HK1166015B - Plk抑制剂的盐类 - Google Patents

Description

PLK 抑制剂的盐类

本发明涉及PLK抑制剂的新的结晶、水溶性盐类、其制备方法、该新的盐形式的水合物、溶剂化物与多晶型物、其在治疗中的应用及包含它们的药物组合物。

癌症是人类死亡主要的原因；外科手术，辐射和化学治疗是对抗癌症的有用方法.

PLK1是适当有丝分裂的发展必需的丝氨酸苏氨酸激酶。

所有增殖性正常的组织中可见PLK1的表达，而其过表达在一系列的肿瘤、包括乳腺癌，前列腺癌，卵巢癌，肺癌，胃癌和结肠癌中被观察到。当在癌细胞中RNAi导致PLK1耗竭时，抑制增殖和减少活力导致具有4N DNA内容物的细胞周期停滞，接着观察到细胞凋亡。尽管4种不同PLKs家族成员描述于人类，抑制酶活性或PLK1的耗竭足以导致在肿瘤细胞系中G2/M细胞周期阻断和细胞凋亡和在异种移植物模型中肿瘤消退。此外，对于其它PLKs，已经描述了肿瘤抑制功能，并且报告了，在非增殖性、分化的有丝分裂后细胞，例如神经元中表达的是PLK2和PLK3-而不是PLK1-，这表明PLK1特异性化合物可能具有更安全的特性(参见例如：Strebhardt K，等人，NatRev Cancer 2006；6(4)：321-30)

有丝分裂的抑制剂用于癌治疗是广泛接受的用于治疗多种人癌症的临床策略(参见例如：Jackson JR等人，Nature Reviews Cancer2007；7，107-117)。紫杉烷类(紫杉醇和多西他赛)和长春花生物碱(长春新碱和长春碱)如下起作用：稳定微管或使微管去稳定，通过有丝分裂在细胞发展中具有灾难性后果。它们是用于若干肿瘤类型的一线治疗，所述肿瘤类型包括霍奇金氏病，非霍奇金氏淋巴瘤、睾丸癌，神经元细胞和Wilms肿瘤(长春花生物碱)，并且它们是在顺铂-难治的卵巢癌，乳腺癌，肺和食管癌(紫杉烷类)中的二线治疗。但是，由于微管在过程中的作用，例如细胞迁移，吞噬和轴突的转运，使用这些试剂时经常观察到某些毒性，例如外周神经病。

专利申请WO2008074788中被描述和要求保护的吡唑并喹唑啉类(Nerviano Medical Sciences Srl.)是有效的PLK1抑制剂并且因此适用于治疗增殖障碍，特别是癌症。

化合物937具有下列式：

是上述专利申请描述的和要求保护的化合物之一。其中也描述了和要求保护了其制备，包含它的药物组合物和医药用途。

化合物937是1-(2-羟基-乙基)-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，并且其优选的制备描述于上述的专利申请实施例38和40中。

化合物937是难溶于水的晶体化合物，其显示小于0.1mg/ml的在水中的溶解度。

化合物937的溶解度在10％聚山梨酯80的5％葡萄糖溶液中是约4mg/ml，在含水50％聚乙二醇400的5％葡萄糖溶液中是约7mg/ml，并且当配制为盐酸盐或甲磺酸盐原位盐时是约8-9mg/ml。化合物937也适于2-8mg/ml近似范围的水性甲基纤维素(methocel)混悬剂。

得到的游离碱初始配制为原位盐或甲基纤维素悬浮液，以供早期药理及毒理评估使用。尽管解决了早期制剂方法问题，应用的制剂方法不适于发展口服制剂。

活性药物成分临床前研究需要将它溶解在适宜的赋形剂中的可能性。通常目的是赋予化合物水溶性，为了适于可注射的无菌配制剂的制备；快速溶解包含在固体剂型(例如硬明胶胶囊)中的药物物质并且立即-释放片剂也需要充分的水-溶解度。

观察到的化合物937不良溶解度使它难于配制和给药。

此外，游离碱是轻微吸湿性的，因为其显示在90％相对湿度(RH)在25℃最多吸收约1％的水。

湿气吸收对药粉来说也是一种严重的顾虑。例如湿气对药物、赋形剂和制剂的物理、化学和制造性质都具有显著的影响。其也是决定包装、储存、处理及保存期限的一项关键因素，因而成功的开发需要对吸湿性质有一个彻底的了解。

举例来说，当相对湿度超过一个临界水平且固体中的含水量快速增加时，可观察到自无水至水合物形式的转变。这不仅会影响药物本身的物理及药学性质，并且也会影响其生物药物学方面。此外，已经熟知，水合物形式通常相对于相应的无水形式的溶解性更差，其对活性化合物本身的溶解速率性质及其通过胃肠道的吸收特性也具有潜在的不利影响。以相同的方式，在存在湿度时可观察到自结晶至无定形形式的转变，在物理稳定性方面存在潜在缺点。无定形活性药物物质若容易吸收湿气的话，可自大气吸收相对大量的水，直至其溶解为止，同时其化学稳定性也会受到影响，因为经热力学活化的无定形结构更易化学降解及与其他化学物种发生化学相互作用。因而，制剂及活性成分两者的性能及效力皆可显著改变。

此外，游离碱的粉末堆密度是低的，为约90mg/ml。

有利的堆积性质，例如粉末堆密度，也是期望的。更高粉末堆密度涉及更适宜的颗粒形态学，允许改善流动性和导致改善的性质的药物组合物。更高粉末密度允许，例如，更适宜的胶囊制剂制备方法或在类似胶囊尺寸之内更高剂量强度，以及减少待施用的胶囊的数量和/或尺寸的具体可能性，特别是在早期临床期期间。

因此，在治疗中需要化合物937的水溶性盐，其具有良好和可再现的物理化学和堆积性质，例如充分的溶解度，低的吸湿性，结晶性和有利的粉末堆密度，但也是固体状态和在可变的保存温度，湿度和照明条件的化学稳定性，确保适当的生物药物行为和实现较安全且有效的口服给药。

技术人员熟知的是，盐形成不总是导致增强的溶解度特性(参见例如：Shozo Miyazaki等人，国International Journal of Pharmaceutics1980；6(1)，77-85)以及不同盐在溶解度和/或溶解和/或对反荷离子的敏感性作用方面的行为可以随各药物-反荷离子对的性质而不同。

令人意想不到的是，本发明人已经通过提供具有改良物理化学和堆积性质的化合物937的新的盐类以及盐类的新晶型，从而解决了上述技术问题。

事实上，该新盐类是具有高水溶性的结晶的、可快速溶解的固体；此外这些盐是低度或中度吸湿性的，因此，在实质上还引入了在处理、储存及制剂等方面的重要优点；最终，除了具备所有其他优点特别是如游离碱当配制为原位盐或甲基纤维素悬浮液时所展现出的治疗优点外，这些盐具有令人意想不到的大于游离碱的粉末堆密度。

意外地，化合物937的新盐形式被发现并证实为晶体及游离碱形式。结晶粉末的性质使得此类形式特别适用于药物开发。

附图说明

参照下述附图对发明进行说明。

图1显示化合物937游离碱及其结晶盐类的X-射线衍射图，其中2θ角度(度(deg))记录于x轴，而强度(CPS)记录于y轴。特别地，光谱是关于化合物937游离碱I型(A)及以下盐类：L-酒石酸盐I型(B)，琥珀酸盐I型(C)，磷酸盐I型(D)，甲磺酸盐I型(E)，马来酸盐I型(F)，L-苹果酸盐I型(G)，盐酸盐I型(H)，富马酸盐-半摩尔的反荷离子I型(I)，富马酸盐I型(J)，柠檬酸盐-半摩尔的反荷离子I型(K)，苯磺酸盐I型(L)，L-天冬氨酸盐-半摩尔的反荷离子I型(M)。

图2显示化合物937游离碱I型(A)及以下盐类的X-射线衍射图：L-酒石酸盐I型(B)，富马酸盐I型(C)，L-苹果酸盐I型(D)盐。

图3显示化合物937富马酸盐I型的X-射线衍射图。

图4显示化合物937L-苹果酸盐I型的X-射线衍射图。

图5显示化合物937L-酒石酸盐I型的X-射线衍射图。

图6显示化合物937马来酸盐I型(A-B)和马来酸盐II型(C)的X-射线衍射图。

图7显示化合物937琥珀酸盐I型(A)和琥珀酸盐II型(B-C)的X-射线衍射图。

图8显示化合物937游离碱，I型的X-射线衍射图。

图9显示化合物937游离碱I型(A)和下列盐的DSC温谱图：L-酒石酸盐I型(B)，琥珀酸盐I型(C)，磷酸盐I型(D)，甲磺酸盐I型(E)，马来酸盐I型(F)，L-苹果酸盐I型(G)，盐酸盐I型(H)，富马酸盐-半摩尔的反荷离子I型(I)，富马酸盐I型(J)，柠檬酸盐I型(K)，苯磺酸盐I型(L)，L-天冬氨酸盐-半摩尔的反荷离子I型(M)。

温谱图将温度(℃)记录于x轴，同时将热流量(mW)记录于y轴。

图10显示化合物937游离碱I型(A1)，游离碱II型(A2)，L-酒石酸盐I型(B)，琥珀酸盐II型(C-D)，富马酸盐I型(E)，马来酸盐I型(F)，马来酸盐II型(G)和L-苹果酸盐I型(H)的DSC温谱图。

图11显示化合物937游离碱I型(A-B1)和游离碱II型(B2)的DSC温谱图细节。

图12显示多批次化合物937游离碱I型(A-B)的X-射线衍射图，其特征也为图11中报道的DSC特征。

图13显示化合物937游离碱I型(A)，富马酸盐I型(B)，马来酸盐II型(C)，琥珀酸盐II型(D)，L-苹果酸盐I型(E)，L-酒石酸盐I型(F)的DVS特征(吸湿性测定)。

图14显示按比例增加的批次的化合物937富马酸盐I型的X射线衍射图。

图15显示按比例增加的批次的化合物937富马酸盐I型的DSC特征。

图16显示按比例增加的批次的化合物937富马酸盐II型的X射线衍射图。

在第一个方面，本发明涉及化合物937的新的盐类，其选自L-酒石酸盐，琥珀酸盐，磷酸盐，甲磺酸盐，马来酸盐，L-苹果酸盐，盐酸盐、富马酸盐(半摩尔的反荷离子)，富马酸盐，柠檬酸盐(半摩尔的反荷离子)，苯磺酸盐和L-天冬氨酸盐(半摩尔的反荷离子)，和它们的晶型，溶剂化物和水合物。

具体的是，本发明涉及化合物937的新的盐，其选自L-酒石酸盐，琥珀酸盐，马来酸盐，L-苹果酸盐和富马酸盐，和它们的晶型，溶剂化物和水合物。

更具体地，本发明涉及化合物937的新的盐，其选自L-酒石酸盐，L-苹果酸盐和富马酸盐，和它们的晶型，溶剂化物和水合物。

其它更具体地，本发明涉及化合物937富马酸盐的新的晶型，和其溶剂化物和水合物。

最具体地，本发明涉及化合物937富马酸盐的溶剂化物。

这些化合物937的盐类可通过已知的类似方法获得，即将所需化学计量的溶剂或反荷离子的水溶液，添加至溶解于适当溶剂中的游离碱中。该溶剂优选为有机(尤其是无水)溶剂，更优选为甲醇、乙醇、二氯甲烷及其混合物。如果需要，可通过在无水非极性溶剂(例如乙醚、正己烷或环己烷)中添加或再处理，从而利于所得盐的沉淀或结晶。

根据本发明，盐类的定义还包括它们的晶型、其溶剂化物及水合物。

如本文使用的术语“溶剂化物”意指通过溶剂化形成的化合物，例如作为溶剂分子与溶质分子或离子的组合。熟知的溶剂分子包括水，醇类和其它极性有机溶剂。醇类包括甲醇，乙醇，正丙醇、异丙醇，正丁醇、异丁醇，和叔-丁醇。醇类也包括聚合醇类，例如聚烷二醇(例如聚乙二醇，聚丙二醇)。

文中所用的术语“水合物”是指经过溶剂化形成的化合物，其中溶剂是水。

除非另有说明，当提及“溶剂化物”和“水合物”时，本发明意欲包括化学计量的和非化学计量的“溶剂化物”和“水合物”。

化学计量的溶剂化物具有溶剂分子与化合物分子的固定比率。这是典型地由于在溶剂和化合物分子之间的键合相互作用。在非化学计量的溶剂化物中，溶剂不以与化合物分子的固定的比率存在且经常可以变化。在非化学计量的溶剂化物中，溶剂经常存在于晶格之内的空隙空间或通道。化学计量的水合物具有水分子与化合物分子的固定的比率。这是典型地由于在水和化合物分子之间的键合相互作用。在非化学计量的水合物中，水不以与化合物分子的固定的比率存在且经常可以变化。在非化学计量的水合物中，水经常存在于晶格之内的空隙空间或通道。

接着，在另一个方面，本发明涉及作为游离碱的化合物937的新稳定晶型。

本发明的另一目的是提供一种药物组合物，其包括作为活性成分的任何如上所定义的化合物937的盐、化合物937富马酸盐的晶型、溶剂化物或水合物、或者为游离碱形式的化合物937的晶型以及药学上可接受的赋形剂和/或载体。

本发明的另一目的是提供任何如上所定义的化合物937的盐、化合物937富马酸盐的晶型、溶剂化物或水合物、或者为游离碱形式的化合物937的晶型，其用作药物。

本发明的另一个目的是提供单独或与其它治疗剂组合的任何如上所定义的化合物937的盐、化合物937富马酸盐的晶型、溶剂化物或水合物、或者为游离碱形式的化合物937的晶型，其用于治疗患有通过PLK抑制可治疗的疾病状态的哺乳动物、包括人类。

此外，本发明涉及任何如上所定义的化合物937的盐、化合物937富马酸盐的晶型、溶剂化物或水合物、或者为游离碱形式的化合物937的晶型，其用于治疗患有通过PLK抑制可治疗的疾病状态的哺乳动物、包括人类，所述疾病状态例如细胞增殖障碍，病毒感染，自身免疫和神经变性障碍。

此外，本发明涉及任何如上所定义的化合物937的盐、化合物937富马酸盐的晶型、溶剂化物或水合物、或者为游离碱形式的化合物937的晶型，其用于治疗患有通过PLK抑制可治疗的疾病状态的哺乳动物、包括人类，所述疾病状态特征为细胞增殖障碍是癌症。

本发明的另一目的是提供治疗需要PLK抑制的包括人类的哺乳动物的方法，所述方法包括对所述哺乳动物给予治疗有效量的任何如上所定义的化合物937的盐、化合物937富马酸盐的晶型、溶剂化物或水合物、或者为游离碱形式的化合物937的晶型。

最终，本发明的另一目的是提供单独或与其他治疗药剂联用的任何如上所定义的化合物937的盐、化合物937富马酸盐的晶型、溶剂化物或水合物、或者为游离碱形式的化合物937的晶型在制备药物中的用途，所述药物适用于治疗通过PLK抑制而可治疗的疾病状态。

术语“可治疗的疾病状态”是指根据本发明的治疗能使疾病状态缓解，或至少使接受治疗的哺乳动物的状况及生活品质得到改善。

这类疾病状态的实例是具体的不同癌症，其可以包括癌，例如膀胱癌，乳腺癌，结肠癌，肾癌，肝癌，肺癌，包括小细胞肺癌，食管癌，胆囊癌，卵巢癌，胰腺癌，胃癌，宫颈癌，甲状腺癌，前列腺癌，和皮肤癌，包括鳞状细胞癌；淋巴系的造血系统癌，包括白血病，急性淋巴细胞性白血病，急性淋巴母细胞白血病，B-细胞淋巴瘤、T-细胞-淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤和Burkett淋巴瘤；髓系的造血系统癌，包括急性和慢性髓性白血病，脊髓发育不良综合征和前髓细胞性白血病；间充质来源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；中枢及周围神经系统肿瘤，包括星形细胞瘤、神经元细胞瘤，神经胶质瘤和神经鞘瘤；其它肿瘤、包括黑色素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、着色性干皮病，角化棘皮瘤、滤泡状甲状腺癌和卡波西肉瘤。这类疾病状态的实例也是特异性细胞的增殖障碍例如，诸如，良性前列腺增生，家族性腺瘤病息肉病，神经纤维瘤病，银屑病，血管平滑细胞增殖，其与动脉粥样硬化相关，肺纤维化，关节炎，肾小球肾炎和术后狭窄和再狭窄。

化合物937的盐类的有效剂量可根据疾病、病症的严重度及接受治疗的病人的状况而改变。因此，医生始终需对每一位病人设定最佳剂量。无论如何，有效剂量的范围可为从约5至约500mg/剂量(以游离碱计算)，每天1至5次。

如上所定义的化合物937的盐、化合物937富马酸盐的晶型、溶剂化物或水合物、或者为游离碱形式的化合物937的晶型口服容易吸收，因此优选将其口服给药。

毋庸置疑，本发明的化合物可经由任何给药途径给予，例如通过非肠胃、局部、直肠及鼻腔途径。

作为另一个方面，已发现化合物937富马酸盐可以作为晶体固体以称为I型的晶型的形式得到。I型是化合物937富马酸盐的高熔点(high melting)晶型，其显示在25℃/90％RH的1.6％的中度吸水量，其是通过在25℃恒温降低RH可逆的。(PXRD特征：图1J；DSC特征：图9J；DVS特征：图13B和表11-关于PXRD和DSC特征的其它参考描述于表1)

已发现化合物937富马酸盐可以作为晶体固体也以0.5∶1的化学计量比率得到。(PXRD特征：图1I；DSC特征：图9I)。

化合物937富马酸盐可以作为晶体固体以称为II型的晶型形式(PXRD特征：图16)得到。

作为另一个方面，已发现化合物937L-苹果酸盐和化合物937L-酒石酸盐可以作为晶体固体以均称为I型的晶型得到。化合物937L-苹果酸盐和化合物937L-酒石酸盐是中度吸湿性的，均在25℃/90％RH分别显示约4.7％和5.8％的吸水量。水含量在环境条件是相当稳定的，因此可以是认为两种盐是稳定水合物(PXRD特征：L-苹果酸盐图1G，L-酒石酸盐图1B；DSC特征L-苹果酸盐图9G，L-酒石酸盐图9B；DVS特征：L-苹果酸盐图13E，L-酒石酸盐图13F；关于PXRD和DSC特征的其它参考描述于表1)。

作为另一个方面，已发现化合物937马来酸盐可以作为晶体固体以称为I型和II型的两种不同晶型得到。I型是化合物937马来酸盐的高熔点晶型，其特征是稳定水合的形式。(PXRD特征：图1F；DSC特征：图9F；关于PXRD和DSC特征的其它参考描述于表1)。II型是化合物937马来酸盐的高熔点晶型，其特征是中度吸湿性的形式(PXRD特征：图6C；DSC特征：图10G；DVS特征：图13C)。通过暴露于温度和水份的应激条件(stressed condition)例如保存在40℃/75％RH，II型转化为I型。(PXRD特征：图6B；DSC特征：图10F)

作为另一个方面，已发现化合物937琥珀酸盐可以作为晶体固体以称为I型和II型的两种不同晶型得到。I型是化合物937琥珀酸盐的高熔点晶型，其特征是甲醇溶剂化物(PXRD特征：图1C和7A；DSC特征：图9C)。II型是高熔点晶型的化合物937琥珀酸盐，其特征是水合的形式，该水合的形式在环境条件和温度和水份的应激条件例如保存在40℃/75％RH下稳定(PXRD特征：图7B和7C；DSC特征：图10C和10D；DVS特征：图13D)。

此外，已发现化合物937柠檬酸盐可以作为晶体固体以0.5∶1的化学计量比率得到(PXRD特征：图1K；DSC特征：图9K)和作为无定形固体以1∶1的化学计量比率得到。

化合物937盐显示良好在水中的溶解度，具体的是，富马酸盐，L-苹果酸盐和L-酒石酸(tartarate)盐在水中的溶解度是在1-4mg/ml范围内(更多细节报告在实施例4中)。

除了显示充分的水溶解度的优势，化合物937盐，具体的是富马酸盐，L-苹果酸盐和L-酒石酸盐，也具体地适于以明确的酸/碱比率被可复现地制备。该发现使这些盐具体地适用于用于口服的液体配制剂以及用于静脉内配制剂。

此外，化合物937盐显示有利的粉末堆密度，具体的是富马酸盐，L-苹果酸盐和L-酒石酸盐的粉末堆密度大于240mg/ml(更多细节报告在实施例12中)。

如已经提及的，化合物937的盐和游离碱形式的固体状态性质说明连同相关的PXRD和DSC图的完全列举如表1所显示。

表1-化合物937的盐及游离碱形式的固态性质描述和图/表参考

注(＊)：若无不同说明，所述盐类是指游离碱与反荷离子间摩尔比为1∶1。

注(＊＊)：所记录的PXRD峰是根据完整数据组中的它们的较高强度而选择的。

在一优选的实施方案中，化合物937的基本上纯的1∶1富马酸盐I型具有图3所示的X-射线衍射图，其大约在表1所述的2θ值(度)处具有显著的峰强度。在不含任何其它物质(其他晶型、赋形剂)的样品中，大约在表2中所述的2θ值(度)处应当可以观察到衍射峰。

在另一优选的实施方案中，化合物937的基本上纯的1∶1富马酸盐II型具有图16所示的X-射线衍射图，其大约在表1所述的2θ值(度)处具有显著的峰强度。在不含任何其它物质(其他晶型、赋形剂)的样品中，大约在表10中所述的2θ值(度)处应当可以观察到衍射峰。

在另一优选的实施方案中，化合物937的基本上纯的1∶1L-苹果酸盐I型具有图4所示的X-射线衍射图，其大约在表1所述的2θ值(度)处具有显著的峰强度。在不含任何其它物质(其他晶型、赋形剂)的样品中，大约在表4中所述的2θ值(度)处应当可以观察到衍射峰。

在另一优选的实施方案中，化合物937的基本上纯的1∶1L-酒石酸盐I型具有图5所示的X-射线衍射图，其大约在表1所述的2θ值(度)处具有显著的峰强度。在不含任何其它物质(其他晶型、赋形剂)的样品中，大约在表3中所述的2θ值(度)处应当可以观察到衍射峰。

在另一优选的实施方案中，化合物937的基本上纯的1∶1马来酸盐I型具有图6A所示的X-射线衍射图，其大约在表1所述的2θ值(度)处具有显著的峰强度。在不含任何其它物质(其他晶型、赋形剂)的样品中，大约在表5中所述的2θ值(度)处应当可以观察到衍射峰。

在另一优选的实施方案中，化合物937的基本上纯的1∶1马来酸盐II型具有图6C所示的X-射线衍射图，其大约在表1所述的2θ值(度)处具有显著的峰强度。在不含任何其它物质(其他晶型、赋形剂)的样品中，大约在表6中所述的2θ值(度)处应当可以观察到衍射峰。

在另一优选的实施方案中，化合物937的基本上纯的1∶1马来酸盐I型(甲醇溶剂化物)具有图7A所示的X-射线衍射图，其大约在表1所述的2θ值(度)处具有显著的峰强度。在不含任何其它物质(其他晶型、赋形剂)的样品中，大约在表7中所述的2θ值(度)处应当可以观察到衍射峰。

在另一优选的实施方案中，化合物937的基本上纯的1∶1马来酸盐II型具有图7C所示的X-射线衍射图，其大约在表1所述的2θ值(度)处具有显著的峰强度。在不含任何其它物质(其他晶型、赋形剂)的样品中，大约在表8中所述的2θ值(度)处应当可以观察到衍射峰。

在另一优选的实施方案中，基本上纯的化合物937游离碱I型具有图8所示的X-射线衍射图，其大约在表1所述的2θ值(度)处具有显著的峰强度。在不含任何其它物质(其他晶型、赋形剂)的样品中，大约在表9中所述的2θ值(度)处应当可以观察到衍射峰。

I型晶体结构可以因此表征为在图9和图10中报告的DSC特征9A和10A1熔解吸热谱线，以及在图11中报告的DSC特征11A和11B1。另一个优选的实施方案是化合物937游离碱II型，其显示在图10和图11中分别报告的DSC特征10A2和11B2。更高熔点DSC峰对应于II型，因为由在图9A和10A中报告的温谱图表征的游离碱批次共有与在12图中所报告的相同的X射线粉末衍射图。

基本上纯指的是本发明的晶型具有至少90％的纯度。更优选为本发明的晶型具有至少95％的纯度，最优选为至少99％重量的化合物937的酸加成盐或游离碱的晶型是以本发明所述的晶型存在。

再一方面，涉及通过DSC的固态表征，发现由PXRD表征为结晶物质的化合物937富马酸(半摩尔的反荷离子)，盐酸盐、甲磺酸盐和磷酸盐呈现出复杂的DSC特征(图9)。这些盐经历涉及去溶剂化/脱水过程的热转变，及经过了以其DSC熔融峰温度为特征的去溶剂化的/脱水形式的随后熔融。

当发生例如降解的时候，可伴随进一步的热转变。

PXRD和DSC结果进一步描述在表1和实施例6和7中。

根据本发明的另一个方面，可根据现有技术中的已知方法及现有技术中已知的任何药物形式，配制用于对哺乳动物包括人类给药的药物组合物。

例如，药物组合物包含如本文中所定义的化合物937的盐，其与药学上可接受的稀释剂或载体结合。

本发明的组合物可以为适用于口服使用的形式。这些形式的实例是：片剂、硬或软胶囊、水性或油性悬浮液、乳剂、可分散粉末或颗粒。本发明的组合物可以为适用于局部使用的形式。这些形式的实例是：乳膏、软膏、凝胶或水性或油性溶液或悬浮液。本发明的组合物可以为适于经由吸入给药的形式，例如，诸如细分散粉末或液态气溶胶。本发明的组合物可以为适于经由吹入法给药的形式，例如，诸如，为细分散粉末。本发明的组合物可以为适于经由肠胃外给药的形式(例如，诸如，用于静脉内、皮下、肌肉内的无菌水性或油性溶液)或为直肠给药的栓剂的形式。

本发明的组合物可使用现有技术中已经熟知的常规药物赋形剂并通过常规的方法获得。

因此，用于口服使用的组合物可包含，例如，一种或多种着色剂、甜味剂、芳香剂和/或防腐剂。

片剂制剂的适合药学上可接受的赋形剂包括，例如，填充剂诸如乳糖、甘露糖醇、微晶纤维素、碳酸钠、预糊化淀粉、磷酸钙或碳酸钙；制粒剂及崩解剂诸如交联羧甲基纤维素钠、玉米淀粉、交联聚维酮或羟基乙酸淀粉钠；粘合剂诸如淀粉、微晶纤维素、聚维酮、蔗糖；润滑剂诸如硬脂酸镁、硬脂酸、硬脂酰福马酸钠、山嵛酸甘油酯、聚乙二醇或滑石；助流剂诸如胶态二氧化硅；防腐剂诸如对羟基苯甲酸乙酯或丙酯；以及抗氧化剂诸如抗坏血酸。

片剂制剂可不包衣或包衣，以改变其崩解性质以及随后活性成分在胃肠道内的吸收性质，以改良其稳定性和/或外观。不包衣或包衣的片剂需要使用常规的包衣剂及现有技术中熟知的方法。

供口服使用的组合物可配制为硬胶囊的形式，其中采用活性成分制备填充混合物，所述活性成分是与惰性固体稀释剂混合，例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土，并且包括上述供片剂制剂使用的赋形剂；供口服使用的组合物也可配制为为软胶囊的形式，其中采用活性成分制备填充混合物，所述活性成分是与水或诸如花生油、液态石蜡、大豆油、椰子油的油类，或优选为橄榄油，或任何其他可接受的赋形剂混合。供口服使用的组合物也可为硬胶囊的形式，其中活性成分是经配制为稳定药物固体或半固体分散物，其包含活性成分及例如亲水性载体、作为抗氧化剂的水溶性维生素E衍生物及可选的其他赋形剂。水悬浮液一般采用包含呈细粉形式的活性成分制备，并添加悬浮剂(例如，诸如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯基吡咯烷酮)分散或湿润剂(诸如卵磷脂、聚氧乙烯硬脂酸酯或聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯、聚乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)。水性悬浮液可以包含一种或多种适当的添加剂，例如防腐剂、抗氧化剂、着色剂、芳香剂和/或甜味剂，以提供适口的口服制剂。油性悬浮液可通过使活性成分悬浮于植物油(诸如橄榄油和芝麻油)中而获得。适于通过添加水而制备水悬浮液或溶液的可分散或冻干粉末及颗粒包含活性成分以及适当的赋形剂(增量剂、分散或悬浮剂及防腐剂)。

制剂还可以为无菌可注射悬浮液、溶液、乳剂，其可以使用适当的赋形剂，例如其选自以上已经提到的分散剂、湿润剂及悬浮剂，并根据已知的方法配制。

局部制剂，诸如乳膏、软膏、凝胶及溶液或悬浮液，可通过使用现有技术中熟知的常规方法，将活性成分与常规的载体赋形剂或稀释剂进行调配而得到。

用于经由吹入法给药的组合物可呈现细分散粉末形式，其含有适当平均直径为，例如，50μm或更小的颗粒，粉末本身仅包含活性成分或被适当的载体诸如乳糖稀释。

供吹入法使用的粉末被配制成在含有适量活性成分的胶囊中，其将通过涡轮吸入装置而被使用。用于经由吸入给药的组合物可以为常规的加压气溶胶形式，其被设置以将活性成分分散成含有细分散固体或液滴的气溶胶。

常规的气溶胶推进剂和装置可以用于分散限定量的活性成分。呈硬胶囊形式的供口服使用的组合物的实例在实施例10中给予了描述。

实施例

以下实施例说明本发明。

温度是以摄氏度(℃)测量的。

除非另外指明，否则反应或实验是在室温下进行的。

简称：

RT：室温

RH：相对湿度

PXRD：粉末X-射线衍射

DSC：示差扫描量热法

DVS：动态蒸汽吸附

TGA：热重分析

实施例1：化合物937盐小规模制备

在RT下将一份化合物937游离碱(约40÷50mg)溶解于4÷5mL的甲醇和二氯甲烷的2∶1混合物中，得到约10mg/mL的标称浓度。

然后通过在RT下将1∶1化学计量的反荷离子添加至4÷5mL所述化合物937游离碱的溶液中，由此进行若干盐形成的实验。

在-30℃下进行冷却结晶实验，静置时间约为24-36小时。

经由真空过滤收集所得的沉淀物，于40℃下在真空中干燥。

当未发生结晶时，通过在RT下于温和氮气流中蒸发使溶液浓缩，进而使之沉淀。

在一些情况中，需要进一步的重结晶步骤(例如，于乙醚中研磨化合物)，以从胶状残留物中分离结晶或至少是粉末状的样品。

在40℃真空条件下进行干燥。

通过¹H NMR(说明见实施例9)进行化合物937及酸性反荷离子的化学鉴别。

实施例2：化合物937L-酒石酸盐，琥珀酸盐，富马酸盐，柠檬酸酯，马来酸盐和L-苹果酸盐的克规模制备。

在室温，回流下将游离碱(500mg，0.939mmol)溶解于二氯甲烷∶甲醇的2∶1混合物(24mL)中，然后加入溶解在甲醇中的1当量的酸性反荷离子，或在富马酸的情况下加入溶解在96％乙醇中的1当量的酸性反荷离子。在真空将溶液减少至10mL，然后冷却至-20℃。然后将沉淀的物质过滤，用乙醚洗涤和最终在40℃在真空下干燥至少24小时。

实施例3：化合物937富马酸盐I型的放大制备

一定量的化合物937游离碱在无水乙醇中回流搅拌下加热30分钟，使起始物料(浓度约25g/L)完全溶解。

之后将约1当量的富马酸溶解于乙醇中(浓度约29g/L)，并将其添加至游离碱溶液中。

回流30分钟使盐化完全后，中断加热。

将混合物冷却至约5℃，在该温度搅拌约1小时，过滤，用无水乙醇洗涤，然后在真空下在35-40℃干燥。

得到的物质是化合物937富马酸盐的乙醇溶剂化物。

实施例4：化合物937富马酸盐II型的放大制备

一定量的化合物937游离碱在水中RT下搅拌，在30分钟之后，加入约1当量的富马酸。

将悬浮液搅拌2小时，然后冷却至4℃和保持在该温度1小时，之后过滤。得到的物质在过滤器上用冷水洗涤，在真空下在35-40℃干燥。

实施例5：化合物937盐及游离碱的溶解度

通过以下程序进行如实施例2中所述制备的化合物937盐的溶解度测定：将已知的量的化合物937盐和游离碱在RT在水中搅拌4小时，在过量固体的条件下，认为目标浓度为10mg/ml。将所得制剂过滤并通过HPLC进行分析。

结果记录如下。

根据上述方法的化合物937游离碱在水中的溶解度值是＜0.1mg/mL。

根据上述方法的化合物937L-酒石酸盐在水中的溶解度值是1.9mg/mL。

根据上述方法的化合物937琥珀酸盐在水中的溶解度值是5.8mg/mL。

根据上述方法的化合物937马来酸盐在水中的溶解度值是3.1mg/mL。

根据上述方法的化合物937L-苹果酸盐在水中的溶解度值是3.9mg/mL。

根据上述方法的化合物937富马酸盐在水中的溶解度值是0.7mg/mL。

实施例6：粉末X-射线衍射(PXRD)的分析结果

通过粉末X-射线衍射(PXRD)表征化合物937盐，其过程是在室温使用Thermo/ARL XTRA装置，利用CuKα源(45kV，40mA，1.8kW-Kα1辐射，波长λ＝1.54060埃)在5°与34°2θ之间照射粉末样品而进行。

扫描速率为1.20°/分钟(0.020°步进，每步计数时间为1秒)。

在X-射线衍射图中，将衍射2θ的角度描绘在水平轴(x轴)，将线强度描绘在垂直轴(y轴)。

在定义化合物937盐及游离碱晶型的X-射线粉末衍射峰的段落中，表述“...大约在表中所述的2θ角度处...”中使用了术语“大约在”来指示峰的精确位置(即所引述的2θ角度值)，不应将其解释为绝对值，因为本领域技术人员应当明白，在不同机器、不同样品之间，或由于所利用的测量条件有细微的变化，都会使得峰的精确位置稍微改变。

也认为在前述段落中，化合物937的盐和游离碱的晶型具有“实质上”与图1、2、3、4、5、6、7、8、12、14、及16中所示的X-射线粉末衍射图相同的X-射线粉末衍射图，并且在表1、2、3、4、5、6、7、8、9、及10中所示的2θ角度值处具有实质上最显著的峰。应当明确在本文中使用术语“实质上”也是指X-射线粉末衍射图的2θ角度值在不同机器、不同样品之间，或由于测量条件有细微的变化都会稍微改变，因此图中所示或表中所引述的峰位置同样不应解释为绝对值。

就此而论，现有技术中已知取决于测量条件(诸如设备和/或样品制备)而可获得具有一个或多个测量误差的X-射线粉末衍射图。特定而言，一般知晓X-射线粉末衍射图中的强度可根据测量条件及样品制备而波动。

举例来说，X-射线粉末衍射领域的技术人员应当明了峰的相对强度可受到例如尺寸大于3θ微米及长宽比(aspect ratio)不均一的颗粒的影响，其会影响样品的分析。

本领域技术人员还应明了反射的位置可受样品位于衍射仪中的精确高度及衍射仪的零校准的影响。

样品的表面平坦度也会影响结果。

因此，本领域技术人员应当明了不应将文中所呈现的衍射图数据解释为绝对(关于更多的信息，参见Fundamentals of PowderDiffraction和Structural Characterization，Pecharsky和Zavalij，Kluwer Academic Publishers，2003)。因此，应当明了本发明中所述的化合物937的盐及游离碱的晶型并不限于具有与例如图1中所示的X-射线粉末衍射图相同的X-射线粉末衍射图的晶体，并且具有任何实质上与例如图1所示者相同的X-射线粉末衍射图的晶体都属于本发明的范畴之内。

熟悉X-射线粉末衍射的本领域技术人员可判定X-射线粉末衍射图的实质同一性。

一般而言，X-射线粉末衍射图中衍射角度的测量误差约为2θ＝0.5度或更小(或更适宜的，约2θ＝0.2度或更小)，并且在考虑图1、2、3、4、5、6、7、8、12、14及16中的X-射线粉末衍射图，以及在诠释文中及表1、2、3、4、5、6、7、8、9、及10中所提及的峰位置时，应当将此测量误差程度列入考虑。

因此，当陈述例如化合物937的盐及游离碱具有至少一个特定峰在约2θ＝20.1度(或任一其他提及的角度)的X-射线粉末衍射图时，则可解释为2θ＝20.1度加或减0.5度，或2θ＝20.1度加或减0.2度。

图1记录了如实施例1中所述以小规模分离的化合物937的盐及游离碱的粉末X-射线衍射图。

图2报道以实施例2所述较大规模得到的化合物937的盐：L-酒石酸盐I型(B)，富马酸盐I型(C)和L-苹果酸盐I型(D)盐的粉末X射线衍射图的实例。

化合物937富马酸盐I型，L-苹果酸盐I型，L-酒石酸盐I型，马来酸盐I型(A-B)，马来酸盐II型(C)，琥珀酸盐I型(A)和琥珀酸盐II型(B-C)的X射线衍射峰分别报告在图中3，4，5，6和7中。

图8报道化合物937游离碱I型的X射线衍射峰。

图12报道化合物937游离碱I型(A-B)的X射线衍射峰，所述化合物937游离碱I型(A-B)涉及由在图9，图10和图11中报告的DSC特征(实施例6中也讨论了DSC数据)表征的相同的批次。

化合物937富马酸盐I型，L-酒石酸盐I型，L-苹果酸盐I型，马来酸盐I型和马来酸盐II型，琥珀酸盐I型，琥珀酸盐II型，游离碱和富马酸盐II型的主要X射线衍射峰2θ角度分别报告在表2，3，4，5，6，7，8，9和10中。

根据实施例3得到的化合物937富马酸盐I型的放大批次的PXRD特征报告在图14中。

根据实施例4得到的化合物937富马酸盐II型的放大批次的PXRD特征报告在图16中。

表2-化合物937富马酸盐I型。

表3-化合物937L-酒石酸盐I型

表4-化合物937L-苹果酸盐I型。

表5-化合物937马来酸盐I型

表6-化合物937马来酸盐II型

表7-化合物937琥珀酸盐I型。

表8-化合物937琥珀酸盐II型

表9-化合物937游离碱I型

表10-化合物937富马酸盐II型。

实施例7：差示扫描量热法(DSC)的分析结果

DSC分析是利用Perkin-Elmer DSC-7装置进行的。将DSC铝盘装入约2mg的样品，分析温度范围在30℃与最大值300℃之间。在氮气流中，在10℃/分钟的加热速率下分析样品。

图9记录如实施例1所述以小规模分离的化合物937的盐及游离碱的DSC温谱图。

图10记录以如实施例2所述更高规模分离的化合物937盐与原始游离碱比较的DSC温谱图，且包括已知的可代替的晶型的特征。

具体的是，DSC特征9A，10A1，11A和11B1涉及游离碱I型，而DSC特征10A2和11B2涉及II型。

根据实施例3得到的化合物937富马酸盐I型的放大批次的DSC特征报告在图15中。观察到具有分解的熔解吸热谱线是在约260℃(峰温度)。应当理解DSC的起始和/或峰温度值可以在不同机器或不同样品之间有细微的变化，所以，不应认为所述值是绝对的。实际上，观察到温度将取决于温度变化的速率以及样品制备技术和采用的具体仪器。应将应用此等不同条件所得的温度值会有正或负约4℃的变化估计并考虑在内。

实施例8：热重分析(TGA)的分析结果

TGA分析是利用Perkin-Elmer TGA-7装置进行的。将铝盘装入约5-10mg的样品。分析温度范围在30℃与最大值约250℃之间。在氮气流中，在2℃/分钟的加热速率下分析样品。

实施例9：动态蒸汽吸附(DVS)的分析结果

通过使化合物937盐及游离碱的样品经历利用DVS 1000(SMS)的吸湿性试验，从而研究这些物质的吸水量。该装置是“控制大气的微量天平”，其在恒定及受控温度下，将经过称重的样品暴露在程式化变化的相对湿度(RH)下。根据Excel工作表单记录的测量参数(重量、时间及RH)，能够得到在测试RH范围内的吸湿性曲线。在0％与90％RH之间的吸附/脱附循环可在25℃的受控温度下进行。RH的渐进变化为10％；其是通过软件在样品重量的平衡下操作的。此条件可在恒定的重量百分比变化速率(例如，0.005％/分钟)下界定。实验结果是以DVS等温报告及等温图记录的。

如实施例2中所述制备的化合物937优选盐与原始游离碱比较的DVS特征记录于图13。

在DVS吸附升温期间的化合物937富马酸盐的吸水量的实例概述于下表11。

表11-化合物937富马酸盐DVS吸附数据

相对湿度(％)	吸水量(％)
		0.0	0.0
10.0	0.1
		20.0	0.3
30.0	0.4
		40.0	0.6
50.0	0.9
		60.0	1.2
70.0	1.4
		80.0	1.5
90.0	1.6

实施例10：NMR鉴别分析

¹H NMR实验是在28℃的恒温下，在499.8MHZ下操作的VarianInova 500光谱仪上进行的。将少量的各样品溶解在0.75mL的DMSO-d6中，并转移至5-mm的NMR管中供随后分析用。该分析能够确认分子及反荷离子两者的预期化学结构。

实施例11：供口服使用的制剂的组成百分比

成分	范围％
		化合物937	4-20
单水合乳糖	45-55
		预糊化淀粉	30-45
山嵛酸甘油酯	1-2

实施例12：粉末堆密度

通过用自由沉降的活性成分手动填充硬明胶胶囊，来实施化合物937的富马酸盐、L-苹果酸盐和L-酒石酸盐和游离碱的粉末堆密度的测定。

已经通过将包括自由沉降的活性成分的胶囊填充重量除以已知硬明胶胶囊的正常体积，来计算堆密度。已经将填充重量计算为在填充胶囊粗重量和空的胶囊皮重之间的不同。

富马酸盐、L-苹果酸盐和L-酒石酸盐特征为粉末堆密度值大于240mg/ml，而游离碱密度是约90mg/ml。

本领域技术人员由上述数据及实施例应当明确在本发明中所述的化合物937的新盐类在治疗中是一种新的、经改良的并且有价值的工具。

Claims (3)

1.具有下式的化合物937的富马酸盐晶型I：

它是作为乙醇溶剂化物，具有包含下列表2所示的衍射峰的X射线粉末衍射图：

2.一种药物组合物，其包含作为活性成分的权利要求1中所定义的化合物937的富马酸盐，以及药学上可接受的赋形剂和/或载体。

3.权利要求1中所定义的化合物937的富马酸盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗通过PLK抑制而可治疗的疾病状态。