog.Med.,5,2157-2161(1985)、“医药品的开发”(广川书店、1990年)第7卷分子设计163-198中记载的基团。

另外，本发明包含全部药学上可接受的、用一种以上的放射性或非放射性的同位素标记的式(I)的化合物或其盐。作为适合用于本发明化合物的同位素标记的同位素的例子，包含氢(²H和³H等)、碳(¹¹C、¹³C和¹⁴C等)、氮(¹³N和¹⁵N等)、氧(¹⁵O、¹⁷O和¹⁸O等)、氟(¹⁸F等)、氯(³⁶Cl等)、碘(¹²³I和¹²⁵I等)、磷(³²P等)、硫(³⁵S等)这样的同位素。

用同位素标记的本申请发明的化合物可用于药物和/或底物的组织分布研究等研究等。例如，从标记的容易性和检测的简便性出发，氚(³H)、碳14(¹⁴C)等放射性同位素可用在此目的中。

向更重的同位素的置换、例如氢向氘(²H)的置换由于代谢稳定性提高，有时在治疗上有利(例如，体内(in vivo)的半衰期的增加、所需用量的减少、药物相互作用的减少)。

为了试验底物受体占有率，向正电子发射同位素(¹¹C、¹⁸F、¹⁵O和¹³N等)的置换可以在正电子发射断层成像法(PET)试验中使用。

本发明的用同位素标记的化合物通常可以通过本领域技术人员已知的现有方法或者代替未标记的试剂而使用被同位素标记的适当的试剂通过与实施例或制造例同样的制造方法等来制造。

关于本说明书中记载的粉末X射线衍射图，在结晶的同一性认定中，数据的性质上、晶格间距、整体的图案很重要，衍射角和衍射强度根据晶体生长的方向、粒子的大小、测定条件可能会产生一些误差，因此不应严格地解释。在本说明书中，粉末X射线衍射图中的衍射角(2θ(°))是考虑在该测定方法中通常允许的误差范围后进行解释的，作为一个方式，可以取±0.2°的误差范围。另外，例如，在与赋形剂的混合物的状态下进行测定的情况下，对于存在于来自赋形剂的峰的附近且处于基线的斜率上的峰而言，表观上峰有可能在±0.3°的范围内偏移。

(制造方法)

式(I)的化合物及其盐可以利用基于其基本结构或取代基的种类的特征，应用各种公知的合成方法来制造。此时，根据官能团的种类，有时在从原料到中间体的阶段预先将该官能团置换为适当的保护基(能够容易地转化为该官能团的基团)在制造技术上是有效的。作为这样的保护基，例如可以列举Wuts(P.G.M.Wuts)和Greene(T.W.Greene)著、“Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis(第4版、2006年)”中记载的保护基等，可以根据它们的反应条件适当选择使用。在这样的方法中，导入该保护基进行反应后，根据需要除去保护基，由此可以得到期望的化合物。

另外，式(I)的化合物的前药可以与上述保护基同样地通过在从原料到中间体的阶段导入特定的基团或者使用所得到的式(I)的化合物进一步进行反应来制造。反应可以通过应用通常的酯化、酰胺化、脱水等本领域技术人员公知的方法来进行。

以下，对式(I)的化合物的代表性的制造方法进行说明。各制造方法也可以参考在该说明中附加的参考文献来进行。需要说明的是，本发明的制造方法不限定于以下所示的例子。

在本说明书中，有时使用下述缩写。

DMF＝N,N-二甲基甲酰胺、DMSO＝二甲基亚砜、EtOAc＝乙酸乙酯、EtOH＝乙醇、Hex＝己烷、MeCN＝乙腈、MeOH＝甲醇、THF＝四氢呋喃、DMI＝1,3-二甲基-2-咪唑啉酮、NMP＝N-甲基-2-吡咯烷酮、CH₂Cl₂＝二氯甲烷。

Boc＝叔丁氧基羰基、Ph＝苯基、tBu＝叔丁基、Et＝乙基、Me＝甲基、Ac＝乙酰基、Ns＝2-硝基苯磺酰基。

CDI＝1,1’-羰基二(1H-咪唑)、DCC＝N,N’-二环己基碳二亚胺、TEA＝三乙胺、DIPEA＝N,N-二异丙基乙胺、DABCO＝1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷、DPPA＝叠氮磷酸二苯酯、HATU＝O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯、HOBt＝1-羟基苯并三唑、KOtBu＝叔丁醇钾、NaOtBu＝叔丁醇钠、NMO＝N-甲基吗啉、Pd/C＝钯负载碳、TFA＝三氟乙酸、TFAA＝三氟乙酸酐、WSC.HCl＝N-[3-(二甲基氨基)丙基]-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐。

Pd(PPh₃)₄＝四(三苯基膦)钯、PdCl₂(PPh₃)₂＝双(三苯基膦)二氯化钯(II)、Pd(dppf)Cl₂·CH₂Cl₂＝[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物、Pd₂(dba)₃＝(1E,4E)-1,5-二苯基-1,4-戊二烯-3-酮/钯(3：2)。

brine＝饱和NaCl水溶液、MgSO₄＝无水硫酸镁、Na₂SO₄＝无水硫酸钠、NaHCO₃＝碳酸氢钠、NH₄Cl＝氯化铵、NaBH(OAc)₃＝三乙酰氧基硼氢化钠。

(式中，R^1a表示R¹或R¹的保护基加合物。)

(第一工序)

本工序是通过使化合物(1)进行还原反应而得到化合物(2)的方法。

该反应可以通过在甲醇、乙醇或1,4-二氧六环等与水的混合溶剂中将化合物(1)和金属在酸性条件下在从室温到加热回流下搅拌1小时～5天来进行。作为酸，可以使用NH₄Cl、AcOH、HCl等。作为金属，可以使用Fe、Zn、Sn等。

另外，该反应可以通过在氢气气氛下在MeOH、EtOH、EtOAc等对反应惰性的溶剂以及它们的混合溶剂中将化合物(1)在金属催化剂存在下在从冷却下到加热下、优选在室温下搅拌1小时～5天来进行。作为金属催化剂，可以使用Pd/C、钯黑和氢氧化钯负载碳等钯催化剂、铂负载碳、氧化铂等铂催化剂、还原镍、雷尼镍等镍催化剂等。

(第二工序)

本工序是通过使化合物(2)和化合物(3)进行酰胺化反应后进行适当的取代基的转化来得到式(I)的化合物的方法。

该酰胺化反应中，等量地或一者过量地使用化合物(2)和化合物(3)，将它们的混合物在缩合剂的存在下在对反应惰性的溶剂中在从冷却下到加热下、优选在-20℃～60℃通常搅拌0.1小时～5天。作为在此使用的溶剂的例子，没有特别限定，可以列举：苯、甲苯或二甲苯等芳香族烃类、CH₂Cl₂、1,2-二氯乙烷或氯仿等卤代烃类、乙醚、THF、1,4-二氧六环、1,2-二甲氧基乙烷等醚类、DMF、DMSO、EtOAc、MeCN或水、以及它们的混合物。作为缩合剂的例子，可以列举：WSC.HCl、DCC、CDI、DPPA、POCl₃、HATU等，但不限定于此。有时反应中优选使用添加剂(例如HOBt)。在TEA、DIPEA、NMO等有机碱、或K₂CO₃、Na₂CO₃、KOH等无机碱的存在下进行反应有时有利于使反应顺利地进行。

另外，也可以使用使化合物(3)转化为反应性衍生物后与化合物(2)反应的酰胺化反应。作为化合物(3)的反应性衍生物的例子，可以列举：与POCl₃、SOCl₂等卤化剂反应而得到的酰卤化物、与氯甲酸异丁酯等反应而得到的混合酸酐、与HOBt等缩合而得到的活性酯等。该反应可以在卤代烃类、芳香族烃类、醚类等对反应惰性的溶剂中在冷却下～加热回流下、优选在-20℃～120℃进行。

该酰胺化反应后，根据需要导入和/或除去保护基后，进行适当的取代基的转化，由此可以得到式(I)的化合物。例如，在化合物(2)的R^1a为R¹的保护基加合物的情况下，在适当的反应条件下除去该保护基，可以得到式(I)的化合物。

(原料合成)

(式中LG¹和LG²表示脱离基。LG¹和LG²为卤素等，各自不同。)

本制造方法是制造原料化合物(1)的方法。

(第三工序)

本工序是通过自位取代反应由化合物(5)制造化合物(6)的方法。

本反应在对反应惰性的溶剂中或无溶剂下在从冷却下到加热回流下、优选在0℃～120℃通常搅拌0.1小时～5天。作为在此使用的溶剂的例子，没有特别限定，可以列举：CH₂Cl₂、1,2-二氯乙烷、氯仿等卤代烃类、苯、甲苯、二甲苯等芳香族烃类、乙醚、THF、1,4-二氧六环、1,2-二甲氧基乙烷等醚类、DMF、DMSO、NMP、EtOAc、MeCN以及它们的混合物。在TEA、DIPEA、NMO、DABCO等有机碱、NaH、K₂CO₃、Na₂CO₃、Cs₂CO₃、NaOtBu等无机碱的存在下进行反应有时有利于使反应顺利地进行。

(第四工序)

本工序是使用化合物(5)和有机硼化合物通过铃木偶联反应制造化合物(7)的方法或者使用化合物(5)和胺化合物通过布赫瓦尔德-哈特维希反应(Buchwald-Hartwigreaction)制造化合物(7)的方法。

本反应在对反应惰性的溶剂中在碱和钯催化剂的存在下在从室温到加热回流下通常搅拌0.1小时～5天。作为在此使用的溶剂的例子，没有特别限定，可以列举：CH₂Cl₂、1,2-二氯乙烷、氯仿等卤代烃类、苯、甲苯、二甲苯等芳香族烃类、乙醚、THF、1,4-二氧六环、1,2-二甲氧基乙烷等醚类、甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇等醇类、DMF、DMSO、MeCN、DMI、水和它们的混合物。作为碱，可以列举：NaH、K₂CO₃、Na₂CO₃、Cs₂CO₃、K₃PO₄、CsF等无机碱。作为钯催化剂，可以列举：Pd(PPh₃)₄、PdCl₂(PPh₃)₂、Pd(dppf)Cl₂·CH₂Cl₂、Pd₂(dba)₃等。在二环己基(2',6'-二甲氧基联苯-2-基)膦(SPhos)等配体的存在下进行反应有时有利于使反应顺利地进行。另外，通过微波照射对反应混合物进行加热有时有利于使反应顺利地进行。作为本反应的参考文献，例如可以参考以下文献。

J.Am.Chem.Soc.127,4685-4696,2005

Angew.Chem.,Int.Ed.Engl.34,1348-1350,1995

另外，本工序也是通过自位取代反应由化合物(5)制造化合物(7)的方法。反应条件与第三工序同样。

(第五工序、第六工序)

本工序是通过自位取代反应由化合物(6)或化合物(7)制造化合物(1)的方法。

反应条件与第三工序同样。

需要说明的是，作为化合物(1)的其他制造方法，可以以将化合物(5)的R²置换成卤素等脱离基(以下，将该卤素等脱离基设为LG³。LG³与LG¹和LG²不同。)的化合物(5a)作为原料，与第四工序同样地，制造将化合物(7)的R²置换成LG³的化合物(7a)。进而与第六工序同样地，制造将化合物(1)的R²置换成LG³的化合物(1a)，进而与第四工序同样地，制造化合物(1)。

式(I)的化合物作为游离化合物、其盐、水合物、溶剂化物或多晶物质被分离、纯化。式(I)的化合物的盐也可以通过常规方法的成盐反应来制造。

分离、纯化可以应用萃取、分离结晶化、各种层析等通常的化学操作来进行。

各种异构体可以通过选择适当的原料化合物来制造，或者可以利用异构体间的物理化学性质的差异来分离。例如，光学异构体可以通过外消旋体的通常的光学分割法(例如，导入至与光学活性的碱或酸的非对映异构体盐的分离结晶化、使用手性柱等的层析等)来得到，另外，也可以由适当的光学活性的原料化合物来制造。

式(I)的化合物的药理活性可以通过以下试验或公知的改良试验来确认。需要说明的是，在本说明书中，测试化合物的用量是换算成游离体的重量来表示。另外，使用市售的试剂或试剂盒等的情况下，可以按照市售品的说明书来实施。

试验例1DGKζ抑制作用的评价

使用利用ADP-Glo^TM Kinase Assay(Promega公司)来检测测试化合物对人重组DGKζ(Carna Bio公司、12-410-20N)的抑制作用的下述方法进行研究。

向384孔板(Greiner Bio-one公司)中，添加3μL的溶解在Assay buffer(40mMTris-HCl pH7.5、10mM MgCl₂、1mM二硫代苏糖醇(DTT)、0.1mg/mL牛血清白蛋白(BSA))中的DGKζ酶(90ng/mL)，同样地添加3μL的稀释在Assay buffer中的测试化合物并使其达到目标最终浓度。在室温下静置15分钟后，添加3μL的溶解在Lipid dilution buffer(40mM Tris-HCl pH7.5、0.1mg/mL BSA、1mM DTT)中的底物(150μM 1-油酰基-2-乙酰基-sn-丙三醇(SIGMA-ALDRICH公司)、480μM磷脂酰丝氨酸(Avanti公司)、150μM UltraPure-ATP(附属于ADP-Glo))，在室温下静置30分钟使其反应。然后添加3μL的ADP-Glo Reagent，在室温下静置40分钟使酶反应停止。进而添加6μL的激酶检测试剂，在室温下静置30分钟后，使用ARVOX3(PerkinElmer公司)测定发光(Luminescence)。将溶剂处理中的信号值设为0％抑制，将DGKζ酶无添加下的信号值设为100％抑制，通过Sigmoid-Emax模型非线性回归分析算出50％抑制浓度(IC₅₀)。将几个式(I)的测试化合物的结果示于表1中。需要说明的是，表中，Ex表示后述的实施例编号。另外，表中，化合物C(cpd.C)表示国际公开第WO2008/054702号中记载的实施例199的测试化合物。

[表1]

试验例2人T细胞性白血病细胞株Jurkat E6.1中的IL-2产生作用的评价

对在Jurkat E6.1细胞(ECACC、88042803)中测试化合物对由T细胞受体(TCR)刺激(抗CD3/抗CD28)带来的IL-2产生能力的作用进行评价。

在96孔板(Iwaki公司)中以50μL/孔添加用磷酸缓冲食盐水(PBS)稀释后的5μg/mL抗CD3抗体(eBioscience、OKT3克隆)，在4℃下静置12小时以上，预先准备涂布了抗CD3抗体的板。在实验中使用时，利用200μL的PBS清洗1次后，以10μL/孔添加利用包含培养基(包含10％胎牛血清(Hyclone公司)的RPMI1640培养基(Sigma-Aldrich公司))稀释成10μg/mL的浓度的抗CD28抗体(eBioscience、28.2克隆)，作为TCR刺激用的培养板用于化验。

接着，以达到目标最终浓度的方式，将测试化合物和Jurkat E6.1细胞混合，以每1孔为1×10⁵个细胞的方式，按照每90μL/孔进行播种(即，最终以1×10⁵个细胞/100μL/孔进行培养)。细胞培养条件是使用包含10％胎牛血清的RPMI1640培养基在5％CO₂存在下于37℃下进行。

24小时后回收培养上清液，使用AlphaLISA人IL2免疫分析试剂盒(PerkinElmer公司)对IL-2进行定量。在IL-2测定中，使用EnVision2104-0010和EnVision 2104-0020(PerkinElmer公司)，在Alpha Screen的标准设定条件(以680nm的激发波长测定570nm下的荧光强度)进行测定。将溶剂处置对照的IL-2定量值设为1，使用Sigmoid-Emax模型非线性回归分析通过逆推定算出测试化合物处置样品的IL-2定量值增加对照的10倍时的测试化合物浓度(EC_10fold)。将几个式(I)的测试化合物的结果示于表2中。需要说明的是，表中，Ex表示后述的实施例编号。

[表2]

试验例3荷瘤有小鼠大肠癌细胞株MC38的同系小鼠模型中的抗肿瘤作用的评价

将MC38细胞(获自National Cancer Institute)悬浮在PBS中，将制备成4.0×10⁶个细胞/mL的细胞悬浮液以50μL的容量植入6周龄的雌性小鼠(C57BL/6J、日本CharlesRiver公司)皮下。植入4天后，以各组间的肿瘤体积大致同等的方式进行分组，开始测试化合物的给药。试验按照溶剂组和测试化合物给药组各10只进行，对于溶剂组，口服给药0.5％甲基纤维素(信越化学株式会社)，对于测试化合物给药组，在0.5％甲基纤维素中混合测试化合物进行口服给药。给药在从第1天到第10天按照一天两次进行，第11天进行一次，每1个星期测定两次肿瘤直径和体重。使用以下公式算出肿瘤体积。

[肿瘤体积(mm³)]＝[肿瘤的长径(mm)]×[肿瘤的短径(mm)]²×0.5

基于测试化合物的肿瘤增殖抑制率(％)通过将即将开始给药前的测试化合物给药组的肿瘤体积设为100％抑制、将给药结束日的溶剂组的肿瘤体积设为0％抑制来算出。将几个式(I)的测试化合物的结果示于表3中。需要说明的是，表中，Ex表示后述的实施例编号。

[表3]

Ex	一次给药量(mg/kg)	抗肿瘤作用
			9	5	64％抑制
10	4.7	60％抑制
			11	5	63％抑制
33	5	36％抑制
			34	5	55％抑制

试验例4荷瘤有小鼠黑色素瘤细胞株B16-F1的同系小鼠模型中的抗肿瘤作用的评价

使B16-F1细胞(ATCC、CRL-6323)悬浮在PBS中，将制备成2.0×10⁶个细胞/mL或1.0×10⁷个细胞/mL的细胞悬浮液以50μL的容量植入5周龄的雌性小鼠(C57BL/6J、日本Charles River公司)皮下。植入5天后，以各组间的肿瘤体积大致同等的方式进行分组，开始测试化合物的给药。试验按照溶剂组和测试化合物给药组各10只进行，对于溶剂组，口服给药0.5％甲基纤维素(信越化学株式会社)，对于测试化合物给药组，在0.5％甲基纤维素中混合测试化合物进行口服给药。给药按照表4中记载的给药方案进行，每1个星期测定两次肿瘤直径和体重。使用以下公式算出肿瘤体积。

[肿瘤体积(mm³)]＝[肿瘤的长径(mm)]×[肿瘤的短径(mm)]²×0.5

基于测试化合物的肿瘤增殖抑制率(％)通过将即将开始给药前的测试化合物给药组的肿瘤体积设为100％抑制、将最终给药第二天的溶剂组的肿瘤体积设为0％抑制来算出。将几个式(I)的测试化合物的结果示于表4中。需要说明的是，表中，Ex表示后述的实施例编号。

[表4]

根据上述试验的结果，确认了几个式(I)的化合物的DGKζ抑制作用(试验例1)。另外，就几个式(I)的化合物而言，确认了在人T细胞性白血病细胞株中产生IL-2(试验例2)。此外，就几个式(I)的化合物而言，确认了在小鼠模型中的抗肿瘤作用(试验例3、4)。特别是，试验例4中使用的B16-F1细胞是已知抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体一般不显示药效的细胞，即使在荷瘤有该细胞的小鼠模型中，也确认到几个式(I)的化合物显示出抗肿瘤作用。因此，式(I)的化合物能够在与免疫细胞活化相关的癌症或者对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的癌症、特别是对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的与免疫细胞活化相关的癌症等的治疗等中使用。

含有式(I)的化合物或其盐中的一种或两种以上作为有效成分的药物组合物可以使用本领域中通常使用的赋形剂、即药剂用赋形剂或药剂用载体等通过通常使用的方法来制备。

给药可以为利用片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、液剂等的口服给药或者关节内、静脈内、肌肉内等利用注射剂、栓剂、滴眼剂、眼软膏、经皮用液剂、软膏剂、经皮用贴剂、经粘膜液剂、经粘膜贴剂、吸入剂等的非口服给药中的任一种形态。

作为用于口服给药的固体组合物，可以使用片剂、散剂、颗粒剂等。在这样的固体组合物中，将一种或两种以上的有效成分与至少一种惰性的赋形剂混合。组合物可以根据常规方法含有惰性的添加剂、例如润滑剂、崩解剂、稳定剂、溶解辅助剂。片剂、散剂、颗粒剂或丸剂可以根据需要用蜡、糖衣或者胃溶性或肠溶性物质的膜被覆。

用于口服给药的液体组合物含有药剂上可接受的乳浊剂、溶液剂、悬浮剂、糖浆剂或酏剂等，含有通常使用的惰性的稀释剂、例如纯净水或乙醇。该液体组合物中，除了惰性的稀释剂以外，还可以含有增溶剂、湿润剂、悬浮剂之类的辅助剂、甜味剂、调味剂、香味剂、防腐剂。

用于非口服给药的注射剂含有无菌的水性或非水性的溶液剂、悬浮剂或乳浊剂。作为水性的溶剂，例如含有注射用蒸馏水或生理盐水。作为非水性的溶剂，例如有乙醇之类的醇类。这样的组合物还可以含有等渗剂、防腐剂、湿润剂、乳化剂、分散剂、稳定剂或溶解辅助剂。它们例如通过在细菌截留过滤器中通过的过滤、配合杀菌剂或照射而进行无菌化。另外，它们也可以制造无菌的固体组合物并在使用前溶解或悬浮在无菌水或无菌的注射用溶剂中使用。

作为外用剂，包含软膏剂、硬膏剂、霜剂、凝胶剂、泥敷剂、喷雾剂、洗剂、滴眼剂、眼软膏等。含有通常使用的软膏基剂、洗剂基剂、水性或非水性的液剂、悬浮剂、乳剂等。

吸入剂或经鼻剂等经粘膜剂可以使用固态、液态或半固态状的物质，可以按照以往公知的方法来制造。例如可以适当地添加公知的赋形剂、以及pH调节剂、防腐剂、表面活性剂、润滑剂、稳定剂、增稠剂等。给药可以使用用于适当的吸入或吹送的设备。例如，可以使用计量给药吸入设备等公知的设备或喷雾器，将化合物单独或者作为处方的混合物的粉末、或者与医药上可接受的载体组合而以溶液或悬浮液的形式给药。干燥粉末吸入器等可以是一次或多次给药用的吸入器，可以利用干燥粉末或含粉末的胶囊。或者，可以是使用了适当的推进剂、例如使用了氯氟烷烃或二氧化碳等适当的气体的加压气溶胶喷雾等形态。

通常口服给药的情况下，一天的给药量按照每单位体重为约0.001～100mg/kg、优选为0.1～30mg/kg、进一步优选为0.1～10mg/kg是适当的，将其一次或分成两次～四次进行给药。静脈内给药的情况下，一天的给药量按照每单位体重为约0.0001～10mg/kg是适当的，一天一次～分成多次给药。另外，作为经粘膜剂，将每单位体重为约0.001～100mg/kg一天一次～分成多次进行给药。给药量在考虑症状、年龄、性別等根据各个情况来适当决定。

虽然因给药路径、剂型、给药部位、赋形剂或添加剂的种类而不同，但本发明的药物组合物含有0.01～100重量％、作为一个方式含有0.01～50重量％的作为有效成分的一种或其以上的式(I)的化合物或其盐。

式(I)的化合物可以与认为上述式(I)的化合物显示出有效性的疾病的各种治疗剂或预防剂合用。该合用可以是同时给药、或者另外连续地、或者间隔期望的时间地进行给药。同时给药制剂可以是配合剂，也可以是分别进行制剂化。

实施例

以下，基于实施例，对式(I)的化合物的制造方法进一步详细说明。需要说明的是，本发明不限定于下述实施例中记载的化合物。另外，将原料化合物的制造方法示于制造例中。另外，式(I)的化合物的制造方法并非仅限定于以下所示的具体实施例的制造方法，式(I)的化合物也可以通过这些制造方法的组合或者对于本领域技术人员而言显而易见的方法来制造。

需要说明的是，在本说明书中，化合物的命名有时使用ACD/Name(注册商标、Advanced Chemistry Development,Inc.)等命名软件。

另外，为了方便，将浓度mol/l表示为M。例如，1M氢氧化钠水溶液是指1mol/l的氢氧化钠水溶液。

本说明书中记载的粉末X射线衍射结果是使用Empyrean在管球：Cu、管电流：40mA、管电压：45kV、步长：0.013°、波长：测定衍射角范围(2θ)：2.5～40°的条件下测定的结果。

制造例1

将K₂CO₃(14.4g)添加到2-溴-4-氟-1-硝基-3-(三氟甲基)苯(15g)、苯酚(4.91g)和NMP(150mL)的混合物中，在50℃搅拌16小时。使反应液自然冷却至室温后，添加EtOAc和水，分离水层。将水层用EtOAc萃取，用水和brine对合并的有机层进行清洗，利用MgSO₄进行干燥。在减压下进行浓缩，通过硅胶柱层析(Hex/EtOAc)对残渣进行纯化，由此得到了2-溴-1-硝基-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯(18.4g)。

制造例13

在2-氯-4-氟-1-硝基-3-(三氟甲基)苯(4.3g)、1-(叔丁氧基羰基)-1,2,3,6-四氢-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶(4.5g)、Pd(dppf)Cl₂·CH₂Cl₂(590mg)和K₂CO₃(4g)的混合物中添加1,4-二氧六环(45mL)和水(9mL)，在氩气气氛下，在100℃搅拌20小时。自然冷却至室温后，添加水和EtOAc，进行硅藻土过滤后，利用EtOAc进行萃取，利用MgSO₄对有机层进行干燥。在减压下进行浓缩，通过硅胶柱层析(Hex/EtOAc)对残渣进行纯化，得到了4-[3-氟-6-硝基-2-(三氟甲基)苯基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(4.65g)。

制造例16

在氮气气氛下，将PdCl₂(PPh₃)₂(487mg)添加到2-溴-4-氟-1-硝基-3-(三氟甲基)苯(2g)、{[(3R)-哌啶-3-基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(1.63g)、K₂CO₃(2.87g)和1,4-二氧六环(20mL)的混合物中，在100℃搅拌3小时。使反应液自然冷却至室温后，添加水，利用EtOAc进行萃取，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(Hex/EtOAc)对残渣进行纯化，以固体的形式得到了({(3S)-1-[3-氟-6-硝基-2-(三氟甲基)苯基]哌啶-3-基}甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.70g)。

制造例17

在冰冷下在4-[3-氟-6-硝基-2-(三氟甲基)苯基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(4.6g)、苯酚(1.3g)和NMP(23mL)的混合物中添加氢化钠(60％油分散体，570mg)，在氩气气氛下，在冰冷下搅拌1小时。在冰冷下，添加水，利用EtOAc进行萃取，利用MgSO₄对有机层进行干燥。在减压下进行浓缩，通过硅胶柱层析(Hex/EtOAc)对残渣进行纯化，得到了4-[6-硝基-3-苯氧基-2-(三氟甲基)苯基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(5.18g)。

制造例21

在冰冷下，将({(3S)-1-[3-氟-6-硝基-2-(三氟甲基)苯基]哌啶-3-基}甲基)氨基甲酸叔丁酯(300mg)添加到环丙醇(0.10mL)、NaOtBu(205mg)和DMF(6mL)的混合物中，在室温下搅拌1小时。利用水使反应骤冷，利用EtOAc进行萃取，在减压下对有机层进行浓缩。通过硅胶柱层析(Hex/EtOAc)对残渣进行纯化，以固体的形式得到了({(3S)-1-[3-(环丙氧基)-6-硝基-2-(三氟甲基)苯基]哌啶-3-基}甲基)氨基甲酸叔丁酯(250mg)。

制造例30

将4M HCl/1,4-二氧六环溶液(30mL)添加到(3S)-3-[(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(8.106g)和乙醇(60mL)的混合物中，在室温下搅拌11小时。在减压下进行浓缩，使残渣从乙醇、乙醚中结晶析出。对析出固体进行过滤，利用乙醚进行清洗。在减压下对过滤固体进行干燥，以固体的形式得到了2-{[(3R)-哌啶-3-基]甲基}-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮一盐酸盐(5.695g)。

制造例31

在[(3S)-1-(叔丁氧基羰基)哌啶-3-基]乙酸(2.9g)、NH₄Cl(960mg)的混合物中添加CH₂Cl₂(24mL)、水(12mL)、WSC.HCl(2.5g)、TEA(5.8mL)、HOBt(1.8g)，在室温下搅拌过夜。向反应液中添加1M盐酸使pH变为2～3后，使用ISOLUTE(注册商标)相位分离器进行萃取，利用饱和NaHCO₃水溶液对分离的有机层进行清洗，在减压下进行浓缩，得到了(3S)-3-(2-氨基-2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.7g)。

制造例32

在冰冷下在(3S)-3-(2-氨基-2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(335mg)和THF(7mL)的混合物中添加氢化铝锂(130mg)，在室温下搅拌过夜。在冰冷下，添加水(130μL)、1M氢氧化钠水溶液(130μL)、水(390μL)后用10％甲醇/CH₂Cl₂进行稀释，在室温下搅拌1小时。进行硅藻土过滤，在减压下对滤液进行浓缩。在室温下向残渣添加CH₂Cl₂(4mL)和DIPEA(360μL)后，在冰冷下，添加TFAA(240μL)，在室温下搅拌过夜。添加饱和NH₄Cl水溶液，使用ISOLUTE(注册商标)相位分离器进行萃取，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(Hex/EtOAc)对残渣进行纯化，得到了(3S)-3-[2-(2,2,2-三氟乙酰胺)乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(139mg)。

制造例33

在室温下在(3S)-3-[2-(2,2,2-三氟乙酰胺)乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(137mg)和乙醚(1mL)的混合物中添加4M HCl/1,4-二氧六环溶液(1mL)，搅拌过夜。在减压下进行浓缩，得到了2,2,2-三氟-N-{2-[(3S)-哌啶-3-基]乙基}乙酰胺一盐酸盐(117mg)。

制造例34

在2-溴-1-硝基-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯(4.15g)和1,4-二氧六环(60mL)的混合物中添加DIPEA(3mL)和{[(3R)-哌啶-3-基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(3g)，在100℃搅拌过夜。自然冷却后，添加水，利用EtOAc进行萃取。利用MgSO₄干燥后，在减压下进行浓缩，通过硅胶柱层析(Hex/EtOAc)对残渣进行纯化，得到了({(3S)-1-[6-硝基-3-苯氧基-2-(三氟甲基)苯基]哌啶-3-基}甲基)氨基甲酸叔丁酯(4.87g)。

制造例60

在氩气气氛下，在冰冷下将氢化钠(60％油分散体，410mg)分四次添加到({(3S)-1-[3-(2-氟苯氧基)-6-硝基-2-(三氟甲基)苯基]哌啶-3-基}甲基)氨基甲酸叔丁酯(3.5g)、碘甲烷(860μL)和DMF(35mL)的混合物中，在室温下搅拌3小时。在冰冷下，利用水使反应骤冷。利用EtOAc进行萃取。利用水和brine对有机层进行清洗，利用MgSO₄进行干燥。在减压下进行浓缩，通过硅胶柱层析(Hex/EtOAc)对残渣进行纯化，以固体的形式得到了({(3R)-1-[3-(2-氟苯氧基)-6-硝基-2-(三氟甲基)苯基]哌啶-3-基}甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(3.44g)。

制造例68

在冰冷下在(2R)-2-(羟甲基)-4-[6-硝基-3-苯氧基-2-(三氟甲基)苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(110mg)和CH₂Cl₂(2mL)的混合物中添加戴斯-马丁(Dess-Martin)试剂(120mg)，在室温下搅拌1小时。进一步添加戴斯-马丁试剂(120mg)，在室温下搅拌30分钟。在冰冷下向反应液中添加10％亚硫酸钠水溶液、饱和NaHCO₃水溶液，在室温下搅拌30分钟，使用ISOLUTE(注册商标)相位分离器进行萃取，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(Hex/EtOAc)对所得到的残渣进行纯化，得到了(2R)-2-甲酰基-4-[6-硝基-3-苯氧基-2-(三氟甲基)苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(86mg)。

制造例69

在(2R)-2-甲酰基-4-[6-硝基-3-苯氧基-2-(三氟甲基)苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(84mg)和CH₂Cl₂(1mL)的混合物中添加2M甲胺/THF溶液(170μL)、乙酸(20μL)、NaBH(OAc)₃(75mg)，在室温下搅拌2小时。向反应液中添加饱和NaHCO₃水溶液，使用ISOLUTE(注册商标)相位分离器进行萃取，在减压下进行浓缩，得到了(2S)-2-[(甲基氨基)甲基]-4-[6-硝基-3-苯氧基-2-(三氟甲基)苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(93mg)。

制造例70

在冰冷下在(2S)-2-[(甲基氨基)甲基]-4-[6-硝基-3-苯氧基-2-(三氟甲基)苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(93mg)和CH₂Cl₂(1mL)的混合物中添加DIPEA(50μL)、TFAA(35μL)，在室温下搅拌1小时。在冰冷下向反应液中添加DIPEA(50μL)、TFAA(35μL)，在室温下搅拌15分钟。向反应液中添加饱和NH₄Cl水溶液，使用ISOLUTE(注册商标)相位分离器进行萃取，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(氯仿/甲醇)对残渣进行纯化，得到了(2R)-2-{[甲基(三氟乙酰基)氨基]甲基}-4-[6-硝基-3-苯氧基-2-(三氟甲基)苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(81mg)。

制造例71

在(2R)-2-甲酰基-4-[6-硝基-3-苯氧基-2-(三氟甲基)苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.04g)和CH₂Cl₂(10mL)的混合物中添加O-苄基羟胺(320μL)、乙酸(180μL)、NaBH(OAc)₃(670mg)，在室温下搅拌过夜。向反应液中添加氰基硼氢化钠(200mg)，在室温下搅拌3小时。向反应液中添加氰基硼氢化钠(200mg)，在室温下搅拌过夜。添加甲醇(3mL)，搅拌过夜。添加饱和NaHCO₃水溶液，在室温下搅拌1小时，使用ISOLUTE(注册商标)相位分离器进行萃取，在减压下进行浓缩。使残渣溶解于CH₂Cl₂(10mL)，添加DIPEA(720μL)后，在冰冷下添加TFAA(450μL)，在室温下搅拌30分钟。添加饱和NH₄Cl水溶液，使用ISOLUTE(注册商标)相位分离器进行萃取，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(Hex/EtOAc)对残渣进行纯化，得到了(2R)-2-{[(苄基氧基)氨基]甲基}-4-[6-硝基-3-苯氧基-2-(三氟甲基)苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(426mg)。

制造例72

在冰冷下在{(2R)-1-[3-(2-氟苯氧基)-6-硝基-2-(三氟甲基)苯基]吡咯烷-2-基}甲醇(510mg)和CH₂Cl₂(5mL)的混合物中添加吡啶(310μL)、乙酸酐(360μL)，在室温下搅拌过夜。添加饱和NH₄Cl水溶液，使用ISOLUTE(注册商标)相位分离器进行萃取，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(Hex/EtOAc)对残渣进行纯化，得到了乙酸{(2R)-1-[3-(2-氟苯氧基)-6-硝基-2-(三氟甲基)苯基]吡咯烷-2-基}甲酯(170mg)。

制造例73

将肼一水合物(110μL)添加到2-{[(3R)-1-(2,4-二氟-6-硝基-3-苯氧基苯基)哌啶-3-基]甲基}-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(0.376g)和MeOH(5mL)的混合物中，在加热回流下搅拌3小时。自然冷却至室温后，注入到5％氢氧化钠水溶液中，利用氯仿进行萃取。将有机层分离，利用氯仿对水层进行萃取，利用Na₂SO₄对合并的有机层进行干燥，在减压下进行浓缩，得到了1-[(3S)-1-(2,4-二氟-6-硝基-3-苯氧基苯基)哌啶-3-基]甲胺(0.266g)。

制造例75

将二碳酸二叔丁酯(202μL)添加到1-[(3S)-1-(2,4-二氟-6-硝基-3-苯氧基苯基)哌啶-3-基]甲胺(0.266g)、CH₂Cl₂(5mL)和TEA(153μL)的混合物中，在室温下搅拌63小时。将反应液注入到水中，利用CH₂Cl₂进行萃取。利用MgSO₄对有机层进行干燥后，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(Hex/EtOAc)对残渣进行纯化，得到了{[(3S)-1-(2,4-二氟-6-硝基-3-苯氧基苯基)哌啶-3-基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(0.294g)。

制造例77

在冰冷下在({(3S)-1-[6-硝基-3-苯氧基-2-(三氟甲基)苯基]哌啶-3-基}甲基)氨基甲酸叔丁酯(4.85g)、1,4-二氧六环(150mL)和水(30mL)的混合物中添加锌粉末(6.4g)和NH₄Cl(5.24g)。在室温下搅拌3小时后，利用硅藻土过滤不溶物。在减压下对所得到的滤液进行浓缩后，向残渣添加饱和NaHCO₃水溶液，利用氯仿进行萃取。利用MgSO₄干燥后，在减压下进行浓缩，得到了({(3S)-1-[6-氨基-3-苯氧基-2-(三氟甲基)苯基]哌啶-3-基}甲基)氨基甲酸叔丁酯(4.56g)。

制造例122

在氮气气氛下，在(2R)-2-{[(苄基氧基)氨基]甲基}-4-[6-硝基-3-苯氧基-2-(三氟甲基)苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(424mg)、EtOAc(2mL)和乙醇(2mL)的混合物中添加含水10％的氢氧化钯负载碳(100mg)，与氢进行置换，在室温下搅拌2小时。氮气置换后，用EtOAc进行稀释，进行硅藻土过滤，在减压下对滤液进行浓缩，得到了(2S)-2-(氨基甲基)-4-[6-氨基-3-苯氧基-2-(三氟甲基)苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(347mg)。

制造例123

将三氟乙酸乙酯(110μL)添加到(2S)-2-(氨基甲基)-4-[6-氨基-3-苯氧基-2-(三氟甲基)苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(345mg)和甲醇(2mL)的混合物中，在室温下搅拌过夜。在减压下进行浓缩，得到了(2S)-4-[6-氨基-3-苯氧基-2-(三氟甲基)苯基]-2-[(2,2,2-三氟乙酰胺)甲基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(380mg)。

制造例124

在({(3S)-1-[6-氨基-3-苯氧基-2-(三氟甲基)苯基]哌啶-3-基}甲基)氨基甲酸叔丁酯(4.56g)和DMF(50mL)的混合物中添加2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-羧酸(2.23g)、DIPEA(3mL)和HATU(4.5g)，在50℃搅拌过夜。使反应液自然冷却至室温后，在冰冷下向反应液添加水，对析出的固体进行过滤。利用氯仿溶解所得到的固体，添加水，利用氯仿进行萃取。利用MgSO₄干燥后，在减压下进行浓缩，通过硅胶柱层析(Hex/EtOAc)对残渣进行纯化，以固体的形式得到了{[(3S)-1-{3-苯氧基-6-[2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺]-2-(三氟甲基)苯基}哌啶-3-基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(5.85g)。

制造例172

在乙酸{(2R)-1-[3-(2-氟苯氧基)-6-{[2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-羰基]氨基}-2-(三氟甲基)苯基]吡咯烷-2-基}甲酯(194mg)和甲醇(1mL)的混合物中添加水(0.1mL)、K₂CO₃(135mg)，在室温下搅拌过夜。将反应液用EtOAc稀释后，进行硅藻土过滤，在减压下对滤液进行浓缩，得到了N-[4-(2-氟苯氧基)-2-[(2R)-2-(羟甲基)吡咯烷-1-基]-3-(三氟甲基)苯基]-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(200mg)。

制造例173

在冰冷下在N-[4-(2-氟苯氧基)-2-[(2R)-2-(羟甲基)吡咯烷-1-基]-3-(三氟甲基)苯基]-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(198mg)和CH₂Cl₂(2mL)的混合物中添加戴斯-马丁试剂(220mg)，在室温下搅拌1小时。在冰冷下添加10％亚硫酸钠水溶液、饱和NaHCO₃水溶液，在室温下搅拌30分钟。使用ISOLUTE(注册商标)相位分离器进行萃取，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(氯仿/甲醇)对残渣进行纯化，得到了N-[4-(2-氟苯氧基)-2-[(2R)-2-甲酰基吡咯烷-1-基]-3-(三氟甲基)苯基]-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(112mg)。

制造例174

在冰冷下，将三氟甲磺酸酐(52μL)添加到({(3S)-1-[3-羟基-6-{[2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-羰基]氨基}-2-(三氟甲基)苯基]哌啶-3-基}甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.075g)、CH₂Cl₂(4.5mL)和吡啶(50μL)的混合物中，在室温下搅拌8小时。将反应液注入到水中，利用CH₂Cl₂进行萃取。利用10％盐酸、水和brine对有机层进行清洗后，利用Na₂SO₄进行干燥，在减压下进行浓缩。在冰冷下向残渣和吡啶(2.6mL)的混合物中添加三氟甲磺酸酐(64μL)，在室温下搅拌13小时。将反应液注入到水中，利用EtOAc进行萃取。利用10％盐酸、水和brine对有机层进行清洗后，利用Na₂SO₄进行干燥，在减压下进行浓缩，得到了三氟甲磺酸3-[(3S)-3-{[(叔丁氧基羰基)氨基]甲基}哌啶-1-基]-4-{[2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-羰基]氨基}-2-(三氟甲基)苯酯(0.103g)。

制造例175

在氩气气氛下，将三氟甲磺酸3-[(3S)-3-{[(叔丁氧基羰基)氨基]甲基}哌啶-1-基]-4-{[2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-羰基]氨基}-2-(三氟甲基)苯酯(0.103g)和THF(2.5mL)的混合物添加到K₂CO₃(0.030g)、苯硼酸(0.027g)和Pd(PPh₃)₄(0.017g)的混合物中后，添加水(0.5mL)，在110～130℃搅拌8小时。使反应液自然冷却至室温后，注入到水中，利用EtOAc进行萃取。利用brine对有机层进行清洗后，利用Na₂SO₄进行干燥，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(Hex/EtOAc)对残渣进行纯化，得到了({(3S)-1-[4-{[2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-羰基]氨基}-2-(三氟甲基)[1,1'-联苯]-3-基]哌啶-3-基}甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.067g)。

制造例176

在4-[3-苯氧基-6-{[2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-羰基]氨基}-2-(三氟甲基)苯基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(2.4g)和甲醇(24mL)的混合物中添加4M HCl/1,4-二氧六环溶液(10mL)，在室温下搅拌19小时。在减压下进行浓缩，向残渣添加饱和NaHCO₃水溶液，利用混合溶剂(氯仿/甲醇)进行萃取，利用MgSO₄对有机层进行干燥。在减压下进行浓缩，通过硅胶柱层析(氯仿/甲醇)对残渣进行纯化，以固体的形式得到了N-[4-苯氧基-2-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-3-(三氟甲基)苯基]-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(1.57g)。

制造例182

在冰冷下在N-{2-[(3R)-3-(氨基甲基)哌啶-1-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(63mg)和CH₂Cl₂(1mL)的混合物中添加DIPEA(30μL)和2-硝基苯磺酰氯(30mg)，在冰冷下搅拌1小时。添加饱和NH₄Cl水溶液，使用ISOLUTE(注册商标)相位分离器进行萃取，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(氯仿/甲醇)对残渣进行纯化，得到了N-{2-[(3S)-3-{[(2-硝基苯-1-磺酰基)氨基]甲基}哌啶-1-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(94mg)。

制造例185

在室温下在N-{2-[(3S)-3-{[(2-硝基苯-1-磺酰基)氨基]甲基}哌啶-1-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(90mg)和MeCN(1mL)的混合物中添加碘甲烷(25μL)和碳酸铯(45mg)，在室温下搅拌30分钟。添加EtOAc，进行硅藻土过滤后，在减压下对滤液进行浓缩，得到了N-{2-[(3S)-3-{[甲基(2-硝基苯-1-磺酰基)氨基]甲基}哌啶-1-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(83mg)。

制造例190

在N-{2-[(3R)-3-{[甲基(三氟乙酰基)氨基]甲基}哌嗪-1-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(40mg)和CH₂Cl₂(1mL)的混合物中添加35％甲醛水溶液(10uL)、乙酸(5uL)、NaBH(OAc)₃(20mg)，在室温下搅拌过夜。向反应液中添加饱和NaHCO₃水溶液，搅拌10分钟，使用ISOLUTE(注册商标)相位分离器进行萃取，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(Hex/EtOAc氨基硅胶)对残渣进行纯化，得到了N-{2-[(3R)-4-甲基-3-{[甲基(三氟乙酰基)氨基]甲基}哌嗪-1-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(36mg)。

制造例192

在-78℃下，将苯硫酚(0.38g)添加到氢化钠(60％油分散体、0.208mg)和THF(5mL)的混合物中，在-78℃搅拌15分钟。添加2-溴-4-氟-1-硝基-3-(三氟甲基)苯(1.00g)，在-78℃搅拌15分钟。添加饱和NH₄Cl水溶液，利用EtOAc萃取三次。利用Na₂SO₄对合并的有机层进行干燥，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(Hex/EtOAc)对残渣进行纯化，得到了2-溴-1-硝基-4-(苯硫基)-3-(三氟甲基)苯(0.50g)。

制造例193

在冰冷下，在氩气气氛下，将硝酸钾(0.84g)添加到1,3-二氟-2-(甲磺酰基)苯(1.60g)和浓硫酸(12mL)的混合物中，在室温下搅拌2小时。将反应混合物注入到冰水中，对析出固体进行过滤。使所得到的固体溶解于EtOAc，利用饱和NaHCO₃水溶液进行清洗，利用Na₂SO₄进行干燥。在减压下进行浓缩，由此以固体的形式得到了1,3-二氟-2-(甲磺酰基)-4-硝基苯(1.80g)。

制造例194

在冰冷下，将30％双氧水(5mL)滴加到4-氨基-3-氟-2-(三氟甲基)苯甲酸(1.30g)和THF(15mL)的混合物中，在室温下搅拌5分钟，在80℃搅拌2小时。自然冷却至室温后，将反应混合物注入到冰水中，利用EtOAc萃取两次。利用水对合并的有机层进行清洗，利用Na₂SO₄进行干燥。在减压下进行浓缩，以固体的形式得到了3-氟-4-硝基-2-(三氟甲基)苯甲酸(1.20g)。

制造例195

在冰冷下，将草酰氯(2.03mL)滴加到3-氟-4-硝基-2-(三氟甲基)苯甲酸(1.20g)和CH₂Cl₂(30mL)的混合物中后，添加催化剂量的DMF。在冰冷下，对反应混合物搅拌1小时后，在减压下进行浓缩。使残渣溶解于苯(15mL)，在冰冷下，用时5分钟以上添加氯化铝(1.26g)，在室温下搅拌1小时。将反应混合物注入到冰上，利用EtOAc萃取三次。利用Na₂SO₄对合并的有机层进行干燥后，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(Hex/EtOAc)对残渣进行纯化，以固体的形式得到了[3-氟-4-硝基-2-(三氟甲基)苯基](苯基)甲酮(0.80g)。

制造例196

将叔丁基氯二苯基硅烷(10.0mL)添加到(8S)-8-羟基六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮(3.250g)、DMF(48mL)和咪唑(3.972g)的混合溶液中，在室温下搅拌23小时。将反应液注入到水中，利用EtOAc萃取两次。利用水、brine对合并的有机层进行清洗后，利用Na₂SO₄进行干燥，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(EtOAc/MeOH)对残渣进行纯化，得到了作为低极性物质的(8S,8aS)-8-{[叔丁基二(苯基)甲硅烷基]氧基}六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮(1.786g)和作为高极性物质的(8S,8aR)-8-{[叔丁基二(苯基)甲硅烷基]氧基}六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮(g)。

制造例197

将(8S,8aR)-8-{[叔丁基二(苯基)甲硅烷基]氧基}六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮(1.164g)的THF(10mL)溶液添加到氢化铝锂(0.594g)和THF(40mL)的混合液中，在加热回流下搅拌17小时。使反应悬浮液自然冷却至室温后，添加水(0.7mL)和THF(7.7mL)的混合液和4N氢氧化钠水溶液(0.7mL)后，添加Na₂SO₄，在室温下搅拌3小时。进行硅藻土过滤，对滤液进行减压浓缩，由此得到了(8S,8aS)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-8-醇(0.972g)。

制造例216

在氩气气氛下，在冰冷下将二异丙基偶氮二羧酸酯(262μL)添加到(8S,8aS)-2-[6-硝基-3-苯氧基-2-(三氟甲基)苯基]八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-8-醇(0.375g)、THF(6mL)、苯甲酸(0.119g)和三苯基膦(0.349g)的混合溶液中，逐渐升温到室温后搅拌15小时。对反应液进行减压浓缩，通过硅胶柱层析(Hex/EtOAc)对残渣进行纯化，得到了苯甲酸(8R,8aS)-2-[6-硝基-3-苯氧基-2-(三氟甲基)苯基]八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-8-基(0.518g)。

制造例220

在氩气气氛下，将乙酸钯(24mg)添加到{[(3S)-1-(2-溴-6-硝基-3-苯氧基苯基)哌啶-3-基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(550mg)、环丙基硼酸(112mg)、三环己基膦(30mg)、甲苯(9mL)和水(1mL)的混合物中，在微波照射下，在110℃搅拌4小时。在减压下对反应混合物进行浓缩。通过硅胶柱层析(Hex/EtOAc)对残渣进行纯化，得到了{[(3S)-1-(2-环丙基-6-硝基-3-苯氧基苯基)哌啶-3-基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(280mg)。

制造例221

在氩气气氛下，在冰冷下将二异丙基偶氮二羧酸酯(0.13mL)添加到(8S,8aS)-2-[6-硝基-3-苯氧基-2-(三氟甲基)苯基]八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-8-醇(0.233g)、THF(4mL)、邻苯二甲酰亚胺(0.090g)和三苯基膦(0.173g)的混合溶液中，逐渐升温到室温后搅拌15小时。在冰冷下向反应液中添加三苯基膦(0.173g)和二异丙基偶氮二羧酸酯(0.13mL)，逐渐升温到室温后搅拌8小时。对反应液进行减压浓缩，通过硅胶柱层析(Hex/EtOAc)对残渣进行纯化，得到了2-{(8R,8aS)-2-[6-硝基-3-苯氧基-2-(三氟甲基)苯基]八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-8-基}-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(0.214g)。

制造例271

在冰冷下，将间氯过氧苯甲酸(含有40％水分，385mg)添加到{[(3S)-1-{6-[(2-溴基-1,3-噻唑-4-羰基)氨基]-3-(苯硫基)-2-(三氟甲基)苯基}哌啶-3-基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(300mg)和CH₂Cl₂(5mL)的混合物中，在室温下对反应混合物搅拌12小时。利用饱和硫代硫酸钠水溶液使反应骤冷后，利用CH₂Cl₂萃取两次。利用Na₂SO₄对合并的有机层进行干燥，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(Hex/EtOAc)对残渣进行纯化，得到了({(3S)-1-[3-(苯磺酰基)-6-[(2-溴-1,3-噻唑-4-羰基)氨基]-2-(三氟甲基)苯基]哌啶-3-基}甲基)氨基甲酸叔丁酯(200mg)。

制造例272

在氩气气氛下，将Pd(PPh₃)₄(33mg)添加到({(3S)-1-[3-(苯磺酰基)-6-[(2-溴-1,3-噻唑-4-羰基)氨基]-2-(三氟甲基)苯基]哌啶-3-基}甲基)氨基甲酸叔丁酯(200mg)、4-(三丁基锡烷基)哒嗪(115mg)和甲苯(10mL)的混合物中，在100℃搅拌24小时。使反应混合物自然冷却至室温后，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(Hex/EtOAc)对残渣进行纯化，得到了({(3S)-1-[3-(苯磺酰基)-6-{[2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-羰基]氨基}-2-(三氟甲基)苯基]哌啶-3-基}甲基)氨基甲酸叔丁酯(100mg)。

与上述所示的制造例的制造方法同样地操作，制造后述表5-1～表5-35中所示的化合物。另外，将各制造例化合物的结构示于后述表5-1～表5-35中，将各制造例化合物的制造方法和物理化学数据示于表6-1～表6-12中。它们通过使用上述制造例的制造方法以及对于本领域技术人员而言显而易见的方法或者它们的变换方法能够容易地制造。

实施例1

在N-[2-(1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基)-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基]-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(93mg)和CH₂Cl₂(1mL)的混合物中添加35％甲醛水溶液(50μL)、乙酸(40μL)、NaBH(OAc)₃(100mg)，在室温下搅拌1小时。向反应液中添加饱和NaHCO₃水溶液，搅拌10分钟，使用ISOLUTE(注册商标)相位分离器进行萃取，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(氯仿/甲醇)对残渣进行纯化。利用MeCN对所得到的油状物进行固化，进行过滤，在减压下进行干燥，以固体的形式得到了N-[2-(9-甲基-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基)-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基]-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(72mg)。

实施例6

在N-{2-[(3R)-4-甲基-3-{[甲基(三氟乙酰基)氨基]甲基}哌嗪-1-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(35mg)和甲醇(0.5mL)的混合物中添加K₂CO₃(15mg)、水(0.1mL)，在室温下搅拌1.5小时。利用EtOAc对反应液进行稀释，进行硅藻土过滤后，在减压下对滤液进行浓缩。通过硅胶柱层析(氯仿/甲醇/氨水)对残渣进行纯化。用乙醚使所得到的粗产物固化，对生成的固体进行过滤，在减压下，在50℃进行干燥，以固体的形式得到了N-[2-{(3S)-4-甲基-3-[(甲基氨基)甲基]哌嗪-1-基}-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基]-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(17mg)。

实施例9

在冰冷下，在{[(3S)-1-{3-苯氧基-6-[2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺]-2-(三氟甲基)苯基}哌啶-3-基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(5.83g)和CH₂Cl₂(60mL)的混合物中添加TFA(7mL)，在室温下搅拌过夜。在减压下进行浓缩，利用CH₂Cl₂稀释后，在冰冷下添加饱和NaHCO₃水溶液进行中和。利用氯仿进行萃取后，利用MgSO₄进行干燥，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(氯仿/甲醇/氨水)对残渣进行纯化。利用乙醚对所得到的固体进行清洗，以固体的形式得到了N-{2-[(3S)-3-(氨基甲基)哌啶-1-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(3.52g)。

实施例49

在N-{2-[(3R)-3-{[甲基(2-硝基苯-1-磺酰基)氨基]甲基}哌啶-1-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(202mg)和DMF(1mL)的混合物中添加巯基乙酸(60μL)、氢氧化锂一水合物(60mg)，在70℃搅拌15分钟。自然冷却后，向反应液中添加CH₂Cl₂、饱和NaHCO₃水溶液并搅拌，使用ISOLUTE(注册商标)相位分离器进行萃取，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(EtOAc/氯仿)对残渣进行纯化。利用MeCN使所得到的油状物固化，进行过滤，在减压下进行干燥，以固体的形式得到了N-[2-{(3S)-3-[(甲基氨基)甲基]哌啶-1-基}-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基]-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(29mg)。

实施例54

在N-{2-[(3R)-3-(氨基甲基)哌啶-1-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(83mg)和CH₂Cl₂(1mL)的混合物中添加35％甲醛水溶液(50μL)、乙酸(35μL)、NaBH(OAc)₃(100mg)，在室温下搅拌1小时。添加饱和NaHCO₃水溶液，在室温下搅拌10分钟，使用ISOLUTE(注册商标)相位分离器进行萃取，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(氯仿/甲醇)对残渣进行纯化，使所得到的物质溶解于EtOAc后，添加4M HCl/EtOAc溶液(120μL)，对析出的固体进行过滤，在减压下，在50℃进行干燥，以固体的形式得到了N-[2-{(3R)-3-[(二甲基氨基)甲基]哌啶-1-基}-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基]-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺二盐酸盐(71mg)。

实施例59

在N-[2-(1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基)-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基]-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(100mg)和MeCN(1mL)的混合物中添加DIPEA(35μL)、1-溴-2-甲氧基乙烷(20μL)，在微波照射下，在100℃搅拌1小时。使反应液自然冷却至室温后，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(氯仿/甲醇)对残渣进行纯化，利用EtOAc进行稀释，在室温下添加4M HCl/1,4-二氧六环溶液(130μL)，在室温下搅拌10分钟。对析出的固体进行过滤，在减压下进行干燥，以固体的形式得到了N-{2-[9-(2-甲氧基乙基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺二盐酸盐(67mg)。

实施例62

在室温下，在N-[2-(1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基)-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基]-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(150mg)和CH₂Cl₂(1mL)的混合物中添加3-氧杂环丁酮(60mg)、乙酸(45μL)、NaBH(OAc)₃(160mg)，搅拌过夜。添加饱和NaHCO₃水溶液，在室温下搅拌30分钟，使用ISOLUTE(注册商标)相位分离器进行萃取，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(氯仿/甲醇)对残渣进行纯化，得到了油状物。利用EtOAc、Hex、二异丙醚进行固化，过滤后，在减压下进行干燥，以固体的形式得到了N-{2-[9-(氧杂环丁烷-3-基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(99mg)。

实施例63

在N-[4-(2-氟苯氧基)-2-[(2R)-2-甲酰基吡咯烷-1-基]-3-(三氟甲基)苯基]-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(60mg)和CH₂Cl₂(0.5mL)的混合物中添加3-氧杂环丁胺(25mg)、乙酸(20μL)、NaBH(OAc)₃(70mg)，在室温下搅拌2小时。添加饱和NaHCO₃水溶液，在室温下搅拌30分钟，使用ISOLUTE(注册商标)相位分离器进行萃取，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(氯仿/甲醇)对残渣进行纯化，得到了油状物。在所得到的油状物中添加乙醚，在减压下进行浓缩，以固体的形式得到了N-[4-(2-氟苯氧基)-2-[(2R)-2-{[(氧杂环丁烷-3-基)氨基]甲基}吡咯烷-1-基]-3-(三氟甲基)苯基]-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(20mg)。

实施例64

将2-溴-1-硝基-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯(10.9mg)、叔丁基甲基[(哌啶-3-基)甲基]氨基甲酸酯(20.7mg)、DIPEA(20μL)、NMP(250μL)的混合物在120℃搅拌过夜。放冷后，向反应液中添加PS-Isocyanate(150mg)、氯仿(1mL)，搅拌过夜。然后过滤不溶物，在减压下对滤液进行浓缩。向所得到的残渣添加乙醇(0.8mL)、水(0.2mL)、NH₄Cl(0.8mg)、还原铁(10mg)，在80℃搅拌过夜。自然冷却后，向反应液中添加水、氯仿，进行分液操作，在减压下对所得到的有机层进行浓缩。向所得到的残渣添加2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-羧酸(6.2mg)、DIPEA(10μL)、DMF(185μL)添加HATU(13.3mg)的DMF(200μL)溶液，在室温下搅拌过夜。利用HPLC(柱：サンファイア(SunFire；注册商标)MeOH/0.1％HCOOH-H₂O)进行分取纯化，向所得到的残渣添加TFA(500μL)，在室温下搅拌1小时。在减压下进行浓缩，添加饱和NaHCO₃水溶液、氯仿，进行分液操作，在减压下对所得到的有机层进行浓缩，得到了N-[2-{3-[(甲基氨基)甲基]哌啶-1-基}-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基]-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(3.8mg)。

实施例78

将肼一水合物(19.8μL)添加到N-{2-[(8R,8aS)-8-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(0.097g)和MeOH(1.4mL)的混合液中，在加热回流下搅拌6小时。使反应液自然冷却至室温后，注入到5％氢氧化钠水溶液中，利用CH₂Cl₂进行萃取。分离有机层，利用CH₂Cl₂对水层进行萃取，利用MgSO₄对合并的有机层进行干燥，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱层析(CH₂Cl₂/MeOH)对残渣进行纯化，由此得到了N-{2-[(8R,8aS)-8-氨基六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(0.047g)。

实施例83

在N-[4-(2-氟苯氧基)-2-{(3S)-3-[(甲基氨基)甲基]哌啶-1-基}-3-(三氟甲基)苯基]-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺一盐酸盐(200mg)中添加EtOAc和饱和NaHCO₃水溶液，暂时搅拌后，分离水层。利用混合溶剂(EtOAc/MeOH)对水层进行萃取，利用水和brine对合并的有机层进行清洗，利用Na₂SO₄进行干燥。在减压下进行浓缩。向残渣添加2-丙醇(4mL)，在80℃暂时进行搅拌。向其中添加富马酸(40mg)和水(200μL)，在室温下搅拌24小时。对析出物进行过滤后，在减压下进行干燥，以结晶的方式得到了N-[4-(2-氟苯氧基)-2-{(3S)-3-[(甲基氨基)甲基]哌啶-1-基}-3-(三氟甲基)苯基]-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺单[(2E)-2-丁烯二酸]盐(141mg)。

实施例84

在N-{2-[(3S)-3-(氨基甲基)哌啶-1-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺(100mg)中添加乙醇(2mL)，在75℃进行搅拌使其溶解。向其中添加富马酸(23mg)和水(400μL)，在室温下搅拌过夜。对析出物进行过滤后，在减压下进行干燥，以结晶的方式得到了N-{2-[(3S)-3-(氨基甲基)哌啶-1-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺单[(2E)-2-丁烯二酸]盐(73mg)。

与上述所示的实施例的制造方法同样地，制造了后述表7-1～表7-11中所示的化合物。另外，将各实施例化合物的结构示于后述表7-1～表7-11中，将各实施例化合物的制造方法和物理化学数据示于后述表8-1～表8-5中。它们可以通过使用上述实施例的制造方法以及对于本领域技术人员而言显而易见的方法或者它们的变换方法容易地制造。

另外，将参考例化合物的结构和物理化学数据示于后述表9中。它们可以通过使用上述制造例或实施例的制造方法以及对于本领域技术人员而言显而易见的方法或者它们的变换方法容易地制造。

另外，在后述表中，有时使用以下缩写。

PEx：制造例编号、Ex：实施例编号、PSyn：制造例化合物的制造方法(PSyn栏的编号表示该化合物通过与将该编号作为制造例编号的化合物同样的方法使用对应的原料制造。例如PSyn栏为1的化合物表示是指通过与制造例1的化合物同样的方法制造)、Syn：实施例化合物的制造方法(Syn栏的编号表示该化合物通过与将该编号作为实施例编号的化合物同样的方法使用对应的原料制造。例如Syn栏为1的化合物是指通过与实施例1的化合物同样的方法制造)、Str：化学结构式、DAT：物理化学数据、ESI+：质谱分析中的m/z值(电离法ESI，没有特殊说明的情况下[M+H]⁺或[M+Na]⁺)、ESI-：质谱分析中的m/z值(电离法ESI，没有特殊说明的情况下[M-H]^-)、NMR DMSO-d6(400MHz)、或者NMR DMSO-d6(500MHz)：DMSO-d6中的¹H-NMR中的信号的δ值(ppm)、NMR CDCl₃(400MHz)、或NMR CDCl₃(500MHz)：CDCl₃中的¹H-NMR中的信号的δ值(ppm)、s：单峰(谱)、d：二重峰(谱)、t：三重峰(谱)、m：多重峰(谱)、br：宽峰(谱)、dd：双二重峰(谱)。

只要没有特殊说明，化合物表示具有化学结构式记载的绝对立体构型的光学异构体。结构式中的HCl表示该化合物为一盐酸盐，2HCl表示该化合物为二盐酸盐，3HCl表示该化合物为三盐酸盐。

[表5-1]

[表5-2]

[表5-3]

[表5-4]

[表5-5]

[表5-6]

[表5-7]

[表5-8]

[表5-9]

[表5-10]

[表5-11]

[表5-12]

[表5-13]

[表5-14]

[表5-15]

[表5-16]

[表5-17]

[表5-18]

[表5-19]

[表5-20]

[表5-21]

[表5-22]

[表5-23]

[表5-24]

[表5-25]

[表5-26]

[表5-27]

[表5-28]

[表5-29]

[表5-30]

[表5-31]

[表5-32]

[表5-33]

[表5-34]

[表5-35]

[表6-1]

[表6-2]

[表6-3]

[表6-4]

[表6-5]

[表6-6]

[表6-7]

[表6-8]

PEx	PSyn	DAT
			173	173	ESI+：558.2
174	174	ESI+：732.9
			175	175	ESI+：661.3
176	176	ESI+：524.2
			177	176	ESI+：488.1
178	176	ESI+：452.3
			179	176	ESI+：666.4
180	176	ESI+：652.3
			181	176	ESI+：456.2
182	182	ESI+：740.3
			183	182	ESI+：740.3
184	182	ESI+：758.1
			185	185	ESI+：754.3
186	185	ESI+：754.4
			187	185	ESI+：772.4
188	185	ESI+：786.3
			189	185	ESI+：816.4
190	190	ESI+：680.3
			191	190	ESI+：666.4

[表6-9]

[表6-10]

[表6-11]

[表6-12]

[表7-1]

[表7-2]

[表7-3]

[表7-4]

[表7-5]

[表7-6]

[表7-7]

[表7-8]

[表7-9]

[表7-10]

[表7-11]

[表8-1]

[表8-2]

[表8-3]

[表8-4]

[表8-5]

[表9]

产业上的可利用性

本发明化合物或其盐作为DGKζ抑制剂是有用的，可以作为药物组合物、例如与免疫细胞活化相关的癌症或者对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的癌症的治疗用药物组合物的有效成分使用。

Claims (8)

1.一种药物组合物，其含有式(I)的化合物或其盐以及一种以上药学上可接受的赋形剂，

式中，

R¹为下述式(i)、(ii)、(iii)、(iv)或(v)，

R²为C_1-6烷基、C_3-5环烷基、-O-(C_1-6烷基)、甲磺酰基、卤代C_1-6烷基或卤素，

R³为i)被选自由C_1-6烷基、氰基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的苯基；ii)C_3-8环烷基；iii)吡啶基；iv)被C_1-6烷基取代或未取代的吡唑基；或者v)吡咯烷基，

R⁴为H或F，

L为键、O或NH，

X为CH₂、O或N-甲基，

Y为CH₂或O，

R^a为H或甲基，

R^b为H、甲基、乙基或-(CH₂)₂O-CH₃，

R^c为H、甲基或氧杂环丁烷基，

R^d为H、甲基、-(CH₂)₂OH、-(CH₂)₂O-CH₃或氧杂环丁烷基，

m为1或2，

n为1或2。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其中，R²为卤代C_1-6烷基或卤素，X为CH₂或N-甲基，R^c为H或甲基，m为1。

3.如权利要求2所述的药物组合物，其中，R¹为下述式(i-a)、(ii-a)、(iii-a)或(v)，

4.如权利要求3所述的药物组合物，其中，R³为被选自由C_1-6烷基和卤素组成的组中的基团取代或未取代的苯基或者C_3-5环烷基。

5.如权利要求4所述的药物组合物，其中，R²为CF₃，R⁴为H，R^b为H或甲基，R^c为H。

6.如权利要求1所述的药物组合物，其中，化合物选自由N-{2-[(3S)-3-(氨基甲基)哌啶-1-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺、N-{2-[(3S)-3-(氨基甲基)哌啶-1-基]-4-(3-氟苯氧基)-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺、N-{2-[9-(2-甲氧基乙基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺、N-{2-[(3S)-3-(氨基甲基)哌啶-1-基]-4-(2-氟苯氧基)-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺、N-[4-(2-氟苯氧基)-2-{(3S)-3-[(甲基氨基)甲基]哌啶-1-基}-3-(三氟甲基)苯基]-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺、N-{2-[(2R)-2-(氨基甲基)吡咯烷-1-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺、N-{2-[(8R,8aS)-8-氨基六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺和N-{2-[(8R,8aS)-8-(二甲基氨基)六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺组成的组。

7.如权利要求1所述的药物组合物，其中，化合物或其盐选自由N-{2-[(3S)-3-(氨基甲基)哌啶-1-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺单[(2E)-2-丁烯二酸]盐、N-{2-[(3S)-3-(氨基甲基)哌啶-1-基]-4-(3-氟苯氧基)-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺单[(2E)-2-丁烯二酸]盐、N-{2-[(3S)-3-(氨基甲基)哌啶-1-基]-4-(2-氟苯氧基)-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺单[(2E)-2-丁烯二酸]盐、N-[4-(2-氟苯氧基)-2-{(3S)-3-[(甲基氨基)甲基]哌啶-1-基}-3-(三氟甲基)苯基]-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺单[(2E)-2-丁烯二酸]盐和N-{2-[(2R)-2-(氨基甲基)吡咯烷-1-基]-4-苯氧基-3-(三氟甲基)苯基}-2-(哒嗪-4-基)-1,3-噻唑-4-甲酰胺单[(2E)-2-丁烯二酸]盐组成的组。

8.如权利要求1～7中任一项所述的药物组合物，其是与免疫细胞活化相关的癌症或者对抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体疗法具有抗性的癌症的治疗用药物组合物。