HK1185621B - Clostridium difficile antigens - Google Patents

Claims (19)

1. Protéine de fusion, constituée de ou comprenant une première séquence d'acides aminés et une deuxième séquence d'acides aminés, dans laquelle :

   a) la première séquence d'acides aminés est apportée par une séquence d'acides aminés ayant une identité de séquence d'au moins 80 % avec une séquence d'acides aminés constituée des résidus 874-1 850 d'une séquence de toxine A de C. difficile ou des résidus 1 444-1 851 d'une séquence de toxine B de C. difficile ; et

   b) la deuxième séquence d'acides aminés est apportée par une séquence d'acides aminés ayant une identité de séquence d'au moins 80 % avec une séquence d'acides aminés constituée d'une longue unité de répétition située dans les résidus acides aminés 1 851-2 710 d'une séquence de toxine A de C. difficile ou dans les résidus acides aminés 1 852-2 366 d'une séquence de toxine B de C. difficile ;

   sous réserve que la protéine de fusion ne soit pas un polypeptide comprenant les résidus acides aminés 543-2 710 d'une toxine A de C. difficile ; sous réserve que la protéine de fusion ne soit pas un polypeptide comprenant les résidus acides aminés 543-2 366 d'une toxine B de C. difficile ; et la protéine de fusion ne présente pas d'activité de la cystéine protéase, une partie ou la totalité de la séquence d'acides aminés apportant ladite activité étant absente.
2. Protéine de fusion selon la revendication 1, dans laquelle la première séquence d'acides aminés est apportée par une séquence d'acides aminés ayant une identité de séquence d'au moins 80 % avec une séquence d'acides aminés constituée des résidus 770-1 850 ou 774-1 850 ou 794-1 850 ou 814-1 850 ou 834-1 850 ou 854-1 850 d'une séquence de toxine A de C. difficile ; ou des résidus 1 164-1 851 ou 1 204-1 851 ou 1 244-1 851 ou 1 284-1 851 ou 1 324-1 851 ou 1 364-1 851 d'une séquence de toxine B de C. difficile.
3. Protéine de fusion selon la revendication 1, dans laquelle la première séquence d'acides aminés est apportée par une séquence d'acides aminés qui a une identité de séquence d'au moins 80 % avec une séquence d'acides aminés constituée des résidus 770-1 850 d'une séquence de toxine A de C. difficile ou des résidus 767-1 851 d'une séquence de toxine B de C. difficile.
4. Protéine de fusion selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle la deuxième séquence d'acides aminés est apportée par une séquence d'acides aminés ayant une identité de séquence d'au moins 80 % avec une séquence d'acides aminés sélectionnée parmi une ou plusieurs des séquences d'acides aminés 1 851-2 389 ou 1 851-2 007 ou 2 008-2 141 ou 2 142-2 253 ou 2 254-2 389 ou 2 390-2 502 ou 2 503-2594 ou 2 595-2 710 d'une séquence de toxine A de C. difficile.
5. Protéine de fusion selon la revendication 4, dans laquelle la deuxième séquence d'acides aminés est apportée par une séquence d'acides aminés ayant une identité de séquence d'au moins 80 % avec une séquence d'acides aminés sélectionnée parmi les séquences d'acides aminés 1 851-2 007 ou 1 851-2 141 ou 1 851-2 253 ou 1 851-2 389 ou 1 851-2 502 ou 1 851-2 594 ou 1 851-2 710 d'une séquence de toxine A de C. difficile.
6. Protéine de fusion selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle la deuxième séquence d'acides aminés est apportée par une séquence d'acides aminés ayant une identité de séquence d'au moins 80 % avec une séquence d'acides aminés sélectionnée parmi les séquences d'acides aminés 1 852-2 007 ou 2 008-2 139 ou 2 140-2 273 ou 2 274-2 366 d'une séquence de toxine B de C. difficile.
7. Protéine de fusion selon la revendication 6, dans laquelle la deuxième séquence d'acides aminés est apportée par une séquence d'acides aminés ayant une identité de séquence d'au moins 80 % avec une séquence d'acides aminés sélectionnée parmi les séquences d'acides aminés 1 852-2 007 ou 1 852-2 139 ou 1 852-2 273 ou 1 852-2 366 d'une séquence de toxine B de C. difficile.
8. Protéine de fusion selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle la première séquence d'acides aminés est apportée par une séquence d'acides aminés ayant une identité de séquence d'au moins 80 % avec une séquence d'acides aminés constituée des résidus 767-1 850 d'une séquence de toxine A de C. difficile ou des résidus 767-1 851 d'une séquence de toxine B de C. difficile, et dans laquelle la deuxième séquence d'acides aminés est apportée par une séquence d'acides aminés ayant une identité de séquence d'au moins 80 % avec une séquence d'acides aminés constituée des résidus 1851-2 710 d'une séquence de toxine A de C. difficile ou des résidus 1 852-2 366 d'une séquence de toxine B de C. difficile ; ou la protéine de fusion comprenant ou étant constituée d'une séquence d'acides aminés ayant une identité de séquence d'au moins 80 % avec une séquence d'acides aminés constituée des résidus 770-2 710 ou 770-2 389 d'une séquence de toxine A de C. difficile.
9. Protéine de fusion selon l'une quelconque des revendications précédentes, ladite protéine de fusion, à part les séquences d'acides aminés de toxine A et/ou de toxine B définies ci-dessus, ne contenant aucune séquence additionnelle d'acides aminés de toxine A et/ou de toxine B.
10. Protéine de fusion selon l'une quelconque des revendications précédentes, destinée à une utilisation comme antigène dans un procédé de génération d'un anticorps qui se lie à une toxine A de C. difficile et/ou à une toxine B de C. difficile.
11. Procédé in vitro d'isolation d'anticorps qui se lient à une toxine A de C. difficile et/ou à une toxine B de C. difficile, ledit procédé comprenant :

    a) l'immobilisation sur une surface (par exemple sur une matrice dans une colonne) d'une ou plusieurs protéines de fusion de C. difficile selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 ;

    b) la mise en contact desdites une ou plusieurs protéines de fusion immobilisées avec une solution contenant des anticorps qui se lient à une toxine A et/ou à une toxine B de C. difficile ;

    c) le fait de laisser lesdits anticorps se lier auxdites une ou plusieurs protéines de fusion, en formant ainsi un complexe lié d'anticorps et d'une ou plusieurs protéines de fusion ;

    d) l'élimination par lavage de tous les anticorps ou de toutes les protéines qui se sont pas liés ; et

    e) l'élution des anticorps liés à partir de la surface, en produisant ainsi des anticorps purifiés par affinité.
12. Anticorps polyclonaux qui se lient à et neutralisent une toxine A de C. difficile et/ou une toxine B de C. difficile, lesdits anticorps pouvant être obtenus par un procédé selon la revendication 10 ou la revendication 11, et lesdits anticorps polyclonaux comprenant des anticorps qui ne se lient pas sensiblement au domaine effecteur et/ou au domaine de la cystéine protéase d'une toxine A ou d'une toxine B de C. difficile ; et lesdits anticorps se liant à un épitope présenté par les résidus 1 500-1 850 d'une toxine A de C. difficile et/ou par les résidus 1 500-1 851 d'une toxine B de C. difficile.
13. Anticorps selon la revendication 12, lesdits anticorps comprenant une IgG entière, des anticorps Fab ou des anticorps F(ab')₂.
14. Protéine de fusion selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 et/ou anticorps polyclonaux selon la revendication 12 ou la revendication 13, destinés à une utilisation dans la prévention, le traitement ou la suppression d'une infection à Clostridium difficile (ICD) ; préférablement à une utilisation dans la prévention, le traitement ou la suppression d'une ICD chez un humain.
15. Quantité thérapeutiquement efficace d'une protéine de fusion selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 et/ou d'anticorps polyclonaux selon la revendication 12 ou la revendication 13, destinée à une utilisation dans une méthode de prévention, de traitement ou de suppression d'une ICD chez un humain, ladite méthode comprenant l'administration de ladite quantité thérapeutiquement efficace d'une protéine de fusion et/ou d'anticorps polyclonaux à un humain.
16. Quantité thérapeutiquement efficace d'une protéine de fusion destinée à une utilisation selon la revendication 15, ladite méthode comprenant l'administration de ladite quantité thérapeutiquement efficace de ladite protéine de fusion dans le cadre d'une polythérapie avec un ou plusieurs antigènes additionnels sélectionnés parmi un antigène non-toxine de C. difficile, des cellules bactériennes entières inactivées ou atténuées de C. difficile, et un extrait cellulaire de C. difficile ; et

    a) optionnellement, un ou plusieurs antigènes sélectionnés parmi 1) un antigène issu d'une bactérie causant une infection nosocomiale, et 2) des cellules bactériennes entières inactivées ou atténuées d'une bactérie causant une infection nosocomiale ; et

    b) optionnellement, un ou plusieurs antibiotiques, tels qu'un antibiotique efficace contre une bactérie causant une infection nosocomiale.
17. Quantité thérapeutiquement efficace d'anticorps polyclonaux destinée à une utilisation selon la revendication 15, ladite méthode comprenant l'administration de ladite quantité thérapeutiquement efficace desdits anticorps polyclonaux dans le cadre d'une polythérapie avec un ou plusieurs anticorps additionnels sélectionnés parmi un anticorps qui se lie à un antigène non-toxine de C. difficile, et un anticorps qui se lie à des cellules bactériennes entières de C. difficile ; et

    a) optionnellement, un ou plusieurs anticorps sélectionnés parmi 1) un anticorps qui se lie à un antigène issu d'une bactérie causant une infection nosocomiale, et 2) un anticorps qui se lie à des cellules bactériennes entières d'une bactérie causant une infection nosocomiale ; et

    b) optionnellement, un ou plusieurs antibiotiques, tels qu'un antibiotique efficace contre une bactérie causant une infection nosocomiale.
18. Utilisation d'anticorps polyclonaux selon la revendication 12 ou la revendication 13 dans un procédé de dosage immunologique in vitro pour confirmer la présence ou l'absence d'une infection à C. difficile dans un échantillon d'un patient, la présence d'une infection à C. difficile étant confirmée par la détection de la liaison dudit anticorps à une toxine A et/ou à une toxine B de C. difficile présente dans ledit échantillon, et l'absence de détection de la liaison dudit anticorps à une toxine A et/ou à une toxine B de C. difficile présente dans ledit échantillon confirmant l'absence d'infection à C. difficile.
19. Utilisation d'une protéine de fusion selon l'une quelconque des revendications 1 à 10 dans un procédé de dosage immunologique in vitro pour confirmer la présence ou l'absence d'une infection à C. difficile dans un échantillon d'un patient, la présence d'une infection à C. difficile étant confirmée par la détection de la liaison de ladite protéine de fusion à un anticorps présent dans ledit échantillon, et l'absence de détection de la liaison de ladite protéine de fusion à un anticorps présent dans ledit échantillon confirmant l'absence d'infection à C. difficile.