HK1249119B - Engineered botulinum neurotoxin - Google Patents

Claims (15)

1. Polypeptide comprenant un domaine de liaison au récepteur modifié du sérotype B de Clostridial botulinum (B-H_c), comprenant une ou plusieurs mutations de substitution correspondant à des substitutions dans le sérotype B, souche 1, dans lequel l'une des mutations de substitution est choisie dans le groupe constitué par E1191C et E1191Y, dans lequel le domaine de liaison au récepteur modifié possède une identité de séquence d'acides aminés de 95 % ou plus avec un domaine de liaison au récepteur de type sauvage de référence de SEQ ID NO : 5, et dans lequel le polypeptide présente une liaison améliorée au Syt II humain par rapport à une molécule identique dépourvue de l'une ou plusieurs mutations de substitution.
2. Polypeptide de neurotoxine botulique (BoNT) comprenant :

   a) un domaine de protéase ;

   b) un site de clivage de protéase ;

   c) un domaine de translocation ; et

   d) un domaine de liaison au récepteur modifié du sérotype B de Clostridial botulinum (B-H_c), comprenant une ou plusieurs mutations de substitution correspondant à des substitutions du sérotype B, souche 1, dans lequel l'une des mutations de substitution est choisie dans le groupe constitué par E1191C et E1191Y,

   dans lequel le domaine de liaison au récepteur modifié possède une identité de séquence d'acides aminés de 95 % ou plus avec un domaine de liaison au récepteur de type sauvage de référence de SEQ ID NO : 5, et dans lequel le polypeptide BoNT présente une liaison améliorée au Syt II humain par rapport à une molécule identique dépourvue de l'une ou plusieurs mutations de substitution.
3. Polypeptide BoNT selon la revendication 2, dans lequel le domaine de protéase, le domaine de translocation et le site de clivage de protéase sont d'un sérotype choisi dans le groupe constitué par A, B, C, D, E, F, G et des combinaisons de ceux-ci, de préférence dans lequel le domaine de protéase, le domaine de translocation et le site de clivage de protéase proviennent du sérotype B, souche 1 ou du sérotype A, souche 1.
4. Polypeptide ou polypeptide BoNT selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel le domaine de liaison de récepteur modifié correspond aux résidus 1078-1291 de SEQ ID NO : 5 ou aux résidus 859-1291 de SEQ ID NO : 5.
5. Polypeptide ou polypeptide BoNT selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel le domaine de liaison au récepteur modifié comprend :

   i) deux mutations de substitution ; ou

   ii) deux mutations de substitution correspondant à :

   E1191C et S1199W ;

   E1191C et S1199Y ; ou

   E1191C et W1178Q.
6. Polypeptide ou BoNT selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel le domaine de liaison au récepteur modifié comprend trois mutations de substitution.
7. Polypeptide ou polypeptide BoNT selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, qui est une molécule chimérique comprenant une première partie qui est le domaine de liaison de récepteur modifié lié à une seconde partie.
8. Polypeptide ou polypeptide BoNT selon la revendication 7, dans lequel :

   la première partie et la seconde partie sont reliées de manière covalente ou non covalente; et

   la seconde partie est choisie dans le groupe constitué par une petite molécule, un acide nucléique, un polypeptide court et une protéine, de préférence dans lequel la seconde partie est une molécule bioactive, un médicament polypeptidique ou non polypeptidique.
9. Acide nucléique, de préférence vecteur d'acide nucléique, comprenant une séquence nucléotidique qui code pour le polypeptide ou le polypeptide BoNT selon l'une quelconque des revendications 1 à 8.
10. Cellule comprenant l'acide nucléique selon la revendication 9 ou exprimant le polypeptide ou le polypeptide BoNT selon l'une quelconque des revendications 1 à 8.
11. Composition pharmaceutique comprenant le polypeptide ou le polypeptide de BoNT selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 ou l'acide nucléique selon la revendication 9, éventuellement dans laquelle la composition pharmaceutique comprend en outre un excipient pharmaceutiquement acceptable.
12. Procédé de production d'un polypeptide ou d'un polypeptide BoNT, le procédé comprenant les étapes de culture de la cellule selon la revendication 10 dans des conditions dans lesquelles ledit polypeptide ou ledit polypeptide BoNT est produit.
13. Procédé selon la revendication 12, comprenant en outre une ou plusieurs des étapes suivantes :

    - récupérer le polypeptide ou le polypeptide BoNT de la culture,

    - purifier le polypeptide ou le polypeptide de BoNT,

    - activer le polypeptide ou le polypeptide de BoNT, et/ou

    - formuler le polypeptide ou le polypeptide BoNT.
14. Polypeptide ou BoNT selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, ou composition pharmaceutique selon la revendication 11, pour une utilisation en médecine.
15. Polypeptide ou polypeptide BoNT selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, ou composition pharmaceutique selon la revendication 11, destinés à être utilisés dans le traitement d'une maladie associée à une activité neuronale indésirable, la maladie étant choisie dans le groupe constitué par la dysphonie spasmodique, le torticolis spasmodique, la dystonie laryngée, dysphonie oromandibulaire, dystonie linguale, dystonie cervicale, dystonie focale de la main, le blépharospasme, strabisme, spasme hémifacial, trouble des paupières, la paralysie cérébrale, spasticité focale et d'autres troubles de la voix, la colite spasmodique, vessie neurogène, l'anisme, la spasticité des membres, les tics, tremblements, le bruxisme, la fissure anale, l'achalasie, la dysphagie et d'autres troubles du tonus musculaire et d'autres troubles caractérisés par des mouvements involontaires de groupes musculaires, le larmoiement, l'hyperhydrose, la salivation excessive, les sécrétions gastro-intestinales excessives, les troubles de la sécrétion, les douleurs dues à des spasmes musculaires, les maux de tête, la migraine, et les maladies dermatologiques.