HK40003468B - 用於鉴定羊水的诊断组合物 - Google Patents

Description

用于鉴定羊水的诊断组合物

本申请是申请日为2014年9月17日，申请号为201410474935.3，发明名称为“用于鉴定羊水的诊断组合物”的申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及医学诊断学领域并且更特别地涉及羊水的鉴定。

背景技术

羊膜囊的过早破裂是在大约10％的孕妇中偶然发生的常见紊乱。未能治疗过早破裂可能导致羊膜内感染、刺激胎肺发育以及甚至围产期死亡。

检测羊膜渗漏的若干方法在本领域是已知的，所述若干方法包括在与阴道分泌物接触之后对诊断制品的颜色变化的色谱检测。

包括具有意图鉴定羊水的指示剂的卫生护垫、拭子以及类似物的许多装置被开发，例如在美国专利号5,897,834、6,126,597、6,149,590中。这些装置可以被使用者穿着、或以其他方式被使用者使用并且每当有分泌物时其立即被吸收并且被检测。

美国专利号6,921,647以及包括美国专利号7,314,752、7,541,177以及7,947,467的其部分继续案，公开了用于鉴定包括羊水的分泌的生物流体的分泌物监测制品，所述分泌物监测制品包括：主体，所述主体包括吸收材料和指示剂系统，所述指示剂系统具有包括化学组合物的至少一种pH测定构件，所述化学组合物与含有尿素的流体反应，这不同于与不含有尿素的流体反应并且以使得含有尿素的流体可以与不含有尿素的流体被区分同时避免两种流体的假阳性指示的方式反应，pH测定构件还包括疏水性化学组合物，所述疏水性化学组合物与流体基于流体的缓冲能力进行反应，使得具有不同缓冲能力的流体可以被区分，其中指示剂系统与吸收材料相连以便生物流体接触指示剂系统以鉴定分泌的生物流体。

还已经被提出的是，通过利用羊水中的蛋白质比如甲胎蛋白、催乳素、纤连蛋白、以及胰岛素样生长因子结合蛋白1的免疫化学分析来检测羊膜囊的破裂。例如，美国专利号8,114,610公开了使用PAMG-1-特异性单克隆抗体的组合来检测包括孕妇阴道分泌物的样品中的羊水的方法。

对改进的诊断系统有未满足的需要，所述改进的诊断系统可以在羊水和干扰生物流体比如尿液之间鉴别，具有最少假阳性结果，同时提供随着时间过去是稳定的可靠指示，并且同时减少得到可靠结果所需要的时间量。

发明内容

本发明公开用于检测阴道分泌物中的羊水的指示剂组合物，所述指示剂组合物包括：多种聚合物、增塑剂、表面活性剂、离子平衡试剂以及指示剂，其中所述组合物不含润湿剂。本发明还公开用于鉴定羊水的诊断制品以及其使用方法。

有利地，本发明的制品在接触阴道分泌物之后立刻运行并且不需要任何干燥时间和/或尿液蒸发过程。不希望受到任何理论或机理的束缚，假设这样的优点由本发明诊断制剂中的成分的独特组合给予，或可以特别地归因于酸、表面活性剂或其组合、以及剩余的成分。

此外，本发明的制品使得初始的自我检测成为可能并且不需要患者访问卫生保健专业人员以便区分阳性和假阳性。相应地，使用本发明的制品节省测定羊水是否实际上渗漏所需要的大量的时间。

在某些实施方案中，提供了用于检测阴道分泌物中的羊水的指示剂组合物，所述指示剂组合物包括：多种聚合物、增塑剂、表面活性剂、酸、离子平衡试剂以及指示剂，其中所述组合物不含润湿剂。

在某些实施方案中，所述酸包括至少一种取代羧酸，所述至少一种取代羧酸包括环状部分和芳香族部分中的至少一种。

在某些实施方案中，所述至少一种取代羧酸包括未被取代的或取代的芳基、杂环基、杂芳基、以及碳环中的至少一种。

在某些实施方案中，所述至少一种取代羧酸选自由水杨酸、苯甲酸以及其组合组成的组。

在某些实施方案中，所述多种聚合物包括第一聚合物和第二聚合物，所述第一聚合物的疏水性高于所述第二聚合物的疏水性。

在某些实施方案中，每种聚合物包括纤维素、其衍生物或其共聚物。

在某些实施方案中，所述表面活性剂是非离子型表面活性剂。

在某些实施方案中，所述指示剂带负电荷。

在某些实施方案中，所述指示剂是弱酸。

在某些实施方案中，所述指示剂选自由以下组成的组：甲酚红、茜素、溴甲酚紫、氯酚红、硝嗪黄、溴百里酚蓝、溴二甲苯酚蓝、中性红、酚红、百里酚蓝、二甲苯酚蓝以及间甲酚紫。

在某些实施方案中，所述离子平衡试剂是季胺。

在某些实施方案中，所述离子平衡试剂选自由以下组成的组：二(长链烷基)二甲基氯化铵、N-甲基-N,N-双(长链烷酰氧基乙基)-N-(2-羟基乙基)甲基硫酸铵、乙烯基苄基二甲基椰油基氯化铵、甲基三辛基氯化铵、三辛酰基甲基氯化铵、三(十二烷基)甲基氯化铵以及鲸蜡基三甲基氯化铵。

在某些实施方案中，所述增塑剂是低分子量增塑剂。

在某些实施方案中，提供了用于检测阴道分泌物中的羊水的制品，所述制品包括：用于吸收从人分泌的生物流体的吸收材料、以及指示剂组合物，所述指示剂组合物包括多种聚合物、增塑剂、表面活性剂、酸、离子平衡试剂以及指示剂，其中所述组合物不含润湿剂。

在某些实施方案中，所述酸包括至少一种取代羧酸，所述至少一种取代羧酸包括环状部分和芳香族部分中的至少一种。

在某些实施方案中，所述至少一种取代羧酸包括未被取代的或取代的芳基、杂环基、杂芳基、以及碳环中的至少一种。

在某些实施方案中，所述至少一种取代羧酸选自由水杨酸、苯甲酸以及其组合组成的组。

在某些实施方案中，所述多种聚合物包括第一聚合物和第二聚合物，所述第一聚合物的疏水性高于所述第二聚合物的疏水性。

在某些实施方案中，每种聚合物包括纤维素、其衍生物或其共聚物。

在某些实施方案中，所述表面活性剂是非离子型表面活性剂。

在某些实施方案中，所述指示剂带负电荷。

在某些实施方案中，所述指示剂是弱酸。

在某些实施方案中，所述指示剂选自由以下组成的组：甲酚红、茜素、溴甲酚紫、氯酚红、硝嗪黄、溴百里酚蓝、溴二甲苯酚蓝、中性红、酚红、百里酚蓝、二甲苯酚蓝以及间甲酚紫。

在某些实施方案中，所述离子平衡试剂是季胺。

在某些实施方案中，所述离子平衡试剂选自由以下组成的组：二(长链烷基)二甲基氯化铵、N-甲基-N,N-双(长链烷酰氧基乙基)-N-(2-羟基乙基)甲基硫酸铵、乙烯基苄基二甲基椰油基氯化铵、甲基三辛基氯化铵、三辛酰基甲基氯化铵、三(十二烷基)甲基氯化铵以及鲸蜡基三甲基氯化铵。

在某些实施方案中，所述增塑剂是低分子量增塑剂。

在某些实施方案中，所述吸收材料选自由以下组成的组：拭子、纱布、卫生护垫、卫生巾、尿布以及阴唇间吸收结构。

在某些实施方案中，提供了用于诊断阴道分泌物中羊水渗漏的方法，所述方法包括：

(a)将分泌物监测制品定位为接收从受试者分泌的生物流体，所述制品包括：吸收材料以及指示剂组合物，所述指示剂组合物包括多种聚合物、酸、增塑剂、表面活性剂、离子平衡试剂以及指示剂，其中所述组合物不含润湿剂；

(b)使所述制品与阴道分泌物接触；以及

(c)观察所述制品，其中颜色变化指示羊水的存在。

根据下文中给出的详细描述以及附图，本发明的另外的实施方案、特征、优点、以及适用的全部范围将变得明显。然而，应该理解的是，详细描述虽然表示本发明的优选实施方案，但仅仅作为实例给出，因为根据此详细描述在本发明的精神以及范围之内的多种变化以及修改对于本领域技术人员将变得明显。

附图说明

例示性实施方案在参考图中被示出。意图的是，本文公开的实施方案和附图被认为是例证性的而不是限制性的。附图在下面被列出。

图1示出候选制品在以下时间点的相对特异性：0-2分钟、5分钟、10分钟、20分钟、30分钟、1小时以及2小时。

图2呈现了从用一种候选制品(ALM1)以及试验制品3Mar1和3Mar2接触尿液样品而获得的结果。

图3显示在与羊水(A；暗斑被虚线围绕并且箭头指向斑点)和尿液(B)接触之后30分钟包含ALM1制剂的吸收制品的照片。

具体实施方式

本发明提供用于获得羊水渗漏的直接可靠鉴定的指示剂组合物、包括所述指示剂组合物的诊断制品、以及其使用方法。

术语“羊水渗漏”和羊膜囊(也称为胎膜)的过早破裂是可互换的并且涉及膜在分娩发作之前24小时或更多小时的自发性破裂。约30％-50％的过早破裂发生在孕期的第37周之前。因为羊水渗漏与在子宫内感染以及胎儿肺系统发育扰乱中的风险的明显增加相关，破裂的决定性并且可靠的诊断是重要的。此类感染的子宫内渗透使母体和围产儿两者的发病率和死亡率增加了约十个百分点。在孕期的38周到40周破裂的直接诊断是关键性的，因为一旦被检测到，分娩应该被尽快诱发。在孕期的37周之前破裂诊断也是重要的，因为其能够预防羊膜内感染以及刺激胎肺发育。

因为羊水渗漏的严重后果，孕妇承受严重压力并且在从阴道附近分泌任何液体时经常去看卫生保健专业人员。卫生保健专业人员通过检查阴道分泌物的pH寻找羊水的存在，羊水具有6.0和8.0之间的pH。因为孕妇经常具有尿失禁并且因为尿液通常具有5.0和8.0之间的pH，如果仅仅pH被检查，假阳性结果可能出现：尿液被鉴定为羊水。因此，有必要使用显微镜对此类阴道分泌物检查指示羊水的羊齿状特征(fern-shaped pattern)的存在。

因为流体分泌和到达卫生保健专业人员处之间的时间可能是长的,经常在检查时没有羊水的证据。分泌物可能被错误地假设为尿液，这经常伴随着悲剧性的结果。另一方面，卫生保健专业人员可能过于谨慎地决定而误诊尿液分泌物为羊水，导致了不必要的住院治疗以及患者压力。

多种诊断指示剂是已知的，然而，多种障碍是因为在干燥、干扰生物流体以及干燥/润湿的重复循环时pH的变化，其经常提供“假阳性”。“假阳性”读数对使用者是有压力的并且是耗时间的。需要最小化这些“假阳性”读数的装置。

本发明是对现有技术的改进，为使用者提供了更准确、更可靠以及更便利的诊断组合物。本发明的诊断组合物包括鉴定与流体相关的pH的指示剂、多种聚合物、增塑剂、表面活性剂、离子平衡试剂以及任选的至少一种取代羧酸，其中所述组合物不含润湿剂。

如在本文中以及在权利要求中所使用，术语“多种”意指至少两种。

在某些实施方案中，诊断组合物与吸收材料相连，从而形成用于吸收从孕妇分泌的流体的诊断制品。诊断制品可以使用多种装置以及方法来实施。在某些实施方案中，制品以可以被非技术人员特别是使用者容易地使用的方式来实施。包括吸收材料的制品的主体可以例如以衬垫、纱布、拭子、纤维球的形式但最优选地作为卫生巾、尿布、卫生护垫、以及阴唇间结构被供应至使用者。

在某些实施方案中，制品还包括用于安装制品以利于分泌的生物流体的收集的工具。安装工具的实例包括但不限于与制品相连的粘合带。在某些实施方案中，制品还包括释放带，每个释放带覆盖每个粘合带。如本文使用的覆盖也意指保护(例如以免变干)。通常地，使用者除去释放带以暴露制品的粘合带并且把制品放置在其内衣的胯部部分中，从而防止制品在常规使用期间脱离位置。可以被使用的粘合剂化合物的类型在本领域中是众所周知的。

在某些实施方案中，诊断组合物提供羊水的可见指示。在某些实施方案中，可视指示稳定持续约一周。

术语“稳定指示”和“不可逆指示”在本文中可交换地被使用以描述一旦获得就充分地保持不变持续由专业人员临床检查所需要的时间的指示，通常是颜色指示。优选地，颜色变化稳定持续至少48小时，更优选地至少72小时，并且在某些实施方案中，优选地颜色变化稳定持续约一周。

在某些实施方案中，指示剂选自具有阴性官能团(negative functional group)的化合物的组。在某些实施方案中，指示剂是弱酸。在某些实施方案中，指示剂选自由以下组成的组：硝嗪黄、百里酚蓝、溴百里酚蓝、二甲苯酚蓝、溴二甲苯酚蓝、酚红、间甲酚紫、氯酚红、溴甲酚紫、茜素、中性红、以及甲酚红。其他适当的指示剂列表可以在例如美国专利号5,897,834中找到。本领域技术人员清楚的是，本文特别提到的指示剂只是实例并且任何适当的指示剂可以被使用。

在某些实施方案中，本发明的聚合物是水不溶性聚合物。在某些实施方案中，每种聚合物包括纤维素、其衍生物或其共聚物，包括但不限于乙酸纤维素、乙酸丁酸纤维素、玻璃纸、硝酸纤维素、丙酸纤维素、丙酸丁酸纤维素、二乙酸纤维素、三乙酸纤维素、纤维素醚、以及羧甲基纤维素、以及前述聚合物的任何共聚物和任何共混物。

在某些实施方案中，本发明的聚合物是纤维素酯，所述纤维素酯包括纤维素和纤维素酯单体单元的混合物；例如，具有丁酰基、丙酰基以及乙酰基内容物的乙酸纤维素，包括但不限于含有乙酸纤维素单体部分以及丁酸纤维素单体部分以及未酯化的纤维素部分的乙酸丁酸纤维素、和乙酸丙酸纤维素组合物。

术语“疏水性”聚合物和“亲水性”聚合物涉及到聚合物在100％相对湿度下吸收的水蒸气的量。因此，“疏水性聚合物”通常指的是在100％相对湿度下仅吸收至多1wt.％的水的聚合物，然而中等亲水性聚合物吸收1-10wt.％的水并且亲水性聚合物能够吸收多于10wt.％的水。

在某些实施方案中，所述多种聚合物包括具有类似疏水性的第一聚合物和第二聚合物。

在某些实施方案中，所述多种聚合物包括第一聚合物比如乙酸丁酸纤维素，以及第二聚合物比如乙酸纤维素，所述第一聚合物的疏水性高于所述第二聚合物的疏水性。

不希望受到任何理论或作用机理的束缚，较小疏水性的聚合物是较亲水性的，从而改善待被试验的流体向护垫内的渗透，并且较大疏水性的聚合物提供指示剂组合物与吸收载体(例如织物)的改善粘附，从而最小化或甚至避免制剂组分的浸出。

本发明中的增塑剂任选地可以是低分子量增塑剂。

通常，低分子量增塑剂是具有小于600的分子量的增塑剂。在某些实施方案中，增塑剂具有小于500的分子量。在某些实施方案中，增塑剂具有小于400的分子量。在某些实施方案中，增塑剂具有小于300的分子量。

在某些实施方案中，增塑剂是也被称为低邻苯二甲酸酯的低分子量邻苯二甲酸酯。低邻苯二甲酸酯在其化学主链中通常包括3-6个碳原子。低邻苯二甲酸酯的最常用类型之一是也被称为邻苯二甲酸二辛酯(DOP)的邻苯二甲酸二-2-乙基己酯(DEHP)。

适当的低分子量增塑剂包括：邻苯二甲酸二烷基酯、邻苯二甲酸二环烷基酯、邻苯二甲酸二芳基酯以及混合的邻苯二甲酸烷基-芳基酯，如由以下代表的：邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二丙酯、邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯、邻苯二甲酸二-异丙酯、邻苯二甲酸二戊酯以及邻苯二甲酸二辛酯；磷酸烷基酯和磷酸芳基酯，比如磷酸三丁酯、磷酸三辛酯、磷酸三甲苯酯、以及磷酸三苯酯；1,2-环己烷二羧酸二异壬酯、柠檬酸烷基酯以及柠檬酸酯比如柠檬酸三甲酯、柠檬酸三乙酯、柠檬酸三丁酯、乙酰柠檬酸三乙酯、以及柠檬酸三己酯；己二酸二烷基酯比如己二酸二辛酯(DOA，也被称为己二酸双(2-乙基己基)酯)、己二酸二乙酯、己二酸二(2-甲基乙基)酯、以及己二酸二己酯；酒石酸二烷基酯比如酒石酸二乙酯以及酒石酸二丁酯；癸二酸二烷基酯比如癸二酸二乙酯、癸二酸二丙酯以及癸二酸二壬酯；琥珀酸二烷基酯比如琥珀酸二乙酯以及琥珀酸二丁酯；乙醇酸烷基酯、甘油酸烷基酯(alkyl glycerolate)、二醇酯(glycol ester)以及甘油酯比如二乙酸甘油酯、三乙酸甘油酯(三醋精)、单乳酸二乙酸甘油酯、甲基邻苯二甲酰基乙醇酸乙酯、丁基邻苯二甲酰基乙醇酸丁酯、乙二醇二乙酸酯、乙二醇二丁酸酯、三甘醇二乙酸酯、三甘醇二丁酸酯以及三甘醇二丙酸酯；以及其混合物。

在某些实施方案中，增塑剂是柠檬酸三乙酯。

在某些实施方案中，增塑剂是1,2-环己烷二羧酸二异壬酯。

本发明中表面活性剂任选地可以是非离子的、离子的、阴离子的或阳离子的。在某些实施方案中，表面活性剂是非离子型表面活性剂。在某些实施方案中，表面活性剂选自以下的组：月桂酸钠、月桂基硫酸钠、十六烷基三甲基溴化铵、苯扎氯铵、泊洛沙姆、烷基聚(环氧乙烷)、聚(环氧乙烷)和聚(环氧丙烷)的共聚物、辛基葡萄糖苷、癸基麦芽糖苷、鲸蜡醇、油醇、椰油酰胺单乙醇胺(MEA)、椰油酰胺二乙醇胺(DEA)、椰油酰胺TEA(三乙醇胺)、聚山梨醇酯比如(例如吐温或吐温)、卵磷脂以及其组合。

在某些实施方案中，表面活性剂包括泊洛沙姆(例如泊洛沙姆407)。

在某些实施方案中，表面活性剂包括聚山梨醇酯。

在某些实施方案中，表面活性剂包括泊洛沙姆、聚山梨醇酯以及其组合。

在某些实施方案中，表面活性剂是除了癸二酸二丁酯之外的。

如本文中使用的术语“泊洛沙姆”指的是非离子型三嵌段共聚物，所述非离子型三嵌段共聚物包括聚氧丙烯(聚(环氧丙烷))中心疏水链和两个聚氧乙烯(聚(环氧乙烷))亲水链。泊洛沙姆通常被称为被三个数字跟随的“P”，前两个数字乘以100指的是聚氧丙烯核心的估计的分子质量，并且最后的数字乘以10是聚氧乙烯含量百分数。例如，P407指的是具有4,000g/mol的聚氧丙烯分子质量和70％的聚氧乙烯含量的泊洛沙姆。

如本文中使用的术语“聚山梨醇酯”通常指的是山梨聚糖单月桂酸酯的聚氧乙烯衍生物。聚山梨醇酯的常用商标名称包括比如吐温或吐温在聚氧乙烯部分之后的数指的是在分子中存在的氧乙烯基的总数。在聚山梨醇酯部分之后的数涉及与分子的聚氧乙烯山梨聚糖部分相关联的脂肪酸的类型。单月桂酸酯通过20表示，单棕榈酸酯通过40表示，单硬脂酸酯通过60表示并且单油酸酯通过80表示。

在某些实施方案中，表面活性剂的量在相对于固体组分总重量的1％到10％(wt/wt)的范围之内。

如本文中使用的术语“固体组分”或“总固体”指的是在没有溶剂特别是水和/或丙酮的情况下每种制剂内的全部成分。

如本文中使用的术语“表面活性剂”指的是一种或多种表面活性剂。在某些实施方案中，表面活性剂指的是多种表面活性剂。

不希望受到任何理论或机理的束缚，表面活性剂充分地分散尿液并且因此尿液的保留时间被减少，从而避免来自尿液的假阳性结果。

在某些实施方案中，指示剂组合物包括离子平衡试剂，其中所述离子平衡试剂是季胺。

在某些实施方案中，离子平衡试剂选自由以下组成的组：二(长链烷基)二甲基氯化铵、N-甲基-N,N-双(长链烷酰氧基乙基)-N-(2-羟基乙基)甲基硫酸铵、乙烯基苄基二甲基椰油基氯化铵、甲基三辛基氯化铵、三辛酰基甲基氯化铵、三(十二烷基)甲基氯化铵以及其衍生物比如三(十二烷基)甲基碘化铵、和鲸蜡基三甲基氯化铵。

在某些实施方案中，离子平衡试剂是以约0.1％到2％的量。在某些实施方案中，离子平衡试剂以约0.1％到1％的量存在；并且指示剂以约0.2％到0.7％的量存在。

任何适当的离子平衡试剂可以被使用，所述任何适当的离子平衡试剂包括三辛酰基甲基氯化铵(Aliquat 336；CAS 5137-55-3)、三(十二烷基)甲基氯化铵(TDMAC；CAS7173-54-8)或鲸蜡基三甲基氯化铵(CTAC；CAS 112-02-7)。在某些实施方案中，离子平衡试剂是离子平衡试剂的组合。

在某些实施方案中，酸是取代羧酸。在某些实施方案中，取代羧酸呈R-COOH的形式。在某些实施方案中，R选自由芳基、杂环基、杂芳基、碳环组成的组，其中R是未被取代的或取代的。取代基的非限制性实例包括卤素、卤代烷基、C₁-C₄烷基、芳基、杂环基、羟基、烷氧基、芳氧基、烷基芳氧基、杂芳氧基、氧代、环烷基、苯基、杂芳基、萘基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、杂芳基氨基、二烷基氨基、二芳基氨基、烷基芳基氨基、烷基杂芳基氨基、芳基杂芳基氨基、酰基、酰氧基、硝基、羧基、氨基甲酰基、氨甲酰、氰基、磺酰基、磺酰基氨基、亚磺酰基、亚磺酰基氨基、巯基、C₁到C₁₀烷硫基、芳硫基、或C₁到C₁₀烷基磺酰基。任何取代基可以是未被取代的或被这些前述取代基中的任一种进一步取代。每种可能性代表作为本发明的不同实施方案。

在某些实施方案中，取代羧酸选自由以下组成的组：水杨酸、苯甲酸、苯磺酸、甲苯磺酸、萘磺酸、樟脑磺酸、苯乙酸、扁桃酸以及类似的以及其组合。每种可能性代表作为本发明的不同实施方案。

本文可交换地使用的术语“环烷基”和“碳环”通常指的是包括单环基或多环基的C₃到C₈环烷基。环烷基的非限制性实例是环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基。环烷基可以是未被取代的或被上文对烷基所定义的取代基中的任何一种或更多种取代。类似地，术语“亚环烷基”意指二价的如上文定义的环烷基，其中环烷基基团在两个位置被键合，使两个分开的另外的基团连接到一起。

本文单独使用或作为另一基团的部分的术语“芳基”表示含有从6-14个环碳原子的芳香族环体系。芳基环可以是单环的、二环的、三环的以及类似的。芳基的非限制性实例是苯基、包括1-萘基和2-萘基的萘基以及类似的。芳基可以是未被取代的或通过可利用的碳原子被上文对烷基所定义的一种或更多种基团取代。

本文单独使用或作为另一基团的部分的术语“杂芳基”表示杂芳香族体系，所述杂芳香族体系包含至少一个杂原子环原子，所述至少一个杂原子环原子选自氮、硫以及氧。杂芳基通常包含5个或更多个环原子。杂芳基可以是单环的、二环的、三环的以及类似的。还被包括在这样的表达中的是苯并杂环。如果氮是环原子，本发明还涵盖含氮杂芳基的N-氧化物。杂芳基的非限制性实例包括噻吩基、苯并噻吩基、1-萘并噻吩基、噻蒽基、呋喃基、苯并呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、嘌呤基、异喹啉基、喹啉基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基、咔啉基、噻唑基、噁唑基、异噻唑基、异噁唑基以及类似的。杂芳基任选地可以通过可利用的原子被上文对烷基所定义的一种或更多种基团取代。本文单独使用或作为另一基团的部分的术语“杂环”或“杂环基”表示具有1个到4个杂原子比如氧、硫和/或氮特别是单独的或与硫或氧环原子联合的氮的五元到八元的环。这些五元到八元的环可以是饱和的、完全不饱和的或部分不饱和的。优选的杂环包括哌啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、吡唑啉基、吡唑烷基、吗啉基、硫代吗啉基、吡喃基、硫代吡喃基、哌嗪基、二氢吲哚基、二氢呋喃基、四氢呋喃基、二氢噻吩基、四氢噻吩基、二氢吡喃基、四氢吡喃基以及类似的。杂环基可以是未被取代的或通过可利用的原子被上文对烷基所定义的一种或更多种基团取代。

本文单独使用或作为另一基团的部分的术语“卤素”包括氯、氟、溴、以及碘。

不希望受到任何理论或机理的束缚，取代羧酸与尿液的铵离子产生络合物，并且可以起到阱的作用。这样的相互作用导致来自尿液的干扰的减少，并且因此改善指示剂的特异性，所述尿液包括具有7.0单位以及甚至更高的pH水平的尿液。

在某些实施方案中，取代羧酸是除了L-乳酸乙酯(乳酸)、草酸或柠檬酸之外的。在某些实施方案中，本发明提供用于诊断阴道分泌物中羊水渗漏的方法，所述方法包括以下步骤：

a.将分泌物监测制品定位为接收从受试者分泌的生物流体，所述制品包括：吸收材料以及指示剂组合物，所述指示剂组合物包括多种聚合物、增塑剂、表面活性剂、离子平衡试剂以及指示剂，其中所述组合物不含润湿剂；

b.使所述制品与阴道分泌物接触；以及

c.观察所述制品，其中颜色变化指示羊水的存在。

在某些实施方案中，接触制品包括除去覆盖粘合带的释放带，从而暴露粘合带，并且把制品放置在内衣的胯部部分中，从而使所述制品附接至内衣的所述胯部部分。

在某些实施方案中，观察颜色变化包括检测制品上的暗斑，其中暗斑指示羊水的存在。

在某些实施方案中，暗斑是蓝斑。

本文描述的组合物可以通过本领域技术人员众所周知的方法来制备。

以上公开内容一般性地描述本发明。更完整的理解可以通过参考以下具体的实施例来获得。这些实施例只是为了说明的目的被描述并且不意图限制本发明的范围。因为情形可能暗示或提出权宜之计，形式上的变化和等效物的替代被涵盖。虽然特定术语已经在本文中被利用，此类术语被意图是在描述性的意义上而不为限制的目的。

实施例

实施例1：临床研究

尿液样品和羊水样品从83名孕妇中被收集，根据以下分配：尿液和羊水从8名妇女中被收集，仅尿液从63名妇女中被收集，并且羊水从12名妇女中被收集。

参与研究的受试者的入选标准是孕妇：

(i).18岁到50岁年龄的孕妇。

(ii).受试者准备好签知情同意书。

(iii).受试者到达产房经历羊膜穿破术。

参与此研究的受试者的排除标准是：

(iv).受试者经历出血。

(v).受试者不能或不愿意配合研究程序。

(vi).受试者目前正参与另一临床研究。

到达产房的受试者被要求收集随机尿液样品在干净的容器中。羊水样品由临床医生在羊膜穿破术程序期间收集。每份新鲜尿液样品和羊水样品在研究中使用各自包括候选制剂或参考制剂的试验装置(护垫)来试验，如下：

1.用于pH以及另外的尿液参数的浸量尺(使用Combur-带，RocheDiagnostics)。

2.100μl羊水被滴加到每个候选装置和参考装置(AL-SENSE和AmniScreen)上。

3.400μl尿液被滴加到每个候选装置(含有八种候选制剂之一的护垫)和每个参考装置(含有AmniScreen制剂或Al-Sense制剂的护垫)上。

4.研究协调员以将模仿“现实生活”用法的方式搅动每份护垫。

5.对于羊水样品和尿液样品，基于在试验衬垫上观察到的颜色，协调员立即(0-2分钟)和在5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、30分钟、60分钟以及120分钟之后记录结果状态(阳性或阴性)。当黄色护垫显示任何尺寸或形状的蓝色、绿色斑点(即使是浅色)时，得出结论为阳性结果。当护垫颜色保持黄色时，得出结论为阴性结果。

八种类型的候选装置(表1)和两种参考装置即AL-SENSE和AmniScreen(表2)被使用。每种候选制剂和参考制剂中的成分都被溶解在50ml丙酮和2ml水中。

表1：候选装置的制剂

^§G＝在层之间包含胶作为制造过程的一部分。

表2：AL-SENSE和AmniScreen组成

在敏感性和特异性方面，AmniScreen参考装置的值如下：84％特异性和96％敏感性的功效。在30分钟之后AmniScreen提供最后的读数。研究结果的显著性水平被确定等于或低于5％。所有的统计学分析使用SAS v9.3(SAS Institute Cary,NC USA)软件来进行。

结果(斑点)在不同时间点被检测，然而用于AL-SENSE和AmniScreen的感兴趣的时间点分别是30分钟和10分钟。基于衬垫颜色，来自不同试验中的结果被指定为“阳性”、“阴性”。术语“阳性”意指在护垫装置的黄色背景上出现的蓝斑。术语“阴性”意指斑点没有出现、或出现并且在检测时间期间褪色回到黄色。在尿液试验中形成的斑点被认为是假阳性并且当斑点在尿液试验中不出现时其是真阴性。类似地，当斑点在羊水试验中不出现时，其被称为假阴性。

表3-4和图1示出在暴露于羊水(表3)或暴露于尿液(表4)之后从候选装置读取的检测结果。功效评估通过对比来自多种装置(衬垫)的敏感性，即在衬垫暴露于羊水时“阳性”读数的比例；和特异性，即在衬垫暴露于尿液时“阴性”的比例来获得。作为结果的敏感性和特异性在表3和4中被示出，连同用McNemar检验进行比较的相应的双侧90％精确置信区间(CI)。

对于每个候选装置，候选装置和AmniScreen之间的一致性与95％的精确置信区间一起被计算出。羊水中的一致性、尿液中的一致性以及全部的一致性被评估为装置对之间的同等诊断(阳性-阳性、阴性-阴性)的百分比。装置诊断的一致性水平与AmniScreen的整体一致性水平的那些对比地被交叉列表并且使用McNemar检验来比较。如表3中所示，所有候选装置具有100％的敏感性，即所有候选物在暴露于羊水之后呈现阳性读数(蓝斑)。此外，在所有候选衬垫中颜色变化(在黄色背景上蓝斑的形成)立即发生或在接触试验样品之后不长于两分钟(即0-2分钟)发生并且保持稳定持续两小时跟进的持续时间。关于特异性，候选衬垫ALM1和ALM1G展示出超过其余候选衬垫的优越性(表4和图1)。这两种候选物在5分钟呈现出84％特异性并且在10分钟呈现出甚至更好的特异性值而没有波动：ALM1(和ALM1G)候选物的特异性在5分钟是84.5％(60/71)并且在10分钟是87.2％(62/71)。因此，ALM1和ALM1G达到在短时间跨度中良好准确度的目标。

表3：在暴露于羊水后候选装置的读数

‘％’-％敏感性；‘N’-试验样品的数目；‘m’-分钟。

表5和6分别示出在较低的双侧90％精确置信界限下五种选中的候选护垫在5分钟和10分钟的敏感性和特异性连同AL-SENSE和AmniScreen的结果。根据表5，ALM1的敏感性在5分钟和10分钟是100％，即大于在95％置信下的86.09％。86.09％的值指的是考虑到样品尺寸和敏感性数据可能作出的要求。上述情况也适用于AmniScreen。AL-SENSE具有比ALM1和AmniScreen的敏感性更低但不明显地更低的90％敏感性。根据表6，ALM1的特异性在5分钟(84.51％)比AmniScreen的特异性(77.46％；＝0.0588)更好，且在10分钟(87.32％)相对于AmniScreen(p＝0.0082)和AL-SENSE(74.65％，p＝0.0067)具有明显优越性。AmniScreen和AL-SENSE的特异性没有显著性差异(p＝0.5637)。

表4：当暴露于尿液时候选装置随着时间的过去的读数

‘％’-％敏感性；‘N’-试验样品的数目；‘m’-分钟。

表5：候选衬垫和参考衬垫的敏感性

表6：候选衬垫和参考衬垫的特异性

表7示出ALM1和AL-SENSE的交叉列表读数连同AmniScreen的读数-所有读数在相同的样品上获得。

表8展现出候选装置和参考装置(AL-SENSE和AmniScreen)在阳性案例和阴性案例上以及总体上的总的百分比一致性水平以及各自的双侧95％精确置信区间。这些值代表其中装置在羊水(阳性案例；N＝20)中、在尿液(阴性案例；N＝71)中以及总体上(在尿液和羊水两者中一起；N＝91)给出相同读数的案例的百分比。如可以在阳性案例即羊水中看见的是，ALM1读数在5分钟和10分钟对应AmniScreen读数。因此，对于这两个时间点，在羊水的诊断中ALM1和AmniScreen之间的一致性是100％，其中ALM1和AL-SENSE之间的一致性只有90％。在尿液中，ALM1在5分钟在98.2％的案例中与AmniScreen相一致并且在10分钟在全部(100％)案例中与AmniScreen相一致，其中AmniScreen提供阴性读数。AmniScreen在5分钟展示出六个假阳性读数并且在10分钟展示出七个假阳性读数，然而ALM1在5分钟和10分钟正确地读取阴性。在阴性案例上AL-SENSE与AmniScreen的一致性是87.3％，其中AL-SENSE比AmniScreen具有更多的假阳性读数(7对5)。

通常，在5分钟和10分钟，ALM1和AmniScreen之间在七个案例中有不一致性，其中ALM1在5分钟在六(6)个案例中给出正确的读数并且在10分钟评估点在全部七(7)个案例中给出正确读数。在5分钟(p＝0.0588，表8)，差异不是统计学显著的，但在10分钟(p＝0.0082，表8)被发现是统计学显著的。另外说明，如从表7中明显的是，前述的不一致性仅仅是在阴性案例(即，尿液)上，其中在5分钟ALM1在那7个有差异的案例的6个中给出正确读数并且在10分钟评估点在全部7个案例中给出正确读数。AL-SENSE和AmniScreen之间的不一致性更大—14个案例，其中AmniScreen在9个案例中是正确的。尽管有较好的准确度，关于阳性读数和阴性读数的百分比，AmniScreen和AL-SENSE被发现是统计学类似的(p＝1.00，表8)。

表7：候选物、AL-Sense相对AmniScreen的交叉列表

表8：ALM1和AL-SENSE与AmniScreen的一致性

实施例2：用没有表面活性剂和酸的制品的临床研究

包含除了泊洛沙姆407或水杨酸之外的ALM1制剂的所有成分的两种制剂3Mar1和3Mar2被制备(表9)。

表9：没有表面活性剂或酸的制剂

具有pH 7.0的尿液样品(400μl)被滴在包含3Mar1制剂和3Mar2制剂的制品以及包含ALM1制剂的制品上。

如图2中所示，在与尿液接触之后，包含3Mar1制剂或3Mar2制剂的每种制品产生假阳性结果，即在每种制品中央形成的暗色区别性(蓝色)斑点。然而，ALM1制品提供真阴性结果，因为其在接触尿液样品时不产生任何斑点。

结果指出需要表面活性剂和酸来获得可靠检测。

实施例3：穿用研究的可行性

18名参与者登记，其中的十一(11)名通过临床诊断被发现对羊水渗漏为阳性(组1)，且根据临床诊断发现七(7)名参与者对羊水渗漏为阴性(组2)。临床诊断通过池化试验(pooling test)(窥器检查)进行，其中破裂膜的诊断指示阳性临床诊断。然而，如果池化试验得出阴性，则进行pH试验(硝嗪纸)和显微镜羊齿状结晶试验。只有当pH试验和羊齿状结晶试验两者皆是阳性时，临床诊断被确定为阳性。

来自组1的样品使用ALM1装置来试验。全部十一个案例在衬垫取下之后立即给出真阳性指示并且在衬垫取下之后5分钟、10分钟、15分钟、20分钟以及30分钟给出真阳性指示(例如在衬垫取下之后30分钟获得的图3的A图)。

关于组2，六个案例在衬垫取下之后立即给出真阴性指示并且在衬垫取下之后5分钟、10分钟、15分钟、20分钟以及30分钟也给出真阴性指示(例如图3的B图)。其余的案例在衬垫取下之后立即给出假阳性指示(浅绿色斑点)并且在衬垫取下之后5分钟、10分钟、15分钟、20分钟以及30分钟也给出假阳性指示(浅绿色斑点)。这样的案例在pH试验(硝嗪纸)中也给出阳性。

实施例4：制品制备

制品制备最初包括制备以溶液形式的每种候选制剂和参考制剂(包括3Mar1和3Mar2)。为此目的，不包括硝嗪黄的每种制剂的固体部分被溶解在50ml丙酮中。硝嗪黄被溶解在2ml水中并且然后被添加到丙酮溶液。

产生的溶液被喷涂在基材上。因此，基材获得淡黄色的颜色，所述淡黄色的颜色给出用于检测由于与阴道液相互作用的颜色变化，特别地用于检测作为与羊水相互作用的恰当结果的蓝斑的适当背景。每种衬底然后与预先形成的护垫整合，从而获得不同的诊断(候选或参考)护垫。

前面的具体实施方案的描述将如此充分地揭示本发明的一般性性质以致其他人可以在没有过度实验并且没有脱离一般性概念的情况下通过应用现有知识容易地修改和/或调整这样的具体实施方案用于多种应用，并且因此这样的调整和修改应该并且被意图包含在公开的实施方案的等效物的含义和范围之内。应理解的是，本文利用的措辞或术语是为了描述的目的并且不是为了限制的目的。用于实施多种公开功能的工具、材料、以及步骤可以采取多种备选形式而不脱离本发明。

Claims (39)

1.一种用于检测阴道分泌物中的羊水的指示剂组合物，所述指示剂组合物包括：

至少一种选自以下的聚合物：纤维素、纤维素酯、或其共聚物；

增塑剂，其中所述增塑剂具有小于600g/mol的分子量；

表面活性剂，其中所述表面活性剂是泊洛沙姆；

由结构式表示的酸，所述酸包含选自以下的环部分：未被取代的或取代的C₆-C₁₄芳香族环部分、未被取代的或取代的C₃-C₈碳环部分、未被取代的或取代的具有1至4个选自氮、硫或氧的杂原子的5元至8元杂环部分、或者未被取代的或取代的具有1至4个选自氮、硫或氧的杂原子的5元或更多元杂芳香族环部分；

离子平衡试剂，其中所述离子平衡试剂是季胺；以及

指示剂。

2.如权利要求1所述的指示剂组合物，其中所述环部分是未被取代的或取代的C₆-C₁₄芳香族环部分。

3.如权利要求1所述的指示剂组合物，其中所述环部分是取代的C₆-C₁₄芳香族环部分。

4.如权利要求1所述的指示剂组合物，其中所述酸选自水杨酸、苯甲酸或其组合。

5.如权利要求1所述的指示剂组合物，其中所述酸是水杨酸。

6.如权利要求1所述的指示剂组合物，所述指示剂组合物由多种聚合物、所述增塑剂、所述表面活性剂、所述酸、所述离子平衡试剂以及所述指示剂组成。

7.如权利要求1-6的任一项所述的指示剂组合物，其中所述表面活性剂包括泊洛沙姆407。

8.如权利要求1-6的任一项所述的指示剂组合物，其中所述增塑剂具有小于300g/mol的分子量。

9.如权利要求1-6的任一项所述的指示剂组合物，其中所述增塑剂是柠檬酸三乙酯。

10.如权利要求1-6的任一项所述的指示剂组合物，所述指示剂组合物包括多种聚合物，其中每种聚合物独立地是纤维素酯。

11.如权利要求1-6的任一项所述的指示剂组合物，所述指示剂组合物包括多种聚合物，其中每种聚合物独立地选自乙酸纤维素、乙酸丁酸纤维素、玻璃纸、硝酸纤维素、丙酸纤维素、丙酸丁酸纤维素、二乙酸纤维素、三乙酸纤维素、纤维素醚、羧甲基纤维素、或其任何共聚物。

12.如权利要求1-6的任一项所述的指示剂组合物，所述指示剂组合物包括多种聚合物，其中所述多种聚合物中的一种聚合物是乙酸丁酸纤维素。

13.如权利要求1-6的任一项所述的指示剂组合物，其中所述离子平衡试剂选自二(长链烷基)二甲基氯化铵、N-甲基-N,N-双(长链烷酰氧基乙基)-N-(2-羟基乙基)甲基硫酸铵、乙烯基苄基二甲基椰油基氯化铵、甲基三辛基氯化铵、三辛酰基甲基氯化铵、三(十二烷基)甲基氯化铵或鲸蜡基三甲基氯化铵。

14.如权利要求1-6的任一项所述的指示剂组合物，其中所述指示剂带负电荷。

15.如权利要求1-6的任一项所述的指示剂组合物，其中所述指示剂是弱酸。

16.如权利要求1-6的任一项所述的指示剂组合物，其中所述指示剂选自甲酚红、茜素、溴甲酚紫、氯酚红、硝嗪黄、溴百里酚蓝、溴二甲苯酚蓝、中性红、酚红、百里酚蓝、二甲苯酚蓝或间甲酚紫。

17.一种用于检测阴道分泌物中的羊水的制品，所述制品包括与权利要求1-6的任一项所述的指示剂组合物缔合的吸收材料。

18.如权利要求17所述的制品，其中所述吸收材料选自拭子、纱布、卫生护垫、卫生巾、尿布或阴唇间吸收结构。

19.如权利要求17所述的制品，其中所述表面活性剂包括泊洛沙姆407。

20.如权利要求17所述的制品，其中所述增塑剂具有小于300g/mol的分子量。

21.如权利要求17所述的制品，其中所述增塑剂是柠檬酸三乙酯。

22.如权利要求17所述的制品，其中所述指示剂组合物包括多种聚合物；并且每种聚合物独立地是纤维素酯。

23.如权利要求17所述的制品，其中所述指示剂组合物包括多种聚合物；并且每种聚合物独立地选自乙酸纤维素、乙酸丁酸纤维素、玻璃纸、硝酸纤维素、丙酸纤维素、丙酸丁酸纤维素、二乙酸纤维素、三乙酸纤维素、纤维素醚、羧甲基纤维素、或其任何共聚物。

24.如权利要求17所述的制品，其中所述指示剂组合物包括多种聚合物；并且所述多种聚合物中的一种聚合物是乙酸丁酸纤维素。

25.如权利要求17所述的制品，其中所述离子平衡试剂选自二(长链烷基)二甲基氯化铵、N-甲基-N,N-双(长链烷酰氧基乙基)-N-(2-羟基乙基)甲基硫酸铵、乙烯基苄基二甲基椰油基氯化铵、甲基三辛基氯化铵、三辛酰基甲基氯化铵、三(十二烷基)甲基氯化铵或鲸蜡基三甲基氯化铵。

26.如权利要求17所述的制品，其中所述指示剂带负电荷。

27.如权利要求17所述的制品，其中所述指示剂是弱酸。

28.如权利要求17所述的制品，其中所述指示剂选自甲酚红、茜素、溴甲酚紫、氯酚红、硝嗪黄、溴百里酚蓝、溴二甲苯酚蓝、中性红、酚红、百里酚蓝、二甲苯酚蓝或间甲酚紫。

29.一种用于检测阴道分泌物中羊水渗漏的方法，所述方法包括：

(a)使权利要求1-6中任一项所述的指示剂组合物或权利要求17所述的制品与阴道分泌物接触；以及

(b)观察所述指示剂组合物或所述制品，其中颜色变化指示羊水的存在。

30.如权利要求29所述的方法，其中所述表面活性剂包括泊洛沙姆407。

31.如权利要求29所述的方法，其中所述增塑剂具有小于300g/mol的分子量。

32.如权利要求29所述的方法，其中所述增塑剂是柠檬酸三乙酯。

33.如权利要求29所述的方法，其中所述指示剂组合物包括多种聚合物；并且每种聚合物独立地是纤维素酯。

34.如权利要求29所述的方法，其中所述指示剂组合物包括多种聚合物；并且每种聚合物独立地选自乙酸纤维素、乙酸丁酸纤维素、玻璃纸、硝酸纤维素、丙酸纤维素、丙酸丁酸纤维素、二乙酸纤维素、三乙酸纤维素、纤维素醚、羧甲基纤维素、或其任何共聚物。

35.如权利要求29所述的方法，其中所述指示剂组合物包括多种聚合物；并且所述多种聚合物中的一种聚合物是乙酸丁酸纤维素。

36.如权利要求29所述的方法，其中所述离子平衡试剂选自二(长链烷基)二甲基氯化铵、N-甲基-N,N-双(长链烷酰氧基乙基)-N-(2-羟基乙基)甲基硫酸铵、乙烯基苄基二甲基椰油基氯化铵、甲基三辛基氯化铵、三辛酰基甲基氯化铵、三(十二烷基)甲基氯化铵或鲸蜡基三甲基氯化铵。

37.如权利要求29所述的方法，其中所述指示剂带负电荷。

38.如权利要求29所述的方法，其中所述指示剂是弱酸。

39.如权利要求29所述的方法，其中所述指示剂选自甲酚红、茜素、溴甲酚紫、氯酚红、硝嗪黄、溴百里酚蓝、溴二甲苯酚蓝、中性红、酚红、百里酚蓝、二甲苯酚蓝或间甲酚紫。