HK1130669A - 抗-igf-1r人单克隆抗体制剂 - Google Patents
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Description
本发明涉及一种抗-IGF-1R人单克隆抗体制剂，制备和应用其的方法。
在一方面中，本发明涉及IGF-1R制剂，其包括：
-约1到约150mg/mL huMab IGF-1R，
-约0.001到约1％的至少一种表面活性剂，和
-约1到约100mM缓冲液，
-约5.0到约7.0的pH。
所述IGF-IR(1型胰岛素样生长因子受体)，已经参与促进癌细胞的致瘤转化、生长、和存活。已经在宽范围的人恶性病中报道过高水平的IGF-IR表达。另外，已经在肿瘤和相关的基质细胞中注意到高水平的IGF-I和IGF-II表达，并且其可能以自分泌或旁分泌的方式刺激癌细胞生长。流行病学研究已将IGF-I的上五分血浆水平(upper quintileplasma levels)与增加的前列腺癌、结肠癌、肺癌和乳腺癌的危险相关。除了它在癌细胞增殖中的作用之外，IGF-IR保护细胞免于由生长因子匮乏、贴壁不依赖性、或细胞毒性药物治疗引起的程序性细胞死亡。
抑制癌细胞中IGF-IR的功能的一种有希望的策略是应用人抗-IGF-IR抗体，其结合IGF-IR的细胞外结构域并且抑制受体激活。已经开发了这样的拮抗性的、完整的人单克隆抗体，命名为huMab IGF-1R，其特异性结合人胰岛素样生长因子I受体(IGF-IR)，并且抑制该受体在癌细胞中的信号传导和增殖功能。
在本发明的制剂中所包括的抗体最先在PCT专利申请号WO2005/005635中描述，该申请的申请人是所有人，并且该申请的内容，特别是权利要求通过引用结合于此。如在WO2005/005635中所述，所述抗体结合IGF-IR，并且抑制IGF-I和IGF-II结合IGF-IR，并且其特征在于，它：
a)是IgG1同种型，
b)表现出1∶3到3∶1的抑制IGF-I结合IGF-IR的IC50值与抑制IGF-II结合IGF-IR的IC50值的比例，
c)在含有0.5％热灭活的胎牛血清(FCS)的培养基中，用HT29细胞进行的细胞磷酸化测定中，当与不用所述抗体的这样的测定比较时，它以5nM的浓度，抑制至少80％，优选地至少90％的IGF-IR磷酸化，和
d)在含有0.5％热灭活的胎牛血清(FCS)的培养基中，用3T3细胞，提供400,000到600,000分子IGF-IR/细胞，而进行的细胞磷酸化测定中，当与不用所述抗体的测定比较时，在10μM的浓度，它没有表现出如pkB磷酸化测量的IGF-IR刺激活性。
在本发明所述的制剂中所包括的抗体对需要抗肿瘤治疗的患者显示出益处，并且提供了肿瘤生长的减少和达到发展的时间的显著延长。在本发明所述的制剂中所包括的抗体具有新颖和创造性的特征，其为患有与IGF反常相关的疾病，特别是肿瘤疾病的患者带来益处。在本发明的制剂中所包括的抗体特征在于上述特征。因此，所述特征特别是特异性结合IGF-IR，以上述比例抑制IGF-I和IGF-II结合IGF-IR，是IgG1同种型，并且甚至在是它的IC50值200倍浓度的过量表达IGF-IR的细胞中也不激活IGF-IR信号传导。当用作治疗剂时，不具有“IGF-I模拟活性”的抗体提供了很强的优点。
术语“抗-IGF-1R人单克隆抗体”或“huMAb IGF-IR”表示如在WO2005/005635中所述和要求保护的抗体，WO2005/005635的内容，特别是权利要求，通过引用结合于此。
术语“抗体”包括不同形式的抗体，包括但不限于完整抗体、抗体片段、人抗体、人源化抗体和遗传加工的抗体，只要保留本发明所述的特征性特征。
“抗体片段”包括全长抗体的一部分，通常至少它的抗原结合部分或可变区。抗体片段的实例包括双抗体、单链抗体分子、免疫毒素、和由抗体片段形成的多特异性抗体。另外，抗体片段包括单链多肽，所述单链多肽具有VH链的特征，即能够与VL链组装在一起，或者具有结合IGF-1R的VL链的特征，即能够与VH链组装在一起成为功能性抗原结合口袋，并且由此提供抑制IGF-I和IGF-II结合IGF-IR的特征。
“抗体片段”还包括这样的片段，其本身不能提供效应器功能(ADCC/CDC)，但是在与适当的抗体恒定结构域组合后以本发明所述的方式提供这种功能。
当用于本文时，术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指单一氨基酸组成的抗体分子的制剂。因此，术语“人单克隆抗体”指表现出单一结合特性的抗体，其具有来源于人种系免疫球蛋白序列的可变和恒定区。在一个实施方案中，所述人单克隆抗体通过杂交瘤产生，其包括获自转基因非人动物如转基因小鼠的B细胞，具有包括融合到无限增殖细胞中的人重链转基因和轻链人转基因的基因组。
术语“嵌合抗体”指这样的单克隆抗体，其包括来自一种来源或物种的可变区，即结合区，和来自不同来源或物种的至少部分恒定区，通常通过重组DNA技术制备。包括鼠源可变区和人恒定区的嵌合抗体是特别优选的。这样的鼠源/人嵌合抗体是表达的免疫球蛋白基因的产物，所述表达的免疫球蛋白基因包括编码鼠源免疫球蛋白可变区的DNA片段和编码人免疫球蛋白恒定区的DNA片段。本发明所包括的其它形式的“嵌合抗体”是其中种类或亚类已经被从原始抗体进行修饰或改变的那些。这样的“嵌合”抗体还叫作“种类-转换抗体”。产生嵌合抗体的方法包括现在本领域公知的常规重组DNA和基因转染技术。参见，例如，Morrison，S.L.，等，Proc.Natl.Acad Sci.USA(美国国家科学院学报)81(1984)6851-6855；美国专利号5,202,238和5,204,244。
术语“人源化抗体”指这样的抗体，其中构架或“互补决定区”(CDR)已被修饰成包括与亲本免疫球蛋白相比具有不同特异性的免疫球蛋白的CDR。在优选的实施方案中，将鼠源CDR移植到人抗体的构架区，以制备“人源化抗体”。参见，例如，Riechmann，L.，等，Nature(自然)332(1988)323-327；和Neuberger，M.S.，等，Nature(自然)314(1985)268-270。特别优选的CDRs对应识别上述关于嵌合和双功能抗体的抗原的那些代表性序列。
术语“人抗体”，当用于本文时，意欲包括具有来自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。可变重链优选地来源于种系序列DP-50(GenBank LO6618)，并且可变轻链优选地来源于种系序列L6(GenBank X01668)。所述抗体的恒定区是人IgG1型的恒定区。这样的区域可以是同种异型的，并且由例如Johnson，G.，和Wu，T.T.，NucleicAcids Res.(核酸研究)28(2000)214-218及其中引用的数据库所述，并且是有用的，只要保留本发明所述的诱导ADCC和优选地CDC的特征。
术语“重组人抗体”，当用于本文时，意欲包括通过重组方式制备、表达、产生或分离的所有人抗体，诸如从宿主细胞诸如SP2-0，NS0或CHO细胞或从对于人免疫球蛋白基因是转基因的动物(例如，小鼠)分离的抗体，或者使用转染到宿主细胞中的的重组表达载体表达的抗体。这样的重组人抗体以重排的方式具有来源于人种系免疫球蛋白序列的可变和恒定区。本发明所述的重组人抗体已经进行了体内的体细胞超突变。因此，所述重组抗体的VH和VL区域的氨基酸序列是这样的序列，即，尽管来源于并且与人种系VH和VL序列相关，其不能在体内天然存在于人抗体种系所有成员中。
当用于本文时，“结合”是指以约10-13到10-8M(KD)，优选地约10-13到10-9M的亲和力结合IGF-IR的抗体。
术语“核酸分子”，当用于本文时，意欲包括DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是单链的或双链的，但是优选是双链DNA。
“恒定结构域”不直接参与抗体与抗原的结合，但是参与效应器功能(ADCC，互补结合，和CDC)。本发明所述的抗体的恒定结构域是IgG1型的。具有这些特征的人恒定结构域在Kabat等，Sequences ofProteins of Immunological Interest(免疫学目的的蛋白序列)，第5版.Public Health Service(公共保健服务)，National Institutes of Health(全国卫生研究所)，Bethesda，MD.(1991)，和Brüggemann，M.，等，J.Exp.Med.(实验医学杂志)166(1987)1351-1361；Love，T.W.，等，MethodsEnzymol.(酶学方法)178(1989)515-527中详细描述。实例在WO2005/005635中显示为SEQ ID NOS：5-8。其它有用的和优选的恒定结构域是可获自为这个发明保存在DSMZ的杂交瘤细胞系的抗体的恒定结构域。用于本发明的恒定结构域提供互补结合。ADCC和任选地CDC由可变和恒定结构域的组合提供。
当用于本文时，“可变区”(轻链的可变区(VL)，重链的可变区(VH))表示直接参与抗体与抗原结合的轻链和重链对的每一个。可变人轻链和重链的结构域具有相同的大体结构(general structure)，并且每个结构域包括序列广泛保守的4个构架(FR)区，它们通过3个“超可变区”(或互补决定区，CDRs)连接。该构架区采用β-折叠构象，并且CDRs可以形成连接所述β-折叠结构的环。每条链中的CDRs通过所述构架区容纳在它们的三维结构中，并且与来自另一条链的CDRs形成抗原结合位点。抗体重链和轻链CDR3区在本发明所述的抗体的结合特异性/亲和性中起特别重要的作用，并且因此提供本发明的另一个目的。
当用于本文时，术语“超可变区”或“抗体的抗原-结合部分”是指负责结合抗原的抗体的氨基酸残基。所述超可变区包括来自“互补决定区”或″CDRs″的氨基酸残基。“构架”或″FR″区是除了本文所定义的超可变区残基之外的那些可变结构域区。因此，抗体的轻链和重链包括结构域FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，和FR4的N到C端。特别地，重链的CDR3是最有助于抗原结合的区域。CDR和FR区依据Kabat等，(免疫学目的的蛋白序列)，第5版.Public Health Service(公共保健服务)，National Institutes of Health(全国卫生研究所)，Bethesda，MD.(1991))的标准定义确定，和/或是来自“超可变环”的那些残基。
当用于本文时，术语“与IGF-IR结合”意指在体外测定中，优选地在其中抗体结合在表面上的结合测定中，所述抗体与IGF-IR的结合，并且IGF-IR的结合通过表面等离子共振(SPR)测量。结合意指结合亲和力(KD)10-8M或更小，优选10-13到10-9M。
与IGF-IR结合可以通过BIAcore测定(Pharmacia Biosensor AB(法玛西亚生物传感器AB)，Uppsala，瑞典)研究。结合的亲和力通过术语ka(抗体从抗体/抗原复合物上缔合的速率常数)，kd(解离常数)和KD(kd/ka)定义。本发明所述的抗体表现出10-10M或更小的KD。
IGF-I和IGF-II与IGF-IR的结合还被本发明所述的抗体抑制。所述抑制在IGF-I/IGF-II与肿瘤细胞上的IGF-IR结合的测定中以IC50测量。这样的测定在实施例7中描述。在这样的测定中，在所述肿瘤细胞(例如，HT29)表面上提供的结合IGF-IR的放射性标记的IGF-I或IGF-II或其结合IGF-IR的片段的量，不用或用增加浓度的抗体进行测量。本发明所述的抗体对于IGF-I和IGF-II与IGF-IR结合的IC50值不大于2nM，并且关于IGF-I/IGF-II与IGF-IR结合的IC50值的比例是约1∶3到3∶1。IC50值测量为至少三次独立测量的平均值或中值。单次IC50值可能超出范围。
当用于本文时，术语“对IGF-I和IGF-II与IGF-IR结合的抑制”指在体外测定中，抑制I125-标记的IGF-I或IGF-II与呈递在HT29(ATCCHTB-38)肿瘤细胞表面上的IGF-IR的结合。抑制意指2nM或更低的IC50值。
当用于本文时，术语“表面活性剂”表示药用表面活性剂。在本发明的制剂中，表面活性剂的量描述为以重量/体积表示的百分数。最常用的重量/体积单位是mg/mL。适当的药用表面活性剂包括但不限于，聚乙烯-脱水山梨糖醇-脂肪酸酯，聚乙烯-聚丙二醇，聚氧乙烯-硬脂酸酯和十二烷基硫酸钠。优选的聚乙烯-脱水山梨醇是聚乙烯(20)-脱水山梨醇-酯(与聚山梨醇20同义，以商标名吐温20TM出售)和聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单油酸酯(与聚山梨醇80同义，以商标名吐温80TM出售)。优选的聚乙烯-聚丙二醇是以名称PluronicF68或Poloxamer 188TM出售的那些。优选的聚氧乙烯-硬脂酸酯是以商标名MyrjTM出售的那些。优选的聚氧乙烯单月桂酸酯是以商标名BrijTM出售的那些。当使用聚乙烯-脱水山梨醇-聚乙烯(20)-脱水山梨醇-酯(吐温20TM)和聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单油酸酯(吐温80TM)时，它们通常以约0.001到约1％，优选地约0.005到约0.1％，和还优选地约0.01到约0.02％w/v的量使用。
当用于本发明时，术语“缓冲液”表示药用缓冲液。适当的药用缓冲液包括但不限于，组氨酸-缓冲液、柠檬酸-缓冲液、琥珀酸-缓冲液、乙酸-缓冲液和磷酸-缓冲液。优选的缓冲液包括L-组氨酸或L-组氨酸与L-组氨酸氢氯化物与等张剂的混合物，用本领域已知的酸或碱进行pH调节。上述组氨酸-缓冲液通常以约1mM到约100mM，优选地约5mM到约50mM，和还更优选地约20mM的量使用。不依赖于所用的缓冲液，pH将在包括约5.0到约7.0，和优选地约5.5到约6.5，并且还优选地约6.0的值进行调节。
当用于本文时，术语“等张剂”表示药用等张剂。等张剂用来提供等张制剂。等张制剂是液体或由固体形式，例如冻干形式重建的液体，并且表示具有与其所比较的另外一些溶液诸如生理盐溶液和血液血清相同的张力的溶液。适当的等张剂包括但不限于氯化钠、氯化钾、葡萄糖、甘油和任何来自氨基酸组的成分、糖以及它们的组合。等张剂通常以约5mM到约350mM的总量使用。
当用于本文时，术语“液体”与本发明所述的制剂联系表示在至少约2到约8℃的温度是液体的制剂。
当用于本文时，术语“冻干的”与本发明所述的制剂联系表示通过冷冻所述制剂并且随后通过本领域已知的任何冷冻干燥方法，例如商购的冷冻-干燥装置，将冰从冷冻的内容物中升华的制剂。
当用于本文时，术语“氨基酸”表示约1到约100mg/mL的量的氨基酸，包括但不限于精氨酸、甘氨酸、鸟氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、脯氨酸。
当用于本文时，术语“糖”表示以约25mM到约500mM的量使用的药用糖。适当的糖包括但不限于海藻糖、蔗糖、乳糖、葡萄糖、甘露糖、麦芽糖、半乳糖、果糖、山梨糖、棉子糖、葡糖胺、N-甲基葡糖胺(所谓的“甲葡胺”)、半乳糖胺和神经氨酸。
术语“稳定剂”指药用稳定剂，例如但不限于，上部分所述的氨基酸和糖以及本领域已知的任何种类和分子量的商购的环糊精和葡聚糖。
术语“抗氧化剂”表示药用抗氧化剂。
如上文提及，在一方面，本发明涉及IGF-1R制剂，其包括：
-约1到约150mg/mL huMab IGF-1R，
-约0.001到约1％的至少一种表面活性剂，和
-约1到约100mM的缓冲液，
-约5.0到约7.0的pH。
本发明所述的制剂优选地包括约0.001到约1％的至少一种表面活性剂。
在一个特定的实施方案中，本发明所述的制剂包括：
-约1到约150mg/mL huMab IGF-1R，
-约0.005到约0.05％的至少一种表面活性剂，和
-约1到约100mM的缓冲液，
-约5.0到约7.0的pH。
本发明所述的制剂可以是为液体形式，冻干的形式或由冻干形式重构的液体形式。
在一个特定的实施方案中，本发明所述的制剂是冻干的制剂。关于较高分子量的颗粒和聚集物的制剂，其通常很难在与所述的抗-IGF-1R人单克隆抗体的相同的浓度获得液体制剂，本发明所述的冻干的制剂具有提高的稳定性的优点。
本发明所述的制剂可以通过静脉内(i.v.)、皮下(s.c.)或任何其它的肠胃外(parental)施用方式诸如药物领域已知的那些进行施用。
本发明的制剂可以进一步包括一种或多种约5mM到约350mM的量的等张剂。适当的等张剂可以选自由氯化钠(NaCl)，氯化钾，糖，包括葡萄糖，甘油，氨基酸，以及它们的组合组成的组。
本发明的制剂可以进一步包括约25mM到约500mM的量的糖。适当的糖可以选自由海藻糖、蔗糖、乳糖、葡萄糖、甘露糖、麦芽糖、半乳糖、果糖、山梨糖、棉子糖、葡糖胺、N-甲基葡糖胺、半乳糖胺、神经氨酸、以及它的组合组成的组。
本发明的制剂可以进一步包括一种或多种下列组分：抗氧化剂，抗坏血酸，谷胱甘肽，防腐剂，例如，间-甲酚，苯酚，苯甲醇，羟苯甲酸甲酯，对羟苯甲酸丙酯，氯丁醇，thiomersal，苯扎氯铵，环糊精，例如羟丙基-β-环糊精，硫代丁基乙基-β-环糊精，β-环糊精，聚乙二醇，例如PEG 3000，3350，4000，6000，白蛋白，人血清白蛋白(HSA)，牛血清白蛋白(BSA)，多羟基醇，甘油，乙醇，甘露醇，盐，乙酸盐，(例如乙酸钠)，氯化镁，氯化钙，氨丁三醇，EDTA(例如Na-EDTA)。
本发明的制剂可以进一步包括一种或多种上文定义的稳定剂和还在本领域中已知为“溶剂保护剂(lyoprotectants)”的成分，诸如本领域已知的糖、糖醇、氨基酸和葡聚糖。
在一个特定的实施方案中，本发明的制剂包括下述制剂，以液体、冻干的或由冻干形式重构的液体：
-约1到约150mg/mL huMab IGF-1R，
-0.01％吐温20w/v，
-20mM L-组氨酸，
-140mM NaCl，
-pH 6.0。
本发明所述的制剂还包括下述具体制剂：
-25mg/mL huMab IGF-1R，
-0.01％聚山梨醇20，
-20mM L-组氨酸，
-140mM NaCl，
-pH 6.0；
或
-25mg/mL huMab IGF-1R，
-0.03％聚山梨醇20，
-20mM L-组氨酸，
-140mM NaCl，
-pH 6.0；
或
-25mg/mL huMab IGF-1R，
-0.05％聚山梨醇20，
-20mM L-组氨酸，
-140mM NaCl，
-pH 6.0；
或
-10mg/mL huMab IGF-1R，
-0.01％聚山梨醇20，
-20mM L-组氨酸，
-140mM NaCl，
-pH 6.0；
或
-10mg/mL huMab IGF-1R，
-0.03％聚山梨醇20，
-20mM L-组氨酸，
-140mM NaCl，
-pH 6.0；
或
-10mg/mL huMab IGF-1R，
-0.05％聚山梨醇20，
-20mM L-组氨酸，
-140mM NaCl，
-pH 6.0；
或
-25mg/mL huMab IGF-1R，
-20mM L-组氨酸，
-140mM NaCl，
-pH 5.5；
或
-25mg/mL huMab IGF-1R，
-0.01％聚山梨醇20，
-20mM L-组氨酸，
-250mM海藻糖二水合物，
-pH 5.5；
或
-25mg/mL huMab IGF-1R，
-20mM L-组氨酸，
-250mM海藻糖二水合物，
-pH 6.0；
或
-25mg/mL huMab IGF-1R，
-0.01％聚山梨醇20，
-20mM L-组氨酸，
-250mM海藻糖二水合物，
-pH 6.0；
或
-25mg/mL huMab IGF-1R，
-20mM L-组氨酸，
-250mM海藻糖二水合物，
-0.05％聚山梨醇20，
-pH 6.0；
或
-25mg/mL huMab IGF-1R，
-20mM L-组氨酸，
-60mM海藻糖二水合物，
-0.01％聚山梨醇20，
-pH 6.0；
或
-25mg/mL huMab IGF-1R，
-20mM琥珀酸酯(succinate)，
-250mM海藻糖二水合物，
-0.01％聚山梨醇20，
-pH 5.5；
或
-25mg/mL huMab IGF-1R，
-20mM L-组氨酸，
-60mM海藻糖二水合物，
-0.01％聚山梨醇20，
-pH 6.0。
在本发明所述的制剂的优选实施方案中，所述制剂是以冻干的形式，并且在用用于注射的适量的水重构后包括：
-25mg/mL huMab IGF-1R，
-0.01％聚山梨醇20，
-20mM L-组氨酸，
-250mM海藻糖二水合物，
-pH 5.5。
在2-8℃和25℃保存约6个月时，这种制剂表现出良好的稳定性，具有低于1.5％的高分子量种类，并且没有形成可见的和在显微镜下才可见的颗粒。摇动和多次冻融步骤用于该液体制剂，以模拟在制备过程中，例如通过压滤和填充、冻干和完成操作过程中，潜在发生的物理性应力条件。发现这种制剂在5℃和25℃摇动一周后是稳定的。不能检测到可见的和显微镜下才可见的颗粒的形成，并且在表明形成可溶的聚集物的高分子量种类的级分中没有观察到显著增加。
在摇动和冻融后的高分子量种类
实施例
如下开发本发明所述的用于静脉内施用的液体和冻干的药物产品制剂：
制备液体制剂
将在生产缓冲液(约10mM组氨酸缓冲液，具有约150mM NaCl)中的约10和25mg/mL huMab IGF-1R溶液针对大体积的水和最终制剂各自的缓冲盐系统(参见具有制剂的精确组成的表格)进行透析。如果需要，在透析之前，蛋白浓度通过使用商购离心过滤装置过滤而增加，并且然后通过用透析缓冲液稀释而调整到需要的蛋白浓度。需要时，将用于稳定蛋白质和用于张力调节的糖和盐加入到透析缓冲液中。在透析后，将表面活性剂以2-40倍的储液加入到所述制剂中。备选地，缓冲液交换和浓缩使用商购的切线流过滤装置(tangential flow filtrationdevice)，例如具有Sartorius Hydrosart膜(30’000Da截留分子量)的CF(GE卫生保健(GE Healthcare))进行。成分诸如糖、盐或表面活性剂在缓冲液交换之后通过使用适当量的浓缩储液而加入。所有制剂都是通过0.22μm低蛋白结合滤器进行无菌过滤，并且无菌整分到无菌的6mL玻璃瓶中，该玻璃瓶用特氟纶-包被的橡胶塞和alucrimp帽封闭。这些制剂在不同温度下保存不同的时间间隔，并且在各段指定的时间点取出进行分析，分析通过1)UV分光光度测量，2)大小排阻色谱(SEC)和3)光暗性进行，以确定溶液的浊度。此外，使用Seidenader V90-T仪器对每种样品进行可见颗粒的分析。显微镜下才可见颗粒的出现通过HIAC Royco装置评估。
制备冻干的制剂
按上述关于液体制剂制备25mg/mL huMab IGF-1R溶液。所有制剂都是通过0.22μm低蛋白结合滤器进行无菌过滤，并且无菌整分到无菌玻璃瓶中。该瓶部分用特氟纶-包被的橡胶塞部分封闭，适用于在冻干过程中使用，并且转移到冻干器的干燥室中。本领域任何已知的冻干方法都意欲包括在本发明的范围内。例如，用于本研究的冻干方法包括将所述制剂从室温冷却到约5℃(预冷)，而后通过在-40℃(冷冻I)冷冻，以约1℃/min到5℃/min的下降率进行。第一干燥步骤可以0.3到0.5℃的下降率从-40℃到-30℃使用，然后在约75到80m Torr的室压下保持在-30℃至少50小时。第二干燥部分可以以0.1到0.3℃/min的下降率从-30℃到25℃发生，并且在约50到80m Torr的室压下在25℃保持至少5小时。发现使用上述冻干方法干燥的huMab IGF-1R制剂具有约＜5分钟的便利地快速重构时间。冻干在LyoStar II冻干器(FTS系统，StoneRidge，纽约，美国和Usifroid Orion，Maurepas，法国)中进行。当通过Karl-Fischer方法确定时，本研究中所有的冻干的饼具有约0.1-5.0％的残留的水含量。将冻干的瓶在不同温度下保存不同的时间间隔。在分析之前，将所述冻干的制剂用各自的注射水体积(WFI)重构，分析通过1)UV分光光度测量，2)确定重构时间，3)大小排阻色谱(SEC)和4)光暗性进行，以确定溶液的浊度。此外，使用Seidenader V90-T仪器(Seidenader，Marktschwaben，德国)对每种样品进行可见颗粒的分析。显微镜下才可见颗粒的出现通过HIAC Royco装置评估。
进行大小排阻层析(SEC)以检测该制剂中可溶的高分子量种类(聚集物)和低分子量水解产物。该方法使用Merck日立7000 HPLC仪器或带有UV检测器(检测波长λ(280nm))的Waters Alliance 2795。该两种仪器都装有TSK G3000 SWXL柱；该方法使用0.2M K2HPO4/0.25MKCL，pH 7.0作为流动相。流速为0.5mL/min(平等的)，运行时间30分钟，柱温在25℃。在将样品稀释至0.5mg/mL抗体浓度后，分别在Uvikon932(Kontron仪器)上在278nm和在Varian Cary Bio UV分光光度计在280nm进行确定蛋白质浓度的UV分光光度检测。对于浊度确定，使用HACH 2100AN浊度计在室温以FTU(浊度单位)测量光暗性。
本发明所述的液体huMAb IGF-1R药物制剂的组成和在2-8℃保存3个月后的稳定性数据
制剂A是液体制剂，其具有25mg/mL huMab IGF-1R，20mM L-组氨酸，140mM NaCl，0.01％聚山梨醇20，在pH 6.0的组成。
| 时间点 | 蛋白质浓度 | 高分子量种类(％) | 浊度FTU(浊度) |
| 初始 | 24.47 | 0.82 | 9.94 |
| 4周 | 22.35 | 1.0 | 10.3 |
| 8周 | 23.02 | 1.31 | 9.83 |
| 12周 | 23.59 | 1.46 | 9.22 |
制剂B是液体制剂，其具有25mg/mL huMab IGF-1R，20mM L-组氨酸，140mM NaCl，0.03％聚山梨醇20，在pH 6.0的组成。
| 时间点 | 蛋白质浓度 | 高分子量种类(％) | 浊度FTU |
| 初始 | 24.98 | 0.84 | 9.79 |
| 4周 | 23.58 | 1.01 | 9.97 |
| 8周 | 25.43 | 1.37 | 10.5 |
| 12周 | 23.68 | 1.49 | 10.3 |
制剂C是液体制剂，其具有25mg/mL huMab IGF-1R，20mM L-组氨酸，140mM NaCl，0.05％聚山梨醇20，在pH 6.0的组成。
| 时间点 | 蛋白质浓度 | 高分子量种类(％) | 浊度FTU |
| 初始 | 24.42 | 0.85 | 10.1 |
| 4周 | 21.57 | 1.02 | 10.5 |
| 8周 | 25.0 | 1.36 | 10.6 |
| 12周 | 23.97 | 1.51 | 10.2 |
制剂D是液体制剂，其具有10mg/mL huMab IGF-1R，20mM L-组氨酸，140mM NaCl，0.01％聚山梨醇20，在pH 6.0的组成。
| 时间点 | 蛋白质浓度 | 高分子量种类(％) | 浊度FTU |
| 初始 | 9.87 | 0.63 | 4.42 |
| 4周 | 9.61 | 0.75 | 4.44 |
| 8周 | 9.72 | 0.97 | 4.53 |
| 12周 | 9.63 | 1.11 | 4.24 |
制剂E是液体制剂，其具有10mg/mL huMab IGF-1R，20mM L-组氨酸，140mM NaCl，0.03％聚山梨醇20，在pH 6.0的组成。
| 时间点 | 蛋白质浓度 | 高分子量种类(％) | 浊度FTU |
| 初始 | 9.98 | 0.69 | 4.26 |
| 4周 | 9.68 | 0.79 | 4.72 |
| 8周 | 9.68 | 1.05 | 4.54 |
| 12周 | 9.62 | 1.59 | 4.26 |
制剂F是液体制剂，其具有10mg/mL huMab IGF-1R，20mM L-组氨酸，140mM NaCl，0.05％聚山梨醇20，在pH 6.0的组成。
| 时间点 | 蛋白质浓度 | 高分子量种类(％) | 浊度FTU |
| 初始 | 9.81 | 0.67 | 4.45 |
| 4周 | 9.69 | 0.83 | 4.36 |
| 8周 | 9.62 | 1.19 | 5.01 |
| 12周 | 9.18 | 1.45 | 4.44 |
制剂G是液体制剂，其具有10mg/mL huMab IGF-1R，20mM L-组氨酸，140mM NaCl，在pH 5.5的组成。
| 时间点 | 蛋白质浓度 | 高分子量种类(％) | 浊度FTU |
| 初始 | 24.7 | 0.8 | 4.9 |
| 4周 | 24.6 | 1.0 | 3.9 |
| 8周 | n.d. | n.d. | n.d. |
| 12周 | 24.8 | 0.8 | 6.1 |
制剂H是液体制剂，其具有25mg/mL huMab IGF-1R，20mM L-组氨酸，250mM海藻糖二水合物，0.01％聚山梨醇20，在pH 5.5的组成。
| 时间点 | 蛋白质浓度 | 高分子量种类(％) | 浊度FTU |
| 初始 | 27.1 | 1.29 | 3.58 |
| 4周 | 26.9 | 1.27 | 3.74 |
| 8周 | 29.33 | 1.43 | 5.03 |
| 12周 | 26.44 | 1.38 | 4.10 |
制剂I是液体制剂，其具有25mg/mL huMab IGF-1R，20mM L-组氨酸，250mM海藻糖二水合物，在pH 6.0的组成。
制剂J是液体制剂，其具有25mg/mL huMab IGF-1R，20mM L-组氨酸，250mM海藻糖二水合物，0.01％聚山梨醇20，在pH 6.0的组成。
制剂K是液体制剂，其具有25mg/mL huMab IGF-1R，20mM L-组氨酸，250mM海藻糖二水合物，0.05％聚山梨醇20，在pH 6.0的组成。
制剂L是液体制剂，其具有25mg/mL huMab IGF-1R，20mM L-组氨酸，60mM海藻糖二水合物，0.01％聚山梨醇20，在pH 6.0的组成。
制剂M是液体制剂，其具有25mg/mL huMab IGF-1R，20mMsuccinate，250mM海藻糖二水合物，0.01％聚山梨醇20，在pH 5.5的组成。
| 时间点 | 蛋白质浓度 | 高分子量种类(％) | 浊度FTU |
| 初始 | 26.13 | 1.49 | 7.06 |
| 4周 | 27.93 | 1.46 | 7.25 |
| 8周 | 26.59 | 1.62 | 8.20 |
| 12周 | 26.89 | 1.62 | 7.10 |
本发明所述的冻干的huMAb IGF-1R药物产品的组成和在2-8℃保存3个月后的稳定性数据
制剂N是冻干的制剂，其具有25mg/mL huMab IGF-1R，20mM L-组氨酸，60mM海藻糖二水合物，0.01％聚山梨醇20，在pH 6.0的重构溶液组成。
| 时间点 | 蛋白质浓度 | 高分子量种类(％) | 浊度FTU |
| 初始 | 27.40 | 1.37 | 3.99 |
| 4周 | 27.89 | 1.36 | 4.20 |
| 8周 | 27.93 | 1.43 | 5.04 |
| 12周 | 27.34 | 1.38 | 4.31 |
制剂O是冻干的制剂，其具有25mg/mL huMab IGF-1R，20mM L-组氨酸，60mM蔗糖，0.01％聚山梨醇20，在pH 6.0的重构溶液组成。
| 时间点 | 蛋白质浓度 | 高分子量种类(％) | 浊度FTU |
| 初始 | 24.77 | 0.93 | 5.77 |
| 4周 | 24.81 | 0.93 | 6.79 |
| 8周 | 24.11 | 0.88 | 5.38 |
| 12周 | 24.32 | 1.03 | 3.93 |
制剂P是冻干的制剂，其具有25mg/mL huMab IGF-1R，20mMsuccinate，250mM海藻糖二水合物，0.01％聚山梨醇20，在pH 5.5的重构溶液组成。
| 时间点 | 蛋白质浓度 | 高分子量种类(％) | 浊度FTU |
| 初始 | 26.9 | 1.45 | 7.17 |
| 4周 | 27.71 | 1.55 | 7.44 |
| 8周 | 26.59 | 1.43 | 7.13 |
| 12周 | 26.89 | 1.36 | 7.07 |
制剂Q是冻干的制剂，其具有25mg/mL huMab IGF-1R，20mM L-组氨酸，250mM海藻糖二水合物，0.01％聚山梨醇20，在pH 5.5的重构溶液组成。
| 时间点 | 蛋白质浓度 | 高分子量种类(％) | 浊度FTU |
| 初始 | 27.11 | 1.33 | 3.59 |
| 4周 | 28.28 | 1.22 | 3.49 |
| 8周 | 27.81 | 1.30 | 4.65 |
| 12周 | 28.22 | 1.18 | 4.04 |
Claims (14)
1.一种制剂，其包括：
-约1到约150mg/mL huMab IGF-1R，
-约0.001到约1％的至少一种表面活性剂，和
-约1到约100mM缓冲液，
-约5.0到约7.0的pH。
2.权利要求1所述的制剂，其包括约0.001到约1％的至少一种表面活性剂。
3.权利要求1所述的制剂，其是以液体形式，以冻干的形式，或以由冻干形式重构的液体形式。
4.权利要求1或3任一项所述的制剂，其可以通过静脉内(i.v.)或皮下(s.c.)或任何其它的肠胃外施用而施用。
5.权利要求1到4任一项所述的制剂，其还包括以约5mM到约350mM的量的一种或多种等张剂。
6.权利要求5所述的制剂，其中所述等张剂选自由氯化钠(NaCl)，氯化钾，糖，包括葡萄糖，甘油，氨基酸和它们的组合组成的组。
7.权利要求1到6任一项所述的制剂，其还包括以约25mM到约500mM的量的糖。
8.权利要求7所述的制剂，其中所述糖选自由海藻糖、蔗糖、乳糖、葡萄糖、甘露糖、麦芽糖、半乳糖、果糖、山梨糖、棉子糖、葡糖胺、N-甲基葡糖胺(“甲葡胺”)、半乳糖胺和神经氨酸组成的组。
9.权利要求1到8任一项所述的制剂，其还包括一种或多种选自由下列药用物组成的组的成分：抗氧化剂，抗坏血酸，谷胱甘肽，防腐剂，特别地，间-甲酚，苯酚，苯甲醇，羟苯甲酸甲酯，对羟苯甲酸丙酯，氯丁醇，thimersal，苯扎氯铵，环糊精，特别是羟丙基-β-环糊精，硫代丁基乙基-β-环糊精，β-环糊精，聚乙二醇，特别是PEG 3000，3350，4000，6000，白蛋白，人血清白蛋白(HSA)，牛血清白蛋白(BSA)，多羟基醇，甘油，乙醇，甘露醇，盐，乙酸盐，特别是乙酸钠，氯化镁，氯化钙，氨丁三醇，EDTA，特别是Na-EDTA。
10.权利要求1到9任一项所述的制剂，其中它包括：
-约1到约150mg/mL huMab IGF-1R，
-0.01％吐温20w/v，
-20mM L-组氨酸，
-140mM NaCl，
-pH 6.0。
11.权利要求1到9任一项所述的制剂，其中它包括：
-25mg/mL huMab IGF-1R，
-0.01％聚山梨醇20，
-20mM L-组氨酸，
-140mM NaCl，
-pH 6.0；
或
-25mg/mL huMab IGF-1R，
-0.03％聚山梨醇20，
-20mM L-组氨酸，
-140mM NaCl，
-pH 6.0；
或
-25mg/mL huMab IGF-1R，
-0.05％聚山梨醇20，
-20mM L-组氨酸，
-140mM NaCl，
-pH 6.0；
或
-10mg/mL huMab IGF-1R，
-0.01％聚山梨醇20，
-20mM L-组氨酸，
-140mM NaCl，
-pH 6.0；
或
-10mg/mL huMab IGF-1R，
-0.03％聚山梨醇20，
-20mM L-组氨酸，
-140mM NaCl，
-pH 6.0；
或
-10mg/mL huMab IGF-1R，
-0.05％聚山梨醇20，
-20mM L-组氨酸，
-140mM NaCl，
-pH 6.0；
或
-25mg/mL huMab IGF-1R，
-20mM L-组氨酸，
-140mM NaCl，
-pH 5.5；
或
-25mg/mL huMab IGF-1R，
-0.01％聚山梨醇20，
-20mM L-组氨酸，
-250mM海藻糖二水合物，
-pH 5.5；
或
-25mg/mL huMab IGF-1R，
-20mM L-组氨酸，
-250mM海藻糖二水合物，
-pH 6.0；
或
-25mg/mL huMab IGF-1R，
-0.01％聚山梨醇20，
-20mM L-组氨酸，
-250mM海藻糖二水合物，
-pH 6.0；
或
-25mg/mL huMab IGF-1R，
-20mM L-组氨酸，
-250mM海藻糖二水合物，
-0.05％聚山梨醇20，
-pH 6.0；
或
-25mg/mL huMab IGF-1R，
-20mM L-组氨酸，
-60mM海藻糖二水合物，
-0.01％聚山梨醇20，
-pH 6.0；
或
-25mg/mL huMab IGF-1R，
-20mM琥珀酸盐(酯)，
-250mM海藻糖二水合物，
-0.01％聚山梨醇20，
-pH 5.5；
或
-25mg/mL huMab IGF-1R，
-20mM L-组氨酸，
-60mM海藻糖二水合物，
-0.01％聚山梨醇20，
-pH 6.0。
12.权利要求1到11任一项所述的制剂用于制备用来治疗由IGF-IR受体调控的疾病的药物中的应用。
13.权利要求12所述的应用，其中所述疾病选自由乳腺癌、结肠直肠癌、非小细胞肺癌(NSCLC)和前列腺癌组成的组。
14.如上文所述的本发明。
***
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP06111848.5 | 2006-03-28 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HK1130669A true HK1130669A (zh) | 2010-01-08 |
Family
ID=
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