HK1016261B

HK1016261B - Method for bulk enrichment of a population or subpopulation of cells

Info

Publication number: HK1016261B
Application number: HK99101289.0A
Authority: HK
Inventors: S. Kenyon Norma; R. Russell Thomas; Ricordi Camillo; K. Zwerner Robert
Original assignee: The University Of Miami; Biotransplant, Inc.
Priority date: 1995-11-13
Filing date: 1996-11-05
Publication date: 2003-10-17

Claims

Verfahren zum Anreichern zumindest einer ausgewählten Population oder Subpopulation von Zellen in einer fließfähigen Probe, wobei die Probe ein Teil des Blutes, Knochenmarks oder Rückenmarks ist, wobei das Verfahren Folgendes umfasst:
Bereitstellen einer Vielzahl von Teilchen mit ausreichender Dichte, um für differenzielle Schwerkraftabsetzung zu sorgen, wobei an die Teilchen ein oder mehrere Reaktand(en) gebunden ist bzw. sind, der bzw. die sich spezifisch an die Zellen von zumindest zwei vorbestimmten, aus der Probe zu entfernenden Populationen bindet bzw. binden; wobei die vorbestimmten Populationen Zellen der erythroischen Linie und Zellen der myeloischen Linie sind;

Vermischen eines Teils der Probe mit einem Volumen von zumindest 1 ml mit den Teilchen, um die Teilchen an Zellen der vorbestimmten, zu entfernenden Populationen zu binden, ohne die ausgewählte anzureichernde Population oder Subpopulation nennenswert physisch zu schädigen, wobei das Vermischen der Teilchen und des Teils der Probe erfolgt, indem bewirkt wird, dass sich die Teilchen wiederholt durch einen beträchtlichen Anteil des Teils der Probe hindurch absetzen;

differentielle Schwerkraftabsetzung der an Zellen der vorbestimmten Populationen gebundenen Teilchen in der Probe; und

Abtrennen zumindest eines Teils des resultierenden Überstands des Teils der Probe, der die ausgewählte anzureichernde Population oder Subpopulation umfasst, von den abgesetzten gebundenen Teilchen.
Verfahren nach Anspruch 1, worin das Vermischen durch Kopfüber-Taumeln der Probe und der Teilchen bewirkt wird.
Verfahren nach Anspruch 1, worin die Teilchen aus Nickel bestehen.
Verfahren nach Anspruch 1, worin die Teilchen einen Durchmesser von etwa 3 bis 35 µm aufweisen.
Verfahren nach Anspruch 4, worin die Teilchen einen Durchmesser von etwa 5 bis 10 µm aufweisen.
Verfahren nach Anspruch 1, worin die Teilchen eine Dichte von etwa 2 g/cm³ oder darüber aufweisen.
Verfahren nach Anspruch 6, worin die Teilchen eine Dichte von etwa 9 g/cm³ aufweisen.
Verfahren nach Anspruch 1, worin die Teilchen eine Dichte aufweisen, die etwa das Doppelte bis Dreifache der Dichte von Zellen in der Flüssigkeitprobe beträgt.
Verfahren nach Anspruch 1, worin der Reaktand zumindest eines von Antikörper, Arzneimittel, Hormon, Wachstumsfaktor, Lectin oder Enzym ist.
Verfahren nach Anspruch 9, worin der Reaktand ein Antikörper ist.
Verfahren nach Anspruch 10, worin der Antikörper ein erster Antikörper, der für die Zellen der erythroischen Linie spezifisch ist, und ein zweiter Antikörper ist, der für die Zellen der myeloischen Linie spezifisch ist.
Verfahren nach Anspruch 11, worin der erste Antikörper ein KC16-Antikörper (ATCC-Hinterlegungs-Nr. CRL 8994) ist und der zweite Antikörper CD15-Zellen bindet.
Verfahren nach Anspruch 11, worin der erste und der zweite Antikörper getrennt und nacheinander mit dem Teil der Probe vermischt und daraus entfernt werden.
Verfahren nach Anspruch 1, worin das Vermischen etwa 4 bis 30 min lang durchgeführt wird.
Verfahren nach Anspruch 14, worin das Mischen etwa 4 min lang durchgeführt wird.
Verfahren nach Anspruch 1, worin die Schwerkraftabsetzung etwa 4 min bis 30 min lang durchgeführt wird.
Verfahren nach Anspruch 16, worin die Schwerkraftabsetzung etwa 4 min lang durchgeführt wird.
Verfahren nach Anspruch 1, umfassend das Vermischen der Teilchen und der Probe, indem die Teilchen dazu gebracht werden, sich wiederholt durch einen beträchtlichen Anteil der Probe hindurch abzusetzen.
Verfahren nach Anspruch 1, worin der Schritt des Abtrennens das Entfernen zumindest eines Teils des resultierenden Überstands vom Teil der Probe ohne die Teilchen und die gebundene Population oder Subpopulation umfasst.
Verfahren nach Anspruch 19, umfassend das Wiederholen des Entfernens von zumindest einer der vorbestimmten Populationen von zumindest einem Teil des Überstands durch Vermischen des Überstands mit einer zweiten Vielzahl von Teilchen, die einen Reaktanden aufweisen, der sich an die vorbestimmte Population bindet, das Absetzen der Teilchen im Überstand und das Abtrennen eines zweiten resultierenden Überstands vom Teil des Überstands.
Verfahren nach Anspruch 20, das die positive Selektion der ausgewählten anzureichernden Population oder Subpopulation aus dem zweiten resultierenden Überstand umfasst.
Verfahren nach Anspruch 19, das die positive Selektion der ausgewählten anzureichernden Population oder Subpopulation aus dem zweiten resultierenden Überstand umfasst.
Verfahren nach Anspruch 19, das weiters das Entfernen zumindest einer anderen vorbestimmten Population, die sich von den ersten beiden vorbestimmten Populationen unterscheidet, aus dem resultierenden Überstand umfasst.
Verfahren nach Anspruch 1, worin die ausgewählte Zellpopulation CD34-positive hämopoetische Stammzellen sind.
Verfahren nach Anspruch 1, worin die ausgewählte Zellpopulation natürliche Killerzellen, Stromazellen, Dendritzellen, Osteoblasten oder Endothelzellen sind.