HK1169325B - 辣木属的种的完整种子的提取物及其在化妆品和/或皮肤病学组合物中的用途 - Google Patents

Description

辣木属的种的完整种子的提取物及其在化妆品和/或皮肤病学组合物中的用途

技术领域

本发明涉及含有油(包括甘油三酯、脂肪酸和极性脂质)和多酚的辣木属的种(Moringa sp.)的完整种子的提取物及其在化妆品和/或皮肤病学组合物中的用途。

背景技术

辣木为印度本地的小树，但在世界各地栽培并在许多其非常普及的环境中移植。存在属于辣木科的13个辣木属的种，辣木(M.oleifera)(同义词：印度辣木(Moringa pterygosperma))是最公知的。

辣木(Moringa oleifera)为小树，高4至8米，具有开放树冠以伞形式蔓延。树叶为落叶性的，30至70n cm长，花为白色且极为芳香，果实为线性伸长囊、三角形、皮质且悬垂的，长度达到30至40cm。种子为圆角三角形，1.2cm长且1cm宽，并具有三个从种子延伸的2cm长的膜质翼瓣。

所述树在热带、潮湿或极干燥气候中野生或栽培，其可在极端条件下存活并极快速生长。其极深根系允许其在无水下忍受数月。

其具有极多俗名，包括本树(Ben tree)、翼本(Winged Ben)、不死(neverdié)、Anamambo、辣根树、鼓槌树，以及不死树或“奇迹树”。实际上，已知印度草药医学(ayurvedic medicine)除了具有极显著的营养价值之外，还治疗300种疾病。果实煮熟食用，树叶作为蔬菜消耗并具有在某些国家解决营养失调的营养价值。

富含油酸的食用油衍生自种子，所述种子也用作消毒水的絮凝剂。所述油通过已去外皮的种子的压力提取或己烷提取而获得。利用絮凝剂性质，在压制之后回收油籽饼。

当种子仍然绿时，其可作为豆类食用。成熟种子含有约40％的油。来自辣木属的种的油为高品质食用油(类似于橄榄油)，其也在香料厂中使用，用于制造肥皂或作为灯油(其对氧化极稳定)。

在传统医学中，油在应用中用于在痛风或风湿病发病过程中缓解疼痛(The Indian Materia Medica，pp 811-816)。口服给药的种子用作退热剂(Hukkeri等人，Indian J.Pharm.Sci.(2006)68，pp.124-126)。

由于其包含的甘油三酯，通过压制或通过极非极性提取(特别使用己烷)获得的来自种子的油以其滋养性质而广泛用于美容术。

描述了水性种子提取物在美容术中的用途：其包含的肽和蛋白质将具有防皱和净化性质：首先将种子去壳并脱脂(美国专利6500470和2006/0275247)。自辣木属的种的完整种子或去壳种子提取的水性脱脂蛋白质级分对皮肤具有保湿、修复和防皱作用(欧洲专利1064008)。所述种子的蛋白质级分的特征可在于“非常极性”。

根据文献，所述种子由甾醇类(菜油甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇、Δ5-燕麦甾醇、赤桐甾醇......)、脂肪酸(C18:1-油酸-68至76％、C16:06至7.8％、C18:04至7.6％、C20:02.8至4％和C22:05至6.7％)、蛋白质(26至32％)、纤维、生育酚(α、γ、δ：分别为油的134、93和48mg/kg)组成。

种子也包含芥子油苷，包括4-(α-L-吡喃鼠李糖基氧基)-苄基芥子油苷。也已描述辣木属的种的树叶和种子包含一些细胞激肽类，如玉米素、二氢玉米素和异戊烯腺嘌呤(美国专利2006/0222682)。

发明内容

本申请人已说明了包含油(包括甘油三酯、脂肪酸和极性脂质)和多酚的辣木属的种的完整种子的特定提取物用作化妆品和/或皮肤病学组合物中的活性成分的用途。

因此，本发明的目的是含有油(包括甘油三酯、脂肪酸和极性脂质)和多酚的辣木属的种的完整种子的提取物。在本发明的上下文中，“完整种子”应理解为外皮未被去除的种子。

辣木属的种的完整种子的提取物的特征在于(以相对于干提取物的重量的重量％计)：

-5％至50％含量的油，其包含(i)2％至10％的甘油三酯和脂肪酸以及(ii)5％至15％的极性脂质；

-0.01％至5％含量的总多酚(以100g干提取物的焦棓酚的g表示)。

根据本发明的特性，所述提取物具有25％至40％含量的油(以相对于干提取物的重量的重量％计)。

根据本发明的另一特性，辣木属的种优选为辣木(Moringaoleifera)或象腿树(Moringa drouhardii)。

根据本发明的所述辣木属的种的提取物(已说明其化妆品和皮肤病学价值(valorization))自辣木属的种的完整种子获得，所述辣木属的种的完整种子有利地进行干燥、研磨，然后经受至少一次利用中等极性溶剂的提取。

在本发明的上下文中，术语“中等极性溶剂”应理解为选自单独使用或组合使用的C1至C4醇、丙酮、水/醇混合物和水/丙酮混合物的溶剂。

优选地，其为乙醇/水混合物。有利地，该乙醇/水混合物的特征可在于9/1至7/3(v/v)的各种比例的乙醇/水。

甚至更有利地，所述中等极性溶剂为9/1或3/1(v/v)的乙醇/水混合物。

提取在搅拌下或在静态条件下，在回流下或在环境温度下进行30分钟至48小时的持续时间，植物/溶剂的体积比可为1/5至1/20。提取可重复2或3次。

然后通过离心或过滤从所述提取物分离残渣，可或多或少地浓缩溶液直至获得产率为5％至10％的干提取物。所得的提取物不是非常均匀，可在干燥步骤过程中以相对于提取的干物质的质量比例(其可为1％至75％)加入载体(support)。所述载体可为麦芽糊精、乳糖、二氧化硅或使所述提取物溶解的任何其他美容学可接受的载体，例如各种比例的丙二醇/乙氧基化油醇。

所得的辣木属的种提取物的特征在于其油(包括甘油三酯、脂肪酸和极性脂质)和多酚含量。

本发明的另一目的涉及这种辣木属的种提取物用作抗衰老活性成分。

优选地，所述提取物适于抵抗具有成熟皮肤的人的所有皮肤老化迹象。在本发明的上下文中，术语“成熟皮肤”应理解为通常超过55岁，优选超过60岁的人的皮肤。

特别地，皮肤的老化迹象的特征在于失去皮肤的坚度和/或弹性和/或紧张性和/或柔软度，以及皱纹和细线的出现。

因此本发明的目的是提供一种能够为表皮/成熟皮肤同时提供保护、保湿和滋养的新型活性成分，并因此提供给皮肤光滑、抗松弛、重组效果。

通过不同类型的测试，本申请人评价了根据本发明的辣木属的种提取物的总体抗衰老作用。

已显示该新型提取物同时带来各种所需的作用，即：

-抗氧化剂、抗自由基作用以限制与内部和外部老化相关的氧化过程；

-对随年龄变化的皮肤(表皮的蛋白质和脂质结构)的屏障功能的修复的作用：所述提取物的使用使得有可能限制皮肤脱水，并因此保护皮肤；

-对细胞外基质的作用以提高成熟皮肤的机械性质(坚度、弹性、紧张性)。

根据本发明的提取物促进皮肤的保湿、光滑、不松弛和再构造。因此根据本发明的提取物使得有可能美化和统一肤色。

本发明的另一目的涉及提取物的用途，如限定为增强和修复皮肤的屏障功能。

在本发明的上下文中，术语“增强皮肤的屏障功能”意指提高皮肤的屏障功能。

皮肤的基本功能之一是确保身体和外部环境之间的屏障，在一方面使自身对抗环境的真菌、细菌和过敏原对表皮的渗透(“由外而内”)，在另一方面对抗失水(“由内而外”)。

表皮为持续更新的外胚层源的多层表皮。不同形态性质和细胞组成的数个层可由内而外区别：基底层、角化细胞具有极高增殖能力(这允许表皮的自动更新)的细胞层、基底上层(粒状、刺状层)和最终的角质层(角化层，SC)。这些阶段对应于角化细胞分化的越来越高的水平。一旦基底层的角化细胞开始向表皮的表面迁移的过程(一种程序性细胞死亡的过程)，它们失去它们的增殖能力，在所述向表皮的表面迁移的过程中角化细胞表达分化程序，从而导致角化。皮肤屏障功能首先由角质层进行，所述角质层为由两个隔室(compartments)组成的固体密封组装体：

-富含脂质的角质细胞间粘合剂：以片状组织并共价连接至细胞的脂质限制分子通过角质层的渗透；

-失去细胞单元的角化死细胞(角质细胞)的层，其对应于角化细胞分化的最终阶段。

细胞外脂质粘合剂以及角质层的所有细胞元素的完整性，和增殖与角化细胞分化之间的平衡对于保持功能性表皮屏障功能是重要的。

慢性或急性的屏障功能的微扰使得身体对外部应激和脱水敏感。

当皮肤的屏障功能被改变并必须被重建时，屏障功能的提高是特别决定性的。在响应时间(皮肤老化)或与荷尔蒙环境或应激相关的某些生理状态中就是这样。允许返回体内平衡的该修复速度被延迟。此外，皮肤屏障功能在大多数的人群皮肤的最常见病理学(其通常伴随炎症成分(皮肤的干燥......))中被改变。

当待巩固皮肤的初始功能，特别地以提供给身体更好的对身体所暴露的外部应激(特别是环境类型(紫外线、湿度水平、外部温度、污染、燃烧))的抵抗力时，提高屏障功能也是有利的。皮肤的屏障功能包括对其所经受的应激的自然防御的所有机制。进行该功能的重要成分位于表皮的最表面部分(在称为角质层(stratum corneum)的角质层区域中)。

已由不同测试说明如所限定的提取物有利地具有修复表皮的脂质结构和蛋白质结构的作用。

根据本发明的提取物的使用对于皮肤屏障功能的增强和修复特别有效。

本发明的另一目的涉及化妆品和/或皮肤病学组合物，其包含根据本发明的辣木属的种的完整种子的提取物作为活性成分以及至少一种化妆品和/或皮肤病学可接受的赋形剂。

根据本发明的所述化妆品和/或皮肤病学组合物包含对于100g所述组合物在0.1g至5g之间的辣木属的种的完整种子的干提取物的量。

有利地，所述辣木属的种的提取物的量对于100g化妆品和/或皮肤病学组合物在0.25g至1g之间。

更特别地，本发明涉及抗老化化妆品组合物。优选地，所述化妆品组合物适于抵抗具有成熟皮肤的人的所有皮肤老化迹象。

根据本发明的抗老化化妆品组合物还可含有一种或几种活性成分，如适于防晒的活性成分和/或适于皮肤色素减退的活性成分。

适于防晒的活性成分进一步选自已知其抗UVA作用、抗UVB作用的化学合成分子，如氰双苯丙烯酸辛酯(octocrylene)和/或二辛基丁酰胺基三嗪酮和/或双乙基己基氧基苯基甲氧基苯基三嗪。

此外，适于皮肤色素减退、使肤色变亮和统一的活性成分可为烟酰胺、维生素C及其衍生物。

考虑到获得抗老化化妆品组合物，选择化妆品可接受的赋形剂以能够局部给药或口服给药。

有利地，局部形式选自乳状物、霜剂、药膏、油、洗液、凝胶、发泡凝胶、发膏、喷雾等。

有利地，口服形式选自片剂、胶囊、锭剂、粉末、颗粒、溶液或口服混悬剂。

更特别地，本发明也涉及适于加强和修复皮肤的屏障功能的化妆品和/或皮肤病学组合物。

考虑到获得增强并修复皮肤的屏障功能的化妆品和/或皮肤病学组合物，选择化妆品和/或皮肤病学可接受的赋形剂以能够局部给药。

有利地，局部形式选自乳状物、霜剂、药膏、油、洗液、凝胶、发泡凝胶、发膏、喷雾等。

本发明的另一目的涉及一种对抗具有成熟皮肤的人的所有皮肤老化迹象的化妆方法，其特征在于所述方法涉及局部给药或口服给药使用根据本发明的辣木属的种的完整种子的提取物。

如下的制备和组合物以非限制性实施例的方式提供。

具体实施方式

植物提取物的制备的实施例

实施例1

通过在80℃下两次逆流提取，在17.5L乙醇90(乙醇/水的比例＝9/1)中提取2.5kg干燥并研磨的辣木的完整种子。在环境在50℃冷却之后，通过固/液分离回收经提取的溶液。干燥样品，从而获得243g提取物。该提取物的特征在于36％含量的油和0.02％含量的总多酚(以100g干提取物的焦棓酚的g表示)，所述油包含(i)10％的甘油三酯和脂肪酸以及(ii)10％的极性脂质。

实施例2

将20g干燥并研磨的辣木的完整种子在100ml乙醇/水混合物75∶25中回流提取1小时。经提取的溶液通过固/液分离回收，并利用在50℃下的旋转蒸发器干燥。由此获得1.66g棕色糊状物形式的提取物，所述棕色糊状物经滴定为5％的油和0.68％表示为焦棓酚的总多酚。

实施例3

将20g干燥并研磨的象腿树的完整种子在200ml乙醇/水90∶10混合物中回流提取1小时。经提取的溶液通过固/液分离回收，并使用在50℃下的旋转蒸发器干燥。由此获得1.29g黄棕色糊状物形式的提取物，所述黄棕色糊状物经滴定为35％的油(甘油三酯、脂肪酸和极性脂质)和1.3％表示为焦棓酚的总多酚。

化妆品组合物的实施例

实施例4：眼部护理

实施例5：增白新生霜

抗氧化剂活性的评价

DPPH测试

根据本发明的辣木的种子提取物的抗氧化剂活性使用DPPH测试进行评价。该测试基于稳定的自由基2.2-二苯基-1-苦基肼基(DPPH)的捕获抗氧化剂的能力的测量。当所述稳定自由基与氢给体反应时，具有在517nm处的吸收的该稳定的自由基被还原为相应的肼。

结果：

所得结果以IC50表示，所述IC50对应于提供0.06mM的DPPH的甲醇溶液的吸光度的50％降低的浓度。

测试产品
		完整种子的非极性提取物(己烷)	＞1000(失活的)
使用EtOH 90％的不含外皮的种子提取物	1000(失活的)
		根据实施例1的提取物	280
使用EtOH 90％的外皮的提取物	30
		维生素E(参照)	6-10

根据本发明的提取物具有大部分由存在于外皮中的分子所提供的抗氧化剂活性。

化学发光

其为通过光化学信号产生自由基(超氧化物自由基O₂°^-)的方法。氧化强度比在通常条件下获得的氧化强度大1000倍。检测通过化学发光进行，并允许评价抗氧化剂油溶性或水溶性提取物或分子。结果分别以维生素C或Trolox(6-羟基-2，5，7，8-四甲基苯并二氢吡喃-2-羧酸)的当量表示。灵敏度为纳摩尔数量级。

结果：

根据实施例1的65μg提取物是获得与对于1μg trolox所检测的活性相当的活性所必需的：相当于番茄红素(已知其抗氧化剂活性的分子)的活性。

该测试也确定了所观察到的抗氧化剂活性主要由外皮的分子带来：对于1μg trolox(活性相当于染料木黄酮)，仅需要4，7μg外皮的EtOH 90％提取物。这确定了根据本发明使用辣木属的种的完整种子的重要性。

自由基导致皮肤细胞以及细胞膜和线粒体的DNA的改变，自由基的产生由于外部应激(冷、污染、烟草、UV)而增加。根据实施例1制得的提取物的抗自由基活性使得有可能抵抗内部和外部皮肤老化。

对屏障功能的修复的活性的评价

表皮通过为身体提供化学和机械屏障而起到主要保护作用。其确保保持密封，即皮肤屏障功能。角质细胞(角质层的角化细胞)联合脂质基质确保该功能的大部分。然而，更深的层协助将该功能的作用物设定在适当位置。表皮的角化细胞的分化能力保证将功能选择性渗透型屏障设定在适当位置(Elias PM.J Invest Dermatol 125183-200(2005))。

就蛋白质而言，表皮分化主要集中于结构蛋白质的进化，所述结构蛋白质为角蛋白，并有助于表皮的构造完整性。它们的表达随角化细胞的成熟程度而变化。基底角蛋白1(base keratin 1)和酸性角蛋白10为角化细胞分化的早期标记物，其存在于表皮的基底层。可跟踪该生物过程的其他标记物(后期标记物)的表达，如角质包膜的蛋白质(如总苞蛋白)的表达，以及在结构蛋白质彼此交联开始和结构蛋白质与角化细胞脂质、转谷酰胺酶(如转谷酰胺酶1(TG1))的交联开始的某些主要的酶的表达(Houben E等人，Skin PharmacolPhysiol.；20(3)：122-32(2007))。

同时，角化细胞脂质的合成和转运在皮肤屏障不可缺少的角质细胞间脂质粘合剂的开始时，所述角质细胞间脂质粘合剂的形成表示终末表皮分化的最终阶段。该细胞外脂质基质将主要屏障提供给水和电解质的经皮移动(Mizutani Y.等人，FEBS Lett.563：93(2004))。因此，一定数量的酶和脂质转运蛋白的角化细胞表达随分化而增大。特别地，转运蛋白ABC(腺苷三磷酸结合盒转运蛋白)家族的某些成员在将脂质屏障设置在适当位置的步骤中起到主要作用。因此，对在板层小体中脂质前体的转移不可缺少的ABC G1和ABC A12为敏感标记物，所述ABC G1特异性地转运甘油。表皮神经酰胺起到主要特异性作用，并且是皮肤屏障的功能水平的必要标记物。因此，协助皮肤神经酰胺合成的酶的表达和活性在表皮屏障功能破坏过程中随表皮分化水平而特异性增加。即，特别地，鞘脂C4-氢化酶/Δ-4脱饱和酶或hDES2的情况，所述鞘脂C4-氢化酶/Δ-4脱饱和酶或hDES2的二羟基神经酰胺氢化酶活性有助于人类皮肤植物神经酰胺(phytoceramide)的合成(Feingold，K.R.J Lipid Res 48：2531-2546(2007))。

首先，根据本发明的提取物的作用首次通过分化的正常人类角化细胞(NHK)模型进行研究。

随后该作用通过角化细胞衰老模型进行研究。

正常人类角化细胞的分化模型

分析了辣木属的种的提取物对在表皮脂质、ABC G1和hDES2的合成或转运中涉及的不同蛋白质的基因表达的作用。

结果：

结果表示为通过NHK(相对于未处理的细胞)表达的表皮分化的不同标记物的基因表达(mRNA)的刺激百分比。显著正面作用考虑为100％刺激。所得结果列于下表中。

细胞处理	ABC G1	hDES2
			Vit D35μM	170％	780％
罗格列酮10μM	330％	190％
			提取物实施例1(20μg/ml)	150％	100％

表1：根据分化的正常人类角化细胞(NHK)模型，维生素D3、罗格列酮和根据本发明的提取物的作用

20μg/ml的根据实施例1制得的提取物产生hDES2和ABC G1的基因表达。根据实施例1制得的提取物允许在将疏水性屏障设置于适当位置开始时修复脂质表皮分化，所述疏水性屏障允许限制特别是在成熟皮肤中遇到的皮肤脱水。

角化细胞衰老模型

皮肤屏障的再生能力在成熟受试者中被降低(Tagami，Arch.Derm.Res.2007)，本申请人已使用由经H₂O₂处理的人类角化细胞HaCaT的谱系模拟角化细胞衰老过程的模型。本申请人已分析辣木属的种的提取物对蛋白质分化的标记物的表达(mRNA)的修复的作用，所述蛋白质分化的标记物的表达被细胞(如K1和总苞蛋白)的衰老所抑制。

结果：

1和10μg/ml的根据实施例1的提取物允许修复K1(分别为11和35％)和总苞蛋白(对于10μg/ml为15％)的表达。

结论

由两个模型获得的结果良好显示了本发明的提取物的作用(对于表皮的脂质结构和蛋白质结构的修复)的互补性。

细胞外基质的活性的评价

细胞外基质(ECM)为组织的具有结构和调节作用的动态结构。其给予皮肤肿胀(turgescence)和机械性质：坚度、弹性和紧张性。在表皮区域中，细胞外基质占据细胞间空间，并在保持表皮结构中起到作用。其也提供表皮细胞之间的交换，并在细胞活性中起到作用。表皮的ECM特别地由IV型胶原(纤维蛋白质)构成。当细胞衰老时，ECM的组分主要被称为基质金属蛋白酶或MMP的锌内肽酶型酶所降解。后者积极参与结疤过程，但它们也促成皮肤松弛和皱纹(皱纹为皮肤老化的最初迹象)的出现。其中，MMP-9为明胶酶，其具有抗变性胶原分子(胶质)的活性，但也可分裂IV、V和VII型胶原的天然分子。

在模拟细胞衰老过程的经H₂O₂处理的人类角化细胞HaCaT的谱系上分析辣木属的种提取物对MMP-9的mRNA的表达的作用。

结果：

在三种浓度下，显著地在1、10和30μg/ml下，根据实施例1制得的提取物抑制MMP-9的基因表达。

根据实施例1制得的提取物使得有可能修复ECM的机械性质：皮肤的ECM的坚度、弹性和紧张性，也使得有可能修复表皮的蛋白质结构。

Claims (7)

1.辣木属的种的完整种子的提取物，其中所述提取物通过下述方法制备，所述方法包括：

通过在80℃下两次逆流提取，在17.5L乙醇90中，即，乙醇/水的比例＝9/1，提取2.5kg干燥并研磨的辣木的完整种子；

在环境在50℃冷却之后，通过固/液分离回收经提取的溶液；

干燥样品，从而获得243g提取物，

其中该提取物的特征在于36％含量的油和0.02％含量的总多酚，以100g干提取物的焦棓酚的g表示，所述油包含(i)10％的甘油三酯和脂肪酸以及(ii)10％的极性脂质，

其中所述辣木属的种的完整种子的提取物为辣木的完整种子的提取物，其中所述完整种子为外皮未被去除的种子。

2.根据权利要求1所述的辣木属的种的完整种子的提取物在制备抗老化化妆品和/或皮肤病学组合物中的用途。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述抗老化化妆品和/或皮肤病学组合物适于抵抗具有成熟皮肤的人的所有皮肤老化迹象。

4.根据权利要求1所述的辣木属的种的完整种子的提取物在制备抗老化化妆品和/或皮肤病学组合物中的用途，所述抗老化化妆品和/或皮肤病学组合物用于增强并修复皮肤的屏障功能。

5.化妆品和/或皮肤病学组合物，其包含具有活性成分能力的根据权利要求1所述的辣木属的种的完整种子的提取物以及至少一种化妆品和/或皮肤病学可接受的赋形剂。

6.根据权利要求5所述的组合物，其包含对于100g所述组合物在0.1g至5g之间的辣木属的种的完整种子的干提取物的量。

7.根据权利要求5所述的组合物，其还包含一种或多种适于防晒和/或适于皮肤色素减退的活性成分。