HK1080115B - Cultures of e1-immortalized cells and processes for culturing the same to increase product yields therefrom - Google Patents

Claims (18)

1. Procédé pour la mise en culture de cellules qui dérivent de cellules PER.C6 afin d'augmenter les rendements en produits à partir desdites cellules, lesdites cellules étant capables de croître en suspension, comprenant les étapes :

   a) de détermination, au moins une fois au cours de la mise en culture des cellules, de la concentration d'au moins un composant du milieu choisi parmi le groupe constitué par le glucose, la glutamine, le phosphate, la leucine, la sérine, l'isoleucine, l'arginine, la méthionine, la cystéine, la valine, la lysine, la thréonine et la glycine ;

   b) d'addition des composants au milieu au cours de la mise en culture des cellules lors de la déplétion d'au moins un des composants dont la concentration a été déterminée à l'étape a) ou avant ladite déplétion, dans lequel

   les composants ajoutés comprennent au moins du glucose, de la glutamine, du phosphate, de la leucine, de la sérine, de l'isoleucine, de l'arginine, de la méthionine et de la cystéine.
2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel ledit au moins un composant du milieu, dont la concentration est déterminée à l'étape a), est choisi parmi le groupe constitué par le glucose, la glutamine, le phosphate, la leucine, la sérine, l'isoleucine, l'arginine, la méthionine et la cystéine.
3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, dans lequel, à l'étape a), on détermine la concentration d'au moins deux desdits composants du milieu.
4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel les composants ajoutés à l'étape b) comprennent en outre un ou plusieurs des composants ci-après : la valine, la lysine, la thréonine, la glycine, l'asparagine, la tyrosine, l'histidine, la phénylalanine, le tryptophane, le phosphate, le calcium, LongR3 IGF-1, Long EGF et l'insuline.
5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel les composants à l'étape b) sont ajoutés pour obtenir une concentration finale, en mmoles/l de composant fraîchement ajouté par 10 x 10⁶ cellules/ml, entre 4,0 et 8,0 pour le glucose, 0,44 et 0,88 pour la leucine, 0,37 et 1,47 pour la sérine, 0,33 et 0,67 pour l'isoleucine, 0,31 et 0,61 pour l'arginine, 0,15 et 0,31 pour la méthionine, et 0,1 et 0,6 pour la cystéine.
6. Procédé selon la revendication 5, dans lequel, à l'étape b), on ajoute en outre de la glutamine pour obtenir une concentration finale entre 1,17 et 3,47 mmoles/l de glutamine fraîchement ajoutée par 10 x 10⁶ cellules/ml.
7. Procédé selon la revendication 6, dans lequel les composants à l'étape b) sont ajoutés à plus d'une reprise, caractérisé en outre en ce que, à titre de résultat de la première addition, la concentration finale de la glutamine fraîchement ajoutée est supérieure à celle que l'on obtient comme résultat d'une addition ultérieure.
8. Procédé selon la revendication 5, dans lequel on ajoute en outre de la glutamine essentiellement en continu de telle sorte que la concentration résiduelle de la glutamine dans le milieu se maintient entre 0,2 et 1,5 mM, de préférence entre 0,5 et 1,0 mM.
9. Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 8, dans lequel, à l'étape b), on ajoute en outre les composants suivants pour obtenir une concentration finale, en mmoles/l de composant fraîchement ajouté par 10 x 10⁶ cellules/ml, entre 0,3 et 0,6 pour la valine, 0,29 et 0,59 pour la lysine, 0,2 et 0,4 pour la thréonine.
10. Procédé selon la revendication 9, dans lequel, à l'étape b), on ajoute en outre les composants suivants pour obtenir une concentration finale, en mmoles/l de composant fraîchement ajouté par 10 x 10⁶ cellules/ml, entre 0,067 et 0,13 pour l'asparagine, 0,087 et 0,17 pour la tyrosine, 0,067 et 0,13 pour l'histidine, 0,013 et 0,027 pour la phénylalanine, et 0,04 et 0,08 pour le tryptophane.
11. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, dans lequel l'addition des composants à l'étape b) est mise en oeuvre entre 48 heures et juste avant la déplétion d'au moins un des composants du milieu dont la concentration a été déterminée à l'étape précédente.
12. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, dans lequel lesdites étapes sont répétées au moins une fois.
13. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, dans lequel on fait croître les cellules pour obtenir une densité cellulaire d'au moins 9 x 10⁶ par ml.
14. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 13, dans lequel les cellules fournissent un produit qui est récolté.
15. Procédé selon la revendication 14, dans lequel ledit produit est une protéine recombinante.
16. Procédé selon la revendication 15, dans lequel ladite protéine recombinante est une immunoglobuline qui est sécrétée dans le milieu de culture jusqu'à une teneur d'au moins 500 mg par litre.
17. Procédé selon la revendication 16, dans lequel ladite protéine recombinante est une immunoglobuline qui est sécrétée dans le milieu de culture jusqu'à une teneur d'au moins 1.000 mg par litre.
18. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel les cellules sont mises en suspension lors de la mise en culture.