HK1220865B - Mice that make heavy chain antibodies - Google Patents

Claims (16)

1. Procédé de fabrication d'un anticorps ou d'isolement d'une cellule qui le produit, le procédé comprenant les étapes consistant à :

   a. immuniser une souris avec un antigène d'intérêt, la souris comprenant une région constante de chaîne lourde d'immunoglobuline endogène comprenant un gène de région constante d'IgG qui est dépourvu de séquence codant pour une région CH1 en raison d'une modification génétique de lignée germinale qui comprend la suppression d'une séquence nucléotidique codant pour le domaine CH1, et un gène de région constante d'IgM endogène qui code pour un domaine CH1 fonctionnel, la souris exprimant un IgM qui comprend un domaine CH1 fonctionnel et un IgG dépourvu de domaine CH1 en totalité;

   b. laisser la souris présenter une réponse immunitaire contre l'antigène d'intérêt ; et

   c. isoler à partir de la souris une cellule qui produit un anticorps qui se lie spécifiquement à l'antigène d'intérêt.
2. Procédé de la revendication 1, dans lequel la souris comprend en outre un remplacement de l'ensemble ou sensiblement de l'ensemble des segments de gène V, D et J de chaîne lourde d'immunoglobuline par au moins un segment de gène VH de chaîne lourde d'immunoglobuline humaine, DH de chaîne lourde d'immunoglobuline humaine et JH de chaîne lourde d'immunoglobuline humaine, l'au moins un segment de gène VH, DH et JH de chaîne lourde d'immunoglobuline humaine étant opérationnellement lié au niveau du locus de souris endogène à la région constante de chaîne lourde d'immunoglobuline endogène.
3. Procédé de la revendication 2, dans lequel l'anticorps comprend une région variable de chaîne lourde d'immunoglobuline humaine.
4. Procédé de l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le gène de région constante d'IgG endogène est choisi dans le groupe constitué par un gène de région constante d'IgG 1, un gène de région constante d'IgG2b, un gène de région constante d'IgG2a et leurs combinaisons, le gène de région constante d'IgG étant de préférence un gène de région constante d'IgG 1.
5. Procédé de la revendication 4, dans lequel le gène de région constante d'IgG endogène est un gène de région constante d'IgG 1 et la souris exprime en outre (a) une protéine IgG3 de type sauvage ; (b) une protéine IgG2a de type sauvage ; et (c) une protéine IgG2b de type sauvage, la souris exprimant en outre de préférence (d) une protéine IgM de type sauvage ; (e) une protéine IgD de type sauvage, (f) une protéine IgA de type sauvage ; et (h) une protéine IgE de type sauvage.
6. Procédé de l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel :

   (a) l'anticorps de chaîne lourde d'IgG endogène comprend une charnière IgG1, un domaine CH2 et un domaine CH3 ;

   (b) la souris comprend un locus de chaîne légère d'immunoglobuline fonctionnel, le locus de chaîne légère d'immunoglobuline étant de préférence un locus de gène de chaîne légère κ ou un locus de gène de chaîne légère X ; et/ou

   (c) la souris est une souche choisie dans le groupe constitué par une souche 129, une souche C57BL/6 et une souche mixte 129 x C57BL/6, la souris étant de préférence à 50 % 129 et à 50 % C57BL/6.
7. Procédé d'isolement d'un acide nucléique codant pour un anticorps de chaîne lourde, le procédé comprenant les étapes consistant à :

   a. immuniser une souris avec un antigène d'intérêt, la souris comprenant une région constante de chaîne lourde d'immunoglobuline endogène comprenant un gène de région constante d'IgG qui est dépourvu de séquence codant pour une région CH1 en raison d'une modification génétique de lignée germinale qui comprend une suppression d'une séquence nucléotidique codant pour le domaine CH1, et une région constante d'IgM endogène qui code pour un domaine CH1 fonctionnel, la souris exprimant un IgM qui comprend un domaine CH1 fonctionnel et un IgG dépourvu de domaine CH1 en totalité ;

   b. laisser la souris présenter une réponse immunitaire contre l'antigène d'intérêt ; et

   c. isoler à partir de la souris une cellule qui produit un anticorps qui se lie spécifiquement à l'antigène d'intérêt, et

   d. isoler des acides nucléiques de région variable de chaîne lourde d'immunoglobuline à partir de la cellule isolée à l'étape (c).
8. Procédé de la revendication 7, dans lequel la souris comprend en outre un remplacement de l'ensemble ou sensiblement de l'ensemble des segments de gène V, D et J de chaîne lourde d'immunoglobuline par au moins un segment de gène VH de chaîne lourde d'immunoglobuline humaine, DH de chaîne lourde d'immunoglobuline humaine et JH de chaîne lourde d'immunoglobuline humaine, l'au moins un segment de gène VH, DH et JH de chaîne lourde d'immunoglobuline humaine étant opérationnellement lié au niveau d'un locus de souris endogène à la région constante de chaîne lourde d'immunoglobuline endogène.
9. Procédé de la revendication 8, dans lequel l'anticorps comprend une région variable de chaîne lourde d'immunoglobuline humaine.
10. Procédé de l'une quelconque des revendications 7 à 9, dans lequel le gène de région constante d'IgG endogène est choisi dans le groupe constitué par un gène de région constante d'IgG 1, un gène de région constante d'IgG2b, un gène de région constante d'IgG2a et leurs combinaisons, le gène de région constante d'IgG étant de préférence un gène de région constante d'IgG 1.
11. Procédé de la revendication 10, dans lequel le gène de région constante d'IgG endogène est un gène de région constante d'IgG1 et la souris exprime en outre (a) une protéine IgG3 de type sauvage ; (b) une protéine IgG2a de type sauvage ; et (c) une protéine IgG2b de type sauvage, la souris exprimant en outre de préférence (d) une protéine IgM de type sauvage ; (e) une protéine IgD de type sauvage, (f) une protéine IgA de type sauvage ; et (h) une protéine IgE de type sauvage.
12. Procédé de l'une quelconque des revendications 7 à 11, dans lequel :

    (a) l'anticorps de chaîne lourde d'IgG endogène comprend une charnière IgG1, un domaine CH2 et un domaine CH3 ;

    (b) la souris comprend un locus de chaîne légère d'immunoglobuline fonctionnel, le locus de chaîne légère d'immunoglobuline étant de préférence un locus de gène de chaîne légère κ ou un locus de gène de chaîne légère X ; et/ou

    (c) la souris est une souche choisie dans le groupe constitué par une souche 129, une souche C57BL/6 et une souche mixte 129 x C57BL/6, la souris étant de préférence à 50 % 129 et à 50 % C57BL/6.
13. Procédé de l'une quelconque des revendications 1 à 12, comprenant en outre les étapes consistant à d. produire un hybridome à partir de la cellule isolée à l'étape (c), la cellule produisant un anticorps spécifique de l'antigène.
14. Procédé de la revendication 13, comprenant en outre l'étape consistant à d. isoler des acides nucléiques de région variable de chaîne lourde à partir de l'hybridome produit à l'étape (d).
15. Hybridome formé selon la revendication 13, l'hybridome comprenant une région constante de chaîne lourde d'immunoglobuline endogène comprenant un gène de région constante d'IgG qui est dépourvu de séquence codant pour une région CH1 en raison d'une modification génétique de lignée germinale qui comprend une suppression d'une séquence nucléotidique codant pour le domaine CH1.
16. Hybridome de la revendication 15, dans lequel la région constante de chaîne lourde d'immunoglobuline endogène comprend en outre une région de commutation de souris.