HK1118289A - 可用作蛋白激酶抑制劑的吖吲哚 - Google Patents

Description

可用作蛋白激酶抑制剂的吖吲哚

技术领域

本发明涉及可用作蛋白激酶抑制剂的化合物。本发明也提供包含本发明化合物的药学上可接受的组合物和使用这些组合物治疗各种疾患的方法。本发明也提供制备本发明化合物的方法。

背景技术

近年来，更好地理解与疾病有关的酶和其他生物分子的结构，大大有助于寻求新的治疗剂。已经成为广泛研究的主题的一类重要的酶是蛋白激酶。

蛋白激酶构成一大家族在结构上相关的酶，它们负责控制细胞内的多种信号转导过程(参见Hardie，G.and Hanks，S.The ProteinKinase Facts Book，I and II，Academic Press，San Diego，CA：1995)。蛋白激酶被认为从共同的遗传基因进化而来，这是由于保存了它们的结构和催化功能。几乎所有的激酶都含有相似的250-300个氨基酸催化结构功能域。激酶可以根据它们磷酸化的底物分为若干家族(例如蛋白质-酪氨酸、蛋白质-丝氨酸/苏氨酸、脂质等)。已经鉴别了一般对应于每种激酶家族的序列基序(例如参见Hanks，S.K.Hunter，T.FASEB J.1995，9，576-596；Knighton等人.Science1991，253，407-414；Hiles等人.Cell 1992，70，419-429；Kunz等人.Cell 1993，73，585-596；Garcia-Bustos等人.EMBO J.1994，13，2352-2361)。

一般而言，蛋白激酶通过影响磷酰基从三磷酸核苷转移至参与信号传递途径的蛋白质受体而介导细胞内信号传递。这些磷酸化事件充当分子开关，能够调控或调节靶蛋白的生物功能。这些磷酸化事件最终是响应于多种细胞外与其他刺激而被激发的。这类刺激的实例包括环境与化学应激反应信号(例如渗透压休克、热激、紫外辐射、细菌内毒素和H₂O₂)、细胞因子(例如白介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子α(TNF-α))和生长因子(例如粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和成纤维细胞生长因子(FGF))。细胞外刺激可以影响一种或多种细胞应答，所述应答涉及细胞生长、移行、分化、激素分泌、转录因子活化、肌肉收缩、糖代谢、蛋白质合成控制和细胞周期调节。

很多疾病与由上述蛋白激酶介导的事件激发的异常细胞应答有关。这些疾病包括但不限于自身免疫疾病、炎性疾病、骨疾病、代谢疾病、神经病学与神经变性疾病、癌症、心血管疾病、变态反应与哮喘、阿尔茨海默氏病和激素相关性疾病。因此，医药化学界一直努力寻找作为治疗剂有效的蛋白激酶抑制剂。

Tec家族非受体酪氨酸激酶在抗原-受体信号发送中起到核心作用，例如TCR、BCR和Fcε受体(在Miller A，等人Current Opinionin Immunology 14；331-340(2002)中有评述。Tec家族激酶是T-细胞活化所必需的。Tec家族的三种成员Itk、Rlk和Tec在T-细胞中的抗原受体参与事件(engagement)下游被活化，传送信号至下游效应器，包括PLC-γ。小鼠中Itk的缺失导致T-细胞受体(TCR)-诱导的细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IL-10和IFN-γ增殖与分泌减少(Schaeffer等人，Science 284；638-641(1999)，Fowell等人，Immunity 11；399-409(1999)，Schaeffer等人.Nature Immunology 2，12；1183-1188(2001)))。变应性哮喘的免疫学症状在Itk-/-小鼠中减弱了。响应于变应原OVA的攻击，肺部炎症、嗜曙红细胞浸润和粘液产生在Itk-/-小鼠中急骤地减少了(Mueller等人，Journal ofImmunology 170：5056-5063(2003))。Itk也在特应性皮炎中有牵连。据报道这种基因在来自中等和/或严重特应性皮炎患者的外周血液T-细胞中比在对照或轻微特应性皮炎患者中被更加高度的表达(Matsumoto等人，International archives of Allergy andImmunology 129；327-340(2002))。

响应于TCR衔接，来自Rlk-/-小鼠的脾细胞所分泌的IL-2是由野生型动物产生的IL-2的一半(Schaeffer等人，Science 284；638-641(1999))，而小鼠中Itk与Rlk的联合缺失引起TCR-诱导的应答的极度抑制，包括细胞因子IL-2、IL-4、IL-5和IFN-γ的增殖与产生(Schaeffer等人.Nature Immunology 2，12；1183-1188(2001)；Schaeffer等人，Science 284；638-641(1999))。在Itk/Rlk缺陷性T-细胞中发生TCR参与事件之后的细胞内信号发送；肌醇三磷酸的产生、钙的活动、MAP激酶的活化和转录因子NFAT与AP-1的活化都减少了(Schaeffer等人，Science 284；638-641(1999)，Schaeffer等人.Nature Immunology 2，12，1183-1188(2001))。

Tec家族激酶也是B-细胞发育和活化所必需的。Btk突变患者具有B-细胞发育的极度阻滞，导致B淋巴细胞与浆细胞的几乎完全缺乏、Ig水平严重降低和回忆抗原的体液应答的极度抑制(在Vihinen等人.Frontiers in Bioscience 5：d917-928中有评述)。Btk缺陷的小鼠也有外周B-细胞的数量减少和IgM与IgG3水平的大大降低。小鼠中的Btk缺失对由抗-IgM诱导的B-细胞增殖具有深刻的影响，抑制胸腺-独立性II型抗原的免疫应答(Ellmeier等人，J Exp Med 192：1611-1623(2000))。

通过高亲和性IgE受体(FcεRI)，Tec激酶也在肥大细胞活化中起作用。Itk和Btk在肥大细胞中被表达，被FcεRI交叉偶联所活化(Kawakami等人，Journal of Immunology；3556-3562(1995))。Btk缺陷性鼠肥大细胞在FcεRI交叉偶联之后，减少了脱粒，降低了促炎性细胞因子的产生(Kawakami等人.Journal of leukocyte biology65：286-290)。Btk缺陷也导致巨噬细胞效应器功能的降低(Mukhopadhyay等人，Journal of Immunology；168，2914-2921(2002))。

Janus激酶(JAK)是酪氨酸激酶的一个家族，由JAK1、JAK2、JAK3和TYK2组成。JAK在细胞因子信号发送中起到决定性作用。JAK家族激酶的下游底物包括转录信号传感与活化(STAT)蛋白。JAK/STAT信号发送已经在很多异常免疫应答的介导中有牵连，例如变态反应、哮喘、自身免疫疾病，例如移植排斥、类风湿性关节炎、肌萎缩性侧索硬化和多发性硬化，以及实体与血液恶性肿瘤，例如白血病和淋巴瘤。JAK/STAT途径的药物干预已有评述[Frank Mol.Med.1999，5，432-456；Seidel等人.Oncogene 2000，19，2645-2656]。

JAK1、JAK2和TYK2被普遍表达，而JAK3主要在造血细胞中被表达。JAK 3排他性地结合公共细胞因子受体γ链(γ_c)，被IL-2、IL-4、IL-7、IL-9和IL-15所活化。由IL-4和IL-9诱导的鼠肥大细胞增殖和存活事实上已经显示依赖于JAK3-与γ_c-信号发送[Suzuki等人，Blood 2000，96，2172-2180]。

敏感化肥大细胞的高亲和性免疫球蛋白(Ig)E受体的交叉偶联引起促炎性介质的释放，包括大量作用于血管的细胞因子，导致急性变应性或即时性(I型)过敏反应[Gordon等人.Nature 1990，346，274-276 & Galli，N.Engl.JMed.1993，328，257-265]。JAK3在IgE受体-介导的肥大细胞应答中的决定性作用已经在体外和体内得到确定[Malaviya等人.Biochem.Biophys.Res.Commun.1999，257，807-813]。另外，通过抑制JAK3来预防由肥大细胞活化介导的I型过敏反应、包括过敏性也有过报道[Malaviya等人.J.Biol.Chem.1999274，27028-27038]。用JAK3抑制剂靶向肥大细胞体外调控肥大细胞脱粒，体内预防IgE受体/抗原-介导的过敏性反应。

最近有研究描述过成功的JAK3靶向，用于免疫抑制和同种移植物接受。该研究证明了在JAK3抑制剂给药后水牛心脏同种移植物在Wistar Furth接受者中的剂量-依赖性存活，表明了在移植物抗宿主疾病中调节不希望的免疫应答的可能性[Kirken，Transpl.Proc.2001，33，3268-3270]。

IL-4-介导的STAT-磷酸化已经成为参与早期与晚期类风湿性关节炎(RA)的机理。RA滑膜与滑液中促炎性细胞因子的增量调节是该疾病所特有的。已经证明，IL-4-介导的IL-4/STAT途径活化是通过Janus激酶(JAK 1 & 3)介导的，并且与IL-4有关的JAK激酶在RA滑膜中被表达[Muller-Ladner等人.J.Immunol.2000，164，3894-3901]。

家族性肌萎缩性侧索硬化(FALS)是一种致命性神经变性疾病，影响大约10％的ALS患者。在用JAK3特异性抑制剂处理后，FALS小鼠的存活率增加。这提示了JAK3在FALS中起作用[Trieu等人.Biochem.Biophys.Res.Commun.2000，267，22-25]。

转录信号传感与活化(STAT)蛋白尤其受JAK家族激酶的活化。来自最近研究的结果提示了通过用特异性抑制剂靶向JAK家族激酶来干预JAK/STAT信号发送途径的可能性，用于治疗白血病[Sudbeck等人.Clin.Cancer Res.1999，5，1569-1582]。JAK3特异性化合物抑制JAK3-表达性细胞系DAUDI、RAMOS、LCl；19、NALM-6、MOLT-3和HL-60的克隆生长。

在动物模型中，TEL/JAK2融合蛋白诱导脊髓增殖和造血细胞系疾患，TEL/JAK2的引入导致STATl、STAT3、STAT5的活化和细胞因子-依赖性生长[Schwaller等人.EMBO J.1998，17，5321-5333]。

抑制JAK3和TYK2取消了STAT3的酪氨酸磷酸化，抑制了蕈样真菌病的细胞生长，后者是皮肤T-细胞淋巴瘤的一种形式。这些结果暗示了JAK家族激酶在存在于蕈样真菌病的组成型活化JAK/STAT途径中有牵连[Nielsen等人.Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.1997，94，6764-6769]。与之相似，STAT3、STAT5、JAK1和JAK2被证明在最初以LCK过度表达为特征的小鼠T-细胞淋巴瘤中被组成型活化，从而进一步暗示了JAK/STAT在异常细胞生长中有牵连[Yu等人.J.Immunol.1997，159，5206-5210]。另外，IL-6-介导的STAT3活化被JAK抑制剂所阻滞，引起骨髓瘤细胞对细胞程序死亡敏感化[Catlett-Falcone等人.Immunity 1999，10，105-115]。

因此，对于开发可用作蛋白激酶抑制剂的化合物存在巨大需求。确切而言，需要开发可用作Tec家族(例如Tec、Btk、Itk/Emt/Tsk、Bmx、Txk/Rlk)和JAK家族蛋白激酶抑制剂的化合物，特别是鉴于目前可用于大多数与它们的活化有关的疾患的治疗尚不充分。

发明内容

现已发现，本发明化合物及其药学上可接受的组合物作为蛋白激酶的抑制剂是有效的。在某些实施方式中，这些化合物作为Tec家族(例如Tec、Btk、Itk/Emt/Tsk、Bmx、Txk/Rlk)和JAK家族蛋白激酶的抑制剂是有效的。这些化合物具有如本文所定义的通式I或其药学上可接受的盐。

这些化合物及其药学上可接受的组合物可用于治疗或预防多种疾病、疾患或病症，包括但不限于自身免疫、炎性、增殖性或过度增殖性疾病或者免疫学-介导的疾病。这些组合物在预防凝血酶-诱导的血小板聚集的方法中也是有用的。由本发明所提供的化合物也可用于生物学与病理学现象中的激酶研究；由这类激酶介导的细胞内信号转导途径研究；和新的激酶抑制剂的对比评价。

发明详细内容

1、本发明化合物的一般说明：

本发明涉及式I化合物：

(I)

或其药学上可接受的盐，其中：

环A是可选被取代的五元环，选自：

或

x是0、1或2；

每次出现的R¹独立地是卤素、CN、NO₂或U_mR；

R²独立地选自T_n-R’

X¹、X²和X³各自独立地是CR¹、N、S或O；

R³、R⁴和R⁵各自独立地是卤素、CN、NO₂或V_p-R’；

每次出现的T、U或V独立地是可选被取代的C_1-6亚烷基链，其中该链的至多两个亚甲基单元可选地和独立地被-NR-、-S-、-O-、-CS-、-CO₂-、-OCO-、-CO-、-COCO-、-CONR-、-NRCO-、-NRCO₂-、-SO₂NR-、-NRSO₂-、-CONRNR-、-NRCONR-、-OCONR-、-NRNR-、-NRSO₂NR-、-SO-、-SO₂-、-PO-、-PO₂-或-POR-所代替；

m、n和p各自独立地是0或1；

每次出现的R独立地是氢或者可选被取代的C_1-6脂族基团；每次出现的R’独立地是氢或者可选被取代的C_1-6脂族基团、具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的3-8元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环或者具有0-5个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-12元饱和、部分不饱和或完全不饱和的二环环系；或者R和R’、两次出现的R或两次出现的R’与它们所键合的原子一起构成可选被取代的具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的3-12元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环或二环；

其条件是至少一次出现的R³、R⁴、R⁵是V_p-R’，其中R’不是氢。

为了避免疑问，(R¹)_x如果存在的话键合在环A的任意位置，被R²占据的位置除外。

在一种实施方式中，

a)如果n是0，那么R’不是H；

b)如果环A是，R⁴是2-苯氧基苯基，那么R²不是COOH或CONHR^x，其中R^x是正丙基、苯基、环己基、苄基、-CH₂CH₂OH、-CH₂-环丙基、-CH₂CH₂OCH₃、3-吡啶基、4-羟基-环己基或-CH₂-C≡CH。

在另一种实施方式中，本发明化合物不包括在WO 2004/078756 A2第152-166页上权利要求9中所列举的化合物，引用在此作为参考。

2、化合物和定义：

本发明化合物包括如上一般性描述的那些，进一步阐述为本文所公开的大类、小类和品种。除非另有指示，将适用以下定义。出于本发明的目的，化学元素将根据元素周期表CAS版Handbook ofChemistry and Physics，75^th Ed进行识别。另外，有机化学的一般原理描述在″Organic Chemistry″，Thomas Sorrell，UniversityScience Books，Sausalito：1999和″March′s Advanced Or ganicChemistry″，5^th Ed.Ed.Smith，M.B.and March，J.John Wiley& Sons，New York：2001中，其完整内容引用在此作为参考。

正如本文所述，本发明化合物可以可选地被一个或多个取代基取代，例如上面概述所阐述的，或者如本发明的特定大类、小类和品种所例证的。应当理解，措辞“可选被取代的”与措辞“取代或未取代的”是可互换使用的。一般而言，术语“取代”无论前面有无术语“可选”，都表示给定结构中的氢原子团被指定取代基的原子团所代替。除非另有指示，可选被取代的基团可以在该基团每一可取代的位置上具有取代基，若任意给定结构中一个以上位置可以被一个以上选自指定组的取代基所取代，则取代基可以在每一位置上是相同或不同的。本发明所关注的取代基组合优选地是能形成稳定的或化学上可行的化合物的那些。本文所用的术语“稳定的”表示在受到用于它们制备、检测、优选回收、纯化的条件和用于一种或多种本文所公开的目的时基本上不变的化合物。在有些实施方式中，稳定的化合物或化学上可行的化合物是在没有水分或其他化学反应性条件的存在下、在40℃或以下的温度下保持至少一周而基本上不发生变化的化合物。

正如本文所述，所指定的原子数包括其中的任意整数。例如，具有1-4个原子的基团可能具有1、2、3或4个原子。

本文所用的术语“脂族”或“脂族基团”表示直链(即未分支)或支链的取代或未取代的烃链，它是完全饱和的或者含有一个或多个不饱和单元，或者表示单环烃或二环烃，它是完全饱和的或者含有一个或多个不饱和单元，但是不是芳族的(本文也称之为“碳环”、“环脂族”或“环烷基”)，它具有单一的与分子其余部分连接的点。除非另有说明，脂族基团含有1-20个脂族碳原子。在有些实施方式中，脂族基团含有1-10个脂族碳原子。在其他实施方式中，脂族基团含有1-8个脂族碳原子。在其他实施方式中，脂族基团含有1-6个脂族碳原子，在其他实施方式中，脂族基团含有1-4个脂族碳原子。在有些实施方式中，“环脂族”(或者“碳环”或“环烷基”)表示单环C₃-C₈烃或二环C₈-C₁₂烃，它是完全饱和的或者含有一个或多个不饱和单元，但不是芳族的，它具有单一的与分子其余部分连接的点，其中所述二环环系中任意单一的环是3-7元环。适合的脂族基团包括但不限于直链或支链的取代或未取代的烷基、烯基、炔基及其杂合物，例如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。

本文所用的术语“杂脂族”表示其中一个或两个碳原子独立地被一个或多个氧、硫、氮、磷或硅代替的脂族基团。杂脂族基团可以是取代或未取代的、直链或支链的、环状或无环的，包括“杂环”、“杂环基”、“杂环脂族”或“杂环的”基团。

本文所用的术语“杂环”、“杂环基”、“杂环脂族”或“杂环的”表示非芳族的、单环、二环或三环环系，其中一个或多个环成员是独立选择的杂原子。在有些实施方式中，“杂环”、“杂环基”、“杂环脂族”或“杂环的”基团具有三至十四个环成员，其中一个或多个环成员是独立选自氧、硫、氮或磷的杂原子，该系统中每一环含有3至7个环成员。适合的杂环包括但不限于3-1H-苯并咪唑-2-酮、3-(1-烷基)-苯并咪唑-2-酮、2-四氢呋喃基、3-四氢呋喃基、2-四氢噻吩基、3-四氢噻吩基、2-吗啉代基、3-吗啉代基、4-吗啉代基、2-硫吗啉代基、3-硫吗啉代基、4-硫吗啉代基、1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、3-吡咯烷基、1-四氢哌嗪基、2-四氢哌嗪基、3-四氢哌嗪基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、1-吡唑啉基、3-吡唑啉基、4-吡唑啉基、5-吡唑啉基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基、2-噻唑烷基、3-噻唑烷基、4-噻唑烷基、1-咪唑烷基、2-咪唑烷基、4-咪唑烷基、5-咪唑烷基、二氢吲哚基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、苯并硫杂环戊烷、苯并二噻烷和1，3-二氢-咪唑-2-酮。

术语“杂原子”表示一个或多个氧、硫、氮、磷或硅(包括氮、硫、磷或硅的任意氧化形式；任意碱性氮或杂环可取代氮的季铵化形式，例如N(如在3，4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或NR⁺(如在N-取代的吡咯烷基中))。

本文所用的术语“不饱和的”意味着该部分具有一个或多个不饱和单元。

本文所用的术语“烷氧基”或“硫代烷基”表示如前文所定义的烷基通过氧(“烷氧基”)或硫(“硫代烷基”)原子与主体碳链连接。

术语“卤代烷基”、“卤代烯基”和“卤代烷氧基”表示被一个或多个卤原子取代的烷基、烯基或烷氧基，视情况而定。术语“卤素”表示F、Cl、Br或I。

单独或者作为更大部分“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”的一部分使用的术语“芳基”表示具有总计五至十四个环成员的单环、二环和三环环系，其中该系统中至少一个环是芳族的，并且其中该系统中每一环含有3至7个环成员。术语“芳基”可以与术语“芳基环”互换使用。

单独或者作为更大部分“杂芳烷基”或“杂芳基烷氧基”的一部分使用的术语“杂芳基”表示具有总计五至十四个环成员的单环、二环和三环环系，其中该系统中至少一个环是芳族的，该系统中至少一个环含有一个或多个杂原子，并且其中该系统中每一环含有3至7个环成员。术语“杂芳基”可以与术语“杂芳基环”或术语“杂芳族”互换使用。适合的杂芳基环包括但不限于2-呋喃基、3-呋喃基、N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基、苯并咪唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基、N-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、哒嗪基(例如3-哒嗪基)、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、四唑基(例如5-四唑基)、三唑基(例如2-三唑基和5-三唑基)、2-噻吩基、3-噻吩基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基(例如2-吲哚基)、吡唑基(例如2-吡唑基)、异噻唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，5-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，2，3-三唑基、1，2，3-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基、嘌呤基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、喹啉基(例如2-喹啉基、3-喹啉基、4-喹啉基)和异喹啉基(例如1-异喹啉基、3-异喹啉基或4-异喹啉基)。

芳基(包括芳烷基、芳烷氧基、芳氧基烷基等)或杂芳基(包括杂芳烷基和杂芳烷氧基等)可以含有一个或多个取代基。芳基或杂芳基的不饱和碳原子上适合的取代基一般选自卤素、-R^o、-OR^o、-SR^o、1，2-亚甲二氧基、1，2-亚乙二氧基、可选被R^o取代的苯基(Ph)、可选被R^o取代的-O(Ph)、可选被R^o取代的-(CH₂)_1-2(Ph)、可选被R^o取代的-CH＝CH(Ph)、-NO₂、-CN、-N(R^o)₂、-NR^oC(O)R^o、-NR^oC(S)R^o、-NR^oC(O)N(R^o)₂、-NR^oC(S)N(R^o)₂、-NR^oCO₂R^o、-NR^oNR^oC(O)R^o、-NR^oNR^oC(O)N(R^o)₂、-NR^oNR^oCO₂R^o、-C(O)C(O)R^o、-C(O)CH₂C(O)R^o、-CO₂R^o、-C(O)R^o、-C(S)R^o、-C(O)N(R^o)₂、-C(S)N(R^o)₂、-OC(O)N(R^o)₂、-OC(O)R^o、-C(O)N(OR^o)R^o、-C(NOR^o)R^o、-S(O)₂R^o、-S(O)₃R^o、-SO₂N(R^o)₂、-S(O)R^o、-NR^oSO₂N(R^o)₂、-NR^oSO₂R^o、-N(OR^o)R^o、-C(＝NH)-N(R^o)₂或-(CH₂)_0-2NHC(O)R^o，其中每次独立出现的R^o选自氢、可选被取代的C₁-C₆脂族基团、未取代的5-6元杂芳基或杂环、苯基、-O(Ph)或-CH₂(Ph)，或者尽管有如上定义，在相同取代基或不同取代基上两次独立出现的R^o与每一R^o基团所键合的原子一起构成5-8元杂环基、芳基或杂芳基环，或者3-8元环烷基环，具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子。R^o的脂族基团上可选的取代基选自NH₂、NH(C_1-4脂族基团)、N(C_1-4脂族基团)₂、卤素、C_1-4脂族基团、OH、O(C_1-4脂族基团)、NO₂、CN、CO₂H、CO₂(C_1-4脂族基团)、O(卤代C_1-4脂族基团)或卤代C_1-4脂族基团，其中R^o的每一上述C_1-4脂族基团是未取代的。

脂族或杂脂族基团或者非芳族杂环可以含有一个或多个取代基。脂族或杂脂族基团或者非芳族杂环的饱和碳原子上适合的取代基选自上面关于芳基或杂芳基不饱和碳所列举的那些，并且另外包括下列基团：＝O、＝S、＝NNHR^*、＝NN(R^*)₂、＝NNHC(O)R^*、＝NNHCO₂(烷基)、＝NNHSO₂(烷基)或＝NR^*，其中每一R^*独立地选自氢或可选被取代的C₁-C₆脂族基团。R^*的脂族基团上可选的取代基选自NH₂、NH(C_1-4脂族基团)、N(C_1-4脂族基团)₂、卤素、C_1-4脂族基团、OH、O(C_1-4脂族基团)、NO₂、CN、CO₂H、CO₂(C_1-4脂族基团)、O(卤代C_1-4脂族基团)或卤代C_1-4脂族基团，其中R^*的每一上述C_1-4脂族基团是未取代的。

非芳族杂环氮上可选的取代基选自-R⁺、-N(R⁺)₂、-C(O)R⁺、-CO₂R⁺、-C(O)C(O)R⁺、-C(O)CH₂C(O)R⁺、-SO₂R⁺、-SO₂N(R⁺)₂、-C(＝S)N(R⁺)₂、-C(＝NH)-N(R⁺)₂或-NR⁺SO₂R⁺；其中R⁺是氢、可选被取代的C₁-C₆脂族基团、可选被取代的苯基、可选被取代的-O(Ph)、可选被取代的-CH₂(Ph)、可选被取代的-(CH₂)_1-2(Ph)、可选被取代的-CH＝CH(Ph)或者未取代的5-6元杂芳基或杂环，具有一至四个独立选自氧、氮或硫的杂原子，或者尽管有如上定义，在相同取代基或不同取代基上两次独立出现的R⁺与每一R⁺基团所键合的原子一起构成5-8元杂环基、芳基或杂芳基环，或者3-8元环烷基环，具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子。R⁺的脂族基团或苯基环上可选的取代基选自NH₂、NH(C_1-4脂族基团)、N(C_1-4脂族基团)₂、卤素、C_1-4脂族基团、OH、O(C_1-4脂族基团)、NO₂、CN、CO₂H、CO₂(C_1-4脂族基团)、O(卤代C_1-4脂族基团)或卤代C_1-4脂族基团，其中R⁺的每一上述C_1-4脂族基团是未取代的。

术语“亚烷基链”表示直链或支链碳链，它可以是完全饱和的或者具有一个或多个不饱和单元，并且具有两个与分子其余部分连接的点，其中一个或多个亚甲基单元可以可选地和独立地被这样一种基团所代替，包括但不限于CO、CO₂、COCO、CONR、OCONR、NRNR、NRNRCO、NRCO、NRCO₂、NRCONR、SO、SO₂、NRSO₂、SO₂NR、NRSO₂NR、O、S或NR。

本文所用的术语“保护基团”表示用于暂时封闭多官能化合物中一个或多个所需反应活性位置的成分。在某些实施方式中，保护基团具有下列特征中的一个或多个或者优选全部：a)以良好的收率选择性反应，得到被保护的底物，它对发生在一个或多个其他反应活性位置的反应而言是稳定的；和b)以良好的收率被不攻击所再生的官能团的试剂所选择性除去。示范性保护基团参见Greene，T.W.Wuts，P.Gin″Protective Groups in Organic Synthesis″，Third Edition，John Wiley & Sons，New York：1999，其完整内容引用在此作为参考。本文所用的术语“氮保护基团”表示用于暂时封闭多官能化合物中一个或多个所需氮反应性位置的成分。优选的氮保护基团也具备上述特征，某些示范性氮保护基团也参见Chapter 7 in Greene，T.W.Wuts，P.G in ″Protective Groups in Organic Synthesis″，ThirdEdition，John Wiley & Sons，New York：1999，其完整内容引用在此作为参考。

如上所述，在有些实施方式中，两次独立出现的R^o(或者R⁺或任何其他在本文中有类似定义的变量)与每一变量所键合的原子一起构成5-8-元杂环基、芳基或杂芳基环或者3-8-元环烷基环，具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子。两次独立出现的R^o(或者R⁺或任何其他在本文中有类似定义的变量)与每一变量所键合的原子一起所构成的示范性环包括但不限于下列：a)两次独立出现的R^o(或者R⁺或任何其他在本文中有类似定义的变量)键合于同一原子，并且与该原子一起构成一个环，例如N(R^o)₂，其中出现的两个R^o与氮原子一起构成哌啶-1-基、哌嗪-1-基或吗啉-4-基；和b)两次独立出现的R^o(或者R⁺或任何其他在本文中有类似定义的变量)键合于不同原子，并且与这些原子一起构成一个环，例如

其中苯基被两次出现的OR^o取代，这两次出现的R^o与它们所键合的氧原子一起构成稠合的6-元含氧环：

将被领会的是，两次独立出现的R^o(或者R⁺或任何其他在本文中有类似定义的变量)与每一变量所键合的原子一起可以构成多种其他环，并且上述详细实例不打算是限制性的。

除非另有规定，本文所描绘的结构也意味着包括该结构的所有异构(例如对映异构、非对映异构和几何异构(或构象异构))形式；例如每一不对称中心的R与S构型，(Z)与(E)双键异构体，和(Z)与(E)构象异构体。因此，这些化合物的单一立体化学异构体以及对映异构、非对映异构和几何异构(或构象异构)混合物都属于本发明的范围。除非另有规定，本发明化合物的所有互变异构形式都属于本发明的范围。另外，除非另有规定，本文所描绘的结构也意味着包括仅在一个或多个同位素富集原子的存在上有所不同的化合物。例如，除了氢被氘或氚代替或者碳被¹³C-或¹⁴C-富集的碳代替以外具有本发明结构的化合物都属于本发明的范围。这类化合物例如可用作生物学测定法中的分析工具或探针。

3、示范性化合物的说明：

本文实施方式的所有说明都可以应用于式I、II、III、IV、V和VI化合物。

在本发明的某些实施方式中，R⁴和R⁵各自独立地是V_p-R’。

在其他实施方式中，R³、R⁴和R⁵之一是V_p-R’，其中R’是可选被取代的具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-或6-元完全不饱和(即芳族)的单环或者可选被取代的具有0-5个独立选自氮、氧或硫的杂原子的9-或10-元完全不饱和的二环环系。

在其他实施方式中，R³、R⁴和R⁵之一是V_p-R’，其中R’独立地是可选被取代的C_1-6脂族基团、可选被取代的具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的3-8元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环或者可选被取代的具有0-5个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-12元饱和、部分不饱和或完全不饱和的二环环系。

在其他实施方式中，R⁴是V_p-R’，其中R’独立地是可选被取代的C_1-6脂族基团、可选被取代的具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的3-8-元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环或者可选被取代的具有0-5个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-12元饱和、部分不饱和或完全不饱和的二环环系。在某些这些实施方式中，R³和R⁵是V_p-R’，其中p是0，R’是氢。

在其他实施方式中，R⁴是V_p-R’，其中R’独立地是可选被取代的C_1-6脂族基团或者可选被取代的具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的3-8-元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环。

在其他实施方式中，R⁴是V_p-R’，其中R’是可选被取代的具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的3-8-元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环。

在其他实施方式中，R⁴是V_p-R’，其中R’独立地是可选被取代的具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6-元完全不饱和的单环。

在其他实施方式中，R⁴是V_p-R’，其中R’是可选被取代的具有0-3个氮杂原子或者具有0-1个氮杂原子的6-元完全不饱和的单环。

在其他实施方式中，R⁴是V_p-R’，其中R’是可选被取代的具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的3-8-元饱和单环。

在其他实施方式中，R⁴是V_p-R’，其中R’是可选被取代的具有0-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的6-元饱和单环。

在其他实施方式中，R⁴是V_p-R’，其中R’是可选被取代的C_1-6脂族基团。在某些实施方式中，R’是C_1-6炔基。在某些实施方式中，R’是-C≡CH。

在其他实施方式中，p是0。

在其他实施方式中，p是1。

在其他实施方式中，V是-NR-、-S-或-O-。

在其他实施方式中，R³是V_p-R’，其中p是0且R’是氢。

在其他实施方式中，R⁵是卤素或V_p-R’，其中p是0且R’是氢或C_1-6脂族基。在其他实施方式中，这种C_1-6脂族基是C_1-3烷基。

在其他实施方式中，环A是：

在某些这些实施方式中，X₂是CR¹。

在其他实施方式中，环A是：

或

在其他实施方式中，环A是：

或

在某些实施方式中，R¹是U_mR。在其他实施方式中，R¹是U_mR，其中m是0且R是H或CH₃。

在某些实施方式中，R²是T_nR’，其中n是1。

在其他实施方式中，R²是T_nR’，其中n是0。

在某些实施方式中，T是-NR-、-O-、-CO-、-CONR-或-NRCO-。

在某些实施方式中，T是-NR-。在某些实施方式中，T是-O-。在某些这些实施方式中，R’是C_1-6脂族基。在其他这些实施方式中，R和R’都是H。

在某些实施方式中，T是-NR-，R’是C_1-6脂族基。在某些这些实施方式中，R是C_1-6脂族基。在有些实施方式中，R和R’都是C_1-6烷基。

在某些实施方式中，T是C_1-6亚烷基链，其中该亚烷基链通过亚甲基单元与环A连接。在有些这些实施方式中，T是-(C_1-5烷基)NR-。在有些实施方式中，T是-CH₂NR-。在有些这些实施方式中，R’是C_1-6脂族基。

在其他实施方式中，T是C_1-6亚烷基链，其中0个亚甲基单元被本文公开的基团所代替。

在其他实施方式中，R²是可选被取代的5-7元N-连接杂环基。在某些实施方式中，所述N-连接杂环基选自吗啉基、哌啶基、吡咯烷基和哌嗪基。在某些实施方式中，所述N-连接杂环基可选地和独立地被0-4次出现的氨基、烷基氨基、二烷基氨基或C_1-6烷基取代。

正如上文所一般描述的，另一种本发明化合物具有式II：

II

或其药学上可接受的盐。

在其他实施方式中，本发明化合物具有式III：

III

或其药学上可接受的盐。

在其他实施方式中，该化合物具有式IV：

IV

或其药学上可接受的盐。

在其他实施方式中，该化合物具有式V：

V

或其药学上可接受的盐。

在其他实施方式中，该化合物具有式VI：

VI

或其药学上可接受的盐。

将被领会的是，就式II-VI化合物而言，式II-VI化合物中的变量是如本文任意实施方式所定义的。

正如上文所一般描述的，优选的取代基和变量(例如R’基团)是如表1化合物所例证的。

因此，式I化合物的代表性实例是如下表1和2所描绘的。

表1：式I化合物的实例

表2：式I化合物的实例

4、通用合成方法：

本发明化合物一般可以借助本领域技术人员已知用于类似化合物的方法加以制备，如以下通用流程和下列制备实施例所述。

使用下列缩写：

EtOH是乙醇；RT是室温；Ts是甲苯磺酰基；Ph是苯基；DME是二甲基醚；Bu是丁基；EDC是1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺；DMF是二甲基甲酰胺；O/N是过夜；Et₂O是乙醚；CDI是N，N’-羰基二咪唑；LCMS是液相色谱-质谱；P-是适合的保护基团。

流程I

试剂和条件：(a)AlCl₃，CH₂Cl₂，RT，16小时；(b)EtOH，微波照射，120℃，10mins。

上述流程I显示用于制备本发明化合物5的通用合成途径，此时R₁至R₅是如本文所述的。利用本领域熟知的Friedel-Craft酰化方法制备中间体3。这种反应适用于多种取代的氯乙酰氯，生成式3化合物。最后，按照步骤(b)环化中间体3，得到式5化合物。该反应适用于多种式4取代的硫代酰胺。

流程II

试剂和条件：(a)Br₂，CHCl₃，0℃至RT；(b)n-BuLi，THF，TsCl；(c)PdCl₂(dppf)₂，二噁烷，KOAc，双(频哪醇代，pinacolato)二硼，18小时；(d)Pd(PPh₃)₄，Na₂CO₃，DME，EtOH/H₂O，微波照射，120℃，2小时；(e)3N NaOH，MeOH。

上述流程II显示用于制备本发明化合物11的通用合成途径，此时A、R₁至R₅和x是如本文所述的。溴化结构式1化合物，继之以用甲苯磺酰基保护中间体6，制备中间体7。按照流程II步骤(c)生成代硼酸酯8。利用本领域熟知的Suzuki偶联方法，在钯催化剂的存在下，将溴化物9用代硼酸酯衍生物8处理，实现联芳基连接衍生物10的生成。该反应适用于多种取代的芳基或杂芳基溴化物9。最后，按照流程II步骤(e)，在碱性条件中除去甲苯磺酰基保护基团，得到结构式11化合物。

流程III

试剂和条件：(a)Br₂，CHCl₃，0℃至RT；(b)n-BuLi，THF，TsCl；(c)Pd(PPh₃)₄，Na₂CO₃，DME，EtOH/H₂O，微波照射，120℃，2小时；(d)3N NaOH，MeOH。

上述流程III显示另一种用于制备本发明化合物11的通用合成途径，此时A、R₁至R₅和x是如本文所述的。如上按照流程II制备中间体7。在这种情况下，利用本领域熟知的Suzuki偶联方法，在钯催化剂的存在下，将溴化物7用代硼酸衍生物12处理，实现联芳连接衍生物10的生成。该反应适用于多种取代的芳基或杂芳基代硼酸12。按照流程III步骤(d)，仍然在碱性条件中除去甲苯磺酰基保护基团，得到结构11化合物。

流程IV

试剂和条件：(a)Lawesson氏试剂，甲苯，110℃，O/N；(b)EtOH，回流，O/N；(c)EtOH，1N NaOH，12小时；(d)EDC，HOBt，DMF，NHR′R，RT，O/N。

上述流程IV显示用于制备本发明化合物18的通用合成途径，此时R、R’和R₁至R₅是如本文所述的。借助基本上与文献所述相似的方法可以制备原料13：Schneller and LuoJ.Org.Chem.1980，45，4045。化合物13与Lawesson氏试剂反应，生成衍生物14。在β-酮基酯15的存在下，化合物14的环化作用得到中间体16。该反应适用于多种β-酮基酯15。在碱性条件下酯16的脱保护之后，通过本领域技术人员熟知的偶联步骤生成衍生物18。

流程V

试剂和条件：(a)n-BuLi，THF，PCl；(b)i)t-BuLi，Et₂O，-78℃，1h，ii)R′SSR′；(c)脱保护条件。

上述流程V显示用于制备本发明化合物18的通用合成途径，此时R’是如本文所述的。借助Mazeas，等人，Heterocycles 1999，50，1065所述方法可以制备原料19。按照流程V步骤(b)，将用适合的保护基团(P)保护式19所得中间体20用适当的二硫化物R’SSR’处理。吲唑21的脱保护之后，生成式22化合物。

流程VI

试剂和条件：(a)R₁OH，NaOMe，CuBr，DMF，加热，2.5小时.

上述流程VI显示用于制备本发明化合物23的通用合成途径，此时R’是如本文所述的。按照流程VI步骤(a)，将原料19用适当的醇R’OH处理。

流程VII

试剂和条件：(a)n-BuLi，THF，PCl；(b)NHR′R，PdCl₂(dppf)，NaO^tBu，THF，加热；或者HNR′R，Cu，K₂CO₃，硝基苯，加热；(c)脱保护条件。

上述流程VII显示用于制备本发明化合物25的通用合成途径，此时R和R’是如本文所述的。利用本领域熟知的Buchwald-Hartwig交叉偶联反应，在钯催化剂的存在下，将用适合的保护基团(P)保护式19所得中间体20用胺RR’NH处理。这种交叉偶联反应也能这样实现，利用本领域熟知的Ullmann反应，在铜催化剂的存在下，将中间体20用胺RR’NH处理。这些反应都适用于多种取代的胺。吲唑24的脱保护之后，生成式25化合物。

流程VIII

试剂和条件：(a)R₄B(OH)₂，Pd(PPh₃)₄，EtOH，H₂O，DME，100℃，O/N；(b)Br₂，CHCl₃，0℃至RT；(c)n-BuLi，THF，TsCl；(d)Pd(PPh₃)₄，Na₂CO₃，DME，EtOH/H₂O，微波照射，120℃，2小时；(e)3N NaOH，MeOH。

上述流程VIII显示用于制备本发明化合物30的通用合成途径，此时A、R₁至R₄和x是如本文所述的。利用本领域熟知的Suzuki偶联方法，在钯催化剂的存在下，将结构式19化合物用代硼酸衍生物R₄B(OH)₂处理。该反应适用于多种取代的芳基或杂芳基代硼酸。溴化结构式26化合物制备中间体27，继之以用甲苯磺酰基保护中间体27。按照流程VIII步骤(d)实现另一种Suzuki交叉偶联反应。最后按照流程VIII步骤(e)，在碱性条件中除去甲苯磺酰基保护基团，得到结构式30化合物。

流程IX

试剂和条件：(a)n-BuLi，THF，PCl；(b)i)t-BuLi，Et₂O，-78℃，1h，ii)R′CHO；(c)脱保护条件。

上述流程IX显示用于制备本发明化合物32的通用合成途径，此时R’是如本文所述的。按照流程IX步骤(b)，将用适合的保护基团(P)保护式19所得中间体20用适当的醛R’CHO处理。吲唑31的脱保护之后，生成式32化合物。

流程X

试剂和条件：(a)n-BuLi，THF，PCl；(b)i)t-BuLi，Et₂O，-78℃，1h，ii)R′CH₂Br；(c)脱保护条件.

上述流程X显示用于制备本发明化合物32的通用合成途径，此时R’是如本文所述的。按照流程X步骤(b)，将用适合的保护基团(P)保护式19所得中间体20用适当的R’CH₂Br处理。吲唑33的脱保护之后，生成式34化合物。

流程XI

试剂和条件：(a)CDI，DMF；(b)P₂S₅，吡啶。

上述流程XI显示用于制备本发明化合物38的通用合成途径，此时R₂至R₅是如本文所述的。借助基本上与文献所述的方法可以制备原料35：Allegreti等人，Org.Proc.Res.Dev.2003，7，209。按照流程XI步骤(a)，中间体35与胺36反应。该反应适用于多种胺36。在P₂S₅的存在下，化合物37的环化作用得到衍生物38。

流程XII

试剂和条件：(a)AlCl₃，CH₂Cl₂，RT，16小时；(b)NH₂OH·HCl，EtOH，加热，1小时。

上述流程XII显示用于制备本发明化合物41的通用合成途径，此时R₂至R₅是如本文所述的。利用本领域熟知的Friedel-Craft酰化方法制备中间体40。这种反应适用于多种取代的衍生物39，生成式40化合物。按照步骤(b)，中间体40的环化作用得到式41化合物。

尽管上文和本文描绘和描述了某些示范性实施方式，不过将被领会的是，借助本领域普通技术人员一般可用的方法，本发明化合物可以按照上文一般描述的方法、使用适当的原料加以制备。

因此，在另一种实施方式中，本发明提供制备本发明化合物的方法，基本上如本文所述，确切而言如流程和实施例所述。

5、用途、制剂和给药：

药学上可接受的组合物

正如上文所讨论的，本发明提供这样的化合物，它们是蛋白激酶的抑制剂，因而这些化合物可用于治疗疾病、疾患和病症，包括但不限于自身免疫、炎性、增殖或过度增殖疾病或者免疫学-介导的疾病。因此，在本发明的另一方面，提供药学上可接受的组合物，其中这些组合物包含任意如本文所述的化合物，并且可选地包含药学上可接受的载体、助剂或赋形剂。在某些实施方式中，这些组合物可选地进一步包含一种或多种其他治疗剂。

也将被领会的是，某些本发明化合物能够以游离形式存在供治疗，或者在适当的情况下为其药学上可接受的衍生物。按照本发明，药学上可接受的衍生物包括但不限于药学上可接受的盐、酯、这类酯的盐、或者任意其他加合物或衍生物，一旦对需要的患者给药即能够直接或间接提供如本文所述的化合物或者其代谢产物或残余物。

本文所用的术语“药学上可接受的盐”表示这样的盐，在合理的医学判断范围内，它们适合用于与人体和低等动物组织接触，没有不适当的毒性、刺激性、变态反应等，与合理的利益/风险比相称。“药学上可接受的盐”表示本发明化合物的任意无毒性盐或酯盐，一旦对接受者给药，即能够直接或间接提供本发明化合物或者其抑制活性代谢产物或残余物。本文所用的术语“其抑制活性代谢产物或残余物”意味着其代谢产物或残余物也是Tec家族(例如Tec、Btk、Itk/Emt/Tsk、Bmx、Txk/Rlk)蛋白激酶的抑制剂。

药学上可接受的盐是本领域熟知的。例如，S.M.Berge等在J.Pharmaceutical Sciences，1977，66，1-19中详细描述了药学上可接受的盐，引用在此作为参考。本发明化合物的药学上可接受的盐包括从适合的无机与有机酸与碱衍生的那些。药学上可接受的无毒性酸加成盐的实例是与无机酸或有机酸生成的氨基盐，无机酸例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸，有机酸例如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸，或者利用本领域所用的其他方法，例如离子交换形成的盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对-甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。从适当的碱衍生的盐包括碱金属、碱土金属、铵和N⁺(C_1-4烷基)₄盐。本发明也涵盖如本文所公开的化合物的任意碱性含氮基团的季铵化作用。借助这类季铵化作用可以得到可溶于水或油或可分散在水或油中的产物。代表性碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等。当适当的时候，其他药学上可接受的盐包括无毒的铵盐、季铵盐和胺阳离子盐，利用抗衡离子生成，例如卤化物、氢氧化物、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、低级烷基磺酸盐和芳基磺酸盐。

如上所述，本发明的药学上可接受的组合物另外包含药学上可接受的载体、助剂或赋形剂，正如本发明中所述，它们包括适合于所需的特定剂型的任意和所有溶剂、稀释剂或其他液体赋形剂、分散或悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等。Remington′s Pharmaceutical Sciences，SixteenthEdition，E.W.Martin(Mack Publishing Co.Easton，Pa.1980)公开了用于配制药学上可接受的组合物的各种载体和用于其制备的已知技术。除了任何常规载体介质与本发明化合物不相容以外，例如产生任何不可取的生物学效应或者以有害方式相互作用于药学上可接受的组合物的任何其他组分，它的使用涵盖在本发明的范围内。能够充当药学上可接受的载体的材料的一些实例包括但不限于离子交换剂；氧化铝；硬脂酸铝；卵磷脂；血清蛋白质，例如血清白蛋白；缓冲物质，例如磷酸盐；甘氨酸；山梨酸或山梨酸钾；饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物；水；盐或电解质，例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐；胶体二氧化硅；三硅酸镁；聚乙烯吡咯烷酮；聚丙烯酸酯；蜡类；聚乙烯-聚氧化丙烯-嵌段聚合物；羊毛脂；糖类，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉碎的黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，例如可可脂和栓剂用蜡；油类，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，例如丙二醇或聚乙二醇；酯类，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；藻酸；无热原的水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；以及其他无毒的可相容的润滑剂，例如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁；根据制剂人员的判断，在组合物中也可以存在着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和香料、防腐剂和抗氧化剂。

化合物和药学上可接受的组合物的用途

另一方面，提供治疗Tec家族(例如Tec、Btk、Itk/Emt/Tsk、Bmx、Txk/Rlk)-介导的疾病或者减轻其严重性的方法，包括对需要的受治疗者给予有效量的化合物或者包含化合物的药学上可接受的组合物。在本发明的某些实施方式中，化合物或药学上可接受的组合物的“有效量”是就治疗Tec家族(例如Tec、Btk、Itk/Emt/Tsk、Bmx、Txk/Rlk)-介导的疾病或者减轻其严重性而言有效的量。根据本发明方法的化合物和组合物可以利用就治疗Tec家族(例如Tec、Btk、Itk/Emt/Tsk、Bmx、Txk/Rlk)-介导的疾病或者减轻其严重性而言有效的任意量和任意给药途径加以给药。所需确切的量将因受治疗者而异，取决于受治疗者的种类、年龄与一般状态、感染的严重性、特定药物、其给药的方式等。本发明化合物优选地被配制成剂量单元形式，有易于给药和剂量的一致性。本文所用的表达方式“剂量单元形式”表示物理上离散的药物单元，对所治疗的患者而言是适当的。不过将被理解的是，本发明化合物和组合物的总每日用量将由主治医师在合理的医学判断范围内决定。任意特定患者或生物体的具体有效剂量水平将依赖于多种因素，包括所治疗的病症和病症的严重性；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；给药的时间、给药的途径和所采用的具体化合物的排泄速率；治疗的持续时间；与所采用的具体化合物联合或同时使用的药物；和医药领域熟知的其他因素。本文所用的术语“患者”表示动物，优选哺乳动物，最优选人。

本发明的药学上可接受的组合物可以对人和其他动物口服、直肠、肠胃外、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(以粉剂、软膏剂或滴剂)、颊、以口用或鼻用喷雾剂等方式给药，这依赖于所治疗感染的严重性。在某些实施方式中，本发明化合物可以被口服或肠胃外给药，剂量水平为每天约0.01mg/kg至约50mg/kg、优选约1mg/kg至约25mg/kg受治疗者体重，一天一次或多次，以获得所需的治疗效果。

口服给药的液体剂型包括但不限于药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液、悬液、糖浆剂和酏剂。除了活性化合物以外，液体剂型可以含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂，增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄基酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、麦胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨醇的脂肪酸酯，和它们的混合物。除了惰性稀释剂以外，口服组合物还可以包括助剂，例如湿润剂、乳化与悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。

使用适合的分散或湿润剂和悬浮剂，可以按照已知技术配制可注射制剂，例如无菌可注射的水性或油性悬液。无菌可注射制剂也可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬液或乳液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。可以采用的可接受的载体和溶剂有水、林格氏溶液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。另外，常规上采用无菌的不挥发油作为溶剂或悬浮介质。为此，可以采用任何温和的固定油，包括合成的单-或二-甘油酯。另外，在注射剂的制备中也可以使用脂肪酸，例如油酸。

可注射制剂可以这样进行灭菌，例如通过细菌截留性滤器过滤，或者掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂，可以在使用前将其溶解或分散在无菌的水或其他无菌可注射介质中。

为了延长本发明化合物的作用，经常需要延缓化合物在皮下或肌内注射后的吸收。这可以利用水溶性差的结晶性或无定形物质的液体悬液来实现。化合物的吸收速率取决于它的溶解速率，后者反过来又可能取决于晶体大小和晶型。作为替代选择，将化合物溶解或悬浮在油类载体中，实现肠胃外给药化合物形式的延迟吸收。可注射的储库形式是这样制备的，在生物可降解的聚合物中，例如聚丙交酯-聚乙交酯，生成化合物的微囊包封基质。根据化合物与聚合物的比例和所采用特定聚合物的属性，可以控制化合物的释放速率。其他生物可降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。储库型可注射制剂也可以将化合物包合在与机体组织相容的脂质体或微乳中来制备。

直肠或阴道给药组合物优选地是栓剂，它们可以这样制备，将本发明化合物与适合的无刺激性赋形剂或载体混合，例如可可脂、聚乙二醇或栓剂用蜡，它们在环境温度下是固体，但是在体温下是液体，因此在直肠或阴道腔中融化，释放出活性化合物。

口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在这类固体剂型中，将活性化合物与至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂或载体混合，例如柠檬酸钠或磷酸二钙，和/或a)填充剂或增容剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸，b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶，c)润湿剂，例如甘油，d)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e)溶解迟延剂，例如石蜡，f)吸收促进剂，例如季铵化合物，g)湿润剂，例如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯，h)吸收剂，例如高岭土和膨润土，和i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，该剂型还可以包含缓冲剂。

也可以采用相似类型的固体组合物作为软或硬的填充的明胶胶囊剂中的填充剂，胶囊所用赋形剂例如乳糖或奶糖以及高分子聚乙二醇等。片剂、锭剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂等固体剂型可以带有包衣和外壳，例如肠溶衣和药物配制领域熟知的其他包衣。它们可以可选地含有遮光剂，也可以是仅仅或优先在肠道某一部分释放活性成分的组合物，可选地为延迟的方式。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡类。也可以采用相似类型的固体组合物作为软与硬的填充的明胶胶囊剂中的填充剂，胶囊所用赋形剂例如乳糖或奶糖以及高分子聚乙二醇等。

活性化合物也可以是微囊包封的形式，其中含有一种或多种上述赋形剂。片剂、锭剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂等固体剂型可以带有包衣和外壳，例如肠溶衣、释放控制性包衣和药物配制领域熟知的其他包衣。在这类固体剂型中，可以将活性化合物与至少一种惰性稀释剂混合，例如蔗糖、乳糖或淀粉。在正常情况下，这类剂型还可以包含除惰性稀释剂以外的其他物质，例如压片润滑剂和其他压片助剂，例如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包含缓冲剂。它们可以可选地含有遮光剂，也可以是仅仅或优先在肠道某一部分释放活性成分的组合物，可选地为延迟的方式。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡类。

本发明化合物的局部或透皮给药剂型包括软膏剂、糊剂、霜剂、洗剂、凝胶剂、粉剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴剂。将活性组分在无菌条件下与药学上可接受的载体和任何必需的防腐剂或缓冲剂混合，根据需要而定。眼科制剂、滴耳剂和滴眼剂也被涵盖在本发明的范围内。另外，本发明涵盖透皮贴剂的使用，它们具有控制化合物向机体递送的附加优点。这类剂型可以通过将化合物溶解或分散在恰当的介质中来制备。还可以使用吸收增强剂以增加化合物穿过皮肤的通量。可以通过提供速率控制膜或者将化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制速率。

正如上文一般性描述的，本发明化合物可用作蛋白激酶的抑制剂。在一种实施方式中，本发明化合物和组合物是一种或多种Tec家族(例如Tec、Btk、Itk/Emt/Tsk、Bmx、Txk/Rlk)激酶的抑制剂，因而不希望受任意特定理论所限，化合物和组合物特别可用于治疗这样一种疾病、病症或疾患或者减轻其严重性，其中一种或多种Tec家族(例如Tec、Btk、Itk/Emt/Tsk、Bmx、Txk/Rlk)激酶的活化在该疾病、病症或疾患中有牵连。当Tec家族(例如Tec、Btk、Itk/Emt/Tsk、Bmx、Txk/Rlk)激酶的活化在特定疾病、病症或疾患中有牵连时，该疾病、病症或疾患也可以被称为“Tec家族(例如Tec、Btk、Itk/Emt/Tsk、Bmx、Txk/Rlk)-介导的疾病”或疾病症状。因此，在另一方面，本发明提供治疗这样一种疾病、病症或病症或者减轻其严重性的方法，其中一种或多种Tec家族(例如Tec、Btk、Itk/Emt/Tsk、Bmx、Txk/Rlk)的活化在该疾病状态中有牵连。

在本发明中用作Tec家族(例如Tec、Btk、Itk/Emt/Tsk、Bmx、Txk/Rlk)激酶抑制剂的化合物的活性可以在体外、体内或细胞系中加以测定。体外测定法包括测定对活化Tec家族(例如Tec、Btk、Itk/Emt/Tsk、Bmx、Txk/Rlk)激酶的磷酸化活性或ATP酶活性的抑制作用。选择性的体外测定法可定量测定抑制剂与Tec家族(例如Tec、Btk、Itk/Emt/Tsk、Bmx、Txk/Rlk)激酶结合的能力。抑制剂的结合可以这样测量，在结合之前放射性标记抑制剂，分离抑制剂/Tec家族(例如Tec、Btk、Itk/Emt/Tsk、Bmx、Txk/Rlk)复合物，再测定所结合的放射性标记的量。或者，抑制剂的结合可以这样测定，在竞争实验中，将新抑制剂和与已知放射性配体结合的Tec家族(例如Tec、Btk、Itk/Emt/Tsk、Bmx、Txk/Rlk)激酶一起温育。

本文所用的术语“可测量地抑制”表示在包含所述组合物和Tec家族(例如Tec、Btk、Itk/Emt/Tsk、Bmx、Txk/Rlk)激酶的样品与包含Tec家族(例如Tec、Btk、Itk/Emt/Tsk、Bmx、Txk/Rlk)激酶而没有所述组合物存在的等同样品之间Tec家族(例如Tec、Btk、Itk/Emt/Tsk、Bmx、Txk/Rlk)激酶活性有可测量的改变。

本文所用的术语“Tec家族酪氨酸激酶-介导的病症”表示已知Tec家族激酶在其中起作用的任意疾病或其他有害病症。这类病症非限制性地包括自身免疫性、炎性、增殖性与过度增殖性疾病和免疫学-介导的疾病，包括移植器官或组织的排斥和获得性免疫缺陷综合征(AIDS)。

例如，Tec家族酪氨酸激酶-介导的病症包括呼吸道疾病，非限制性地包括可逆性阻塞性气道疾病，包括哮喘，例如支气管、变应性、内因性、外因性与尘埃性哮喘，特别是慢性或顽固性哮喘(例如晚期哮喘气道反应性过高)和支气管炎。另外，Tec家族酪氨酸激酶疾病非限制性地包括以鼻粘膜炎症为特征的那些病症，包括急性鼻炎、变应性与特应性鼻炎和慢性鼻炎，包括干酪性鼻炎、肥大性鼻炎、脓性鼻炎、干燥性鼻炎和药物性鼻炎；膜性鼻炎，包括哮吼性、纤维蛋白性与假膜性鼻炎和瘰疠性鼻炎；季节性鼻炎，包括神经性鼻炎(枯草热)和血管舒缩性鼻炎；肉样瘤病；农民肺与相关疾病；纤维样肺；和自发性间质性肺炎。

Tec家族酪氨酸激酶-介导的病症也包括骨和关节的疾病，非限制性地包括类风湿性关节炎(中的血管翳形成)、血清反应阴性脊椎关节病(包括关节强硬性脊椎炎、牛皮癣性关节炎和莱特尔氏病)、贝切特氏病、斯耶格伦氏综合征和系统性硬化。

Tec家族激酶-介导的病症也包括皮肤的疾病和疾患，非限制性地包括牛皮癣、系统性硬化、特应性皮炎、接触性皮炎与其他湿疹性皮炎、皮脂溢性皮炎、扁平苔癣、天疱疮、大疱性天疱疮、大疱性表皮松解、荨麻疹、干皮病、结节性脉管炎、红皮病、皮肤嗜曙红细胞增多、眼色素层炎、脱发、簇性与春季结膜炎。

Tec家族酪氨酸激酶-介导的病症也包括胃肠道的疾病和疾患，非限制性地包括腹腔疾病、直肠炎、嗜曙红细胞性胃肠炎、肥大细胞病、胰腺炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、远离肠胃的食物相关性变态反应，例如偏头痛、鼻炎和湿疹。

Tec家族酪氨酸激酶-介导的病症也包括其他组织的疾病与疾患和全身疾病，非限制性地包括多发性硬化、动脉粥样硬化、获得性免疫缺陷综合征(AIDS)、红斑狼疮、系统性狼疮、红斑、桥本氏甲状腺炎、重症肌无力、I型糖尿病、肾病综合征、嗜曙红细胞增多性筋膜炎、IgE过高综合征、结节性麻风、赛塞利综合征与自发性血小板减少性紫癜、血管成形术后再狭窄、肿瘤(例如白血病、淋巴瘤)、动脉粥样硬化和系统性红斑狼疮。

Tec家族酪氨酸激酶-介导的病症也包括同种移植物排斥，非限制性地包括急性与慢性同种移植物排斥，例如继发于肾、心、肝、肺、骨髓、皮肤和角膜的移植术之后；和慢性移植物抗宿主疾病。

也将被领会的是，本发明的化合物和药学上可接受的组合物可以用在联合疗法中，也就是说，化合物和药学上可接受的组合物可以在一种或多种其他所需治疗剂或医药程序同时、之前或随后给药。用在联合方案中的特定疗法组合(治疗剂或程序)将考虑所需治疗剂和/或程序与所要达到的所需治疗效果的可相容性。也将被领会的是，所用疗法可以对同一病症达到所需效果(例如，本发明化合物可以与另一种用于治疗同一病症的药物同时给药)，或者它们可以达到不同的效果(例如控制任何副作用)。正如本文所用的，在正常情况下给药以治疗或预防特定疾病或病症的另外的治疗剂被称为“就所治疗的疾病或病症而言是适当的”。

例如，化疗剂或其他抗增殖剂可以与本发明化合物相联合治疗增殖性疾病和癌症。其他可以用于与本发明抗癌剂组合的疗法或抗癌剂包括手术、放射疗法(一些实例有γ-照射、中子束放射疗法、电子束放射疗法、质子疗法、近程疗法和系统性放射性同位素，仅举数例)、内分泌疗法、生物应答改性剂(干扰素、白介素和肿瘤坏死因子(TNF)，仅举数例)、高温与冷冻疗法、减弱任何副作用的药物(例如止吐剂)和其他经过批准的化疗药，包括但不限于烷基化药(氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、美法仑、异环磷酰胺)、抗代谢产物(甲氨蝶呤)、嘌呤拮抗剂与嘧啶拮抗剂(6-巯基嘌呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他滨)、纺锤体抑制剂(长春花碱、长春新碱、长春瑞滨、紫杉醇)、鬼臼毒素(依托泊苷、伊立替康、托泊替康)、抗生素(阿霉素、博莱霉素、丝裂霉素)、亚硝基脲(亚硝脲氮芥、环己亚硝脲)、无机离子(顺铂、卡铂)、酶(天冬酰胺酶)、激素(他莫昔芬、醋酸亮丙瑞林、氟他胺和甲地孕酮)、Gleevec^TM、阿霉素、地塞米松和环磷酰胺。关于最新癌症疗法的更全面讨论，参见http://www.nci.nih.gov/、FDA批准的肿瘤药物列表http://www.fda.gov/cder/cancer/druglistframe.htm和The Merck Manual，Seventeenth Ed.1999，其完整内容引用在此作为参考。

其他也可以与本发明抑制剂联合的药物实例非限制性地包括：阿尔茨海默式病的治疗剂，例如和；帕金森氏病的治疗剂，例如左旋多巴/卡比多巴、恩他卡朋、罗匹尼罗、普拉克索、溴隐亭、培高利特、苯海索和金刚烷胺；治疗多发性硬化(MS)的药物，例如β-干扰素(例如和)、和米托蒽醌；哮喘的治疗剂，例如沙丁胺醇和；治疗精神分裂症的药物，例如再普乐、维思通、思瑞康和氟哌啶醇；抗炎剂，例如皮质甾类、TNF阻滞剂、IL-1RA、硫唑嘌呤、环磷酰胺和柳氮磺胺吡啶；免疫调控与免疫抑制剂，例如环孢菌素、他克莫司、雷帕霉素、霉酚酸吗乙基麦考酚酯、干扰素、皮质甾类、环磷酰胺、硫唑嘌呤和柳氮磺胺吡啶；神经营养因子，例如乙酰胆碱酯酶抑制剂、MAO抑制剂、干扰素、抗惊厥剂、离子通道阻滞剂、利鲁唑和抗帕金森剂；治疗心血管疾病的药物，例如β-阻滞剂、ACE抑制剂、利尿剂、硝酸酯、钙通道阻滞剂和他汀类；治疗肝疾病的药物，例如皮质类固醇、考来烯胺、干扰素和抗病毒剂；治疗血液病的药物，例如皮质类固醇、抗白血病剂和生长因子；和治疗免疫缺陷性疾病的药物，例如γ-球蛋白。

另外的治疗剂在本发明组合物中的含量将不超过在包含该治疗剂作为唯一活性成分的组合物中通常的给药量。优选地，另外的治疗剂在目前所公开的组合物中的量将是通常的包含该药物作为唯一治疗活性成分的组合物中的含量的约50％至100％。

本发明化合物或其药学上可接受的组合物也可以引入到涂覆可植入医药装置的组合物中，例如假肢、人工瓣膜、脉管移植物、支架和导管。因此，本发明在另一方面包括涂覆可植入装置的组合物，其包含如上一般性描述和在本文的大类与小类中所述的本发明化合物，和适合于涂覆所述可植入装置的载体。在另一方面，本发明包括涂有组合物的可植入装置，所述组合物包含如上一般性描述和在本文大类与小类中所述的本发明化合物，和适合于涂覆所述可植入装置的载体。

脉管支架例如已经用于克服再狭窄(损伤后血管壁的再狭窄)。不过，使用斯坦特氏印模或其他可植入装置的患者面临凝块生成或血小板活化的危险。通过将该装置预先涂覆包含激酶抑制剂的药学上可接受的组合物，可以防止或减轻这些所不希望的效果。适合的涂料和制备涂覆的可植入装置的一般方法描述在美国专利6,099,562、5,886,026和5,304,121中。涂料通常是生物可相容的聚合材料，例如水凝胶聚合物、聚甲基二硅氧烷、聚己内酯、聚乙二醇、聚乳酸、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物和它们的混合物。涂料可以可选地进一步被适合的氟硅酮、多糖、聚乙二醇、磷脂或其组合的表层所覆盖，以赋予组合物的控释特征。

本发明的另一方面涉及在生物样品或患者中抑制Tec家族(例如Tec、Btk、Itk/Emt/Tsk、Bmx、Txk/Rlk)活性，该方法包括对患者给予或者使所述生物样品接触式I化合物或包含所述化合物的组合物。本文所用的术语“生物样品”非限制性地包括细胞培养物及其提取物；从哺乳动物或其提取物获得的活组织检查材料；和血液、唾液、尿、粪便、精液、泪液或其他体液或其提取物。

在生物样品中抑制Tec家族(例如Tec、Btk、Itk/Emt/Tsk、Bmx、Txk/Rlk)激酶活性可用于本领域技术人员已知的多种目的。这类目的的实例包括但不限于输血、器官移植、生物样本贮存和生物学测定。

具体实施方式

合成实施例

本文所用的¹H NMR是核磁共振。HPLC是高效液相色谱。术语“Rt(min)”表示与化合物有关的HPLC保留时间，以分钟计。除非另有指示，用于获得所报道的保留时间的HPLC方法如下：

柱子：Ace 5C8，15cm×4.6mm id

梯度：0-100％乙腈+甲醇(50∶50)(20mM Tris磷酸盐，pH 7.0)

流速：1.5ml/min

检测：225nm

实施例1

5-苯基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶

将5-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(2g，10.15mmol)、苯基代硼酸(1.24g，10.15mmol)和四(三苯膦)钯(117mg，0.10mmol)悬浮在乙醇(5ml)、水(6ml)和DME(22ml)中，加热至100℃过夜。在真空中除去溶剂，反应经过柱色谱纯化，用30％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱，得到标题化合物，为灰白色固体(1.51g，77％)。

MS(ES⁺)195，(ES-)193.δH(CDCl₃)6.60(1H，s)，7.36-7.43(2H，m)，7.68(2H，d)，8.18(1H，s)，8.62(1H，s)，10.39(1H，br s).

实施例2

2-氯-1-(5-苯基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-乙酮

将5-苯基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(200mg，1.03mmol)和氯化铝(412mg，3.09mmol)悬浮在无水DCM中，在室温下搅拌1小时，滴加氯乙酰氯(98μl，1.24mmol)，将所得琥珀色溶液在室温下搅拌过夜。将反应用甲醇(5ml)淬灭，在室温下搅拌2小时。然后蒸发溶剂，得到橙色的油。使其在DCM与水之间分配。在真空中浓缩有机相，产物用二乙醚研制，得到标题化合物，为米色固体(188mg，67％)。

MS(ES⁺)271，(ES-)269.δH(CDCl₃)4.57(2H，s)，7.44(1H，t)，7.50(2H，t)，7.70(2H，d)，8.23(1H，s)，8.70(1H，s)，8.91(1H，s)，11.59(1H，br s).

实施例3

二乙基-[4-(5-苯基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-噻唑-2-基]-胺

将2-氯-1-(5-苯基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-乙酮(50mg，0.18mmol)和1，1-二乙基硫脲(24mg，0.18mmol)悬浮/溶解在乙醇(2ml)中，在120℃微波中加热10分钟。粗反应混合物经过HPLC纯化，用乙腈/水洗脱，得到标题化合物，为奶油色固体(9.5mg，15％)。

MS(ES+)349，(ES-)347.δH(CDCl3)1.31(6H，t)，3.59(4H，q)，6.61(1H，s)，7.38(1H，t)，7.50(2H，t)，7.69(2H，d)，7.78(1H，s)，8.56-8.62(2H，m)，8.94(1H，br s)，

借助基本上类似于本文实施例3所述的方法制备多种其他式I化合物。这些化合物的鉴别数据总结在下表3中，包括HPLC、LC/MS(观测)和¹H NMR数据。

表3：所选择的式I化合物的鉴别数据

化合物号I-	M+1(obs)	Rt(min)
				1	292	9.60
2	349	10.72	(CDCl3)1.31(6H，t)，3.59(4H，q)，6.61(1H，s)，7.38(1H，t)，7.50(2H，t)，7.69(2H，t)，7.78(1H，s)，8.56-8.62(2H，m)，8.94(1H，br s)
				3	306	9.96
4	363	10.98
				5	307	8.74
6	364	10.17
				7	350	9.89

9	363	9.78
				12	390	8.63	(DMSO)3.25-3.45(4H，m)，3.90(2H，br s)，4.76(2H，br s)，7.42(1H，t)，7.54(2H，t)，7.79(2H，d)，8.20(1H，s)，8.36(1H，s)，8.63(2H，d)，8.82(1H，br s)，12.20(1H，s).
14	391	9.20
				16	404	8.89
18	362		(DMSO)2.81-2.87(4H，m)，3.35-3.44(4H，m)，7.27(1H，s)，7.37(1H，t)，7.45-7.52(2H，m)，7.73-7.77(2H，m)，7.84(1H，s)，8.54(1H，s)，8.59(1H，s)，11.88(1H，s)
				46	335	8.92	(DMSO)2.18(3H，s)，7.43(1H，t)，7.49-7.56(3H，m)，4.79-4.82(2H，m)，7.94(1H，s)，8.58(1H，s)，8.71(1H，s)，12.00(1H，s)，12.19(1H，s)
48	418	8.48	(DMSO)：1.40(2H，t)，1.80-1.95(3H，m)，2.88(2H，t)，3.22-3.31(4H，m)，7.39(1H，t)，7.51(2H，t)，7.85(2H，d)，8.15(1H，s)，8.29(2H，br s)，8.60(1H，s)，8.78(1H，s)，8.99(1H，t)，12.17(1H，s).
				49	293		(DMSO)6.95(1H，s)，7.00(1H，s)，7.37(1H，t)，7.46-7.51(2H，m)，7.75-7.79(3H，m)，8.54(1H，s)，8.59(1H，s)，11.84(1H，s)
50	321	10.00	(DMSO)3.13(6H，s)，7.10(1H，s)，7.39(1H，t)，7.46-7.54(2H，m)，7.75-7.78(2H，m)，7.85(1H，s)，8.54(1H，s)，8.62(1H，s)，11.88(1H，s)
				50	538	10.9
52	365	10.0

53	389	11.22
				54	379	10.6	(DMSO)1.2-1.3(6H，m)，3.4-3.6(4H，m)，3.8-3.9(3H，s)，6.9(1H，m)，7.0(1H，s)，7.3(2H，m)，7.4(1H，m)，7.8-7.9(1H，s)，8.5-8.6(1H，s)，8.7(1H，s)，11.8-11.9(0.7H，s)
55	323	8.5	(DMSO)3.7-3.8(3H，s)，6.8-7.0(3H，m)，7.2-7.3(2H，m)，7.3-7.4(1H，m)，7.7-7.8(1H，s)，8.5-8.6(2H，m)，11.8(0.6H，s)
				56	347	10.38
57	379	10.39
				58	335	10.35
59	376	9.82
				60	365	9.61
61	363	9.61	(DMSO)1.14(6H，d，J＝6.8Hz)，2.72-2.8491H，m)，7.35-7.56(4H，m)，7.75-7.82(2H，m)，7.90(1H，brs)，8.58(1H，brs)，8.70(1H，brs)，11.98(1H，brs)，12.13(1H，brs).
				62	363	10.97

63	392	10.27
				64	381	9.64	(DMSO)1.14(6H，d，J＝6.9Hz)，2.72-2.86(1H，m)，7.30-7.40(2H，m)，7.52(1H，s)，7.79-7.91(3H，m)，8.56(1H，brs)，8.66(1H，brs)，11.99(1H，brs)，12.12(1H，brs).
65	353	8.98	(DMSO)1.15(6H，d，J＝6.8Hz)，2.72-2.86(1H，m)，7.18(1H，s)，7.53(1H，s)，7.78-7.89(2H，m)，8.30(1H，s)，8.56-8.62(1H，m)，11.90(1H，brs)，12.14(1H，brs).
				66	298	9.58	(DMSO)1.21(6H，t，J＝7.0Hz)，3.51(4H，q，J＝7.0Hz)，7.08(1H，s)，8.04(1H，brs)，8.65(1H，brs)，8.91(1H，brs)，12.48(1H，brs).
67	405	10.68	(DMSO)1.00(6H，d)，1.40(3H，t)，2.11-2.23(1H，m)，2.63(2H，d)，4.34(2H，q)，7.34-7.41(1H，m)，7.46-7.54(3H，m)，7.73-7.75(2H，m)，7.99(1H，s)，8.56(1H，s)，8.76(1H，s)，11.95(1H，s)
				68	363	9.80	(DMSO)1.42(3H，t)，2.46(3H，s)，4.35(2H，q)，7.34-7.40(1H，m)，7.51-7.56(3H，m)，7.76-7.71(2H，m)，8.01(1H，s)，8.60(1H，s)，8.74(1H，s)，12.00(1H，s)
69	349	10.59	(DMSO)1.2(6H，q)，3.5(4H，t)，6.9(1H，s)，7.4(1H，m)，7.5(2H，m)，7.7(1H，m)，7.9(1H，s)，8.1(2H，m)，8.5(1H，d)，11.8(NH，s)
				70	392	9.9	(DMSO)1.2-1.3(6H，m)，3.5-3.6(4H，m)，6.9(1H，s)，7.5-7.6(3H，m)，7.7(1H，s)，7.9-8.1(3H，m)，8.4-8.5(1H，d)，10.6(1H，s)，11.5-11.6(1H，s)
71	364	10.1	(DMSO)1.2-1.3(6H，m)，3.5(4H，m)，6.6-6.7(1H，d)，6.8(1H，s)，6.8-6.9(1H，m)，7.2-7.3(2H，m)，7.4(1H，s)，7.8(2H，m)，8.2(1H，d)，9.0(1H，s)，11.3-11.4(1H，s)
				72	311	8.82	(CDCl3)1.51(3H，t)，2.48(3H，s)，3.18(1H，s)，4.42(2H，q)，7.10(1H，s)，7.84(1H，s)，8.51(1H，s)，8.66(1H，s)，9.91(1H，br s)
73	406	7.73	(DMSO)1.14(6H，d，J＝6.8HZ)，2.74-2.86(1H，m)，7.42(1H，brs)，7.58(1H，s)，7.84-7.94(3H，m)，7.98-8.12(3H，m)，8.65(1H，brs)，8.75(1H，brs)，12.01(1H，brs)，12.15(1H，brs).

74	330	8.32	(DMSO)1.23(6H，t，J＝7.0Hz)，2.85(3H，d，J＝4.4Hz)，3.52(4H，q，J＝7.0Hz)，6.98(1H，s)，7.90(1H，brs)，8.50-8.60(1H，m)，8.74(1H，brs)，8.86(1H，brs)，12.01(1H，brs).
				75	297	9.86	(DMSO)1.31(6H，t，J＝7.0Hz)，3.16(1H，s)，3.59(4H，q，J＝7.0Hz)，6.60(1H，s)，7.80(1H，brs)，8.49(1H，brs)，8.55(1H，brs)，9.75(1H，brs).

实施例4

3-碘-5-苯基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶

将在环境温度下搅拌着的5-苯基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(2.96g，15.24mmol，1eq)的无水DMF(60ml)溶液用碘(7.74g，30.50mmol，2eq)处理，然后加入氢氧化钾(3.20g，57.14mmol，3.75eq)。将反应混合物在室温下搅拌15h，然后用硫代硫酸钠水溶液与乙酸乙酯的混合物稀释。分离有机层，用饱和氯化钠水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，然后在真空中浓缩。然后将所得油溶于DCM/MeOH混合物，吸附到硅胶上。然后将产物干燥加载上柱，进行硅胶色谱处理，使用乙酸乙酯(1)：40-60石油醚(2)的混合物作为洗脱剂，得到3-碘-5-苯基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(1)(3.16g，65％)，为白色固体。

1H NMR，(400Mhz，DMSO)7.34-7.41(1H，m)，7.46-7.56(2H，m)，7.70-7.80(3H，m)，7.81-7.89(1H，m)，8.53-8.60(1H，m)，12.21(1H，brs).

实施例5

3-碘-5-苯基-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶将在环境温度下搅拌着的60％氢化钠的矿物油悬浮液(79mg，1.98mmol，1.2eq)的无水DMF(30ml)悬液用3-碘-5-苯基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(1)(530mg，1.66mmo l，1.0eq)的DMF(5m l)溶液处理。然后将反应混合物在室温下搅拌1h，然后冷却至0℃。然后加入对-甲苯磺酰氯(316mg，1.66mmol，1.0eq)的无水DMF(5ml)溶液，历经15h使反应混合物升温至室温。然后将反应混合物用水与乙酸乙酯的混合物稀释，用饱和氯化钠水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，然后在真空中浓缩。所得油然后经过硅胶色谱处理，使用乙酸乙酯(1)：40-60石油醚(2)的混合物作为洗脱剂，得到3-碘-5-苯基-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(2)(743mg，95％)，为白色固体。1H NMR，(400Mhz，DMSO)2.37(3H，s)，7.39-7.56(5H，m)，7.75(2H，d)，7.91(1H，s)，8.05(2H，d)，8.20(1H，s)，8.71(1H，s).

实施例6

5-苯基-3-(1H-吡咯-2-基)-1-H-吡咯并[2，3-b]吡啶

将3-碘-5-苯基-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(2)(150mg，0.32mmol，1eq)、四(三苯膦)钯(0)(4mg，0.0035mmol，0.01eq)与1-(叔丁氧羰基)-1H-吡咯-2-基-2-代硼酸(67mg，0.32mmol，1eq)的混合物置于微波试管中。然后将混合物用DME(4ml)、EtOH(0.86ml)、水(1.14ml)和2N碳酸钠水溶液(0.63ml)处理。将试管置于微波内，在160℃下加热40min。使试管冷却至室温，用水/乙酸乙酯稀释。分离有机层，经硫酸钠干燥，在真空中浓缩，得到胶状物。将该胶溶于DMSO，进行反相色谱处理，使用ACN/水作为梯度洗脱剂，得到5-苯基-3-(1H-吡咯-2-基)-1-H-吡咯并[2，3-b]吡啶(3)，为固体。

1H NMR，(400Mhz，DMSO)6.10-6.16(1H，m)，6.45-6.50(1H，m)，6.78-6.84(1H，m)，7.32-7.54(3H，m)，8.37-8.42(1H，m)，8.52-8，58(1H，m)，11.05(1H，brs)，11.75(1H，brs).

借助基本上与本文实施例6所述相似的方法制备多种其他式I化合物。这些化合物的鉴别数据总结在下表4中，包括HPLC、LC/MS(观测)和¹H NMR数据。

表4：所选择的式I化合物的鉴别数据

化合物号II-	M+1(obs)	Rt(min)
				2	319	9.70	(DMSO)2.55(3H，s)，7.36-7.45(1H，m)，7.47-7.59(2H，m)，7.61-7.69(1H，m)，7.75-7.85(2H，m)，7.92-7.99(1H，m)，8.19-8.25(1H，m)，8.41-8.4891H，m)，8.59-8.6691H，m)，12.34(1H，brs).

实施例7：ITK抑制作用测定法

利用放射性磷酸盐结合测定法筛选化合物抑制Itk的能力。测定是在25℃下、在30nM Itk的存在下，在包含100mM HEPES(pH 7.4)、10mM MgCl₂、25mM NaCl、0.01％BSA与1mM DTT的缓冲液中进行的。最终底物浓度为15μM[γ-³³P]ATP(400μCi ³³P ATP/μmol ATP，AmershamPharmacia Biotech/Sigma Chemicals)和2μM肽(SAM68蛋白Δ332-443)。制备测定储备缓冲溶液，其中含有全部上列试剂，ATP和有关供试化合物除外。将50μl储备溶液置于96孔平板中，继之以加入含有供试化合物系列稀释液的1.5μl DMSO储备溶液(通常开始于15μM的最终浓度，2倍系列稀释)，一式两份(最终DMSO浓度1.5％)。将平板在25℃下预温育10分钟，加入50μl[γ-³³P]ATP引发反应(最终浓度15μM)。

10分钟后加入50μl TCA/ATP混合物(20％TCA，0.4mM ATP)终止反应。将Unifilter GF/C 96孔平板(Perkin Elmer Life Sciences，Cat no.6005174)用50μl Milli Q水预处理，然后加入全部反应混合物(150μl)。将平板用200μl Milli Q水洗涤，继之以200μl TCA/ATP混合物(5％TCA，1mM ATP)。这种洗涤循环重复另外2次。干燥后，向小孔加入30μl Optiphase‘SuperMix’液体闪烁鸡尾酒试剂(PerkinElmer)，然后进行闪烁计数(1450 Microbeta Liquid ScintillationCounter，Wallac)。

利用Prism软件包(GraphPad Prism version 3.0a for Macintosh，GraphPad Software，San Diego California，USA)，从初始速率数据的非线性回归分析计算IC₅₀数据。

测定是在20mM MOPS(pH 7.0)、10mM MgCl₂、0.1％BSA与1mM DTT的混合物中进行的。最终底物浓度为7.5μM[γ-³³p]ATP(400mCi ³³PATP/mmol ATP，Amersham Pharmacia Biotech/Sigma Chemicals)和3μM肽(SAM68蛋白D332-443)。测定是在25℃下、在50nM Itk的存在下进行的。制备测定储备缓冲溶液，其中含有全部上列试剂，ATP和有关供试化合物除外。将50μl储备溶液置于96孔平板中，继之以加入含有供试化合物系列稀释液的2μl DMSO储备溶液(通常开始于50μM的最终浓度，2倍系列稀释)，一式两份(最终DMSO浓度2％)。将平板在25℃下预温育10分钟，加入50μl[γ-³³P]ATP引发反应(最终浓度7.5μM)。

10分钟后加入100mL 0.2M磷酸+0.01％吐温20终止反应。将multiscreen磷酸纤维素96孔过滤平板(Millipore，Cat no.MAPHN0B50)用100μL 0.2M磷酸+0.01％吐温20预处理，然后加入170mL终止测定混合物。将平板用4×200μL 0.2M磷酸+0.01％吐温20洗涤。干燥后，向小孔加入30μL Optiphase‘SuperMix’液体闪烁鸡尾酒试剂(Perkin Elmer)，然后进行闪烁计数(1450 MicrobetaLiquid Scintillation Counter，Wallac)。

利用Prism软件包(GraphPad Prism version 3.0cx for Macintosh，GraphPad Software，San Diego California，USA)，从初始速率数据的非线性回归分析计算Ki(app)数据。

实施例8：ITK抑制作用测定法(AlphaScreen^TM)

在Vertex Pharmaceuticals利用AlphaScreen^TM磷酸酪氨酸测定法筛选化合物抑制Itk的能力。测定是在20mM MOPS(pH 7.0)、10mMMgCl₂、0.1％BSA与1mM DTT的混合物中进行的。测定中的最终底物浓度为100μM ATP(Sigma Chemicals)和2μM肽(生物素基化SAM68Δ332-443)。测定是在25℃下、在Itk(30nM)的存在下进行的。制备测定储备缓冲溶液，其中含有全部上列试剂，ATP和有关供试化合物除外。将25μl储备溶液置于96孔平板的每孔中，继之以加入含有供试化合物系列稀释液的1μl DMSO(通常开始于15μM的最终浓度)，一式两份(最终DMSO浓度2％)。将平板在25℃下预温育10分钟，加入25μl ATP引发反应(最终浓度100μM)。在用ATP引发之前，向含有测定储备缓冲液和DMSO的对照小孔加入5μl 500mM EDTA，测定背景计数。

30分钟后稀释225倍反应混合物至含有50mM EDTA的MOPS缓冲液(20mM MOPS(pH 7.0)，1mM DTT，10mM MgCl₂，0.1％BSA)，使生物素-SAM68的最终浓度为9nM。

按照厂商指导制备AlphaScreen^TM试剂(AlphaScreen^TM磷酸酪氨酸(P-Tyr-100)测定试剂盒，PerkinElmer catalogue number6760620C)。在柔和光照下，将20μl AlphaScreen^TM试剂置于白色半区96孔平板(Corning Inc.-COSTAR 3693)每孔中，含有30μl终止的稀释的激酶反应物。将平板在暗处温育60分钟，然后在Fusion Alpha平板读数器(Perkin Elmer)上读取。

除去全部数据点的平均背景值后，利用Prism软件包(GraphPadPrism version 3.0cx for Macintosh，GraphPad Software，San DiegoCalifornia，USA)从非线性回归分析计算Ki(app)数据。

一般而言，本发明化合物、包括表1和表2化合物就ITK的抑制而言是有效的。

实施例9：ITK抑制作用测定法(UV)

利用标准偶联酶测定法筛选化合物抑制Itk的能力(Fox等人.Protein Sci.(1998)7，2249)。测定是在20mM MOPS(pH 7.0)、10mM MgCl₂、0.1％BSA、1mM DTT、2.5mM磷酸烯醇丙酮酸、300μM NADH、30μg/m l丙酮酸激酶与10μg/ml乳酸脱氢酶的混合物中进行的。测定中的最终底物浓度为100μM ATP(Sigma Chemicals)和3μM肽(生物素基化SAM68Δ332-443)。测定是在25℃下、在100nM Itk的存在下进行的。

制备测定储备缓冲溶液，其中含有全部上列试剂，ATP和有关供试化合物除外。将60μl储备溶液置于96孔平板的每孔中，继之以加入含有供试化合物系列稀释液的2μl DMSO(通常开始于15μM的最终浓度)。将平板在25℃下预温育10分钟，加入5μl ATP引发反应。利用Molecular Devices SpectraMax Plus平板读数器测定10分钟的初始反应速率。利用Prism软件包(GraphPad Prismversion 3.0cxfor Macintosh，GraphPad Software，San Diego California，USA)，从非线性回归分析计算IC₅₀和Ki数据。

一般而言，本发明化合物、包括表1和表2化合物就ITK的抑制而言是有效的。

实施例10：BTK抑制作用测定法

在Vertex Pharmaceuticals利用放射性磷酸盐结合测定法筛选化合物抑制Btk的能力。测定是在100mM HEPES(pH 7.5)、10mM MgCl₂、25mM NaCl、0.01％BSA与1mM DTT的混合物中进行的。测定中的最终底物浓度为100μM ATP(Sigma Chemicals)和5μM肽(SAM68Δ332-443)。测定是在25℃下、在Btk(25nM)和[γ³³p]ATP(100μCi³³P ATP/μmol ATP，Amersham Pharmacia Biotech，Amersham，UK)的存在下进行的。制备测定储备缓冲溶液，其中含有全部上列试剂，SAM68和有关供试化合物除外。将75μl储备溶液置于96孔平板中，继之以加入含有供试化合物系列稀释液的1.5μl DMSO储备溶液(通常开始于15μM的最终浓度)，一式两份(最终DMSO浓度1.5％)。将平板在25℃下预温育15分钟，加入25μl SAM68引发反应(最终浓度5μM)。在用SAM68引发之前，向含有测定储备缓冲液和DMSO的对照小孔加入50μL 20％TCA+0.4mM ATP，测定背景计数。

60分钟后加入50μl 20％TCA+0.4mM ATP，终止反应。在加入全部反应混合物(150μL)之前，将Unifilter GF/C 96孔平板(PerkinElmer Life Sciences，Cat no.6005174)用50μL Milli Q水预处理。将平板用200μL Milli Q水、继之以200μL 5％TCA+1mM ATP洗涤。水/TCA洗涤循环重复另外2次。干燥后，向小孔加入30μL Optiphase‘SuperMix’液体闪烁鸡尾酒试剂(Perkin Elmer)，然后闪烁计数(1450 Microbeta Liquid Scintillation Counter，Wakllac)。

除去全部数据点的平均背景值后，利用Prism软件包(GraphPadPrism version 3.0a for Macintosh，GraphPad Software，San DiegoCalifornia，USA)从非线性回归分析计算Ki(app)数据。

在Vertex Pharmaceuticals利用AlphaScreen^TM筛选化合物抑制Btk的能力。测定是在20mM MOPS(pH 7.0)、10mM MgCl₂、0.1％BSA与1mM DTT的混合物中进行的。测定中的最终底物浓度为50μM ATP(Sigma Chemicals)和2μM肽(生物素基化SAM68Δ332-443)。测定是在25℃下、在BtK(25nM)的存在下进行的。制备测定储备缓冲溶液，其中含有全部上列试剂，生物素-SAM68和有关供试化合物除外。将37.5μl储备溶液置于96孔平板的每孔中，继之以加入含有供试化合物系列稀释液的1μl DMSO(通常开始于15μM的最终浓度)，一式两份(最终DMSO浓度2％)。将平板在25℃下预温育15分钟，加入12.5μl生物素-SAM68引发反应(最终浓度2μM)。在用生物素-SAM68引发之前，向含有测定储备缓冲液和DMSO的对照小孔加入5μl 500mM EDTA，测定背景计数。

30分钟后稀释225倍反应混合物至含有50mM EDTA的MOPS缓冲液(20mM MOPS(pH 7.0)，1mM DTT，10mM MgCl₂，0.1％BSA)，使生物素-SAM68的最终浓度为9nM。

按照厂商指导制备AlphaScreen^TM试剂(AlphaScreen^TM磷酸酪氨酸(P-Tyr-100)测定试剂盒，PerkinElmer catalogue number6760620C)。在柔和光照下，将20μl AlphaScreen^TM试剂置于白色半区96孔平板(Corning Inc.-COSTAR 3693)每孔中，含有30μl终止的稀释的激酶反应物。将平板在暗处温育60分钟，然后在Fusion Alpha平板读数器(PerkinElmer)上读取。

除去全部数据点的平均背景值后，利用Prism软件包(GraphPadPrism version 3.0cx for Macintosh，GraphPad Software，San DiegoCalifornia，USA)从非线性回归分析计算Ki(app)数据。

一般而言，本发明化合物、包括表1和表2化合物就Btk的抑制而言是有效的。

实施例11：RLK抑制作用测定法

利用标准偶联酶测定法筛选化合物抑制Rlk的能力(Fox等人.Protein Sci.(1998)7，2249)。测定是在20mM MOPS(pH 7.0)、10mM MgCl₂、0.1％BSA与1mM DTT的混合物中进行的。测定中的最终底物浓度为100μM ATP(Sigma Chemicals)和10μM肽(Poly Glu∶Tyr4∶1)。测定是在30℃下、在40nM Rlk的存在下进行的。偶联酶系统组分的最终浓度为2.5mM磷酸烯醇丙酮酸、300μM NADH、30μg/ml丙酮酸激酶和10μg/ml乳酸脱氢酶。

制备测定储备缓冲溶液，其中含有全部上列试剂，ATP和有关供试化合物除外。将60μl储备溶液置于96孔平板的每孔中，继之以加入含有供试化合物系列稀释液的2μl DMSO(通常开始于7.5μM的最终浓度)。将平板在30℃下预温育10分钟，加入5μl ATP引发反应。利用Molecular Devices SpectraMax Plus平板读数器测定10分钟的初始反应速率。利用Prism软件包(GraphPad Prism version 3.0cxfor Macintosh，GraphPad Software，San Diego California，USA)，从非线性回归分析计算IC₅₀和Ki数据。

一般而言，本发明化合物、包括表1和表2化合物就RLK的抑制而言是有效的。

实施例12：JAK3抑制作用测定法

利用下示测定法针对其抑制JAK的能力筛选化合物。反应是在激酶缓冲液中进行的，其中含有100mM HEPES(pH 7.4)、1mM DTT、10mMMgCl₂、25mM NaCl和0.01％BSA。

测定中的底物浓度为5μM ATP(200μCi/μmol ATP)和1μMpoly(Glu)₄Tyr。反应是在25℃和1nM JAK3下进行的。

向96孔聚碳酸酯平板的每孔加入1.5μl候选JAK3抑制剂以及50μl激酶缓冲液，其中含有2μM poly(Glu)₄Tyr和10μM ATP。然后混合之，加入含有2nM JAK3酶的50μl激酶缓冲液开始反应。在室温(25℃)下20分钟后，用也含有0.4mM ATP的50μl 20％三氯乙酸(TCA)终止反应。然后利用TomTek细胞收获器将每孔全部内容物转移至96孔玻璃纤维过滤平板。洗涤后，加入60μl闪烁流体，在Perkin Elmer TopCount上检测³³P的结合。

一般而言，本发明化合物、包括表1和表2化合物就JAK(例如JAK-3)的抑制而言是有效的。

Claims (60)

1.式I化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

环A是可选被取代的五元环，选自：

x是0、1或2；

每次出现的R¹独立地是卤素、CN、NO₂或U_mR；

R²独立地选自T_n-R’；

X¹、X²和X³各自独立地是CR¹、N、S或O；

R³、R⁴和R⁵各自独立地是卤素、CN、NO₂或V_p-R’；

每次出现的T、U或V独立地是可选被取代的C_1-6亚烷基链，其中该链的至多两个亚甲基单元可选地和独立地被-NR-、-S-、-O-、-CS-、-CO₂-、-OCO-、-CO-、-COCO-、-CONR-、-NRCO-、-NRCO₂-、-SO₂NR-、-NRSO₂-、-CONRNR-、-NRCONR-、-OCONR-、-NRNR-、-NRSO₂NR-、-SO-、-SO₂-、-PO-、-PO₂-或-POR-所代替；

m、n和p各自独立地是0或1；

每次出现的R独立地是氢或者可选被取代的C_1-6脂族基团；每次出现的R’独立地是氢或者可选被取代的C_1-6脂族基团、具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的3-8元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环，或者具有0-5个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-12元饱和、部分不饱和或完全不饱和的二环环系；或者R和R’、两次出现的R或两次出现的R’与它们所键合的原子一起构成可选被取代的具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的3-12元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环或二环；

其条件是至少一次出现的R³、R⁴、R⁵是V_p-R’，其中R’不是氢；

如果n是0，那么R’不是H；

如果环A是R⁴是2-苯氧基苯基，那么R²不是COOH或CONHR^x，其中R^x是正丙基、苯基、环己基、苄基、-CH₂CH₂OH、-CH₂-环丙基、-CH₂CH₂OCH₃、3-吡啶基、4-羟基-环己基或-CH₂-C≡CH。

2.权利要求1的化合物，其中R³、R⁴和R⁵之一是V_p-R’，其中R’是可选被取代的具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-或6-元完全不饱和的单环，或者可选被取代的具有0-5个独立选自氮、氧或硫的杂原子的9-或10-元完全不饱和的二环环系。

3.权利要求1的化合物，其中R³、R⁴和R⁵之一是V_p-R’，其中R’是可选被取代的C_1-6脂族基团、可选被取代的具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的3-8元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环，或者可选被取代的具有0-5个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-12元饱和、部分不饱和或完全不饱和的二环环系。

4.权利要求1-3任意一项的化合物，其中R⁴是V_p-R’，其中R’是可选被取代的C_1-6脂族基团、可选被取代的具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的3-8元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环，或者可选被取代的具有0-5个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-12元饱和、部分不饱和或完全不饱和的二环环系。

5.权利要求4的化合物，其中R⁴是V_p-R’，其中R’是可选被取代的C_1-6脂族基团或者可选被取代的具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的3-8-元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环。

6.权利要求5的化合物，其中R⁴是V_p-R’，并且R’是C≡CH。

7.权利要求5的化合物，其中R⁴是V_p-R’，并且R’是可选被取代的具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的3-8-元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环。

8.权利要求7的化合物，其中R⁴是V_p-R’，其中R’是可选被取代的具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6-元完全不饱和的单环。

9.权利要求8的化合物，其中R⁴是V_p-R’，并且R’是可选被取代的具有0-3个氮杂原子的6-元完全不饱和的单环。

10.权利要求9的化合物，其中该6-元完全不饱和的单环具有0-1个氮杂原子。

11.权利要求7的化合物，其中R⁴是V_p-R’，并且R’是可选被取代的具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的3-8-元饱和单环。

12.权利要求11的化合物，其中R⁴是V_p-R’，并且R’是可选被取代的具有0-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的6-元饱和单环。

13.权利要求1-12任意一项的化合物，其中p是0。

14.权利要求1-12任意一项的化合物，其中p是1。

15.权利要求14的化合物，其中V是-NR-、-S-或-O-。

16.权利要求1-15任意一项的化合物，其中R³是V_p-R’，其中p是0且R’是氢。

17.权利要求1-16任意一项的化合物，其中R⁵是卤素或V_p-R’，其中p是0且R’是氢或C_1-6脂族基。

18.权利要求17的化合物，其中R⁵是卤素或V_p-R’，其中p是0且R’是氢或C_1-3烷基。

19.权利要求1-18任意一项的化合物，其中环A是：

20.权利要求19的化合物，其中X²是CR¹。

21.权利要求19的化合物，其中环A是：

22.权利要求21的化合物，其中环A是：

23.权利要求1-22任意一项的化合物，其中R¹是U_mR。

24.权利要求1-23任意一项的化合物，其中R²是T_nR’，其中n是1。

25.权利要求24的化合物，其中T是-NR-、-O-、-CO-、-CONR-或-NRCO-。

26.权利要求1-23任意一项的化合物，其中R²是T_nR’，其中n是0。

27.权利要求1的化合物，选自下式

或其药学上可接受的盐。

28.权利要求27的化合物，选自下式

或其药学上可接受的盐。

29.权利要求27-28任意一项的化合物，其中R¹是U_mR，其中m是0且R是H或CH₃。

30.权利要求27-29任意一项的化合物，其中R²是T_nR’，其中n是1。

31.权利要求30的化合物，其中T是-NR-、-O-、-CO-、-CONR-或-NRCO-。

32.权利要求31的化合物，其中T是-NR-。

33.权利要求32的化合物，其中R和R’都是C_1-6脂族基。

34.权利要求27-29任意一项的化合物，其中R²是T_nR’，其中n是0。

35.权利要求34的化合物，其中R’是可选被取代的N-连接杂环基，选自吗啉基、哌啶基、吡咯烷基和哌嗪基。

36.权利要求27-35任意一项的化合物，其中R⁴和R⁵各自独立地是V_p-R’。

37.权利要求36的化合物，其中R⁴是V_p-R’且R’是C≡CH。

38.权利要求27-35任意一项的化合物，其中R³、R⁴和R⁵之一是V_p-R’，其中R’是可选被取代的具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-或6-元完全不饱和(即芳族)的单环，或者可选被取代的具有0-5个独立选自氮、氧或硫的杂原子的9-或10-元完全不饱和的二环环系。

39.权利要求27-35任意一项的化合物，其中R³、R⁴和R⁵之一是V_p-R’，其中R’独立地是可选被取代的C_1-6脂族基团、可选被取代的具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的3-8-元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环，或者可选被取代的具有0-5个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-12元饱和、部分不饱和或完全不饱和的二环环系。

40.权利要求39的化合物，其中R⁴是V_p-R’，其中R’独立地是可选被取代的C_1-6脂族基团、可选被取代的具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的3-8-元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环，或者可选被取代的具有0-5个独立选自氮、氧或硫的杂原子的8-12元饱和、部分不饱和或完全不饱和的二环环系；R³和R⁵是V_p-R’，其中p是0且R’是氢。

41.权利要求40的化合物，其中R⁴是V_p-R’，其中R’独立地是可选被取代的C_1-6脂族基团或者可选被取代的具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的3-8-元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环。

42.权利要求41的化合物，其中R⁴是V_p-R’，其中R’是可选被取代的具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的3-8-元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环。

43.权利要求42的化合物，其中R⁴是V_p-R’，其中R’独立地是可选被取代的具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6-元完全不饱和的单环。

44.权利要求43的化合物，其中R⁴是V_p-R’，其中R’是可选被取代的具有0-3个氮杂原子的6-元完全不饱和的单环。

45.权利要求44的化合物，其中该6-元完全不饱和的单环具有0-1个氮杂原子。

46.权利要求42的化合物，其中R⁴是V_p-R’，其中R’是可选被取代的具有0-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的3-8-元饱和单环。

47.权利要求46的化合物，其中R⁴是V_p-R’，其中R’是可选被取代的具有0-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的6-元饱和单环。

48.权利要求27-47任意一项的化合物，其中p是1。

49.权利要求48的化合物，其中V是-NR-、-S-或-O-。

50.权利要求27-47任意一项的化合物，其中p是0。

51.权利要求27、29-50任意一项的化合物，其中R³是V_p-R’，其中p是0，R’是氢。

52.权利要求27-51任意一项的化合物，其中R⁵是卤素或V_p-R’，其中p是0，R’是氢或C_1-6脂族基。

53.权利要求52的化合物，其中R⁵是卤素或V_p-R’，其中p是0且R’是氢或C_1-3烷基。

54.权利要求1的化合物，选自：

55.组合物，包含权利要求1-54任意一项的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体或稀释剂。

56.权利要求55的组合物，进一步包含另外的治疗剂，选自治疗自身免疫、炎性、增殖或过度增殖疾病或者免疫学-介导的疾病、包括移植器官或组织排斥和获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的药物。

57.在(a)患者或(b)生物样品中抑制Tec家族(例如Tec、Btk、Itk/Emt/Tsk、Bmx、Txk/Rlk)激酶活性的方法，该方法包括对所述患者给予或者使所述生物样品接触根据权利要求1-54任意一项的化合物。

58.治疗疾病或病症或者减轻其严重性的方法，所述疾病或病症选自自身免疫、炎性、增殖或过度增殖疾病或者免疫学-介导的疾病，该方法包括对需要的患者给予包含根据权利要求1-54任意一项的化合物的组合物。

59.权利要求58的方法，包括对所述患者给予另外治疗剂的附加步骤，所述另外的治疗剂选自治疗自身免疫、炎性、增殖或过度增殖疾病或者免疫学-介导的疾病、包括移植器官或组织排斥和获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的药物，其中：

所述另外的治疗剂就所治疗的疾病而言是适当的；

所述另外的治疗剂与所述组合物一起以单一剂型给药或者作为多剂型的一部分与所述组合物分开给药。

60.权利要求58或权利要求59的方法，其中该疾病或疾患是哮喘、急性鼻炎、变应性、萎缩性鼻炎、慢性鼻炎、膜性鼻炎、季节性鼻炎、肉样瘤病、农民肺、纤维样肺、自发性间质性肺炎、类风湿性关节炎、血清反应阴性脊椎关节病(包括关节强硬性脊椎炎、牛皮癣性关节炎和莱特尔氏病)、贝切特氏病、斯耶格伦氏综合征、系统性硬化、牛皮癣、系统性硬化、特应性皮炎、接触性皮炎与其他湿疹性皮炎、皮脂溢性皮炎、扁平苔癣、天疱疮、大疱性天疱疮、大疱性表皮松解、荨麻疹、皮血管炎、结节性脉管炎、红皮病、皮肤嗜曙红细胞增多、眼色素层炎、脱发、簇性春季结膜炎、腹腔疾病、直肠炎、嗜曙红细胞性胃肠炎、肥大细胞病、胰腺炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、食物相关性变态反应、多发性硬化、动脉粥样硬化、获得性免疫缺陷综合征(AIDS)、红斑狼疮、系统性狼疮、红斑、桥本氏甲状腺炎、重症肌无力、I型糖尿病、肾病综合征、嗜曙红细胞增多性筋膜炎、IgE过高综合征、结节性麻风、赛塞利综合征与自发性血小板减少性紫癜、血管成形术后再狭窄、肿瘤、动脉粥样硬化、系统性红斑狼疮、同种移植物排斥，非限制性地包括急性与慢性同种移植物排斥，例如在肾、心、肝、肺、骨髓、皮肤和角膜的移植术之后；和慢性移植物抗宿主疾病。