HK1220371B

HK1220371B - 用於眼科应用的醌基一氧化氮供体化合物

Info

Publication number: HK1220371B
Application number: HK16108444.7A
Authority: HK
Inventors: Nicoletta Almirante; Laura Storoni; Gael Ronsin; Elena Bastia
Original assignee: Nicox Sa
Priority date: 2013-04-18
Filing date: 2014-04-14
Publication date: 2018-07-27

Description

用于眼科应用的醌基一氧化氮供体化合物

本发明涉及用于治疗和/或预防青光眼和高眼压症的式(I)的一氧化氮供体化合物及其用途。

本发明还涉及包含式(I)的一氧化氮供体化合物和一种或多种用于治疗和/或预防青光眼和高眼压症的其它活性成分的组合产品。

青光眼、包括正常眼压性青光眼和高眼压青光眼是一种特征在于由于不可逆的视神经损伤所引起的视野逐渐损失的眼疾病，如果不加治疗，可能导致完全失明。当眼睛内的液体(房水)的产生和排出失衡使眼压增加至不健康的水平时，就会出现高眼压青光眼。

相反，尽管眼内压保持在合理的低水平，也会发生正常眼压性青光眼。

在一种形式的原发性开角青光眼(POAG)中，视野的损失与患病眼中持续的眼内压增加有关。此外，没有视野损失的眼内压升高被认为是这种形式的POAG的早期阶段的征兆。

正常眼压性青光眼是一种慢性进行性视神经病变，其导致典型的视神经头变化、视网膜神经纤维层缺陷和特征性的视野缺陷。此外，前房角是开放的，并且眼内压值在统计学正常限内(低于22mmHg)(Lee等人,1998；综述参阅Hoyng和Kitazawa 2002)。

有证据表明，通过降低眼内压治疗正常眼压性青光眼能减缓青光眼的进程。至少需要使眼内压降低30％以引起这种疾病的有利的改变。

除了这两种主要类型的青光眼外，其它疾病也可导致眼内压的升高，即，继发性青光眼，包括葡萄膜炎后的青光眼和类固醇性青光眼。

现有技术中的青光眼治疗在于通过给予可减少眼内房水产生或增加液体排出的药物来降低眼内压，如β受体阻滞剂、α受体激动剂、胆碱能剂、碳酸酐酶抑制剂或前列腺素类似物。

常规用于治疗青光眼的药物有多种副作用。

局部β受体阻滞剂显示严重的肺副作用、抑郁、疲劳、意识模糊、阳痿、脱发、心力衰竭和心动过缓。

局部α受体激动剂有相当高的过敏或毒性反应发生率；局部胆碱能剂(缩瞳剂)会引起视觉的副作用。

与口服碳酸酐酶抑制剂相关的副作用包括疲劳、厌食、抑郁、感觉异常和血清电解质异常(The Merck Manual of Diagnosis and Therapy,第17版,M.H.Beers和R.Berkow编,Sec.8,Ch.100)。

最后，用于治疗青光眼的局部前列腺素类似物(比马前列素、拉坦前列素、曲伏前列素、他氟前列素和乌诺前列酮)可以产生眼部的副作用，如增加虹膜的色素沉着、眼部刺激、结膜充血、虹膜炎、葡萄膜炎和黄斑水肿(Martindale,第33版,p.1445)。

黄斑疾病、如年龄相关性黄斑变性和糖尿病黄斑水肿是失明的主要原因。目前用于治疗黄斑疾病的药物是甾体类抗炎药，如去炎松缩丙酮或氟轻松。然而，玻璃体内注射去炎松会伴有多种眼部并发症、包括眼内压升高。

眼内压升高是眼部手术如玻璃体切除术、玻璃体视网膜手术、视网膜脱离手术、全视网膜光凝术后常见的一种术后并发症。

众所周知，眼内的一氧化氮(NO)在某些生理过程如调节房水动力学、血管张力、视网膜神经传递、视网膜神经节细胞的凋亡、光传导和眼部免疫反应中起重要作用，另一方面，NO的过度产生与许多眼部疾病有关。

美国专利4590207公开了用于治疗和/或预防眼内高压和青光眼的包含单硝酸异山梨酯作为活性成分的眼科溶液。

美国专利申请2002/0168424公开了一氧化氮(NO)供体如硝基血管扩张药如米诺地尔、硝酸甘油、L-精氨酸、二硝酸异山梨酯或硝普盐与环鸟苷3’,5’-一磷酸(cGMP)特异性5型磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂如枸橼酸西地那非的混合物用于治疗青光眼或高眼压症的用途。所公开的组合可促进系统性血管舒张、视神经血流量的增加、小梁网、巩膜静脉窦和葡萄膜巩膜流出渠道组织的扩张、房水引流的增加，从而降低哺乳动物眼睛的眼内压(IOP)。

有机硝酸酯用于治疗心脏疾病已经使用了一个世纪以上，然而，已知治疗用的经典有机硝酸酯如硝酸甘油、二硝酸异山梨酯或5-单硝酸异山梨酯在反复给药时会发生耐受并失去其活性。即使药物血浆浓度升高，仍然出现硝酸酯耐受，这反映了血管敏感性对先前的治疗水平降低。这可通过在给药方案中包含硝酸酯停药期来防止或减少。

英国专利申请号GB 2 349 385 A公开了用作血管扩张剂用于治疗与血管内皮功能障碍有关的病理学情况、特别是心脏病的抗氧化剂硝酸酯或亚硝酸酯。

所公开的化合物含有超氧化物清除剂部分和硝酸酯或亚硝酸酯基团，并且这两部分被稳定的连接以降低在生理条件下的分子降解。稳定的连接增加了抗氧化剂清除剂的活性，从而可以避免进一步产生有害物质的活性氧介导的NO消耗。

因此，本发明所要解决的技术问题是提供用于治疗和/或预防高眼压青光眼、正常眼压性青光眼、继发性青光眼和高眼压症的有效治疗剂。

令人惊讶的是，现已发现本发明的一氧化氮供体可降低眼内压，并且出现的耐受性显著低于现有技术中描述的一氧化氮供体。

还惊讶地发现，本发明的一氧化氮供体还额外具有有益的抗炎和抗氧化性能，这些性能与递送一氧化氮协同地在促进对于房水通过小梁网流出的调控、细胞修复和保护中发挥作用。

本发明涉及式(I)化合物或其立体异构体。

本发明涉及式(I)化合物

或其立体异构体，其中:

R₁选自H、甲基、甲氧基；

R₂是H或甲基；

R₃选自H、甲基、甲氧基；

或者R₁和R₃一起形成–CH＝CH-CH＝CH-；

R₄和R₅是甲基并且n是1，或者

R₄是H，R₅选自苯基、对-氟苯基、对-甲氧基苯基、对-异丙基苯基、对-三氟甲基苯基和对-甲基苯基并且n是2；

m是从1至10的整数，优选m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是0或1；

R₆是H或甲基。

本发明的另一个实施方案提供了如上所定义的式(I)化合物或其立体异构体，其中:

R₁选自H、甲基、甲氧基；

R₂是甲基；

R₃选自H、甲基、甲氧基；

或者R₁和R₃一起形成–CH＝CH-CH＝CH-；

R₄和R₅是甲基并且n是1,

m是从1至10的整数，优选m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是0或1；

R₆是H或甲基。

R₁选自H、甲基、甲氧基；

R₂是甲基；

R₃选自H、甲基、甲氧基；

或者R₁和R₃一起形成–CH＝CH-CH＝CH-；

R₄和R₅是甲基并且n是1,

m是从1至10的整数，优选m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是0并且R₆是H。

R₁选自H、甲基、甲氧基；

R₂是甲基；

R₃选自H、甲基、甲氧基；

或者R₁和R₃一起形成–CH＝CH-CH＝CH-；

m是从1至10的整数，优选m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是0或1；

R₆是H或甲基。

R₁选自H、甲基、甲氧基；

R₂是甲基；

R₃选自H、甲基、甲氧基；

或者R₁和R₃一起形成–CH＝CH-CH＝CH-；

m是从1至10的整数，优选m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是0并且R₆是H。

R₁选自H、甲基、甲氧基；

R₂是甲基；

R₃选自H、甲基、甲氧基；

或者R₁和R₃一起形成–CH＝CH-CH＝CH-；

m是从1至10的整数，优选m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是1并且R₆是H或甲基，优选R₆是H。

R₁、R₂和R₃是甲基；

R₄和R₅是甲基并且n是1；

m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是0或1；

R₆是H或甲基。

R₁、R₂和R₃是甲基；

R₄和R₅是甲基并且n是1；

m是从1至6的整数；

p是0并且R₆是H。

R₁、R₂、R₃是甲基；

m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是0或1；

R₆是H或甲基。

本发明的另一个实施方案提供了式(I)化合物或其立体异构体，其中:

R₁、R₂、R₃是甲基；

m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是0并且R₆是H。

R₁是甲氧基；

R₂是甲基；

R₃是甲氧基；

R₄和R₅是甲基并且n是1；

m是从1至10的整数，优选m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是0或1；

R₆是H或甲基。

R₁是甲氧基；

R₂是甲基；

R₃是甲氧基；

R₄和R₅是甲基并且n是1；

m是从1至10的整数，优选m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是0并且R₆是H。

R₁是甲氧基；

R₂是甲基；

R₃是甲氧基；

m是从1至10的整数，优选m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是0或1；

R₆是H或甲基。

R₁是甲氧基；

R₂是甲基；

R₃是甲氧基；

m是从1至10的整数，优选m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是0并且R₆是H。

R₂是甲基；

R₁和R₃一起形成–CH＝CH-CH＝CH-；

R₄和R₅是甲基并且n是1；

m是从1至10的整数，优选m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是0或1；

R₆是H或甲基。

R₂是甲基；

R₁和R₃一起形成–CH＝CH-CH＝CH-；

R₄和R₅是甲基并且n是1；

m是从1至10的整数，优选m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是0并且R₆是H。

R₂是甲基；

R₁和R₃一起形成–CH＝CH-CH＝CH-；

m是从1至10的整数，优选m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是0或1；

R₆是H或甲基。

R₂是甲基；

R₁和R₃一起形成–CH＝CH-CH＝CH-；

m是从1至10的整数，优选m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是0并且R₆是H。

R₁是甲基；

R₂是甲基；

R₃是甲氧基；

R₄和R₅是甲基并且n是1；

m是从1至10的整数，优选m是从1至的整数，最优选4或6；

p是0或1；

R₆是H或甲基。

R₁是甲基；

R₂是甲基；

R₃是甲氧基；

R₄和R₅是甲基并且n是1；

m是从1至10的整数，优选m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是0并且R₆是H。

R₁是甲基；

R₂是甲基；

R₃是甲氧基；

m是从1至10的整数，优选m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是0或1；

R₆是H或甲基。

R₁是甲基；

R₂是甲基；

R₃是甲氧基；

m是从1至10的整数，优选m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是0并且R₆是H。

R₁是甲氧基；

R₂是甲基；

R₃是甲基；

R₄和R₅是甲基并且n是1；

m是从1至10的整数，优选m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是0或1；

R₆是H或甲基。

R₁是甲氧基；

R₂是甲基；

R₃是甲基；

R₄和R₅是甲基并且n是1；

m是从1至10的整数，优选m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是0并且R₆是H。

R₁是甲氧基；

R₂是甲基；

R₃是甲基；

m是从1至10的整数，优选m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是0或1；

R₆是H或甲基。

R₁是甲氧基；

R₂是甲基；

R₃是甲基；

m是从1至10的整数，优选m是从1至6的整数，最优选4或6；

p是0并且R₆是H。

本发明的另一个实施方案提供了选自下列的式(I)化合物:

及其立体异构体。

本发明的另一个实施方案提供了式(I)化合物用于治疗高眼压青光眼、正常眼压性青光眼、继发性青光眼和高眼压症的用途。

所进行的试验证实，式(I)化合物表现出与众所周知的抗氧化剂化合物如阿魏酸和咖啡酸或依达拉奉相当的抗氧化剂活性。

此外，本发明的化合物在兔子的短暂性高眼压体内模型中显著减弱盐水诱导的眼内压(IOP)增加。

因此，本发明的化合物可用作药物用于预防和/或治疗其中NO的缺乏以及氧化应激均在其发病机理中起重要作用的眼科疾病。

本发明的另一个实施方案涉及用于治疗和/或预防高眼压青光眼、正常眼压性青光眼、继发性青光眼和高眼压症的式(I)化合物。

本发明的另一个实施方案涉及用于治疗由眼眶水肿、术后并发症、眼内炎症、瞳孔阻塞或特发性原因引起的高眼压的式(I)化合物。

此外，本发明还涉及用于治疗和/或预防年龄相关性黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、视网膜静脉阻塞、黄斑变性、炎症性视网膜病、葡萄膜炎的式(I)化合物。

本发明还涉及包含式(I)的一氧化氮供体和一种或多种选自下列的其它活性成分的组合的组合物：α肾上腺素能受体激动剂、β受体阻滞剂、碳酸酐酶抑制剂、前列腺素类似物、非甾体抗炎药、甾体抗炎药。

适当的α肾上腺素能受体激动剂的实例是溴莫尼定、阿可乐宁、可乐定。

适当的β受体阻滞剂的实例是噻吗洛尔、卡替洛尔、倍他洛尔、左布诺洛尔。

适当的碳酸酐酶抑制剂的实例是多佐胺、乙酰唑胺、布林佐胺、多佐胺、双氯非那胺、甲醋唑胺。

适当的前列腺素类似物的实例是比马前列素、拉坦前列素、曲伏前列素、乌诺前列酮和他氟前列素。

非甾体抗炎药的实例是溴芬酸、氟比洛芬、萘普生、酮洛芬。

甾体抗炎药的实例是地塞米松、氟西奈德、曲安奈德、布地奈德、泼尼松龙。

本发明的另一个实施方案是用于治疗和/或预防高眼压青光眼、正常眼压性青光眼、继发性青光眼和高眼压症的以上所述的组合物。

本发明的另一个实施方案是用于治疗和/或预防继发性青光眼、年龄相关性黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、黄斑变性、炎症性视网膜病、葡萄膜炎的以上所述的组合物。

本发明的另一个实施方案是用于治疗由眼眶水肿、术后并发症、眼内炎症、瞳孔阻塞或特发性原因引起的高眼压的以上所述的组合物。

本发明的另一个实施方案提供了用于局部、眼周或眼内给药的包含至少一种式(I)的一氧化氮供体和至少一种眼科可接受的成分和/或眼科可接受的载体的药物制剂。

本发明的另一个实施方案提供了用于局部、眼周或眼内给药的包含至少一种式(I)的一氧化氮供体和一种或多种选自α肾上腺素能受体激动剂、β受体阻滞剂、碳酸酐酶抑制剂、前列腺素类似物、非甾体抗炎药、甾体抗炎药的其它活性成分以及至少一种眼科可接受的成分和/或眼科可接受的载体的药物制剂。

本发明的化合物和组合物的优选给药途径是局部或玻璃体内给药。本发明的化合物和组合物可以以溶液剂、混悬剂或乳剂(分散液)的形式局部应用。

用于本发明的化合物还可以通过眼周给药，并且可以配制成用于眼周给药的溶液或混悬液。用于眼周给药的制剂通常是眼周注射剂或手术冲洗液。眼周给药是指向眼睛附近的组织给药，例如向眼眶内的眼球周围的组织或空间给药。眼周给药可以通过注射、沉积或任何其它安置方式来进行。

本发明的化合物和组合物可以配制成用于眼内给药的溶液或混悬液。用于眼内给药的组合物通常是眼内注射剂组合物或手术冲洗液。

“眼科可接受的”成分是指在其预期应用的浓度下和预期使用的时间内不会造成任何明显的眼损伤或眼部不适的成分。增溶剂和稳定剂应当是非反应性的。“眼科可接受的”载体是指不会与化合物发生反应并且适于对患者给药的任何物质或物质的组合。

本发明的一氧化氮供体通常以约0.001到约10.0％重量/体积的量包含在本文所述的局部、眼周或眼内制剂中。优选的浓度范围为约0.1到约5.0％w/v。

一般合成方法

其中的R₁、R₂、R₃、R₆、m和p如上所定义、R₄和R₅是甲基且n是1的式(I)的化合物可通过如下方式制备:

如流程1所示，将化合物(Va)与其中R₆、m和p如上所定义的式(VI)的化合物在偶联试剂例如DCC、EDC、HBTU、HATU和催化量的DMAP或Sc(OTf)₃的存在下、在非质子/非极性溶剂例如THF、DMF或CH₂Cl₂的存在下在-80℃至60℃的温度下反应；或者

如流程1所示，将其中Xa是选自N₃、F、Cl、Br或者式(Xaa)或(Xbb)所示的基团的活化基团、优选Cl或(Xaa)的式(Vb)的化合物

与化合物(VI)在碱例如DMAP、吡啶或三乙胺或K₂CO₃、Cs₂CO₃的存在下在非质子/非极性溶剂例如THF、DMF或CH₂Cl₂中在-80℃至60℃的温度下反应:

式(Vb)的化合物可以通过已知的方法从相应的式(Va)的化合物制备。式(Va)的化合物通常可以按照流程2所示，通过Carpino等人,J.Org.Chem.,1989,54,3303-3310所述的方法制备。

按照Carpino等人的文献,J.Org.Chem.,1989,54,3303-3310中的描述将通式(III)的氢醌与甲磺酸和3-甲基丁-2-烯酸甲酯反应得到内酯(IV)。

式(Va)的化合物通过将化合物(IV)与氧化剂例如新结晶的NBS或PDC按照Borchardt等人,J.Am.Chem.Soc.,1972,94,9175和Carpino等人,J.Org.Chem.,1989,54,3303-3310所述的条件反应来制备。

式(III)的化合物可购买到或者可以通过将相应的式(II)的醌利用还原剂例如NaBH₄在甲醇中还原来制备(流程3)。

式(II)的醌可购买到或者可以通过文献中所述的方法来制备。

其中的m、p和R₆如上所定义的式(VI)的化合物是文献中已知的或者可以从相应的式(VIIa)的醇开始

其中PG是适宜的羟基保护基，优选酯例如苯甲酸酯，并且m、p和R₆如上所定义，通过与硝酸和乙酸酐在-50℃至20℃的温度范围内反应，或者通过与三氟甲磺酸酐/四烷基硝酸铵盐在非质子极性/非极性溶剂例如DMF、THF或CH₂Cl₂中、在-80℃至65℃的温度范围内、在碱例如吡啶、二甲基吡啶、2,6-二-叔丁基-4-甲基吡啶的存在下反应，然后通过已知的方法除去保护基(参见例如:T.W.Greene,P.G.M.Wuts"Protective groups in organicSynthesis",第4版,J.Wiley&Sons,New York,2006)来合成。

或者，可以首先将(VIIa)的羟基转化成相应的甲磺酰基或甲苯磺酰基或三氟甲磺酸酯基团，然后用已知的方法、例如四烷基硝酸铵和硝酸钠硝化，然后通过本领域已知的方法除去保护基。

或者，其中的m和R₆如上所定义、p是0的式(VI)的化合物可以通过将其中Q是H或PG(其中PG如前所定义)并且X是卤素原子例如Cl、Br、I的相应的卤素衍生物(VIIb)与硝化试剂例如AgNO₃在乙腈中按照文献中已知的方法反应，然后通过本领域已知的方法除去Q保护基(如果存在的话)来合成。

其中的m如前所定义、p是1并且R₆是H或CH₃的式(VIIa)的化合物可以通过将相应的式(VIIIb)的链烯基醇与二羟基化试剂例如ADmixα或ADmixβ或KMnO₄、OsO₄在1/1的质子/非质子溶剂例如tBuOH、H₂O的混合物中、任选地在活化剂例如甲磺酰胺的存在下在-20至30℃的温度范围内反应来合成，并任选地随后进行二醇(VIIa)的手性分离

式(VIIIb)的化合物通过用已知的方法(参见，例如:T.W.Greene,P.G.M.Wuts"Protective groups in organic Synthesis",第4版,J.Wiley&Sons,New York,2006)，利用以上定义的适宜的PG基团保护游离羟基从化合物(VIIIa)制备。

化合物(VIIIa)是可商购获得的或者可以从已知化合物利用已知的方法制备。

或者，其中的m如上所定义、p是1并且R₆是H的化合物(VI)可以通过将化合物(VIIIb)与I₂和AgNO₃在乙腈中按照文献中的描述进行反应来制备(参见Cena,C.等人,Bioorganic&Medicinal Chemistry 2008,16,5199–5206)。

或者，其中的m如上所定义、p是1并且R₆是CH₃的化合物(VI)可以从化合物(VIIa)按照流程4所示，通过如下步骤获得:

1)保护化合物(VIIa)的伯羟基

2)保护仲羟基得到式(X)的化合物，其中PG₁是三苯基甲基并且PG₂是TBDPS、TBDMS或TIPS。

3)除去保护基PG₁并将化合物(XI)用已知的方法氧化成醛得到化合物(XII)

4)将化合物(XII)与化合物(XIII)在手性氨基醇催化剂例如(1S,2R)-(-)-(二丁基氨基)-1-苯基-1-丙醇或(1R,2S)-(+)-(二丁基氨基)-1-苯基-1-丙醇或非手性催化剂的存在下、在非质子/非极性溶剂例如甲苯、THF或Et₂O中、在-80℃至65℃的温度下反应

CH₃-D-Z₂

(XIII)

其中D是Zn、Mg或者Cu，优选Zn；Z是R或卤素，优选Cl

5)通过本领域已知的方法除去保护基PG₂得到化合物(VI)。

其中的R₄是H并且R₅选自苯基、对-氟苯基、对-甲氧基苯基、对-异丙基苯基、对-三氟甲基苯基和对-甲基苯基、n是2并且R₁、R₂、R₃、R₆、m和p如上所定义的式(I)的化合物可以通过如下方式制备:

如流程5所示，将其中的R₁、R₂、R₃如上所定义，R₈是H、F、CH₃O-、(CH₃)₂CH-、CF₃-或CH₃-的式(XVIIIa)的化合物与以上所定义的式(VI)的化合物在偶联试剂例如DCC、EDC、HBTU、HATU和催化量的Sc(OTf)₃或DMAP的存在下反应；

如流程5所示，将其中的R₁、R₂、R₃、R₈和Xa如上所定义的式(XVIIIb)的化合物与式(VI)的化合物在碱例如DMAP、吡啶或三乙胺或K₂CO₃、Cs₂CO₃的存在下、在非质子/非极性溶剂例如THF、DMF或CH₂Cl₂中、在-80℃至60℃的温度下反应:

式(XVIIIb)的化合物可以用已知方法，从相应的式(XVIIIa)的化合物制得。

式(XVIIIa)的化合物可以通过将式(XVII)的羧酸(其中R₁、R₂、R₃和R₈如上所述)按照Jurd和Wong,Aust.J.Chem.1980,33,137中所公开的方法氧化来制备，如流程6所示。

式(XVII)的羧酸可以通过酸催化的氢醌(III)和可商购获得的γ-内酯(XVI)之间的偶联反应来制备

实施例1

4-(硝基氧基)丁基3-甲基-3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)丁酸酯(化合物1)的合成

步骤1:6-羟基-4,4,5,7,8-五甲基苯并二氢吡喃-2-酮的合成

采用与Carpino等人，J.Org.Chem.,1989,54,3303-3310中所述的方法相类似的合成方法。

将甲磺酸(20mL)于70℃下加热。同时迅速加入2,3,5-三甲基苯-1,4-二醇(2.0g,13.14mmol)和3-甲基丁-2-烯酸甲酯(1.94mL,13.14mmol,1eq)并将反应液于该温度下加热2小时。然后将反应液倒入水中，并且在冷却后用EtOAc(3x 100mL)萃取。将合并的有机层依次用水、饱和NaHCO₃、水和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)、过滤并蒸发。将残余物用30％CHCl₃的正己烷溶液结晶得到浅灰色固体状标题化合物(1.86g,收率:60％)。熔点:185℃。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ4.63(s,1H),2.54(s,2H),2.36(s,3H),2.22(s,3H),2.18(s,3H),1.45(s,6H)。

步骤2:3-甲基-3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丁酸(中间体2)的合成

该反应按照Borchardt等人，J.Am.Chem.Soc.,1972,94,9175所述的条件进行。

向搅拌着的6-羟基-4,4,5,7,8-五甲基苯并二氢吡喃-2-酮(2.0g,0.853mmol)在10％乙腈水溶液(100mL)中的溶液中加入刚刚重结晶过的NBS(1.6g,0.853mmol,1eq)的乙腈(20mL)溶液。将反应液搅拌1小时然后用水(100mL)稀释并用Et₂O(3x 100mL)萃取。将合并的有机层用水和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)、过滤并蒸发。将残余物用Et₂O/正己烷结晶得到黄色固体状标题化合物(1.64g,收率:77％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ11.08–8.78(m,1H),3.02(s,2H),2.14(s,3H),1.95(s,3H),1.93(s,3H),1.44(s,6H)。

步骤3:4-羟基丁基4-硝基苯甲酸酯的合成

向冷却至0℃的搅拌着的1,4-丁二醇(3.0g,33.29mmol,1.1eq)和4-硝基苯甲酰氯(5.56g,29.96mmol)的EtOAc(100mL)溶液中滴加三乙胺(4.6mL,33.3mmol,1.1eq)并将反应液剧烈搅拌6小时。将反应液用水稀释，将有机层分离，用HCl 0.1M、水和盐洗涤。将有机相干燥(Na₂SO₄)，过滤并蒸发。将残余物在冷的Et₂O中研磨并滤出固体。将滤液蒸发得到粘稠油状标题化合物，其在放置时固化(2.86g,收率:40％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ8.30(d,J＝8.8,2H),8.22(d,J＝8.8,2H),4.44(t,J＝6.5,2H),3.76(t,J＝6.3,2H),1.93(dt,J＝14.4,6.7,2H),1.75(dt,J＝13.2,6.4,2H).

步骤4:4-(硝基氧基)丁基4-硝基苯甲酸酯的合成

将浓硝酸(1.9mL,45.15mmol,3eq)滴加到冷却至0℃的乙酸酐(20mL)中。然后加入固体4-羟基丁基4-硝基苯甲酸酯并将反应液在该温度下搅拌30分钟，然后倒在冰上。融化后，将有机油状物从含水液体中分离并用乙酸乙酯稀释。将有机层用NaHCO₃(2x 30mL)、水和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并蒸发。将残余物通过快速色谱纯化(Biotage系统,SNAP筒装二氧化硅100g,洗脱剂:在8个柱体积(CV)内从正己烷/乙酸乙酯85/15到正己烷/乙酸乙酯75/25)得到黄色油状标题化合物(3.73g,收率:87％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ8.34–8.29(m,2H),8.24–8.19(m,2H),4.56(t,J＝5.9,2H),4.44(t,J＝6.0,2H),1.99–1.90(m,4H)。

步骤5:4-羟基丁基硝酸酯的合成

向冷却至0℃的搅拌着的4-(硝基氧基)丁基4-硝基苯甲酸酯(2.13g,7.49mmol)在3/1 THF/EtOH混合物(40mL)中的溶液中加入NaOH 1M(7.5mL,1eq)。将反应液在该温度下搅拌3小时，然后用EtOAc和水稀释。将有机层分离，用水和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并蒸发。将残余物通过快速色谱纯化(Biotage系统,SNAP筒装二氧化硅100g,洗脱剂:在8个柱体积内从正己烷/乙酸乙酯85/15到正己烷/乙酸乙酯75/25)得到无色油状标题化合物(0.48g,收率:49％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ4.52(t,J＝6.5,2H),3.72(t,J＝6.2,2H),1.87(dt,J＝14.2,6.5,2H),1.75–1.63(m,1H)。

步骤6:4-(硝基氧基)丁基3-甲基-3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)丁酸酯(化合物1)的合成

向冷却至0℃的搅拌着的4-羟基丁基硝酸酯(在步骤5中制备)(2.0g,14.8mmol)和3-甲基-3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丁酸(在步骤2中制备)(3.70g,14.8mmol)在干燥CH₂Cl₂中的溶液中加入EDC(3.12g,16.28mmol,1.1eq)和催化量的DMAP(0.05g)。将反应液在该温度下搅拌5小时然后用水、HCl 1M、水和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并蒸发。将残余物通过快速色谱纯化(Biotage系统,2SNAP筒装二氧化硅340g,洗脱剂:在8个柱体积内从正己烷/乙酸乙酯85/15到正己烷/乙酸乙酯70/30)得到黄色油状标题化合物(5.02g,收率:92％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ4.45(t,J＝6.2,2H),4.01(t,J＝6.1,2H),2.98(s,2H),2.14(s,3H),1.94(s,6H),1.82–1.62(m,4H),1.42(s,6H)。

实施例2

6-(硝基氧基)己基3-甲基-3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)丁酸酯(化合物2)的合成

步骤1:6-硝基氧基-己-1-醇的合成

向6-溴己-1-醇(2.2mL,16.6mmol)的CH₃CN(100mL)溶液中加入硝酸银(5.95g,35mmol,2eq)。将反应液在室温下搅拌3天。通过加入盐水溶液终止反应。搅拌15分钟后，将溶液过滤，用乙酸乙酯萃取，用H₂O、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将残余物通过柱色谱纯化(Biotage系统,SNAP筒装二氧化硅100g,洗脱剂:在12柱体积内从正己烷/乙酸乙酯80/20到正己烷/乙酸乙酯50/50)得到无色油状所需产物(2.34g,收率:86％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)4.47(t,J＝6.6Hz,2H),3.68(t,J＝6.1Hz,2H),1.77(m,2H),1.62(m,2H),1.48(m,4H),1.27(s,1H)。

步骤2:6-(硝基氧基)己基3-甲基-3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)丁酸酯的合成

向冷却至0℃的搅拌着的6-羟基己基硝酸酯(164mg,1.0mmol)和3-甲基-3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丁酸(在实施例1,步骤2中制备)(250mg,1.0mmol)的干燥CH₂Cl₂溶液中加入EDC(202mg,1.1mmol,1.1eq)和催化量的DMAP(0.02g)。将反应混合物从0℃到室温搅拌16小时。将反应液用水、HCl 1M、水和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)、过滤并蒸发。将残余物通过快速色谱纯化(Biotage系统,SNAP筒装二氧化硅100g,洗脱剂:在8个柱体积内从正己烷/乙酸乙酯85/15到正己烷/乙酸乙酯70/30)得到黄色油状标题化合物(286mg,收率:72％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ4.44(t,J＝6.6,2H),3.97(t,J＝6.6,2H),2.97(s,2H),2.12(s,3H),1.94(d,J＝10.4,6H),1.77–1.65(m,2H),1.63–1.50(m,2H),1.47–1.41(m,6H),1.41–1.30(m,4H)。

实施例3

6-(硝基氧基)己基4-苯基-4-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)丁酸酯(化合物3)的合成

步骤1:4-(2,5-二羟基-3,4,6-三甲基苯基)-4-苯基丁酸的合成

该反应按照Mitsuru等人，J.Med.Chem.Soc.,1989,32,2214-2221所述的条件进行。

将醚合三氟化硼(0.25ml；1.99mmol)在60℃下在10分钟内滴加到三甲基氢醌(1.0g；6.57mmol)和γ-苯基-γ-丁内酯(1.1g；6.57mmol)在甲苯(70ml)中的混合物中。将混合物继续搅拌2小时，然后减压蒸发溶剂。将残余物通过快速色谱纯化(Biotage系统,SNAP筒装二氧化硅100g,在10个柱体积内从9％到60％EtOAc的正己烷溶液)得到橙色固体状标题化合物(0.74g；收率:36％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.39–7.07(m,5H),4.72–4.25(m,3H),2.74–2.25(m,4H),2.25(s,3H),2.08(s,3H),1.98(m,2H)。

步骤2:4-苯基-4-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丁酸的合成

向4-(2,5-二羟基-3,4,6-三甲基苯基)-4-苯基丁酸(0.74g；2.33mmol)在CH₃CN:H₂O 1:1(50ml)中的溶液中加入硝酸铈铵(3.3g；5.87mmol)。将混合物在室温下搅拌3小时，然后倒入H₂O(30ml)中。加入Et₂O(20ml)，将两相分离并将有机层用Et₂O(2X20ml)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥并浓缩得到560mg标题化合物，不进行进一步的纯化。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.40–7.06(m,5H),4.35(t,J＝7.6,1H),2.77–2.25(m,4H),2.15–2.03(m,3H),1.97(m,6H)。

步骤3:6-(硝基氧基)己基4-苯基-4-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)丁酸酯(化合物(3))的合成

向4-苯基-4-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丁酸(0.29g；0.92mmol)和6-硝基氧基-己-1-醇(在实施例2,步骤1中合成)(0.17mg；0.92mmol)在CH₂Cl₂(5ml)中的溶液中加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)(0.29g；1.38mmol)和催化量的DMAP。将溶液在0℃下搅拌30分钟并在室温下搅拌4小时，然后用NaH₂PO₄5％(5ml)、H₂O(5ml)和盐水洗涤。将有机层用Na₂SO₄干燥并减压浓缩。将残余物通过快速色谱纯化(Biotage SP1仪器，SNAP筒装二氧化硅50g,Hex/EtOAc 9:1,10CV)得到标题化合物(0.35g；收率:83％)

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.37–7.08(m,5H),4.44(t,2H),4.38–4.27(m,1H),4.06(t,2H),2.68–2.52(m,1H),2.52–2.35(m,1H),2.35–2.26(m,2H),2.07(s,3H),1.97(m,6H),1.80–1.66(m,2H),1.66–1.52(m,2H),1.50–1.29(m,4H)。

实施例4

4-(硝基氧基)丁基3-甲基-3-(3-甲基-1,4-二氧代-1,4-二氢萘-2-基)丁酸酯(化合物4)的合成

步骤1:6-羟基-4,4,5-三甲基-3,4-二氢-2H-苯并[h]苯并吡喃-2-酮的合成

将甲磺酸(30mL)在70℃下加热。同时迅速加入2-甲基萘-1,4-二醇(4.75g,25.0mmol)和3-甲基丁-2-烯酸甲酯(2.85g,25.0mmol,1eq)并将反应液在该温度下加热2小时。然后将反应液倒入水中，并在冷却后用EtOAc(3x 100mL)萃取。将合并的有机层依次用水、饱和NaHCO₃、水和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并蒸发。将残余物通过快速色谱纯化(Biotage系统,2SNAP筒装二氧化硅100g,洗脱剂:在10柱体积内从正己烷/乙酸乙酯90/10到正己烷/乙酸乙酯70/30)得到浅黄色固体状标题化合物(2.26g,收率:35％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.90(d,J＝8.3,2H),7.45(d,J＝8.0,2H),3.88–3.67(m,2H),2.45(s,3H),1.56(s,6H)。

步骤2:3-甲基-3-(3-甲基-1,4-二氧代-1,4-二氢萘-2-基)丁酸的合成

向搅拌着的6-羟基-4,4,5-三甲基-3,4-二氢-2H-苯并[h]苯并吡喃-2-酮(1.2g,4.44mmol)在10％乙腈水溶液(100mL)中的溶液中加入刚刚重结晶过的NBS(0.8g,4.44mmol,1eq)的乙腈(20mL)溶液。将反应液搅拌1小时然后用水(100mL)稀释并用Et₂O(3x100mL)萃取。将合并的有机层用水和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并蒸发。将残余物通过快速色谱纯化(Biotage系统,SNAP筒装二氧化硅100g,洗脱剂:在8柱体积内从正己烷/乙酸乙酯70/30到正己烷/乙酸乙酯50/50)得到黄色油状标题化合物(0.86g,收率:68％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ12.11(m,1H),8.06-7.99(m,1H),7.87–7.78(m,1H),7.70–7.58(m,2H),3.02(s,2H),2.14(s,3H),1.44(s,6H)。

步骤3:4-(硝基氧基)丁基3-甲基-3-(3-甲基-1,4-二氧代-1,4-二氢萘-2-基)丁酸酯(化合物4)

向冷却至0℃的4-羟基丁基硝酸酯(在实施例1,步骤1、2和3中合成)(150mg,1.11mmol)和3-甲基-3-(3-甲基-1,4-二氧代-1,4-二氢萘-2-基)丁酸(303mg,1.11mmol,1eq)在干燥CH₂Cl₂中的溶液中加入EDC(234mg,1.22mmol,1.1eq)和催化量的DMAP。将反应液于0℃搅拌6小时，然后用水、HCl 0.1M、水和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并蒸发。将残余物通过快速色谱纯化(Biotage系统,SNAP筒装二氧化硅100g,洗脱剂:在8柱体积内从正己烷/乙酸乙酯80/20到正己烷/乙酸乙酯70/30)得到黄色油状标题化合物(268mg,收率:62％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ8.02(dd,J＝6.1,2.9,1H),7.89–7.80(m,1H),7.70–7.58(m,2H),4.36(t,J＝6.3,2H),3.94(t,J＝6.2,2H),3.10(s,2H),2.32(s,3H),1.67(dt,J＝10.8,6.1,2H),1.65-1.45(m,14H)。

实施例5

6-(硝基氧基)己基4-(4-氟苯基)-4-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)丁酸酯(化合物5)的合成

步骤1:4-(2,5-二羟基-3,4,6-三甲基苯基)-4-(4-氟苯基)丁酸的合成

将醚合三氟化硼(0.21ml；1.65mmol)在60℃下在10分钟内滴加到三甲基氢醌(0.50g；3.30mmol)和γ-(4-氟苯基)-γ-丁内酯(0.59g；3.30mmol)在甲苯(10ml)中的混合物中。将该混合物继续搅拌2小时，然后减压蒸除溶剂。将残余物通过快速色谱纯化(Biotage系统,SNAP筒装二氧化硅50g,在10柱体积内从9％到60％EtOAc的正己烷溶液)得到橙色固体状标题化合物(0.48g；收率:43％)。

步骤2:4-(4-氟苯基)-4-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丁酸的合成

向4-(2,5-二羟基-3,4,6-三甲基苯基)-4-(4-氟苯基)丁酸(0.48g；1.44mmol)在CH₃CN:H₂O 1:1(40ml)中的溶液中加入硝酸铈铵(2.04g；3.60mmol)。将混合物在室温下搅拌3小时，然后倒入H₂O(30ml)中。加入Et₂O(20ml)，将两相分离并将有机层用Et₂O(2X 20ml)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥并浓缩得到430mg标题化合物，不进行进一步的纯化。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.32–7.19(m,3H),6.97(m,2H),4.29(t,J＝7.6,1H),2.70–2.25(m,4H),2.10(s,3H),2.03–1.89(m,6H)。

步骤3:6-(硝基氧基)己基4-(4-氟苯基)-4-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)丁酸酯(化合物5)

向4-(4-氟苯基)-4-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丁酸(0.22g；0.66mmol)和6-硝基氧基-己-1-醇(在实施例2,步骤1中合成)(0.12mg；0.66mmol)的CH₂Cl₂(5ml)溶液中加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)(0.19g；0.98mmol)和催化量的DMAP。将溶液于0℃搅拌30分钟并于室温搅拌4小时，然后用NaH₂PO₄5％溶液(5ml)、H₂O(5ml)和盐水洗涤。将有机层用Na₂SO₄干燥并减压浓缩。将残余物通过快速色谱纯化(Biotage SP1仪器，SNAP筒装二氧化硅50g,Hex/EtOAc 9:1,10柱体积)得到标题化合物(0.18g；收率:58％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.36–7.17(m,3H),7.05–6.88(m,2H),4.44(t,2H),4.28(t,1H),4.06(t,2H),2.67–2.33(m,2H),2.33–2.22(m,2H),2.11(s,3H),2.00(s,3H),1.95(s,3H),1.80–1.55(m,4H),1.49–1.30(m,4H)。

实施例6

4-(硝基氧基)丁基4-苯基-4-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)丁酸酯(化合物6)的合成

步骤1:4-氯丁基4-硝基苯甲酸酯的合成

向冷却至0℃的4-氯丁醇(1.09g；10.04mmol)和TEA(1.7ml；12.05mmol)的CH₂Cl₂(25ml)溶液中分批加入4-硝基苯甲酰氯(2.23g；12.05mmol)。将混合物于室温搅拌2小时，然后用NaH₂PO₄(25ml)、H₂O和盐水洗涤。将残余物通过快速色谱纯化(Biotage SP1仪器，SNAP筒装二氧化硅100g,正己烷/EtOAc 9:1,10柱体积)得到标题化合物(2.48g；收率:96％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ8.38–8.25(m,2H),8.25–8.14(m,2H),4.55–4.33(m,2H),3.73–3.53(m,2H),2.13–1.85(m,4H)。

步骤2:4-(硝基氧基)丁基4-硝基苯甲酸酯的合成

向4-氯丁基4-硝基苯甲酸酯(2.48g；9.62mmol)的CH₃CN(40ml)溶液中加入NaI(5.77g,38.30mmol)。将混合物在微波装置中加热(40分钟；120℃)，然后滤出盐并减压蒸除溶剂。加入EtOAc(50ml)并将溶液用Na₂S₂O₅5％溶液(50ml)、H₂O和盐水洗涤。将有机层用Na₂SO₄干燥并减压浓缩。将残余物溶于CH₃CN(40ml)并加入AgNO₃(1.97g；11.54mmol)。将混合物于120℃微波加热15分钟，然后滤出盐并减压蒸除溶剂。加入EtOAc(30ml)，再次通过过滤除去沉淀并蒸除溶剂。将该过程重复3次，然后将有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥并减压浓缩。将残余物通过快速色谱纯化(Biotage SP1仪器，SNAP筒装二氧化硅100g,在10柱体积内从5％到40％EtOAc的正己烷溶液)得到透明油状的标题化合物(2.50g；收率:93％)。

步骤3:4-羟基丁基硝酸酯的合成

向冷却至0℃的4-(硝基氧基)丁基4-硝基苯甲酸酯(2.5g；8.76mmol)的THF(30ml)溶液中滴加NaOH 2M(8.7ml；17.53mmol)。将溶液室温搅拌4小时，然后用NaHCO₃饱和溶液(20ml)稀释并用CH₂Cl₂(3x30ml)萃取。将合并的有机层用Na₂SO₄干燥并减压浓缩。将残余物通过快速色谱纯化(Biotage SP1仪器，SNAP筒装二氧化硅50g,在10柱体积内从10％到100％EtOAc的正己烷溶液)得到标题化合物(1.0g；收率:85％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ4.50(td,J＝6.5,2H),3.70(t,J＝6.2,2H),1.95–1.76(m,2H),1.76–1.59(m,2H)。

步骤4:4-(硝基氧基)丁基4-苯基-4-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)丁酸酯(化合物6)的合成

向4-苯基-4-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丁酸(在实施例3,步骤1和2中合成)(0.27g；0.86mmol)和4-羟基丁基硝酸酯(0.15mg；0.86mmol)的CH₂Cl₂(4ml)溶液中加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)(0.25g；1.30mmol)和催化量的DMAP。将溶液于0℃搅拌30分钟并于室温搅拌4小时，然后用NaH₂PO₄5％溶液(5ml)、H₂O(5ml)和盐水洗涤。将有机层用Na₂SO₄干燥并减压浓缩。将残余物通过快速色谱纯化(Biotage SP1仪器，SNAP筒装二氧化硅50g,Hex/EtOAc 9:1,10柱体积)得到橙色油状标题化合物(0.23g；收率:62％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.38–7.11(m,5H),4.47(m,2H),4.34(t,J＝7.7,1H),4.09(t,J＝6.0,2H),2.73–2.52(m,1H),2.52–2.23(m,3H),2.07(s,3H),1.97(m,6H),1.89–1.65(m,4H)。

实施例7

4-(硝基氧基)丁基4-(4-氟苯基)-4-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)丁酸酯(化合物7)的合成

向4-(4-氟苯基)-4-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丁酸(在实施例5,步骤1和2中合成)(0.19g；0.57mmol)和4-羟基丁基硝酸酯(在实施例6,步骤1、2和3中合成)(0.10mg；0.57mmol)的CH₂Cl₂(4ml)溶液中加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)(0.16g；0.86mmol)和催化量的DMAP。将溶液于0℃搅拌30分钟并于室温搅拌4小时，然后用NaH₂PO₄5％溶液(5ml)、H₂O(5ml)和盐水洗涤。将有机层用Na₂SO₄干燥并减压浓缩。将残余物通过快速色谱纯化(Biotage SP1仪器，SNAP筒装二氧化硅50g,正己烷/EtOAc 9:1,10柱体积)得到橙色油状标题化合物(0.15g；收率:59％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.35–7.15(m,2H),7.06–6.87(m,2H),4.47(m,2H),4.28(t,J＝7.7,1H),4.09(t,J＝6.0,2H),2.68–2.22(m,4H),2.08(s,3H),1.97(m,6H),1.86–1.65(m,4H)。

实施例8

(5S,6R)-5,6-二(硝基氧基)庚基3-甲基-3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)丁酸酯(化合物8的(5S,6R)-异构体)的合成

步骤1:己-5-烯基4-硝基苯甲酸酯的合成

在0℃下，向5-己烯-1-醇(19.4mL；161.54mmol)的二氯甲烷(513mL)溶液中加入对-硝基苯甲酰氯(35.97g,193.85mmol)，然后滴加三乙胺(27.0mL,193.85mmol)的二氯甲烷(150mL)溶液。将混合物室温搅拌21小时，然后用水、1M HCl水溶液、盐水洗涤。将有机层干燥(Na₂SO₄)并减压除去溶剂。将残余物通过快速色谱纯化(Biotage系统,两个SNAP筒装二氧化硅340g,洗脱剂:在12柱体积内从正己烷/乙酸乙酯90/10到正己烷/乙酸乙酯50/50)得到黄色油状标题化合物(40.00g,99％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ8.30(dt,J＝9.0,3.0Hz,2H),8.22(dt,J＝9.0,3.0Hz,2H),5.83(1H,ddt,J＝16.9,10.2,6.7Hz),4.95-5.11(2H,m),4.39(2H,t,J＝6.6Hz),2.15(2H,m),1.84(2H,m)1.50-1.66(2H,m)。

步骤2:(5S)-5,6-二羟基己基4-硝基苯甲酸酯的合成

在0℃下，向剧烈搅拌着的可商购获得的“AD mixα”(112.5g)在1:1水/叔丁醇(822mL)中的溶液中加入己-5-烯基4-硝基苯甲酸酯(20.00g,80.23mmol)。将混合物在4℃(冷藏室)剧烈搅拌21小时。将混合物冷却至0℃并加入乙酸乙酯(450mL)，然后分批缓慢加入焦亚硫酸钠(33.1g)。将混合物于0℃搅拌30分钟，然后室温搅拌1小时。分出有机相，将水相用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)并减压除去溶剂。通过用短的硅胶垫过滤进行纯化，用乙酸乙酯洗脱得到米白色固体状标题化合物(21.90g,96％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ8.30(dt,J＝9.0,2.0Hz,2H),8.21(dt,J＝9.0,2.0Hz,2H),4.39(t,J＝6.6Hz,2H),3.80-3.62(2H,m),3.47(1H,m),2.59(bs,1H),2.42(bs,1H),1.90-1.75(2H,m),1.73-1.45(4H,m)。

步骤3:(5S)-6-三苯基甲氧基-5-羟基己基4-硝基苯甲酸酯的合成

在氮气氛下，向(5S)-5,6-二羟基己基4-硝基苯甲酸酯(13.46g,47.53mmol)在无水N,N-二甲基甲酰胺(123mL)中的溶液中加入三苯基氯甲烷(14.57g,52.28mmol)，然后加入三乙胺(7.29mL,52.28mmol)和4-二甲基氨基吡啶(581mg,4.75mmol)。将形成的溶液室温搅拌23小时。将混合物倒入水中并用乙醚萃取(3次)。将合并的有机萃取液用饱和NH₄Cl水溶液和水洗涤，然后干燥(Na₂SO₄)并减压除去溶剂。通过快速色谱纯化，用20％乙酸乙酯/己烷到50％乙酸乙酯/正己烷洗脱得到浅黄色油状标题化合物(20.90g,84％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ8.28(d,J＝8.8Hz,2H),8.20(d,J＝8.8Hz,2H),7.49-7.42(m,6H),7.36-7.23(m,9H),4.36(t,J＝6.5Hz,2H),3.82(dp,J＝10.9,3.1Hz,1H),3.21(dd,J＝9.3,3.3Hz,1H),3.07(dd,J＝9.2,7.7Hz,1H),2.36(d,J＝2.9Hz,1H),1.86–1.72(m,2H),1.56–1.38(m,4H)。

步骤4:(5S)-6-三苯基甲氧基-5-叔丁基二苯基硅烷氧基己基4-硝基苯甲酸酯的合成

在氮气氛下，向(5S)-6-三苯基甲氧基-5-羟基己基4-硝基苯甲酸酯(7.10g,13.51mmol)在无水N,N-二甲基甲酰胺(65mL)中的溶液中加入咪唑(1.84g,27.02mmol)并将该溶液冷却至0℃。加入叔丁基二苯基氯硅烷(7.03mL,27.02mmol)并将溶液于0℃搅拌10分钟，然后室温搅拌15小时。将混合物倒入水中并用乙醚萃取。将合并的有机相干燥(Na₂SO₄)并减压除去溶剂。通过快速色谱纯化，用5％乙酸乙酯/正己烷洗脱得到米白色泡沫状标题化合物(5.29g,51％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ8.28–8.20(m,2H),8.19–8.09(m,2H),7.67–7.53(m,4H),7.48–7.11(m,21H),4.22(t,J＝6.4Hz,2H),3.97–3.87(m,1H),3.15(dd,J＝9.3,4.8Hz,1H),3.03(dd,J＝9.2,6.4Hz,1H),1.78–1.44(m,4H),1.27(m,2H),1.02(s,9H)。

步骤5:(5S)-5-叔丁基二苯基硅烷氧基-6-羟基己基4-硝基苯甲酸酯的合成

向(5S)-6-三苯基甲氧基-5-叔丁基二苯基硅烷氧基己基-4-硝基苯甲酸酯(4.06g,5.32mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液中加入甲醇(157mL)和对甲苯磺酸一水合物(202mg,1.06mmol)。将溶液在室温下搅拌17小时。减压蒸除溶剂并将残余物溶于乙酸乙酯，用饱和NaHCO₃水溶液、水和盐水洗涤。将有机层干燥(Na₂SO₄)并减压蒸除溶剂。通过快速色谱纯化(Biotage系统,SNAP筒装二氧化硅340g,洗脱剂:在12柱体积内从正己烷/乙酸乙酯90/10到正己烷/乙酸乙酯70/30)得到浅黄色油状标题化合物(1.33g,48％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ8.32–8.26(m,2H),8.20–8.15(m,2H),7.73–7.66(m,5H),7.48–7.35(m,5H),4.25(t,J＝6.5Hz,2H),3.83(dt,J＝10.3,5.3Hz,1H),3.52(ddd,J＝11.4,5.9,3.7Hz,1H),3.58(ddd,J＝11.4,4.8,3.1Hz,1H),1.79(bs,1H),1.70–1.46(m,4H),1.36(dd,J＝15.0,7.4Hz,2H),1.09(s,9H)。

步骤6:(5S)-5-叔丁基二苯基硅烷氧基-6-氧代己基4-硝基苯甲酸酯的合成

向0.4M(5S)-5-叔丁基二苯基硅烷氧基-6-羟基己基4-硝基苯甲酸酯(9.29g,17.81mmol)的二氯甲烷(44.5mL)溶液中加入二氧化硅负载的TEMPO(307mg；0.178mmol)，然后加入0.5M KBr水溶液(3.53mL)。将混合物冷却至0℃并剧烈搅拌。加入0.37M NaOCl(10-15％活性Cl)(13.73mL)的水(46.30mL)溶液并将混合物用固体NaHCO₃缓冲。将混合物于0℃剧烈搅拌3.5小时。滤出固体并用二氯甲烷和水充分洗涤。分出有机层并将水层用二氯甲烷萃取。将合并的有机相干燥(Na₂SO₄)并减压蒸除溶剂得到浅黄色油状的标题化合物粗品(9.09g,98％)，其不经进一步纯化直接使用。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ9.64(d,J＝1.4Hz,1H),8.30(dt,J＝9.0,2.0Hz,2H),8.19(dt,J＝9.0,2.0Hz,2H),7.75-7.60(m,4H),7.55-7.35(m,6H),4.30(t,J＝6.4Hz,2H),4.09(td,J＝5.6,1.4Hz,1H),1.90-1.35(m,6H),1.12(9H,s)。

步骤7:(5S,6R)-6-羟基-5-叔丁基二苯基硅烷氧基庚基4-硝基苯甲酸酯和(5S,6S)-6-羟基-5-叔丁基二苯基硅烷氧基庚基4-硝基苯甲酸酯的合成

向一个250mL的Schlenk瓶(干燥的并用N₂净化的)中加入(1R,2S)-(+)-(二丁基氨基)-1-苯基-1-丙醇(3.28g,12.45mmol,1eq)，然后加入2M二甲基锌的甲苯溶液(37.35mL,74.7mmol,6eq)。将形成的黄色溶液冷却至0℃并缓慢加入(5S)-5-叔丁基二苯基硅烷氧基-6-氧代己基4-硝基苯甲酸酯(6.47g,12.45mmol)的无水甲苯(40mL)溶液。将溶液于0℃搅拌10分钟，然后升温至室温并搅拌18小时。将溶液冷却至0℃并通过加入饱和NH₄Cl水溶液(75mL)缓慢终止反应。将混合物升温至室温并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机相干燥(Na₂SO₄)并减压蒸除溶剂。通过快速色谱纯化，用15％乙酸乙酯/正己烷至25％乙酸乙酯/正己烷洗脱得到黄色油状标题化合物(4.31g,65％)，其为非对映异构体5S,6R(主要的)和5S,6S(次要的)的不可分离的混合物。

(5S,6R)-主要的非对映异构体

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ8.29(dt,J＝9.0,2.0Hz,2H).8.16(dt,J＝9.0,2.0Hz,2H),7.75-7.65(4H,m),7.50-7.30(6H,m),4.20(t,J＝6.4Hz,2H),3.83(m,1H),3.72(m,1H),2.09(d,J＝4.9Hz,1H),1.65-1.20(m,6H),1.12(d,J＝6.5Hz,3H),1.09(s,9H)。

(5S,6S)-次要的非对映异构体:

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ8.29(dt,J＝9.0,2.0Hz,2H),8.16(dt,J＝9.0,2.0Hz,2H),7.75-7.65(m,4H),7.30-7.50(m,6H),4.20(t,J＝6.4Hz,2H),3.71(1H,m),3.60(1H,m),2.21(d,J＝6.1Hz,1H),1.65-1.20(m,6H),1.16(d,J＝6.3Hz,3H),1.09(s,9H)。

步骤8:(5S,6R)-5,6-二羟基庚基4-硝基苯甲酸酯的合成

向(5S,6R)-6-羟基-5-叔丁基二苯基硅烷氧基庚基4-硝基苯甲酸酯(805mg,1.50mmol)的乙醚(50mL)溶液中滴加3％HCl的甲醇溶液(通过将乙酰氯(2.00mL)加入到甲醇(50mL)中来制备)。将溶液室温搅拌41小时。加入Amberlite IRA 400(OH)树脂并将混合物搅拌1小时，再次加入树脂直至pH＝7/8。滤出树脂，用乙酸乙酯洗涤，然后用甲醇洗涤。减压蒸除溶剂，将残余物在乙酸乙酯和饱和NaHCO₃水溶液之间进行分配，将水相用乙酸乙酯萃取。将合并的有机相干燥(Na₂SO₄)并减压蒸除溶剂。通过快速色谱纯化，用10％乙酸乙酯/己烷至90％乙酸乙酯/正己烷洗脱得到浅黄色油状标题化合物(189mg,42％)，为非对映异构体5S,6R(主要的)和5S,6S(次要的)的混合物。非对映异构体过量(5S,6R)＝56.4％。

将该非对映异构体通过制备型HPLC纯化(条件:柱子Phenomenex Gemini苯基-己基100x21.2mm/5m

流动相:A:水+0.1％甲酸；B:甲醇+0.1％甲酸。

流速:25mL/min。

梯度变化:时间0min:45％A/55％B；5.5min:40％A/60％B；5.6min:0％A/100％B；7.6min:0％A/100％B；7.7min:45％A/55％B。检测器:δ:254nm)得到白色固体状化合物H(135mg)。对映体过量/非对映异构体过量＝72.1％。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ8.32(dt,J＝9.0,2.0Hz,2H),8.23(dt,J＝9.0,2.0Hz,2H),4.42,(t,J＝6.5Hz,2H),3.84(m,1H),3.66(m,1H),1.42-2.0(m,8H),1.19(d,J＝6.4Hz,3H)。

其他脱保护方法

0℃下，向搅拌着的(5S,6R)-6-羟基-5-叔丁基二苯基硅烷氧基庚基4-硝基苯甲酸酯(2.96g,5.52mmol)的乙腈(60mL)溶液中加入三氟化硼–乙醚合物(3.5mL,5eq)并将反应液室温搅拌6小时。将反应液冷却至0℃，然后用饱和碳酸氢钠溶液终止反应。将反应液用乙酸乙酯(50mL)稀释，分出有机层，依次用水和盐水(各5mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并减压蒸除溶剂。将残余物通过快速色谱纯化(Biotage系统,2x SNAP筒装二氧化硅100g,洗脱剂:在7柱体积内从正己烷/乙酸乙酯35/65到正己烷/乙酸乙酯30/70梯度洗脱)得到无色油状标题化合物(1.47g,90％)，为非对映异构体5S,6R(主要的)和5S,6S(次要的)的混合物。

将非对映异构体通过制备型HPLC分离(条件:柱Phenomenex Gemini苯基-己基100x 21.2mm/5m)得到白色固体状的主要的非对映异构体(1.09g,66％)。

步骤9:(5S,6R)-5,6-二(硝基氧基)庚基4-硝基苯甲酸酯的合成

向冷却至-78℃的搅拌着的(5S,6R)-5,6-二羟基庚基4-硝基苯甲酸酯(400mg,1.34mmol)、四丁基硝酸铵(863mg,2.82mmol,2.1eq)和2,6-二-叔丁基-4-甲基吡啶(580mg,2.82mmol,2.1eq)在干燥CH₂Cl₂中的溶液中滴加三氟甲磺酸酐(0.778g,2.75mmol,2.05eq)并将反应液于-78℃搅拌1小时，然后恢复至室温。然后用水终止反应并将有机层分离，用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将残余物通过快速色谱纯化(Biotage SP4,SNAP100柱,在10柱体积内从20％到30％EtOAc的正己烷溶液)得到黄色油状标题化合物(406mg,收率:77％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ8.32(dt,J＝9.02.0Hz,2H),8.22(dt,J＝9.0,2.0Hz,2H),5.30(m,1H),4.42(td,J＝6.4Hz,1H),1.95-1.55(m,6H),1.43(d,J＝6.7Hz,3H)。

步骤10:(1R,2S)-6-羟基-1-甲基-2-(硝基氧基)己基硝酸酯的合成

向(5S,6R)-5,6-二(硝基氧基)庚基4-硝基苯甲酸酯(163mg,0.42mmol)在四氢呋喃(1.27mL)和乙醇(1.27mL)中的溶液中加入1M NaOH水溶液(546μL,0.546mmol)。将形成的黄色溶液室温搅拌1.5小时。减压浓缩溶剂，将含水残余物在乙酸乙酯和饱和NaHCO₃水溶液之间进行分配。将有机层用饱和NaHCO₃水溶液洗涤并将水层用乙酸乙酯反萃取。将合并的有机相干燥(Na₂SO₄)并将溶剂浓缩至小的体积(2mL)。将产物小心地通过快速色谱纯化(Biotage系统,SNAP筒装二氧化硅100g,洗脱剂:在8柱体积内从正己烷/乙酸乙酯75/25到正己烷/乙酸乙酯50/50梯度洗脱)以便将两种非对映异构体分离，得到无色油状的标题化合物(0.147g,90％)。

可以用Thar Investigator SFC系统，采用如下条件来获得最佳的分离:

柱:CHIRALPACK IB 250x10mm(5μm)

助溶剂:正己烷/2-丙醇1/1

等度洗脱:CO₂/助溶剂90/10

流速10ml/min T柱:40℃；注射体积:80μl；检测器波长:210nm

运行时间:8.5min；周期:3min；注射量:14-16mg

(样品制备:将800mg粗品化合物溶于4ml MeOH)

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ5.25-5.34(m,2H),3.70(t,J＝5.9Hz,2H),1.47-1.85(m,7H),1.42(d,J＝6.8Hz,3H)。

步骤11:(5S,6R)-5,6-二(硝基氧基)庚基3-甲基-3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)丁酸酯(化合物8)的合成

向冷却至0℃的3-甲基-3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丁酸(在实施例1,步骤2中制备)(146mg,0.583mmol,1eq)和(1R,2S)-6-羟基-1-甲基-2-(硝基氧基)己基硝酸酯(140mg,0.583mmol)在干燥CH₂Cl₂中的溶液中加入EDC(117mg,0.612mmol,1.05eq)和催化量的DMAP。将反应液在该温度下搅拌5小时，然后用水、HCl 0.1M、水和盐水洗涤。将有机溶液干燥(Na₂SO₄)，过滤并蒸发。将残余物通过快速色谱纯化(Biotage SP4系统,SNAP筒装二氧化硅100g,洗脱剂:在8柱体积内从正己烷/乙酸乙酯80/20到正己烷/乙酸乙酯70/30梯度洗脱)得到黄色油状标题化合物(210mg,76％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ5.32–5.17(m,2H),3.99(t,J＝6.2,2H),2.98(s,2H),2.14(s,3H),1.98–1.94(m,6H),1.76–1.45(m,15H),1.43(s,6H),1.39(d,J＝6.7,3H)。

实施例9

(4-(硝基氧基)丁基4-(4,5-二甲氧基-2-甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)-4-苯基丁酸酯(化合物9)的合成

步骤1:4-(2,5-二羟基-3,4-二甲氧基-6-甲基苯基)-4-苯基丁酸的合成

将醚合三氟化硼(0.23ml；1.59mmol)在60℃下于10分钟内滴加到2,3-二甲氧基-5-甲基苯-1,4-二醇(1.00g；5.49mmol)和γ-苯基-γ-丁内酯(0.89g；5.49mmol)在甲苯(55ml)中的混合物中。将混合物继续搅拌3小时然后减压蒸除溶剂。将残余物通过快速色谱纯化(Biotage系统,SNAP筒装二氧化硅100g,在10柱体积内从9％到60％EtOAc的正己烷溶液)得到浅黄色固体状标题化合物(0.80g；收率:42％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.44–7.10(m,5H),5.42(m,2H),4.49(m,1H),3.99–3.81(m,6H),2.77–2.47(m,2H),2.47–2.29(m,2H),2.10(s,3H)。

步骤2:4-(4,5-二甲氧基-2-甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)-4-苯基丁酸的合成

向4-(2,5-二羟基-3,4-二甲氧基-6-甲基苯基)-4-苯基丁酸(0.40g；1.15mmol)在CH₃CN:H₂O 1:1(40ml)中的溶液中加入硝酸铈铵(1.63g；2.89mmol)。将混合物室温搅拌3小时，然后倒入H₂O(30ml)中。加入Et₂O(20ml)，将两相分离并将有机层用Et₂O(2X 20ml)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥并浓缩得到400mg标题化合物，不进行进一步的纯化。

步骤3:(4-(硝基氧基)丁基4-(4,5-二甲氧基-2-甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)-4-苯基丁酸酯(化合物9)的合成

向4-(4,5-二甲氧基-2-甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)-4-苯基丁酸(0.40g；0.57mmol)和4-羟基丁基硝酸酯(在实施例6,步骤1、2和3中合成)(0.10mg；0.57mmol)的CH₂Cl₂(4ml)溶液中加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)(0.16g；0.86mmol)和催化量的DMAP。将溶液于0℃搅拌30分钟并于室温搅拌4小时，然后用NaH₂PO₄5％溶液(5ml)、H₂O(5ml)和盐水洗涤。将有机层用Na₂SO₄干燥并减压浓缩。将残余物通过快速色谱纯化(Biotage SP1仪器，SNAP筒装二氧化硅25g,Hex/EtOAc 8:2,10柱体积)得到红色油状标题化合物(95mg；收率:36％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.38–7.15(m,5H),4.49(m,2H),4.35(t,J＝7.7,1H),4.11(t,J＝6.0,2H),3.98(s,6H),2.74–2.52(m,1H),2.52–2.25(m,3H),2.09(s,3H),1.89–1.66(m,4H)。

实施例10:体外抗氧化剂活性(TBARS试验)

在大鼠肝微粒体中进行NADPH-诱导的膜脂的脂质过氧化之后，通过可见光谱检测2-硫代巴比妥酸反应性物质(TBARS)来评价化合物(1)(实施例1)、其前体(3-甲基-3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丁酸，记载于实施例1的步骤2(中间体2))和参比抗氧化剂化合物的抗氧化性能。

通过在HEPES/蔗糖缓冲液(10mM,250mM,pH 7.4)中差速离心(8000g,20分钟；120000g,1小时)从雄性Wistar大鼠(200-250g)制备肝微粒体膜并保存在-80℃下。在37℃下、在含有微粒体膜(2mg蛋白/mL)、抗坏血酸钠(100μM)和待测化合物的DMSO溶液的Tris-HCl/KCl(100mM/150mM,pH 7.4)中孵育。

通过加入ADP-FeCl₃和NADPH(方法A)或2.5μM FeSO₄(方法B)引发脂质过氧化(按照Boschi D.等人，J.Med.Chem.2006,49:2886-2897所述的方法)。在5、15和30分钟从孵育混合物取样并用三氯乙酸(TCA)10％w/v处理。

脂质过氧化通过用分光光度法(543nm)测定主要由丙二醛(MDA)组成的TBARS来评价。TBARS浓度(以nmol/mg蛋白质表达)通过插值法用MDA标准曲线得到。待测化合物的抗氧化活性利用孵育30分钟之后所得到的数值，以相对于对照样品的TBARS生成抑制百分数的形式进行评价。IC₅₀值通过非线性回归分析计算得到。

结果报告于表1，表明化合物(1)以浓度依赖型方式抑制TBARS的生成，其效力(IC₅₀＝28μM)与众所周知的抗氧化剂化合物如阿魏酸或咖啡酸、依达拉奉或褪黑激素相当。

结果用在37℃下孵育30分钟后抑制TBARS生成的IC₅₀表示。

方法A:抑制由ADP-FeCl₃和NADPH诱导的大鼠肝脏脂质过氧化。

方法B:抑制由FeSO₄和抗坏血酸诱导的大鼠肝脏脂质过氧化。

^a在1mM浓度下测试；

^bChegaev,K.等人,J.Med.Chem.2009,52:574–578

^cChegaev,K.等人,J.Pineal Res.2007,42:371–385

实施例11:在高渗盐水诱导的兔子眼内压(IOP)增加中降低眼内压的活性

在眼内压升高的动物模型中评估化合物(1)(实施例1)降低眼内压(IOP)的活性。

实验中使用体重为1.8-2.0Kg的成年雄性新西兰大白兔。

将动物用20mg/ml/kg的戊巴比妥钠麻醉。通过向玻璃体两边注射0.1ml高渗盐水溶液(5％)诱导眼内压的增加(Krauss等人，2011，Orihashi等人，2005)。

在注射高渗盐水前(基础值)和注射30、60、90、120、240和360分钟后用Tono-PenXL测量眼内压。在注射高渗盐水后，立即以滴眼液的形式灌输载体(5％Cremophor-EL；0.3％DMSO,0.2mg/ml苯扎氯铵(BAC)的PBS溶液,pH 6.0)或本发明化合物。眼睛被随机分配到不同的治疗组。载体或本发明化合物以所需剂量直接灌输到结膜袋中。在每组的压力测量临进行前，在每只眼中灌输一滴用盐水1:1稀释的0.2％盐酸奥布卡因(Novesine,Sandoz)。

结果如表2所示，化合物(1)降低眼压的活性用局部给药后60分钟和120分钟时的眼内压测量平均值来表示。

实施例12

(S)-5,6-二(硝基氧基)己基3-甲基-3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)丁酸酯(化合物15；化合物(10)的(S)-异构体)的合成

步骤1:(5S)-5,6-二(硝基氧基)己基4-硝基苯甲酸酯的合成

在-78℃下，向搅拌着的发烟硝酸(7.7mL,91.8mmol,10eq)的二氯甲烷(60mL)溶液中加入硫酸(4mL)并且在搅拌5分钟后加入(5S)-5,6-二羟基己基4-硝基苯甲酸酯(在实施例8的步骤2中制备)(5.2g,9.2mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液，将反应液在该温度下搅拌30分钟。然后将粗品混合物倒在冰上，将有机层萃取，用水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到浅黄色油状标题化合物(6.8g,100％)。得到的残余物不经进一步纯化直接用于下一步骤。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ8.32(d,J＝8.9Hz,2H),8.26–8.15(m,2H),5.39–5.25(m,1H),4.78(dd,J＝12.9,3.1Hz,1H),4.52(dd,J＝12.9,6.4Hz,1H),4.46–4.35(m,2H),1.97–1.77(m,4H),1.77–1.49(m,2H)。

步骤2:(2S)-6-羟基己烷-1,2-二基二硝酸酯的合成:

向搅拌着的(5S)-5,6-二(硝基氧基)己基4-硝基苯甲酸酯(在步骤1中制备)(6.8g,18.2mmol)在1/1乙醇/THF(各30mL)混合物中的溶液中于0℃下加入2M氢氧化钠溶液(9.1mL,2eq)并将反应液搅拌2小时。将反应液用乙酸乙酯和水(各100mL)稀释并萃取。将有机层依次用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发。将油状残余物通过柱色谱纯化(SNAP100,从4/6乙酸乙酯/正己烷到60/40乙酸乙酯/正己烷的梯度系统)得到无色油状标题化合物(3.82g,93％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ5.32(qd,J＝6.7,3.0Hz,1H),4.77(dd,J＝12.9,3.0Hz,1H),4.49(dd,J＝12.9,6.6Hz,1H),3.68(d,J＝5.5Hz,2H),1.89–1.71(m,2H),1.70–1.48(m,5H),1.46(s,1H)。

步骤3:(S)-5,6-二(硝基氧基)己基3-甲基-3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)丁酸酯的合成

向冷却至0℃的搅拌着的3-甲基-3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丁酸(201mg；0.80mmol)(按照实施例1，步骤1和2的描述制备)和(2S)-6-羟基己烷-1,2-二基二硝酸酯(181mg；0.80mmol)(在步骤2中制备)的DCM(5ml)溶液中加入EDAC(137mg；0.89mmol)和催化量的DMAP。将反应液于0℃下搅拌过夜。然后将粗产物用水、HCl 1N、水和盐水洗涤，干燥并真空蒸发。将粗产物通过快速色谱纯化[Cy/EtOAc:0％至20％(1CV),20％至40％(7CV),40％至60％(2CV)]得到246mg黄色油状标题化合物(收率:67.1％)。

¹H NMR(300MHz,丙酮)δ5.49(qd,J＝6.6,2.6Hz,1H),5.01(dd,J＝13.0,2.6Hz,1H),4.73(dd,J＝13.0,6.3Hz,1H),4.00(t,J＝6.3Hz,2H),2.95(s,2H),2.13(s,3H),1.94(s,J＝6.3Hz,6H),1.90–1.79(m,2H),1.70–1.58(m,2H),1.52(dt,J＝8.0,5.7Hz,2H),1.43(s,6H)。α_D ²⁰＝+2.2(0.44％MeOH)

实施例13

(R)-5,6-二(硝基氧基)己基3-甲基-3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)丁酸酯(化合物16；化合物10的(R)-异构体)的合成

步骤1:(5R)-5,6-二羟基己基4-硝基苯甲酸酯的合成

向剧烈搅拌着的可商购获得的“AD mixβ”(112.5g)在1:1水/叔丁醇(822mL)中的溶液中于0℃下加入己-5-烯基4-硝基苯甲酸酯(在实施例8，步骤1中制备)(20.00g,80.23mmol)。将混合物于4℃(冷藏室)剧烈搅拌21小时。将混合物冷却至0℃并加入乙酸乙酯(450mL)，然后缓慢地分批加入焦亚硫酸钠(33.1g)。将混合物于0℃搅拌30分钟，然后室温搅拌1小时。将有机相分离并将水相用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)并减压蒸除溶剂。将滤液通过短的硅胶垫纯化，用乙酸乙酯洗脱得到米白色固体状标题化合物(20.5g,90.2％)。

步骤2:(5R)-5,6-二(硝基氧基)己基4-硝基苯甲酸酯的合成

在-78℃下，向搅拌着的发烟硝酸(7.7mL,91.8mmol,10eq)的二氯甲烷(60mL)溶液中加入硫酸(4mL)并且在搅拌5分钟后加入(5R)-5,6-二羟基己基4-硝基苯甲酸酯(在步骤1中制备)(5.2g,9.2mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液，将反应液在该温度下搅拌30分钟。然后将粗品混合物倒在冰上，将有机层萃取，用水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到浅黄色油状标题化合物(6.8g,100％)。得到的残余物不经进一步纯化直接用于下一步骤。

步骤3:(2R)-6-羟基己烷-1,2-二基二硝酸酯的合成:

向搅拌着的(5R)-5,6-二(硝基氧基)己基4-硝基苯甲酸酯(在步骤2中制备)(6.8g,18.2mmol)在1/1乙醇/THF(各30mL)混合物中的溶液中于0℃下加入2M氢氧化钠溶液(9.1mL,2eq)并将反应液搅拌2小时。将反应液用乙酸乙酯和水(各100mL)稀释并萃取。将有机层依次用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发。将油状残余物通过柱色谱纯化(SNAP100,从4/6乙酸乙酯/正己烷到60/40乙酸乙酯/正己烷的梯度系统)得到无色油状标题化合物(3.50g,86％)。

步骤4:(R)-5,6-二(硝基氧基)己基3-甲基-3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)丁酸酯的合成

向冷却至0℃的搅拌着的3-甲基-3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丁酸(237mg；0.95mmol)(按照实施例1，步骤1和2的描述制备)和(2R)-6-羟基己烷-1,2-二基二硝酸酯(在步骤3中制备)(213mg；0.95mmol)的DCM(5ml)溶液中加入EDAC(162mg；1.04mmol)和催化量的DMAP。将反应液于0℃下搅拌过夜。然后将粗产物用水、HCl 1N、水和盐水洗涤，干燥并真空蒸发。将粗产物通过快速色谱纯化[Cy/EtOAc:0％至20％(1CV),20％至40％(7CV),40％至60％(2CV)]得到338mg黄色油状标题化合物(收率:78.2％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ5.30–5.21(m,1H),4.74(dd,J＝12.9,3.0Hz,1H),4.47(dd,J＝12.9,6.5Hz,1H),3.99(t,J＝6.3Hz,2H),2.98(s,2H),2.16(d,J＝7.2Hz,3H),1.96(s,6H),1.81–1.69(m,2H),1.66–1.56(m,2H),1.52–1.31(m,8H)。α_D ²⁰＝+2.3(0.47％MeOH)

实施例14

(S)-5,6-二(硝基氧基)己基3-(4,5-二甲氧基-2-甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)-3-甲基丁酸酯(化合物17；化合物11的(S)-异构体)的合成

步骤1:2,3-二甲氧基-5-甲基苯-1,4-二醇的合成

将NaBH₄(5.2g；137.2mmol)溶于150ml水，然后在室温下搅拌加入2,3-二甲氧基-5-甲基环己-2,5-二烯-1,4-二酮(Sg；27.4mmol)在75ml Et₂O和38ml MeOH的混合物中的溶液。15分钟后，将混合物置于分液漏斗中，分层。将乙醚相除去并将水相用每份50ml的乙醚萃取两次。将合并的有机萃取液用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂得到红色油状标题化合物(9g；88％)。其不经进一步纯化直接用于下一步骤。

步骤2:6-羟基-7,8-二甲氧基-4,4-二甲基苯并二氢吡喃-2-酮的合成

将2,3-二甲氧基-5-甲基苯-1,4-二醇(在步骤2中获得)(9g；49mmol)、3-甲基丁-2-烯酸甲酯(7ml；58mmol)和甲磺酸(80mL)在搅拌下于70℃加热90分钟。然后将混合物倒入冰中，用水稀释至600ml并用乙醚萃取(3x150ml)。将合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩至干得到棕色固体，将其用甲醇结晶得到黄色结晶状的纯净标题化合物(6.5g；50％)。

步骤3:4-硝基苯基3-(4,5-二甲氧基-2-甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)-3-甲基丁酸酯的合成

采用与Carpino等人，J.Org.Chem.,1989,54,3303-3310所述类似的合成方法，但由于3-(4,5-二甲氧基-2-甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)-3-甲基丁酸被证实是高度不稳定的(虽然其在文章中有记载)，因此将其就地转化成其4-硝基苯基酯。

将步骤3得到的内酯(2g；7.51mmol)的DMF(15mL)溶液在室温下加入到搅拌着的PDC(12.7g；33.7mmol)的DMF(15mL)溶液中并继续搅拌4小时。将混合物用水稀释至300mL并迅速用乙醚萃取(3x150mL)。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩至约10mL。将该溶液在EtOAc(40mL)中稀释然后依次加入对-硝基苯酚(1.57g；11.2mmol)、DCC(2.31g；11.2mmol；1.5eq.)和DMAP(催化量)。将混合物室温搅拌16小时，然后将其浓缩至干。用中性氧化铝进行色谱纯化(洗脱剂:环己烷/AcOEt 8/2)得到橙色油状的标题化合物(800mg；26％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ8.24(d,2H),7.20(d,2H),3.93(s,3H),3.89(s,3H),3.32(s,2H),2.19(s,3H),1.55(s,3H),1.53(s,3H)。

步骤4:(S)-5,6-二(硝基氧基)己基3-(4,5-二甲氧基-2-甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)-3-甲基丁酸酯的合成

在一个50-ml的单颈瓶中，将178.0mg(0.45mmole)4-硝基苯基3-(4,5-二甲氧基-2-甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)-3-甲基丁酸酯(在步骤4中获得)和111.0mg(0.50mmole)(S)-6-羟基己烷-1,2-二基二硝酸酯(在实施例12,步骤2中获得)加入到DCM(1.5ml)中。10分钟后，加入55.0mg(0.45mmole)DMAP。将溶液室温搅拌18小时。将反应液用水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩，以定量收率得到红色油。将得到的红色油通过自动化硅胶柱色谱纯化，用Cy/DCM/MeOH(50/50/0至68/30/2)混合物洗脱得到200mg(91％收率)橙色油状标题化合物。

MS:m/z＝489[M+H]⁺

TLC:(Cy/DCM/MeOH 68:30:2)R_f＝0.33

NMR(CDCl₃):5.25(m,1H),4.74(dd,1H),4.50(dd,1H),4.0(t,2H),3.97(s,3H),3.93(s,3H),3.0(s,2H),2.14(s,3H),1.8-1.5(m,6H),1.43(s,6H)。

实施例15

(S)-5,6-二(硝基氧基)己基3-(4,5-二甲氧基-2-甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)-3-甲基丁酸酯(化合物17)的合成

标题化合物的制备如下:

步骤1:2,5-二氧代吡咯烷-1-基3-(4,5-二甲氧基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)-3-甲基丁酸酯的合成

采用与Carpino等人，J.Org.Chem.,1989,54,3303-3310所述类似的合成方法，但由于3-(4,5-二甲氧基-2-甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)-3-甲基丁酸被证实是高度不稳定的(虽然其在文章中有记载)，因此将其就地转化成其N-羟基琥珀酰亚胺基酯。

将实施例14的步骤3得到的内酯(2.5g；9.39mmol)的DMF(20mL)溶液在室温下加入到搅拌着的PDC(14.8g；39.4mmol)的DMF(20mL)溶液中并继续搅拌4小时。将混合物用水稀释至300mL并迅速用乙醚萃取(3x150mL)。将合并的乙醚萃取液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩至约10mL。将该溶液在DCM(40mL)中稀释，然后依次加入NHS(1.29g；11.2mmol)和EDCl.HCI(2.16g；11.2mmol)并继续搅拌16小时。将混合物用水稀释并用DCM萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩至干得到橙色油状标题化合物(2.74g；78％)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ3.97(s,3H),3.88(s,3H),3.28(s,2H),2.88(s,4H),2.16(s,3H),1.55(s,3H),1.57(s,3H)。

步骤2:(S)-5,6-二(硝基氧基)己基3-(4,5-二甲氧基-2-甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)-3-甲基丁酸酯(化合物17)的合成

将40.0mg(0.1mmole)2,5-二氧代吡咯烷-1-基3-(4,5-二甲氧基-2-甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)-3-甲基丁酸酯、28.0mg(0.12mmole)(S)-6-羟基己烷-1,2-二基二硝酸酯(在实施例12的步骤2中制备)和DMF(1ml)在搅拌下混合物在一起。10分钟后，加入19.0mg(0.1mmole)EDC*HCl和12.0mg(0.1mmole)DMAP。将溶液搅拌5小时至50℃。将反应液用水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩，以定量收率得到红色的油。将得到的红色油用硅胶Versaflash短柱通过自动化柱色谱进行纯化，用Cy/DCM/MeOH(50/50/0至68/30/2)混合物洗脱得到14.6mg(31％收率)橙色油状标题化合物。

MS:m/z＝489[M+H]⁺

TLC:(Cy/DCM/MeOH 68:30:2)R_f＝0.33

实施例16

在高渗盐水诱导的兔子眼内压(IOP)增加中降低眼内压的活性

本研究评估了单次应用两种不同浓度(1％和0.3％)的化合物(1)在具有实验性眼内压增加的兔子中降低眼内压的效果。

实验中使用体重为1.8-2.0Kg的成年雄性新西兰大白兔。

通过向玻璃体两边注射0.1ml高渗盐水溶液(5％)诱导短暂性眼内压增加(Krauss等人，2011，Orihashi等人，2005)。

在注射高渗盐水前(基础值)和注射30、60、120和240分钟后用Tono-Pen XL测量眼内压。在注射高渗盐水后，立即以滴眼液的形式灌输载体(5％Cremophor-EL；0.3％DMSO,0.2mg/ml苯扎氯铵的PBS溶液,pH 6.0)或化合物。眼睛被随机分配到不同的治疗组。载体和化合物以所需剂量直接灌输到结膜袋中。在每组的压力测量临进行前，在每只眼中灌输一滴0.4％盐酸奥布卡因(Novesine,Sandoz)。

结果如表3所报道，并且用相对于载体和相对于注射高渗盐水前的基础眼内压而言(局部给药后60分钟和120分钟时)眼内压的变化来表示。

实施例17

在高渗盐水诱导的兔子眼内压(IOP)增加中降低眼内压的活性

本研究评估了单次应用化合物(15)(实施例12)和用作参比化合物的ISMN(5-单硝酸异山梨醇酯)在眼内压升高的动物模型中降低眼内压的效果。

实验中使用体重为1.8-2.0Kg的成年雄性新西兰大白兔。

将动物用20mg/ml/kg的戊巴比妥钠麻醉。通过向玻璃体两边注射0.1ml高渗盐水溶液(5％)诱导眼内压增加(Krauss等人，2011，Orihashi等人，2005)。

在注射高渗盐水前(基础值)和注射30、60、90、120、240和360分钟后用Tono-PenXL测量眼内压。在注射高渗盐水后，立即以滴眼液的形式灌输载体(5％Cremophor-EL；0.3％DMSO；0.2mg/ml苯扎氯铵的PBS溶液,pH 6.0)或试验化合物。眼睛被随机分配到不同的治疗组。载体或化合物以所需剂量直接灌输到结膜袋中。在每组的压力测量临进行前，在每只眼中灌输一滴用盐水1:1稀释的0.2％盐酸奥布卡因(Novesine,Sandoz)。

结果如表4所报道，并且用相对于载体和相对于注射高渗盐水前的基础眼内压而言(局部给药后30分钟和60分钟时)眼内压的变化来表示。

与ISMN治疗组相比，单次应用化合物(15)导致明显更多的眼内压降低。

Claims

1.式(I)化合物

或其立体异构体，其中:

R₁选自H、甲基、甲氧基；

R₂是H或甲基；

R₃选自H、甲基、甲氧基；

或者R₁和R₃一起形成–CH＝CH-CH＝CH-；

R₄和R₅是甲基并且n是1，

m是从1至10的整数；

p是0或1；

R₆是H或甲基。

2.根据权利要求1所述的式(I)化合物，其中：

R₂是甲基；

R₄和R₅是甲基并且n是1。

3.根据权利要求2所述的式(I)化合物，其中：

R₁和R₃是甲基。

4.根据权利要求2所述的式(I)化合物，其中：

R₁和R₃是甲氧基。

5.根据权利要求2所述的式(I)化合物，其中：R₁和R₃一起形成–CH＝CH-CH＝CH-。

6.根据权利要求2所述的式(I)化合物，其中：R₁是甲基并且R₃是甲氧基。

7.根据权利要求2所述的式(I)化合物，其中：R₁是甲氧基并且R₃是甲基。

8.根据权利要求3至7任意一项所述的式(I)化合物，其中p是0并且R₆是H。

9.根据权利要求3至7任意一项所述的式(I)化合物，其中p是1。

10.根据权利要求1所述的式(I)化合物，选自:

4-(硝基氧基)丁基3-甲基-3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)丁酸酯(化合物1)；

6-(硝基氧基)己基3-甲基-3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)丁酸酯(化合物2)；

4-(硝基氧基)丁基3-甲基-3-(3-甲基-1,4-二氧代-1,4-二氢萘-2-基)丁酸酯(化合物4)；

(5S,6R)-5,6-二(硝基氧基)庚基3-甲基-3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)丁酸酯(化合物8)；

5,6-二(硝基氧基)己基-3-甲基3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)丁酸酯(化合物10)

5,6-二(硝基氧基)己基3-(4,5-二甲氧基-2-甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)-3-甲基丁酸酯(化合物11)

4-(硝基氧基)丁基3-(4,5-二甲氧基-2-甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)-3-甲基丁酸酯(化合物12)

(S)-5,6-二(硝基氧基)己基3-甲基-3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯基)丁酸酯(化合物15)

及其立体异构体。

11.根据权利要求1至10任意一项所述的式(I)化合物在制备药物中的用途。

12.根据权利要求1至10任意一项所述的式(I)化合物在制备用于治疗高眼压青光眼、正常眼压性青光眼、继发性青光眼和高眼压症的药物中的用途。

13.根据权利要求1至10任意一项所述的式(I)化合物在制备用于治疗年龄相关性黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、黄斑变性、炎症性视网膜病、葡萄膜炎的药物中的用途。

14.包含根据权利要求1至10任意一项所述的式(I)化合物和至少一种眼科可接受的成分和/或眼科可接受的载体的眼科组合物。

15.包含根据权利要求1至10任意一项所述的式(I)化合物和一种或多种选自下列的其它活性成分的组合物：α肾上腺素能受体激动剂、β受体阻滞剂、碳酸酐酶抑制剂、前列腺素类似物、非甾体抗炎药或甾体抗炎药。

16.用于治疗高眼压青光眼、正常眼压性青光眼、继发性青光眼和高眼压症的权利要求15所述的组合物。

17.用于治疗年龄相关性黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、黄斑变性、炎症性视网膜病、葡萄膜炎的权利要求14所述的组合物。

18.包含权利要求15所述的组合物和至少一种眼科可接受的成分和/或眼科可接受的载体的眼科组合物。