HK1112021B - Variant forms of urate oxidase and use thereof - Google Patents

Claims (28)

1. Eine isolierte, gekürzte Säugetier-Uricase, bestehend aus einer Säugetier-Uricase-Aminosäuresequenz, die am Amino-Terminus oder am Carboxy-Terminus oder sowohl am Amino- als auch Carboxy-Terminus um 6 Aminosäuren gekürzt ist; und zudem eine Aminosäuresubstitution durch Threonin bei Position 7 (D7T), eine Aminosäuresubstitution durch Threonin bei Position 46 (S46T), eine Aminosäuresubstitution durch Lysin bei Position 291 (R291 K) und eine Aminosäuresubstitution durch Serin bei Position 301 (T301 S) umfasst, wobei die genannte Kürzung und Aminosäuresubstitution einer natürlich vorkommenden Schwein-Uricase mit einer Aminosäuresequenz SEQ ID NR. 11 entspricht.
2. Die Uricase entsprechend Anspruch 1, die zudem eine Amino-Terminus-Aminosäure umfasst, wobei die Amino-Terminus-Aminosäure Alanin, Glycin, Prolin, Serin oder Threonin ist.
3. Die Uricase entsprechend Anspruch 1, die aus einer Aminosäuresequenz SEQ ID NR.: 8 besteht.
4. Die Uricase entsprechend einem der Ansprüche 1-3, wobei die Uricase mit einem Polymer konjugiert ist.
5. Ein Polyethylenglycol-Uricase-Konjugat, das die Uricase von einem der Ansprüche 1-3 umfasst.
6. Das Konjugat entsprechend Anspruch 5, das an jeder Uricase-Untereinheit 2 bis 12 Polyethylenglycol-Moleküle aufweist.
7. Das Konjugat entsprechend Anspruch 5, wobei jedes Polyethylenglycol-Molekül eine Molekülmasse von zwischen 1 kD und 100 kD aufweist.
8. Eine pharmazeutische Zusammensetzung bestehend aus einer Uricase von einem der Ansprüche 1-4.
9. Das isolierte, gekürzte Säugetier-Uricase-Protein entsprechend Anspruch 1, wobei die N-terminale Aminosäure Methionin ist.
10. Die Uricase entsprechend Anspruch 9, welche die Aminosäuresequenz SEQ ID NR. 7 umfasst.
11. Eine isolierte Nukleinsäure bestehend aus einer Neukleinsäuresequenz, welche die Uricase von Anspruch 1, Anspruch 2, Anspruch 9 oder Anspruch 10 kodiert.
12. Eine isolierte Nukleinsäure bestehend aus einer Nukleinsäuresequenz, die eine Uricase kodiert, welche die Aminosäuresequenz SEQ ID NR. 7 oder SEQ ID NR. 8 umfasst.
13. Die isolierte Nukleinsäure entsprechend Anspruch 12, wobei die Nukleinsäuresequenz SEQ ID NR. 9 oder SEQ ID NR. 10 umfasst.
14. Die isolierte Nukleinsäure entsprechend Anspruch 11 oder 12, wobei die Nukleinsäuresequenz funktionsfähig mit einem heterologen Promoter verbunden ist.
15. Die isolierte Nukleinsäure entsprechend Anspruch 14, wobei der Promoter der osmB-Promoter ist.
16. Ein Nukleinsäurevektor, der die Nukleinsäure von Anspruch 14 umfasst.
17. Eine isolierte Host-Zelle, die den Vektor von Anspruch 16 umfasst.
18. Ein Verfahren zur Produktion einer Uricase bestehend aus den Schritten des Züchtens einer Host-Zelle von Anspruch 17 unter solchen Bedingungen, dass die Nukleinsäuresequenz durch die Host-Zelle exprimiert wird und die exprimierte Uricase isoliert wird.
19. Die Uricase entsprechend Anspruch 10, welche aus der Aminosäuresequenz SEQ ID NR. 7 besteht.
20. Ein Polyethylenglycol-Uricase Konjugat, das die Uricase von Anspruch 19 umfasst.
21. Eine pharmazeutische Zusammensetzung, die das Konjugat von Anspruch 5 oder 20 umfasst.
22. Die Zusammensetzung entsprechend Anspruch 8 oder 21, die sich für langzeitige Verabreichung eignet.
23. Eine Zusammensetzung entsprechend einem der Ansprüche 8, 21, oder 22 zur Verwendung bei der Reduktion von Harnsäurespiegeln in einer biologischen Flüssigkeit eines Subjekts.
24. Die Zusammensetzung zur Verwendung bei der Reduktion von Harnsäurespiegeln in einer biologischen Flüssigkeit eines Subjekts entsprechend Anspruch 23, wobei die biologische Flüssigkeit Blut ist.
25. Die Uricase entsprechend Anspruch 1, wobei die Uricase eine Schweine-,Rinder-, Schaf- oder Pavianleber-Urikase oder eine Chimäre dieser ist.
26. Das Konjugat entsprechend Anspruch 7, wobei jedes Polyethylenglycol-Molekül eine Molekülmasse von zwischen 1 kD und 50 kD aufweist.
27. Das Konjugat entsprechend Anspruch 26, wobei jedes Polyethylenglycol-Molekül eine Molekülmasse von zwischen 5 kD und 20 kD aufweist.
28. Das Konjugat entsprechend Anspruch 27, wobei jedes Polyethylenglycol-Molekül eine Molekülmasse von ca. 10 kD aufweist.