HK1064681B - Process for the purification and/or isolation of biologically active granulocyte colony stimulating factor - Google Patents

Claims (12)

1. Verfahren zur Abtrennung von biologisch aktivem, korrekt gefaltetem G-CSF von inkorrekt gefaltetem, biologisch inaktivem G-CSF, durch Bereitstellung eines Gemisches, das eine biologisch aktive Form von G-CSF in der Anwesenheit einer Verunreinigung umfasst, und Unterziehung solcher Gemische einer IMAC in Abwesenheit von Denaturierungsmitteln, wobei dieses Verfahren die folgenden Stufen umfasst

   • Aufbringung eines solchen Gemisches, das den biologisch aktiven G-CSF in der Gegenwart einer Verunreinigung umfasst, auf einen IMAC Träger,

   • selektive Bindung der biologisch aktiven Form von G-CSF an den IMAC Träger,

   • Waschung der IMAC Säule, und

   • Elution der biologisch aktiven Form von G-CSF von dem IMAC Träger unter Erhalt des biologisch aktiven G-CSF,

   wobei die IMAC mit einem chelatisierten Metallion durchgeführt wird, das an den IMAC Träger gebunden ist, worin das Metallion kein Hg ist.
2. Verfahren nach Anspruch 1, worin das erwähnte Gemisch eine Verunreinigung umfasst, die wenigstens eine Substanz aus der Gruppe ist, die besteht aus biologisch inaktiven monomeren Formen und inkorrekt gefalteten Molekülen von G-CSF, oligomeren und polymeren Formen von G-CSF, denaturierten Formen von G-CSF, Wirtzellproteinen und anderen Wirtzellsubstanzen, worin die IMAC in einer Weise durchgeführt wird, dass die Verunreinigung substantiell nicht an den IMAC Träger gebunden ist und eluiert wird vor einer Elution der biologisch aktiven Form von G-CSF.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, worin der biologisch aktive G-CSF wenigstens ein Faktor ist, der aus der Gruppe ausgewählt ist, die besteht aus nicht glycosyliertem G-CSF, glycosyliertem G-CSF, Methionyl G-CSF, G-CSF Analoga, enzymatisch oder chemisch modifizierten Formen von G-CSF und Fusionsproteinen, die G-CSF umfassen.
4. Verfahren nach einem der vorherigen Ansprüche, worin das G-CSF enthaltende Gemisch ausgewählt ist aus der Gruppe, die besteht aus einem Gemisch, einem Medium oder einer Lösung, die erhalten worden sind nach einer Denaturierung und einer anschließenden Renaturierung, einer Lösung oder Suspension von Inklusionskörpern unter nativen Bedingungen, einem Gemisch oder einer Lösung, erhalten aus dem Überstand nach der Expression in sekretorischen Systemen oder einem Kulturmedium eines Expressionssystems, und einem Eluat, das erhalten worden ist durch eine vorherige Elution von G-CSF aus einer IMAC Säule oder irgendeiner sonstigen Chromatographiesäule.
5. Verfahren nach Anspruch 1 oder 4, worin das Gemisch eine Lösung oder Suspension eines Inklusionskörpers unter nativen Bedingungen umfasst.
6. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, worin eine IMAC mit einem chelatisierten Metallion durchgeführt wird, das an den IMAC Träger gebunden ist, worin das chelatisierte Metallion, das an den IMAC Träger gebunden ist, ausgewählt ist aus der Gruppe, die besteht aus M(I1)-Iminodiacetat, M(II)-Nitrilotriessigsäure und M(II)-Carboxymethylaspartat, worin M ausgewählt ist aus der Gruppe, die besteht aus Zn, Cu, Co und Ni.
7. Verfahren nach Anspruch 6, worin das chelatisierte Metallion, das an den IMAC Träger gebunden ist, ausgewählt ist aus der Gruppe, die besteht aus Zn(II)-Iminodiacetat, Ni(II)-Iminodiacetat und Ni(II)-Nitrilotriessigsäure.
8. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, weiter umfassend die Stufen einer Kationenaustauschchromatographie und/oder einer Gelfiltrationschromatographie.
9. Verfahren nach Anspruch 1, worin die G-CSF Chromatographiestufen unterzogen wird, die nur aus IMAC bestehen, und optional wenigstens einem der Reinigungsverfahren unterzogen wird, die ausgewählt sind aus Ionenaustauschtechniken und Gelfiltrationstechniken.
10. Verfahren nach Anspruch 9, worin das Gemisch, das das G-CSF enthält, frei ist von Tensid oder einem Solubilisierungsmittel oder ein Tensid oder Solubilisierungsmittel in einer Konzentration enthält, worin das G-CSF unter nativen Bedingungen anwesend ist.
11. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, worin das gesamte Verfahren unter nativen Bedingungen durchgeführt wird.
12. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, weiter umfassend die Stufe einer Verwendung des erhaltenen G-CSF zur Herstellung eines Arzneimittels.