HK1064681B - Process for the purification and/or isolation of biologically active granulocyte colony stimulating factor - Google Patents

Claims (12)

1. Un procédé pour la séparation d'un G-CSF correctement replié et biologiquement actif à partir d'un G-CSF biologiquement inactif et non correctement replié qui comprend : l'élaboration d'un mélange qui comprend une forme biologiquement active de G-CSF en présence d'une impureté, et la soumission desdits mélanges à une IMAC, ce procédé comprenant les étapes suivantes, en l'absence d'agents dénaturants :

   • le chargement dudit mélange, qui comprend le G-CSF biologiquement actif en présence d'une impureté, sur un support à l'IMAC,

   • la liaison sélective de la forme biologiquement active du G-CSF à un support d'IMAC,

   • le lavage de la colonne d'IMAC et,

   • l'élution de la forme biologiquement active de G-CSF à partir du support d'IMAC pour obtenir le G-CSF biologiquement actif,

   dans lequel une IMAC est entreprise avec un ion métallique chélaté lié au support d'IMAC, dans laquelle l'ion métallique n'est pas Hg.
2. Le procédé selon la revendication 1, dans lequel ledit mélange comprend une impureté qui est au moins une substance faisant partir du groupe qui consiste en des formes monomériques biologiquement inactives et des molécules de G-CSF non correctement repliées, des formes oligomériques et polymériques et polymériques de G-CSF, des formes dénaturées de G-CSF, des protéines de cellules d'hôte et d'autres substances de cellules d'hôte ; et dans lequel l'IMAC est réalisée de telle manière que l'impureté est substantiellement non liée au support d'IMAC et éluée avant l'élution de la forme biologiquement active de G-CSF.
3. Le procédé selon la revendication 1 ou 2, dans lequel le G-CSF biologiquement actif est au moins un composé sélectionné du groupe formé par des G-CSF non glycosylés, des G-CSF méthionylés, des analogues de G-CSF, des formes de G-CSF modifiées chimiquement ou enzymatiquement et des protéines de fusion qui comprennent le G-CSF.
4. Le procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes dans lequel ledit mélange contenant le G-CSF est sélectionné du groupe formé par : un mélange, milieu ou solution, obtenu après dénaturation suivre d'une renaturation; une solution ou suspension de corps occlusion dans des conditions natives ; un mélange ou solution obtenu à partir du surnageant après l'expression dans des systèmes secrétoires ou à partir d'un milieu de culture d'un système d'expression ; et un éluat qui a été obtenu par une élution précédente de G-CSF à partir d'une colonne d'IMAC ou de toute autre colonne chromatographique.
5. Le procédé selon la revendication 1 ou 4, dans lequel ledit mélange comprend une solution ou suspension de corps d'inclusion dans des conditions natives.
6. Le procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes dans lequel une IMAC avec un ion métallique chélaté lié au support d'IMAC est réalisée dans laquelle l'ion métallique chélaté lié au support d'IMAC est sélectionné du groupe formé de M(II)-iminodiacétate, d'acide M(II) nitrilotriacétique et d'aspartate de M(II)-carboxyméthyle dans lequel M est sélectionné du groupe formé par Zn, Cu, Co et Ni.
7. Le procédé selon la revendication 6, dans lequel l'ion métallique chélaté lié au support d'IMAC est sélectionné du groupe formé de l'iminodiacétate de Zn (II), l'iminodiacétate de Ni (II) et l'acide (II)-nitrilotriacétique.
8. Le procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, comprenant, en outre, l'étape ou les étapes de chromatographie de filtration sur gel.
9. Le procédé selon la revendication 1, dans lequel le G-CSF est soumis à une ou des étapes chromatographiques qui consistent uniquement en IMAC et éventuellement au moins une des méthodes de purification sélectionnées à partir de techniques d'échange d'ion et de filtration sur gel.
10. Le procédé selon la revendication 9, dans lequel le mélange contenant le G-CSF est exempt d'agent détergent ou solubilisant ou contient un agent détergent ou solubilisant à une concentration ou le G-CSF est présent dans des conditions natives.
11. Le procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes dans lequel le procédé dans son ensemble est réalisé dans des conditions natives.
12. Le procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes comprenant, en outre, l'étape d'utilisation du G-CSF obtenu pour la préparation d'un médicament.