HK1016261B - Method for bulk enrichment of a population or subpopulation of cells - Google Patents

Claims (25)

1. Méthode pour enrichir au moins une population sélectionnée ou sous-population de cellules dans un échantillon de fluide, ledit échantilon étant une portion de sang, de moelle osseuse ou de moelle vertébrée du corps, ladite méthode consistant à

   produire un certain nombre de particules ayant une densité suffisante pour produire une décantation par différence de gravité auxdites particules étant liées à un ou plusieurs réactants qui se lie spécifiquement aux cellules d'au moins deux populations présélectionnées à éliminer dudit échantillon ; ladite population présélectionnée étant des cellules de la lignée des érythroïdes et des cellules de la lignée des myéloïdes ;

   mélanger une portion dudit échantillon ayant un volume d'au moins un millilitre avec lesdites particules pour lier lesdites particules aux cellules desdites populations présélectionnées à éliminer sans endommager sensiblement physiquement ladite population sélectionnée ou sous-population à enrichir, mélanger lesdites particules et ladite portion d'échantillon en forçant lesdites particules à se décanter de façon répétée à travers une partie sensible de ladite portion de l'échantillon ;

   faire décanter par différence de gravité lesdites particules liées aux cellules desdites populations présélectionnées dans ledit échantillon et

   séparer au moins une portion du produit surnageant résultant de ladite portion d'échantillon comprenant ladite population ou sous-population sélectionnée à enrichir desdites particules liées décantées.
2. Méthode de la revendication 1 où ledit mélange est effectué en faisant passer ledit échantillon au tambour et en retournant lesdites particules.
3. Méthode de la revendication 1 où lesdites particules sont formées de nickel.
4. Méthode de la revendication 1 où lesdites particules ont un diamètre d'environ 3 à 35 µm.
5. Méthode de la revendication 4 où lesdites particules ont un diamètre d'environ 5-10 µm.
6. Méthode de la revendication 1 où lesdites particules ont une densité d'environ 2 g/cm³ ou plus.
7. Méthode de la revendication 6 où lesdites particules ont une densité d'environ 9 g/cm³.
8. Méthode de la revendication 1 où lesdites particules ont une densité d'environ deux à trois fois la densité des cellules dans ledit échantillon de fluide.
9. Méthode de la revendication 1 où ledit réactant est au moins l'un d'un anticorps médicament hormone facteur de croissance lectine ou enzyme.
10. Méthode de la revendication 9 où ledit réactant est un anticorps.
11. Méthode de la revendication 10 où ledit anticorps est un premier anticorps spécifique desdites cellules desdites erythroïdes et un second anticorps spécifique des cellules de lignée de myéloïde.
12. Méthode de la revendication 11 où ledit premier anticorps est un anticorps KC16 (dépôt ATCC N° CRL 8994) et ledit second anticorps lie les cellules CD15.
13. Méthode de la revendication 11 où lesdits premier et second anticorps sont séparément et séquentiellement mélangés avec et retirés de ladite portion de l'échantillon.
14. Méthode de la revendication 1 où ledit mélange est effectué pendant environ 4 à 30 minutes.
15. Méthode de la revendication 14 où ledit mélange est effectué pendant environ 4 minutes.
16. Méthode de la revendication 1 où ladite décantation par gravité est effectuée pendant environ 4 minutes à 30 minutes.
17. Méthode de la revendication 16 où ladite décantation par gravité est effectuée pendant environ 4 minutes.
18. Méthode de la revendication 1 comprenant le mélange desdites particules et dudit échantillon en forçant lesdites particules à se décanter de façon répétée à travers une partie sensible dudit échantillon.
19. Méthode telle que définie à la revendication 1 où ladite étape de séparation comprend l'enlèvement d'au moins une portion du produit surnageant résultant de ladite portion d'échantillon sans lesdites particules et ladite population ou sous-population liée.
20. Méthode telle que définie à la revendication 19 comprenant la répétition de l'enlèvement d'au moins l'une desdites populations présélectionnée d'au moins une portion dudit produit surnageant par mélange dudit produit surnageant avec une seconde quantité de particules ayant un réactant qui se lie à ladite population présélectionnée, la décantation desdites particules dans le produit surnageant et la séparation d'un second produit surnageant résultant de ladite portion dudit produit surnageant.
21. Méthode de la revendication 20 consistant à sélectionner positivement ladite population ou sous-population sélectionnée à enrichir dudit second produit surnageant résultant.
22. Méthode de la revendication 19 consistant à sélectionner positivement ladite population ou sous-population sélectionnée à enrichir dudit second produit surnageant résultant.
23. Méthode de la revendication 19 comprenant de plus l'enlèvement d'au moins une autre population présélectionnée différente desdites deux premières populations présélectionnées dudit produit surnageant résultant.
24. Méthode de la revendication 1 où la population sélectionnée de cellules est des cellules souches hématopoétiques CD 34 positives.
25. Méthode de la revendication 1 où la population sélectionnée de cellules est des cellules tueuses naturelles des cellules stromales, des cellules dendritiques, des ostéoblastes ou des cellules endothéliales.