HK1249119B - Engineered botulinum neurotoxin - Google Patents

Claims (15)

1. Polypeptid, das eine modifizierte Rezeptorbindungsdomäne von Clostridium botulinum Serotyp B (B-H_c) umfasst, die eine oder mehrere Substitutionsmutationen umfasst, die Substitutionen in Serotyp B, Stamm 1, entsprechen, wobei eine der Substitutionsmutationen aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus E1191C und E1191Y besteht, wobei die modifizierte Rezeptorbindungsdomäne 95 % oder mehr Aminosäuresequenzidentität einer Referenzrezeptorbindungsdomäne eines Wildtyps von SEQ ID NO: 5 besitzt und wobei das Polypeptid eine verstärkte Bindung an humanes Syt II im Vergleich zu einem identischen Molekül vorweist, dem das eine oder die mehreren Substitutionsmutationen fehlen.
2. Botulinum-Neurotoxin(BoNT)-Polypeptid, das Folgendes umfasst:

   a) eine Proteasedomäne;

   b) eine Proteasespaltungsstelle;

   c) eine Translokationsdomäne; und

   d) eine modifizierte Rezeptorbindungsdomäne von Clostridium botulinum Serotyp B (BH_c), die eine oder mehrere Substitutionsmutationen umfasst, die Substitutionen in Serotyp B, Stamm 1, entsprechen, wobei eine der Substitutionsmutationen aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus E1191C und E1191Y besteht,

   wobei die modifizierte Rezeptorbindungsdomäne 95 % oder mehr Aminosäuresequenzidentität einer Referenzrezeptorbindungsdomäne des Wildtyps von SEQ ID NO: 5 besitzt und wobei das BoNT-Polypeptid die verstärkte Bindung an humanes Syt 11 im Vergleich zu einem identischen Molekül vorweist, dem das eine oder die mehreren Substitutionsmutationen fehlen.
3. BoNT-Polypeptid nach Anspruch 2, wobei die Proteasedomäne, die Translokationsdomäne und die Proteasespaltungsstelle von einem Serotyp stammen, der aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus aus A, B, C, D, E, F, G und Kombinationen davon besteht, vorzugsweise wobei die Proteasedomäne, die Translokationsdomäne und die Proteasespaltungsstelle von Serotyp B, Stamm 1, oder von Serotyp A, Stamm 1, stammen.
4. Polypeptid oder BoNT-Polypeptid nach einem der Ansprüche 1-3, wobei die modifizierte Rezeptorbindungsdomäne Resten 1078-1291 von SEQ ID NO: 5 oder Resten 859-1291 von SEQ ID NO: 5 entspricht.
5. Polypeptid oder BoNT-Polypeptid nach einem der Ansprüche 1-4, wobei die modifizierte Rezeptorbindungsdomäne Folgendes umfasst:

   i) zwei Substitutionsmutationen; oder

   ii) zwei Substitutionsmutationen, die Folgendem entsprechen:

   E1191C und S1199W;

   E1191C und S1199Y; oder

   E1191C und W1178Q.
6. Polypeptid oder BoNT-Polypeptid nach einem der Ansprüche 1-4, wobei die modifizierte Rezeptorbindungsdomäne drei Substitutionsmutationen umfasst.
7. Polypeptid oder BoNT-Polypeptid nach einem der Ansprüche 1-6, das ein chimäres Molekül ist, das einen ersten Abschnitt umfasst, der die modifizierte Rezeptorbindungsdomäne ist, die mit einem zweiten Abschnitt verknüpft ist.
8. Polypeptid oder BoNT-Polypeptid nach Anspruch 7, wobei:

   der erste Abschnitt und der zweite Abschnitt kovalent oder nicht-kovalent verknüpft sind; und

   der zweite Abschnitt aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus einem kleinen Molekül, einer Nukleinsäure, einem kurzen Polypeptid und einem Protein besteht, vorzugsweise wobei der zweite Abschnitt ein bioaktives Molekül, ein therapeutisches Polypeptid oder ein Nicht-Polypeptid-Arzneimittel ist.
9. Nukleinsäure, vorzugsweise ein Nukleinsäurevektor, die eine Nukleotidsequenz umfasst, die für das Polypeptid oder das BoNT-Polypeptid nach einem der Ansprüche 1-8 kodiert.
10. Zelle, die die Nukleinsäure nach Anspruch 9 umfasst oder das Polypeptid oder das BoNT-Polypeptid nach einem der Ansprüche 1-8 exprimiert.
11. Pharmazeutische Zusammensetzung, die das das Polypeptid oder das BoNT-Polypeptid nach einem der Ansprüche 1-8 oder die Nukleinsäure nach Anspruch 9 umfasst, optional wobei die pharmazeutische Zusammensetzung ferner einen pharmazeutisch unbedenklichen Arzneistoffträger umfasst.
12. Verfahren zum Herstellen eines Polypeptids oder eines BoNT-Polypeptids, wobei das Verfahren die Schritte eines Kultivierens der Zelle nach Anspruch 10 unter Bedingungen umfasst, bei denen das Polypeptid oder das BoNT-Polypeptid hergestellt wird.
13. Verfahren nach Anspruch 12, das ferner die folgenden Schritte umfasst:

    - Gewinnen des Polypeptids oder des BoNT-Polypeptids aus der Kultur,

    - Reinigen des Polypeptids oder des BoNT-Polypeptids,

    - Aktivieren des Polypeptids oder des BoNT-Polypeptids und/oder

    - Formulieren des Polypeptids oder des BoNT-Polypeptids.
14. Polypeptid oder BoNT-Polypeptid nach einem der Ansprüche 1-8 oder pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 11 zur Verwendung in der Medizin.
15. Polypeptid oder BoNT-Polypeptid nach einem der Ansprüche 1-8 oder pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 11 zur Verwendung bei einem Behandeln einer Krankheit im Zusammenhang mit unerwünschter neuronaler Aktivität, wobei die Krankheit aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Folgendem besteht: spasmodischer Dysphonie, Torticollis spasticus, Laryngospasmus, Dysphonie, lingualer Dystonie, zervikaler Dystonie, fokaler Handdystonie, Blepharospasmus, Strabismus, Spasmus (hemi)facialis, Affektion des Augenlides, Zerebralparese, fokaler Spastik und anderen Stimmerkrankungen, Reizdarmsyndrom, neurogener Blase, Anismus, spastischer Paraplegie, Ticstörungen, abnormen unwillkürlichen Bewegungen, Bruxismus, Analfissur, Achalasie, Dysphagie und anderen Muskeltonuserkrankungen und anderen Erkrankungen, die durch unfreiwillige Bewegungen von Muskelgruppen gekennzeichnet sind, Tränenfluss, Hyperhidrose, übermäßigem Speichelfluss, übermäßiger Magen-Darm-Sekretion, sekretorischen Erkrankungen, Schmerzen durch Muskelkrämpfe, Kopfschmerzen, Migräne und dermatologischen Krankheiten.