HK40070314A - 一种杂环化合物、其中间体、其制备方法及其应用 - Google Patents

Description

一种杂环化合物、其中间体、其制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及一种杂环化合物、其中间体、其制备方法及其应用。

背景技术

存在多种离子通道蛋白质以调节通过细胞膜的离子流。离子通道蛋白质的适当表达和功能对于细胞功能的维持以及细胞内交流是重要的。许多疾病是由于膜电位的调控异常或异常的钙处理导致。考虑到离子通道在调控膜电位和细胞中离子流的核心重要性，鉴定可促进或抑制特定离子通道的药剂作为研究工具以及作为可能的治疗剂是受到极大关注的。

TRPC(Transient Receptor Potential Canonical)是TRP超家族中最重要的亚家族之一，包括TRPC1-7，其中TRPC2在人类是假基因而不表达。根据氨基酸序列的同源性和结构特点，可将TRPCs分成两个亚类：TRPC1,4,5归为一亚类，TRPC3,6,7归为一亚类。根据激活方式，功能性TRPC又可分为钙库操控钙通道和受体操控钙通道。两种模式激活的TRPC通道均表现为非特异性阳离子通道，可介导钠、钙内流，钾外流。

阳离子通道(诸如瞬时型感受器电位(TRP)阳离子通道亚家族C，成员5(TRPC5))调节钙和钠离子通过细胞膜的流动。钠和钙的内流导致细胞的去极化。这增加了电压门控离子通道会达到对于激活所需的阈值的可能性。因此，非选择性阳离子通道的激活可增加电兴奋性，并增加电压依赖性事件的频率。电压依赖性事件包括但不限于神经元的动作电位、心动作电位、平滑肌收缩、心肌收缩和骨骼肌收缩。

通过非选择性阳离子通道(诸如TRPC5)的激活引起的钙内流还改变细胞内游离钙浓度。钙是细胞中普遍存在的第二信使分子，细胞内钙水平的改变对信号传导和基因表达具有深远的影响。因此，非选择性阳离子通道(诸如TRPC5)的激活可导致基因表达和细胞表型的变化。基因表达事件包括但不限于编码细胞表面受体、离子通道和激酶的mRNA的产生。基因表达中的这些变化可导致该细胞中的超兴奋性。

同聚TRPC5离子通道是主要在神经元中表达的信号传导门控、Ca²⁺可通过通道。TRPC5形成同聚多亚基结构(诸如四聚体(即TRPC5同源多聚体))和异聚多亚基结构(诸如四聚体(即TRPC5-TRPC1异源多聚体))。除非明确另外说明，当在本文中使用术语TRPC5时(例如当鉴定TRPC5的调节剂，诸如TRPC5拮抗剂)，术语TRPC5是一般性地使用，以包括TRPC5同源多聚体或异源多聚体(例如TRPC5-TPRC1或TRPC5-TRPC4异源多聚体)中之一或二者。文献中TRPC5的实例包括以下：Nature.2008年1月3日；451(7174)：69-72；Mol Pharmacol.2008年1月；73(1)：42-9；J Biol Chem.2007年11月16日；282(46)：33868-78；BiochemBiophysRes Commun.2008年1月11日；365(2)：239-45；J Biol Chem.2006年11月3日；281(44)：33487-96；Eur J Pharmacol.2005年3月14日；510(3)：217-22；J Biol Chem.2006年2月24日；281(8)：4977-82；Biochem Soc Trans.2007年2月；35(Pt 1)：101-4；HandbExpPharmacol.2007；(179)：109-23；J Biol Chem.2005年3月25日；280(12)：10997-1006；JPhysiol.2006年1月15日；570(Pt 2)：219-35；和Nat Neurosci.(2003)6∶837-45。

调节TRPC5蛋白的功能提供调节钙稳态、钠稳态、膜极化和/或细胞内钙水平的方法，并且可调节TRPC5功能的化合物可用于许多方面，包括但不限于维持钙稳态、调节细胞内钙水平、调节膜极化，以及治疗或预防与钙和/或钠稳态或生理紊乱(dyshomeostasis)相关的疾病、病症或病况。

抑制含有离子通道的TRPC5的化合物例如适用于通过调节可呈同源多聚体形式及与其他离子通道(诸如TRPC1或TRPC3)呈异源多聚体形式(即，TRPC5-TRPC1及TRPC1-TRPC3-TRPC5)存在的瞬时型感受器电位阳离子通道亚家族C，成员5(TRPC5)的活性以治疗病症。

局灶节段性肾小球硬化(FSGS)是一种临床病理综合征，临床表现为大量蛋白尿或肾病综合征，病理以局灶节段分布的肾小球硬化病变及足细胞变性所致足突融合或消失为特征。FSGS约占我国成人肾病综合征的5％～10％，患者以青壮年男性多见。持续肾病综合征的患者，5～10年内50％以上进展至终末期肾病。

在健康肾小球中，TRPC5被隔离在细胞质中，维持正常过滤障碍，当足细胞损伤后，足细胞损伤激活RAC1，引起TRPC5从胞浆转移至细胞膜，这促进了AT1受体诱导的通过TRPC5通道钙离子内流，进一步促进RAC1活性，RAC1激活诱导肌动蛋白重组和足细胞从肾小球上脱离；足细胞的损失破坏了过滤屏障，使得血清蛋白漏到尿液里面。

目前临床使用的FSGS治疗药物主要为激素、免疫抑制剂、CNIs和烷化剂，都存在严重毒副作用，并且很多需要与其他药联合使用才有效，容易复发。

发明内容

本发明要解决的是现有TRPC5抑制剂化合物溶解性差和生物利用度低的问题。为此，本发明提供了一种杂环化合物、其中间体、其制备方法及其应用。本发明化合物具有更好的水溶性和药代动力学性质。

本发明提供了一种如式I-a所示的化合物、其互变异构体、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其药学上可接受的盐的溶剂合物；

其中，

n为0、1、2、3或4；

R¹独立地为-CN、卤素、-OH、C₁～C₄烷基或被1、2、3或4个R^1-1取代的C₁～C₄烷基；

R^1-1独立地为-CN、卤素或-OH；

L为单键或-CR^aR^b-；

R^a为H或C₁～C₃烷基；

R^b为H、卤素或C₁～C₃烷基；

R²为

X¹为-O-、-S-、-NH-、-O-CH₂-、-S-CH₂-、-NH-CH₂-、-CH₂-或-CH₂-CH₂-；

X²为-O-、-S-、-NH-、-O-CH₂-、-S-CH₂-、-NH-CH₂-、-CH₂-或-CH₂-CH₂-；

R^2-1和R^2-2独立地为-OR^2-1-1、-SR^2-1-1或-NR^2-1-2R^2-1-3；

R^2-1-1独立地为H、C₁～C₆烷基、C₃～C₆环烷基、被1、2、3或4个R^2-1-1-1取代的C₁～C₆烷基或被1、2、3或4个R^2-1-1-1取代的C₃～C₆环烷基；

R^2-1-1-1独立地为-CN、F、Cl、Br、I、-OH、-NH₂、-COOH或-NO₂；

R^2-1-2和R^2-1-3独立地为H或C₁～C₆烷基；

R^2-3为H、F、Cl、Br、I、-CN、-NO₂、-NH₂、C₁～C₃烷基或C₁～C₃烷氧基；

R^2-4为H、F、Cl、Br、I、-CN、-NO₂、-NH₂、C₁～C₃烷基或C₁～C₃烷氧基；

R^2-5为-OR^2-5-1、-SR^2-5-1或-NR^2-5-2R^2-5-3；

R^2-5-1独立地为H、C₁～C₆烷基、C₃～C₆环烷基、被1、2、3或4个R^2-5-1-1取代的C₁～C₆烷基或被1、2、3或4个R^2-5-1-1取代的C₃～C₆环烷基；

R^2-5-1-1独立地为-CN、F、Cl、Br、I、-OH、-NH₂、-COOH或-NO₂；

R^2-5-2和R^2-5-3独立地为H或C₁～C₆烷基；

R^2-6为C₁～C₈烷基、C₃～C₆环烷基、-NR^2-6-2R^2-6-3、被1、2、3或4个R^2-6-1取代的C₁～C₈烷基或被1、2、3或4个R^2-6-1取代的C₃～C₆环烷基；

R^2-6-1独立地为-CN、F、Cl、Br、I、-OH、-NH₂、-COOH或-NO₂；

R^2-6-2和R^2-6-3独立地为H或C₁～C₆烷基。

在某一方案中，所述的如式I-a所示的化合物、其互变异构体、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其药学上可接受的盐的溶剂合物的某些基团的定义如下所述，下述内容未涉及的基团的定义如上任一方案所述(以下简称为“在某一方案中”)：n为2。

在某一方案中，R¹独立地为卤素或被1、2、3或4个R^1-1取代的C₁～C₄烷基，例如R¹独立地为氟或三氟甲基。

在某一方案中，R^1-1独立地为卤素。

在某一方案中，L为单键或-CH₂-。

在某一方案中，L为-CR^aR^b-，例如为-CH₂-。

在某一方案中，R^a为H。

在某一方案中，R^b为H。

在某一方案中，R²为例如为

在某一方案中，R^2-1和R^2-2独立地为-OR^2-1-1。

在某一方案中，R^2-1-1为H。

在某一方案中，R^2-5为-OR^2-5-1。

在某一方案中，R^2-5-1为H。

在某一方案中，R^2-6为-NR^2-6-2R^2-6-3或被1、2、3或4个R^2-6-1取代的C₁～C₅烷基。

在某一方案中，R^2-6-1为-NH₂。

在某一方案中，R^2-6-2和R^2-6-3独立地为甲基或乙基。

在某一方案中，为

在某一方案中，

n为2；

R¹独立地为卤素或被1、2、3或4个R^1-1取代的C₁～C₄烷基；

R^1-1独立地为卤素；

L为-CR^aR^b-；

R^a为H；

R^b为H；

R²为

R^2-1和R^2-2独立地为-OR^2-1-1；

R^2-1-1为H；

R^2-5为-OR^2-5-1；

R^2-5-1为H；

R^2-6为-NR^2-6-2R^2-6-3或被1、2、3或4个R^2-6-1取代的C₁～C₅烷基；

R^2-6-1为-NH₂；

R^2-6-2和R^2-6-3独立地为甲基或乙基。

在某一方案中，为

在某一方案中，为

在某一方案中，为

在某一方案中，为

在某一方案中，为

在某一方案中，当R¹独立地为卤素时，所述卤素为氟、氯或溴，例如为氟。

在某一方案中，当R¹独立地为被1、2、3或4个R^1-1取代的C₁～C₄烷基，所述C₁～C₄烷基独立地为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基，例如为甲基。

在某一方案中，当R¹独立地为被1、2、3或4个R^1-1取代的C₁～C₄烷基，所述R^1-1独立地为卤素，例如为氟。

在某一方案中，当R¹独立地为被1、2、3或4个R^1-1取代的C₁～C₄烷基，所述的R^1-1的个数为2个或3个，例如为3个。

在某一方案中，当R¹独立地为被1、2、3或4个R^1-1取代的C₁～C₄烷基时，所述被1、2、3或4个R^1-1取代的C₁～C₄烷基为二氟甲基或三氟甲基，例如为三氟甲基。

在某一方案中，当R^2-6为被1、2、3或4个R^2-6-1取代的C₁～C₈烷基时，所述C₁～C₈烷基为C₁～C₄烷基，例如为异丁基。

在某一方案中，当R^2-6为被1、2、3或4个R^2-6-1取代的C₁～C₈烷基时，所述R^2-6-1独立地为-NH₂。

在某一方案中，当R^2-6为被1、2、3或4个R^2-6-1取代的C₁～C₈烷基时，所述R^2-6-1的个数为1个。

在某一方案中，当R^2-6为被1、2、3或4个R^2-6-1取代的C₁～C₈烷基时，所述R^2-6为

在某一方案中，当R^2-6-2和R^2-6-3独立地为C₁～C₆烷基时，所述C₁～C₆烷基为C₁～C₃烷基，例如均为甲基。

在某一方案中，当R^2-6为-NR^2-6-2R^2-6-3时，所述R^2-6为

在某一方案中，所述如式I-a所示的化合物具有如式I-b所示的结构：

在某一方案中，所述如式I-a所示的化合物选自以下化合物：

本发明还提供了一种如式I-b所示的化合物的制备方法，其为方法1或方法2：

所述方法1包括以下步骤：在溶剂中，在酸的存在下，所述化合物I-c进行脱保护反应，得到所述的如式I-b所示的化合物；

其中，R²为R³为PG₁和PG₂为羟基保护基；PG₃为氨基保护基；R¹和n的定义如前所述；

所述方法2包括以下步骤：在溶剂中，所述化合物III-1与所述氯磺酸或二甲氨基甲酰氯发生取代反应，得到所述如式I-b所示的化合物；

其中，R²为R¹和n的定义如前所述。

所述制备方法中，方法1中，较佳地，PG₁和PG₂相同，更佳地，PG₁和PG₂均为t-Bu。

所述制备方法中，方法1中，较佳地，PG₃为Boc。

所述制备方法中，方法1中，所述酸可为本领域常规，例如为三氟乙酸或氯化氢的1,4-二氧六环溶液。

所述制备方法中，方法1中，所述溶剂可为本领域常规，例如为二氯甲烷和/或乙酸乙酯。

所述制备方法中，方法2中，所述溶剂可为本领域常规，例如为乙腈。

所述制备方法中，方法2中，当R²为时，所述溶剂可为本领域常规，例如为乙腈。

所述制备方法中，方法2中，当R²为时，所述氯磺酸与所述化合物化合物III-1的摩尔比可为本领域常规，例如为(3-6):1，再例如为5:1。

所述制备方法中，方法2中，当R²为时，所述溶剂可为本领域常规，例如为四氢呋喃。

所述制备方法中，方法2中，当R²为时，所述二甲氨基甲酰氯与所述化合物III-1的摩尔比为可为本领域常规，例如为(1-2):1，再例如为1:1。

本发明还提供了一种如式I-c-1所示的化合物：

其中，R¹、n、PG₁和PG₂的定义如前所述；

优选地，如式I-c-1所示的化合物为以下化合物：

本发明还提供了一种如式I-c-2所示的化合物：

其中，R¹、n和PG₃的定义如前所述；

优选地，如式I-c-2所示的化合物为以下化合物：

本发明还提供了一种如式III-1所示的化合物：

其中，R¹和n的定义如前所述；

优选地，如式III-1所示的化合物为以下化合物：

本发明还提供了一种药物组合物，其包含物质X和药用辅料，所述的物质X为上述的如式I-a所示的杂环化合物、其互变异构体、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其药学上可接受的盐的溶剂合物。

本发明还提供了一种物质X在制备TRPC5抑制剂中的应用，所述的物质X为上述的如式I-a所示的杂环化合物、其互变异构体、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其药学上可接受的盐的溶剂合物，所述TRPC5抑制剂在体内使用。

本发明还提供了一种物质X在制备药物中的应用，所述的物质X为上述的如式I-a所示的杂环化合物、其互变异构体、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其药学上可接受的盐的溶剂合物，所述的药物为用于治疗和/或预防TRPC5介导的疾病的药物。

在所述的应用中，所述的TRPC5介导的疾病可为精神病症、神经病症、神经退行性病症或肾病。

所述的精神病症、神经病症或神经退行性病症可选自：与失调的情绪处理相关的疾病(例如，边缘型人格障碍或抑郁症，诸如重性抑郁症、严重抑郁障碍、精神抑郁症、心境恶劣和产后抑郁症以及双相障碍)、与焦虑及恐惧相关的病症(例如，创伤后应激障碍、惊恐病、广场恐怖症、社交恐惧症、广泛性焦虑症、惊恐病、社交焦虑症、强迫症及分离焦虑)、记忆障碍(例如，阿尔茨海默病、遗忘症、失语症、脑损伤、脑肿瘤、慢性疲劳综合征、克雅氏病、解离性遗忘症、神游遗忘症、亨廷顿病、学习障碍、睡眠障碍、多重人格障碍、疼痛、创伤后应激障碍、精神分裂症、运动损伤、中风及韦-科二氏综合征)、与受损的冲动控制及成瘾相关的病症、阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、肌萎缩侧索硬化、癫痫、以及、由创伤或包括衰老的其他损伤引起的其他脑部病症。

所述的肾病可为局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、微小病变肾病或糖尿病肾病。

本发明还提供了一种物质X在制备药物中的应用，所述的物质X为上述的如式I-a所示的杂环化合物、其互变异构体、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其药学上可接受的盐的溶剂合物，所述的药物为用于治疗和/或预防精神病症、神经病症、神经退行性病症或肾病的药物。

在所述的应用中，所述的精神病症、神经病症或神经退行性病症可选自：与失调的情绪处理相关的疾病(例如，边缘型人格障碍或抑郁症，诸如重性抑郁症、严重抑郁障碍、精神抑郁症、心境恶劣和产后抑郁症以及双相障碍)、与焦虑及恐惧相关的病症(例如，创伤后应激障碍、惊恐病、广场恐怖症、社交恐惧症、广泛性焦虑症、惊恐病、社交焦虑症、强迫症及分离焦虑)、记忆障碍(例如，阿尔茨海默病、遗忘症、失语症、脑损伤、脑肿瘤、慢性疲劳综合征、克雅氏病、解离性遗忘症、神游遗忘症、亨廷顿病、学习障碍、睡眠障碍、多重人格障碍、疼痛、创伤后应激障碍、精神分裂症、运动损伤、中风及韦-科二氏综合征)、与受损的冲动控制及成瘾相关的病症、阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、肌萎缩侧索硬化、癫痫、以及、由创伤或包括衰老的其他损伤引起的其他脑部病症。

在所述的应用中，所述的肾病可为局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、微小病变肾病或糖尿病肾病。

除非另有说明，在本发明说明书和权利要求书中出现的以下术语具有下述含义：

术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物与相对无毒的、药学上可接受的酸或碱制备得到的盐。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的药学上可接受的碱与这类化合物的原型接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括但不限于：锂盐、钠盐、钾盐、钙盐、铝盐、镁盐、锌盐、铋盐、铵盐、二乙醇胺盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的药学上可接受的酸与这类化合物的原型接触的方式获得酸加成盐。所述的药学上可接受的酸包括无机酸，所述无机酸包括但不限于：盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、碳酸、磷酸、亚磷酸、硫酸等。所述的药学上可接受的酸包括有机酸，所述有机酸包括但不限于：乙酸、丙酸、草酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、水杨酸、酒石酸、甲磺酸、异烟酸、酸式柠檬酸、油酸、单宁酸、泛酸、酒石酸氢、抗坏血酸、龙胆酸、富马酸、葡糖酸、糖酸、甲酸、乙磺酸、双羟萘酸(即4,4’-亚甲基-双(3-羟基-2-萘甲酸))、氨基酸(例如谷氨酸、精氨酸)等。当本发明的化合物中含有相对酸性和相对碱性的官能团时，可以被转换成碱加成盐或酸加成盐。具体可参见Berge et al.,"Pharmaceutical Salts",Journalof Pharmaceutical Science 66:1-19(1977)、或、Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use(P.Heinrich Stahl and Camille G.Wermuth,ed.,Wiley-VCH,2002)。

术语“溶剂合物”是指本发明化合物与化学计量或非化学计量的溶剂结合形成的物质。溶剂合物中的溶剂分子可以有序或非有序排列的形式存在。所述的溶剂包括但不限于：水、甲醇、乙醇等。

术语“药学上可接受的盐的溶剂合物”中的“药学上可接受的盐”和“溶剂合物”如上所述，是指本发明化合物1、与相对无毒的、药学上可接受的酸或碱制备得到的，且2、与化学计量或非化学计量的溶剂结合形成的物质。所述的“药学上可接受的盐的溶剂合物”包括但不限于本发明化合物的盐酸一水合物。

当任意变量(例如R¹)在化合物的定义中多次出现时，该变量每一位置出现的定义与其余位置出现的定义无关，它们的含义互相独立、互不影响。因此，若某基团被1个、2个或3个R¹基团取代，也就是说，该基团可能会被最多3个R¹取代，该位置R¹的定义与其余位置R¹的定义是互相独立的。另外，取代基及/或变量的组合只有在该组合产生稳定的化合物时才被允许。

术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。

术语“烷基”是指具有一个到十个碳原子的饱和的直链或支链的一价烃基(例如C₁～C₈烷基，又例如C₁～C₆烷基、C₁～C₅烷基、C₁～C₄烷基、C₁～C₃烷基等)。烷基的实例包括但不限于：甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、1-丁基、2-甲基-1-丁基、2-丁基、2-甲基-2-丙基、1-戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基、3,3-二甲基-2-丁基、1-庚基和1-辛基。

术语“环烷基”是指具有三到二十个碳原子的饱和的环烃原子团，优选包含3至12个碳原子，更优选包含3至6个碳原子。环烷基的实例包括但不限于：环丙基、环丁基、环戊基和环己基。

术语“烷氧基”是指基团R^X-O-，其中，R^X为上文所定义的烷基。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基等。

术语“药用辅料”是指生产药品和调配处方时使用的赋形剂和附加剂，是除活性成分以外，包含在药物制剂中的所有物质。可参见中华人民共和国药典(2020年版)四部、或、Handbook of Pharmaceutical Excipients(Raymond C Rowe,2009 Sixth Edition)。

术语“治疗”指治疗性疗法。涉及具体病症时，治疗指：(1)缓解疾病或者病症的一种或多种生物学表现，(2)干扰(a)导致或引起病症的生物级联中的一个或多个点或(b)病症的一种或多种生物学表现，(3)改善与病症相关的一种或多种症状、影响或副作用，或者与病症或其治疗相关的一种或多种症状、影响或副作用，或(4)减缓病症或者病症的一种或多种生物学表现发展。

术语“预防”是指获得或发生疾病或障碍的风险降低。

术语“患者”是指根据本发明的实施例，即将或已经接受了该化合物或组合物给药的任何动物，哺乳动物为优。术语“哺乳动物”包括任何哺乳动物。哺乳动物的实例包括但不限于牛、马、羊、猪、猫、狗、小鼠、大鼠、家兔、豚鼠、猴、人等，以人类为优。

术语“治疗有效量”是指在给予患者时，足以有效治疗本文所述的疾病或病症的化合物的量。“治疗有效量”将根据化合物、病症及其严重度、以及欲治疗患者的年龄而变化，可由本领域技术人员根据需要进行调整。

在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

本发明的积极进步效果在于：本发明化合物具有更好的水溶性和药代动力学性质。

附图说明

图1为单次灌胃给药化合物L015后CD-1小鼠组织中血药浓度分布图。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

名词及代表试剂

在以下具体实验描述中使用的所述名词分别代表(除非另有说明)以下试剂：

NBS：N-溴代丁二酰亚胺；DIEA：N,N-二异丙基乙胺；EA：乙酸乙酯；DCM：二氯甲烷；DMF：N,N-二甲基甲酰胺；THF：四氢呋喃；i.v.：静脉注射；PO：口服。

一、本发明化合物的制备及其效果数据：

实施例1化合物(5-氯-4-(3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)磷酸二氢甲酯(化合物1)的制备

合成路线：

1.1化合物1-1的制备

将化合物1-a(10.0g，0.11mol)溶于无水乙醇(100mL)中，加入化合物1-b(15.8g，0.11mmol)，混合物在90℃下搅拌2小时。反应结束后，冷却至室温，旋干溶剂得到黑色粘稠状物，加入30mL氯化氢的1,4-二氧六环溶液(4mol/L)，25℃下搅拌12小时，反应结束后，加入50mL水，用碳酸钠溶液调节pH值约为8，乙酸乙酯(50mL*4)萃取，饱和食盐水(30mL*2)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后的残留物用乙酸乙酯重结晶三次后，得到化合物1-1(3.5g)。LC-MS[M+H]⁺＝148.0。

1.2化合物1-2的制备

将化合物1-c(7.47g，30.6mmol)溶于四氢呋喃(50mL)，并取出2mL溶液滴加到氮气保护下含有镁屑(1.47g，61.2mmol)和碘(50mg，2mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中，用吹风机加热至溶液澄清透明后，将剩余化合物1-c的四氢呋喃溶液逐滴加入到反应体系。将混合物在70℃下搅拌1小时，冷却至室温后。在-70℃氮气保护下，将混合物再滴加到化合物1-1(3.00g，20.4mmol)的四氢呋喃溶液中。将混合体系在-70℃下搅拌2小时。反应结束后，加入氯化铵溶液(50mL)，乙酸乙酯(50mL*3)萃取，饱和食盐水(30mL*2)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后，粗品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝100/1(v/v))，得到化合物1-2(3.2g)。

LC-MS[M+H]⁺＝312.07。

1.3化合物1-3的制备

将化合物1-2(1.10g，3.50mmol)溶于四氢呋喃(25mL)中。加入湿Pd/C(10％，400mg)，所得混合物在氢气气氛下室温搅拌12小时。反应结束后，过滤，滤液减压浓缩得到化合物1-3(1.0g)。

LC-MS[M+H]⁺＝316.2。

1.4化合物1-4的制备

将化合物1-3(200mg，0.63mmol)溶于无水丁醇(1mL)中，加入1-d(189mg，0.76mmol)和N,N-二异丙基乙胺(245mg，1.90mmol)，氮气保护下，将混合物在120℃下搅拌2小时。反应液浓缩，粗品经硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝100/1(v/v))，得到化合物1-4(160mg)。

LC-MS[M+H]⁺＝528.2。

1.5化合物1-5的制备

将化合物1-4(200mg，0.297mmol)溶于无水二氯甲烷(20mL)中，加入戴斯-马丁氧化剂(630mg，1.485mmol)。氮气保护下，将混合物在40℃下搅拌8小时。反应结束后，加入氢氧化钠溶液调节pH值约为9，二氯甲烷(10mL*3)萃取，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗品经硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝100/1(v/v))，得到化合物1-5(150mg)。LC-MS[M+H]⁺＝526.2。

1.6化合物1-6的制备

将化合物1-5(150mg,0.28mmol)溶于氯化氢的1,4-二氧六环溶液(2mL，4mol/L)中，将混合物在25℃下搅拌1小时。混合物减压浓缩后得到粗产品，粗产品再经高效液相制备色谱纯化得到化合物1-6(216mg)。LC-MS[M+H]⁺＝441.8。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ13.08(s,1H),8.02(s,1H),7.85(dd,J＝9.3,2.5Hz,1H),7.79(dd,J＝8.5,5.5Hz,1H),7.68(td,J＝8.5,2.5Hz,1H),7.35(s,1H),4.83(s,2H),4.52(t,J＝5.2Hz,2H),3.91(t,J＝5.3Hz,2H)。

1.7化合物1-7的制备

向反应瓶中加入化合物1-6(300mg，0.68mmol)，碘化钠(132mg，0.88mmol)，四氢呋喃(3mL)搅拌溶解，冰浴降温至0℃左右，向反应液中滴加叔丁醇锂(1M的四氢呋喃溶液，0.82mL，0.82mmol)，滴加完毕，随后向反应液中加入氯甲基磷酸二叔丁酯(230mg，0.83mmol)，反应液升温至室温反应12小时。反应液加水淬灭，乙酸乙酯(5mL*3)萃取，有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥后，过滤，滤液减压浓缩得到的化合物1-7(300mg)，无需进一步纯化直接于下一步反应。

LC-MS[M+H]⁺＝664.2。

1.8化合物(5-氯-4-(3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)磷酸二氢甲酯(化合物1)的制备

将化合物1-7(300mg,0.45mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，搅拌下向反应液中滴加三氟乙酸(0.6mL)，混合物在25℃下搅拌1小时。反应完毕，混合物减压浓缩后得到粗产品，粗产品再经高效液相制备色谱纯化得到化合物1(112.3mg)。

LC-MS[M+H]⁺＝552.0；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.14(s,1H),7.84(dd,J＝9.2,2.8Hz,1H),7.79(dd,J＝8.4,5.6Hz,1H),7.68(td,J＝8.4,2.6Hz,1H),7.36(s,1H),5.68(d,J＝7.6Hz,2H),4.91(s,2H),4.54(t,J＝5.6Hz,2H),3.98(t,J＝5.6Hz,2H)。

实施例2(5-氯-4-(3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)L-缬氨酸甲酯(化合物2)的制备

合成路线：

2.1化合物2-1的制备

将化合物2-a(3g，13.81mmol)，碳酸氢钠(4.7g，55.23mmol)和四丁基硫酸氢铵(468mg，1.38mmol)溶于二氯甲烷(30mL)和水(30mL)的混合溶剂中，所得反应液在室温下搅拌5分钟后降至0℃，将化合物2-b(2.73g，16.57mmol)加入到反应液中，然后升温至室温并搅拌2小时。反应完毕，反应液缓慢倒入碳酸氢钠水溶液中，用二氯甲烷(50mL*3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水清洗，用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩。粗品经硅胶层析柱分离纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/0～4/1(v/v))纯化得到化合物2-1(3.6g)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ7.35(d,J＝7.6Hz,1H),5.94(d,J＝6.0Hz,1H),5.84(d,J＝6.0Hz,1H),3.92-3.88(m,1H),2.06-2.01(m,1H),1.39-1.34(m,9H),0.89(dd,J₁＝6.8,J₂＝1.6Hz,6H)。

2.2化合物2-2的制备

将化合物1-6(200mg,0.45mmol)和碘化钠(88.22mg，0.59mmol)溶于四氢呋喃(3mL)中，向反应液中加入叔丁醇锂(0.54mL，1M的四氢呋喃溶液)，后将化合物2-1(145.4mg，0.55mmol)的四氢呋喃(2mL)溶液加入到反应液中，反应液升温至室温并搅拌过夜。反应完毕。将反应液和前一批次合并后并减压浓缩。粗品经硅胶层析柱分离纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/4～0/1(v/v))纯化得到化合物2-2(400mg)。

LC-MS[M-Boc+H]⁺＝571.2。

2.3化合物(5-氯-4-(3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)L-缬氨酸甲酯(化合物2)的制备

将化合物2-2(350mg,0.35mmol)溶于乙酸乙酯(10mL)中，向反应中加入氯化氢的1,4-二氧六环溶液(10mL，4M)，反应液在室温下搅拌2小时。反应完毕，反应液缓慢倒入碳酸氢钠水溶液中，用乙酸乙酯(30mL*3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水清洗，用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩。粗品经高效液相制备色谱纯化得到化合物2(47.4mg)。

LC-MS[M+H]⁺＝571.1；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.24(s,1H),8.16(s,1H),7.84(dd,J₁＝8.4,J₂＝2.4Hz,1H),7.78(dd,J₁＝8.8,J₂＝5.6Hz,1H),7.69(dd,J₁＝4.4,J₂＝2.4Hz,1H),7.35(s,1H),5.97(dd,J₁＝22.4,J₂＝9.6Hz,2H),4.91(s,2H),4.53(t,J＝4.8Hz,2H),3.98(t,J＝4.8Hz,2H),3.14(d,J＝5.2Hz,1H),1.83-1.78(m,1H),0.86(d,J＝6.8Hz,3H),0.81(d,J＝6.8Hz,2H)。

实施例3化合物(5-氯-4-(3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)硫酸氢甲酯(化合物3)的制备

合成路线：

3.1化合物3-1的制备

将化合物1-6(400mg，0.90mmol)溶于乙醇(4mL)和10％的甲醛水溶液(4mL)中，反应液在80℃反应32小时。反应完毕，反应液减压浓缩得到粗品，粗品经硅胶层析柱分离纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1(v/v))得到化合物3-1(35mg)。LC-MS[M+H]⁺＝472.1。

3.2化合物(5-氯-4-(3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)硫酸甲酯(化合物3)的制备

将化合物3-1(35mg,0.07mmol)溶于乙腈(10mL)中。再加入氯磺酸(43mg,0.37mmol)，反应在0℃下反应2小时，反应完毕。用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝8，反应液减压浓缩后得到粗产品，粗产品再经高效液相制备色谱纯化得到化合物3(5.8mg)。LC-MS[M+H]⁺＝552.05；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ12.91(s,1H),8.00(s,1H),7.86–7.82(m,2H),7.67(td,J₁＝8.4Hz,J₂＝2.4Hz,1H),7.37(s,1H),5.55–5.53(m,1H),4.66–4.63(m,1H),4.30–3.98(m,6H)。

实施例4化合物(5-氯-4-(3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)二甲基氨基甲酸甲酯(化合物4)的制备

合成路线：

将化合物3-1(50mg,0.11mmol)溶于四氢呋喃(3mL)中后降至0℃，向反应液中加入氢化钠(4mg，0.11mmol，60％纯度分散于矿物油中)，反应液升温至室温并搅拌半个小时后降至0℃。将二甲氨基甲酰氯(11mg，0.11mmol)的四氢呋喃(0.5mL)溶液加入到反应液中，反应升温至室温并搅拌3小时。反应完毕后，将反应液减压浓缩，残留物经高效液相制备色谱纯化得到化合物4(1.2mg)。LCMS[M+H]⁺＝543.1；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.95(s,1H),7.60-7.55(m,1H),7.52(dd,J₁＝8.8,J₂＝2.4Hz,1H),7.36(t,J＝6.8Hz,1H),7.31(s,1H),5.32(s,1H),4.89(d,J＝14.4Hz,1H),4.52-4.43(m,1H),4.24-4.00(m,5H),3.19(s,3H),2.93(s,3H)。

效果实施例1生物学活性测试试验

TRPC5是一类非选择性阳离子通道，对钙离子具有通透性，因此本实验选用TRPC5激动剂Englerin A(EA)、TRPC5抑制剂Pico145作为阳性对照，使用Fluo-4 AM荧光染料检测化合物对TRPC5-HEK 293细胞内Ca²⁺的方法来间接反映化合物对TRPC5通道的影响。

1.细胞培养

1.1 TRPC5-HEK 293细胞复苏

复苏液：100％DMEM高糖

选择培养基：DMEM高糖+10％FBS+1％P/S+1％HEPES+稻瘟散(Blasticidin，5μg/mL)+潮霉素(Hygromycine，50μg/mL)

诱导培养基：DMEM高糖+10％FBS+1％P/S+1％HEPES+多西环素(Doxycycline，1μg/mL)

复苏过程：液氮罐中取出，于冰盒中转移至水浴锅，划圈溶解至含一小块冰时转移冻存液至复苏液中，1000rpm离心5min，弃去上清，转移至选择培养基中，CO₂培养箱中(5％CO₂，95％湿度，37℃)扩培。

1.2 TRPC5-HEK 293细胞接板

实时荧光实验前14h，用PBS清洗细胞，用含EDTA的胰蛋白酶(TRYPSIN-EDTA)消化细胞，诱导培养基稀释细胞至20万细胞/mL，接至已包被多聚赖氨酸(PDL,Poly-D-Lysine)(母液10mg/mL，终浓度10μg/mL)的96孔黑壁底透板中，100μL/孔即2万细胞/孔。

2.缓冲液配制

500mL TRPC5钙信号检测用外液：4.0908g NaCl,0.1864g KCl,0.111CaCl₂,0.0476g MgCl₂,0.9g Glucose(葡萄糖),1.1915g HEPES(4-羟乙基哌嗪乙磺酸)。

钙荧光染料：TRPC5钙信号检测用外液含终浓度4μM Fluo-4(含0.5％BSA)

3.化合物的配制

激动剂：Englerin A(EA)

激动剂浓度：由于EA激活TRPC5的EC₅₀大约在0.35nM，使用0.3nM EA

阳性抑制剂：Pico145(HC608)

阳性抑制剂浓度：100nM

待测化合物：化合物1-6和化合物1

待测化合物浓度：常规配制，配制为8倍于检测终浓度的药液(检测终浓度分别为：1nM、3nM、10nM、30nM、100nM、300nM和1000nM)，每个底板孔60μL。

4.数据处理

Flipr测试荧光值减去未进行染色(dye)的细胞孔的值(即本底荧光值)，采用Graphpad Prism 6.0软件进行统计和数据处理，轨迹图采用去除基线(remove baseline)的方式进行归一化处理，比值型显示，量效图求取AUC(钙流信号形成的曲线的曲线下面积)收集数据与化合物浓度的log值，采用log[Inhibitor]vs.response—Variable slope计算IC₅₀值。

结果见表1：化合物1对TRPC5通道无抑制活性。

表1

化合物编号
		化合物1-6	11.5
化合物1	>10000

效果实施例2化合物单次灌胃(以5％Solutol为溶媒)给药雄性SD大鼠PK研究

1.实验目的：

探索本发明化合物1(125mg/kg)及化合物1-6(100mg/kg)单次灌胃给药后雄性大鼠血浆中该化合物的时间-血药浓度曲线，获得本发明化合物1及化合物1-6单次给药大鼠的PK参数(C_max，T_max，AUC_last，AUC_inf，T_1/2、MRT等)。

2.实验方案

2.1实验仪器

表2

名称	型号/规格	厂家
			电子分析天平	MS105Du	Mettler-Toledo
电子秤	YP2001	上海佑科仪器
			高速冷冻离心机	STR16	Thermo Fisher Scientific

2.2实验准备

2.2.1本发明化合物(化合物1)的实验准备

大鼠：SD大鼠，SPF级，3只雄性，体重范围180-200g(来源：北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号：110011201109106028)；

饲养条件：普通级动物房饲养，自由饮食饮水，3只/笼饲养，12/12小时明/暗周期调节(7:00am/7:00pm)，温度23±1℃。

配药：PO组化合物精确称量后，先加入所需体积的5％solutol，涡旋混匀2min后，超声30min，搅拌2h后至肉眼无明显可见颗粒，边搅拌边给药，取中层药液用于给药。

给药前，药液需留样分析，混悬液准确取样上、中、下各100μL 2份，当天送分析检测，备份样品保存在-75℃冰箱备用。

2.2.2化合物1-6的实验准备

大鼠：SD大鼠，SPF级，3只雄性，体重范围220-300g(来源：北京斯贝福生物技术有限公司，合格证号：110324200103216838)；

饲养条件：普通级动物房饲养，自由饮食饮水，3只/笼饲养，12/12小时明/暗周期调节(7:00am/7:00pm)，温度23±1℃。

配药：PO组化合物1-6精确称量后，先加入所需体积的5％solutol，涡旋混匀2min后，超声30min，搅拌3h后至肉眼无明显可见颗粒后给药；

现配现用，药液需留样分析，混悬液取上、中、下各100μL 2份，当天送分析检测。

2.3给药方案

大鼠根据体重随机分成3组，具体分组和给药情况如下：

表3本发明化合物分组给药信息

1.PO组动物给药前通宵禁食不禁水，给药后4h返还食物；

2.取血时间点：PO组取血时间点为0.167、0.5、1、2、3、4、6、9、12和24h。

表4化合物1-6分组给药信息

1.PO组动物给药前通宵禁食不禁水，给药后4h返还食物；

2.取血时间点：PO组取血时间点为0.167、0.5、1、2、3、4、6、9、12和24h。

2.4样品的采集和制备

大鼠给药后，根据采样时间点，从眼眶静脉丛收集血液，每个时间点采集约0.2-0.3mL血液于抗凝EP管中(内含4μL EDTA-K₂，375mg/mL)，缓慢上下倒置3次，置于冰盒内保存(不超过30分钟)，在4℃下使用3500×g离心10分钟，移取上清液至标记的EP管中，观察血浆溶血情况并记录，送生物分析检测；如果无法当天检测，样本需储存在-80℃直到检测(注意勿进行多次冷冻/溶解的过程)。

2.5样品分析

2.5.1本发明化合物的样品分析

2.5.1.1实验仪器：

高效液相色谱泵(Pump)：Exion LC AD Pump，Sciex公司

自动进样器(Auto sampler：Exion LC AD Autosampler，Sciex公司

柱温箱(column Oven)：Exion LC AD Column Oven，Sciex公司

质谱仪(Mass spectrometer)：AB Sciex Qtrap 3500

高速冷冻离心机(centrifuge)：Thermo Fisher,ST16R，GG1206085-093

分析天平(Electronic balance)：Mettler Toledo,MS-105DU，GG1206363

微型涡旋仪(Vortex):上海沪西分析仪器厂，WH-2，GG1206487

实验材料：大鼠血浆(EDTA-K₂)

分析物：化合物1-6

内标：甲苯磺丁脲

分析方法：液质联用法

2.5.1.2质谱条件：

质谱参数

离子源：Ion Electrospray(ESI)

离子化模式(Ionization mode)：正离子模式(Positive)

检测模式(Mode)：多反应监测(MRM)

电喷雾电压(Ion Spray Voltage)：5500

离子喷雾温度(Turbo Ion Spray Temp)：550℃

气帘气(Curtain Gas)：35

碰撞池气体(CAD Gas)：Medium

雾化气(Nebulizing Gas，Gas 1)：55.00

辅助气(Auxiliary Gas，Gas 2)：55.00

检测离子对：

表5

2.5.1.3液相方法：

色谱柱：poroshell 120EC-C18(2.1×50mm，2.7μm)

流动相A(Mobile Phase A)：0.1％甲酸的水溶液

流动相B(Mobile Phase B)：0.1％甲酸的甲醇溶液

自动进样器清洗溶液(Rinse Port Wash Solution)：甲醇：水：乙腈：异丙醇＝1:1:1:1

柱温箱温度(Column Temperature)：40℃

流速(Flow Rate)：0.65mL/min

自动进样器温度(Sample Tray Temp)：15℃

进样体积(Injection Volume)：8μL

压脚提升量(Needle Stroke)：49mm

自动进样器清洗设置(Rinse Pump Setting)：仅清洗进样口

自动进样器清洗模式(Rinse Mode)：吸入前清洗

自动进样器洗针体积(Rinse Volume)：500μL

进样针清洗时浸泡时间(Rinse Dip Time)：2秒

洗脱梯度：

表6

2.5.1.4前处理方法

样品前处理过程：取3μL工作液，加入57μL空白基质于1.5mL离心管中，加入240μL含200ng/mL甲苯磺丁脲和0.1％FA的乙腈沉淀蛋白，涡旋混合1分钟，样品于4℃的离心机中13000rpm离心15分钟。取上清液100μL于另一96深孔板中，加入100μL的含0.1％FA的甲醇：水(1：3，v：v)溶液，振荡混合1分钟，于96孔板离心机中3500rpm离心5分钟后直接进样。

2.5.2化合物1-6的样品分析

2.5.2.1实验仪器：

高效液相色谱泵(Pump)：LC-30AD，Shimadzu公司

自动进样器(Auto sampler：SIL-30AC，Prominence，Shimadzu公司

柱温箱(Column Oven)：CTO-30A，Shimadzu公司

质谱仪(Mass spectrometer)：AB Sciex Qtrap 3500

高速冷冻离心机(Centrifuge)：Thermo Fisher,ST16R，GG1206085-093

分析天平(Electronic balance)：Mettler Toledo,MS-105D，GG1206363

微型涡旋仪(Vortex)：上海沪西分析仪器厂，WH-2，GG1206487

实验材料：大鼠血浆(EDTA-K₂)

分析物：化合物1-6

内标：甲苯磺丁脲

分析方法：液质联用法

2.5.2.2质谱条件：

质谱参数

离子源：Ion Electrospray(ESI)

离子化模式(Ionization mode)：正离子模式(Positive)

检测模式(Mode)：多反应监测(MRM)

电喷雾电压(Ion Spray Voltage)：5500

离子喷雾温度(Turbo Ion Spray Temp)：550℃

气帘气(Curtain Gas)：35

碰撞池气体(CAD Gas)：Medium

雾化气(Nebulizing Gas，Gas 1)：55.00

辅助气(Auxiliary Gas，Gas 2)：55.00

检测离子对：

表7

2.5.2.3液相方法：

色谱柱：poroshell 120EC-C18(4.6×50mm，2.7μm)

流动相A(Mobile Phase A)：0.1％甲酸的水溶液

流动相B(Mobile Phase B)：0.1％甲酸的甲醇溶液

自动进样器清洗溶液(Rinse Port Wash Solution)：甲醇：乙腈：水：异丙醇＝1:1:1:1

流速(Flow Rate)：0.8mL/min

自动进样器温度(Sample Tray Temp)：15℃

进样体积(Injection Volume)：15μL

压脚提升量(Needle Stroke)：49mm

自动进样器清洗设置(Rinse Pump Setting)：仅清洗进样口

自动进样器清洗模式(Rinse Mode)：吸入前清洗

自动进样器洗针体积(Rinse Volume)：500μL

进样针清洗时浸泡时间(Rinse Dip Time)：2秒

洗脱梯度：

表8

2.5.1.4前处理方法

样品前处理过程：取30μL样品，加入120μL含0.1％FA和200ng/mL混标溶液的乙腈沉淀蛋白，涡旋混合均匀，样品于4℃的离心机中13000pm离心10分钟。取上清液100μL于另一96深孔板中，加入100μL的甲醇：水(1：3，v：v)溶液，振荡混合10分钟。

2.6数据分析

数据将使用WinNonlin(version 5.2.1 Pharsight,Mountain View,CA)通过非房室模型进行分析，得到PK参数(根据不同给药途径选择C_max，T_max，AUC_last，AUC_inf，T_1/2，MRT等参数)。具体结果见表9，表中所列数据的分析物为化合物1-6。

表9

100*在此表示化合物1的125mg/kg相当于化合物1-6的100mg/kg。

实验结论：本发明化合物与化合物1-6相比，具有更好的暴露量。

二、本发明化合物1-6(对应以下实施例15中的化合物L015)及其类似物的制备及其效果数据：

实施例1化合物4-氯-5-(3-(2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)哒嗪-3(2H)酮(L001)的制备

1.1化合物5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(L001-1)的制备

将5,6,7,8-四氢咪唑[1,2-a]吡嗪(700mg,5.68mmol)和K₂CO₃(1.57g，11.37mmol)加入单口瓶中，加入H₂O(8mL)和THF(8mL)，溶解完全后滴加(Boc)₂O，加完后室温反应过夜。TLC(DCM/MeOH＝10/1)显示反应完全。向反应液加入NaCl使其饱和，EA萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩得L001-1(1.2g)，棕色固体。

1.2化合物3-溴-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(L001-2)的制备

将5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(1.2g，5.37mmol)加入单口瓶中，加DMF(10mL)，溶解完全后缓慢加入NBS(1.15g，6.45mmol)，加完室温反应过夜。TLC(DCM/MeOH＝10/1)表明反应完全，反应液制备分离(MeCN，H₂O，0.05％TFA)得到L001-2(700mg)，淡黄色固体。

1.3化合物3-(2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(L001-3)的制备

将2-(三氟甲基)苄溴(791.1mg,3.31mmol)和Zn(8.27mmol)加入单口瓶中，加入无水THF(5mL)，氮气保护下室温反应过夜，将Pd₂(dba)₃(91.6mg)、三(邻甲苯基)膦(50.3mg)和3-溴-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(500mg，1.65mmol)加入单口瓶中，氮气保护下70℃下反应2h，TLC(纯EA)表明反应完全，EA萃取，有机相用饱和食盐水洗，浓缩，残留物经硅胶柱层析纯化得L001-3(80mg)，无色液体。

1.4化合物3-(2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪(L001-4)的制备

将3-(2-(三氟甲基)苄基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(60mg，157.3μmol)溶于DCM(2mL)中，溶解完全后边搅拌边加入HCl的1,4-二氧六环溶液(2mL，4M)，加完室温反应3h。TLC(纯EA加1滴氨水)表明反应完全。浓缩得L001-4(45mg)白色固体。

1.5化合物4-氯-5-(3-(2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)哒嗪-3(2H)-酮的制备

将3-(2-(三氟甲基)苄基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪(43mg，152.9μmol)加入单口瓶中，加入4,5-二氯哒嗪-3(2H)-酮(211.1mg，1.28mmol)、DIEA(59.2mg,458.6μmol)和DMF(2mL)，氮气保护下100℃反应过夜。TLC(DCM/MeOH＝10/1)显示反应完全。粗品经制备HPLC(H₂O，MeCN，0.05％TFA)制备分离，冻干后得到L001黄色固体(6.1mg，纯度97.71％)。

LC-MS:[M+H]⁺＝410.05。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.08(s,1H),7.97(s,1H),7.80(d,J＝7.9Hz,1H),7.65(t,J＝7.7Hz,1H),7.53(t,J＝7.6Hz,1H),7.33(d,J＝7.6Hz,1H),7.18(s,1H),4.96(s,2H),4.24(s,2H),4.12(d,J＝4.9Hz,2H),3.93(d,J＝5.0Hz,2H)。

实施例2化合物4-氯-5-(-3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)哒嗪-3(2H)-酮(L002)制备过程

2.1化合物咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-甲醛(L002-1)的制备

将氨基吡嗪(10.0g，0.11mol)溶于无水乙醇(100mL)中，加入2-溴丙二醛(15.8g，0.11mmol)，混合物在90℃下搅拌2h。反应结束后，冷却至室温，旋干溶剂得到黑色粘稠状物体，加入30mL氯化氢的1,4-二氧六环溶液(4mol/L)，25℃下搅拌12h，反应结束后，加入50mL水，用碳酸钠溶液调节pH值约为8，乙酸乙酯(50mL*4)萃取，饱和食盐水(30mL*2)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂后粗产品用乙酸乙酯重结晶三次后，得到黄色固体3.5g，收率22％。LC-MS[M+H]⁺＝148.0。

2.2化合物(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基)甲醇(L002-2)的制备

将2-溴-5-氟三氟甲苯(7.47g，30.6mmol)溶于四氢呋喃(50mL)，并取出2mL溶液滴加到氮气保护下含有镁屑(1.47g，61.2mmol)和碘(50mg，2mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中，用吹风机加热至溶液澄清透明后，将剩余2-溴-5-氟三氟甲苯的四氢呋喃溶液逐滴加入到反应体系。将混合物在70℃下搅拌1h，冷却至室温后。在-70℃氮气保护下，将混合物滴加到咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-甲醛(3.00g，20.4mmol)的四氢呋喃溶液中。将混合体系在-70℃下搅拌2小时。反应结束后，加入氯化铵溶液(50mL)，乙酸乙酯(50mL*3)萃取，饱和食盐水(30mL*2)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后，粗品经硅胶柱层析分离(DCM/MeOH＝100/1)，得到黄色固体3.20g，收率41％。LC-MS[M+H]⁺＝312.07。

2.3化合物(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)(5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基)甲醇(L002-3)的制备

将(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基)甲醇(1.10g，3.50mmol)溶于四氢呋喃(25mL)中。加入湿Pd/C(10％，400mg)，在氢气气氛下室温搅拌12h。反应结束后，过滤，滤液旋干溶剂得到白色固体1.00g，收率90％，LC-MS[M+H]⁺＝316.2。

2.4化合物3-((4-氟-2-(三氟甲基)苯基)(羟基)甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(L002-4)的制备

将(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)(5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基)甲醇(1.00g，3.16mmol)溶于四氢呋喃(10mL)/水(5mL)中，加入碳酸钠(1.00g，9.48mmol)，二碳酸二叔丁酯(0.83g，3.79mmol)，在25℃下搅拌2h。反应结束后，加入水(50mL)，乙酸乙酯(20mL*3)萃取，饱和食盐水(20mL*2)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂得到黄色固体1.00g，收率71％。LC-MS[M+H]⁺＝416.4。

2.5化合物3-(乙酰氧基(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(L002-5)的制备

将3-((4-氟-2-(三氟甲基)苯基)(羟基)甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(1.00g，2.40mmol)溶于吡啶(10mL)中，并加入乙酸酐(300mg，2.89mmol)，在25℃下搅拌2小时。反应结束后，旋干溶剂，得到浅黄色油状物体1.10g(90％产物)，LC-MS[M+H]⁺＝457.9。

2.6化合物3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(L002-6)的制备

将3-(乙酰氧基(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(1.10g，2.40mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，并加入湿钯/碳(10％，100mg)。通入氢气，25℃下搅拌2小时。反应结束后，过滤钯/碳，旋干溶剂得到白色固体800mg，收率85％。

LC-MS[M+H]⁺＝400.1。

2.7化合物3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪(L002-7)的制备

将3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(500mg，1.25mmol)溶于氯化氢的1,4二氧六环溶液(4mol/L，5mL)溶液，将混合物在25℃下搅拌2小时。反应结束后，旋干溶剂，得到浅黄色物体450mg，粗品。LC-MS[M+H]⁺＝300.1。

2.8化合物4-氯-5-(3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)哒嗪-3(2H)-酮(L002-8)的制备

将3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪盐酸盐(336mg，1.0mmol)溶于正丁醇(1.5mL)中，并加入4,5-二氯-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)哒嗪-3(2H)-酮(374mg，1.5mmol)和N，N二异丙基乙胺(388mg，3.0mmol)，氮气保护下，将混合物在120℃下搅拌3小时。反应结束后，旋干正丁醇溶剂，粗品经硅胶柱层析分离(DCM/MeOH＝30/1)，得到黄色固体200mg。收率为71％，LC-MS[M+H]⁺＝512.1。

2.9化合物4-氯-5-(3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)哒嗪-3(2H)-酮(L002)的制备

将4-氯-5-(3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)哒嗪-3(2H)-酮(200mg，0.39mmol)溶于氯化氢的1,4-二氧六环(2mL，4mol/L)溶液中，25℃下搅拌1小时。反应结束后，旋干溶剂，残留物溶于二氯甲烷(40mL)，饱和碳酸氢钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，粗品制备色谱纯化得到白色固体94.0mg，收率57％。LC-MS[M+H]⁺＝427.9。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.13(s,1H),7.99(s,1H),7.73(dd,J＝9.3,2.7Hz,1H),7.57(td,J＝8.5,2.7Hz,1H),7.44(dd,J＝8.6,5.5Hz,1H),7.22(s,1H),5.00(s,2H),4.23(s,2H),4.17(d,J＝5.1Hz,2H),3.96(d,J＝5.0Hz,2H).

实施例3化合物7-(5-氯-6-氧代-1,6-二氢哒嗪-4-基)-3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-N-甲基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-甲酰胺(L003)的制备

3.1化合物3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-2-碘-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(L003-1)的制备

将3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(L002-6，0.50g，1.25mmol)溶于二氯乙烷(6mL)中，加入N-碘代琥珀酰亚胺(0.42g，1.87mmol)。氮气保护下，将反应液在90℃下搅拌1小时。反应结束后，冷却至室温，加入硫代硫酸钠水溶液(10mL)搅拌五分钟后，二氯甲烷(10mL*3)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后，粗品经硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝100/1)，得到黄色油状物体200mg，收率27％。LC-MS[M+H]⁺＝525.8。

3.2化合物7-(叔丁氧羰基)-3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-2,7(8H)-2-羧酸甲酯(L003-2)的制备

将3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-2-碘-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(170mg，0.32mmol)，1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(24mg，0.032mmol)和三乙胺(162mg，1.6mmol)溶于甲醇/N,N-二甲基甲酰胺(3mL/3mL)中，氮气置换后，通入一氧化碳气体，70℃下搅拌16小时。将反应液过滤，滤液旋干。粗品经硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝40/1)，得到黄色固体产品126mg，收率85％。LC-MS[M+H]⁺＝458。

3.3化合物3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-2-(甲基氨基甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(L003-3)的制备

0℃下将甲胺(2M的THF溶液，0.75mL，1.5mmol)加入到三甲基铝(2M的己烷溶液，0.75mL，1.5mmol)中，反应0.25小时，然后将7-(叔丁氧羰基)-3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-2,7(8H)-2-羧酸甲酯(126mg，0.28mmol)加到上述反应液中，加毕，升至25℃，搅拌10小时。加入盐酸(1N)淬灭，旋干，粗品经硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝30/1)，得到黄色固体产品80mg，收率63％。

LC-MS[M+H]⁺＝457。

3.4化合物3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-N-甲基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-甲酰胺盐酸盐(L003-4)的制备

将3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-2-(甲基氨基甲酰)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(80mg，0.175mmol)溶于二氯甲烷(3mL)，加入氯化氢的1,4-二氧六环溶液(3mL，4M)，室温搅拌1h。反应液减压浓缩，得到黄色固体70mg。LC-MS[M+H]⁺＝357。

3.5化合物7-(5-氯-6-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)-3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-N-甲基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-甲酰胺(L003-5)的制备

将3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-N-甲基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-甲酰胺盐酸盐(70mg，0.175mmol)，4,5-二氯-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)哒嗪-3(2H)-酮(50mg，0.192mmol)和N,N-二异丙基乙胺(68mg，0.525mmol)溶于正丁醇(1mL)中，反应液在120℃下搅拌4小时，反应完毕，旋干，粗品经硅胶薄层制备板纯化(流动相为乙酸乙酯)，得到白色固体60mg，收率59％。LC-MS[M+H]⁺＝569。

3.6化合物7-(5-氯-6-氧代-1,6-二氢哒嗪-4-基)-3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-N-甲基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-甲酰胺(L003)的制备

将7-(5-氯-6-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)-3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-N-甲基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-甲酰胺(60mg，0.11mmol)溶于二氯甲烷(2mL)，加入氯化氢的1,4-二氧六环溶液(2mL，4M)，室温搅拌1h。将反应液旋干，粗品重新溶于甲醇/二氯甲烷溶液(10mL，1/15)，加固体碳酸氢钠，搅拌5分钟，过滤，滤液减压浓缩，粗品经制备板纯化(甲醇/二氯甲烷＝1/20)，得到白色固体30mg，收率59％。

LC-MS[M+H]⁺＝485。¹H NMR(400MHz,MeOD):δ7.94(s,1H),7.51(dd,J＝9.1,2.8Hz,1H),7.25(t,J＝8.5Hz,1H),6.96(dd,J＝8.6,5.2Hz,1H),4.75(s,2H),4.67(s,2H),3.87(d,J＝5.0Hz,2H),3.83(d,J＝5.0Hz,2H),2.87(s,3H)。

实施例4化合物4-氯-5-(3-((4-氟-2-(三氟甲基)苯基)氨基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)哒嗪-3(2H)-酮(L004)的制备

4.1化合物4-甲基-N-(吡嗪-2-基)苯磺酰胺(L004-1)的制备

室温下，将吡嗪-2-胺(6.4g,67.30mmol)加入吡啶(100ml)中，加入对甲苯磺酰氯(15.4g，8.07mmol)，室温搅拌18h。减压浓缩，用甲醇(30mL)洗涤，过滤，得到6.80g灰色固体4-甲基-N-(吡嗪-2-基)苯磺酰胺，收率36％。LC-MS[M+H]⁺＝249.9。

4.2化合物N-(氰甲基)-4-甲基-N-(吡嗪-2-基)苯磺酰胺(L004-2)的制备

将4-甲基-N-(吡嗪-2-基)苯磺酰胺(6.8g，27.20mmol)加到DMF(30mL)中，加入氢化钠(1.6g，40.80mmol，60％)，在室温下搅拌30分钟，然后添加溴乙腈(4.9g，40.80mmol)继续搅拌30分钟后加热到60℃，反应3h。待恢复到室温，继续搅拌14小时。将反应液倒入到饱和氯化铵(200mL)，用乙酸乙酯(3*50mL)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩。粗品经硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯)，得到棕色固体N-(氰甲基)-4-甲基-N-(吡嗪-2-基)苯磺酰胺(3.5g，收率45％)。LC-MS[M+H]⁺＝288.9。

4.3化合物咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-胺(L004-3)的制备

将N-(氰甲基)-4-甲基-N-(吡嗪-2-基)苯磺酰胺(1.8g，6.20mmol)加入到三氟乙酸(9.0mL)和水(1.0mL)的混合溶剂中，加热到40℃，反应2.5小时。减压浓缩，将浓缩后的固体加入到饱和醋酸钠(40mL)，搅拌1小时，乙酸乙酯(30mL*6)萃取，合并有机相，减压旋干，粗品经硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝10：1)，得到0.5g黄色固体咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-胺，收率60％。LC-MS[M+H]⁺＝315.1。

4.4化合物N-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-胺(L004-4)的制备

将咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-胺(400mg，2.98mmol)，1-溴-4-氟-2-(三氟甲基)苯(1.45g，5.96mmol)，2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(142mg，0.30mmol)和Cs₂CO₃(1.94g，5.96mmol)加入到1,4-二氧六环(20mL)中，氮气保护下，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(273mg，0.30mmol)，加热至120℃，搅拌15小时。降至室温，加入30mL水淬灭，乙酸乙酯(20mL*3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(20mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯)纯化，得到250mg棕色固体N-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-胺，收率23％。LC-MS[M+H]⁺＝296.9。

4.5化合物N-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-胺(L004-5)的制备

将N-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-胺(150mg，0.50mmol)溶于t-BuOH(40mL)中，加入Pd/C(10％，50mg)，在氢气氛围下搅拌72h，过滤，浓缩滤液，得到150mg棕色固体N-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-胺，粗品。LC-MS[M+H]⁺＝300.9

4.6化合物4-氯-5-(3-((4-氟-2-(三氟甲基)苯基)氨基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)哒嗪-3(2H)-酮(L004-6)的制备

将N-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-胺(140mg，0.46mmol)和4,5-二氯-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)哒嗪-3(2H)-酮(172mg，0.68mmol)溶解在n-BuOH(0.7mL)中，加入DIEA(178mg，1.40mmol)，加热至120℃，反应3h。冷却到室温，减压浓缩，残留物通过硅胶薄层制备板纯化(乙酸乙酯)，得到50mg棕色固体4-氯-5-(3-((4-氟-2-(三氟甲基)苯基)氨基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)哒嗪-3(2H)-酮，收率21％。LC-MS[M+H]⁺＝512.8。

4.7化合物4-氯-5-(3-((4-氟-2-(三氟甲基)苯基)氨基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)哒嗪-3(2H)-酮(L004)的制备

在室温下，将4-氯-5-(3-((4-氟-2-(三氟甲基)苯基)氨基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)哒嗪-3(2H)-酮(50mg，0.06mmol)加入到DCM(3mL)，加入HCl的1,4-二氧六环溶液(4M，1N)，搅拌3h。减压浓缩，残留物溶于二氯甲烷(30mL)，用饱和碳酸氢钠(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗品经制备色谱纯化，得到12.5mg白色固体4-氯-5-(3-((4-氟-2-(三氟甲基)苯基)氨基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)哒嗪-3(2H)-酮，收率47％。

LC-MS[M+H]⁺＝428.8。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)13.04(s,1H),7.96(s,1H),7.42(dd,J＝8.9,2.8Hz,1H),7.29(d,J＝10.8Hz,2H),6.83(s,1H),6.60(dd,J＝9.1,4.6Hz,1H),4.65(s,2H),3.78(d,J＝5.4Hz,4H)。

实施例5化合物5-(2-溴-3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氯哒嗪-3(2H)-酮(L005)的制备

5.1化合物2-溴-3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(L005-1)的制备

将3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(L002-6)(800mg，1.92mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，氮气保护，在-70℃分批加入N-溴琥珀酰亚胺(513mg，2.88mmol)，将混合物在-70℃下搅拌1小时。反应结束后，加入水(20mL)淬灭，乙酸乙酯(20mL*4)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mL*2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗品经硅胶柱层析分离(DCM/EA＝8/1)，得到黄色固体300mg。收率为32％，LC-MS[M+H]⁺＝478.5。

5.2化合物2-溴-3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪(L005-2)盐酸盐的制备

将2-溴-3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(300mg，0.63mmol)溶于HCl的1,4-二氧六环溶液(3mL，4mol/L)，25℃下搅拌2小时。反应结束后，减压浓缩，得到浅黄色固体粗产品260mg，粗品。LC-MS[M+H]⁺＝377.8。

5.3化合物5-(2-溴-3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氯-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)哒嗪-3(2H)-酮(L005-3)的制备

将2-溴-3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪盐酸盐(207mg，0.50mmol)溶于正丁醇(1mL)中，并加入4,5-二氯-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)哒嗪-3(2H)-酮(187mg，0.70mmol)和N，N二异丙基乙胺(256mg，2.00mmol)，氮气保护，120℃下搅拌3小时。反应结束后，减压浓缩。粗品经硅胶柱层析分离(DCM/MeOH＝30/1)，得到黄色固体200mg，收率为67％，LC-MS[M+H]⁺＝590.4。

5.4化合物5-(2-溴-3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氯哒嗪-3(2H)-酮(L005)的制备

将5-(2-溴-3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氯-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)哒嗪-3(2H)-酮(150mg，0.25mmol)溶于HCl的1,4-二氧六环溶液(2mL，4mol/L)，25℃下搅拌1小时。减压浓缩后，加入饱和碳酸氢钠溶液(25mL)，乙酸乙酯(20mL*3)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗品经乙酸乙酯重结晶2次，得到白色固体33.8mg，收率25％。LC-MS[M+H]⁺＝505.7。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.05(s,1H),7.94(s,1H),7.68(dd,J＝9.2,2.7Hz,1H),7.48(td,J＝8.4,2.6Hz,1H),7.01(dd,J＝8.7,5.5Hz,1H),4.66(s,2H),4.10(s,2H),3.86–3.77(m,4H)。

实施例6化合物4-氯-5-(3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6,8,9-四氢-7H-咪唑并[1,2-d][1,4]重氮基庚英-7-基)哒嗪-3(2H)-酮(L006)的制备

6.1化合物5-甲氧基-2,3,6,7-四氢-1H-1,4-二氮杂卓-1-羧酸叔丁酯(L006-1)的制备

将1-Boc-1,4-二氮杂-5-环庚酮(500mg，2.32mmol)溶于二氯甲烷(5mL)，在0℃下加入三甲基氧鎓四氟硼酸(377mg，2.552mmol)，在氮气氛围下，将反应液在25℃下搅拌14h。反应结束后，加入饱和碳酸氢钠溶液(15mL)，乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相，用水(20mL×2)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥，有机相过滤，滤液浓缩后，得到粗产品400mg，收率67.6％，无需纯化，直接用于下一步反应。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ3.60(s,3H),3.53-3.49(m,6H),2.57-2.56(m,2H),1.46(s,9H)。

6.2化合物(3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)丙-2-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯(L006-2)的制备

将2-溴-5-氟三氟甲苯(2.00g，8.2mmol)溶于1,4-二氧六环(20mL)，加入N-Boc-氨基丙炔(4.66g，32.8mmol)、碘化亚铜(15mg，0.082mmol)、二异丙胺(960mg，9.51mmol)、双(三苯基膦)二氯化钯(230mg，0.33mmol)和10％的三叔丁基膦的正己烷溶液(960mg，0.48mmol)。在氮气氛围下，在45℃下搅拌15h。反应结束后，旋干溶剂，粗品经硅胶柱层析分离(PE/EA＝10/1)，得到浅黄色固体1.2g，含杂质N-Boc-氨基丙炔(可在下一步除去)，纯度约30％，收率14.6％。LC-MS[M+H]⁺＝261.9。

6.3化合物3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)丙-2-炔-1-胺(L006-3)的制备

将(3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)丙-2-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯(1.2g，1.1mmol)溶于二氯甲烷(8mL)中，在0℃下加入HCl的1,4-二氧六环溶液(4M，4.5mL)，在氮气保护下，25℃下搅拌15h。反应结束后，旋干溶剂，得到粗产品，向粗产品中加入饱和碳酸氢钠溶液(10mL)，用乙酸乙酯(10mL×2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，有机相过滤，滤液浓缩后，得到浅黄色液体0.2g，收率72.7％。LC-MS[M+H]⁺＝218.0。

6.4化合物3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6,8,9-四氢-7H-咪唑并[1,2-d][1,4]二氮杂卓-7-羧酸叔丁酯(L006-4)的制备

将3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)丙-2-炔-1-胺(200mg，0.92mmol)溶于无水甲醇(4mL)，加入5-甲氧基-2,3,6,7-四氢-1H-1,4-二氮杂卓-1-羧酸叔丁酯(316mg，1.38mmol)，在氮气保护下，将反应液在66℃下搅拌5h。反应结束后，旋干溶剂，粗品经硅胶柱层析分离(DCM/MeOH＝50/1)，得到浅黄色油状物200mg，收率44.5％。LC-MS[M+H]⁺＝414.0。

6.5化合物3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-6,7,8,9-四氢-5H-咪唑并[1,2-d][1,4]二氮杂卓(L006-5)的制备

将3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6,8,9-四氢-7H-咪唑并[1,2-d][1,4]二氮杂卓-7-羧酸叔丁酯(200mg，0.48mmol)溶于DCM(3mL)，在0℃下加入HCl的1,4-二氧六环溶液(4M，2mL)，在氮气保护下，将混合物在25℃下搅拌15h。减压浓缩，所得200mg粗品无需纯化，直接用于下一步反应。

LC-MS[M+H]⁺＝314.0。

6.6化合物4-氯-5-(3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6,8,9-四氢-7H-咪唑并[1,2-d][1,4]重氮基庚英-7-基)-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)哒嗪-3(2H)-酮(L006-6)的制备

将粗品3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-6,7,8,9-四氢-5H-咪唑并[1,2-d][1,4]二氮杂卓(200mg，0.48mmol)溶于正丁醇(0.8mL)加入4,5-二氯-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)哒嗪-3(2H)-酮(142mg，0.57mmol)和N,N-二异丙基乙胺(186mg，1.44mmol)。在氮气保护下，将反应液在120℃下搅拌6h。反应结束后，旋干溶剂，粗品经制备TLC分离(DCM/MeOH＝20/1)，得到黄色油状物75mg，收率31.8％。LC-MS[M+H]⁺＝525.8。

6.7化合物4-氯-5-(3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6,8,9-四氢-7H-咪唑并[1,2-d][1,4]重氮基庚英-7-基)哒嗪-3(2H)-酮(L006)的制备

将4-氯-5-(3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6,8,9-四氢-7H-咪唑并[1,2-d][1,4]重氮基庚英-7-基)-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)哒嗪-3(2H)-酮(75mg，0.15mmol)溶于二氯甲烷(2mL)，在0℃下加入HCl的1,4-二氧六环溶液(4M，1mL)，在氮气保护下，将混合物在25℃下搅拌4h。旋干溶剂，用少量二氯甲烷和甲醇溶解粗品，加入碳酸氢钠固体中和，过滤，滤液减压浓缩，粗品经制备TLC分离(DCM/MeOH＝15/1)，得到浅黄色固体25.5mg，收率37.9％。LC-MS[M+H]⁺＝441.9。

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.89(s,1H),7.52(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.36-7.31(m,1H),7.21(dd,J＝8.8,5.2Hz,1H),6.53(s,1H),4.16-4.13(m,4H),3.70-3.65(m,4H),3.28-3.25(m,2H)。

实施例7～12

参照实施例6的制备方法，制备下述化合物：

实施例13化合物4-氯-5-(3-(5-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)哒嗪-3(2H)-酮(L013)的制备

13.1化合物L013-01的制备

将化合物L013-a(2.5g，10.2mmol)溶于1,4-二氧六环(25mL)中，加入化合物L013-b(4.66g，32.8mmol)，二(三苯基膦)二氯化钯(230mg，0.328mmol)，碘化亚铜(15.6mg，0.082mmol)，三乙胺(962mg，9.512mmol)和三叔丁基膦(10％，1.20g，0.05mmol)。将混合物在氮气保护下，45℃下搅拌12小时，反应结束后，加入水(20mL)，乙酸乙酯(20mL*3)萃取，饱和食盐水(10mL*2)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，粗品经硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得到1.90g化合物L013-01。LC-MS[M-55]⁺＝262.1。

13.2化合物L013-02的制备

将化合物L013-01(1.9 0g，6.2mmol)溶于氯化氢的1,4-二氧六环溶液中(10mL，4mol/L)。将混合物在25℃下搅拌1小时。反应结束后，用碳酸钠水溶液(20mL)调节pH约为8，乙酸乙酯(20mL*3)萃取，饱和食盐水(10mL*2)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到450mg化合物L013-02。LC-MS[M+H]⁺＝218.0。

13.3化合物L013-03的制备

将化合物L013-02(450mg，2.06mmol)溶于无水甲醇(4.5mL)中，加入L013-c(567mg，2.48mmol)，将混合物氮气保护下，70℃搅拌2小时。反应结束后，浓缩，粗品经硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝100/1)，得到160mg化合物L013-03。LC-MS[M+H]⁺＝399.8。

13.4化合物L013-04的制备

将化合物L013-03(160mg，0.324mmol)溶于氯化氢的1,4-二氧六环溶液(4mol/L，2mL)。将混合物在25℃下搅拌1h，反应结束后，用碳酸钠水溶液(10mL)调节pH约为8，乙酸乙酯(20mL*3)萃取，饱和食盐水(10mL*2)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到化合物L013-04 100mg。LC-MS[M+H]⁺＝299.7。

13.5化合物L013-05的制备

将化合物L013-04(100mg，0.33mmol)溶于正丁醇(0.5mL)中，加入N，N-二异丙基乙胺(129mg，0.1mmol)和化合物L013-d(100mg，0.40mmol l)。将混合物在氮气保护下，120℃下搅拌3小时。反应结束后，浓缩，粗品经硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝30/1)，得到60mg的化合物L013-05。LC-MS[M+H]⁺＝512.1。

13.6化合物4-氯-5-(3-(5-氟-2-(三氟甲基)苯甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)哒嗪-3(2H)-酮(L013)的制备

将化合物L013-05(40mg，0.078mmol)溶于氯化氢的1,4-二氧六环溶液(4mmol/L，1mL)中。将混合物在25℃下搅拌1小时。反应结束后，旋干溶剂，粗产品通过高效液相色谱法制备纯化(乙腈-水(0.1％甲酸))得到15.8mg的化合物L013。LC-MS[M+H]⁺＝427.7。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.95(s,1H),7.85(dd,J＝8.8,5.6Hz,1H),7.34(t,J＝6.8Hz,1H),7.05(d,J＝9.5Hz,1H),6.54(s,1H),4.64(s,2H),4.12(s,2H),3.91(d,J＝5.1Hz,2H),3.83(d,J＝5.0Hz,2H)。

实施例14化合物4-((7-(5-氯-6-羰基-1,6-二氢哒嗪-4-基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯甲腈(L014)的制备

14.1化合物L014-01的制备

将化合物L014-a(3.0g，12.0mmol)溶于1,4二氧六环(30mL)中，加入化合物L013-b(6.82g，48mmol)，二(三苯基膦)二氯化钯(340mg，0.04mmol)、碘化亚铜(20mg，0.01mmol)、三乙胺(1.41g，13.9mmol)和三叔丁基膦(10％)(1.40g，0.06mmol)。将混合物在氮气保护下，45℃下搅拌12小时，反应结束后，加入水(20mL)，乙酸乙酯(20mL*3)萃取，饱和食盐水(10mL*2)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，粗品经硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯＝10：1)，得到4.0g的化合物L014-01。

LC-MS[M-55]⁺＝269。

14.2化合物L014-02的制备

将化合物L014-01(1.9 0g,6.2mmol)溶于氯化氢的1,4-二氧六环溶液中(20mL，4mol/L)。将混合物在25℃下搅拌1小时。反应结束后，用碳酸钠水溶液(20mL)调节pH约为8，乙酸乙酯(20mL*3)萃取，饱和食盐水(10mL*2)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得1.0g的化合物L014-02。LC-MS[M+H]⁺＝225.0。

14.3化合物L014-03的制备

将化合物L014-02(1.0g,4.4mmol)溶于无水甲醇(10mL)中，加入化合物L013-c(1.21g,5.28mmol)，将混合物在氮气保护下，70℃搅拌2小时。反应结束后，浓缩，粗品经硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝100/1)，得到500mg的化合物L014-03。LC-MS[M+H]⁺＝407.2。

14.4化合物L014-04的制备

将化合物L014-03(300mg,0.735mmol)溶于盐酸的1-4二氧六环溶液(4mol/L，3mL)。将混合物在25℃下搅拌1小时。反应结束后，用碳酸钠水溶液(20mL)调节pH约为8，乙酸乙酯(30mL*3)萃取，饱和食盐水(10mL*2)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到200mg的化合物L014-04。LC-MS[M+H]⁺＝306.8。

14.5化合物L014-05的制备

将化合物L014-04(100mg,0.325mmol)溶于正丁醇(0.5mL)中，加入N，N-二异丙基乙胺(126mg，0.976mmol)和化合物L13-d(97mg,0.390mmol)。将混合物在氮气保护下，120℃下搅拌3小时。反应结束后，浓缩，粗品经硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝30/1)，得到50mg的化合物L014-05。LC-MS[M+H]⁺＝519.2。

14.6化合物4-((7-(5-氯-6-羰基-1,6-二氢哒嗪-4-基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯甲腈(L014)的制备

将化合物L014-05(50mg，0.10mmol)溶于氯化氢的1,4-二氧六环溶液(4mol/L，1mL)中。将混合物在25℃下搅拌1小时。反应结束后，用碳酸钠水溶液(10mL)调节pH约为8，乙酸乙酯(10mL*3)萃取，饱和食盐水(10mL*2)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后，用乙酸乙酯洗涤粗产品，过滤后得到22mg的化合物L014。LC-MS[M+H]⁺＝435.1。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.95(s,1H),7.48(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H),7.27(dd,J＝8.6,6.3Hz,1H),7.20(td,J＝8.5,2.6Hz,1H),6.52(s,1H),4.62(s,2H),4.01(s,2H),3.96(t,J＝5.2Hz,2H),3.82(t,J＝5.2Hz,2H)。

实施例15化合物4-氯-5-(3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲酰)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)哒嗪-3(2H)-酮(L015)的制备

15.1化合物L015-01的制备

将化合物L015-a(10.0g，0.11mol)溶于无水乙醇(100mL)中，加入化合物L015-b(15.8g，0.11mmol)，混合物在90℃下搅拌2小时。反应结束后，冷却至室温，旋干溶剂得到黑色粘稠状物，加入30mL氯化氢的1，4-二氧六环溶液(4mol/L)，25℃下搅拌12h，反应结束后，加入50mL水，用碳酸钠溶液调节pH值约为8，乙酸乙酯(50mL*4)萃取，饱和食盐水(30mL*2)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂后用乙酸乙酯重结晶三次后，得到3.5g的化合物L015-01。LC-MS[M+H]⁺＝148.0。

15.2化合物L015-02的制备

将化合物L015-c(7.47g，30.6mmol)溶于四氢呋喃(50mL)，并取出2mL溶液滴加到氮气保护下含有镁屑(1.47g，61.2mmol)和碘(50mg，2mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中，用吹风机加热至溶液澄清透明后，将剩余化合物L015-c的四氢呋喃溶液逐滴加入到反应体系。将混合物在70℃下搅拌1小时，冷却至室温后。在-70℃氮气保护下，将混合物再滴加到化合物L015-01(3.00g，20.4mmol)的四氢呋喃溶液中。将混合体系在-70℃下搅拌2小时。反应结束后，加入氯化铵溶液(50mL)，乙酸乙酯(50mL*3)萃取，饱和食盐水(30mL*2)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后，粗品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝100/1)，得到3.20g的化合物L015-02。LC-MS[M+H]⁺＝312.07。

15.3化合物L015-03的制备

将化合物L015-02(1.10g，3.50mmol)溶于四氢呋喃(25mL)中。加入湿Pd/C(10％，400mg)，在氢气气氛下室温搅拌12小时。反应结束后，过滤，旋干溶剂得到1.00g的化合物L015-03。LC-MS[M+H]⁺＝316.2。

15.4化合物L015-04的制备

将化合物L015-03(200mg，0.63mmol)溶于无水丁醇(1mL)中，加入L013-d(189mg，0.76mmol)和N,N-二异丙基乙胺(245mg，1.90mmol)，氮气保护下，将混合物在120℃下搅拌2小时。反应液浓缩，粗品经硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝100/1)，得到160mg的化合物L015-04。LC-MS[M+H]⁺＝528.2。

15.5化合物L015-05的制备

将L015-04(200mg，0.297mmol)溶于无水二氯甲烷(20mL)中，加入戴斯-马丁氧化剂(630mg，1.485mmol)。氮气保护下，将混合物在40℃下搅拌8小时。反应结束后，加入氢氧化钠溶液调节pH值约为9，二氯甲烷(10mL*3)萃取，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗品经硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝100/1)，得到150mg的化合物L015-05。LC-MS[M+H]⁺＝526.2。

15.6化合物4-氯-5-(3-(4-氟-2-(三氟甲基)苯甲酰)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)哒嗪-3(2H)-酮(L015)的制备

将L015-05(150mg,0.28mmol)溶于氯化氢的1,4-二氧六环溶液(2mL，4mol/L)中，将混合物在25℃下搅拌1小时。旋干溶剂后得到粗产品，经高压液相制备色谱纯化得到21.6mg的化合物L015。LC-MS[M+H]⁺＝441.8。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.08(s,1H),8.02(s,1H),7.85(dd,J＝9.3,2.5Hz,1H),7.79(dd,J＝8.5,5.5Hz,1H),7.68(td,J＝8.5,2.5Hz,1H),7.35(s,1H),4.83(s,2H),4.52(t,J＝5.2Hz,2H),3.91(t,J＝5.3Hz,2H)。

实施例16化合物4-氯-5-(3-(2-(三氟甲基)苯甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)哒嗪-3(2H)-酮(L016)的制备

16.1化合物L016-01的制备

将L016-a(2.55g，11.3mmol)溶于无水四氢呋喃(40ml)中，氮气置换3次，室温下向反应加入异丙基溴化镁(2.8M，8.09ml，22.65mmol)反应2小时。再向反应加入L015-01(2.0g，13.6mmol)并升温60℃反应2小时，反应完毕，反应液加饱和氯化钠水溶液溶液(20mL)淬灭，再用乙酸乙酯(30mL*3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，再用无水硫酸钠干燥后，过滤，滤液减压浓缩，粗品经硅胶层析柱分离纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)，得到650mg的化合物L016-01。LC-MS[M+H]⁺＝294.0。

16.2化合物L016-02的制备

将化合物L016-01(600mg,2.05mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中。再加入钯/碳(10％，60mg)，氢气氛围下于40℃下反应12小时，反应完毕。反应液过滤，滤液浓缩，得540mg的化合物L016-02。LC-MS[M+H]⁺＝298.0。

16.3化合物L016-03的制备

将L016-02(500mg,1.68mmol)，L016-b(915.05mg，2.52mmol)，N,N-二异丙基乙基胺(652mg，5.05mol)溶于二甲基亚砜(10ml)中，升温60℃反应2小时，反应完毕。反应液加水(20mL)淬灭，乙酸乙酯(30mL*3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤，滤液减压浓缩，粗品经硅胶层析柱(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)纯化，得到510mg的化合物L016-03。LC-MS[M+H]⁺＝510.1。

16.4化合物L016-04的制备

将L016-03(500mg,0.98mmol)，溶于二氯甲烷(10ml)中。再分批加入戴斯马丁试剂(831.8mg,1.96mmol)，室温搅拌1小时。反应完毕，反应液过滤，滤液减压浓缩，粗品经硅胶层析柱(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)纯化，得到210mg的化合物L016-04。LC-MS[M+H]⁺＝508.0。

16.5化合物4-氯-5-(3-(2-(三氟甲基)苯甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)哒嗪-3(2H)-酮(L016)的制备

将L016-04(200mg,0.39mmol)溶于氯化氢的1,4-二氧六环溶液(2mL，4mol/L)中，混合物在25℃下搅拌1小时。反应完毕，旋干溶剂后得到粗产品，经高压液相制备色谱纯化得到16.1mg的化合物L016。

LC-MS[M+H]⁺＝424.0；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.05(s,1H),8.00(s,1H),7.90–7.86(m,1H),7.82–7.74(m,2H),7.67(d,J＝7.2Hz,1H),7.25(s,1H),4.81(s,2H),4.51(t,J＝5.6Hz,2H),3.92–3.88(m,2H)。

实施例17化合物4-氯-5-(3-(4-氯-2-(三氟甲基)苯甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)哒嗪-3(2H)-酮(L017)的制备

17.1化合物L017-01的制备

称取化合物L017-a(4.36g,16.80mmol)到无水四氢呋喃中(80mL)，置换氮气三次，在室温的条件下缓慢加入异丙基溴化镁(2.8M，5mL,14.00mmol)，滴加完毕在室温条件下反应2小时。再将L015-01(1.85g，12.60mmol)固体加入到反应体系中，升温到40℃，并在该温度下反应4小时，反应结束。向反应中缓慢加入饱和氯化铵水溶液(100mL)淬灭反应，用二氯甲烷(100mL*3)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤(50mL*3)，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后，粗品硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化，得到2.5g的化合物L017-01。LC-MS[M+H]⁺＝328.0。

17.2化合物L017-02的制备

称取化合物L017-01(2.4g,7.32mmol)溶入四氢呋喃(30mL)，再加入钯/碳(10％,1.0g)并置换氢气三次，在40℃反应16小时。反应完毕，反应液过滤，滤液浓缩干，粗品用硅胶柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化，得到1.0g的化合物L017-02。LC-MS[M+H]⁺＝332.0。

17.3化合物L017-03的制备

称取化合物L017-02(0.5g，1.06mmol)和化合物L016-b(0.54g，1.48mmol)溶于二甲基亚砜(5.0mL)，再加入二异丙基乙胺(0.41g，3.17mmol)，80℃搅拌反应16小时，反应完毕。将反应液降至30℃后加入乙酸乙酯(30mL)和水(20mL)，搅拌后分液，水相用乙酸乙酯(20mL*2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品用硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)，得到0.4g化合物F017-03。

LC-MS[M+H]⁺＝544.0。

17.4化合物L017-04的制备

称取化合物L017-03(0.4g,734.81mmol)溶于二氯甲烷(8.0mL)中，再加入戴斯-马丁试剂(0.94g，2.2mol)，室温搅拌16小时。反应完毕。反应液过滤，滤液浓缩，粗品用硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)。得到0.35g的化合物L017-04。

LC-MS[M+H]⁺＝542.0。

17.5化合物4-氯-5-(3-(4-氯-2-(三氟甲基)苯甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)哒嗪-3(2H)-酮(L017)的制备

称取L017-04(0.35g,645.35umol)到反应瓶中，加入氯化氢的1,4-二氧六环溶液(4M，4mL)并在室温条件下反应3小时。反应完毕。反应液浓缩，粗品经高压液相制备色谱纯化得到42.8mg的化合物L017。

LC-MS[M+H]⁺＝458.0；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.06(s,1H),8.01(d,J＝3.4Hz,2H),7.90(dd,J＝8.2,1.8Hz,1H),7.74(d,J＝8.4Hz,1H),7.37(s,1H),4.83(s,2H),4.51(t,J＝5.2Hz,2H),3.91(t,J＝5.2Hz,2H),2.07(s,1H)。

实施例18化合物4-氯-5-(3-(5-氟-2-(三氟甲基)苯甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)哒嗪-3(2H)-酮(L018A)和化合物4-氯-5-(3-(2-氟-5-(三氟甲基)苯甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)哒嗪-3(2H)-酮(L018B)的制备

合成路线：

18.1化合物L018-01A&L018-01B的制备

将化合物L013-a(1g,4.11mmol)溶于四氢呋喃(15mL)中，氮气置换后，降温至-78℃，加入2.5M正丁基锂的己烷溶液(1.8mL,4.52mmol),-78℃反应一小时。往反应体系中加入化合物L015-01(605mg,4.11mmol)，加完后自然升至室温反应过夜，反应完毕后。将反应液慢慢加入水(80mL)稀释后，再用乙酸乙酯(30mL*3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤，滤液减压浓缩得到粗品。经硅胶层析柱分离(二氯甲烷/甲醇＝50/1～15/1)纯化，得到化合物L018-01A&L018-01B(600mg)。LC-MS[M+H]⁺＝312.0。

18.2化合物L018-02A&L018-02B的制备

将化合物L018-01A&L018-01B(270mg,0.87mmol)溶于甲醇(20ml)，加入无水钯/碳(10％)，氢气置换后，反应在室温条件下搅拌3小时,反应完毕。将反应液过滤，再加甲醇(3mL)冲洗三次，滤液减压浓缩得到产品，不需要纯化，可直接进行下一步。得到化合物L018-02A&L018-02B(230mg)。LC-MS[M+H]⁺＝316.0。

18.3 L018-03A&L018-03B的制备

将L018-02A&L018-02B(230mg,0.73mmol)和L016-b(291mg,0.80mmol)溶于二甲基亚砜(6ml)中，再加入N,N-二异丙基乙胺(283mg,2.19mmol)，60℃反应过夜，反应完毕。将反应液倒入水(50mL)中，再用乙酸乙酯(20mL*3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤，滤液减压浓缩得到粗品。经硅胶层析柱分离(DCM/MeOH＝50/1～20/1)纯化，得到L018-03A&L018-03B(270mg)。

LC-MS[M+H]⁺＝528.0。

18.4化合物L018-04A&L018-04B的制备

将L018-03A&L018-03B(270mg,0.51mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，0℃下分批加入戴斯-马丁氧化剂(434mg,1.02mmol)，升至室温反应30分钟。往反应液中加入饱和硫代硫酸钠水溶液(30mL),再用二氯甲烷(20mL*3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤，滤液减压浓缩得到粗品。经硅胶层析柱(二氯甲烷/甲醇＝50/1～20/1)纯化，得到L018-04A&L018-04B(230mg)。LC-MS[M+H]⁺＝526.0。

18.5化合物4-氯-5-(3-(5-氟-2-(三氟甲基)苯甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)哒嗪-3(2H)-酮(L018A)和化合物4-氯-5-(3-(2-氟-5-(三氟甲基)苯甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)哒嗪-3(2H)-酮(L018B)的制备

将化合物L018-04A&L018-04B(230mg,0.44mmol)置于25mL单口瓶中，加入氯化氢的1,4-二氧六环溶液(4M，5mL)，室温条件下搅拌30分钟，反应完毕。将反应液减压浓缩得到粗品，粗品用水/乙腈体系经高压液相制备色谱层析柱分离纯化，冻干后得到化合物L018A(26.8mg)和化合物L018B(37.0mg)。

L018A:LC-MS[M+H]⁺＝442.0；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.07(s,1H),8.01(s,1H),7.98(s,1H),7.62(t,J＝8.4Hz,2H),7.41(s,1H),4.83(s,2H),4.51(t,J＝5.2Hz,2H),3.91(t,J＝5.2Hz,2H)。

L018B:LC-MS[M+H]⁺＝442.0 ¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.07(s,1H),8.10-7.90(m,3H),7.64(t,J＝9.2Hz,1H),7.55(s,1H),4.83(s,2H),4.52(t,J＝4.8Hz,2H),3.91(t,J＝4.8Hz,2H)。

实施例19化合物4-(7-(5-氯-6-氧代-1,6-二氢哒嗪-4-基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-羰基)-3-(三氟甲基)苯甲腈(L019)的制备

合成路线：

19.1化合物L019-01的制备

将化合物L014-03(2g，4.92mmol)、醋酸(295.52mg，4.92mmol)和氯化亚铁四水合物(97.83mg，0.492mmol)溶于二甲基亚砜(20mL)中，氮气置换3次，反应在100℃反应24小时，反应完毕，反应液加水(20mL)淬灭，乙酸乙酯(30mL*3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤，滤液减压浓缩,粗品经硅胶层析柱(石油醚/乙酸乙酯＝100/5)纯化，得到化合物L019-01(600mg)。

LC-MS＝421.10[M+H]⁺。

19.2化合物L019-02的制备

将L019-01(600mg，1.43mmol)溶于氯化氢的1,4-二氧六环溶液(4M，10mL)中，室温条件下反应2小时。反应完毕，过滤，得到滤饼为化合物L019-02(500mg)。LC-MS＝321.05[M+1]⁺。

19.3化合物L019-03的制备

将化合物L019-02(250mg,0.78mmol)、L013-d(233mg,0.94mmol)和N,N-二异丙基乙胺(504mg,3.9mmol)溶于二甲基亚砜(3mL)中。反应在80℃反应4小时，反应完毕。反应液加水(20mL)淬灭，乙酸乙酯(30mL*3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，过滤，滤液减压浓缩,粗品经硅胶层析柱(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化得到化合物L019-03(200mg)。LC-MS＝533.10[M+H]⁺。

19.4化合物4-(7-(5-氯-6-氧代-1,6-二氢哒嗪-4-基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-羰基)-3-(三氟甲基)苯甲腈(L019)的制备

将L019-03(200mg,0.37mmol)溶于氯化氢的1,4-二氧六环溶液(4M，10mL)中，室温条件下反应2小时，反应完毕。旋干溶剂后得到粗产品，再经高压液相制备色谱纯化得到化合物L019。LC-MS＝449.00[M+H]⁺；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.06(s,1H),8.50(s,1H),8.31(d,J＝8.0Hz,1H),8.01(s,1H),7.91(d,J＝8.0Hz,1H),7.39(s,1H),4.83(s,2H),4.52(t,J＝5.2Hz,2H),3.92(t,J＝5.2Hz,2H)。

对比例

化合物C001和C002为专利WO2019055966A2中公开的作为TRPC5抑制剂的化合物。

表10

效果实施例1生物学活性测试试验

TRPC5是一类非选择性阳离子通道，对钙离子具有通透性，因此本实验选用TRPC5激动剂Englerin A(EA)、TRPC5抑制剂Pico145作为阳性对照，使用Fluo-4 AM荧光染料检测化合物对TRPC5-HEK 293细胞内Ca²⁺的方法来间接反映化合物对TRPC5通道的影响。

1.细胞培养

1.1 TRPC5-HEK 293细胞复苏

复苏液：100％DMEM高糖

选择培养基：DMEM高糖+10％FBS+1％P/S+1％HEPES+稻瘟散(Blasticidin,5μg/mL)+潮霉素(Hygromycine,50μg/mL)

诱导培养基：DMEM高糖+10％FBS+1％P/S+1％HEPES+多西环素(Doxycycline,1μg/mL)

复苏过程：液氮罐中取出，于冰盒中转移至水浴锅，划圈溶解至含一小块冰时转移冻存液至复苏液中，1000rpm离心5min，弃去上清，转移至选择培养基中，CO₂培养箱中(5％CO₂，95％湿度，37℃)扩培。

1.2 TRPC5-HEK 293细胞接板

实时荧光实验前14h，用PBS清洗细胞，用含EDTA的胰蛋白酶(TE,TRYPSIN-EDTA)消化细胞，诱导培养基稀释细胞至20万细胞/mL，接至已包被多聚赖氨酸(PDL,Poly-D-Lysine)(母液10mg/mL，终浓度10μg/mL)的96孔黑壁底透板中，100μL/孔即2万细胞/孔。

2.缓冲液配制

500mL TRPC5钙信号检测用外液：4.0908g NaCl,0.1864g KCl,0.111CaCl₂,0.0476g MgCl₂,0.9g Glucose(葡萄糖),1.1915g HEPES(4-羟乙基哌嗪乙磺酸)。

钙荧光染料：TRPC5钙信号检测用外液含终浓度4μM Fluo-4(含0.5％BSA)

3.化合物配制

激动剂：Englerin A(EA)

激动剂浓度：由于EA激活TRPC5的EC₅₀大约在0.35nM，使用0.3nM EA

阳性抑制剂：Pico145(HC608)

阳性抑制剂浓度：100nM

待测化合物：化合物1-6和化合物1

待测化合物浓度：常规配制，配制为8倍于检测终浓度的药液(检测终浓度分别为：1nM、3nM、10nM、30nM、100nM、300nM和1000nM)，每个底板孔60μL.

4.数据处理

Flipr测试荧光值减去未进行染色(dye)的细胞孔的值(即本底荧光值)，采用Graphpad Prism 6.0软件进行统计和数据处理，轨迹图采用去除基线(remove baseline)的方式进行归一化处理，比值型显示，量效图求取AUC(钙流信号形成的曲线的曲线下面积)收集数据与化合物浓度的log值，采用log[Inhibitor]vs.response—Variable slope计算IC₅₀值。

结果见表11：

表11

化合物编号
		L001	10.75
L002	6.52
		L007	7.37
L009	39.43
		L013	14.56
L014	18.23
		L015	11.5
L019	24

效果实施例2肝微粒体半衰期试验

对本发明中化合物的体外代谢稳定性利用各种属肝微粒体温孵法进行测定。在肝微粒体反应体系中(1mg/mL肝微粒体蛋白，25U/mL 6-磷酸葡萄糖脱氢酶，1mM NADP，6mM D-6-磷酸葡萄糖，5mM MgCl₂)加入适量供试化合物，放入37℃水浴锅温孵启动反应，于各时间点取100μL反应液加入至含400μL 0℃预冷的内标工作液(含200ng/mL地塞米松、双氯酚酸、甲苯磺丁脲、拉贝洛尔的乙腈溶液)离心管中，终止反应，4℃离心机10000g离心10min，取上清液进LC-MS进行分析检测，获得供试化合物在各种属肝微粒体中的体外代谢半衰期。

结果见表12：

表12

表12中的数据显示本发明所述化合物L001和L002在肝微粒体中的代谢稳定性较对比化合物C001和C002有显著提高，说明本发明化合物在肝微粒体中的代谢稳定性较好，具有更好的临床药代动力学性质。

效果实施例3本发明化合物的小鼠体内药代动力学研究

SPF级小鼠(北京斯贝福生物技术有限公司)在适应性驯养后禁食过夜(不禁水)，分别通过灌胃和尾静脉推注的方式给予3mg/kg或1mg/kg本发明化合物。给药后特定时间点采集小鼠血浆，通过LC-MS/MS(AB SCIEX Qtrap4500)检测血浆中化合物浓度，统计分析、计算各化合物的PK参数(WinNonlin V5.2，Pharsight)，体现本发明化合物的小鼠体内药代动力学性质。

针对本发明实施例化合物进行上述实验，结果表明本发明的化合物均具有较好小鼠体内药代动力学性质，在较低剂量时即可获得较高的体内暴露量以及较高的口服生物利用度，一些化合物口服生物利用度＞30％，一些化合物的口服生物利用度＞50％的化合物。下述表13为代表性化合物的实验数据。

表13：本发明化合物在小鼠体内的PK实验

效果实施例4本发明化合物单次灌胃给药CD-1小鼠组织分布研究

实验方案：

1.1实验仪器

表14

1.2实验准备

小鼠：CD-1小鼠，SPF级，9只，雄性，体重18-22g(来源：北京斯贝福生物技术有限公司，合格证号：110324200103036532)。

饲养条件：普通级动物房饲养，自由饮食饮水，3只/笼饲养，12/12小时明/暗周期调节(7:00am/7:00pm)，温度23±1℃。

配药：将化合物L015精确称量后，先加入所需体积的20％solutol，超声20min后搅拌1.5h后至肉眼无明显可见颗粒，取中层药液用于给药；混悬液取上、中、下各2份，澄清溶液取中层2份，每份准确吸取100μL至1.5mL的EP管，在给药前取样，取样后置于-80℃冰箱保存，随血浆样品一起送样生物分析检测。

1.3给药方案

动物随机分成3组，化合物L015在3个不同时间点，每组3只，雄性，所有小鼠均采用单次灌胃给药，给药体积均为10mL/kg，具体分组和给药情况如下：

表15

备注：①动物合格证编号：110324200103036532，CD-1小鼠，北京斯贝福生物技术有限公司；②三组大鼠给药前通宵禁食不禁水；给药4小时后返还食物；③取组织时间点参考之前的1、3、10mpk小鼠PK结果：L015，10mg/kg灌胃给药小鼠后，0.167h为吸收相，受试物血药浓度在1h达峰；在10h左右位于消除相。

1.4样本的采集和制备

每组动物在给药结束后，分别于各自时间点提前5分钟，腹腔注射1％戊巴比妥钠麻醉(给药体积0.06mL/10g)，收集血液约0.3mL血液于抗凝EP管中(内含4μL EDTA-K₂，375mg/mL，缓慢上下倒置3次，置于冰盒内保存(不超过30分钟)，在4℃下使用3500×g离心10分钟，移取上清液至标记的EP管中，送生物分析检测。如果无法当天检测，样本需储存在-80℃直到检测(注意勿进行多次冷冻/溶解的过程)。

取血后，迅速打开腹腔，剪开大鼠腹主动脉和静脉，放干血液后，分别取大鼠心、肝、脾、肺、肾、大脑。组织取完后，立刻用生理盐水洗干净表面残血，用滤纸吸干，剔除结缔组织，称重。匀浆管置入冰水浴中，用高速匀浆机彻底匀浆制成组织样品匀浆液，送生物分析检测。如果无法当天检测，样本需储存在-80℃直到检测(注意勿进行多次解冻/冰冻的过程)。

1.5样品分析方法

1.5.1实验仪器：

高效液相色谱泵(Pump)：Exion LC AD Pump，Sciex公司

自动进样器(Auto sampler：Exion LC AD Autosampler，Sciex公司

柱温箱(column Oven)：Exion LC AD Column Oven，Sciex公司

质谱仪(Mass spectrometer)：AB Sciex Qtrap 4500

高速冷冻离心机(centrifuge)：Thermo Fisher,ST16R，GG1206085-093

分析天平(Electronic balance)：Mettler Toledo,MS-105D，GG1206363

微型涡旋仪(Vortex):上海沪西分析仪器厂，WH-2，GG1206487

1.5.2实验材料：小鼠血浆和组织

1.5.3分析物：L015

1.5.4内标：拉贝洛尔(Labetalol)

1.5.5分析方法：液质联用法

1.5.6质谱条件：

1.5.6.1质谱参数

离子源：Ion Electrospray(ESI)

离子化模式(Ionization mode)：正离子模式(Positive)

检测模式(Mode)：多反应监测(MRM)

电喷雾电压(Ion Spray Voltage)：5500

离子喷雾温度(Turbo Ion Spray Temp)：550℃

气帘气(Curtain Gas)：35

碰撞池气体(CAD Gas)：Medium

雾化气(Nebulizing Gas，Gas1)：55.00

辅助气(Auxiliary Gas，Gas 2)：55.00

1.5.6.2.检测离子对

表16

1.5.7液相方法：

色谱柱：Agilent poroshell 120 EC-C18(4.6×50mm，2.7μm)

流动相A(Mobile Phase A)：0.1％甲酸的水溶液

流动相B(Mobile Phase B)：0.1％甲酸的甲醇溶液

自动进样器清洗溶液(Rinse Port Wash Solution)甲醇:水:乙腈:异丙醇＝1:1:1:1

柱温箱温度(Column Temperature)：40℃

流速(Flow Rate)：0.8mL/min

自动进样器温度(Sample Tray Temp)：15℃

进样体积(Injection Volume)：10μL(L015)

压脚提升量(Needle Stroke)：49mm

自动进样器清洗设置(Rinse Pump Setting)：仅清洗进样口

自动进样器清洗模式(Rinse Mode)：吸入前清洗

自动进样器洗针体积(Rinse Volume)：500μL

进样针清洗时浸泡时间(Rinse Dip Time)：2秒

洗脱梯度：

表17

1.5.8前处理方法：

样品前处理过程：取3μL工作液，加入57μL空白基质于1.5mL离心管中，加入240μL含200ng/mL甲苯磺丁脲、拉贝洛尔混标的0.1％甲酸的乙腈沉淀蛋白，涡旋混合1分钟，样品于4℃的离心机中13000rpm离心15分钟。取上清液100μL于另一96深孔板中，加入100μL的含0.1％FA的甲醇：水(1：3，v：v)溶液，振荡混合1分钟，于96孔板离心机中3500rpm离心5分钟后直接进样。

1.6数据分析

计算各时间点血浆和各组织中L015的浓度，对数据进行分析。

1.7实验结论：

采用20％solutol作为溶媒，L015 10mg/kg单次灌胃给药雄性CD-1小鼠后：灌胃给药后0.167h时，L015在肝脏(3260ng/g)、肾脏(1467ng/g)有较大量的分布(分别为血浆浓度的5.55倍、2.50倍)，其中大脑药物浓度较少(706ng/g，为血药浓度的0.05倍)；给药后1h和10h时，L015仍主要在肝脏、肾脏分布(分别为血浆浓度的4.53-5.05倍、2.51-1.50倍)，其中在大脑中L015浓度分别为161ng/g、25.9ng/g(分别为血药浓度的0.19-0.09倍)，提示L015在10mg/kg较少在脑中分布，具体见图1。说明本发明化合物主要在肝脏和靶器官(肾脏)分布。

Claims (23)

1.一种如式I-a所示的化合物、其互变异构体、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其药学上可接受的盐的溶剂合物；

其中，

n为0、1、2、3或4；

R¹独立地为-CN、卤素、-OH、C₁～C₄烷基或被1、2、3或4个R^1-1取代的C₁～C₄烷基；

R^1-1独立地为-CN、卤素或-OH；

L为单键或-CR^aR^b-；

R^a为H或C₁～C₃烷基；

R^b为H、卤素或C₁～C₃烷基；

R²为

X¹为-O-、-S-、-NH-、-O-CH₂-、-S-CH₂-、-NH-CH₂-、-CH₂-或-CH₂-CH₂-；

X²为-O-、-S-、-NH-、-O-CH₂-、-S-CH₂-、-NH-CH₂-、-CH₂-或-CH₂-CH₂-；

R^2-1和R^2-2独立地为-OR^2-1-1、-SR^2-1-1或-NR^2-1-2R^2-1-3；

R^2-1-1独立地为H、C₁～C₆烷基、C₃～C₆环烷基、被1、2、3或4个R^2-1-1-1取代的C₁～C₆烷基或被1、2、3或4个R^2-1-1-1取代的C₃～C₆环烷基；

R^2-1-1-1独立地为-CN、F、Cl、Br、I、-OH、-NH₂、-COOH或-NO₂；

R^2-1-2和R^2-1-3独立地为H或C₁～C₆烷基；

R^2-3为H、F、Cl、Br、I、-CN、-NO₂、-NH₂、C₁～C₃烷基或C₁～C₃烷氧基；

R^2-4为H、F、Cl、Br、I、-CN、-NO₂、-NH₂、C₁～C₃烷基或C₁～C₃烷氧基；

R^2-5为-OR^2-5-1、-SR^2-5-1或-NR^2-5-2R^2-5-3；

R^2-5-1独立地为H、C₁～C₆烷基、C₃～C₆环烷基、被1、2、3或4个R^2-5-1-1取代的C₁～C₆烷基或被1、2、3或4个R^2-5-1-1取代的C₃～C₆环烷基；

R^2-5-1-1独立地为-CN、F、Cl、Br、I、-OH、-NH₂、-COOH或-NO₂；

R^2-5-2和R^2-5-3独立地为H或C₁～C₆烷基；

R^2-6为C₁～C₈烷基、C₃～C₆环烷基、-NR^2-6-2R^2-6-3、被1、2、3或4个R^2-6-1取代的C₁～C₈烷基或被1、2、3或4个R^2-6-1取代的C₃～C₆环烷基；

R^2-6-1独立地为-CN、F、Cl、Br、I、-OH、-NH₂、-COOH或-NO₂；

R^2-6-2和R^2-6-3独立地为H或C₁～C₆烷基。

2.如权利要求1所述的如式I-a所示的化合物、其互变异构体、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其药学上可接受的盐的溶剂合物，其特征在于，n为2；

和/或，R¹独立地为卤素或被1、2、3或4个R^1-1取代的C₁～C₄烷基；

和/或，R^1-1独立地为卤素；

和/或，L为-CR^aR^b-；

和/或，R^a为H；

和/或，R^b为H；

和/或，R²为

和/或，R^2-1和R^2-2独立地为-OR^2-1-1；

和/或，R^2-1-1为H；

和/或，R^2-5为-OR^2-5-1；

和/或，R^2-5-1为H；

和/或，R^2-6为-NR^2-6-2R^2-6-3或被1、2、3或4个R^2-6-1取代的C₁～C₅烷基；

和/或，R^2-6-1为-NH₂；

和/或，R^2-6-2和R^2-6-3独立地为甲基或乙基；

和/或，为

3.如权利要求2所述的如式I-a所示的化合物、其互变异构体、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其药学上可接受的盐的溶剂合物，其特征在于，

R¹独立地为氟或三氟甲基；

和/或，L为-CH₂-；

和/或，R²为

4.如权利要求3所述的如式I-a所示的化合物、其互变异构体、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其药学上可接受的盐的溶剂合物，其特征在于，

为

和/或，为

5.如权利要求1所述的如式I-a所示的化合物、其互变异构体、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其药学上可接受的盐的溶剂合物，其特征在于，

n为2；

R¹独立地为卤素或被1、2、3或4个R^1-1取代的C₁～C₄烷基；

R^1-1独立地为卤素；

L为-CR^aR^b-；

R^a为H；

R^b为H；

R²为

R^2-1和R^2-2独立地为-OR^2-1-1；

R^2-1-1为H；

R^2-5为-OR^2-5-1；

R^2-5-1为H；

R^2-6为-NR^2-6-2R^2-6-3或被1、2、3或4个R^2-6-1取代的C₁～C₅烷基；

R^2-6-1为-NH₂；

R^2-6-2和R^2-6-3独立地为甲基或乙基。

6.如权利要求1～5中任一项所述的如式I-a所示的化合物、其互变异构体、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其药学上可接受的盐的溶剂合物，其特征在于，

当R¹独立地为卤素时，所述卤素为氟、氯或溴；

和/或，当R¹独立地为被1、2、3或4个R^1-1取代的C₁～C₄烷基，所述C₁～C₄烷基独立地为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基；

和/或，当R¹独立地为被1、2、3或4个R^1-1取代的C₁～C₄烷基，所述R^1-1独立地为卤素；

和/或，当R¹独立地为被1、2、3或4个R^1-1取代的C₁～C₄烷基，所述的R^1-1的个数为2个或3个；

和/或，当R^2-6为被1、2、3或4个R^2-6-1取代的C₁～C₈烷基时，所述C₁～C₈烷基为C₁～C₄烷基；

和/或，当R^2-6为被1、2、3或4个R^2-6-1取代的C₁～C₈烷基时，所述R^2-6-1独立地为-NH₂；

和/或，当R^2-6为被1、2、3或4个R^2-6-1取代的C₁～C₈烷基时，所述R^2-6-1的个数为1个；

和/或，当R^2-6-2和R^2-6-3独立地为C₁～C₆烷基时，所述C₁～C₆烷基为C₁～C₃烷基。

7.如权利要求6所述的如式I-a所示的化合物、其互变异构体、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其药学上可接受的盐的溶剂合物，其特征在于，

当R¹独立地为卤素时，所述卤素为氟；

和/或，当R¹独立地为被1、2、3或4个R^1-1取代的C₁～C₄烷基，所述C₁～C₄烷基独立地为甲基；

和/或，当R¹独立地为被1、2、3或4个R^1-1取代的C₁～C₄烷基，所述R^1-1独立地为氟；

和/或，当R¹独立地为被1、2、3或4个R^1-1取代的C₁～C₄烷基，所述的R^1-1的个数为3个；

和/或，当R^2-6为被1、2、3或4个R^2-6-1取代的C₁～C₈烷基时，所述C₁～C₈烷基为异丁基；

和/或，当R^2-6-2和R^2-6-3独立地为C₁～C₆烷基时，所述C₁～C₆烷基为甲基。

8.如权利要求7所述的如式I-a所示的化合物、其互变异构体、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其药学上可接受的盐的溶剂合物，其特征在于，当R¹独立地为被1、2、3或4个R^1-1取代的C₁～C₄烷基时，所述被1、2、3或4个R^1-1取代的C₁～C₄烷基为二氟甲基或三氟甲基；

和/或，当R^2-6为被1、2、3或4个R^2-6-1取代的C₁～C₈烷基时，所述R^2-6为

和/或，当R^2-6为-NR^2-6-2R^2-6-3时，所述R^2-6为

9.如权利要求1所述的如式I-a所示的化合物、其互变异构体、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其药学上可接受的盐的溶剂合物，其特征在于，为

10.如权利要求1所述的如式I-a所示的化合物、其互变异构体、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其药学上可接受的盐的溶剂合物，其特征在于，如式I-a所示的化合物具有如式I-b所示的结构：

11.如权利要求1所述的如式I-a所示的化合物、其互变异构体、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其药学上可接受的盐的溶剂合物，其特征在于，如式I-a所示的化合物选自以下化合物：

12.一种如式I-b所示的化合物的制备方法，其为方法1或方法2：

所述的方法1包括以下步骤：在溶剂中，在酸的存在下，所述化合物I-c进行脱保护反应，得到所述的如式I-b所示的化合物；

其中，R²为R³为PG₁和PG₂为羟基保护基；PG₃为氨基保护基；R¹和n的定义如权利要求1-11中任一项所述；

所述的方法2包括以下步骤：在溶剂中，所述化合物III-1与所述氯磺酸或二甲氨基甲酰氯发生取代反应，得到所述的如式I-b所示的化合物；

其中，R²为R¹和n的定义如权利要求1-11中任一项所述。

13.如权利要求12所述的如式I-b所示的化合物的制备方法，其特征在于，

方法1中，PG₁和PG₂相同，例如PG₁和PG₂均为t-Bu；

和/或，方法1中，PG₃为Boc；

和/或，方法1中，所述酸为三氟乙酸或氯化氢的1,4-二氧六环溶液；

和/或，方法1中，所述溶剂为二氯甲烷和/或乙酸乙酯；

和/或，方法2中，当R²为时，所述溶剂为乙腈；

和/或，方法2中，当R²为时，所述氯磺酸与所述化合物III-1的摩尔比为(3-6):1；

和/或，方法2中，当R²为时，所述溶剂为四氢呋喃；

和/或，方法2中，当R²为时，所述二甲氨基甲酰氯与所述化合物III-1的摩尔比为(1-2):1。

14.一种如式I-c-1所示的化合物：

其中，R¹和n的定义如权利要求1-11中任一项所述；

PG₁和PG₂的定义如权利要求12或13所述；

优选地，如式I-c-1所示的化合物为以下化合物：

15.一种如式I-c-2所示的化合物：

其中，R¹和n的定义如权利要求1-11中任一项所述；

PG₃的定义如权利要求12或13所述；

优选地，如式I-c-2所示的化合物为以下化合物：

16.一种如式III-1所示的化合物：

其中，R¹和n的定义如权利要求1-11中任一项所述；

优选地，如式III-1所示的化合物为以下化合物：

17.一种药物组合物，其特征在于，其包含物质X和药用辅料，所述的物质X为如权利要求1-11中任一项所述的如式I-a所示的化合物、其互变异构体、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其药学上可接受的盐的溶剂合物。

18.一种物质X在制备TRPC5抑制剂中的应用，其特征在于，所述的物质X为如权利要求1-11中任一项所述的如式I-a所示的杂环化合物、其互变异构体、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其药学上可接受的盐的溶剂合物，所述TRPC5抑制剂在体内使用。

19.一种物质X在制备药物中的应用，其特征在于，所述的物质X为如权利要求1-11中任一项所述的如式I-a所示的化合物、其互变异构体、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其药学上可接受的盐的溶剂合物，所述的药物为用于治疗和/或预防TRPC5介导的疾病的药物。

20.如权利要求19所述的应用，其特征在于，所述的TRPC5介导的疾病为精神病症、神经病症、神经退行性病症或肾病。

21.如权利要求20所述的应用，其特征在于，所述的精神病症、神经病症或神经退行性病症选自：与失调的情绪处理相关的疾病(例如，边缘型人格障碍或抑郁症，诸如重性抑郁症、严重抑郁障碍、精神抑郁症、心境恶劣和产后抑郁症以及双相障碍)、与焦虑及恐惧相关的病症(例如，创伤后应激障碍、惊恐病、广场恐怖症、社交恐惧症、广泛性焦虑症、惊恐病、社交焦虑症、强迫症及分离焦虑)、记忆障碍(例如，阿尔茨海默病、遗忘症、失语症、脑损伤、脑肿瘤、慢性疲劳综合征、克雅氏病、解离性遗忘症、神游遗忘症、亨廷顿病、学习障碍、睡眠障碍、多重人格障碍、疼痛、创伤后应激障碍、精神分裂症、运动损伤、中风及韦-科二氏综合征)、与受损的冲动控制及成瘾相关的病症、阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、肌萎缩侧索硬化、癫痫、以及、由创伤或包括衰老的其他损伤引起的其他脑部病症；

所述的肾病为局灶节段性肾小球硬化、微小病变肾病或糖尿病肾病。

22.一种物质X在制备药物中的应用，其特征在于，所述的物质X为如权利要求1-11中任一项所述的如式I-a所示的化合物、其互变异构体、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其药学上可接受的盐的溶剂合物，所述的药物为用于治疗和/或预防精神病症、神经病症、神经退行性病症或肾病的药物。

23.如权利要求22所述的应用，其特征在于，所述的精神病症、神经病症或神经退行性病症选自：与失调的情绪处理相关的疾病(例如，边缘型人格障碍或抑郁症，诸如重性抑郁症、严重抑郁障碍、精神抑郁症、心境恶劣和产后抑郁症以及双相障碍)、与焦虑及恐惧相关的病症(例如，创伤后应激障碍、惊恐病、广场恐怖症、社交恐惧症、广泛性焦虑症、惊恐病、社交焦虑症、强迫症及分离焦虑)、记忆障碍(例如，阿尔茨海默病、遗忘症、失语症、脑损伤、脑肿瘤、慢性疲劳综合征、克雅氏病、解离性遗忘症、神游遗忘症、亨廷顿病、学习障碍、睡眠障碍、多重人格障碍、疼痛、创伤后应激障碍、精神分裂症、运动损伤、中风及韦-科二氏综合征)、与受损的冲动控制及成瘾相关的病症、阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、肌萎缩侧索硬化、癫痫、以及、由创伤或包括衰老的其他损伤引起的其他脑部病症；

所述的肾病为局灶节段性肾小球硬化、微小病变肾病或糖尿病肾病。