HK1118270A - 制备磺酰胺衍生物的方法 - Google Patents

Description

制备磺酰胺衍生物的方法

技术领域

本发明涉及式(I)化合物的制备方法

其中Q¹如下文所定义；或者，若合适，其药学上可接受盐和/或其异构体、互变异构体、溶剂化物或同位素变异体，以及用于该方法中的中间体，或者，若合适，其盐和/或其异构体、互变异构体、溶剂化物或同位素变异体。

背景技术

式(I)化合物为β₂受体的激动剂，尤其当通过吸入方式给药时，其显示出优异效力，因而特别适用于治疗经β₂介导的疾病和/或病症。

发明内容

本发明涉及式(I)化合物的制备方法，

其中Q¹为选自以下的基团：

及基团^*-NR⁶-Q²-A，其中符号^*代表与羰基的连接点，p为1或2，Q²为任选被一个羟基取代的C₁至C₄亚烷基，R⁶为H或C₁至C₄烷基，并且A为任选被OH取代的吡啶基、任选被OH取代的C₃至C₇环烷基，或以下基团

其中R¹、R²、R³、R⁴及R⁵相同或不同，且选自H、C₁至C₄烷基、OR⁷、SR⁷、卤素、CN、CF₃、OCF₃、COOR⁷、SO₂NR⁷R⁸、CONR⁷R⁸、NR⁷R⁸、NHCOR⁷及苯基，其任选被1至3个选自OR⁷、卤素及C₁至C₄烷基的基团取代，其中R⁷及R⁸相同或不同，且选自H或C₁至C₄烷基；

或者，若合适，其药学上可接受的盐和/或其异构体、互变异构体、溶剂化物或同位素变异体。

本发明涉及式(I)化合物的制备方法

其中Q¹如上文所定义，其包括使用下式化合物

优选地，上述方法包括使该式(7)化合物与式(5)化合物，

或式(6)化合物反应的步骤

其中PG²为合适的酚保护基，PG³为合适的羟基保护基，LG为合适的离去基团，且R⁹为H或SO₂CH₃。

优选地，该方法包括脱保护的步骤以获得式(I)的化合物。

优选地，该方法包括分离式(I)化合物的步骤。

在优选的实施方案中，该方法包括使式(7)化合物与式(5)化合物反应

其中R⁹为H，以获得式(3)化合物的步骤

优选地，然后使式(3)化合物脱除保护基团以获得式(I)的化合物。

优选地，进行两个脱保护步骤以除去PG²及PG³，并获得式(I)的化合物。

优选地，进行第一脱保护步骤以除去PG³而获得式(2)化合物

或其盐。

优选地所述式(3)化合物未经分离，且直接进行第一脱保护步骤。

优选地制备式(2)化合物的盐并将其用于下一步骤。优选的式(2)化合物的盐为二苯甲酰基-(L)-酒石酸盐。

优选地进行第二脱保护步骤以除去PG²并获得式(I)的化合物。

在另一个优选的实施方案中，使所述式(7)化合物与式(5)化合物反应

其中R⁹为SO₂CH₃，以获得式(3a)化合物

优选地，然后使所述式(3a)化合物脱除保护基团以获得式(I)的化合物。

优选地，进行3个脱保护步骤以除去SO₂CH₃基团、PG²及PG³。优选地，进行第一脱保护步骤以除去PG³并获得式(4)化合物

优选地，进行第二脱保护步骤以除去SO₂CH₃基团并获得式(2)化合物

或其盐。

优选地进行第三脱保护步骤以除去PG²并获得式(I)的化合物。在另一个优选的实施方案中，使式(7)化合物与式(6)化合物反应

其中PG²为合适的酚保护基，以获得式(4)化合物

优选地，然后使所述式(4)化合物脱除保护基团以获得式(I)的化合物。

优选地，进行两个脱保护步骤以除去SO₂CH₃及PG²并获得式(I)的化合物。

优选地，进行第一脱保护步骤以除去SO₂CH₃基团并获得式(2)化合物

或其盐。

优选地，进行第二脱保护步骤以除去PG²并获得式(I)的化合物。

优选地，LG为溴化物。

优选地，PG³为TBDMS。

优选地，PG²为苄基。

在优选的实施方案中，通过如下方法制备式(7)化合物：使式(10)化合物

其中PG¹为合适的氨基保护基，与Q¹-H或其盐(其中Q¹如上文所定义)反应，以获得式(8)化合物

优选地，进行脱保护步骤以除去PG¹并获得所述式(7)化合物。

优选地，通过水解式(11)的化合物来制备所述式(10)化合物

优选地，通过保护式(12)化合物来制备所述式(11)化合物

优选地，PG¹为Boc、三氯乙酰基或氯乙酰基。

在另一个优选的实施方案中，通过使式(19)化合物与烷基腈或芳基腈(优选地为三氯乙腈或氯乙腈)反应，制备所述式(8)化合物，

优选地，通过使式(15)化合物与Q¹-H或其盐(其中Q¹如上文所定义)反应而制得所述式(19)化合物

式(16)化合物(其为式(12)化合物的前体)，可以在酶存在下，通过水解作用而制得。

在优选的实施方案中，式(16)化合物

是在选自脂酶、酯酶或蛋白酶的酶存在下，通过水解式(18)化合物

而制得的。

优选地，该酶选自米赫毛霉(Mucor Miehei)酯酶、根毛霉(Rhizomucor Miehei)脂肪酶、疏棉状嗜热丝孢菌(ThermomucesLanguinosus)脂肪酶、青霉素(Penicillin)酰基转移酶。

更优选地，该酶是疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶。

优选地，所述式(18)化合物的水解作用在介于5与9之间的pH及介于10℃与40℃之间的温度下，于合适缓冲剂存在下及任选于合适碱存在下，在水中进行。

本发明亦涉及用于本发明所述方法中的中间体。

在优选的实施方案中，本发明涉及以下中间体：

其中Q¹如上文所定义，R¹⁰为H或PG²，其中PG²为合适的酚保护基，R⁹为H或PG³，其中PG³为合适的羟基保护基，并且R¹¹为H、PG¹，其中PG¹为合适的氨基保护基。

优选的中间体为：

2-(3-{2-[((2R)-2-{4-苄氧基-3-[(二甲基磺酰基)氨基]苯基}-2-{[叔-丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)氨基]-2-甲基丙基}苯基)-N-[(4′-羟基联苯-3-基)甲基]-乙酰胺；

2-(3-{2-[((2R)-2-{4-苄氧基-3-[(二甲基磺酰基)氨基]苯基}-2-羟乙基)氨基]-2-甲基丙基}苯基)-N-[(4′-羟基联苯-3-基)甲基]-乙酰胺；

叔-丁基-[2-(3-{[(4′-羟基联苯-3-基甲基)-氨甲酰基]-甲基}-苯基)-1，1-(二甲基)乙基]氨基甲酸酯；

2，2，2-三氯-N-[2-(3-{[4′-羟基联苯-3-基甲基)氨甲酰基]-甲基}-苯基)-1，1-二甲基乙基]乙酰胺；

2-氯-N-{2-[3-(2-{[(4′-羟基联苯-3-基)甲基]氨基}-2-氧代乙基)苯基]-1，1-二甲基乙基}乙酰胺；

2-[3-(2-氨基-2-甲基丙基)-苯基]-N-[(4′-羟基联苯-3-基)甲基]乙酰胺及

N-[(R)-2-苄氧基-5-环氧乙烷基-苯基]-二甲烷磺酰胺。

在上述通式(I)中，C₁至C₄烷基表示含有1、2、3或4个碳原子的直链或支链基团。若其具有取代基或以其它基团的取代基出现，例如在O-(C₁至C₄)烷基、S-(C₁至C₄)烷基等中…出现时，该定义亦适用。合适的(C₁至C₄)烷基的实例为甲基、乙基、正-丙基、异-丙基、正-丁基、异-丁基、仲-丁基、叔-丁基…。合适的(C₁至C₄)烷氧基的实例为甲氧基、乙氧基、正-丙氧基、异-丙氧基、正-丁氧基、异-丁氧基、仲-丁氧基及叔-丁氧基…。

卤素代表选自由氟、氯、溴及碘所组成的组的卤素原子，特别为氟或氯。

术语C₃至C₇环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基及环庚基。

合适的羟基保护基包括叔-丁基(二甲基)甲硅烷基(TBDMS)、三乙基甲硅烷基、叔-丁基(二苯基)甲硅烷基、三(异丙基)甲硅烷基、四氢吡喃基、甲氧甲基、苄氧甲基、1-乙氧乙基及苄基。优选的羟基保护基为叔-丁基(二甲基)甲硅烷基或三乙基甲硅烷基。

合适的酚保护基包括苄基、甲基、甲氧甲基、苄氧甲基、TBDMS、4-甲氧苄基及4-氯苄基。优选的酚保护基为苄基。

合适的氨基保护基包括叔-丁氧羰基(Boc)、氯乙酰基、三氯乙酰基、乙酰基、三氟乙酰基、苄氧羰基、甲酰基、苯基酰基、烯丙氧羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧羰基或2，2，2-三氯乙氧羰基。优选的氨基保护基为Boc、氯乙酰基或三氯乙酰基。

合适的离去基团包括溴化物、4-溴苯磺酰基、氯化物、碘化物、甲烷磺酰基、4-硝基苯磺酰基、对-甲苯磺酰基及三氟甲烷磺酰基。优选的离去基团为溴化物、氯化物或对-甲苯磺酰基。

在式(I)化合物中及在用于其制备的中间体中，Q¹优选地为

优选地，R¹、R²、R³、R⁴及R⁵相同或不同，且选自H、C₁至C₄烷基、OR⁶、SR⁶、卤素(优选地为氯)、CF₃、OCF₃、SO₂NR⁷R⁸、CONR⁷R⁸、NR⁷R⁸、NHCOR⁷，条件为R¹至R⁵中至少2个为H；

其中R⁷及R⁸相同或不同，且选自H或C₁至C₄烷基。

优选地，R¹、R²、R³、R⁴及R5相同或不同，且选自H、OH、CH₃、OCH₂-CH₃、SCH₃、卤素(优选地为氯)、CF₃、OCF₃，条件为R¹至R⁵中至少两个为H。

优选地，R¹、R²、R³、R⁴及R⁵相同或不同，且选自H或卤素(优选地为氯)，条件为R¹至R⁵中至少两个为H。

优选地，R²及R³为氯，并且R¹、R⁴及R⁵为H。

优选地，R¹至R⁵中的一个为OH。

优选地，R¹、R²、R³、R⁴及R⁵中的一个为被OH取代的苯基，并且其它的为H。

优选地，R²为4-羟基-苯基，且R¹、R³、R⁴及R⁵为H。

优选地，本发明方法用于制备以下化合物：

N-[(4′-羟基联苯-4-基)甲基]-2-(3-{2-[((2R)-2-羟基-2-{4-羟基-3-[(甲基磺酰基)氨基]苯基}乙基)氨基]-2-甲基丙基}苯基)乙酰胺；

N-(4-氯-2-羟苄基)-2-(3-{2-[((2R)-2-羟基-2-{4-羟基-3-[(甲基磺酰基)氨基]苯基}乙基)氨基]-2-甲基丙基}苯基)乙酰胺；

N-[(4′-羟基联苯-3-基)甲基]-2-(3-{2-[((2R)-2-羟基-2-{4-羟基-3-[(甲基磺酰基)氨基]苯基}乙基)氨基]-2-甲基丙基}苯基)乙酰胺；

N-(3，4-二氯苄基)-2-(3-{2-[((2R)-2-羟基-2-{4-羟基-3-[(甲基磺酰基)氨基]苯基}乙基)氨基]-2-甲基丙基}苯基)乙酰胺；

2-(3-{2-[((2R)-2-羟基-2-{4-羟基-3-[(甲基磺酰基)氨基]苯基}乙基)氨基]-2-甲基丙基}苯基)-N-[(6-羟基-2-萘基)甲基]乙酰胺；

2-(3-{2-[((2R)-2-羟基-2-{4-羟基-3-[(甲基磺酰基)氨基]苯基}乙基)氨基]-2-甲基丙基}苯基)-N-[(2-羟基-1-萘基)甲基]乙酰胺，及

2-(3-{2-[((2R)-2-羟基-2-{4-羟基-3-[(甲基磺酰基)氨基]苯基}乙基)氨基]-2-甲基丙基}苯基)-N-[3-羟基-5-(三氟甲基)苄基]乙酰胺。

在优选的实施方案中，本发明涉及式(I)化合物(其中被羟基取代的碳原子呈R构型)的制备方法：

其中Q¹如上文所定义，及用于其制备的中间体。

在优选的实施方案中，本发明涉及式(Ia)化合物的制备方法：

其中R¹至R⁵如上文所定义，及用于其制备的中间体。

通过以下方案举例说明本发明的方法：

方案1

Q¹如上文所定义。

PG¹为合适的氨基保护基。优选地，PG¹为Boc、氯乙酰基或三氯乙酰基。

PG²为合适的酚保护基。优选地，PG²为苄基。

PG³为合适的羟基保护基。优选地，PG³为TBDMS。

LG为合适的离去基团。优选地，LG为溴化物。

优选地，在上述方案中，被羟基或OPG³基团取代的碳原子呈R构型。

Q¹-H选自

及HNR⁶-Q²-A，其中p、Q²、A、R¹至R⁵及R⁶如上文所定义。

步骤(1a)中，在胺，诸如4-二甲氨基吡啶或三乙胺存在下，在合适的溶剂，诸如四氢呋喃(THF)中，使式(12)的胺与保护剂，例如二碳酸二-叔-丁酯或氯甲酸苄酯反应。其它合适的保护剂描述在教科书“Protetive Groups in Organic Synthesis”(T.W.Greene及P.G.M.Wuts)中。典型的条件包括于10至50℃下在合适的溶剂，例如四氢呋喃中，使1.0当量的化合物(12)、1至3当量的二碳酸二-叔-丁酯及0.05至2当量的4-二甲氨基吡啶反应12至48小时。

步骤(1b)中，使用如教科书“Protective Groups in OrganicSynthesis”(T.W.Greene及P.G.M.Wuts)中所述的标准方法，将式(11)的酯水解成式(10)的羧酸。典型的条件包括于10至50℃下在合适的溶剂，例如水与四氢呋喃或乙醇的混合物中，使1.0当量的化合物(11)及2至5当量的氢氧化钠反应12至48小时。

步骤(1c)中，在合适的碱，例如三乙胺或二异丙基乙胺，及合适的偶联剂，例如1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、二环己基碳二亚胺、羰基二咪唑、新戊酰氯或氯甲酸异丁酯存在下，任选在合适的添加剂，例如1-羟基苯并三唑或N-羟基琥珀酰亚胺存在下，在合适的溶剂(例如二甲基甲酰胺、丙腈、乙腈或吡啶)中，使式(10)的羧酸与式H-Q¹的伯胺或仲胺(或其盐)反应。典型的条件包括于10至40℃下在合适的溶剂，例如丙腈、二甲基甲酰胺或乙腈中，使1.0当量的化合物(10)、1.0至1.5当量的式H-Q¹化合物、1至5当量的碱及1.05至2当量的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐反应1至24小时。

步骤(1d)中，可使用如“Protective Groups in OrganicSynthesis”(T.W.Greene及P.G.M.Wuts)中所述的标准方法以除去PG¹。当PG¹为叔-丁氧羰基时，典型的条件包括于10至50℃下在合适的溶剂，例如二氯甲烷或乙醇及1，4-二烷的混合物中，使1.0当量的化合物(8)与1至10当量的盐酸或三氟乙酸反应12至100小时。

步骤(1e)中，在50℃与150℃之间的温度下，任选在碱，例如碳酸氢钠、三乙醇胺、磷酸氢二钾或二异丙基乙胺存在下，在合适的溶剂，例如丙腈、丁腈、1-甲基-2-吡咯烷酮、乙酸正-丙酯、乙酸正-丁酯或4-甲基-2-戊酮中，使式(7)的胺与式(5a)的活化化合物反应12至48小时。典型的条件包括于110至120℃下在乙腈或乙酸正-丁酯中，使1.0当量的化合物(7)、0.5至2.0当量的化合物(5a)及2至5当量的碳酸氢钠反应24至48小时。

步骤(1f)中，可以使用如“Protective Groups in OrganicSynthesis”(T.W.Greene及P.G.M.Wuts)中所述的标准方法以除去PG³。当PG³为叔-丁基二甲基甲硅烷基时，于合适的溶剂，例如四氢呋喃、乙醇、甲醇或丙腈存在下，可以使用脱保护剂，例如氟化四丁铵、HF或三乙胺三氢氟化物。典型的条件包括于25至40℃下在合适的溶剂，例如甲醇、四氢呋喃、丁腈与甲醇的混合物或乙酸正-丁酯、乙酸乙酯及甲醇的混合物中，使1.0当量的化合物(3)，及1-5当量的三乙胺三氢氟化物反应1至24小时。

步骤(1g)中，在80℃与150℃的温度下在合适的溶剂，例如丙腈、丁腈或正-丁醇中，使式(7)的胺与式(6)的环氧化物反应12至60小时。典型的条件包括于100至130℃下在合适的溶剂(例如丁腈或正-丁醇)中，使1.0当量的化合物(7)与0.5至2当量的化合物(6)反应12至48小时。

步骤(1h)中，在10至50℃下，于合适的溶剂，例如四氢呋喃或水与水可混溶的醇(例如乙醇或甲醇)的混合物存在下，使式(4)化合物与合适脱保护剂，例如氢氧化钠、氢氧化钾、氟化四丁铵或碳酸钾反应3至100小时。典型的条件包括于25至40℃下在乙醇及水的混合物中，使1.0当量的化合物(4)与4至10当量的氢氧化钠反应12至100小时。

步骤(1i)中，可使用如“Protective Groups in OrganicSynthesis”(T.W.Greene及P.Wutz)中所述的标准方法以除去PG²。当PG²为苄基时，典型的条件包括于25至60℃在40至80 psi氢气下，于合适催化剂(例如20％Pd(OH)₂/C或5％Pd/C)存在下，在合适的溶剂，例如乙醇、含水乙醇、四氢呋喃、含水四氢呋喃、乙二醇、丙二醇或二甲基甲酰胺中，使1.0当量的化合物(2)反应2至54小时。

或者，如以下方案所阐明的，可以在脱保护步骤(1f)前进行脱保护步骤(1i)。

在本实施方案中，可使用如“Protective Groups in OrganicSynthesis”(T.W.Greene及P.Wutz)中所述的标准方法以除去PG²及PG³二者。当PG²为苄基时，步骤(1i)的典型条件包括于25至60℃在40至80psi氢气下，于合适的催化剂(例如20％Pd(OH)₂/C或5％Pd/C)存在下，在合适的溶剂，例如乙醇、四氢呋喃、乙酸乙酯或乙酸乙酯及乙酸正-丁酯的混合物中，使1.0当量的化合物(3)反应2至48小时。当PG³为叔-丁基二甲基甲硅烷基时，步骤(1f)的典型条件包括于10至40℃下在合适的溶剂，例如含水甲醇、含水乙醇或含水乙腈中，使1.0当量的化合物(3a)及1.0至10.0当量的氟化铵反应1至48小时。

优选地，在上述化合物中，被羟基或OPG³基取代的碳原子呈R构型。

或者，可以在脱保护步骤(1h)前进行脱保护步骤(1i)。

或者，可以通过以下步骤，使用式(5b)化合物而取代步骤(1e)。

步骤(1j)及(1k)的条件分别与关于上述步骤(1e)及(1h)所公开的条件相同。优选地，在上述化合物中，被羟基或OPG³基团取代的碳原子呈R构型。

步骤(1j)中，在50℃与150℃之间的温度下，任选在碱，例如碳酸氢钠、三乙醇胺、磷酸氢二钾或二异丙基乙胺存在下，于合适的溶剂，例如丙腈、丁腈、1-甲基-2-吡咯烷酮、乙酸正-丙酯、乙酸正-丁酯或4-甲基-2-戊醇存在下，使式(7)的胺与式(5b)的活化化合物反应12至48小时。典型的条件包括于110至120℃下在丁腈中，使1.0当量的化合物(7)、0.5至2.0当量的化合物(5b)及2至5当量的碳酸氢钠反应24至48小时。

步骤(1k)中，在10至50℃下，于合适的溶剂，例如四氢呋喃或水与水可混溶的醇(例如乙醇或甲醇)的混合物存在下，以合适的脱保护剂，例如氢氧化钠、氢氧化钾、氟化四丁铵或碳酸钾处理式(3a)化合物3至100小时。典型的条件包括于25至40℃下在乙醇及水的混合物中，使1.0当量的化合物(3a)与4至10当量的氢氧化钠反应12至100小时。

或者，用于使式(3a)化合物转化成式(I)化合物的脱保护步骤的顺序可以改变，这样可以以任何顺序除去PG²、PG³及甲烷磺酰胺中的任一种。

式(5)化合物，其中PG²为苄基，PG³为TBDMS且LG为溴化物，可以如以下方案中所公开的进行制得：

化合物(5a)的制备的细节公开在实施例中。

优选地，在上述化合物中，被羟基或OTBDMS基团取代的碳原子呈R构型。

式(5a)及(6)化合物可通过根据方案2的方法而制得：

方案2

PG²、PG³及LG如上文所定义。

优选地，在上述化合物中，被羟基或OPG³基团取作的碳原子呈R构型。

式(6)化合物的R异构体也是优选的：

步骤(2a)中，在-80℃与80℃之间的温度下，于合适的碱，例如二异丙基乙胺、三乙胺、氢化钠、二异丙基氨基化锂或正-丁基锂存在下，在合适的溶剂，例如乙腈、丙腈、四氢呋喃、二氯甲烷、1，4-二烷或二甲基甲酰胺中，以甲磺酰氯处理式(5a)化合物1至24小时。典型的条件包括于5至25℃下在合适的溶剂，例如乙腈中，使1.0当量的化合物(5a)、2至5当量的二异丙基乙胺及1至5当量的甲磺酰氯反应1至5小时。

步骤(2b)中，可以使用如“Protective Groups in OrganicSynthesis”(T.W.Greene及P.G.M.Wuts)中所述的标准方法以除去PG³。当PG³为叔-丁基二甲基甲硅烷基时，于合适的溶剂，例如四氢呋喃、甲醇、乙醇或丙腈存在下，可使用脱保护剂，例如氟化四丁胺、HF或三乙胺三氢氟化物。典型的条件包括于25至40℃下在合适的溶剂，例如甲醇或四氢呋喃中，使1.0当量的化合物(5b)及1至5当量的三乙胺三氟化氢反应12至48小时。

步骤(2c)中，在10至40℃下在合适的溶剂，例如四氢呋喃、甲醇、乙醇、二氯甲烷、水存在下，使式(13)化合物与合适的碱(例如碳酸钾、三乙胺、氢化钠、碳酸钠、二异丙基乙胺)反应2至24小时。典型的条件包括于20至25℃下在合适的溶剂，例如甲醇与四氢呋喃的混合物中，使1.0当量的化合物(13)与1至5当量的碳酸钾反应12至18小时。

式H-Q¹化合物市面上有售或可通过本领域技术人员熟知的常规方法(例如还原、氧化、烷基化、过渡金属介导的偶联、保护、脱保护等...)自市售物质制得。这类制备的实例公开在WO 2004/032921、WO2004/108676、WO 2004/108675及WO 2004/100950中。

可根据以下方案3的方法制备式(12)化合物。

方案3

式(12)化合物的制备细节公开在实施例中。

或者，步骤(3a)可被以下步骤替代：

方案4

步骤(4a)中，式(18)的二酯是根据本领域技术人员熟知的由酸制备酯的任何方法(不修饰该分子的其余部分)，通过式(17)二元酸的酯化而制得。典型的条件包括于10℃与100℃之间的温度下，在酸催化剂，例如氯化氢或硫酸存在下，使1.0当量的式(17)二元酸与醇溶剂(优选地为乙醇)反应6至24小时。

步骤(4b)中，在本领域中已知的合适酶，例如脂肪酶、酯酶或蛋白酶，优选地为脂肪酶存在下，将式(18)的二酯水解成式(16)的单酯。优选的酶为米赫毛霉酯酶、根毛霉脂肪酶、疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶、青霉素酰基转移酶。更优选地，该反应于pH介于5与9之间及温度介于10℃与40℃之间在合适缓冲剂，例如乙酸钙、磷酸氢二钾或三乙醇胺存在下，及任选在合适的碱，例如氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化锂存在下，在水中用Lipolase^(疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶，(EC No.3.1.1.3))进行。典型的条件包括于20℃与40℃之间的温度下在乙酸钙缓冲剂溶液中，并通过添加碱，例如氢氧化钠或氢氧化钾，使pH维持在5.5与6.8之间，使1.0当量的式(18)二酯与5至200毫升Lipolase^(液体制剂)进反应12至24小时。

或者，可用如方案5中所阐明的以下步骤替代步骤(3d)：

方案5

步骤(5a)中，式(14a)酯是根据本领域技术人员熟知的自酸制备酯的任何方法(不修饰该分子的其余部分)，通过式(14)酸的酯化而制得的。典型的条件包括于20℃与100℃之间的温度下在酸催化剂，例如氯化氢或硫酸存在下，使1.0当量的式(14)酸与醇溶剂(优选地为乙醇)反应1至12小时。

步骤(5b)中，使用如“Protective Groups in OrganicSynthesis”(T.W.Greene及P.G.M.Wuts)中所述的标准方法，使式(14a)酰胺脱除保护基团。典型的条件包括于50℃与120℃之间的温度下在合适的溶剂，例如乙醇及乙酸的混合物中，使1.0当量的式(14a)氯乙酰胺与1至3当量的硫脲反应12至24小时。

或者，可根据以下方案6制得式(7)化合物：

方案6

在方案6中，PG¹优选地为三氯乙酰基或氯乙酰基。更优选地，PG¹为三氯乙酰基。

步骤(6a)中，以烷基或芳基腈及酸催化剂处理式(15)的叔醇以得到式(10)的酰胺。优选地，使式(15)叔醇于酸，例如硫酸、乙酸、三氟乙酸存在下，与三氯乙腈或氯乙腈反应，以得到式(20)经保护的酰胺。典型的条件包括于0℃与25℃之间的温度下，每克式(15)醇添加1至3毫升的浓(98％)硫酸至1.0当量的式(15)醇及1至2当量的三氯乙腈在合适的溶剂(例如乙酸)中的溶液中1至8小时。

步骤(6b)中，在合适的碱，例如三乙胺或二异丙基乙胺，及合适的偶联剂，例如1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、二环己基碳二亚胺、羰基二咪唑、新戊酰氯或氯甲酸异丁酯存在下，任选在合适的添加剂，例如1-羟基苯并三唑或N-羟基琥珀酰亚胺存在下，在合适的溶剂，例如乙酸乙酯、二甲基甲酰胺、丙腈、乙腈或吡啶中，使式(10)羧酸与式H-Q¹的伯胺或仲胺或其盐反应。典型的条件包括于20至60℃下在合适的溶剂，例如乙酸乙酯、丙腈、二甲基甲酰胺中，使1.0当量的式(10)化合物、0.8至1.2当量的式H-Q¹化合物、1至5当量的碱、1至2当量的1-羟基苯并三唑及1.05至2当量的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐反应12至36小时。

步骤(6c)中，使用如“Protective Groups in OrganicSynthesis”(T.W.Greene及P.G.M.Wuts)中所述的标准方法或为本领域技术人员熟知的其它方法以除去PG¹。当PG¹为三氯乙酰基时，典型的条件包括于30℃与80℃之间的温度下在合适的溶剂，例如水、乙醇或甲醇或优选地为水与乙醇的混合物中，使1.0当量的化合物(8)与2至10当量的合适的碱(例如氢氧化钾或氢氧化钠)反应16至36小时。

或者，可根据以下方案7制得式(7)化合物：

方案7

方案7中，PG¹优选地为三氯乙酰基或氯乙酰基。更优选地，PG¹为氯乙酰基。

步骤(7a)中，在合适的碱，例如三乙胺或二异丙基乙胺及合适的偶联剂，例如1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、二环己基碳二亚胺、羰基二咪唑、新戊酰氯或氯甲酸异丁酯存在下，任选在合适的添加剂，例如1-羟基苯并三唑或N-羟基琥珀酰胺存在下，在合适的溶剂，例如二氯甲烷、乙酸乙酯、二甲基甲酰胺、丙腈、乙腈或吡啶中，使式(15)羧酸与式H-Q¹的伯胺或仲胺或其盐反应。典型的条件包括于20至60℃下在合适的溶剂，例如二氯甲烷、乙酸乙酯、丙腈、二甲基甲酰胺中，使1.0当量的式(15)化合物、0.8至1.2当量的式H-Q¹化合物、1至5当量的碱、0.4至2当量的1-羟基苯并三唑及1至2当量的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐反应1至24小时。

步骤(7b)中，以烷基或芳基腈及酸催化剂处理式(19)叔醇，以得到式(8)酰胺。优选地，使式(19)叔醇在酸，例如硫酸、乙酸、三氟乙酸存在下与三氯乙腈或氯乙腈反应，以得到式(8)经保护的酰胺。典型的条件包括于0℃与75℃之间的温度下每克式(19)醇添加2至5毫升的三氟乙酸至1.0当量的式(19)醇及每克式(19)醇2至5毫升氯乙腈的溶液中1至8小时。可以在进行步骤(7c)前分离式(8)化合物。

步骤(7c)中，  使用如“Protective  Groups in OrganicSynthesis”(T.W.Greene及P.G.M.Wuts)中所述的标准方法或本领域技术人员熟知的其它方法以除去PG¹。当PG¹为氯乙酰基时，典型的条件包括于50℃与120℃之间的温度下在合适的溶剂，例如乙酸、异丙醇、乙酸乙酯、乙酸异丙酯，优选地为乙酸中，使1.0当量的化合物(8)及2至8当量的硫脲反应1至36小时。

具体实施方式

通过以下实施例举例说明本发明的方法。

实施例1：N-(4′-羟基-联苯-3-基甲基)-2-(3-{2-[2-羟基-2-(4-羟基-3- 甲基-苯基)-乙氨基]-2-甲基-丙基}-苯基)-乙酰胺的制备

制备例1：2，2′-(1，3-亚苯基)二乙酸二乙酯

将浓硫酸(1.82升)加入2，2′-(1，3-亚苯基)二乙酸(45.55千克；234.6摩尔)在乙醇(455.5升)中的悬浮液中。将所形成的薄悬浮液加热至回流20小时。将该反应冷却至室温，并于常压下除去乙醇，然后用甲苯(136.5升)替代。以5％碳酸氢钠水溶液(1×91升)洗涤该甲苯溶液，然后浓缩至约1毫升/克的甲苯溶液，并进行下一步骤。分析于真空下经浓缩至干燥的等分试样，显示～100％收率。

¹H NMR(CD₃OD，400MHz)δ：1.21(t，6H)、3.59(s，4H)、4.10(q，4H)、7.15至7.27(m，4H)ppm。

MS(电喷雾)：m/z 251[M+H]⁺

制备例2：[3-(2-氧代-丙基)-苯基]-乙酸乙酯

添加Lipolase^(疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶溶液；9.4升)至乙酸钙在水(117.5升)中的0.2M溶液中，并于环境温度下搅拌该均质溶液30分钟。添加得自制备例1的产物(29.35千克，117.3摩尔)的甲苯溶液，并于环境温度下搅拌该反应。每15分钟检查pH值，并通过添加1M水性氢氧化钠溶液的等分试样而将pH维持在5.5与6.8之间。经48小时后完成该反应。使用1M盐酸水溶液将pH调整成3至4，并添加乙酸乙酯(117升)。使该双相混合物经由Gauthier滤器过滤以除去变性酶。然后分离该混合物，并以乙酸乙酯(2×117升)萃取水层。以饱和碳酸氢钠水溶液(3×149.69升)萃取合并的有机层。使用2M盐酸水溶液将合并的碳酸氢钠萃取物调节至pH 2，并以甲苯(2×147升)萃取所形成的溶液。然后将该甲苯萃取物浓缩成约1毫升/克的甲苯溶液以用于下一步骤。分析于真空下浓缩至干燥以得到该标题化合物的等分试样，显示收率为19.68千克；75.6％。

¹H NMR(CD₃OD，400MHz)δ：1.25(t，3H)、3.60(m，2H)、3.63(m，2H)、4.15(q，2H)、7.18至7.32(m，4H)ppm。

MS(电喷雾)：m/z 245[M+Na]⁺

用于制备制备例2的产物的可替代方法

将无水乙醇(85.41克；1.85摩尔)及37％盐酸水溶液(30毫升)加入2，2′-(1，3-亚苯基)二乙酸(300.0克；1.54摩尔)在THF(3.0升)中的悬浮液中，其可几乎完全溶解。将所形成的薄悬浮液加热至50℃，直到反应完成(通过HPLC监测)为止。一旦反应完成时，除去该溶剂，并用甲苯(1.5升)替代，然后在于真空下过滤前，将所形成的悬浮液激烈搅拌15分钟。以新的甲苯(300毫升)洗涤沉淀物，然后弃之(该沉淀物为起始的2，2′-(1，3-亚苯基)二乙酸)。以饱和碳酸氢钠水溶液(1.35升+2×300毫升)萃取该甲苯溶液。使用37％盐酸及2M盐酸的组合将合并的碳酸氢钠萃取物调整成pH 5至6，并以叔-丁基甲基醚(1.2升+2×600毫升)萃取所形成的的浅乳白色溶液。以软化水(600毫升)洗涤合并的叔-丁基甲基醚萃取物，在MgSO₄上干燥，并于真空下浓缩至干燥以得到如淡黄色油的标题化合物(134.1克)。

制备例3：[3-(2-羟基-2-甲基-丙基)-苯基]-乙酸

在氮气下，将制备例2的产物(3.59千克；经溶剂校正；16.15摩尔)的甲苯溶液溶解在无水四氢呋喃中，并冷却至0至5℃。添加溴化甲基镁(56.53升在四氢呋喃中的1M溶液，56.53摩尔)至该溶液内，其添加速率可以使该温度维持在15℃以下。一旦添加完成时，将该反应温热至环境温度并搅拌直到完成为止。然后将反应混合物冷却至介于0至5℃之间，并添加软化水(17.95升)，维持该温度在15℃以下。一旦添加完成时，通过添加5M盐酸而将pH调整至介于1与2.5之间。以乙酸异丙酯(2×17.95升)萃取该混合物，以水(3×17.95升)洗涤合并的有机萃取物，然后蒸馏该乙酸异丙酯，并用甲苯替代，直到达到约5毫升/克的甲苯浓度为止。将该甲苯溶液冷却至5℃，并粒化所形成的於浆2小时。通过过滤而分离该产物，以甲苯(3.59升)洗涤，得到灰白色固体形式的标题化合物(2.29千克，68％)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：1.22(6H，s)、2.75(2H，s)、3.63(2H，s)、7.12至7.30(4H，m)。

MS(ESI)：m/z 209[M+H]⁺

制备例4：{3-[2-(2-氯-乙酰氨基)-2-甲基-丙基]-苯基}-乙酸

将2-氯乙腈(1.63千克，21.62摩尔)添加至得自制备例3的醇(3.00千克，14.41摩尔)在二氯甲烷(15升)中的溶液中。以乙酸(2.6千克，43.23摩尔)处理所形成的溶液，并维持温度在5℃与10℃之间。以浓硫酸(2.83千克，28.82摩尔)处理所形成的溶液，并维持温度在5℃与10℃之间。将该混合物温热至20℃，经90分钟后，添加该反应混合物至冷水(30升)中，并维持温度在10℃以下。于5至10℃下搅拌该混合物30分钟，然后于20℃下搅拌30分钟。分离各层，并进一步以二氯甲烷(15升)萃取水层。于常压下将合并的二氯甲烷层蒸馏减少至8升体积。以正-庚烷(27升)及甲苯(3升)处理该浓缩物，并利用真空浓缩以除去残留的二氯甲烷。于20℃下粒化所形成的於浆2小时，并通过过滤而分离固体沉淀物，然后用正-庚烷(2×3升)洗涤以得到灰白色固体形式的标题化合物(3.76千克)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：1.36(s，6H)、3.02(s，2H)、3.62(s，2H)、3.95(s，2H)、6.19(m，1H)、7.06至7.31(m，4H)ppm。

MS(电喷雾)：m/z 282[M-H]^-

制备例5：[3-(2-氨基-2-甲基-丙基)-苯基]-乙酸乙酯

在氮气气氛下将得自制备例4的酰胺(151.4克，534毫摩尔)、硫脲(48.7克、640毫摩尔)及乙酸(303毫升)在乙醇(1.5升)中的混合物加热至回流5小时。使该反应混合物冷却至室温，并利用真空浓缩该悬浮液。使该残留物与甲苯(2×900毫升)共沸，然后经乙醇(1.5升)处理，并搅拌一小时。通过过滤除去固体沉淀物，并在冰浴中冷却该滤液，经98％硫酸(227毫升)处理，并于环境温度下搅拌一小时。利用真空浓缩该溶液以除去大部分乙醇，并使用碳酸氢钠水溶液调整至pH 9。通过过滤除去固体沉淀物，并先后用水(300毫升)及乙酸乙酯(1.0升)洗涤。分离该合并的双相滤液及洗液，并再以乙酸乙酯(1.0升+500毫升)萃取水层。使该合并的乙酸乙酯萃取物在硫酸镁上干燥，过滤并利用真空浓缩以得到褐色油状的标题化合物(89.5克)。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：0.99(s，6H)、1.16(t，3H)、2.59(s，2H)、3.61(s，2H)、4.06(q，2H)、7.06(m，3H)、7.21(m，1H)

制备例5a：[3-(2-氨基-2-甲基-丙基)-苯基]-乙酸乙酯，二-对-甲苯酰基-L-酒石酸盐

以二-对-甲苯酰基-L-酒石酸(3.65千克，9.45摩尔)在乙腈(18.6升)中的溶液处理得自制备例5的胺(假定为9.45摩尔)在乙腈(24.8升)中的溶液。于20℃下搅拌所形成的於浆15小时，并通过过滤分离固体沉淀物，用乙腈(2×6.2升)洗涤以得到白色固体形式的标题化合物(5.72千克)。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：1.13(s，6H)、1.17(t，3H)、2.34(s，6H)、2.78(s，2H)、3.63(s，2H)、4.06(q，2H)、5.61(s，2H)、7.02(d，2H)、7.15(d，1H)、7.25(m，5H)、7.80(d，4H)

制备例5：[3-(2-氨基-2-甲基-丙基)-苯基]-乙酸乙酯

添加碳酸钾(6.232千克，45.1摩尔)在水(35.04升)中的溶液至得自制备例5a的盐(7.008千克，11,272摩尔)在丙腈(35.04升)中的悬浮液中，并搅拌直到所有固体已溶解为止。然后分离各相，并以水(17.52升)洗涤丙腈相。于减压下将该溶液的体积减至约3.70千克以得到丙腈溶液形式的标题化合物。取出试样(20毫升)并浓缩至干燥以获得重量/重量检定；该收率显示为92％。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：0.99(s，6H)、1.16(t，3H)、2.59(s，2H)、3.61(s，2H)、4.06(q，2H)、7.06(m，3H)、7.21(m，1H)

制备制备例5产物的可替代程序

以硫脲(0.91千克，11.93摩尔)及乙酸(6.2升)处理得自制备例14的酰胺(3.10千克，9.945摩尔)在乙醇(34.1升)中的溶液，并于回流下加热4小时。将该混合物冷却并通过过滤而除去固体沉淀物，然后用乙醇(3.1升)洗涤。在真空中将合并的滤液及洗液浓缩至8升体积，并与甲苯(31.0升及24.8升)在真空中共沸至8升。以水(9.3升)及2M碳酸钠水溶液(7.5升)处理所形成的混合物，并用二氯甲烷(31.0升及15.5升)萃取。于常压下将合并的二氯甲烷萃取物浓缩至8升体积，经乙腈(12.4升)处理并在真空中浓缩至8升体积。以乙腈(24.8升)稀释该浓缩物，并将其直接用于制备例5a中。

制备例6：N-{2-(苄氧基)-5-[(1R)-2-溴-1-羟乙基]苯基}甲磺酰胺

添加吡啶(18.4毫升；227.2毫摩尔)至(1R)-1-[3-氨基-4-(苄氧基)苯基]-2-溴乙醇(Org.Process Research and Development，1998，2，96)(36.59克；113.6毫摩尔)在THF(160毫升)中的溶液中。然后添加甲磺酰氯(10.5毫升；136.3毫摩尔)，并于20至25℃下搅拌该反应混合物2小时。以1M盐酸(180毫升)猝灭该反应，然后用甲苯(180毫升)萃取。接着以水(2×90毫升)洗涤该甲苯溶液。然后于45℃在减压下将该甲苯溶液浓缩至110毫升，接着将该溶液冷却至室温(20至25℃)，并搅拌一小时，然后将该混合物冷却至10至15℃，并搅拌一小时。通过过滤收集沉淀物，经甲苯(2×10毫升)洗涤以得到粉红色固体形式的标题化合物(37.95克)。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：2.93(s，3H)、3.52至3.66(m，2H)、4.74(m，1H)、5.19(s，2H)、7.11(d，1H)、7.19至7.22(m，1H)、7.33至7.36(m，2H)、7.40至7.43(m，2H)、7.56(d，2H)、8.95(s，1H)ppm。

MS(电喷雾)：m/z 398/400[M-H]^-

制备制备例6产物的可替代程序

如the Journal of the American Oil Chemists’Society 1998，75，1473以及以下实施例中所述，可通过立体选择性酶促还原N-[2-苄氧基-5-(2-溴-乙酰基)-苯基]-甲磺酰胺(Journal of Medicinal Chemistry，1967，10，462及Journal of Medicinal Chemistry，1980，23，738)，制得制备例6的产物。

可由本领域的技术人员，通过在适于发生化学相互作用的条件下，使待转化的物质，及其它必要的反应物，与得自多种活生物的酶接触，来进行生物转化。其后，分离反应的产物，并纯化目的产物以了解它们的化学结构及物理与生物学性质。所述酶可以以纯化试剂形式存在、存在于粗萃取物或溶解产物中，或存在于完整的细胞中及可存在于溶液中、存在于悬浮液(例如完整细胞)中，可以与承载表面共价连接、或包埋在渗透性基质(例如琼脂糖或藻酸盐珠粒)中。该底物及其它必要的反应物(例如水、空气、辅因子)根据化学指示而供应。一般而言，该反应在一个或多个液相(水性相和/或有机相)存在下进行，以促进反应物及产物的物质转移。该反应可以在无菌或不在无菌的条件下进行。监测该反应的进展及该反应产物分离的条件可根据反应系统的物理性质及反应物与产物的化学而变化。

就全细胞生物催化而言，添加营养培养基(例如IOWA培养基：右旋糖、酵母萃取物、磷酸氢二钾、氯化钠、大豆粉、水；经调整至中性pH)至一种或多种培养容器(例如发酵管或瓶)内，其接着经蒸汽灭菌。在生长下自琼脂培养物、经洗涤细胞或孢子的悬浮液或得自该生物转化微生物的液体营养培养基培养物的肉汤无菌接种各容器。将该容器安装在为发酵而设计的振荡器上并于合适温度(例如20至40℃)下振动(例如以100至300rpm进行旋转操作)，其时间足够长以促使该微生物生长至合适的种群大小(例如1至3天)。将待转化的化合物(即底物)溶解在水或合适的水可混溶的溶剂(例如二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、乙醇、甲醇)中。将所形成的溶液以无菌方式添加至各该生物转化容器内，以得到该底物的所欲浓度。将给过料的容器安装在振荡器上并如前述振荡，直到该底物通过微生物新陈代谢作用而转化成产物为止(例如1至10天)。

可以在适于进行生物催化的温度(25至37℃)及持续时间下，使用或不使用有机溶剂，在合适的缓冲液(例如磷酸钾)中通过合适搅动，将分离的酶与任何所需的辅因子及该底物混合。可以在微量滴定板内立即筛检许多酶。将酶溶解在合适缓冲液内，并分布在微量滴定板的各孔内。可冷冻(-80℃)酶或立即使用。为进行筛选，将另外的缓冲液与该底物及酶功能所需的任何辅因子(例如NADPH)一起添加至各孔中。然后如前述混合(例如使用Eppendorf热混合机)该板。

该生化转化容器的内容物可经机械性处理(例如通过过滤或离心法)，以自该水性相中分离固体和/或于最适于萃取所期望化合物的pH下萃取(水不混溶的有机溶剂包括，但不限于二氯甲烷或乙酸乙酯)。可通过HPLC或其它合适的技术分析试样。

以下是进行生物转化以产生目的化合物的实验室规模筛选方法(其可由本领域的技术人员实施)的两个实施例。

用于合成制备例6的可替代方法1：将N-[2-苄氧基-5-(2-溴-乙酰基)-苯基]-甲磺酰胺立体选择性微生物还原为对应的(R)-醇

在具有不锈钢Morton罩子的16×125毫米玻璃管中的2.5毫升IOWA培养基(无水右旋糖，20克；酵母萃取物，5克；磷酸氢二钾，5克；氯化钠，5克；大豆粉，5克；蒸馏水，1升；使用1N盐酸调整至pH 7.0，于15psig及121℃下经蒸汽灭菌15分钟)中进行培育。使所述管用0.025毫升低温贮存(-80℃)的木兰假丝酵母(Candidamagnoliae)ATCC 56463菌丝体储备溶液无菌接种。将该接种的管以小角度安装在旋转振荡器(2英寸摆幅)上并于29℃下以210rpm振荡两天。将N-[2-苄氧基-5-(2-溴-乙酰基)-苯基]-甲磺酰胺(即底物)溶解在二甲基亚砜(10毫克/毫升)中。添加底物至各管中以得到0.1毫克/毫升至多1毫克/毫升的初始底物浓度。再于29℃下以210rpm振荡该给料的管6天。于6天生物转化期结束时，以4毫升乙酸乙酯萃取该生物转化管的内容物。在氮气下浓缩该有机相。在合适数量的甲醇中重构残留物以进行手性HPLC分析。于1毫克/毫升的底物浓度下，该反应产生(R)-醇的收率为33％，＞99％ee。

手性HPLC分析法：

仪器：具有996光电二极管陈列检测器的Waters 2695 HPLC系统。

柱：Chiralpak AD-H，4.6×150毫米。

流动相：于1毫升/分钟下的甲醇∶乙醇[1∶1]

检测：PDA最大曲线(maxplot)：210至400纳米。

该(R)-醇在2.95分钟时被洗脱出来；该底物在6.02分钟时被洗脱出来。

用于合成制备例6的可替代方法2：将N-[2-苄氧基-5-(2-溴-乙酰基)-苯基]-甲磺酰胺立体选择性酶促还原为对应的(R)-醇

将50毫克得自BioCatalytics(Pasadena，CA)的KRED-130溶解在1.5毫升缓冲液(50mM磷酸钾缓冲液，0.1M氯化钾、0.5mM二硫代苏糖醇，pH  6.0)内，并将0.030毫升分布在孔内以作为酮还原酶筛选板的一部分。将聚丙烯盖的该板于-80℃下冷冻，且在用于该实验前先使其中一个解冻。将0.42毫升缓冲液(上述)及0.1毫克底物(0.01毫升的10毫克/毫升DMSO储备溶液)与NADPH(0.040毫升的100毫克/毫升水储备溶液)一起添加至各筛选孔内。于30℃及750rpm下在Eppendorf热混合机R上培育该板24小时。以0.8毫升乙酸乙酯萃取各孔，然后经离心处理(Damon IEC离心机(CRU5000)，2200rpm，3分钟)。自各孔中将0.7毫升移入新微量滴定板内。在氮气下干燥该有机相，然后在甲醇内重构以进行HPLC分析(上述)。制得所期望的(R)-醇，其收率为57％，ee＞99％。

制备例7：N-[2-(苄氧基)-5-((1R)-2-溴-1-{[叔-丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)苯基]甲磺酰胺

将制备例6的溴化物溶液(10克；25.0毫摩尔)溶解在二氯甲烷(20毫升)中，然后先后添加咪唑(4.58克；37.5毫摩尔)及叔-丁基二甲基甲硅烷基氯(5.27克；35.0毫摩尔)。将该反应混合物加热至回流一小时，然后冷却至30℃。以乙酸异丙酯(80毫升)稀释该混合物，然后以2M盐酸(50毫升)猝灭该反应，并激烈搅拌10分钟。分离各相，并以水(50毫升)洗涤有机相。接着于减压在45℃下使该有机相的体积减至25至30毫升。然后将该溶液冷却至室温，并很快形成悬浮液，然后于室温度下搅拌该悬浮液30分钟。然后以10分钟添加庚烷(20毫升)，并将该悬浮液冷却至5至10℃，然后搅拌一小时。接着过滤该悬浮液，并在滤纸上经庚烷(2×10毫升)洗涤以得到白色固体形式的标题化合物(11.05克)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：-0.07(s，3H)、0.11(s，3H)、0.89(s，9H)、2.91(s，3H)、4.80至4.83(m，1H)、6.80(bs，1H)、6.98(d，1H)、7.12(d，1H)、7.36至7.44(m，5H)、7.52至7.54(m，1H)ppm。

制备例8：N-[2-(苄氧基)-5-((1R)-2-溴-1-{[叔-丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)苯基]-二甲磺酰胺

在乙腈(100毫升)中将如制备例7所述制得的N-[2-(苄氧基)-5-((1R)-2-溴-1-{[叔-丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)苯基]甲磺酰胺(20.0克；39.2毫摩尔)，及二异丙基乙胺(24毫升；138毫摩尔)合并，并冷却至约5℃。以约10分钟添加甲磺酰氯(9.0毫升；118.8毫摩尔)，并于5℃下搅拌所形成的混合物约一小时。添加水(300毫升)，并将所形成的於浆粒化15分钟，然后过滤并于40℃在真空下干燥以得到浅黄色固体形式的标题化合物(23.3克)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：-0.06(s，3H)、0.12(s，3H)、0.90(s，9H)、3.31(s，6H)、3.40至3.50(m，2H)、4.83(dd，1H)、5.14(s，2H)、7.05(d，1H)、7.32至7.42(m，5H)、7.46至7.50(m，2H)ppm。

制备例9：N-[2-(苄氧基)-5-((1R)-2-溴-1-羟乙基)苯基]-二甲磺酰胺

使得自制备例8的甲硅烷基醚(19.2克；32.4毫摩尔)悬浮在四氢呋喃(40毫升)及甲醇(2毫升)的混合物中。添加三氢氟化三乙胺(9毫升；55.2毫摩尔)，并于环境温度下搅拌所形成的溶液30小时。以氨水(35％，20毫升)猝灭该反应，并在乙酸乙酯(2×30毫升)内萃取该产物。以饱和碳酸氢钠水溶液及水洗涤合并的有机相，使用无水MgSO₄干燥、过滤并浓缩至干燥。然后使残留物在乙酸乙酯(40毫升)内浆化两小时，其后通过过滤而分离该产物，用乙酸乙酯(10毫升)及叔-丁基甲基醚(20毫升)洗涤以得到白色固体形式的标题化合物(11.3克)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：3.33(s，6H)、3.51(dd，1H)、3.63(dd，1H)、4.90(dd，1H)、5.16(s，2H)、7.08(d，1H)、7.33至7.45(m，5H)、7.46至7.50(m，2H)ppm。

制备例10：N-[(R)-2-苄氧基-5-环氧乙烷基-苯基]-二甲磺酰胺

添加碳酸钾(2.25克；16.3毫摩尔)至得自制备例9的溴醇(bromohydrin)(6.0克；12.5毫摩尔)在甲醇(30毫升)及四氢呋喃(30毫升)的混合物中的溶液中，并于环境温度下搅拌所形成的混合物约18小时。在水(60毫升)内猝灭该反应，并用丙腈(2×60毫升)萃取。以水(100毫升)洗涤合并的丙腈层，使用无水MgSO₄干燥，过滤并浓缩以产生浅黄色固体形式的标题化合物(4.98克)，其不需要纯化即可使用。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：2.76(dd，1H)、3.13(dd，1H)、3.31(s，3H)、3.33(s，3H)、3.83(m，1H)、5.15(s，2H)、7.06(d，1H)、7.22(d，1H)、7.31至7.44(m，4H)、7.46至7.50(m，2H)ppm。

制备例11：(3-溴苄基)氨基甲酸叔-丁酯

添加三乙胺(6.57升；46.7摩尔)至3-溴苄胺盐酸盐(9.9千克；44.5摩尔)在乙酸乙酯(39.6升)中的溶液中，并于20至25℃下搅拌所形成的混合物30分钟，然后将其冷却至0℃。然后以30分钟添加二碳酸二-叔-丁酯(10.7千克；49摩尔)在乙酸乙酯(19.8升)中的溶液，其添加速率可维持温度在0℃与20℃之间。然后于20至25℃下搅拌该反应混合物两小时，接着添加水(29.7升)并激烈搅拌该混合物10分钟，然后分离各相。蒸馏乙酸乙酯相，并于减压在35至45℃下用庚烷替代至约40升最终体积，然后以2小时冷却该溶液至0℃。于0℃下搅拌所形成的悬浮液12小时，然后通过过滤而收集该产物，以庚烷(2×3.37升)洗涤以得到白色固体形式的标题化合物(10.26千克)。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：1.46(s，9H)、4.25至4.32(m，2H)、4.75至4.90(bs，1H)、7.16至7.22(m，2H)、7.39(dt，1H)、7.43(bs，1H)ppm。

制备例12：[(4′-羟基联苯-3-基)甲基]氨基甲酸叔-丁酯

于20至25℃下使氮气经由得自制备例11的溴化物(5.12千克；17.9摩尔)、4-羟苯基硼酸(2.71千克；19.7摩尔)及碳酸钠(2.848千克；26.8摩尔)在1，4-二烷(25.6升)及软化水(25.6升)的混合物中的搅拌溶液而起泡一小时。然后添加氯化1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁基钯(II)(14.6克；0.0179摩尔)至该混合物，并再持续氮气起泡30分钟。其后，于65至70℃在氮气层下将该反应加热2小时。将该反应冷却至20至25℃，添加乙酸乙酯(41升)并激烈搅拌所形成的混合物10分钟，接着分离各相。先后以柠檬酸(1.9千克)在软化水(18.9升)中的溶液及氯化钠(3.15千克)在软化水(18.9升)中的溶液洗涤该有机相。以活性炭(Darco KB 100网目，湿粉末；5.12千克)处理该乙酸乙酯溶液，并搅拌12小时。然后经由Arbocel过滤所形成的於浆，并以甲醇(25.6升)洗涤滤饼。蒸馏合并的滤液，并于减压在40至50℃下用甲苯替代至约15升最终体积。然后以2小时将该溶液冷却至10℃，并于10℃下搅拌所形成的悬浮液12小时。通过过滤而分离该产物，并用环己烷(2×2.56升)洗涤以得到白色固体形式的标题化合物(4.26千克)。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：1.47(s，9H)、4.33至4.41(m，2H)、4.87至4.94(bs，1H)、6.89(d，2H)、7.21(d，1H)、7.37(dd，1H)、7.43至7.45(m，4H)ppm。

MS(电喷雾)m/z 298 [M-H]^-、322  [M+Na]⁺

制备例13：3′-(氨基甲基)联苯-4-酚盐酸盐

以20分钟添加氯化氢在1，4-二烷/水中的溶液(4M，64.7升；135摩尔)至得自制备例12的酚(8.09千克；27摩尔)在1，4-二烷(16.15升)中的溶液中，并于20至25℃下搅拌所形成的混合物一小时。于减压在40至45℃下将该悬浮液浓缩至约40升，并于20至25℃下搅拌12小时。通过过滤而收集沉淀物，并经1，4-二烷(2×4.05升)洗涤。添加所形成的滤饼至乙腈(80.9升)中并于回流下加热2小时。通过过滤而分离沉淀物，并用乙腈(2×4.05升)洗涤以得到白色固体形式的标题化合物(3.65千克；57％)。

蒸馏该含水1，4-二烷液体，并用新1，4-二烷替代，直到该蒸汽温度大于100℃，且该反应体积为～40升。将该反应混合物冷却至20至25℃，粒化18小时，且通过过滤而分离粗产物。添加所形成的滤饼至乙腈(40升)并于回流下加热2小时。通过过滤而分离所形成的沉淀物，并用乙腈(2×4.05升)洗涤以得到浅褐色固体形式的第二产量的标题化合物(2.36千克；37％)。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ：4.17(s，2H)、6.87(d，2H)、7.34(d，1H)、7.45至7.50(m，3H)、7.61(d，1H)、7.65(s，1H)ppm。

MS(电喷雾)m/z 198[M-H]^-、200[M+H]⁺

制备例14：{3-[2-(2-氯-乙酰氨基)-2-甲基-丙基]-苯基}-乙酸乙酯

以浓硫酸(130克，1.31摩尔)处理得自制备例4的酸(3.76千克，13.24摩尔)在乙醇(30.1升)中的溶液，并于回流下加热90分钟。使用1.0M碳酸氢钠水溶液(2.0千克)将该冷却溶液调整至～pH 5。在真空下将该混合物浓缩至8升体积，用甲苯(11.7升)稀释并在真空下经浓缩至12升体积。以甲苯(25.8升)稀释该浓缩液，经水(22.6升)洗涤，并进一步以甲苯(15.0升)再萃取水层。在真空下将合并的甲苯层浓缩至8升。于35℃下维持该浓缩液，并经正-庚烷(15.0升)处理，维持温度在30℃以上。冷却该混合物，并于20℃下粒化所形成的於浆2小时。通过过滤而分离该固体沉淀物，并经正-庚烷(2×3.76升)洗涤以得到白色固体形式的标题化合物(3.15千克)。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：1.14(t，3H)、1.19(s，6H)、2.95(s，2H)、3.59(s，2H)、3.94(s，2H)、4.07(q，2H)、7.00(m，2H)、7.09(d，1H)、7.20(t，1H)、7.59(s，1H)

制备例15：[3-(2-叔-丁氧羰基氨基-2-甲基丙基)苯基]乙酸乙酯

以约30分钟添加得自制备例5的胺(48.0克；204毫摩尔)至二碳酸二-叔-丁酯(55.0克；252毫摩尔)及4-二甲氨基吡啶(1.5克；12.3毫摩尔)在THF(50毫升)中的溶液中，并于环境温度在氮气下搅拌所形成的溶液23小时。然后在乙酸乙酯(100毫升)与盐酸(1.5M，150毫升)之间分配该反应混合物，并分离各相。以水(100毫升)及盐水(50毫升)洗涤该有机相，在无水MgSO₄上干燥并浓缩以得到暗褐色油状的标题化合物(65.8克)，其不需要进一步纯化即可使用。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：1.22至1.24(m，9H)、1.47(s，9H)、2.96(s，2H)、3.57(s，2H)、4.13(q，2H)、4.27(s，1H)、7.05(m，2H)、7.15(m，1H)、7.22(m，1H)ppm

制备例16：[3-(2-叔-丁氧羰基氨基-2-甲基丙基)苯基]乙酸

添加氢氧化钠(16.0克；400毫摩尔)及水(100毫升)至得自制备例15的乙酯(64.7克；193毫摩尔)在THF(100毫升)中的冷却溶液中，并于环境温度下搅拌所形成的溶液约16小时。然后使用盐酸将该溶液酸化至pH 1，并在乙酸乙酯(2×200毫升)内萃取该产物。以水及盐水洗涤合并的有机萃取物，在无水MgSO₄上干燥并浓缩以得到稠褐色油状的标题化合物(57.3克)。自甲苯/庚烷再结晶得到灰白色固体形式的产物。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：1.25(s，6H)、1.47(s，9H)、2.96(s，2H)、3.61(s，2H)、7.07(m，2H)、7.15(m，1H)、7.23(m，1H)ppm。

制备制备例16的产物的可替代方法

添加二异丙基乙胺(210毫升；1.21摩尔)至得自制备例5a的盐(250克；0.40摩尔)在丙腈(1.0升)中的悬浮液中，得到浅黄色溶液。添加二碳酸二-叔-丁酯(97克；0.44摩尔)在丙腈(250毫升)中的溶液并于环境温度下搅拌所形成的浅黄色溶液21小时。添加水(250毫升)并搅拌该混合物30分钟。分离各相，并连续以10％柠檬酸水溶液(500毫升)、水(300毫升)、饱和碳酸氢钠水溶液(500毫升)及盐水(500毫升)洗涤该有机相。然后将该有机相浓缩成暗橘色油，并溶解在四氢呋喃(250毫升)及水(250毫升)的混合物内。添加氢氧化钠(80克；2.0摩尔)，并于环境温度下搅拌所形成的混合物91小时。添加甲苯(400毫升)，并搅拌该混合物30分钟，然后分离各相。以水(200毫升)及饱和碳酸氢钠水溶液(100毫升)的混合物萃取该有机相。然后以浓盐酸将合并的水相调整至pH 1，并经乙酸乙酯(2×250毫升)萃取。以水(2×200毫升)洗涤合并的乙酸乙酯萃取物，然后浓缩至干燥。将所形成的油溶解在回流甲苯(100毫升)中，并添加庚烷(～400毫升)。将该混合物冷却至环境温度并粒化3小时。通过过滤而分离该固体，以庚烷(2×200毫升)洗涤，并于40℃下在真空烘箱内干燥以得到浅黄色固体形式的标题化合物(110.9克；90％)。

制备例17：[2-(3-{[(4′-羟基联苯-3-基甲基)-氨甲酰基]-甲基}-苯基)-1，1-(二甲基)乙基]氨基甲酸叔-丁酯

于环境温度在氮气下搅拌得自制备例16的酸(25克；81.3毫摩尔)、得自制备例13的胺盐酸盐(18.2克；77.3毫摩尔)、4-二甲氨基吡啶(100毫克；0.81毫摩尔)及二异丙基乙胺(22.1克；170.8毫摩尔)在乙腈(125毫升)中的混合物，然后添加1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(17.15克；89.5毫摩尔)，并于环境温度下搅拌该混合物18小时。添加水(190毫升)，并搅拌所形成的悬浮液1.5小时。通过过滤而分离该固体，以水(100毫升)洗涤，并利用吸力干燥20分钟。使该湿滤饼在10％柠檬酸水溶液(100毫升)内浆化一小时。通过过滤而分离该固体，以水(100毫升)洗涤以得到白色固体形式的标题化合物(31.0克；82％)。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：1.11(s，6H)、1.39(s，9H)、2.85(s，2H)、3.43(s，2H)、4.30(d，2H)、6.25(s，1H)、6.82(d，2H)、6.98(d，1H)、7.03(s，1H)、7.09至7.20(m，3H)、7.30(t，1H)、7.35至7.42(m，4H)、8.50(s，1H)、9.50(s，1H)。

制备例18：{3-[2-(2，2，2-三氯-乙酰氨基)-2-甲基-丙基]-苯基}-乙酸

添加三氯乙腈(20克，0.14摩尔)至得自制备例3的醇(20克，0.09摩尔)在乙酸(40毫升)中的溶液中。将所形成的溶液冷却至0℃，经浓硫酸(98％；30毫升)处理，并使该反应混合物逐渐温热至室温。4小时后，将该反应混合物倒入冰/水(400毫升)中，并以乙酸异丙酯(2×200毫升)萃取该溶液。以软化水(120毫升)洗涤合并的的有机层，然后利用真空浓缩以得到黏性褐色油。然后以甲苯(100毫升)处理该油，并浓缩。然后以庚烷(100毫升)处理残留物，并于真空下过滤以得到灰白色固体形式的标题产物(28.32克)。

¹H NMR(CD₃OD，400MHz)δ：1.39(s，6H)、3.07(s，2H)、3.56(s，2H)、7.07至7.45(m，1H)，ppm。

制备例19：2，2，2-三氯-N-[2-(3-{[4′-羟基-联苯-4-基甲基]-氨甲酰基}-甲基)-苯基]-1，1-二甲基-乙基]乙酰胺

将制备例13的产物(19.8克，0.085摩尔)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(24.45克，0.13摩尔)、1-羟基苯并三唑(17.2克，0.13摩尔)、三乙胺(42.9克，0.42摩尔)及得自制备例18的产物(30克，0.085摩尔)悬浮在乙酸乙酯中，并于40℃下加热20小时。以水(4×150毫升)洗涤该乙酸乙酯溶液，然后浓缩以得到褐色固体形式的标题化合物(33.7克)。

¹H NMR(CD₃OD，400MHz)δ：1.34(s，6H)、3.01(s，2H)、3.53(s，2H)、4.40(s，2H)、6.82至7.41(m，12H)ppm。

制备例20：2-[3-(2-氨基-2-甲基丙基)-苯基]-N-[(4′-羟基联苯-3-基)甲基]乙酰胺

以盐酸(在二烷中4M，35毫升；80毫摩尔)处理得自制备例17的经Boc保护的胺(28.0克；57.3毫摩尔)在乙醇(100毫升)中的悬浮液，并于环境温度下搅拌该反应约100小时。将该反应混合物倒入氨水(35％，30毫升)及水(200毫升)的混合物中。然后以丙腈(2×50毫升)及正-丁醇(100毫升)萃取该产物。以水洗涤合并的有机相，使用无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩。在丙酮(100毫升)中使残留物浆化约18小时，并过滤所形成的悬浮液，干燥以产生灰白色固体形式的标题化合物(13.4克)。

¹H NMR(CD₃OD，400MHz)δ：1.09(s，6H)、2.66(s，2H)、3.56(s，2H)、4.41(s，2H)、6.82(d，2H)、7.08至7.15(m，3H)、7.20至7.42(m，8H)。

MS(电喷雾)m/z 389  [M+H]⁺，372[M-H₂O]⁺

制备制备例20的产物的可替代方法

可替代方法1：

于惰性气氛下搅拌得自制备例17的经保护胺(31.0克；63.4毫摩尔)在二氯甲烷(150毫升)中的悬浮液，同时添加三氟乙酸(50毫升；649毫摩尔)。搅拌所形成的浅橘褐色溶液1.5小时，然后于减压下浓缩以得到稠褐色油。以水及浓氨水的混合物(9∶1，～250毫升)处理该油，直到达到pH 12为止，然后以乙酸乙酯及甲醇的混合物(9∶1，2×150毫升)萃取该混合物。以水洗涤合并的有机萃取物，然后于减压下浓缩。在丙酮(500毫升)中使所形成的泡沫体回流一小时，然后冷却至环境温度，并粒化一夜。通过过滤而分离该固体，以丙酮洗涤，并于40℃下在真空烘箱内干燥以得到白色固体形式的标题化合物(13.42克；54％)。

可替代方法2：

将得自制备例19的产物(33克，0.06摩尔)溶解在4M氢氧化钾水溶液(78.6毫升)及乙醇(78.6毫升)的混合物中，并于50℃下搅拌24小时。于真空下将该混合物部分浓缩(至约80毫升)，然后以乙酸乙酯(4×40毫升)萃取。合并有机萃取物并真空浓缩以得到黄色油状的粗标题产物(24.11克)。使该物质悬浮在丙酮(120毫升)中，加热至回流，并以10小时使该溶液冷却至室温，并于5℃下粒化一小时，然后于真空下过滤、以丙酮(25毫升)洗涤以得到白色固体形式的标题化合物(7克)。

可替代方法3：

连续添加1-羟基苯并三唑水合物(11.93克；0.08摩尔)、得自制备例13的胺盐酸盐(45.78克；0.19摩尔)及三乙胺(35.73克；0.35摩尔)至得自制备例3的醇(36.77克；0.18摩尔)在二氯甲烷(368毫升)中的溶液中，搅拌该溶液一小时，然后添加1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(33.84克；0.18摩尔)，并于环境温度下搅拌该混合物2小时。添加四氢呋喃(184毫升)，并连续以水(2×184毫升)、1M盐酸水溶液(2×184毫升)，及1M碳酸氢钾水溶液(2×184毫升)洗涤所形成的溶液。蒸馏该有机溶液，并用氯乙腈(132毫升)替代。添加三氟乙酸(331毫升)至该氯乙腈溶液，并将所形成的混合物加热至50℃2小时。添加二氯甲烷(331毫升)，并先后以水(2×662毫升)及1M碳酸氢钾水溶液(2×331毫升)洗涤有机相。然后蒸馏该有机溶液并用乙酸(404毫升)替代。添加硫脲(44克；0.58摩尔)至该溶液的等分试样(250毫升)中并将所形成的悬浮液加热至100℃3小时。过滤该悬浮液，并以乙酸(54毫升)洗涤该滤饼。以水(774毫升)稀释该乙酸溶液，并以二氯甲烷及甲醇的混合物(9∶1，2×242毫升)洗涤水层。添加甲醇(53毫升)至该水相，并使用浓氨水(～230毫升)将pH调整至＞9，保持温度在15℃以下。添加二氯甲烷(480毫升)并搅拌该混合物30分钟。然后分离各相，并蒸馏该有机相，并用丙酮(～440毫升)替代。将所形成的悬浮液冷却至环境温度，并搅拌18小时，然后于5℃下粒化2小时。通过过滤而收集该产物，以丙酮(2×45毫升)洗涤以得到浅黄色固体形式的标题化合物(11.39克)。

制备例21：2-(3-{2-[((2R)-2-{4-苄氧基-3-[(二甲磺酰基)氨基]苯基}-2-羟乙基)氨基]-2-甲基丙基}苯基)-N-[(4′-羟基联苯-3-基)甲基]-乙酰胺

于回流在惰性气氛下将得自制备例20的胺(500毫克；1.29毫摩尔)及得自制备例10的环氧化物(670毫克；1.69毫摩尔)在丁腈(2毫升)中的混合物加热20小时。然后将该混合物冷却至环境温度，并在硅凝胶(40克)上直接进行色谱分析，以甲醇-二氯甲烷(1∶19至1∶9)洗脱以得到蜡状油状的标题化合物(543毫克)。

¹H NMR(CD₃OD，400MHz)δ：1.00(s，3H)、1.03(s，3H)、2.66(dd，2H)、2.82(m，2H)、3.31(s，6H)、3.55(s，2H)、4.40(s，2H)、4.69(dd，1H)、5.16(s，2H)、6.82(d，2H)、7.03至7.54(m，18H)。

MS(电喷雾)m/z 786 [M+H]⁺

制备例22：2-(3-{2-[((2R)-2-{4-苄氧基-3-[(甲磺酰基)氨基]苯基}-2-羟乙基)氨基]-2-甲基丙基}苯基)-N-[(4′-羟基联苯-3-基)甲基]-乙酰胺

添加氢氧化钠(500毫克；12.5毫摩尔)在水(5毫升)中的溶液至得自制备例21的双-磺酰胺(500毫克；0.64毫摩尔)在乙醇(5毫升)中的溶液中，并于环境温度下搅拌所形成的黄色溶液14天。然后以水(10毫升)稀释该混合物，并用二氯甲烷(10毫升)洗涤。使用盐酸将该水相调整至pH 1，并经丙腈(2×20毫升)萃取。以水洗涤合并的丙腈萃取物，经无水MgSO₄干燥，过滤并浓缩以得到浅黄色玻璃状固体形式的标题化合物(272毫克)。

¹H NMR(CD₃OD，400MHz)δ：1.03(s，3H)、1.05(s，3H)、2.68(dd，2H)、2.78至2.90(m，4H)、3.34(s，3H)、3.54(s，2H)、4.40(s，2H)、4.66(dd，1H)、5.18(s，2H)、6.81(m，2H)、7.01至7.40(m，16H)、7.43至7.48(m，2H)。

MS(电喷雾)m/z 708[M+H]⁺

制备制备例22的产物的可替代方法

可替代方法1：

使得自制备例24的粗甲硅烷基醚(1.24克；假定为1.7毫摩尔)溶解在THF(5毫升)及甲醇(1毫升)的混合物中。添加三氢氟化三乙胺(0.5毫升；3.1毫摩尔)，并于环境温度下搅拌该混合物8小时。以氨水(35％，10毫升)猝灭该反应，并经丙腈(2×20毫升)萃取。以水洗涤合并的丙腈萃取物，经无水MgSO₄干燥，过滤并浓缩以得到褐色泡沫体。使其在硅凝胶上色谱分析，以甲醇-二氯甲烷(1∶9)洗脱以得到灰白色泡沫体的标题化合物(474毫克)。

可替代方法2：

使得自制备例25的粗甲硅烷基醚(3.0克；假定3.6毫摩尔)溶解在THF(15毫升)中。添加三氢氟化三乙基(1.5毫升；9.2毫摩尔)，10分钟后添加乙醇(0.5毫升)。于环境温度下搅拌该浅橘色溶液3小时，然后添加氨水(35％，10毫升)，并在丙腈(2×20毫升)内萃取该产物。以水洗涤合并的有机相，经无水MgSO₄干燥，过滤并浓缩以得到浅褐色泡沫体的标题化合物(2.6克，～70％纯)。

可替代方法3：

在氮气下使得自制备例7的经保护溴醇(13.21克；25.7毫摩尔)、得自制备例20的胺(9.50克；24.4毫摩尔)及碳酸氢钠(4.11克；48.9毫摩尔)在乙酸正-丁酯(29毫升)中的混合物回流24小时。将该混合物冷却至环境温度，并经水(30毫升)及乙酸乙酯(114毫升)稀释。分离各相，并连续以1M(L)-酒石酸水溶液(25毫升)、水-浓氨水(3∶1，40毫升)及水(19毫升)洗涤该有机相。先后添加甲醇(19毫升)及三氢氟化三乙胺(4.5毫升；27.6毫摩尔)，并于环境温度在氮气下搅拌所形成的混合物。一小时后，添加另外等分试样的甲醇(9.5毫升)。6小时后，以水及浓氨水的混合物(3∶1，40毫升)猝灭该反应，并搅拌15分钟。分离各相，并以水(47.5毫升)洗涤该有机相，然后于减压下蒸馏乙酸乙酯以得到该标题化合物的乙酸正-乙酯溶液，将其直接用于制备例22a中。

制备例22a：2-(3-{2-[((2R)-2-{4-苄氧基-3-[(甲磺酰基)氨基]苯基}-2-羟乙基)氨基]-2-甲基丙基}苯基)-N-[(4′-羟基联苯-3-基)甲基]-乙酰胺，二苯甲酰基-(L)-酒石酸盐

添加二苯甲酰基-(L)-酒石酸(8.74克；24.4毫摩尔)在2-丁酮(19毫升)中的溶液至得自制备例22的胺(可替代方法3)的乙酸正-丁酯溶液中以得到稠胶。再以2-丁酮(76毫升)稀释该混合物，并温热至40℃以得到橘色溶液。然后将该橘色溶液冷却至环境温度，并于环境温度下在激烈搅拌下以15分钟添加至叔-丁基甲基醚(285毫升)中，以2-丁酮(2×9.5毫升)洗涤，并于环境温度下粒化所形成的於浆18小时。通过过滤而分离该固体，再以叔-丁基甲基醚(2×95毫升)洗涤以得到灰白色固体形式的标题化合物(24.64克)(经估计为胺及酸组分的约4∶3混合物，且含有部分叔-丁基甲基醚)。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：1.02(s，6H)、2.70至3.10(m，6H)、3.40(s，3H)、4.25(d，2H)、4.65(br.d，1H)、5.18(s，2H)、5.60(s，1.5H)、6.81(d，2H)、6.90至7.60(m，23.5H)、7.90(m，2H)、8.55(t，1H)。

制备制备例22a的产物的可替代方法

添加二苯甲酰基-(L)-酒石酸(9.0克；25.1毫摩尔)在2-丁酮(50毫升)中的溶液至制备例22的产物(16.9克)在丁腈(35毫升)中的溶液中。再添加50毫升2-丁酮以完全溶解所有物质。然后于环境温度下，在激烈搅拌下以10分钟添加该溶液至叔-丁基甲基醚(500毫升)内，再以2-丁酮(20毫升)洗涤。再添加叔-丁基甲基醚(100毫升)至该於浆内，然后于环境温度下将其熟化3小时。通过过滤而分离该固体，并以叔-丁基甲基醚(200毫升)洗涤以得到黄色固体形式的标题化合物(20.86克)。

制备例23：2-(3-{2-[((2R)-2-{4-苄氧基-3-[(二甲磺酰基)氨基]苯基}-2-{[叔-丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)氨基]-2-甲基丙基}苯基)-N-[(4′-羟基联苯-3-基)甲基]-乙酰胺

于惰性气氛下在回流下将得自制备例8的经保护溴醇(1.0克；1.7毫摩尔)、得自制备例20的胺(650毫克；1.67毫摩尔)及碳酸氢钠(560毫克；6.7毫摩尔)在丁腈(2毫升)中的混合物加热31小时。然后将该反应混合物冷却至环境温度，并经丙腈(10毫升)及水(10毫升)稀释。分离各相；以无水硫酸镁干燥该有机相，过滤并浓缩以得到标题化合物(1.54克)，其不需要纯化即可直接用于下一步骤。

制备例24：2-(3-{2-[((2R)-2-{4-苄氧基-3-[(甲磺酰基)氨基]苯基}-2-{[叔-丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)氨基]-2-甲基丙基}苯基)-N-[(4′-羟基联苯-3-基)甲基]-乙酰胺

使得自制备例23的粗双-磺酰胺(1.54克；假定1.7毫摩尔)溶解在乙醇(5毫升)中。添加水(5毫升)及氢氧化钠(600毫克；15毫摩尔)，并于环境温度下搅拌所形成的混合物72小时。然后以浓盐酸将该混合物酸化至pH  1，接着经氨水(35％)中和(至pH 10)。然后在丙腈(2×20毫升)内萃取该产物。以无水硫酸镁干燥合并的有机萃取物，过滤并真空浓缩该溶液以产生黄色油状的标题化合物(1.24克)，其不需要纯化即可用于下一步骤。

制备例25：2-(3-{2-[((2R)-2-{4-苄氧基-3-[(甲磺酰基)氨基]苯基}-2-{[叔-丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)氨基]-2-甲基丙基}苯基)-N-[(4′-羟基联苯-3-基)甲基]-乙酰胺

于惰性气氛下使得自制备例7的经保护溴醇(2.0克；3.92毫摩尔)、得自制备例20的胺(1.5克；3.86毫摩尔)及碳酸氢钠(1.0克；11.9毫摩尔)在丁腈(4毫升)中的混合物回流约30小时。然后以丙腈(20毫升)稀释该冷却反应混合物，经水(2×10毫升)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩以得到标题产物(3.05克，～80％纯)，其不需要进一步纯化即可用于下一步骤。

制备例26：N-[(4′-羟基联苯-3-基)甲基]-2-(3-(2-[((2R)-2-羟基-2-{4-羟基-3-[(甲磺酰基)氨基]苯基}乙基)氨基]-2-甲基丙基}苯基)乙酰胺

添加氢氧化钯(在碳上20重量％；60毫克)至得自制备例22的苄醚(613毫克；0.87毫摩尔)在乙醇(4.5毫升)及水(1.5毫升)的混合物中的溶液中。将该混合物置于氢气氛(60psi)下，并于60℃下搅拌18小时。然后以氮气吹洗该反应混合物，经氨水(35％)在乙醇中的溶液(1∶9，～15毫升)稀释，经由赛力特硅藻土(Celite)过滤，再以氨水(35％)在乙醇中的溶液(1∶9，～15毫升)及乙醇(～10毫升)洗涤。将该液体浓缩成残留物，然后溶解在氨水(35％)及THF的混合物(1∶19，～10毫升)中，并经由硅石垫过滤，再以氨水(35％)/THF(1∶19，～250毫升)洗涤。将该液体浓缩成残留物，在回流的甲醇(10毫升)中浆化，然后冷却至环境温度，并搅拌18小时。通过过滤而收集沉淀物，以甲醇洗涤以得到灰白色固体形式的标题化合物(296毫克)。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：0.88(s，3H)、0.90(s，3H)、2.54(s，2H)、2.62(m，2H)、2.88(s，3H)、3.44(s，2H)、4.30(d，2H)、4.41(dd，1H)、6.81(m，3H)、6.98(m，2H)、7.05至7.18(m，5H)、7.25至7.42(m，5H)、8.49(t，1H)ppm。

制备制备例26的产物的可替代方法

可替代方法1：

将得自制备例22a的盐(6.7克；6.74毫摩尔)、四氢呋喃(67毫升)及浓氨水(10毫升)的混合物激烈搅拌15分钟。分离各相，并以水(10毫升)及饱和盐水(10毫升)的混合物洗涤有机相。然后以恒定体积(50至60毫升)蒸馏该四氢呋喃溶液，若必要，则添加额外四氢呋喃，直到已收集总共60毫升馏出物为止。然后再以四氢呋喃(总共体积约84毫升)及水(18毫升)稀释该溶液，并添加碳载钯(5％，50％水湿品；670毫克)，然后于40℃/50psi氢气压力下氢化所形成的混合物31小时，并分别于8小时及24小时后再添加催化剂(500毫克及600毫克)。自氢化反应器除去该混合物，并添加Arbocel(5克)，并搅拌该混合物20分钟。使所形成的於浆经由Arbocel垫过滤，以四氢呋喃/水(9∶1，约50毫升)洗涤。然后以乙腈(85毫升)稀释该滤出物，并通过蒸馏而除去四氢呋喃。一旦该蒸汽温度达到76℃，再添加20毫升乙腈，然后再收集20毫升馏出物。将所形成的於浆冷却至环境温度，并使其熟化16小时。通过过滤而收集固体，以乙腈-水(9∶1，40毫升)洗涤，并于真空下干燥20分钟。然后在甲醇-水(9∶1，40毫升)中浆化该湿饼，起先于50℃下一小时，然后于环境温度下16小时。通过过滤而分离沉淀物，以甲醇-水(8∶2，40毫升)洗涤以得到灰白色固体形式的标题化合物(2.25克；54％)。

可替代方法2：

将得自制备例22a的盐(11.26克；11.6毫摩尔)、2-甲基四氢呋喃(100毫升)、浓氨水(50毫升)及水(1 50毫升)的混合物激烈搅拌一小时。分离各相，并以2-甲基四氢呋喃(20毫升)反萃取该水相。以水(50毫升)洗涤合并的有机相，然后经乙二醇(100毫升)稀释，并于减压下通过蒸馏而除去2-甲基四氢呋喃。添加碳载钯催化剂(5％，50％水湿品；1100毫克)，并于40℃/50 psi氢气压力下氢化所形成的混合物18小时。自氢化反应器除去该混合物，并添加Arbocel(5克)。搅拌所形成的混合物30分钟，然后经由Arbocel垫过滤，以乙二醇(25毫升)洗涤。添加新的碳载钯催化剂(5％，50％水湿品；1100毫克)，并于40℃/50psi氢气压力下氢化所形成的混合物7小时，然后于40℃/80psi下16小时。接着添加额外的碳载钯(5％，50％水湿品；1000毫克)，并于40℃/80psi氢气压力下氢化所形成的混合物4小时。自氢化反应器除去该混合物，并添加Arbocel(10克)。搅拌所形成的混合物30分钟，然后经由Arbocel垫过滤，以乙二醇(25毫升)洗涤。接着在激烈搅拌下，以约10分钟添加该乙二醇滤液至水(200毫升)中，以额外乙二醇(20毫升)及水(100毫升)洗涤，并于环境温度下搅拌所形成的浅褐色於浆30分钟。通过过滤而分离该固体，以水(100毫升)洗涤，并于40℃下在真空烘箱内干燥。通过在甲醇-水(9∶1，54毫升)中浆化而进一步纯化所形成的浅褐色固体，起先于50℃下2小时，然后于环境温度下16小时。通过过滤而分离沉淀物，以甲醇-水(8∶2，15毫升)洗涤以得到灰白色固体形式的标题化合物(4.57克；64％)。

可替代方法3：

在氮气下使得自制备例7的经保护溴醇(10.93克；21.2毫摩尔)、得自制备例20的胺(7.50克；19.3毫摩尔)及碳酸氢钠(9.0克；107.1毫摩尔)在乙酸正-丁酯(55毫升)中的混合物回流53小时。将该混合物冷却至环境温度，并以水(180毫升)及乙酸乙酯(180毫升)稀释。分离各相，并连续以1M(L)-酒石酸水溶液(55毫升)、水(55毫升)、水-浓氨水(3∶1，60毫升)及水(55毫升)洗涤有机相。添加碳载钯催化剂(5％，50％水湿品；1300毫克)，并于60℃/60psi氢气压力下氢化所形成的混合物24小时。自氢化反应器除去该反应混合物，并添加Arbocel(13克)，并搅拌所形成的於浆30分钟。然后使该混合物经由Arbocel垫过滤，并以乙酸乙酯(200毫升)洗涤该催化剂床。接着于减压下浓缩该浅黄色滤液以除去乙酸乙酯，然后添加甲醇(60毫升)并于减压下将该混合物浓缩至干燥。使所形成的黏性橘褐色油溶解在甲醇(100毫升)中，并放在聚丙烯容器内。添加氟化铵(2.1克；56.7毫摩尔)，以水(20毫升)及甲醇(20毫升)洗涤，并于环境温度下搅拌所形成的溶液65小时。通过过滤而分离该沉淀固体，以甲醇-水(8∶2，100毫升)洗涤，并于吸力下干燥10分钟，然后于40℃下在真空烘箱内干燥4小时。接着在甲醇-水(9∶1，75毫升)中浆化该浅褐色固体，起先于50℃下2小时，然后于环境温度下16小时。通过过滤而分离沉淀物，以甲醇-水(8∶2，2×20毫升)洗涤，并于40℃下在真空烘箱内干燥，通过于环境温度下在水(80毫升)中浆化而进一步纯化该固体16小时。通过过滤而分离该固体，并经水(50毫升)洗涤以得到灰白色固体形式的标题化合物(6.01克；50％)。

Claims (46)

1.一种制备式(I)化合物的方法，

其中Q¹为选自

及基团^*-NR⁶-Q²-A的基团，其中符号^*代表与羰基的连接点，p为1或2，Q²为任选被一个羟基取代的C₁至C₄亚烷基，R⁶为H或C₁至C₄烷基，并且A为任选被OH取代的吡啶基、任选被OH取代的C₃至C₇环烷基，或以下基团

其中R¹、R²、R³、R⁴及R⁵相同或不同，且选自H、C₁至C₄烷基、OR⁷、SR⁷、卤素、CN、CF₃、OCF₃、COOR⁷、SO₂NR⁷R⁸、CONR⁷R⁸、NR⁷R⁸、NHCOR⁷及苯基，其任选被1至3个选自OR⁷、卤素及C₁至C₄烷基的基团取代，其中R⁷及R⁸相同或不同，且选自H或C₁至C₄烷基；

或者，若合适，其药学上可接受的盐和/或其异构体、互变异构体、溶剂化物或同位素变异体，该方法包括使用下式化合物

2.根据权利要求1的方法，其包括使所述式(7)化合物与式(5)化合物，

或式(6)化合物反应的步骤

其中PG²为合适的酚保护基，PG³为合适的羟基保护基，LG为合适的离去基团，且R⁹为H或SO₂CH₃。

3.根据权利要求2的方法，其包括使所述式(7)化合物与式(5)化合物反应

其中R⁹为H，以获得式(3)化合物的步骤

4.根据权利要求3的方法，其包括两个脱保护步骤。

5.根据权利要求3或4的方法，其包括第一脱保护步骤以除去PG³并获得式(2)化合物

或其盐。

6.根据权利要求2的方法，其包括使所述式(7)化合物与式(5)化合物反应

其中R⁹为SO₂CH₃，以获得式(3a)化合物的步骤

7.根据权利要求6的方法，其包括3个脱保护步骤。

8.根据权利要求6或7的方法，其包括脱保护步骤以除去PG³且获得式(4)化合物

9.根据权利要求6至8任何一项的方法，其包括脱保护步骤以除去SO₂CH₃基团并获得式(2)化合物

或其盐。

10.根据权利要求2的方法，其包括使所述式(7)化合物与式(6)化合物反应

其中PG²为合适的酚保护基，以获得式(4)化合物的步骤

11.根据权利要求10的方法，其包括两个脱保护步骤以除去SO₂CH₃基团及PG²。

12.根据权利要求10或11的方法，其中该方法包括第一脱保护步骤以除去SO₂CH₃基团并获得式(2)化合物

或其盐。

13.根据权利要求5、9或12的方法，其包括脱保护步骤以除去PG²并获得权利要求1中所定义的式(I)化合物。

14.根据权利要求2至9任何一项的方法，其中LG为溴化物。

15.根据权利要求2至9和14任何一项的方法，其中PG³为TBDMS。

16.根据权利要求2至15任何一项的方法，其中PG²为苄基。

17.根据权利要求1至16任何一项的方法，其中通过一种包括使式(10)化合物

其中PG¹为合适的氨基保护基，与Q¹-H或其盐反应，其中Q¹如权利要求1中所定义，

以获得式(8)化合物的步骤的方法，制备所述式(7)化合物，

18.根据权利要求1至16任何一项的方法，其中通过一种包括使式(19)化合物

与烷基腈或芳基腈反应而获得式(8)化合物的步骤的方法，制备所述式(7)化合物，

19.根据权利要求18的方法，其中通过使式(15)化合物

与Q¹-H或其盐反应，其中Q¹如权利要求1中所定义，制备所述式(19)化合物。

20.根据权利要求17或18的方法，其包括脱保护步骤以除去PG¹且获得所述式(7)化合物。

21.根据权利要求17的方法，其中通过一种包括水解式(11)化合物的步骤的方法，

制备所述式(10)化合物。

22.根据权利要求21的方法，其中通过一种包括保护式(12)化合物的步骤的方法，

制备所述式(11)化合物。

23.根据权利要求17的方法，其中通过一种包括保护式(15)化合物的步骤的方法，

制备所述式(10)化合物。

24.根据权利要求17、18、20或21的方法，其中PG¹为三氯乙酰基或氯乙酰基。

25.根据权利要求17的方法，其中PG¹为三氯乙酰基。

26.根据权利要求18的方法，其中PG¹为氯乙酰基。

27.根据权利要求17、18、20或21的方法，其中PG¹为Boc。

28.一种制备式(16)化合物的方法

该方法包括以下步骤：在选自脂肪酶、酯酶或蛋白酶的酶的存在下，水解式(18)化合物

29.根据权利要求28的方法，其中所述酶选自米赫毛霉酯酶、根毛霉脂肪酶、疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶、青霉素酰基转移酶。

30.根据权利要求28或29的方法，其中所述酶为疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶。

31.根据权利要求28至30任何一项的方法，其中在合适的缓冲剂的存在下，及任选在合适的碱的存在下，在介于5与9之间的pH及介于10℃与40℃之间的温度下进行所述反应。

32.根据权利要求1至27任何一项的方法，其中Q¹为下式基团

其中R¹至R⁵如权利要求1中所定义。

33.根据权利要求32的方法，其中R¹、R²、R³、R⁴及R⁵相同或不同，且选自H、C₁至C₄烷基、OR⁶、SR⁶、卤素、CF₃、OCF₃、SO₂NR⁶R⁷、CONR⁶R⁷、NR⁶R⁷、NHCOR⁷，条件为R¹至R⁵中至少两个为H；

其中R⁶及R⁷相同或不同，且选自H或C₁至C₄烷基。

34.根据权利要求32的方法，其中R¹、R²、R³、R⁴及R⁵相同或不同，且选自H、OH、CH₃、OCH₂-CH₃、SCH₃、卤素、CF₃、OCF₃，条件为R¹至R⁵中至少两个为H。

35.根据权利要求32至34任何一项的方法，其中R¹至R⁵中的一个为OH。

36.根据权利要求32的方法，其中R¹、R²、R³、R⁴及R⁵中的一个为被OH取代的苯基，并且其它的为H。

37.根据权利要求32的方法，其中R²为4-羟基-苯基，并且R¹、R³、R⁴及R⁵为H。

38.根据权利要求32的方法，其中R²及R³为Cl，并且R¹、R⁴及R⁵为H。

39.根据权利要求33至37任何一项的方法，其中被羟基或OPG³基团取代的不对称碳呈R构型。

40.下式的化合物

其中Q¹如权利要求1中所定义，R¹⁰为H或PG²，其中PG²为合适的酚保护基，R⁹为H或PG³，其中PG³为合适的羟基保护基，且R¹¹为H或PG¹或其中PG¹为合适的氨基保护基。

41.根据权利要求40的下式化合物，

其中Q¹如权利要求32至38任何一项中所定义。

42.根据权利要求41的下式化合物，

其中被OR⁹取代的不对称碳呈R构型。

43.根据权利要求40的下式化合物，

其中PG²为苄基。

44.根据权利要求43的化合物，该化合物具有下式：

45.根据权利要求42的下式化合物，

其中R¹¹为H。

46.根据权利要求40的化合物，该化合物选自：

2-(3-{2-[((2R)-2-{4-苄氧基-3-[(二甲基磺酰基)氨基]苯基}-2-{[叔-丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)氨基]-2-甲基丙基}苯基)-N-[(4′-羟基联苯-3-基)甲基]-乙酰胺；

2-(3-{2-[((2R)-2-{4-苄氧基-3-[(二甲基磺酰基)氨基]苯基}-2-羟乙基)氨基]-2-甲基丙基}苯基)-N-[(4′-羟基联苯-3-基)甲基]-乙酰胺；

叔-丁基-[2-(3-{[(4′-羟基联苯-3-基甲基)-氨甲酰基]-甲基}-苯基)-1，1-(二甲基)乙基]氨基甲酸酯；

2，2，2-三氯-N-[2-(3-{[4′-羟基-联苯-4-基甲基)氨甲酰基]-甲基}-苯基)-1，1-二甲基-乙基]乙酰胺；

2-氯-N-{2-[3-(2-{[(4′-羟基联苯-3-基)甲基]氨基}-2-氧代乙基)苯基]-1，1-二甲基乙基}乙酰胺；

2-[3-(2-氨基-2-甲基丙基)-苯基]-N-[(4′-羟基联苯-3-基)甲基]乙酰胺及

N-[(R)-2-苄氧基-5-环氧乙烷基-苯基]-二甲烷磺酰胺。