HK1098465B - 三环化合物作为甘氨酸转运抑制剂的用途 - Google Patents

Description

三环化合物作为甘氨酸转运抑制剂的用途

本发明涉及N-杂环基甲基苯甲酰胺衍生物，其制备方法及其在治疗中的应用。

本发明的化合物相应于通式(I)

其中

R代表氢原子或乙烯基基团；

当R代表氢原子时n代表0或1或2，而当R代表乙烯基基团时n代表1；

当R代表氢原子时X代表式CH基团或氮原子，而当R代表乙烯基基团时X代表式CH基团；

R₁代表任选由一个或多个选自卤素原子、直链或支链(C₁-C₆)烷基，羟基及(C₁-C₆)烷氧基基团、三氟甲基基团的取代基取代的苯基或萘基基团，或者环己基基团，或者选自噻吩基、吡啶基、噁唑基、呋喃基、噻唑基、喹啉基和异喹啉基的杂芳基基团；

R₂代表氢原子，或者一个或多个选自卤素原子及三氟甲基、(C₁-C₆)烷基、(C₁-C₆)烷氧基、噻吩基、苯氧基、羟基、巯基、硫(C₁-C₆)烷基、氰基或通式-NR₄R₅、SO₂NR₄R₅、-SO₂-(C₁-C₆)烷基、-SO₂-苯基、-CONR₄R₅、-COOR₇、-CO-(C₁-C₆)烷基、-CO-苯基、-NHCOR₈、-NHSO₂-(C₁-C₆)烷基、-NHSO₂-苯基及-NHSO₂NR₄R₅或与苯基基团的2位和3位相连的式-OCF₂O-基团的取代基；

(C₁-C₆)烷基、(C₁-C₆)烷氧基、-SO₂-(C₁-C₆)烷基、-CO-(C₁-C₆)烷基及-NHSO₂-(C₁-C₆)烷基基团任选由一个或多个R₃基团取代；

苯基、-SO₂-苯基、-CO-苯基及-NHSO₂-苯基基团任选由R₆基团取代；

R₃代表卤素原子、苯基基团、(C₁-C₆)烷氧基、-NR₄R₅；

R₄和R₅相互独立代表氢原子或(C₁-C₆)烷基基团或R₄和R₅与所连接的氮原子一起形成吡咯烷环、哌啶环或吗啉环；

R₆代表氢原子、卤素原子、三氟甲基基团、氰基基团、羟基基团、巯基基团、(C₁-C₆)烷基基团或(C₁-C₆)烷氧基；

R₇代表氢原子或任选由一个或多个R₃基团取代的(C₁-C₆)烷基基团，或任选由R₆基团取代的苯基基团；

R₈代表任选由一个或多个R₃基团取代的(C₁-C₆)烷基基团，或任选由R₆基团取代的(C₁-C₆)烷氧基基团或苯基基团。

在通式(I)化合物中，可在全部优选的化合物中辨别某些化合物：

组1：苏型构型的化合物及其中n代表0或1的通式(I)化合物；

组2：在分子式中X代表式CH基团的组1化合物；

组3：在分子式中R代表氢原子的组2化合物；

组4：在分子式中n代表1的组3化合物；

组5：在分子式中R₁代表任选取代的苯基基团的组4化合物。

式(I)化合物可含有多个不对称中心。因此它们可以对映异构体形式或非对映异构体形式存在。这些对映异构体、非对映异构体、及其混合物，并包括外消旋混合物，均在本发明范围内。

更特别的是，对那些R＝H的式(I)化合物而言，可以苏型((1S，2S)和(1R，2R))或赤型((1S，2R)和(1R，2S))非对映异构体形式、或纯对映异构体形式或这些异构体的混合物的形式存在。

式(I)化合物可以碱或酸的加成盐的形式存在。此类加成盐在本发明的范围内。

这些盐最好用药学上可接受的酸制备，但是其他可用的酸(例如用于式(I)化合物的纯化和分离的酸)的盐也在本发明的范围内。式(I)化合物也可以水合物或溶剂化物的形式存在，即是以与一个或多个分子的水或溶剂缔合或化合的形式存在。此类水合物或溶剂化物也在本发明的范围内。

本发明化合物表现出甘氨酸转运蛋白glyt1和/或glyt2特异抑制剂的特殊活性。

通式(I)化合物可按照下列方案1中所示的方法制备。

方案1

根据方案1，将其中n、X、R和R₁如上述所定义的通式(II)二胺与通式(III)的活化的酸或酰氯(其中Y代表疏核基团例如卤原子，R₂如上述所定义)用本领域技术人员已知的方法进行偶合反应。

通式(II)二胺(其中R＝H，n、X和R₁如上述所定义)可按照下列方案2中所示的方法制备。

方案2

将通式(IV)酮(其中n、X和R₁如上述所定义)与苄氧基羟胺盐酸盐在吡啶中回流得到通式(V)肟。肟的Z和E两种形式可根据本领域技术人员已知的方法例如硅胶柱层析法分离。

优选的Z型肟(V)盐酸盐接着在四氢呋喃中用氢化锂铝回流还原，提供大部分为苏型的通式(II)二胺。

通过还原通式(V)的E型肟得到两种非对映异构体(苏型/赤型)二胺(II)的混合物。

赤型和苏型非对映异构体可根据本领域技术人员已知的方法例如硅胶柱层析法分离。

另一种制备其中R和R₁如上述所定义、n等于1而X为CH的通式(II)二胺方法如下列方案3所示。

方案3

按照Bull.Soc.Chim.Belg.(106)，1997，77-84及Tetrahedron：Asymmetry，(6)，1995，1699-1702中描述的方法，通式(VI)的醇通过Mitsunobu反应转化为胺。

另外相应于苏型非对映异构体的对映异构体(1R，2R)或(1S，2S)及赤型非对映异构体的对映异构体(1S，2R)或(1R，2S)的通式(I)手性化合物也可通过用高效液相层析(HPLC)在手性柱上分离外消旋化合物获得，或者从所得的手性胺、或者通过使用手性酸例如酒石酸、樟脑磺酸、二苯甲酰酒石酸、N-乙酰基亮氨酸拆分通式(II)外消旋胺获得，通过在醇类溶剂中分部和优先重结晶非对映异构体盐，或者使用类似于方案3中描述的方法通过由赤型或苏型手性醇对映选择性合成而获得。手性醇可通过类似于Tetrahedron，(55)，1999，2795-2810中描述的方法获得。在R代表乙烯基基团及R₁代表喹啉基基团的情况下，通式(II)二胺可按照方案3使用相应的市售手性醇制备。

通式(IV)外消旋酮可按照类似于Chem.Commun.，1999，1927-1928中描述的方法通过桥环状胺的活化络合物的去质子化并与亲电试剂例如酯或Weinreb酰胺反应制备，或者按照类似于J.Med.Chem.，1980，180-184中描述的方法通过有机金属化合物与2-奎宁酸乙酯反应制备，或者通过按照类似于J.Org Chem.，50，1985，29-31和Chem.Comm.，1999，1927-1929中描述的方法所得的相应醇用本领域技术人员已知的氧化剂例如二氧化锰或草酰氯-二甲基亚砜系统氧化制备。

通式(VI)醇也可通过在本领域技术人员已知的条件下还原相应的通式(IV)酮获得。

通式(III)的酸和酰氯可通过商业途径获得或通过本领域技术人员已知的类似方法制备。

例如，4-氨基-3-氯-5-三氟甲基苯甲酸可按照类似于Arzneim.Forsch.，34，11a，(1984)，1668-1679中描述的方法通过用磺酰氯在含氯溶剂例如氯仿中氯化4-氨基-5-三氟甲基苯甲酸制备。

2，6-二氯-3-三氟甲基苯甲酸可通过类似于US 3,823,134中描述的方法制备。

衍生自磺胺的苯甲酸可按照类似于专利DE-2436263、BE-620741、DE-1158957、US-3112337、GB-915259、US-3203987、DE-642758、EP-68700、FR-2396757、DE-2734270，及J.Pharm.Pharmacol.(1962)，14，679-685中描述的方法制备。

间氯磺酸可按照类似于J.Chem.Soc.(C)，(1968)，13，及专利US-2273444、DE-19929076、EP-0556674中描述的方法获得。

邻位或对位的氯磺化可按照类似于专利US-3663615中描述的方法由重氮盐与4-氨基-3-氯苯甲酸反应实现。

磺胺通过氯磺化衍生物在过量胺的存在下在例如四氢呋喃的溶剂中于室温或回流反应获得。

二级磺胺可按照类似于专利BE-620741中描述的方法甲基化。

一级磺胺可在例如四氢呋喃的溶剂中在例如碳酸钾的碱的存在下与异氰酸酯反应。

某些苯甲酸的亚砜衍生物在专利DE-2056912、DE-2901170及US-3953476中均有描述，或可通过类似于专利BE-872585及J.Org.Chem.，(1991)，56(1)，4976-4977中描述的方法获得。

通式(III)的苯甲酸衍生物(其中R₂代表支链烷基基团)可按照专利US-4879426及Syn.Lett.(1996)，473-474和J.Med.Chem.(2001)，44，1085-1098中描述的类似方法制备。

联苯型的苯甲酸衍生物可按照本领域技术人员已知的方法制备。

最后，羰基化苯甲酸可按照类似于专利US-3725417和GB-913100及Chem.Pharm.Bull.，(1988)，36(9)，3462-3467和J.Labelled Compd.Radiopharm.，(1997)，39(6)，501-508中描述的方法合成。

酯或酰胺可在Tetrahedron Lett.，(2000)，41，3157-3160中描述的条件下通过用强碱在酸的对位直接羰基化引入。

最后，苯甲酸的氰基衍生物通过在氰化钾、四(三苯基膦)合钯型催化剂的存在下，在四氢呋喃型溶剂中按照类似于J.Org.Chem.(1967)62，25，8634-8639中描述的方法加热卤化苯甲酸或苯甲酸酯获得。

其他通式(III)酸及酰氯可按照类似于专利EP-0556672、US-3801636及J.Chem.Soc.，(1927)，25、Chem.Pharm.Bull.，(1992)，1789-1792、Aust.J.Chem.，(1984)，1938-1950和J.O.C.，(1980)，527中描述的方法获得。

下述实施例举例说明几种本发明化合物的制备方法。元素分析、及IR、NMR光谱和手性柱HPLC图谱确证了所得化合物的结构和对映异构体纯度。

实施例标题括号中所标明的数字对应于稍后特定表格的第1列中的数字。

在化合物名称中，连字符“-”是词的一部分，连字符“_”只用作一行字末端断行的连接；在无断行时取消，并不应由正常连字符及空格代替。

实施例1(化合物N°3)

苏型-2-氯-N-[(1-氮杂双环[2.2.2]辛-2-基)苯基甲基]-3-三氟甲基苯甲酰胺盐酸盐1∶1

1.1.(Z)-1-氮杂双环[2.2.2.]辛-2-基(苯基)甲酮O-苄基肟盐酸盐

在装备有磁力搅拌的100ml烧瓶中，加入2.2g(9.35毫摩尔)1-氮杂双环[2.2.2.]辛-2-基(苯基)甲酮(Chem.Commun.，1999，1927-1928)和3g(18.69毫摩尔)苄氧基羟胺盐酸盐及50ml吡啶，回流加热该混合物20h。

减压蒸去溶剂后，用水和氯仿稀释残留物，分离水层，并用氯仿萃取。洗涤合并的有机相后，用硫酸钠干燥并减压蒸去溶剂，残留物用硅胶柱层析纯化，用氯仿和甲醇混合物洗脱。

得到0.5g相应于(E)-1-氮杂双环[2.2.2.]辛-2-基(苯基)甲酮O-苄基肟的组分，及2.25g相应于(Z)-1-氮杂双环[2.2.2.]辛-2-基(苯基)甲酮O-苄基肟盐酸盐的另一组分，熔点195-197℃。

1.2.苏型-[1-氮杂双环[2.2.2.]辛-2-基(苯基)甲基]胺

在装备有磁力搅拌的250ml三颈烧瓶及氮气气氛中，将1.3g(34.32毫摩尔)氢化锂铝的10ml四氢呋喃悬浮液置于其中，分部向其中加入2.2g(6.16毫摩尔)(Z)-1-氮杂双环[2.2.2.]辛-2-基(苯基)甲酮O-苄基肟盐酸盐并回流加热2h。

冷却后，于0℃先后加入1.3ml水、1.3ml 15％苏打水溶液及3.9ml水水解该溶液。用过滤该多相混合物，滤液减压浓缩，然后用1N盐酸和氯仿稀释该残留物。分离有机层并用氨水碱化水层。用氯仿萃取2次。洗涤合并的有机相后，用硫酸钠干燥并减压蒸去溶剂，得到1.25g油状可结晶的苏型-[1-氮杂双环[2.2.2.]辛-2-基(苯基)甲基]胺，在下步反应中直接使用。熔点：120-140℃。

1.3.苏型-2-氯-N-[(1-氮杂双环[2.2.2.]辛-2-基)苯基甲基]-3-三氟甲基苯甲酰胺盐酸盐1∶1

在装备有磁力搅拌的100ml烧瓶中，于0℃将0.51g(2.12毫摩尔)2-氯-3-三氟甲基苯甲酰氯的5ml氯仿溶液及0.29g(2.12毫摩尔)碳酸钾置于其中，加入0.42g(1.93毫摩尔)苏型-[1-氮杂双环[2.2.2.]辛-2-基(苯基)甲基]胺的5ml氯仿溶液，室温搅拌该混合物6h。

用水水解并用氯仿稀释后，分离水层并用氯仿萃取。洗涤合并的有机相后，用硫酸钠干燥并减压蒸去溶剂，残留物用硅胶柱层析纯化，用氯仿和甲醇混合物洗脱。得到0.18g油状产物。

将该产物溶解于几ml的丙-2-醇中，加入6ml 0.1N盐酸的丙-2-醇溶液，减压浓缩该混合物以减少溶剂体积。研磨后，最终分离得到0.15g固体盐酸盐。熔点：257-262℃。

实施例2(化合物N°4)

苏型-2，6-二氯-N-[(1-氮杂双环[2.2.2.]辛-2-基)苯基甲基]-3-三氟甲基苯甲酰胺盐酸盐1∶1

在装备有磁力搅拌的100ml烧瓶中，加入0.36g(1.38毫摩尔)2，6-二氯-3-三氟甲基苯甲酸、0.187g(1.38毫摩尔)羟基苯并三唑、0.264g(1.38毫摩尔)1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的7ml氯仿溶液，室温搅拌该混合物30分钟。

加入0.3g(1.38毫摩尔)苏型-[1-氮杂双环[2.2.2.]辛-2-基(苯基)甲基]胺的5ml氯仿溶液并室温搅拌过夜。

用水水解并用氯仿稀释后，分离水层并用氯仿萃取。洗涤合并的有机相后，用硫酸钠干燥并减压蒸去溶剂，残留物用硅胶柱层析纯化，用氯仿和甲醇混合物洗脱。得到0.37g油状产物。

将该产物溶解于几ml的丙-2-醇中，加入20ml 0.1N盐酸的丙-2-醇溶液，减压浓缩该混合物以减少溶剂体积。研磨后，最终分离得到0.35g固体盐酸盐。熔点：270-273℃。

实施例3(化合物N°14)

2-氯-N-(8α，9S-辛可那-9-基)-3-三氟甲基苯甲酰胺盐酸盐2∶13.1.8α，9S-辛可那-9-胺

在装备有磁力搅拌的100ml三颈烧瓶及氮气气氛中，将0.74g(2.5毫摩尔)8α，9R-辛可那-9-醇(辛可尼丁)及0.79g(3毫摩尔)三苯基膦的15ml四氢呋喃悬浮液置于其中，加入3.5ml 0.9M叠氮酸的苯溶液(3毫摩尔)。向该溶液中滴加0.55ml(2.75毫摩尔)二异丙基碳二亚胺的1.5ml四氢呋喃溶液，并于40℃加热16h。

加入0.65g(2.5毫摩尔)三苯基膦并搅拌30分钟，加入0.5ml水并再搅拌6h。

用1N盐酸水解并用氯仿稀释。用氨水碱化水层并用氯仿萃取几次。洗涤合并的有机相后，用硫酸钠干燥并减压蒸去溶剂，得到0.97g橙色油状8α，9S-辛可那-9-胺，在下步反应中使用该产物的粗品。

3.2.2-氯-N-(8α，9S-辛可那-9-基)-3-三氟甲基苯甲酰胺盐酸盐2∶1

按照实施例1.3中描述的方法，从0.97g(3.3毫摩尔)8α，9S-辛可那-9-胺、0.84g(3.4毫摩尔)2-氯-3-三氟甲基苯甲酰氯和0.5g(3.63毫摩尔)碳酸钾，得到0.360g油状物，并将其溶解于30ml 1N盐酸中。用氯仿萃取水层，然后减压蒸发溶剂。得到0.26g白色固体盐酸盐。

熔点：185-205℃；[α]_D ²⁵＝-5.4(c＝0.986，MeOH)。

实施例4(化合物N°17)

2，6-二氯-N-[(1S)-[(2S)(1-氮杂双环[2.2.2]辛-2-基)苯基甲基]-3-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐1∶1

4.1(1S)-[(2S)-1-氮杂双环[2.2.2.]辛-2-基(苯基)甲基]胺D-酒石酸盐

将9.4g(43.45毫摩尔)苏型-[1-氮杂双环[2.2.2.]辛-2-基(苯基)甲基]胺溶解于150ml乙醇中。向其中加入6.52g(43.45毫摩尔)D-酒石酸的200ml乙醇溶液。减压蒸去溶剂后，将残留物置于500ml乙醇/水(9/1)溶液中，然后加热至溶解。连续3次重结晶后，得到5.39g(1S)-[(2S)-1-氮杂双环[2.2.2.]辛-2-基(苯基)甲基]胺D-酒石酸盐。

熔点：125-135℃。

[α]_D ²⁵＝-46.1(c＝0.616；MeOH)。

4.2.2，6-二氯-N-[(1S)-[(2S)(1-氮杂双环[2.2.2]辛-2-基)苯基甲基]-3-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐1∶1

在装备有磁力搅拌的100ml烧瓶中，于0℃加入3.33g(12.02毫摩尔)2，6-二氯-3-(三氟甲基)苯甲酰氯的30ml氯仿溶液及1.82g(13.22毫摩尔)碳酸钾，向其中加入2.6g(12.02毫摩尔)(1S)-[(2S)-1-氮杂双环[2.2.2.]辛-2-基(苯基)甲基]胺(由碱化4.1中描述的盐然后萃取获得)的40ml氯仿溶液，并室温搅拌该混合物6h。

用水水解并用氯仿稀释后，分离水层并用氯仿萃取。洗涤合并的有机相后，用硫酸钠干燥并减压蒸去溶剂，残留物用硅胶柱层析纯化，用氯仿和甲醇混合物洗脱。得到5.4g油状产物。

将该产物溶解于几ml氯仿中，加入600ml盐酸饱和的乙醚溶液，减压浓缩该混合物。残留物用乙酸乙酯重结晶。得到4.7g 2，6-二氯-N-[(1S)-[(2S)(1-氮杂双环[2.2.2]辛-2-基)苯基甲基]-3-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐。

熔点：264-268℃。

[α]_D ²⁵＝+61.1°(c＝0.32；MeOH)。

实施例5(化合物N°26)

苏型N-[1-氮杂双环[2.2.2]辛-2-基(4-氟苯基)甲基]-2，6-二氯-3-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐1∶1

5.11-氮杂双环[2.2.2]辛-2-基(4-氟苯基)甲醇

在100ml三颈烧瓶中及氩气中，于0℃将1.11g(10毫摩尔)喹核碱置于40ml无水四氢呋喃中。逐滴加入1.33ml(10.5毫摩尔)三氟化硼-乙醚络合物，于0℃搅拌30min(溶液A)。在250ml三颈烧瓶中及氩气中，平行地将2.47g(22毫摩尔)无水叔丁基醇钾置于60ml无水四氢呋喃中。冷却至-70℃并逐滴加入22ml 1M仲丁基锂的环己烷/己烷(22毫摩尔)混合物溶液，并保持温度低于-60℃(溶液B)。加料完成后，将溶液A导入到溶液B中，维持温度约为-70℃并搅拌2h。

在50ml三颈烧瓶中及氩气中，于-70℃将2.36ml(22毫摩尔)重蒸4-氟苯甲醛置于20ml四氢呋喃溶液中。导入溶液B并保持温度至约-70℃。将所得溶液于-70℃放置30min并使温度上升至-20℃。然后用10％盐酸溶液水解。用乙醚萃取后再取水层，并用氨水碱化。用氯仿萃取，然后减压蒸去溶剂。残留物用硅胶柱层析纯化，用氯仿和甲醇混合物洗脱。得到0.53g黄色固体1-氮杂双环[2.2.2]辛-2-基(4-氟苯基)甲醇。

熔点：69-70℃。

5.21-氮杂双环[2.2.2]辛-2-基(4-氟苯基)甲酮

在250ml三颈烧瓶中及氮气中，于-70℃将1.3ml二甲基亚砜置于40ml四氢呋喃中，逐滴加入0.9ml草酰氯(11毫摩尔)，并在该温度下搅拌30min。逐滴加入1g(4.6毫摩尔)1-氮杂双环[2.2.2]辛-2-基(4-氟苯基)甲醇的40ml四氢呋喃溶液。30min后，于-70℃加入4ml(27.6毫摩尔)三乙胺。然后于-70℃搅拌该反应混合物30min、于0℃搅拌30min、然后室温搅拌1h。

将该混合物倾入氨水溶液中，然后用氯仿萃取几次。有机层用硫酸钠干燥并减压蒸发。残留物用硅胶柱层析纯化，用氯仿和甲醇混合物洗脱。得到1g 1-氮杂双环[2.2.2]辛-2-基(4-氟苯基)甲酮。

熔点：68-69℃。

5.3(Z)1-氮杂双环[2.2.2]辛-基(4-氟苯基)甲酮O-苄基肟盐酸盐

根据实施例1.1中描述的操作方法，从1.17g(5毫摩尔)酮开始，反应液处理后，所得残留物用乙醚研磨后得到1.4g(Z)1-氮杂双环[2.2.2]辛-基(4-氟苯基)甲酮O-苄基肟盐酸盐。

熔点：202-203℃。

5.4苏型1-氮杂双环[2.2.2]辛-基(4-氟苯基)甲胺

根据1.2中描述的操作方法，从1.47g(4.54毫摩尔)(Z)1-氮杂双环[2.2.2]辛-基(4-氟苯基)甲酮O-苄基肟盐酸盐开始，得到1g苏型1-氮杂双环[2.2.2]辛-基(4-氟苯基)甲胺(非对映异构体过量，de＝90％)。

5.5N-[(S)-(2S)-1-氮杂双环[2.2.2]辛-2-基(4-氟苯基)甲基]-2，6-二氯-3-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐1∶1

根据1.3中描述的操作方法，从0.39g(1.66毫摩尔)苏型1-氮杂双环[2.2.2]辛-基(4-氟苯基)甲胺、0.5g(1.83毫摩尔)2，6-二氯-3-三氟甲基苯甲酰氯、0.25g(1.83毫摩尔)碳酸钾开始，层析纯化后得到0.79g油状苏型N-[1-氮杂双环[2.2.2]辛-2-基(4-氟苯基)甲基]-2，6-二氯-3-(三氟甲基)苯甲酰胺，然后用氯化氢气体的乙醚溶液成盐。

熔点：290-291℃。

其他化合物按照实施例1、2和5中描述的方法，从其他功能化的醛起始获得。

下列表1举例说明几种本发明化合物的化学结构。

在″R″列中，-CH＝CH₂指乙烯基基团，在″R₁″列中，C₆H₅指苯基基团而4-C₉H₆N指喹啉-4-基基团。在″盐″列中，-指碱形式的化合物，″HCl″指盐酸盐，″tfa″指三氟醋酸盐。

表中化合物14、19至23、24以一个或多个水分子的溶剂化盐酸盐或二盐酸盐(见表)存在。

表中化合物15和16形成一对对映异构体，可用制备型HPLC分离，使用AD 20μm柱，溶剂为异己烷/丙-2-醇95/5混合物，对化合物17和18也同样。

表2中给出化合物的物理性质、熔点和旋光度。″(d)″表示在熔点处分解。

表2

对本发明化合物进行了一系列的药理测试，结果显示它们作为治疗活性物质的重要性是明显的。

在表达人类天然转运蛋白glyt1的SK-N-MC细胞中的甘氨酸转 运的研究

在有或无受试化合物的存在下，通过测定结合放射活性，研究了在表达人类天然转运蛋白glyt1的SK-N-MC细胞(人类神经上皮细胞)中[¹⁴C]甘氨酸的捕获。在用0.02％纤连蛋白预先处理的板中，孵育单层细胞48h。试验当天，弃去培养液，细胞用pH 7.4的Krebs-HEPES缓冲液([4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸)洗涤。于37℃在缓冲液(对照组)或不同浓度受试化合物或10mM甘氨酸(非特异性捕获的测定)的存在下预孵育10min后，然后加入10μM[¹⁴C]甘氨酸(特异性活性112mCi/毫摩尔)。于37℃继续孵育10min，通过用pH 7.4的Krebs-HEPES缓冲液洗涤2次终止该反应。在加入100μl闪烁液并搅拌1h后，测定细胞结合放射活性。用Microbeta Tri-lux^TM计数器计数。化合物的有效性由化合物降低50％甘氨酸特异性捕获的浓度IC₅₀确定，而该浓度由对照组和含有10mM甘氨酸组的结合放射活性之差确定。

在该试验中，本发明活性最强的化合物的IC₅₀为0.001-10μM。

一些化合物的具体结果如下(IC₅₀，单位μM)：

化合物N°3                0.017

化合物N°4                0.004

化合物N°14               0.07

化合物N°17               0.001

化合物N°26               0.07

化合物对小鼠皮质均质体中[¹⁴C]甘氨酸捕获抑制活性的体外研究

试验当天，以逐渐增加的剂量经口(通过在研钵中在0.5％Tween/Methocel^TM蒸馏水溶液中研磨受试分子制备)或腹膜内(将受试分子溶解于生理血清中，或根据该分子的溶解性，通过在研钵中在0.5％Tween/Methocel^TM蒸馏水溶液中研磨制备)给予20-25g OF1 IffaCrédo雄性小鼠待研究化合物。对照组给予载体。剂量以mg/kg表示，给药途径和治疗时间由待研究分子的性能确定。

在给药后的特定时间，动物以安乐死方式处死，将每个动物的皮质迅速在冰上剥除、称重并于4℃保存或在-80℃冷冻(在这两种情况下，样品最多保存1天)。各样品均在pH 7.4Krebs-HEPES缓冲液中按照10ml/g组织进行均质化。在10mML-丙氨酸和缓冲液的存在下，20μl各均质体在室温孵育10min。通过向对照组中加入10mM甘氨酸确定非特异性捕获。该反应由抽滤终止，所获得的放射活性通过固体闪烁测定，在Microbeta Tri-lux^TM计数器上计数。

[¹⁴C]甘氨酸捕获抑制剂将减少各均质体中结合放射配体的量。化合物的活性由其ED₅₀(相对于对照组抑制50％[¹⁴C]甘氨酸捕获的剂量)评价。

在该试验中，最有效的本发明化合物由腹膜内或口服给药的ED₅₀为0.1-5mg/kg。

小鼠脊髓均质体中甘氨酸转运的研究

在有或无被研究化合物的存在下，通过测定结合放射活性，研究了小鼠脊髓均质体中转运蛋白glyt2对[¹⁴C]甘氨酸的捕获。

动物(试验当天重20-25g的OF1 Iffa Crédo雄性小鼠)安乐死后，将每个动物的脊髓迅速剥除、称重并保存在冰中。样品在pH 7.4Krebs-HEPES缓冲液([4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸)中按照25ml/g组织进行均质化。50μl均质体在pH 7.4Krebs-HEPES缓冲液和不同浓度的待研究化合物或10mM甘氨酸(以测定非特异性捕获)的存在下于25℃预孵育10min。然后于25℃在10min内加入[¹⁴C]甘氨酸(特异活性＝112mCi/毫摩尔)，使最终浓度为10μM。该反应由抽滤终止，放射活性通过固体闪烁测定，在Microbeta Tri-lux^TM计数器上计数。

化合物的有效性由化合物降低50％甘氨酸特异性捕获的浓度IC₅₀确定，而该浓度由对照组和含有10mM甘氨酸组的结合放射活性之差确定。

在该试验中，本发明活性最强的化合物的IC₅₀为0.02-10μM。

化合物N°17的IC₅₀为0.69μM。

用本发明通式(I)化合物进行的试验的结果表明，它们是甘氨酸转运蛋白glyt1(大部分存在于脑中)抑制剂和甘氨酸转运蛋白glyt2(大部分存在于脊髓)抑制剂。

因此本发明的化合物可用于药物的制备，尤其是制备甘氨酸转运蛋白glyt1和/或glyt2抑制剂药物。

由此根据另一方面，本发明的目的是包含式(I)化合物、或其与药学上可接受的酸的加成盐、或式(I)化合物的水合物或溶剂化物的药物。

本发明化合物尤其可用于治疗与痴呆、精神病、特别是精神分裂症(不足型和产出型)及由安定药引发的急性或慢性锥体外症状相关的行为障碍，治疗各种形式的焦虑、惊慌发作、恐怖症、强制性障碍，治疗各种形式的抑郁，包括精神病抑郁，治疗酒精滥用或戒除引起的障碍，性行为障碍，摄食障碍，及治疗偏头痛。

另外，本发明化合物可用于治疗风湿病和急性脊柱病引起的疼痛性肌肉挛缩，治疗髓的或脑的痉挛性挛缩，治疗轻度至中度急性和亚急性疼痛症状，治疗强烈和/或慢性疼痛、神经原疼痛和难治的疼痛，治疗帕金森病及神经变性或由安定药引起的帕金森氏症状，治疗一级和二级普遍性癫痫，部分单纯的或复杂的症状，混合型及其他癫痫综合征而作为其他抗癫痫治疗的补充或单一疗法，治疗睡眠呼吸暂停及神经保护。

本发明的目的也是含有效剂量的为药学上可接受的碱或盐或溶剂化物及与一种或多种常规赋形剂的混合物(如果合适)形式的至少一种本发明化合物的药用组合物。

根据药物剂型及所期望的给药方式选择所述赋形剂。

本发明的药用组合物也可经口、舌下、皮下、肌内、静脉内、局部、气管内、鼻内、经皮、直肠、眼内给药。

给药的单位剂量形式例如可为片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、口服或注射溶液或悬浮液、经皮给药膏药(药膏)、栓剂。对局部给药而言，可使用软膏、洗剂和洗眼剂。

作为实例，片剂形式的本发明化合物的给药单位剂量形式可包含下列成分：

本发明化合物                  50.0mg

甘露醇                        223.75mg

交联羧甲基纤维素钠            6.0mg

玉米淀粉                      15.0mg

羟丙基-甲基纤维素             2.25mg

硬脂酸镁                      3.0mg

根据制剂形式，给予所述单位剂量形式以使每公斤体重日服用0.01-20mg主要活性物质。

会有特殊情况，其中更高或更低剂量为合适剂量，这种剂量不超出本发明的范围。根据常规用法，每个病人的合适剂量由医生根据给药方式、体重及病人的反应确定。

本发明根据其另一些方面也涉及上述病症的治疗方法，包括给予病人有效量的本发明的化合物、或其药学上可接受的盐或其水合物或其溶剂化物。

Claims (8)

1.相应于通式(I)的化合物，

其中

R代表氢原子或乙烯基基团；

n代表1；

当R代表氢原子或乙烯基基团时X代表式CH基团；

R₁代表任选由一个或多个卤素原子取代的苯基，或者R₁代表喹啉基；

R₂代表一个或多个选自卤素原子和三氟甲基的取代基；

所述化合物以游离碱或与酸的加成盐的形式存在。

2.权利要求1的化合物，其特征在于所述化合物为苏型构型。

3.权利要求1的化合物，其特征在于R代表氢原子。

4.权利要求1的化合物，其特征在于R₁代表任选由一个或多个卤素原子取代的苯基基团。

5.权利要求1的化合物，其特征在于所述化合物选自：

(1)苏型-2-氯-N-[(1-氮杂双环(2.2.2)辛-2-基)-苯基甲基]-3-三氟甲基苯甲酰胺；

(2)苏型-2-氯-N-[(1-氮杂双环(2.2.2)辛-2-基)-苯基甲基]-3-三氟甲基苯甲酰胺盐酸盐；

(3)苏型-2，6-二氯-N-[(1-氮杂双环(2.2.2)辛-2-基)-苯基甲基]-3-三氟甲基苯甲酰胺；

(4)苏型-2，6-二氯-N-[(1-氮杂双环(2.2.2)辛-2-基)-苯基甲基]-3-三氟甲基苯甲酰胺盐酸盐；

(5)2-氯-N-(8α，9s-辛可那-9-基)-3-三氟甲基-苯甲酰胺；

(6)2-氯-N-(8α，9s-辛可那-9-基)-3-三氟甲基-苯甲酰胺盐酸盐；

(7)2，6-二氯-N-[(1S)-((2S)(1-氮杂双环(2.2.2)辛-2-基)-苯基甲基)]-3-(三氟甲基)苯甲酰胺；

(8)2，6-二氯-N-[(1S)-((2S)(1-氮杂双环(2.2.2)辛-2-基)-苯基甲基)]-3-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐；

(9)苏型-N-[1-氮杂双环(2.2.2)辛-2-基(4-氟苯基)-甲基]-2，6-二氯-3-(三氟甲基)苯甲酰胺；

(10)苏型-N-[1-氮杂双环(2.2.2)辛-2-基(4-氟苯基)-甲基]-2，6-二氯-3-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐。

6.一种药用组合物，其特征在于所述药用组合物包含权利要求1-5任一项的化合物及至少一种药学上可接受的赋形剂。

7.权利要求1-5中任一项的式(I)化合物在制备用于抑制glyt1的药物中的用途。

8.权利要求1-5中任一项的式(I)化合物在制备用于抑制glyt2的药物中的用途。