HK1220865B - Mice that make heavy chain antibodies - Google Patents

Claims (16)

1. Verfahren zum Herstellen eines Antikörpers oder Isolieren einer Zelle, die diesen produziert, wobei das Verfahren umfasst:

   a. Immunisieren einer Maus mit einem Antigen von Interesse, wobei die Maus eine konstante Region der schweren Kette von endogenem Immunglobulin umfasst, die ein Gen der konstanten IgG-Region umfasst, dem es an einer Sequenz mangelt, die für eine CH1-Region codiert, was auf eine genetische Keimbahnmodifikation zurückzuführen ist, die eine Deletion einer für die CH1-Domäne codierenden Nukleotidsequenz umfasst, und ein Gen der konstanten Region von endogenem IgM, das für eine funktionelle CH1-Domäne codiert, wobei die Maus ein IgM, das eine funktionelle CH1-Domäne umfasst, und ein IgG, dem es an einer CH1-Domäne als Ganzes mangelt, exprimiert;

   b. Zulassen, dass die Maus eine Immunantwort auf das Antigen von Interesse zeigt; und

   c. Isolieren einer Zelle aus der Maus, die einen Antikörper produziert, der das Antigen von Interesse spezifisch bindet.
2. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Maus ferner eine Substitution aller oder im Wesentlichen aller V-, D- und J-Gensegmente der schweren Kette von Immunglobulin durch ein oder mehrere VH-Gensegmente der schweren Kette von humanem Immunglobulin, DH-Gensegmente der schweren Kette von humanem Immunglobulin und JH-Gensegmente der schweren Kette von humanem Immunglobulin, wobei das eine oder die mehreren VH-, DH- und JH-Gensegmente der schweren Kette von humanem Immunglobulin am endogenen Maus-Lokus operativ mit der konstanten Region der schweren Kette von endogenem Immunglobulin verknüpft sind.
3. Verfahren nach Anspruch 2, wobei der Antikörper eine variable Region der schweren Kette von humanem Immunglobulin umfasst.
4. Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, wobei das Gen der konstanten Region von endogenem IgG aus der Gruppe ausgewählt ist, bestehend aus einem Gen der konstanten IgG1-Region, einem Gen der konstanten Region der konstanten IgG2b-Region, einem Gen der konstanten Region der konstanten IgG2a-Region und Kombinationen davon, vorzugsweise wobei das Gen der konstanten IgG-Region ein Gen der konstanten IgG1-Region ist.
5. Verfahren nach Anspruch 4, wobei das Gen der konstanten Region von endogenem IgG ein Gen der konstanten IgG 1-Region ist und die Maus ferner (a) Wildtyp-IgG3-Protein; (b) Wildtyp-IgG2a-Protein; und (c) Wildtyp-IgG2b-Protein exprimiert, vorzugsweise wobei die Maus ferner (d) Wildtyp-IgM-Protein; (e) Wildtyp-IgD-Protein, (f) Wildtyp-IgA-Protein; und (h) Wildtyp-IgE-Protein exprimiert.
6. Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, wobei:

   (a) der Antikörper der schweren Kette von endogenem IgG ein IgG1-Gelenk, eine CH2-Domäne und eine CH3-Domäne umfasst;

   (b) die Maus einen funktionellen Lokus der leichten Kette von Immunglobulin umfasst, vorzugsweise wobei der Lokus der leichten Kette von Immunglobulin ein Genlokus der leichten κ-Kette oder ein Genlokus der leichten λ-Kette ist; und/oder

   (c) die Maus ein Stamm ist, der aus der Gruppe ausgewählt ist, bestehend aus einem 129-Stamm, einem C57BL/6-Stamm, einem gemischten 129-x-C57BL/6-Stamm, vorzugsweise wobei die Maus 50 % 129 und 50 % C57BL/6 ist.
7. Verfahren zum Isolieren einer Nukleinsäure, die für einen Antikörper der schweren Kette codiert, wobei das Verfahren umfasst:

   a. Immunisieren einer Maus mit einem Antigen von Interesse, wobei die Maus eine konstante Region der schweren Kette von endogenem Immunglobulin umfasst, die ein Gen der konstanten IgG-Region, dem es an einer Sequenz mangelt, die für eine CH1-Region codiert, was auf eine genetische Keimbahnmodifikation zurückzuführen ist, die eine Deletion einer für die CH1-Domäne codierenden Nukleotidsequenz umfasst, und ein Gen der konstanten Region von endogenem IgM-Gen umfasst, die für eine funktionelle CH1-Domäne codiert, wobei die Maus ein IgM, das eine funktionelle CH1-Domäne umfasst, und ein IgG, dem es an einer CH1-Domäne als Ganzes mangelt, exprimiert;

   b. Zulassen, dass die Maus eine Immunantwort auf das Antigen von Interesse zeigt; und

   c. Isolieren einer Zelle aus der Maus, die einen Antikörper produziert, der das Antigen von Interesse spezifisch bindet, und

   d. Isolieren von Nukleinsäuren der variablen Region der schweren Kette von Immunglobulin aus der unter (c) isolierten Zelle.
8. Verfahren nach Anspruch 7, wobei die Maus ferner eine Substitution aller oder im Wesentlichen aller V-, D- und J-Gensegmente der schweren Kette von Immunglobulin durch ein oder mehrere VH-Gensegmente der schweren Kette von humanem Immunglobulin, DH-Gensegmente der schweren Kette von humanem Immunglobulin und JH-Gensegmente der schweren Kette von humanem Immunglobulin, wobei das eine oder die mehreren VH-, DH- und JH-Gensegmente der schweren Kette von humanem Immunglobulin an einem endogenen Maus-Lokus operativ mit der konstanten Region der schweren Kette von endogenem Immunglobulin verknüpft sind.
9. Verfahren nach Anspruch 8, wobei der Antikörper eine variable Region der schweren Kette von humanem Immunglobulin umfasst.
10. Verfahren nach einem der Ansprüche 7 bis 9, wobei das Gen der konstanten Region von endogenem IgG aus der Gruppe ausgewählt ist, bestehend aus einem Gen der konstanten IgG1-Region, einem Gen der konstanten Region der konstanten IgG2b-Region, einem Gen der konstanten Region der konstanten IgG2a-Region und Kombinationen davon, vorzugsweise wobei das Gen der konstanten IgG-Region ein Gen der konstanten IgG 1-Region ist.
11. Verfahren nach Anspruch 10, wobei das Gen der konstanten Region von endogenem IgG ein Gen der konstanten IgG 1-Region ist und die Maus ferner (a) Wildtyp-IgG3-Protein; (b) Wildtyp-IgG2a-Protein; und (c) Wildtyp-IgG2b-Protein exprimiert, vorzugsweise wobei die Maus ferner (d) Wildtyp-IgM-Protein; (e) Wildtyp-IgD-Protein, (f) Wildtyp-IgA-Protein; und (h) Wildtyp-IgE-Protein exprimiert.
12. Verfahren nach einem der Ansprüche 7 bis 11, wobei:

    (a) der Antikörper der schweren Kette von endogenem IgG ein IgG 1 -Gelenk, eine CH2-Domäne und eine CH3-Domäne umfasst;

    (b) die Maus einen funktionellen Lokus der leichten Kette von Immunglobulin umfasst, vorzugsweise wobei der Lokus der leichten Kette von Immunglobulin ein Genlokus der leichten κ-Kette oder ein Genlokus der leichten λ-Kette ist; und/oder

    (c) die Maus ein Stamm ist, der aus der Gruppe ausgewählt ist, bestehend aus einem 129-Stamm, einem C57BL/6-Stamm, einem gemischten 129-x-C57BL/6-Stamm, vorzugsweise wobei die Maus 50 % 129 und 50 % C57BL/6 ist.
13. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 12, das ferner die Schritte umfasst: d. Produzieren eines Hybridoms aus der unter (c) isolierten Zelle, wobei die Zelle einen für das Antigen spezifischen Antikörper produziert.
14. Verfahren nach Anspruch 13, das ferner als Schritt umfasst: f. Isolieren von Nukleinsäuren der variablen Region der schweren Kette aus dem unter (d) produzierten Hybridom.
15. Hybridom, das gemäß einem Verfahren nach Anspruch 13 gebildet wird, wobei das Hybridom eine konstante Region der schweren Kette von endogenem Immunglobulin umfasst, die ein Gen der konstanten IgG-Region umfasst, dem es an einer Sequenz mangelt, die für eine CH1-Region codiert, was auf eine genetische Keimbahnmodifikation zurückzuführen ist, die eine Deletion einer für die CH1-Domäne codierenden Nukleotidsequenz umfasst.
16. Hybridom nach Anspruch 15, wobei die konstante Region der schweren Kette von endogenem Immunglobulin ferner eine Maus-Switch-Region umfasst.