HK1168127B - Method of increasing the expression yield of vitamin k-dependent proteins - Google Patents

Claims (15)

1. Procédé pour la fermentation de cellules eucaryotes exprimant une ou plusieurs protéines vitamine K-dépendantes dans lequel un ou plusieurs composés choisis dans une liste comprenant

   i) des formes réduites de vitamine K et/ou

   ii) des formes réduites d'un analogue de vitamine K et/ou

   iii) des formes réduites d'un précurseur de vitamine K

   sont ajoutés au milieu de culture de cellules avant et/ou pendant le processus de fermentation, dans lequel l'analogue de vitamine K comprend une structure de cycle 2-méthyl-1,4-naphtoquinone et peut fonctionnellement se substituer à la vitamine K1 dans la gamma-carboxylation dépendante du cycle de la vitamine K de résidus d'acide glutamique en résidus Gla dans des protéines vitamine K-dépendantes.
2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel les facteurs de coagulation vitamine K-dépendants sont choisis dans une liste constituée de FIX, FVII, FX, FII, protéine C, protéine S, protéine Z, ostéocalcine, la protéine Gla de matrice inhibant la calcification (MGP) ou la protéine du gène 6 spécifique de l'arrêt de croissance régulant la croissance cellulaire (Gas6).
3. Procédé selon la revendication 2 dans lequel les facteurs de coagulation vitamine K-dépendants sont FIX ou FVII.
4. Procédé selon les revendications 1 à 3, dans lequel l'analogue de vitamine K réduit est le bisulfite de ménadione réduit.
5. Procédé selon les revendications 1 à 4, dans lequel l'expression est effectuée dans un bioréacteur.
6. Procédé selon les revendications 1 à 5 dans lequel la fermentation est effectuée dans un mode de prélèvement-remplissage, un mode discontinu, ou un mode de perfusion.
7. Procédé selon les revendications 1 à 6, dans lequel la fermentation est effectuée en utilisant des cellules en suspension ou avec des cellules adhérentes.
8. Utilisation d'un ou plusieurs composés choisis dans une liste comprenant

   i) des formes réduites de vitamine K et/ou

   ii) des formes réduites d'un analogue de vitamine K et/ou

   iii) des formes réduites d'un précurseur de vitamine K

   pour l'expression d'une ou plusieurs protéines vitamine K-dépendantes fonctionnelles dans une culture de cellules par ajout desdits composés au milieu de culture de cellules, dans lequel l'analogue de vitamine K comprend une structure de cycle 2-méthyl-1,4-naphtoquinone et peut fonctionnellement se substituer à la vitamine K1 dans la gamma-carboxylation dépendante du cycle de la vitamine K de résidus d'acide glutamique en résidus Gla dans des protéines vitamine K-dépendantes.
9. Utilisation selon la revendication 8, dans laquelle le rapport de l'activité au taux d'expression d'antigène de la protéine vitamine K-dépendante est augmenté.
10. Utilisation selon les revendications 8 à 9, dans laquelle l'analogue de vitamine K réduit est le bisulfite de ménadione réduit.
11. Utilisation selon les revendications 8 à 10, dans laquelle l'expression est effectuée dans un bioréacteur.
12. Utilisation selon les revendications 8 à 11, dans laquelle la fermentation est effectuée en mode de prélèvement-remplissage.
13. Milieu pour la fermentation de protéines vitamine K-dépendantes supplémentées avec une forme réduite de vitamine K et/ou un analogue de vitamine K et/ou un précurseur de vitamine K, dans lequel l'analogue de vitamine K comprend une structure de cycle 2-méthyl-1,4-naphtoquinone et peut fonctionnellement se substituer à la vitamine K1 dans la gamma-carboxylation dépendante du cycle de la vitamine K de résidus d'acide glutamique en résidus Gla dans des protéines vitamine K-dépendantes.
14. Milieu selon la revendication 13 supplémenté avec du bisulfite de ménadione réduit.
15. Utilisation de formes réduites de vitamine K et/ou un analogue de vitamine K et/ou un précurseur de vitamine K dans le milieu de culture de cellules pour augmenter la viabilité de cellules en fermentation, dans laquelle l'analogue de vitamine K comprend une structure de cycle 2-méthyl-1,4-naphtoquinone et peut fonctionnellement se substituer à la vitamine K1 dans la gamma-carboxylation dépendante du cycle de la vitamine K de résidus d'acide glutamique en résidus Gla dans des protéines vitamine K-dépendantes.