FI96863C

FI96863C - Menetelmä lääkeaineina käyttökelpoisten /2-(1-homopiperatsiinikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio/-6-(1-hydroksietyyli)-1-karbapen-2-eemi-3-karboksylaattisuolojen valmistamiseksi

Info

Publication number: FI96863C
Application number: FI910860A
Authority: FI
Inventors: Isao Kawamoto; Masao Miyauchi; Rokuro Endo; Eiji Nakayama; Satoshi Ohya; Yukio Utsui
Original assignee: Sankyo Co
Priority date: 1990-02-23
Filing date: 1991-02-22
Publication date: 1996-09-10
Also published as: FI910860A7; NO178498C; KR910021402A; NZ237191A; CZ289263B6; FI96863B; AU646012B2; AU7132291A; NO910723D0; CS9100483A2; NO178498B; IE910606A1; HUT58100A; RU2059639C1; EP0443883A1; PT96872A; US5420119A; FI910860A0; US5310735A; NO910723L

Description

96863

Menetelmä lääkeaineina käyttökelpoisten [2-(l-homopiperatsiini-karbonyyli)pym>lidin-4-yylitio]-6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -karbapen- 2-eemi-3-karboksylaattisuolojen valmistamiseksi Förfarande för framställning av som läkemedel användbara 5 [2-(l-homopiperazinkarbonyl)pyrrolidin-4-yltio]-6-( 1-hydroxietyl)-1 -karbapen-2-em-3-karboxylatsalt

Keksinnön kohteena on menetelmä lääkeaineina käyttökelpoisten kaavan (I) mukaisten 10 [2-( 1 -homopiperatsiinikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -karbapen-2- eeni-3-karboksylaattisuolojen valmistamiseksi:

H

?H ψ fS ? ΓΛΓ CH 1 ,S-“—N N+

HaC7 N-/ R7 0^N COOR3 (|) 20 jossa R1 on vetyatomi tai metyyliryhmä; 25 R3 on vetyatomi tai negatiivinen jonivaraus; R6 on metyyliryhmä, 2-hydroksietyyliryhmä, karboksimetyyliryhmä, karbamoyylime-tyyliryhmä, 2-fluorietyyliryhmä, 2-aminoetyyliryhmä tai 2-karbamoyylietyyliryhmä; ja 30 R7 on metyyliryhmä, 2-karbamoyylioksietyyliryhmä, 2-hydroksietyyliryhmä tai karbamoyylimetyyliryhmä 96863 2 ja niiden suolojen valmistamiseksi, joissa R3 on vetyatomi, mainittujen yhdisteiden estereiden valmistamiseksi.

Esillä oleva keksintö liittyy joukkoon karbapeneemin johdannaista ja tarjoaa menetelmiä 5 ja koostumuksia, joissa käytetään näitä bakteeri-infektioiden käsittelyyn ja ehkäisyyn; se tarjoaa myös menetelmiä niiden valmistamiseksi.

β-laktaamiantibioottien luokkaan sisältyy hyvin tunnetut penisilliinit ja kefalosporiinit, kuten myös sittemmin esitetyt karbapeneemiyhdisteet, joista menestyksekkäin tällä 10 hetkellä on imipeneemi (hyvin tunnetun tienamysiinin johdannainen), joka on eräs 2-(2-[(iminometyyli)amino]etyylitio)-6-(l-hydroksietyyli)-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyyliha-pon isomeereistä. Tässä selityksessä, kuten tällä alalla on yleistä, karbapeneemin johdannaisia, mukaanlukien tämän keksinnön mukaisia, kutsutaan hypoteettisen 1-karbapen-2-eemin johdannaisiksi: 15 l / \ • · · 2

I I II

.—N-. J

20 0t

Kuten edellä olevasta kaavasta nähdään, l-karbapen-2-eemi järjestelmä muistuttaa 25 peruspenisilliiniydintä paitsi, että siinä on hiiliatomi (rikkiatomin sijasta) 1-asemassa. Karbapeneemiyhdisteissä on normaalisti substituentteja 2-, 3- ja 6-asemissa. 6-aseman substituentti on tavallisimmin, kuten imipeneemissä ja tienamysiinissä, 1-hydroksietyyli-ryhmä. Näissä karbapeneemiyhdisteissä on hiili-hiilikaksoissidos 2- ja 3-asemien välillä.

30 3 • 96863

Yleensä, vaikka on havaittu, että tienamysiinin johdannaisilla on erinomainen bakteerin-vastainen vaikutus, on ilmoitettu, että ihmisen kehossa tapahtuu inaktivointia yhdisteen hajoamisen tuloksena, joka johtuu dehydropeptidaasi I:n vaikutuksesta; tämä on kokeellisesti osoitettu pelkällä virtsan havainnoinnilla [H. Kropp et ai: Antimicrob.

5 Agents Chemother., 22, 62 (1982); S.R. Norrby et ai.: ibid., 23, 300 (1983)]. Tämän seurauksena tunnettuja tienamyisiinin johdannaisia voidaan käytännössä käyttää ainoastaan rajoitetusti. Vaikka imipeneemiä on käytetty kliinisesti yhdessä toisen yhdisteen, kilastatiinin, kanssa sen suojaamiseksi hajoamiselta, on selvää, että ei ole toivottavaa annostella kahta tai useampaa lääkettä, kun yksikin riittäisi, ja tienamysiini-10 johdannaisten rajoitettu stabiilisuus on siten usein rajoittanut niiden käyttöä.

Viime vuosina monia karbapeneemijohdannaisia on esitetty mahdolliseen käyttöön antibiootteina, näiden yleensä erotessa toisistaan karbapeneemiytimen 2-aseman substituentin luonteen osalta. Esimerkiksi Euroopan patenttijulkaisut n:ot 126 587 ja 333 15 175, joiden uskotaan edustavan läheisintä tekniikan tasoa tälle keksinnölle siitä tekniikan tasosta, josta tällä hetkellä olemme tietoisia, esittävät molemmat 1-karbapen- 2-eemi-3-karboksyylihapon johdannaisia, joissa, kuten eräissä tämän keksinnön mukaisissa yhdisteissä, on substituoitu pyrrolidin-3-yylitiosubstituentti 2-asemassa. Tämän keksinnön mukaiset yhdisteet eroavat tekniikan tason yhdisteistä siinä, että 20 niissä on kvaternäärinen typpiatomi ja vaikuttaa siltä, että tämä johtaa merkittävään ja odottamattomaan mikrobinvastaisen, varsinkin bakteerin vastaisen, vaikutuksen suurenemiseen, kuten myös paljon parempaan stabiilisuuteen nisäkkään kehossa, kuten parempi virtsan paraneminen osoittaa. Kun vertaa sen tyyppisiä yhdisteitä, joita yleensä on esitetty tekniikan tasossa, aivan samanlaisiin yhdisteisiin muuten, mutta joissa 25 typpiatomi on kvaternisoitu tämän keksinnön mukaisesti, olemme havainneet perusteellisen parannuksen virtsan paranemisessa tämän keksinnön mukaisissa yhdisteissä verrattuna tekniikan tason yhdisteisiin. Tähän vaikutukseen liittyy myös alhainen myrkyllisyys, joka mahdollistaa sen, että yhdisteitä voidaan käyttää terapeuttisesti.

30 Tekniikan tasona esitämme suomalaisen patenttijulkaisun 91 258, jossa on esitetty yhdisteitä, joihin nähden esillä olevan keksinnön yhdisteillä on voimakkaampi vaikutus 96863 4 erilaisia bakteereita vastaan. Esimerkiksi tämän keksinnön mukaisilla yhdisteillä (1-1) ja (1-2) on pienempi inhiboiva minimikonsentraatio useita mikro-organismesja vastaan verrattuna tämän suomalaisen patenttijulkaisun 91 258 yhdisteisiin (2-1) ja (2-2). Esitämme seuraavan vertailun: 5

Taulukko 1

Yhdiste nro Esimerkki nro Mikro-organismi

ABC

10 (1-1) 9 (FP-9104) <0,01 <0,01 0,2 (1-2) 13 (FP-9104) <0,01 0,02 0,2 (2-1) 1 (FP-8907) 0,01 0,05 1,5 15 Yhdiste (1-1): (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4,4-dimetyyli-l-homopiperatsiniokarbonyy- li)-pyrrolidin-4-yylitio]-6-[( lR)-l-hydroksyylietyyli]-l-metyyli-1-karbapen-2-eemi-3-karboksylaattihydrokloridi

Yhdiste (1-2): (1R,5S, 6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-karbomoyylimetyyli-4-metyyli-l-homopi- 20 peratsiniokarbonyyli)-pyrrolidin-4-yylitio]-6-[( 1R)-1 -hydroksyylietyyli]- 1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattihydrokloridi

Yhdiste (2-1): (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-karbamoyyli-l,l-dimetyyli-pyrrolidinium-4- yylitio]-6-[( 1R)-1 -hydroksyylietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3- 25 karboksylaatti.

Yhdiste (2-2): (1R, 5S, 6S)-2-[(2S,4S)-l,l-dimetyyli-2-etyylikarbamoyylipyrroli- dinium-4-yylitio]-6-[(lR)-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaat-ti.

30 5 • 96863 A: Staphylococcus aureus 209P B: Escherichia coli NIHJ C: Pseudomonas aeruginosa 1001 5 Siten tämän keksinnön mukaiset yhdisteet ovat paljon käyttökelpoisempia erilaisten sairauksien hoitoon ihmisissä ja eläimissä, jotka sairaudet ovat mikro-organismien aiheuttamia. Rakenteellisesti tämän keksinnön yhdisteillä on karbapeneemirenkaan 2-asemassa l-homopiperatsiiniokarbonyylipyrrolidin-4-yylitiosubstituentti, verrattuna suomalaisen patenttijulkaisun 91 258 yhdisteisiin, jossa kaavan (ii) mukainen rengas, 10 jolla on positiivinen kationinen lataus, on ryhmä Ra.

Tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden odotetaan siksi olevan huomattavan arvokkaita nisäkkäissä, varsinkin ihmisissä oleviin mikrobi-infektioiden käsittelyyn ja ennaltaehkäisyyn.

15

Keksinnön avulla saadaan myös farmaseuttinen koostumus bakteeri-infektioiden käsittelyyn tai ennalta ehkäisyyn, joka koostumus käsittää tehokkaan määrän baktee-rinvastaista ainetta yhdessä farmaseuttisesti hyväksyttävän kantoaineen tai laimentimen kanssa, jossa bakteerinvastainen aine on valittu ryhmästä, johon kuuluu kaavan (I) 20 mukaiset yhdisteet ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat ja esterit, kuten edellä on määritelty.

Keksinnön avulla saadaan lisäksi menetelmä bakteeri-infektioiden käsittelyyn tai ennaltaehkäisyyn eläimessä, edullisesti nisäkkäässä, joka voi olla ihminen, joka 25 menetelmä käsittää tehokkaan määrän bakteerinvastaisen aineen annostelemisen mainitulle eläimelle seoksessa farmaseuttisesti hyväksyttävän kantajan tai laimentimen kanssa, jossa bakteerinvastainen aine on valittu ryhmästä, johon kuuluu kaavan (I) mukaiset yhdisteet ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat ja esterit, kuten edellä on määritelty.

30 96863 6

Kaavan (I) mukaisiin yhdisteisiin sisältyy positiivisesti varattu ioni kvaternäärisessä ammoniumionissa. Kun R3 on negatiivinen ionilataus, kvaternäärisen ammoniumionin positiivista latausta tasapainottaa R3. Tässä tapauksessa happoadditiosuola voi muodostua yhdessä yhden tai useamman kaavan (I) mukaisessa yhdisteessä olevan typpiatomin 5 kanssa. Kun R3 kuitenkin on vetyatomi tai se on korvattu esteriryhmällä, kuten sellaisella, josta on annettu esimerkki edellä, yhdiste vaatii toisen anionin tämän positiivisen latauksen tasapainottamiseksi. Tämä toinen anioni voi tulla hapon anionises-ta osasta. Kummassakin tapauksessa käytetyn hapon laatu ei ole kriittinen keksinnössä sillä edellytyksellä, että kun tuloksena saatua yhdistettä käytetään terapeuttiseen 10 tarkoitukseen, se on farmaseuttisesti hyväksyttävä, s.o. sen vaikutus ei vähene (tai ei vähene enempää kuin mitä on hyväksyttyä) tai sen myrkyllisyys ei lisäänny (tai ei lisäänny enempää kuin mitä on hyväksyttävissä) verrattuna vastaavaan kaavan (I) mukaiseen yhdisteeseen. Kun yhdistettä kuitenkin käytetään ei-terapeuttiseen tarkoitukseen, esim. väliaineena muiden yhdisteiden valmistuksen yhteydessä, tämäkään 15 rajoitus ei päde, ja esteriryhmän laatu voidaan valita pelkästään prosessiolosuhteita ajatellen. Esimerkkejä sopivista hapoista, joita voidaan käyttää tasapainottavan anionin saamiseksi tai jotka voivat muodostaa happoadditiosuoloja, ovat: mineraalihapot, varsinkin halogeenivetyhapot, kuten kloorivetyhappo, fluori vety happo, 20 bromivetyhappo tai jodivetyahppo tai muut mineraalihapot, kuten rikkihappo, typpihappo, perkloorihappo tai fosforihappo; orgaaniset karboksy yli hapot, kuten oksaalihappo, tartaarihappo, maleiinihappo, suk-kiinihappo, etikkahappo, bentsoehappo, mandeliinihappo, askorbiinihappo, laktiinihappo, 25 glukonihappo, maliinihappo tai sitruunahappo; ja sulfonihapot, esim. fluorisulfonihappo tai alkaanisulfoni- tai haloalkaanisulfonihapot, kuten metaanisulfonihappo, trifluorimetaanisulfonihappo tai etaanisulfonihappo tai aryylihapot, kuten bentseenisulfonihappo tai p-tolueenisulfonihappo.

30 96863 7

Kun R3 on vetyatomi, esillä olevan keksinnön mukaiset yhdisteet voivat myös muodostaa suoloja kationien kanssa, esimerkiksi: metallien, varsinkin alkaalimetallien, kuten natrium tai kalium, maa-alkalimetallien, 5 kuten kalsium tai barium, ja muiden metallien, kuten magnesium tai alumiini; ammoniumionin; ja orgaanisten emäksten mukaanlukien trialkyyliamiinit, kuten trimetyyliamiini tai trietyy-10 liamiini ja muut emäksiset amiinit, kuten prokaiini, dibentsyyliamiini tai fenetyyliamiini.

Esillä olevan keksinnön mukaiset yhdisteet sisältävät välttämättömästi useita asymmetrisiä hiiliatomeja molekyyleissään ja voivat siten muodostaa optisia isomeerejä. Vaikka kaikkia näitä esitetään tässä yhdellä ainoalla molekyylikaavalla, esillä olevaan 15 keksintöön kuuluu sekä yksittäiset eristetyt isomeerit että seokset, mukaanlukien niiden rasemaatit. Kun käytetään stereospesifisiä synteesitekniikoita, yksittäiset isomeerit voidaan valmistaa suoraan; toisaalta, jos valmistetaan isomeerien seos, yksittäiset isomeerit voidaan saada tavanomaisilla erottelutekniikoilla.

20 Esillä olevan keksinnön yhdisteiden lukuista isomeereistä pidämme niitä edullisina, joissa: (a) kun R1 on vetyatomi, niitä joilla on (5R, 6S)-konfigurointi ja joissa hydroksisubsti-tuentti 6-aseman sivuketjun α-asemassa on R-konfiguraatiossa, joka on sama konfiguraa- 25 tio kuin tienamysiinin; (b) kun R1 on metyyliryhmä, niitä joissa 1-aseman metyyliryhmä on R-konfiguraa-tiossa, ja varsinkin niitä, joilla on (5S, 6S)-konfiguraatio ja joissa 6-aseman sivuketjun a-asemassa oleva hydroksisubstituentti on R-konfiguroinnissa.

Keksinnön yhdisteistä edullisimmat yhdisteet ovat seuraavat yhdisteet: 30 8 96863 1 -114. 2-[2-(4,4-Dimetyyli-1 -homopiperatsiniokarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio] -6-(1- hydroksietyyli)-1-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti, erityisesti (1R, 5S, 6S)-2-[(2S,4S)-2-(4,4-dimetyyli-l-homipiperatsiniokarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatin isomeeri ja sen hemisul-5 faatti ja hydrokloridi; 1-139. 2-{2-[4-(2-Hydroksietyyli)-4-metyyli-l-homopiperatsiniokarbonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-6-( 1 -hydroksietyyli)- 1-metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti, erityisesti sen (1R, 5S, 6S)-2-{(2S, 4S)-2-[4-(2-hydroksietyyli)-4-metyyli-l-homopiperatsiniokar-10 bonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatin isomeeri ja sen hemisulfaatti ja hydrokloridi; 1-140. 2-[2-(4-KarbamoyylimetyyIi-4-metyyli-l-homopiperatsiniokarbonyyli)pyrro-lidin-4-yylitio]-6-(l-hydroksietyyli)-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti, 15 erityisesti sen (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-karbamoyylimetyyli-4-metyyli-l-homopiperat-siniokarbonyyli)pyrrolidin-4-y ylitio]-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaatin isomeerin ja sen hemisulfaatti ja hydrokloridi; 1-141. 2-[2-(4-Karboksimetyyli-4-metyyli-l-homopiperatsiniokarbonyyli)pyrrolidin-4-20 yylitio]-6-(l-hydroksietyyli)-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti, erityisesti (1R, 5S, 6S)-2-[(2S, 4S)-2-(4-karboksimetyyli-4-metyyli-l-homopiperatsiniokarbonyy-li)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-1-hydroksietyyli]- 1-metyyli- l-karbapen-2-eemi-3-karbok-sylaatin isomeeri.

25 Keksinnön mukainen menetelmä on tunnettu siitä, että se käsittää seuraavat vaiheet: annetaan kaavan (IV) mukaisen yhdisteen: \ 30 • 96863 9 *pH R'

5 CH jl X

h,c' J-*—x - 0 COOR‘- 10 (jossa: R1 on määritelty kuten edellä; Y on kaavan -OR21 tai -SO-R23 mukainen ryhmä; R21 on alkyylisulfonyyliryhmä, aryylisulfonyyliryhmä, dialkyylifosforyyliryh-mä tai diaryylifosforyyliryhmä; R22 on karboksia suojaava ryhmä; ja R23 on alkyyyli-ryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, halogenisoitu alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia; 2-asetamidoetyyliryhmä; 2-asetamidovinyyliryhmä; aryyliryhmä, jossa on 6-10 15 rengashiiliatomia ja joka on substituoimaton tai joka on substituoitu ainakin yhdellä substituentilla, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluu halogeeniatomit, Cj-C^-alkyyli-ryhmät, C1-C3-alkoksiryhmät, C2-C5-alkoksikarbonyyliryhmät, nitroryhmät, karba-omyyliryhmät, mono(Ci-C3-alkyyli)karbamoyyliryhmät, di(C1-C3-alkyyli)karbamoyyli-ryhmät, hydroksiryhmät ja syanoryhmät; tai aromaattinen heterosyklinen ryhmä, jossa 20 on 5 tai 6 rengasatomia, joista yksi on heteratomi, joka on typpi- ja/tai happi- ja/tai rikkiheteroatomi ja 0 tai 1 on lisätyppiatomi, mainitun heterosyklisen ryhmän ollessa substituoimaton tai se on substituoitu ainakin yhdellä substituentilla, joka on valittu ryhnmästä, johon kuuluu halogeeniatomit ja C1-C3-alkyyliryhmät, reagoida kaavan (V) mukaisen yhdisteen kanssa: 25

H

ίΛ 9

Hs—-LJLn' ^ 30 '' / R7 10 - 96863 jossa R6 ja R7 on määritelty kuten edellä; jolloin saadaan kaavan (Γ) mukainen yhdiste: 5

H

?H <?1 Γ^ϊ V i^\* ,CH JT S—-M ^ **3° N[C~f/'V][i ^ 10 J—N-\3 O COOR22 (jossa R1, R3, R6 ja R7 on määritelty kuten edellä ja R22 on karboksia suojaava 15 ryhmä, vaadittaessa poistetaan karboksia suojaava ryhmä, jolloin saadaan kaavan (I") mukainen yhdiste:

H

20 I

?H ψ Π ? CH I S—1-—^—N N+

J—N-U

O COOR© 25 kaavan I mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa R3 on negatiivinen lataus, ja vaadittaessa esteröidään tuote tai valmistetaan sen suola.

30 96863 11

Kaavan (IVa) mukainen yhdiste, jota käytetään lähtöaineena näissä reaktioissa voidaan valmistaa antamalla kaavan (VI) mukainen yhdiste: 5 OH R1

I I

CH H CH 0 / \ 1/ \ / H3C CH-C C (VI)

I I I

C—N-C

10 o COOR22 (jossa: R1, R22 on määritelty kuten edellä) reagoida alkyylisulfonihapon, aryylisul-fonihapon, dialkyylifosforihapon tai diaryylifosforihapon tai niiden reaktiivisen johdan-15 naisen kanssa, varsinkin alkyylisulfonihappoanhydridin, aryylisulfonihappoanhydridin, dialkyylifosforyylihalidin tai diaryylifosforyylihalidin kanssa, edullisesti emäksen läsnäollessa. Seuraava vaihe reaktiossa [tuloksena saadun kaavan (IVa) mukaisen yhdisteen reaktio kaavan (V) mukaisen merkaptoyhdisteen kanssa] suoritetaan edullisesti ilman, että välituote, joka on kaavan (IVa) mukainen yhdiste, eristetään ja suoritetaan 20 samassa reaktioväliaineessa.

Sopivia hapon johdannaisia käytettäväksi reaktiossa, jossa kaavan (IVa) mukainen yhdiste valmistetaan kaavan (VI) mukaisesta yhdisteestä ovat: alkaanisulfonihappoanhyd-ridit, kuten metaanisulfonihappoanhydridi, trifluorimetaanisulfonihappoanhydridi tai 25 etaanisulfonihappoanhydridi; aryylisulfonihappoanhydridit, kuten bentseenisulfonihappo- anhydridi tai p-tolueenisulfonihappoanhydridi; dialkyylifosforyylihalidit, kuten dimetyyli-fosforyylikloridi tai dietyylifosforyylikloridi; ja diaryylifosfory ylihalidit, kuten difenyyli-fosforyylikloridi tai difenyylifosforyylibromidi. Näistä p-tolueenisulfonihappoanhydridi tai difenyylifosforyylikloridi ovat erityisen edullisia.

30 12 96863

Reaktio suoritetaan normaalisisti ja edullisesti liuottimessa. Käytetyn liuottimen laatua ei erityisemmin rajoiteta sillä edellytyksellä, että sillä ei ole haitallista vaikutusta reaktioon tai siihen sisältyviin reagensseihin ja että se kykenee liuottamaan reagenssit, ainakin jossain määrin. Esimerkkejä sopivista liuottimista ovat: halogenisoidut hiilive-5 dyt, varsinkin halogenisoidut alifaattiset hiilivedyt, kuten 1,2-dikloorietaani tai kloroformi; nitriilit, kuten asetnitriili; ja amidit, varsinkin rasvahappoamidit, kuten N,N-dimetyyliformamidi tai Ν,Ν-dimetyyliasetamidi. Myöskään reaktiossa käytetyn emäksen laatua ei erityisemmin rajoiteta sillä edellytyksellä, että se ei haittaa yhdisteen muuta osaa, varsinkiin β-laktaamirengasta, ja esimerkkejä sopivista emäksistä ovat: 10 orgaaniset emäkset, varsinkin tertiääriset amiinit, kuten trietyyliamiini, di-isopropyy-lietyyliamiini tai 4-dimetyyliaminopyridiini.

Reaktio voi tapahtua suurella lämpötila-alueella ja täsmällinen reaktiolämpötila ei ole kriittinen keksinnössä. Mahdollisten sivureaktioiden välttämiseksi on kuitenkin 15 toivottavaa suorittaa reaktio suhteellisen alhaisessa lämpötilassa. Yleensä pidämme sopivana suorittaa reaktio lämpötilassa -20 °C - +40 °C. Reaktiolle vaadittu aika vaihtelee myös laajasti, riippuen monista tekijöistä, joista huomattakoon reaktion lämpötila ja reagenssien laatu. Sillä edellytyksellä, että reaktio suoritetaan edellä kuvatuissa edullisissa olosuhteissa 10 minuuttia - 5 tuntia yleensä kuitenkin riittää.

20 Näin saatua kaavan (IVa) mukaista yhdistettä ei tarvitse eristää reaktioseoksesta; sen sijaan koko reaktioseosta voidaan käsitellä kaavan (V) mukaisella merkaptoyhdisteellä emäksen läsnäollessa.Kuten edellisessä vaiheessa, käytetyn emäksen laatua ei erityisemmin rajoiteta reaktiossa sillä edellytyksellä, että se ei haittaa yhdisteen muuta osaa, 25 varsinkin β-laktaamirengasta, ja esimerkkejä sopivista emäksistä ovat: orgaaniset emäkset, kuten trietyyliamiini tai di-isopropyyliamiini; ja epäorgaaniset emäkset, varsinkin alkalimetallikarbonaatit, kuten kaliumkarbonaatti tai natriumkarbonaatti.

Reaktio voi tapahtua laajalla lämpötila-alueella ja täsmällinen reaktiolämpötila ei ole 30 kriittinen keksinnössä. Yleensä pidämme sopivana suorittaa reaktio lämpötilassa \ - 96863 13 -20 °C - huoneen lämpötila. Reaktioon vaadittu aika voi myös vaihdella laajasti riippuen monista tekijöistä, joista huomattakoon reaktion lämpötila ja reagenssien laatu. Sillä edellytyksellä, että reaktio suoritetaan edellä kuvatuissa edullisissa olosuhteissa, 30 minuuttia - 5 päivää yleensä kuitenkin riittää.

5

Reaktion mentyä loppuun, haluttu kaavan (Γ) mukainen yhdiste voidaan ottaa talteen reaktioseoksesta tavanomaisin keinoin. Esimerkiksi poistamalla reaktioväliaine tai liuotin ja sitten puhdistamalla yhdiste sellaisilla tavanomaisilla tekniikoilla, kuten jälleenkitey-tys, jälleensaostus tai erilaisilla kromatografiatekniikoilla, esim. kolonnikromatografialla 10 tai preparatiivisella ohutkerroskromatografialla. Vaihtoehtoisesti se voidaan puhdistaa halutun yhdisteen suoralla jälleensaostamisella reaktioseoksta.

Haluttaessa reaktioseokselle voidaan suorittaa sen jälkeinen vaihe, jossa karboksia suojaava ryhmä poistetaan ilman, että välituotteena saatua kaavan (Γ) mukaista 15 yhdistettä erotetaan tai suojaryhmän poistaminen voidaan suorittaa yhdisteen eristämisen jälkeen, haluttaessa. Käytetty reaktio suojaryhmän poistamiseksi riippuu tietenkin suojaryhmän laadusta ja voidaan suorittaa käyttämällä alalla hyvin tunnettuja menetelmiä karboksia suojaavien ryhmien poistamiseksi tämän tyyppisistä yhdisteistä.

. 96863 14 määrin. Esimerkkejä sopivista liuottimista ovat: alkoholit, kuten metanoli tai etanoli; eetterit, kuten tetrahydrofuraani tai dioksaani; rasvahapot, kuten etikkahappo; tai yhden tai useamman näiden orgaanisten liuottimien seokset veden kanssa.

5 Reaktio tapahtuu laajalla lämpötila-alueella ja täsmällinen reaktiolämpötila ei ole kriittinen keksinnölle. Yleensä pidämme sopivana suorittaa reaktio lämpötilassa 0 °C - huoneen lämpötila, reaktiolle vaadittu aika voi myös vaihdella laajasti riippuen monista tekijöistä, joista huomattakoon reaktion lämpötila ja reagenssien laatu, useimmissa tapauksissa 5-12 tuntia normaalisti kuitenkin riittää.

10

Reaktion mentyä loppuun tuloksena saatu yhdiste voidaan talteenottaa reaktioseoksesta tavanomaisin keinoin. Esimerkiksi mahdollisia reaktioseoksesta erotettavia epäpuhtauksia voidaan poistaa suodattamalla, jonka jälkeen liuotin voidaan poistaa tislaamalla halutun yhdisteen saamiseksi.

15 Näin saatu yhdiste voidaan haluttaessa puhdistaa vielä tavanomaisin keinoin, kuten jälleenkiteytyksellä tai erilaisilla kromatografiatekniikoilla, joista huomattakoon preparatiivinen ohutkerroskromatografia tai kolonnikromatografia. 1 2 3 4 5 6 30

Haluttaessa yhdisteessä oleva karboksiryhmä, joka yhdiste on saatu karboksia suojaavan 2 ryhmän poistamisen jälkeen, voidaan muuntaa tunnetuilla menetelmillä esteriryhmäksi, 3 joka voidaan hydrolysoida fysiologisissa olosuhteissa. Jos R3 on esteriryhmä, joka 4 voidaan hydrolysoida fysiologisesti, esimerkiksi alkanoyylioksialkyyliryhmä (kuten 5 pivaloyylioksimetyyli- tai asetoksimetyyliryhmä), alkoksikarbonyylioksialkyyliryhmä 6 [kuten l-(etoksikarbonyylioksi)etyyli- tai l-(isopropoksikarbonyylioksi)etyyliryhmä], ftalidyyliryhmä, indanyyliryhmä, metoksimetyyliryhmä tai 2-okso-5-metyyli-l,3-dioksolen-4-yylimetyyliryhmä, kaavan (I) mukainen yhdiste voidaan hydrolysoida in vivo fysiologisessa tilassa ja voidaan siksi suoraan annostella potilaille ilman suojanpois-ton tarvetta.

15 96863

Reaktion mentyä loppuun haluttu kaavan (Γ) mukainen yhdiste voidaan saada reak-tioseoksesta tavanomaisin keinoin. Reaktioliuos tai reaktioseoksen liuotin voidaan esimerkiksi yksinkertaisesti tislata pois; näin saatu yhdiste voidaan tarpeen vaatiessa puhdistaa tavanomaisin keinoin, kuten jälleenkiteytyksellä, jälleensaostamisella tai 5 erilaisilla kromatografiatekniikoilla, joista huomattakoon kolonnikromatografia tai preparatiivinen ohutkerroskromatografia. Vaihtoehtoisesti se voidaan puhdistaa saosta-malla se suoraan reaktioliuoksesta. Haluttaessa reaktioliuosta voidaan käyttää eristämättä välillä kaavan (Γ) mukaista yhdistettä sen jälkeistä karboksia suojaavan ryhmän poistamista varten, kuten edellä on kuvattu.

10 Tämän keksinnön mukaisen menetelmän eräässä vaihtoehtoisessa suoritusmuodossa kaavan (IVb) mukaisen yhdisteen: 15

OH R1 O

1 1 r „ CH H CH S-R23 / \ 1/ \ / h3c CH-C C (ivb)

I I II

ΛΑ C- iN

/ \ O COOR22 25 (jossa R1, R22 ja R23 on määritelty kuten edellä) annetaan reagoidaa kaavan (V) mukaisen yhdisteen kanssa, kaavan (Γ) mukaisen yhdisteen saamiseksi.

Kaavan (IVb) mukaisessa yhdisteessä, jossa R23 on alkyyliryhmä, tämä voi olla suora tai haarautunut ketju, jossa on 1-4, edullisesti 1-3 hiiliatomia, esimerkiksi metyyli-, 30 etyyli-, propyyli- tai isopropyyliryhmä. Kun se on halogenisoitu alkyyliryhmä, alkyy-liosa voi olla mikä vain määritellyistä alkyyliryhmistä, joista on annettu esimerkkejä - 96863 16 edellä ja joka on substituoitu ainakin yhdellä, edullisesti 1-3 halogeeniatomilla; esimerkkejä sellaisista ryhmistä ovat erilaiset fluorimetyyli-, kloorimetyyli-, fluorietyyli-, kloorietyyli-, fluoripropyyli-, difluorimetyyli-, difluorietyyli-, dikloorietyyli-, trifluori-metyyli- ja trifluorietyyliryhmät. Kun se on on valinnaisesti substituoitu aryyliryhmä, 5 aryyliryhmä itse voi esimerkiksi olla fenyyli- tai naftyyliryhmä ja se voi olla substituoi-maton tai siinä voi olla ainakin yksi ja edullisesti 1-3 substituenttia, kuten: halogeeniato-mit, esimerkiksi fluori-, kloori- tai bromiatomit; alkyyliryhmät, esim. metyyli-, etyyli-, propyyli- tai isopropyyliryhmät; alkoksiryhmät, esim. metoksi-, etoksi-, propoksi- tai isopropoksiryhmät; alkoksikarbonyyliryhmät, esim. metoksikarbonyyli-, etoksikar-10 bonyyli- tai t-butoksikarbonyyliryhmät; tai nitro-, karbamoyyli-, metyylikarbamoyyli-, etyylikarbamoyyli-, dimetyylikarbamoyyli-, dietyylikarbamoyyli-, hydroksi- tai syano-ryhmät. Kun se on valinnaisesti subsituoitu aromaattinen heterosyklinen ryhmä, tämä on edullisesti pyridyyli- tai pyrimidinyyliryhmä, ja heterosyklinen ryhmä voi olla substituoimaton tai se voi olla substituoitu ainakin yhdellä, ja edullisesti 1-3 substituen-15 tiliä, kuten esimerkiksi: halogeeniatomit, esim. fluori-, kloori- tai bromiatomit; tai alkyyliryhmät, esim. metyyli, etyyli, propyyli tai isopropyyli. Substituoitujen aryyli-ja aromaattisten heterosyklisten ryhmien tapauksessa, kun substituentteja on kaksi tai useampi, nämä voivat olla samanlaisia tai erilaisia.

20 Kaavan (IVb) mukainen yhdiste, joka on lähtöaine menetelmän tässä suoritusmuodossa, voidaan syntetisoida menetelmällä, joka on japanilaisen patenttihakemuksen Kokai n:o Sho 62-30781 mukainen.

Kaavan (IVb) mukaisen yhdisteen ja kaavan (V) mukaisen merkaptoyhdisteen välinen 25 reaktio kaavan (Γ) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi suoritetaan emäksen läsnäollessa ja normaalisti ja edullisesti sopivassa liuottimessa, jonka laatu ei ole kriittinen sillä edellytyksellä, että sillä ei ole haitallista vaikutusta reaktioon ja että se kykenee liuottamaan reagenssit, ainakin jossain määrin. Esimerkkejä sopivista liuottimista ovat: eetterit, kuten tetrahydrofuraani; nitriilit, kuten asetnitriili; amidit, kuten dimetyylifor-30 mamidi; sulfoksidit, kuten dimetyylisulfoksidi; vesi; tai minkä vain kahden tai useamman näiden liuottimien seos. Käytetyn emäksen laatua ei erityisemmin rajoiteta sillä \ 17 96863 edellytyksellä, että se ei vahingoita yhdisteiden muita osia, varsinkaan β-laktaamirengas-ta; sopivia emäksiä ovat: orgaaniset emäkset, kuten di-isopropyylietyyliamiini, trietyy-liamiini, N-metyylipyridiini tai 4-dimetyyliaminopyridiini; ja epäorgaaniset emäkset, varsinkin alkalimetallikarbonaatit ja hiilivedyt, kuten kaliumkarbonaatti tai natriumvety-5 karbonaatti. Reaktio tapahtuu laajalla lämpötila-alueella ja täsmällinen valittu reak-tiolämpötila ei ole kriittinen keksinnölle. Mahdollisten sivureaktioiden välttämiseksi suositellaan kuitenkin, että reaktio suoritettaisiin suhteellisen alhaisessa lämpötilassa. Yleensä pidämme sopivana suorittaa reaktio lämpötilassa -20 °C - 40 °C. Reaktioon vaadittu aika voi myös vaihdella laajasti riippuen monesta tekijästä, joista huomattakoon 10 reaktion lämpötila ja reagenssien laatu. Useimmissa tapauksissa 5 minuuttia - 5 päivää normaalisti kuitenkin riittää.

Reaktion mentyä loppuun haluttu kaavan (Γ) mukainen yhdiste voidaan saada tavanomaisin keinoin.

15

Haluttaessa kaavan (Γ) mukainen yhdisteelle voidaan sitten suorittaa suojanpoisto, kuten aikaisemmin on kuvattu.

Kaavan (V) mukaiset merkaptoyhdisteet, lähtöaineet, voidaan valmistaa menetelmillä, 20 jotka on kuvattu japanilaisessa patenttihakemuksessa Kokai n:o Hei 2-28180 ja japanilaisessa patenttihakemuksessa Kokai n:o Hei 2-3687.

BIOLOGINEN VAIKUTUS

25 Esillä olevan keksinnön mukaisilla yhdisteillä on laaja bakteerin vastainen vaikutus ja ne kykenevät inhiboimaan β-laktamaasin vaikutuksen toisin kuin useimmat tiena-mysiinityyppiset yhdisteet, jotka käyvät läpi aineenvaihdunnan nisäkkään kehossa. Esillä olevan keksinnön mukaisilla johdannaisilla on lisäksi erinomainen stabiilisuus dehydropeptidaasi I:tä vastaan, jonka tunnetaan myös katalysoivan tienamysiinityyppis-30 ten yhdisteiden inaktivointia. Lisäksi esillä olevan keksinnön mukaisilla johdannaisilla on erinomainen virtsan parantaminen. Esillä olevan keksinnön mukaisilla johdannaisilla - 96863 18 oli vahva bakteerinvastainen vaikutus tautia aiheuttavien bakteerien laajaa joukkoa vastaan mukaanlukien gram-positiiviset, kuten Staphylococcus aureus ja Bacillus subtilis, gram-negatiiviset, kuten Escherichia coli, Shigella -lajit, Streptococcus pneumoniae, Proteus -lajit, Serratia -lajit, Enterobacter -lajit ja Pseudomonas -lajit, ja anaerobiset 5 bakteerit, kuten Bacteroides fragilis.

Bakteerinvastainen vaikutus määriteltiin agarlevyliuotusmenetelmällä ja esillä olevan keksinnön mukaisen yhdisteen pienin inhiboiva konsentraatio erilaisia tavallisia tautia aiheuttavia bakteereita vastaan on esitetty seuraavassa taulukossa 7. Taulukossa keksin-10 nön mukaiset yhdisteet tunnistetaan viittaamalla joihinkin seuraavista esimerkeistä, jotka kuvaavat niiden valmistusta; Esimerkin 18 mukaisen yhdisteen tapauksessa, 18A liittyy isomeeriin A ja 18B liittyy isomeeriin B. Käytetyt mikro-organismit ovat seuraavat: A: Staphylococcus aureus 209P; 15 B: Escherichia coli NIHJ; C: Klebsiella pneumoniae 846; D: Pseudomonas aeruginosa 1001.

19 96863 TAULUKKO 7

Esimerkin n:o Mikro-organismi

yhdiste A B CD

5 _ 2 <0,01 <0,01 <0,01 0,2 5A 0,1 0,02 <0,01 0,1 5B 0,1 0,02 0,02 0,2 imipeneemi <0,01 0,05 0,1 3,1 10 ___

Edellä olevat tulokset osoittavat, että esillä olevan keksinnön mukaisilla yhdisteillä on vaikutuksia, jotka yleensä ovat parempia kuin imipeneemin; lisäksi ne ovat, toisin kuin imipeneemi, vastustuskykyisiä dehydropeptidaasi I ja β-laktamaasia vastaan.

15

Esillä olevan keksinnön mukaiset karbapeneemi-3-karboksyylihapon johdannaiset ovat siksi käyttökelpoisia terapeuttisina aineina näiden tautia aiheuttavien bakteereiden infektioiden käsittelyyn ja ennalta ehkäisyyn. Yhdisteet voidaan annostella missä vain tavanomaisessa muodossa tähän tarkoitukseen ja täsmällinen formulointi riippuu 20 käsiteltävästä sairaudesta, potilaan iästä, kunnosta ja muista tekijöistä, jotka ovat hyvin tunnettuja alalla. Suun kautta tapahtuvaa annostelua varten yhdisteet voidaan esimerkiksi formuloida tableteiksi, kapseleiksi, rakeiksi, pulvereiksi tai siirapeiksi; ja ruoansulatuskanavan ulkopuoliseen annosteluun ne voidaan formuloida suonensisäisiksi ruiskuiksi tai lihaksensisäisiksi ruiskuiksi. Annostelu vaihtelee laajasti riippuen iästä, 25 ruumiinpainosta, oireista ja potilaan kunnosta, kuten myös annostelumuodosta ja annosteluajoista; aikuiselle ihmispotilaalle päivittäinen noin 100 mg - 3000 mg:n annos on kuitenkin suositeltava ja tämä voidaan annostella yhtenä ainoana annoksena tai useimpina annoksina.

30 Esillä olevan keksinnön mukaisten eri yhdisteiden valmistusta kuvataan lisäksi seuraavi-en esimerkkien avulla, kun taas useiden näissä esimerkeissä käytettyjen lähtöaineiden valmistus esitetään sen jälkeisissä valmistusesimerkeissä. Näissä esimerkeissä ja 20 96863 valmistusesimerkeissä kaikki seulamitat ovat Tyler Standardin mukaisia. Kun ydinmag-neettinen resonanssispektri mitattiin deuteriumoksidissa, tetrametyylisilaania käytettiin ulkoisena standardina, jos muuta ei ilmoiteta; ja muissa liuottimissa tetrametyylisilaania käytettiin sisäisenä standardina.

5 ESIMERKKI 1 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4,4-DimetyyIi-l-piperatsiniokarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]- 6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatin fluorisul-10 fonaatti 1(1) (2S,4S)-4-Merkapto-2-(4-metyyli-l-piperatsinyyIikarbonyyIi)-l-(4-nitrobent-syylioksikarbonyyIi)pyrrolidinin trifluorimetaanisulfonaatti 15 305mg(2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-(4-metyyli-l-piperatsinyylikarbo-nyyli)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiiniä (valmistettu kuten on esitetty valmistusesimer-kissä 1) suspendoitiin 627 ^l:aan anisolia ja sitten suspensio sijoitettiin jäähauteeseen.

3,14 ml trifluorietikkahappoa ja 56 μΐ trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin sitten suspensioon ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin yhden tunnin ajan huoneen lämmös-20 sä. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös pestiin dietyylieetterillä toistetulla dekantaatiolla, jonka jälkeen se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 318 mg otsikkoyhdistettä.

Infrapunä-absorptiospektri (KBr), ν^χ cm'1: 25 1786, 1706, 1666, 1608, 1524, 1441, 1408, 1348, 1279, 1247, 1224, 1165.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (D20, 270 MHz), δ ppm: 1.58- 1,67 (1H, multipletti); 2.58- 3,46 (12H, multipletti); 30 3,83-4,12 (2H, multipletti); 4,22-4,39 (1H, multipletti); 96863 21 4,57-4,80 (1H, multipletti); 4,88-5,13 (2H, multipletti); 7,31-7,43 (2H, multipletti); 8,05-8,12 (2H, multipletti).

5 1(2) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-[(2S,4S)-2-(4-metyyli-l-piperatsinyylikarbonyyli)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 10 169 mg 4-nitrobentsyyli-(lR, 5R, 6S)-6-[(lR)-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-okso-l- karbapenaami-3-karboksylaattia liuotettiin 2,2 ml:aan vedetöntä asetnitriiliä ja liuotin sijoitettiin jäähauteeseen, jossa 102 μΐ difenyylifosforyylikloridia ja 87 μΐ di-isopropyy-lietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan siihen. Sitä sekoitettiin sitten yhden tunnin ajan tässä jäällä jäähdytetyssä lämpötilassa. Samalla kun seosta yhä pidettiin jäähautees-15 sa, 196 μΐ di-isopropyylietyyliamiinia ja 1,8 ml vedetöntä asetnitriililiuosta, joka sisälsi 312 mg (2S, 4S)-4-merkapto-2-(4-metyyli-l-piperatsinyylikarbonyyli)-l-(4-nitrobentsyy-lioksikarbonyyli)pyrrolidiinitrifluorimetaanisulfonaattia ([valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (1) edellä] lisättiin pisara kerrallaan reaktioseokseen. Seosta sekoitettiin sitten 5 tuntia tässä jäällä jäähdytetyssä lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseoksen 20 annettiin seistä jääkaapissa yön yli, jonka jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Natriumvetykarbonaatin vesiliuos lisättiin sitten jäännökseen, joka sitten uutettiin etyyliasetaatilla ja kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin sitten tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin 5:1 25 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 247 mg otsikkoyhdistettä.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmx cm'1: 1773, 1711, 1654, 1606, 1521, 1345.

30 Ultraviolettiabsorptiospektri (metanoli), nm: 267, 318.

\ 22 96863

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 270 MHz), δ ppm: 1.15 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1.16 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 5 1,57-1,66 (1H, multipletti); 2.05- 2,38 (5H, multipletti); 2,12-2,20 (3H, kaksi singlettiä); 2,81-2,89 (1H, multipletti); 3,11-3,63 (7H, multipletti); 10 3,79-4,28 (4H, multipletti); 4,76, 4,85 (yhteensä 1H, kaksi triplettiä, J = 7,81 Hz); 5.05- 5,48 (4H, multipletti); 7,55, 7,65 (yhteensä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 7,72 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 15 8,22, 8,23 (yhteensä 4H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz).

1(3) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4,4-Dinietyyli-l-piperatsiniokarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatin fluorisulfaatti 20 l,36g 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-[(2S,4S)-2-(4-metyyli-l-piperatsinyylikarbonyyli)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu edellä olevassa vaiheessa (2)] liuotettiin 13 ml:aan vedetöntä metyleenikloridia.

25 283 μΐ metyylifluorisulfonaattia lisättiin sitten tuloksena saatuun liuokseen, jota sitten sekoitettiin 1 tunnin ajan huoneen lämmössä. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännöksenä saatu pulverimainen tuote liuotettiin 60 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden 1:1 tilavuusseokseen. Huoneen lämpöistä vety-kaasua annettiin sitten kulkea seoksen läpi 3 tunnin ajan 1,2 g:n 10 %:sen p/p palla-30 diumhiilellä katalysaattorin läsnäollessa. Tämän jälkeen katalysaattori suodatettiin pois. Suodos uutettiin 100 ml: 11a dietyylieetteriä. Vesikerros kerättiin ja kondensoitiin 23 96863 haihduttamalla alennetussa paineessa 20 ml:aan. Tämä lyofilisoitiin sitten, jolloin saatiin 920 mg raakatuotetta pulverin muodossa.

70 mg tätä raakatuotetta ajettiin Lobar kolonnikromatografialla (Merck, 5 LiChroprep RP-8, Size A), eluoitiin 5 %:11a t/t vesipitoisella metanolilla. Fraktiot, jotka sisälsivät halutun yhdisteen, kerättiin, kondensoitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 45 mg otsikkoyhdistettä värittömänä pulverina.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm’1: 10 1758, 1660, 1603, 1469, 1377, 1273.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Amax nm (e): 298 (9204).

15 Ydinmagneettinen resonanssispektri (D20, 270 MHz), <S ppm: 1,02 (3H, dubletti, J = 7,3 Hz); 1.09 (3H, dubletti, J = 6,3 Hz); 1,73-1,83 (1H, multipletti); 2,78-2,90 (1H, multipletti); 20 3,08 (3H, singletti); 3.09 (3H, singletti); 3,14-3,29 (3H, multipletti); 3,37-3,42 (4H, multipletti); 3,53 (1H, kaksi dublettia, J = 12,2 & 6,3 Hz); 25 3,71-3,91 (5H, multipletti); 4,01-4,08 (2H, multipletti); 4,60 (1H, kaksi dublettia, J = 7,3 & 9,3 Hz).

24 96863 ESIMERKKI 2 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4,4-Dimetyyli-l-homopiperatsiniokarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatin 5 fluorisulfonaatti 2(1) (2S,4S)-4-Merkapto-2-(4-metyyli-l-homopiperatsinyyIikarbonyyli)-l-(4-nitro-bentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiinin bis(trifluorinietaanisulfonaatti) 10 620mg(2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-(4-metyyli-l-homopiperatsinyylikarbonyyli)- l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiiniä valmistettu kuten on kuvattu valmis-tusesimerkissä 5) suspendoitiin 1,23 ml:aan anisolia ja suspensio sijoitettiin jäähautee-seen. Kun suspensio yhä oli jäähauteessa, 6,2 ml trifluorietikkahappoa ja 200 μ\ trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin siihen ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin 1 15 tunnin ajan huoneen lämmössä, tämän jälkeen seosta käsiteltiin samalla tavalla kuin esimerkissä 1(1), jolloin saatiin 640 mg otsikkoyhdistettä.

Infrapuna-absorptiospektri (nestekalvo), cm'1: 1701, 1608, 1524, 1347, 1286, 1246, 1228, 1173, 1029.

20

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 270 MHz), S ppm: 1,66-1,78 (1H, multipletti); 1,96-2,13 (2H, multipletti); 25 2,67-2,86 (5H, multipletti); 2,99-4,07 (12H, multipletti); 4,64-4,83 (1H, multipletti); 5,02-5,26 (2H, multipletti); 7,49-7,65 (2H, multipletti); 30 8,23 (2H, dubletti).

. 96863 25 2(2) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-[(2S,4S)-2-(4-metyyli-l-homopipetsinyylikarbonyyli)-l-(4-mtrobentsyylioksikarbonyyli)pyrro-lidin-4-yylitio]-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyIaatti 5 340 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5R,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-okso-l- karbapenaami-3-karboksylaattia liuotettiin 3,5 mlraan vedetöntä asetnitriiliä ja liuos sijoitettiin jäähauteeseen. Samalla kun liuosta yhä pidettiin jäähauteessa, 210 μΐ difenyylifosforyylikloridia ja 180 μΐ di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin siihen pisara kerrallaan ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin 1 tunnin ajan tässä jäällä aikaan-10 saadussa lämpötilassa. 580 μΐ di-isopropyylietyyliamiinia ja 5 ml vedetöntä asetnit-riililiuosta, joka 640 mg (2£,4S)-4-merkapto-2-(4-metyyli-l-homopiperatsinyylikar-bonyyli)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiinin bis(trifluorimetaanuslfonaatti)a [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (1) edellä] lisättiin sitten pisara kerrallaan reaktioseokseen, joka yhä oli jäähauteessa ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin yön yli 15 tässä jäällä aikaansaadussa lämpötilassa. Tämän jälkeen seosta käsiteltiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin kuvattiin esimerkissä 1(2), jolloin saatiin 316 mg otsikkoyhdistettä.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), Xmax cm'1: 20 1773, 1710, 1648, 1606, 1521.

Ultraviolettiabsorptiospektri (metanoli), Xmax nm: 277, 318.

25 Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCT3, 270 MHz), <5 ppm: 1.29 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 1,37 (3H, dubletti, J = 5,86 Hz); 1,48-2,17 (4H, multipletti); 2.29 (1H, singletti); 30 2,43, 2,45 (yhteensä 3H, kaksi singlettiä); 2,58-2,97 (4H, multipletti); \ 26 96863 3,25-3,86 (9H, multipletti); 4,01-4,28 (2H, multipletti); 4,68-4,76 (1H, multipletti); 5,06-5,52 (4H, multipletti); 5 7,46 (1H, dubletti, J = 8,30 Hz); 7,51 (1H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,65 (2H, dubletti, J = 8,30 Hz); 8,23 (4H, kaksi dublettia, J = 8,79 & 8,30 Hz).

10 2(3) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4,4-Dimetyyli-l-homopiperatsiniokarbonyylipyrro- lidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksy-laatin fluorisulfonaatti 290 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-15 [(2S,4S)-2-(4-metyyli-l-homopiperatsinyylikarbonyyli)-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)-pyrrolidin-4-yylitio]-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (2) edellä] liuotettiin 6 ml:aan metyleenikloridia ja liuos sijoitettiin jäähauteeseen. Samalla kun liuos yhä pidettiin jäähauteessa, 60 μΐ metyylifluorisul-fonaattia lisättiin ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin 30 minuuttia tässä jäällä 20 aikaansaadussa lämpötilassa ja sitten 1 tunnin ajan huoneen lämmössä. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saadulle raakatuotteelle tehtiin hydraus ja se käsiteltiin, puhdistettiin ja lyofilisoitiin samantapaisilla menetelmillä kuin on kuvattu esimerkissä 1(3), jolloin saatiin 110 mg otsikkoyhdistettä.

25 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), kmax cm'1: 1760, 1653, 1603, 1467, 1379, 1279.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), kmax nm: 297 (8340).

\ 30 96863 27

Ydinmagneettinen resonanssispektri (D20, 270 MHz), S ppm: 1,02 (3H, dubletti, J = 7,33 Hz); 1,10 (3H, dubletti, J = 5,86 Hz); 1,80-1,86 (1H, multipletti); 5 2,14 (2H, leveä singletti); 2,76-3,05 (1H, multipletti); 3,02, 3,03 (yhteensä 6H, kaksi singlettiä); 3,14-3,33 (3H, multipletti); 3,41-3,90 (10H, multipletti); 10 4,03-4,08 (2H, multipletti); 4,63-4,70 (1H, multipletti).

ESIMERKKI 3 15 (lR,5S,6S)-2-{ (2S, 4S) -2-[4- (2-Karbamoyylioksietyy li)-4-metyyli-l-piperatsiniokar- bonyyli]pyrroIidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi- 3-karboksylaatin fluorisulfonaatti 3 (1X2S, 4S) -2- [4- (2-Karbamoyylioksietyy li) -1 -piperatsinyy likarbonyy li] -4-merkapto-20 l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiinin trifluorimetaanisulfonaatti 2,67 ml trifluorietikkahappoa ja 122 μΐ trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin, samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 417 mg (2S,4S)-2-[4-(2-karbamoyyliok-sietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyyliok-25 sikarbonyylipyrrolidiiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 7) 753 ulissa anisolia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös pestiin dietyylieetterillä toistetulla dekantoinnilla ja kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 325 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

30 28 96863

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), v,^ cm'1: 1707, 1608, 1524, 1438, 1347, 1280, 1169, 1030.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi + D20, 270 5 MHz), S ppm: 1,60-1,84 (1H, multipletti); 1,65-2,90 (1H, multipletti); 2,85-4,60 (14H, multipletti); 4,63-5,30 (4H, multipletti); 10 7,52, 7,64 (yhteensä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 8,23, 8,24 (yhteensä (2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz).

3(2) 4-NitrobentsyyIi-(lR,5S,6S)-2-{(2S.4S)-2-[4-(2-karbamoyylioksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yyIitio}-6-15 [(lR)-l-hydroksietyyIi]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 91 μΐ difenyylifosforikloridaattia ja 77 μΐ di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 152 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5R,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]~l-metyyli-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksylaattia 20 2,0 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen 176 μΐ di-isopropyylietyyliamiinia ja liuos, joka sisälsi 318 mg (2S,4S)-2-[4-(2-karbaomyylioksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]- 4-merkapto-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrroliidin trifluorimetaanisulfonaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (1) edellä] 2,0 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä 25 lisättiin sitten pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 2 tunnin ajan. Tämän jälkeen reaktioseoksen annettiin seistä yön yli jääkaapissa, jonka jälkeen se vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös sekoitettiin natriumvetykarbonaatin vesiliuokseen ja uutettiin sitten etyyliasetaatilla. Uute kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja 30 liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kromatografialla Lobar kolonnin läpi (tuote yhtiöstä Merck & Co., Inc., LiChro- 29 96863 prep Si60, koko B). Nämä fraktiot, jotka eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin 5:1 tilavuusseoksella, kerättiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 99 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

5 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1773, 1711, 1650, 1521, 1345.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 270 MHz), <S ppm: 10 1,15 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1,16 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 1,51-1,72 (1H, multipletti); 2,10-2,57 (6H, multipletti); 2,72-2,93 (1H, multipletti); 15 3,06-4,30 (13H, multipletti); 4,76, 4,85 (yhteensä 1H, kaksi triplettiä, J = 7,81 Hz); 5,03-5,27 (3H, multipletti); 5,30, 5,46 (2H, AB-kvartetti, J = 14,16 Hz); 6,46 (2H, leveä singletti); 20 7,55, 7,65 (yhteensä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 7,72 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 8,22, 8,23 (yhteensä 4H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz).

3(3) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-Karbamoyylioksietyyli)-4-metyyli-l-piper-25 atsiniokarbonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karba-pen-2-eemi-3-karboksylaatin fluorisulfonaatti 20 μΐ metyylifluorisulfonaattia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 94 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-karbamoyylioksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-30 nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (2) edellä] 96863 30 2,0 ml:ssa vedetöntä metyleenikloridia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämmössä 2 tuntia. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu pulverimainen jäännös liuotettiin 10 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden 1:1 tilavuusseosta ja hydrattiin huoneen lämmössä 2 tunnin ajan katalysaattorin 5 läsnäollessa, joka muodostui 80 mg:sta 10 % p/p palladiumista kivihiilellä. Katalysaattori poistettiin sitten suodattamalla ja suodos uutettiin kaksi kertaa dietyylieetterillä. Vesipitoinen kerros väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin sitten, jolloin 70 mg pulverimaista raakatuotetta. Tälle raakatuotteelle tehtiin kolonnikro-matografia käyttämällä Lobar kolonnia (tuote yhtiöstä Merck & Co., Inc., LiChroprep 10 RP-8, koko A) ja kolonni eluoitiin vedellä. Ne fraktiot, jotka sisälsivät halutun yhdisteen, kerättiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa Jäännös lyofilisoitiin, jolloin 37 mg otsikkoyhdistettä värittömänä pulverina.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 15 1736, 1662, 1604, 1389, 1276, 1259, 1161.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (D20, 270 MHz), S ppm: 1,02 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 1,09 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 20 1,69-1,83 (1H, multipletti); 2,73-2,88 (1H, multipletti); 3,12, 3,13 (3H, kaksi singlettiä); 3,15-3,30 (3H, multipletti); 3,41-3,62 (6H, multipletti); 25 3,65-3,91 (6H, multipletti); 3,97-4,12 (2H, multipletti); 4,34-4,42 (2H, multipletti); 4,49-4,64 (1H, multipletti).

30 31 96863 ESIMERKKI 4 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-KarbamoyyIimetyyli-4-metyyli-l-piperatsiniokarbonyy-li)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-5 karboksylaatti 4(1) (2S,4S)-4-Merkapto-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylimetyyli)-l-piper-at-sinyylikarb onyyli] pyrrolidiinin bis (trifluorimetaanisulfonaatti) 10 8,0 ml trifluorietikkahappoa ja 160 μΐ trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 1120 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylimetyyli)-1 -piperatsinyylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyy-lioksikarbonyyli)pyrrolidiiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 8) 1,75 ml:ssa anisolia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämmössä 1,5 15 tuntia. Tämän jälkeen sitä käsiteltiin samanlaisella menettelyllä kuin on kuvattu esimerkissä 3(1), jolloin saatiin 1,58 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm*1: 1756, 1704, 1667, 1523, 1441, 1348.

20

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 270 MHz), δ ppm: 1,60-1,76 (1H, multipletti); 2,70-2,85 (1H, multipletti); 25 3,08-3,42 (9H, multipletti); 3,65-3,83 (3H, multipletti); 3,94, 4,05 (yhteensä 1H, kaksi kaksoisdublettia, J = 9,8 & 6,8 Hz); 4,72, 4,81 (yhteensä 1H, kaksi triplettiä, J = 8,1 Hz); 5,05-5,26 (2H, multipletti); 30 5,42, 5,43 (yhteensä 2H, kaksi singlettiä); 7,52, 7,64, 7,69, 7,69, 7,70 (yhteensä 4H, neljä dublettia, J = 8,8 Hz); 32 96863 8,23, 8,24, 8,28 (yhteensä 4H, kolme dublettia, J =8,8 Hz).

4(2) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyIi]-l-metyyli-2-{(2S,4S)-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylimetyyli)-l-piperatsinyylikarbonyy-5 H]pyrrolidin-4-yylitio}-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 290 μΐ difenyylifosforikloridaattia ja 245 μΐ di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 500 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5R,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksylaattia 10 (tästä kaavasta puuttuu jotain koska toista hakasulkua ei ole merkitty) 5 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä. Tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen seokseen lisättiin liuos, joka sisälsi 520 μΐ di-isopropyylietyyliamiinia ja liuos, joka sisälsi 1,57 g (2S,4S)-4-merkapto-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylime-tyyli)-1 -piperatsinyylikarbonyylijpyrrolidiinin bis(trifluorimetaanisulfonaatti)a [valmis-15 tettu kuten on kuvattu vaiheessa (1) edellä] 5 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä. Tuloksena saatua seosta sekoitettiin sitten yön yli samassa lämpötilassa, jonka jälkeen reaktioseos käsiteltiin ja puhdistettiin samalla tavalla kuin on kuvattu esimerkissä 13(2), jolloin saatiin 706 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

20 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1772, 1710, 1654, 1521, 1346.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), <5 ppm: 1,27 (3H, dubletti, J = 7,3 Hz); 25 1,37 (3H, dubletti, J = 5,9 Hz); 1,85-2,06 (2H, multipletti); 2,53-2,77 (5H, multipletti); 3,25-3,76 (10H, multipletti); 4,03-4,28 (3H, multipletti); 30 4,67-4,79 (1H, multipletti); 5,06-5,52 (6H, multipletti); 33 • 96863 7,43-7,66 (6H, multipletti); 8,20-8,25 (6H, multipletti).

4(3) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Karboksimetyyli-4-metyyli-l-piperatsiniokarbonyy-5 li)pyrrolidm-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 90 μΐ metyylifluorisulfonaattia lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 700 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-2-{(2S,4S)-2-[4-(4-10 nitrobentsyylioksikarbonyylimetyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (1) edellä] 20 mltssa vedetöntä metyleenikloridia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämmössä 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös liuotettiin tetrahydrofuraanin ja veden 15 väliseen 1:1 tilavuusseokseen ja hydrattiin huoneen lämmössä 3 tuntia katalysaattorin läsnäollessa, joka muodostui 1,4 g:sta 10 %:sta p/p palladiumista kivihiilellä. Katalysaattori poistettiin sitten suodattamalla ja suodos uutettiin 100 ml:lla dietyylieetteriä. Vesipitoinen kerros väkevöitiin sitten haihduttamalla alennetussa paineessa 20 ml:n tilavuuteen ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 410 mg raakatuotetta pulverina. Koko tälle 20 raakatuotteelle tehtiin sitten kolonnikromatografia Lobar kolonnien läpi (RP-8, koko B) käyttämällä ensin 300 ml vettä ja sen jälkeen 200 ml vettä, joka sisälsi 2 til-% me-tanolia eluentteina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdisteen, kerättiin, väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin 200 mg otsikkoyhdistettä värittömänä pulverina.

25

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1756, 1634, 1386, 1259.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 30 296,6.

\ 34 96863

Ydinmagneettinen resonanssispektri (D20, 270 MHz), δ ppm: 1,02 (3H, dubletti, J = 7,3 Hz); 1,10 (3H, dubletti, J = 6,3 Hz); 1,74-1,84 (1H, multipletti); 5 2,80-2,91 (1H, multipletti); 3,21, 3,22 (yhteensä 3H, kaksi singlettiä); 3,12-3,29 (4H, multipletti); 3,44-4,10 (16H, multipletti); 4,57-4,67 (1H, multipletti).

10 ESIMERKKI 5 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Karboksimetyyli-4-metyyli-l-homopiperatsiniokarbonyy- li)pyrroIidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3- 15 karboksylaatti 5(1) (2S,4S)-4-Merkapto-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylimetyyli)-l-homopi-peratsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiinin bis-(trifluorimetaanisulfonaatti) 20 15 ml trifluorietikkahappoa ja 0,36 ml trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin liuokseen, joka sisälsi 1,47 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-limetyyli)-1 -homopiperatsinyylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrroli-diiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkisä 9) 2,2 ml:ssa änisolia ja 25 tuloksena saatua seosta sekoitettiin sitten huoneen lämmössä 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen reaktioseos käsiteltiin menetelmällä, joka on samanlainen kuin esimerkissä 3(1) kuvattu, jolloin saatiin 1,8 g otsikkoyhdistettä pulverina.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 30 1757, 1700, 1608, 1523, 1441, 1408, 1348.

• 96863 35

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 270 MHz), S ppm: 1,61-1,80 (1H, multipletti); 2,00-2,28 (2H, multipletti); 5 2,65-2,86 (1H, multipletti); 3,08-4,24 (13H, multipletti); 4,31-4,48 (2H, multipletti); 5,02-5,37 (2H, multipletti); 5,42 (2H, singletti); 10 7,52, 7,62 (yhteensä 2H, kaksi dublettia, J = 8,30 Hz); 7,69 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 8,23 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 8,27 (2H, dubletti, J = 8,30 Hz).

15 5(2) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-2- {(2S,4S)-2-[4-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyylimetyyli)-l-homopiperatsinyylikar- bonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-l-karbapen-2-eemi-3- karboksylaatti 20 0,37 ml difenyylifosforikloridaattia ja 0,31 ml di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 580 mg 4-nitrobentsyyli-(1 R,5R,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso- l-karbapenaami-3-karboksylaattia 10 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpöti-lasaa 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen 0,99 ml di-isopropyylietyyliamiinia ja liuos, joka 25 sisälsi 1,43 g (2S,4S)-4-merkapto-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylimetyyli)-l-homopiperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiinin bis(tri-fluorimetaanisulfonaatti)a [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (1) edellä] 10 mlrssa vedetöntä asetnitriiliä lisättiin seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja seosta sekoitettiin sitten yön yli samassa lämpötilassa. Reaktioseos käsiteltiin ja puhdistettiin menetel-30 millä, jotka ovat samanlaiset kuin ne, jotka on kuvattu esimerkissä 3(2), jolloin saatiin 1,1 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

36 96863

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1771, 1709, 1647, 1606, 1521, 1346.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), <S ppm: 5 1,28 (3H, dubletti, J = 6,84 Hz); 1,37 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1,74-2,04 (4H, multipletti); 2,62-2,96 (6H, multipletti); 3,27 (1H, kaksi dublettia, J = 6,83 & 2,44 Hz); 10 3,34-3,79 (9H, multipletti); 4,19-4,27 (2H, multipletti); 4,66-4,77 (1H, multipletti); 5,06-5,52 (6H, multipletti); 7,45-7,52 (4H, multipletti); 15 7,65 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 8,23 (6H, dubletti, J = 8,79 Hz).

5(3) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Karboksimetyyli-4-metyyli-l-homopiperatsiniokar-bonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-20 3-karboksylaatti 0,17 ml metyylifluorisulfonaattia lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 1,05 g 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-2- {(2£,4£)-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylimetyyli)-l-homopiperatsinyylikarbonyyli]-l- 25 (4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (2) edellä] 20 ml:ssa vedetöntä metyleeniklori-dia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämmössä 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös hydrattiin, käsiteltiin ja lyofilisoitiin käyttämällä samanlaisia menetelmiä kuin ne, jotka 30 on kuvattu esimerkissä 4(3). Tuloksena saadulle raakatuotteelle suoritettiin sitten kolonnikromatografia käyttämällä Lobar kolonnia (RP-8, koko B) ja vettä, joka sisälsi 37 96863 1 til-% metanolia eluenttina. Kromatografia erotti raakatuotteen kahteen otsikkoyhdisteen isomeeriin, isomeereihin Aja B. Kumpikin fraktio väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 32,4 g isomeeriä A ja 43,0 mg isomeeriä B, molemmat värittömän pulverin muodossa.

5

Isomeeri A:

Korkean suorituskyvyn nestekromatografia:

Kolonni: YMC ODS AQ-312; 10 Liuotin: 0,2 % vesipitoinen ammoniumasetaatti/metanoli (90:10 tilavuusosaa), Virtausnopeus: 1,0 ml/min.;

Retentioaika: 7,76 min.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 15 1761, 1660, 1455, 1382, 1258.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 296,7.

20 Ydinmagneettinen resonanssispektri (D20, 270 MHz), S ppm: 1,22 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 1,29 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1,97-2,08 (1H, multipletti); 2.20- 2,45 (2H, multipletti); 25 3,02-3,14 (1H, multipletti); 3,30-3,58 (3H, multipletti); 3,32, 3,36 (yhteensä 3H, kaksi singlettiä); 3,61-4,09 (12H, multipletti); 4.21- 4,30 (2H, multipletti); 30 4,70-4,89 (1H, multipletti).

38 96863

Isomeeri B:

Korkean suorituskyvyn nestekromatografia:

Kolonni: YMC ODS AQ-312; 5 Liuotin: 0,2 % vesipitoinen ammoniumasetaatti/metanoli (90:10 tilavuusosaa), Virtausnopeus: 1,0 ml/min.;

Retentioaika: 8,18 min.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm"1: 10 1752, 1634, 1464, 1386, 1290.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 296,8.

15 Ydinmagneettinen resonanssispektri (D20, 270 MHz), δ ppm: 1,22 (3H, dubletti, J = 7,33 Hz); 1,30 (3H, dubletti, J = 6,34 Hz); 1,96-2,06 (1H, multipletti); 2.27- 2,50 (2H, multipletti); 20 2,96-3,12 (1H, multipletti); 3.28- 3,56 (3H, multipletti); 3,33, 3,35 (yhteensä 3H, kaksi singlettiä); 3,59-4,14 (12H, multipletti); 4,21-4,30 (2H, multipletti); 25 4,72-4,89 (1H, multipletti).

39 96863 ESIMERKKI 6 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-6-[(lR)-l-Hydroksietyyli]-2-[4-(2-hydroksietyyli)-4-metyyli-l-piperatsiniokarbonyyli]pyrroUdin-4-yylitio}-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karbok-5 sylaatin hydrokloridi 6(1) (2S,4S)-4-Merkapto-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-piperatsinyylikarbonyyU}-l-(4-mtrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiinm bis-(trifluorimetaanisulfonaatti) 10 135,75 mg trifluorietikkahappoa ja 6,18 ml trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin jäällä jäähdyttäen liuokseen, joka sisälsi 26,00 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-piperatsinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyy-lioksikarbonyyli)pyrrolidiiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 10) 15 383, ml:ssa anisolia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämmössä 1,5 tunnin ajan. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös pestiin dietyylieetterillä toistetulla dekantoinnilla ja kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 32,5 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

20 6(2) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyIi-2- {(2S,4S)-2-[4-(2-4’-nitrobentsyylioksikarbonyylioksietyyli)-l-piperatsinyylikar- bonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-l-karbapen-2-eemi-3- karboksylaatti 25 6,38 ml difenyylifosforikloridaattia ja 5,37 ml di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 10,63 g 4-nitrobentsyyli-(1 R,5R,6S)-6-[(lR)-1 -hydroksietyylij-1 -metyyli-2-okso- l-karbapenaami-3-karboksylaattia 75 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen 16,26 ml di-isopropyylietyyliamiinia ja liuos, joka 30 sisälsi 32,5 g (2S,4S)-4-merkapto-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-{4-[2-(4-nitrobentsyyliok-sikarbonyyli)oksietyyli]-l-piperatsinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy- 40 96863 li)pyrrolidiinin bis(trifluorimetaanisulfonaatti)a [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (1) edellä] 65 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä lisättiin pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 1 tunnin ajan, jonka jälkeen sen annettiin seistä huoneen lämmössä yön yli. Tämän jälkeen 5 liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös sekoitettiin natriumvetykarbonaatin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja vapautettiin liuottimesta tislaamalla. Jäännökselle suoritettiin kolonnikromatografia silikageelin läpi. Nämä fraktiot eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin 18:21 tilavuusseoksella, kerättiin ja väkevöitiin haihdutta-10 maila alennetussa paineessa, jolloin saatiin 19,75 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1769, 1751, 1710, 1653, 1607, 1521, 1443, 1347.

15 Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 1,27, 1,28 (yhteensä 3H, kaksi dublettia, J = 7,33 Hz); 1,37 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1,78-1,98 (1H, multipletti); 2.31- 2,80 (7H, multipletti); 20 3,27 (1H, kaksi dublettia, J = 6,83 & 2,44 Hz); 3.31- 3,76 (8H, multipletti); 4,01-4,33 (5H, multipletti); 4,68, 4,74 (yhteensä 1H, kaksi triplettiä, J = 7,81 Hz); 5,04-5,52 (6H, multipletti); 25 7,44, 7,51 (yhteensä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 7,55, 7,65 (yhteensä 4H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 8,17-8,25 (6H, multipletti).

41 - 96863 6(3) (lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-Hydroksietyyli]-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-hydroksietyyli)-4-metyyli-l-pip€ratsiniokarbonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi- 3-karboksylaatin hydrokloridi 5 0,584 g metyylifluorisulfonaattia lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 4,47 g 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-4’-nitrobentsyylioksikarbonyylioksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (2) edellä] 45 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä ja 10 tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös hydrattiin, käsiteltiin ja lyofilisoitiin menetelmän mukaisesti, joka on kuvattu esimerkissä 13(3). Tuloksena saadulle raakatuotteelle suoritettiin sitten kolonnikromatografia 200 ml:n ionivaihtohartsin läpi (Dowex l-x4, 100-200 seulamitta, Ct tyyppiä) käyttämällä 15 vettä eluenttina. Yhdistetyt fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdisteen, lyofilisoitiin ja näin saatu pulveri puhdistettiin käänteisellä faasikolonnikromatografialla silikageelin läpi (yhtiön Merck & Co., Inc. tuote, LiChroprep RP-8, 30 ml) käyttämällä vettä, joka sisälsi 1,5 til-% metanolia eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdisteen, kerättiin, väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin 20 saatiin 1,73 g otsikkoyhdistettä värittömänä pulverina. Tuotteen spektritiedot (infrapu-na-absorptio, ultaviolettiabsorptio ja ydinmagneettinen resonanssispektri) olivat samanlaiset kuin sen tuotteen, joka valmistettin, kuten on kuvattu esimerkissä 20.

ESIMERKKI 7 25

Seuraavat vaiheet 7(1) ja 7(2) taijoavat vaihtoehtoisen menetelmän tuotteen valmistamiseksi, joka myös on valmistettu esimerkissä 6(2) jota käytetään lähtöaineena vaiheessa 6(3). Tuotetta voidaan käyttää noissa vaiheissa esillä olevan keksinnön mukaisen yhdisteen valmistamiseksi.

30 96863 42 7(1) (2S,4S)-4-Merkapto-2-{4-[2-(p-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-piperatsinyylikarbonyyli}-l-(p-nitrobentsyylioksikarbonyyIi)pyrrolidiim 600 ml metanoliliuosta, joka sisälsi 10 % p/t vetykloridia lisättiin liuokseen, joka 5 sisälsi 140 g (2S,4S)-4-asetyylitio-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-piperatsinyylikarbonyyli} -1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)py rrolidiiniä liuotettuna 150 ml dioksaania ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin lämpötilassa 50 °C 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen seos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja konsentraatti laimennettiin 1500 ml:lla etyyliasetaattia, jonka jälkeen se neutralisoitiin kyllästetyllä 10 natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella. Seos pestiin sitten 300 ml:lla vettä ja 300 ml:lla natriumkloridin vesiliuosta, jonka jälkeen se vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa. Näin saadulle jäännökselle suoritettiin kolonnikromatografia silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin seoksia tilavuussuhteissa 30:1 - 20 :1 eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät halutun yhdisteen, kerättiin ja väkevöi-15 tiin, jolloin saatiin 96,44 g otsikkoyhdistettä värittömänä pulverina.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm"1: 2530, 1742, 1710, 1653, 1521, 1347.

20 Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), 5 ppm: 1,83 (1H, multipletti); 2,44-2,79 (7H, multipletti); 3,22-3,64 (6H, multipletti); 4,06-4,17 (1H, multipletti); 25 4,26-4,36 (2H,multipletti); 4,60-4,71 (1H, multipletti); 5,02-5,33 (4H, multipletti); 7,42-7,58 (4H, multipletti); 8,17-8,26 (4H, multipletti).

30 - 96863 43 7(2) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-2-{(2S,4S)-[4-(2-p’-nitrobentsyylioksikarbonyylioksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(p-nitrobent-syylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksy-laatti 5 675 μΐ difenyylikloorifosfaattia ja 567 μΐ di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 1,12 g 4-nitrobentsyyli-(lR,5R,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksylaattia liuotettiin 10 mlraan vedetöntä asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin 10 samassa lämpötilassa 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen liuos, joka sisälsi 2,30 g (2S,4S)- 4-merkapto-2- {4-(2-(g-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli] -1 -piperatsiny ylikarbonyy-li}-l-(g-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (2) edellä] 5 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä lisättiin pisara kerrallaan seokseen ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 1 tunnin ajan. Reaktioseos 15 käsiteltiin ja puhdistettiin sitten samalla menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 6(2), jolloin saatiin 2,70 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa. Tuotteen infrapuna-absorp-tiospektri ja ydinmagneettinen resonanssispektri olivat samanlaiset kuin sen yhdisteen, joka on saatu esimerkin 6(2) mukaisesti.

20 Seuraavat vaiheet 7(3) ja 7(4) taijoavat vielä kaksi vaihtoehtoista menetelmää yhdisten valmistamiseksi, joka myös on valmistettu esimerkissä 6(2) ja jota käytetään lähtöaineena esimerkissä 6(3). Tuotetta voidaan näissä esimerkeissä käyttää esillä olevan keksinnön mukaisen yhdisteen valmistamiseksi.

25 7(3) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-2-{(2S,4S)-[4-(2-p’- nitrobentsyylioksikarbonyylioksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(p-nitrobent-syylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksy-laatti 30 Liuos, joka sisälsi 28,3 g 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-fenyylisulfinyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia ja 7,8 g di-isopro- 96863 44 pyylietyyliamiinia 1 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä lisättiin pisara kerrallaan liuokseen, joka sisälsi 112 g (2S,4S)-{4-{2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-piperat-sinyylikarbony yli} -4-merkapto-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiiniä0,5 ml: ssa vedetöntä asetnitriiliä samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin 5 samassa lämpötilassa 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin 20:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 14 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa. Tuotteen infrapuna-absorp-tiospektri ja ydinmagneettinen resonanssispektri olivat samanlaiset kuin sen yhdisteen, 10 joka on saatu esimerkin 6(2) mukaisesti.

7(4) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-2-{(2S,4S)-[4-(2-p’-nitrobentsyylioksikarbonyylioksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(p-nitrobent-syylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksy-15 laatti

Liuos, joka sisälsi 50 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-(4-kloorifenyyli)sulfinyyli- 6-[( 1 R)-l-hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia ja 19,4 mg di-isopropyylietyyliamiinia 0,5 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä lisättiin pisara 20 kerrallaan liuokseen, joka sisälsi 93 mg (2S,4S)-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)oksietyyli]-l-piperatsinyylikarbonyyli}-4-merkapto-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)pyrrolidiiniä 0,5 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämmössä 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatua jäännöstä 25 käsiteltiin samalla menetelmällä kuin on kuvattu edellä olevassa vaiheessa (1), jolloin saatiin 13 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa. Tuotteen spektri tiedot (infrapuna-absorptiospektri ja ydinmagneettinen resonanssispektri) olivat täysin samanlaiset kuin sen yhdisteen, joka on saatu esimerkin 6(2) mukaisesti.

30 (5R,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-Hydroksietyyli)-4-metyyIi-l-piperatsiniokarbonyyli]pyrro-

Iidm-4-yyIitio}-6-[(lR)-I-hydroksietyyIi]-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatin 5 hydrokloridi 45 - 96863 ESIMERKKI 8 8(1) 4-Nitrobentsyyli-(5R,6S)-2-{(2S,4S)-[4-(2-p’-nitrobentsyylioksikarbonyy-IioksietyyIi)-l-piperatsinyyUkarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyyHoksikarbonyyli)pyrroli-din-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 10 115 μ\ di-isopropyylietyyliamiinia ja 116 μΐ difenyylikloorifosfaattia lisättiin samanaikaisesti liuokseen, joka sisälsi 218 mg 4-nitrobentsyyli-(5R,6S)-6-[(lR)-l-hydrok-sietyyli]-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksylaattia 3 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 15 1 tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 109 μΐ di-isopropyylietyyliamiinia ja 387 mg (2S,4S)- 4-merkapto-2-{4-[2-(p-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-piperatsinyylikarbonyy-li}-l-(p-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiiniä [valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 7(1)] vedettömässä asetnitriilissä (2 ml) lisättiin sitten samalla jäähdyttäen jäällä reaktioseokseen ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 4 20 tuntia, jonka jälkeen sen annettiin seistä yön yli samalla jäähdyttäen jäällä. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös sekoitettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella ja natriumkloridin vesiliuoksella mainitussa järjestyksessä ja kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin 25 taas tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saadulle jäännökselle tehtiin kolonni-kromatografia silikageelin läpi käyttämällä metyleenikloridin ja metanolin tilavuusseos-ta 50:4 eluenttina. Yhdistetyt fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdisteen, väkevöitiin sitten haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 493 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

30 46 96863

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), cm'1: 1777, 1749, 1708, 1653, 1607, 1521, 14g8, 1404.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 5 1,36 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1,83-2,05 (2H, multipletti); 2,29-2,95 (5H, multipletti); 3,06-3,78 (8H, multipletti); 4,17-4,52 (4H, multipletti); 10 4,63-4,77 (1H, multipletti); 5,04-5,51 (6H, multipletti); 7,44 ja 7,50 (yhteensä 2H, kumpikin dubletti, J = 8,30 Hz); 7,55 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,64 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 15 8,17-8,25 (6H, multipletti).

8(2) (5R,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-Hydroksietyyli)-4-metyyli-l-piperatsiniokarbonyy-li)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatin hydrokloridi 20 49 μΐ metyylifluorisulfonaattia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 4-nitrobentsyyli-(5R,6S)- 2- {(2S ,4S)-[4-(2-p’ -nitrobentsyylioksikarbonyylioksiety yli)-1 -piperatsiny ylikarbony yli] -1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]- 1-karba-pen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (1) edellä] 5 ml:ssa 25 vedetöntä asetnitriiliä samalla jäähdyttäen jäällä, jonka jälkeen seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös liuotettiin seokseen, joka sisälsi 15 ml tetrahydrofuraania ja 15 ml vettä ja hydrattiin huoneen lämmössä katalysaattorin läsnäollessa, joka muodostui 550 mg:sta 10 % p/p palladiumista hiilellä 75 minuutin 30 ajan. Tämän jälkeen katalysaattori poistettiin suodattamalla. Suodos pestiin dietyylieet-terillä ja vesikerros väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Konsentraatille • 96863 47 suoritettiin kolonnikromatografia 50 ml:n ionivaihtohartsin läpi (Diwex l-x4, 50-100 seulamitta, CΓ tyyppiä) käyttämällä vettä eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdisteen, kerättiin ja lyofilisoitiin. Tuloksena saadulle pulverille tehtiin sitten kolonnikromatografia Lobar kolonnin läpin (RP-8, koko B) käyttämällä vettä eluentti-5 na. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdisteen, kerättiin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 112 mg otsikkoyhdistettä värittömänä pulverina.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1764, 1660, 1593, 1467, 1378, 1259.

10

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), 7max nm: 297.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (D20, 270 MHz, sisäinen standardi: natriumtri-15 metyylisilyylipropionaatti-d4), S ppm: 1,29 (3H, dubletti, J = 6,34 Hz); 1,98-2,11 (1H, multipletti); 2,95-3,14 (1H, multipletti); 3,15-3,27 (2H, multipletti); 20 3,32 (3H, singletti); 3,40-3,55 (2H, multipletti); 3,56-3,80 (6H, multipletti); 3.81- 4,30 (10H, multipletti); 4.81- 4,93 (1H, multipletti).

25 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4,4-Dimetyyli-l-homopiperatsiniokarbonyyli]pyrrolidm-4- yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatin 5 hemisulfaatti 96863 48 ESIMERKKI 9 26 mg (lR,5S,6S)-2-[(2S,4£)-2-(4,4-dimetyyli-l-homopiperatsiniokarbonyyli)pyrro-lidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatin hydrokloridia [valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 2(3)] tehtiin kolonnikromatogra-10 fia 25 ml:n ionivaihtohartsin läpi (Dowex l-x4, 50-100 seulamitta, S042' tyyppiä) käyttämällä vettä eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdisteen, kerättiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Jäännökselle tehtiin sitten kolonni-kromatografia Lobar kolonnin läpi (yhtiön Merck & Co., Inc. tuote, LiChroprep RP-8, koko B) käyttämällä metanolin 5 til-% :sta vesiliuosta. Ne fraktiot, jotka sisälsivät 15 otsikkoyhdisteen, kerättiin ja lyofxlisoitiin, jolloin saatiin 14 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (D20, 270 MHz), S ppm: 1.02 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 20 1,10 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1,70-1,89 (1H, multipletti); 2,13 (2H, leveä singletti); 2,73-2,95 (1H, multipletti); 3.02 ja 3,03 (yhteensä 6H, kaksi singlettiä); 25 3,04-3,32 (3H, multipletti); 3,41-3,89 (10H, multipletti); 4,02-4,08 (2H, multipletti); 4,62-4,68 (1H, multipletti).

\ 30 (lR,5S,6S)-2-[(2S>4S)-2-(4,4-Dimetyyli-l-homopiperatsiniokarbonyyli)pyrrolidin-4- yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatin 5 hydrokloridi 96863 49 ESIMERKKI 10 25 mg (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4,4-dimetyyli-l-homopiperatsiniokarbonyyli)pyrro-lidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatin hydrokloridia [valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 2(3)] tehtiin kolonnikromatogra-10 fia 25 ml:n ionivaihtohartsin läpi (Dowex l-x4, 50-100 seulamitta, CC tyyppiä) käyttämällä vettä eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdisteen, työstettiin, puhdistettiin ja lyofilisoitiin samalla tavalla kuin esimerkissä 30, jolloin saatiin 13 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

15 Ydinmagneettinen resonanssispektri (D20, 270 MHz), <S ppm: 1.02 (3H, dubletti, J = 7,3 Hz); 1,10 (3H, dubletti, J = 6,3 Hz); 1,72-1,89 (1H, multipletti); 2,15 (2H, leveä singletti); 20 2,75-2,94 (1H, multipletti); 3.02 ja 3,03 (yhteensä 6H, kaksi singlettiä); 3,11-3,25 (1H, multipletti); 3,26-3,34 (2H, multipletti); 3,41-3,92 (10H, multipletti); 25 4,02-4,11 (2H, multipletti); 4,63-4,69 (1H, multipletti).

50 - 96863 ESIMERKKI 11 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-Hydroksietyyli)-4-metyyIi-l-homopiperatsiniokar-bonyyli]pyiTolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-5 3-karboksylaatin hydrokloridi 11(1) (2S,4S)-4-Merkapto-2-{4-[2-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyyli)oksietyyIi]-l-homopiperatsinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiinin trifluorimetaanisulfonaatti 10 5 ml trifluorietikkahappoa ja 110 μΐ trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 900 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-homopiperatsinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylijpyrrolidiiniä liuotettuna 1 ml:aan anisolia ja tuloksena 15 saatua seosta sekoitettiin samoissa olosuhteissa 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös pestiin dietyyli-eetterillä, jolloin saatiin 760 mg otsikkoyhdistettä värittömänä pulverina.

11(2) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-p’-nitrobentsyylioksikar-20 bonyylioksietyyli)-l-homopiperatsmyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyIi-l-karbapen-2-eemi- 3-karboksylaatti 230 μΐ difenyylikloorifosfaattia ja 200 μΐ di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara 25 kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 400 mg 4-nitrobentsyyli-(1 R,5R,6S)-6-[( 1R)~ 1 -hydroksietyyli]- l-metyyli-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksylaattia liuotettuna 4 ml:aan vedettömään asetnitriiliin ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 30 minuuttia. Liuos, joka sisälsi 710 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-homopiperatsinyylikarbonyyli}-l-(4-30 nitrobentsyylioksikarbonyylijpyrrolidiinin trifluorimetaanisulfonaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (1) edellä] 3 mlrssa asetnitriiliä ja 600 μΐ di-isopropyylietyyliamii- 96863 51 nia lisättiin sitten pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä seokseen ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 4 tuntia, jonka jälkeen sen annettiin seistä yön yli lämpötilassa 4 °C. Reaktioseos laimennettiin 200 ml:lla etyyliasetaattia ja pestiin 200 ml:lla vettä ja 200 ml:lla natriumkloridin vesiliuoksella mainitussa 5 järjestyksessä. Orgaaninen kerros kuivattiin sitten vedettömän natriumsulfaatin avulla ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saadulle jäännökselle tehtiin kolonnikromatografia silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin seoksia tilavuussihetissa 9:1 - 8:2 eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdis-teen, kerättiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 640 10 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1768, 1750, 1710, 1649, 1522, 1347, 1260.

15 Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 1,27 (3H, dubletti, J = 7,3 Hz); 1,36 (3H, dubletti, J = 6,0 Hz); 1,80-2,05 (3H, multipletti); 2,40-3,00 (7H, multipletti); 20 3,23-3,78 (7H, multipletti); 4,00-4,29 (5H, multipletti); 4,61-4,77 (1H, multipletti); 5,03-5,53 (6H, multipletti); 7,42-7,67 (6H, multipletti); 25 8,16-8,25 (6H, multipletti).

96863 52 11(3) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-Hydroksietyyli)-4-metyyli-l-homopiperat-siniokarbonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen- 2- eemi-3-karboksylaatin hydrokloridi 5 80 μΐ metyylitrifluorimetaanisulfonaattia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 640 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2£,4S)-2-[4-(2-p’-nitrobentsyylioksikarbonyylioksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyyliok-sikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi- 3- karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (2) edellä] 10 ml:ssa asetniti-10 rilliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin pulverimainen yhdiste, joka liuotettiin 20 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden väliseen seokseen tilavuussuhteessa 1:1 ja hydrattiin huoneen lämmössä katalysaattorin läsnäollessa, joka muodostui 1 g:sta 10 % p/p palladiumista hiilellä 1 tunnin ajan. Katalysaattori poistettiin suodatta-15 maila ja sitten suodos uutettiin kaksi kertaa dietyylieetterillä. Vesikerros väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja konsentraatille tehtiin kolonnikromatografia ionivaihtohartsin läpi (Dowex l-x4, 50-100 seulamitta, CC tyyppiä) käyttämällä vettä eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdisteen, kerättiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Konsentraatille tehtiin sitten kolonnikromatografia 20 käänteisfaasikolonnin läpi (LiChroprep RP-8, koko B) käyttämällä metanolin 2 til-%:sta vesiliuosta eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdisteen, kerättiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jonka jälkeen seurasi lyofilisointi, jolloin saatiin 139 g otsikkoyhdistettä värittömänä pulverina.

25 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), v,^ cm*1: 1768, 1707, 1638, 1521, 1345, 1209, 1136.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Amax nm: 297.

30 53 96863

Ydinmagneettinen resonanssispektri (D20, 270 MHz), sisäinen standardi: natriumtri-metyylisilyylipriopionaatti-d4), δ ppm: 1,21 (3H, dubletti, J = 6,9 Hz); 1,28 (3H, dubletti, J = 6,3 Hz); 5 1,95-2,08 (1H, multipletti); 2,34 (2H, leveä singletti); 3,03-3,14 (1H, multipletti); 3,24 (3H, singletti); 3,31-3,43 (1H, multipletti); 10 3,44-3,53 (3H, multipletti); 3,55-4,16 (13H, multipletti); 4,20-4,29 (2H, multipletti); 4,83-4,92 (1H, multipletti).

15 ESIMERKKI 12 (5R,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4,4-Dimetyyli-l-homopiperatsiniokarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatin hydrokloridi 20 12(1) 4-Nitrobentsyyli-(5R,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-metyyli-l-homopiperatsinyyli- karbonyyli)-l-(4-nitrobentsyyUoksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydrok- sietyyIi]-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 25 76 μΐ di-isopropyylietyyliamiinia ja 77 μΐ difenyylikloorifosfaattia lisättiin saman aikaisesti samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 145 mg 4-nitrobentsyyli-(5R,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-2-okso-l-karbapenaami-3-karbdoksylaattia 2 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä ja tuloksena saatua seost a sekoitettiin samassa lämpötilassa 1 tunnin ajan. 247 μΐ di-isopropyyliamiinia ja liuosta, joka sisälsi 361 mg (2S,4S)-4-30 merkapto-2-(4-metyyli-1 -homopiperatsinyylikarbony yli)-1 -(4-nitrobentsy ylioksikarbonyy- li)pyrrolidiinin bis(trifluorimetaanisulfonaatti)a [valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 54 96863 2(1)] 2 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä lisättiin pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 2 tuntia, jonka jälkeen sen annettiin seistä yön yli samalla jäähdyttäen jäällä. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös työstettiin 5 ja puhdistettiin samalla tavalla kuin esimerkissä 8(1), jolloin saatiin 150 mg otsikkoyh-distettä pulverin muodossa.

12(2) (5R,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Dimetyyli-l-homopiperatsiniokarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatin hydrokloridi 10 18 μΐ metyylifluorisulfonaattia lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 141 mg 4-nitrobentsyyli-(5R,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-metyyli-l-homopiperatsinyy-likarbonyyli)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydrok-sietyyli]-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (1) 15 edellä] 1,5 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös liuotettiin seokseen, joka sisälsi 5 ml tetrahydrofu-raania ja 5 ml vettä ja hydrattiin katalysaattorin läsnäollessa, joka muodostui 170 mg:stä 10 % p/p palladiumista hiilellä. Reaktioseos työstettiin sitten ja puhdistettiin 20 samalla tavalla kuin esimerkissä 8(2), jolloin saatiin 17 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 297.

25 ESIMERKKI 13 96863 55 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-Karbamoyylioksietyyli)-4-metyyli-l-homopiperat-smiokarbonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-5 2-eemi-3-karboksylaatin hydrokloridi 13(1) (2S,4S)-2-[4-(2-Karbamoyylioksietyyli)-l-homopiperatsinyylikarbonyyli]-4-merkapto-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiinintrifluorimetaanisulfonaat-ti 10 2,7 ml trifluorietikkahappoa ja 88 μΐ trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 308 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[4-(2-karbamoyylioksietyyli)-l-homopiperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksi-karbonyylijpyrrolidiiniä liuotettuna 543 Mkaan anisolia ja tuloksena saatua seosta 15 sekoitettiin samassa lämpötilassa 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin samalla tavalla kuin esimerkissä 11(1), jolloin saatiin 315 mg otsikkoyhdistettä.

13(2) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-karbamoyylioksietyyli)-l-homopiperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-20 yyIitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 88 μΐ difenyylikloorifosfaattia ja 74 μΐ di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 145 mg 4-nitrobentsyyli-(1 R,5R,6S)-6-[(l R)- 1-hydroksietyyli]- l-metyyli-2-okso- l-karbapenaami-3-karboksylaattia 25 2 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin sitten 1 tunnin ajan. 202 μΐ di-isopropyylietyyliamiinia ja liuosta, joka sisälsi 310 mg (2S,4S)-2-[4-(2-karbamoyylioksietyyli)-l-homopiperatsinyylikarbonyyli]-4-merkapto-l-(4-nitrobentsyy-lioksikarbonyyli)pyrrolidiinin trifluorimetaanisulfonaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (1) edellä] 2,0 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä lisättiin sitten pisara kerrallaan 30 seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saadun seoksen annettiin seistä yön yli samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samalla 96863 56 tavalla kuin esimerkissä 11(2), jolloin saatiin 107 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

13(3) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-Karbamoyylioksietyyli)-4-metyyli-l-homo-5 piperatsiniokarbonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli- l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatin hydrokloridi 14 μΐ metyylifluorisulfonaattia lisättiin pisara kerrallaan liuokseen, joka sisälsi 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-[4-(2-karbamoyylioksietyyli)-l-homopiper-10 atsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-6- [(1R)-1 -hydroksietyyli] 1 metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (2) edellä] 2,2 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin sitten 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös liuotettiin 15 seokseen, joka sisälsi 5,5 ml tetrahydrofuraania ja 5,5 ml vettä ja hydrattiin katalysaattorin läsnäollessa, joka sisälsi 225 mg 10 % p/p palladiumista hiilellä. Reaktioseos työstettiin sitten ja puhdistettiin samalla tavalla esimerkissä 11(3), jolloin saatiin 31 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

20 Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), λnm: 296.

ESIMERKKI 14 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Karbamoyylimetyyli-4-metyyli-l-homopiperatsiniokar-25 bonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi- 3-karboksylaatin hydrokloridi 14(1) (2S,4S)-2-(4-Karbamoyylimetyyli-l-homopiperatsinyyli)-4-merkapto-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiinin trifluorimetaanisulfonaatti 30 57 96863 3,4 ml trifluorietikkahappoa ja 110 μΐ trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 366 mg (2S,4S)-5-(4-metoksibentsyylitio)-2-(4-karbamoyylimetyyli)-l-homopiperatsinyylikarbonyyli)-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyylijpyrrolidiiniä 679 ulissa anisolia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen 5 lämmössä 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin samalla tavalla esimerkissä 11(1), jolloin saatiin 355 mg otsikkoyhdistettä.

14(2) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-karbamoyyIimetyyli-l-homo-pi-peratsinyylikarbonyyli)pyrroIidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-nietyyli-l-10 karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 104 μΐ difenyylikloorifosfaattia ja 88 μΐ di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 171 mg 4-nitrobentsyyli-(1 R,5R,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksiety y 1 i] - l-metyyli-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksylaattia 15 2 mlissa vedetöntä asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpöti lassa 1 tunnin ajan. 237 μΐ di-isopropyylietyyliamiinia ja liuosta, joka sisälsi 350 mg (2S,4S)-2-(4-karbamoyylimetyyli-l-homopiperatsinyyli)-4-merkapto-l-(4-nitrobentsyy-lioksikarbonyyli)pyrrolidiinin trifluorimetaanisulfonaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (1) edellä] 2 mlissa vedetöntä asetnitriiliä lisättiin sitten seokseen samalla 20 jäähdyttäen jäällä ja seoksen annettiin seistä yön yli samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samalla tavalla esimerkissä 11(2), jolloin saatiin 143 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

14(3) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Karbamoyylimetyyli-4-metyyli-l-honiopiperat-25 simokarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyIi-l-karbapen- 2-eemi-3-karboksylaatin hydrokloridi 15,5 μΐ metyylifluorisulfonaattia lisättiin pisara kerrallaan liuokseen, joka sisälsi 131 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-karbamoyylimetyyli-l-homopi-30 peratsinyylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (2) edellä] 58 96863 2,4 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös liuotettiin seokseen, joka sisälsi 6 ml tetrahydrofu-raania ja 6 ml vettä ja hydrattiin katalysaattorin läsnäollessa, joka muodostui 240 5 mg:sta 10 % p/p palladiumista hiilellä. Reaktioseos työstettiin sitten ja puhdistettiin samalla tavalla esimerkissä 11(3), jolloin saatiin 28 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 10 297,5.

VALMISTUSESIMERKKI 1 (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-(4-metyyli-l-piperatsinyylikarbonyyli)-l-(4-15 nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 1 (a) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-pyrrolidiinin karboksyylihappo 4,0 g (2S,4S)-2-karbamoyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidiinin hydrokloridia 20 liuotettiin 40 ml:aan 2N vesipitoista kloorivetyhappoa ja tuloksena saatua liuosta sekoitettiin 1,5 tuntia öljyhauteessa lämpötilassa 95-100 °C. Tämän jälkeen liuoksen annettiin jäähtyä huoneen lämpötilaan ja sitten noin 40 ml 2N natriumhydroksidin vesiliuosta lisättiin liuokseen samalla sekoittaen sen pH-arvoon säätämiseksi arvoon 4- 6. Kiteet, jotka erotettiin, kerättiin suodattamalla, pestiin vedellä ja kuivattiin ilmassa, 25 jolloin saatiin 3,25 g otsikkoyhdistettä kiteinä, joiden sulamispiste oli 109-200 °C.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 270 MHz), δ ppm: 1,69 (1H, kaksi triplettiä, J = 13,2 & 8,3 Hz); 30 2,44 (1H, kaksi triplettiä, J = 13,2 & 6,8 Hz); 2,90 (1H, kaksi dublettia, J = 11,2 & 7,8 Hz); 59 96863 3,15-3,60 (4H, multipletti); 3,66 (1H, tripletti, J = 8,3 Hz); 3.73 (3H, singletti); 3.74 (2H, singletti); 5 6,88 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz); 7,25 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz).

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm"1: 1610, 1576, 1511, 1445, 1376, 1243.

10 1(b) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-2-pyrroli-diinikarboksyylihappo 1,87 g (2S,4S)-4-(-metoksibentsyylitio)-2-pyrrolidiinin karboksyylihappoa [valmistettu 15 kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] suspensoitiin 80 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden väliseen 1:1 tilavuusseokseen. Tämä suspensio muunnettiin homogeeniseksi liuokseksi lisäämällä 7 ml IN natriumhydroksidin vesiliuosta. Samalla kun tätä liuosta sekoitettiin jäähauteessa 10 ml tetrahydrofuraanin liuosta, joka sisälsi 1510 mg 4-nitrobentsyylioksikarbonyylikloridia ja 7 ml natriumhydroksidin IN vesiliuosta lisättiin 20 vähitellen pisara kerrallaan samaan aikaan ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samoissa olosuhteissa 10 minuuttia. Tämän jälkeen tetrahydrofuraani poistettiin haihduttamalla alennetussa paineessa. IN vesipitoista kloorivetyhappoa lisättiin sitten reaktioliuokseen sen pH-arvon säätämiseksi arvoon 2-3. Kiteet, jotka erotettiin, kerättiin suodattamalla, pestiin hyvin vedellä ja kuivattiin ilmassa. Niitä pestiin sitten 25 vielä pienellä määrällä dietyylieetteriä ja kuivattiin, jolloin saatiin 2,42 g otsikkoyh-distettä, joiden sulamispiste oli 96-98 °C.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 2,03-2,18 (1H, multipletti); 30 2,52-2,68 (1H, multipletti); 3,08-3,22 (1H, multipletti); 60 96863 3,27-3,42 (1H, multipletti); 3,72 (2H, singletti); 3,79 (3H, singletti); 3,77-3,98 (1H, multipletti); 5 4,38 (1H, tripletti, J = 7,3 Hz); 5.03- 5,35 (2H, multipletti); 6,85 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz); 7,22 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz); 7,42, 7,48 (2H, kaksi dublettia, J = 8,3 Hz); 10 8,16, 8,22 (2H, kaksi dublettia, J = 8,3 Hz); 5.4- 6,6 (1H, leveä).

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), cm'1: 3000, 1746, 1673, 1511, 1341, 1178.

15 1(c) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-(4-metyyli-l-piperatsinyylikarbonyyIi)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 11,7g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-2-pyrrolidii-20 nin karboksyylihappoa [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (b) edellä] liuotettiin 100 ml:aan vedetöntä asetnitriiliä. 4,9 g Ν,Ν’-karbonyyli-imidatsolia lisättiin sitten liuokseen, jota sitten sekoitettiin 30 minuuttia huoneen lämmössä. Tämän jälkeen 3,5 g N-metyyliperatsiinia lisättiin reaktioliuokseen ja se sekoitettiin sitten huoneen lämmössä 30 minuuttia ja sitten lämpötilassa 40 °C 30 minuuttia. Reaktioliuos väkevöitiin 25 tilavuuteen 30 ml haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös liuotettiin 30 ml:aan etyyliasetaattia. Tuloksena saatu liuos pestiin kerran 100 ml:lla kyllästettyä natriumvety-karbonaatin vesiliuosta kolme kertaa 100 ml:lla vedellä ja kerran 100 ml:lla kyllästettyä natriumkloridin vesiliuoksella. Etyyliasetaattikerros väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 1,36 g kiteistä jäännöstä. Tämän kiteisen jäännöksen 30 jälleenkiteytys 100 ml:sta etanolia antoi 13,0 g otsikkoyhdistettä värittömien neulojen muodossa, joiden sulamispiste oli 140-141 °C.

61 96863

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vm cm’1: 1710, 1656, 1340.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 5 1,72-1,84 (1H, multipletti); 2,24-2,31 (5H, multipletti); 2,42-2,52 (2H, multipletti); 3,02-3,16 (1H, multipletti); 3,30-3,70 (5H, multipletti); 10 3,72 (2H, singletti); 3,79, 380 (yhteensä 3H, kaksi singlettiä); 3,81-4,07 (1H, multipletti); 4,56, 4,61 (yhteensä 1H, kaksi triplettiä, J = 8,3 Hz); 5,01-5,31 (2H, kaksi AB-kvartettia, J = 13,7 Hz); 15 6,85 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz); 7,23 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz); 7,43, 7,47 (yhteensä 2H, kaksi dublettia, J = 8,8 Hz); 8,18, 8,23 (yhteensä 2H, kaksi dublettia, J = 8,8 Hz).

20 Massaspektri m/e: 528 (M+).

VALMISTUSESIMERKIT 2-5 Käyttämällä 2-(2-aminoetyyli)-l-metyylipyrrolidiiniä, 4-aminometyylipyridiiniä, N,N-25 dimetyylietyleenidiamiinia, 1-metyylihomopiperatsiinia tai 3-aminokinukli-diniä 1-metyylipiperatsiinin sijasta saatiin seuraavat yhdisteet samalla tavalla kuin valmis-tusesimerkissä 1(c).

62 96863 VALMISTUSESIMERKKI 2 (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-(l-metyyli-2-pyrrolidinyylietyylikarbamoyyli)-l- (4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 5

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm*1: 1718, 1660, 1607, 1550, 1530, 1514, 1448.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 10 1,45-2,68 (14H, multipletti); 2,95-3,31 (4H, multipletti); 3,42-3,58 (1H, multipletti); 3,64-4,04 (1H, multipletti); 3,71 (2H, singletti); 15 3,79 (3H, singletti); 4,22-4,28 (1H, multipletti); 5,16, 5,26 (2H, AB, J = 13,67 Hz); 6,84 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,22 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 20 7,56, 8,14 (1H, kaksi leveää singlettiä); 8,21 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz).

VALMISTUSESIMERKKI 3 25 (2S,4S)-4-(4-Metoksiventsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-2-(4-pyridinyyIi-metyylikarbamoyyli) pyrrolidiini

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm"1: 1708, 1606, 1512, 1461, 1416.

30

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 63 96863 1,78-2,67 (3H, multipletti); 3,16-3,22 (1H, multipletti); 3,30-3,51 (1H, multipletti); 3.72 (2H, singletti); 5 3,80 (3H, singletti); 4,40 (1H, tripletti, J = 6,96 Hz); 4,40-4,62 (2H, multipletti); 5,15-5,28 (2H, multipletti); 6,85 (2H, dubletti, J = 8,05 Hz); 10 7,10-7,52 (2H, multipletti); 7,22 (2H, dubletti, J = 8,05 Hz); 8,21 (2H, dubletti, J = 7,33 Hz); 8,51 (2H, leveä singletti).

15 VALMISTUSESIMERKKI 4 (2S,4S)-2-(2-Dinietyyliaminoetyylikarbamoyyli)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4- nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 20 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1713, 1650, 1525, 1346.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), <5 ppm: 2,14, 2,22 (yhteensä 6H, kaksi singlettiä); 25 2,23-2,65 (4H, multipletti); 3,06-3,17 (1H, multipletti); 3,22-3,46 (3H, multipletti); 3.72 (2H, singletti); 3,79 (3H, singletti); 30 3,75-4,06 (1H, multipletti); 4,25 (1H, leveä singletti); 64 96863 5,13-5,28 (2H, multipletti); 6,45-6,80 (1H, leveä); 6,84 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz); 7.22 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz); 5 7,48 (2H, dubletti, J = 8,3 Hz); 8.22 (2H, dubletti, J = 8,3 Hz).

VALMISTUSESIMERKKI 5 10 (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-(4-metyyli-l-homopiperatsinyylikarbonyyli)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini

Infrapuna-absorptiospektri (nestekalvo), vmax cm'1: 1710, 1650, 1513.

15

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), S ppm: 1,73-2,04 (3H, multipletti); 2,23-2,77 (8H, multipletti); 3,02-3,16 (1H, multipletti); 20 3,33-4,08 (6H, multipletti); 3,70, 3,72 (yhteensä 2H, kaksi singlettiä); 3,79, 3,80 (yhteensä 2H, kaksi singlettiä); 4,15-4,63 (1H, multipletti); 5,01-5,34 (2H, multipletti); 25 6,85 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,24 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,45, 7,47 (yhteensä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 8,19, 8,23 (yhteensä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz).

30 65 96863 VALMISTUSESIMERKKI 6 (2S,4S)-2-[4-(2-Hydroksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-4-(4-inetoksibentsyylitio)- l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 5 10,9 g Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 25,0 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-2-pyrrolidiinin karboksyyli-happoa 200 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämmössä 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen liuos, joka sisälsi 10,9 g l-(2-hydroksietyy-10 lijpiperatsiinia 50 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä lisättiin seokseen, jota sitten sekoitettiin huoneen lämmössä 45 minuuttia. Reaktioseos väkevöitiin sitten haihduttamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös liuotettiin 800 ml:lla etyyliasetaattia ja pestiin sitten kolme kertaa 200 ml:lla vettä ja sitten kerran 150 mlrlla natriumkloridin vesiliuosta. Etyyliasetaattikerros väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa 15 tilavuuteen 100 ml ja kiteet, jotka saostuivat, kerättiin suodattamalla, jolloin saatiin 28,6 g otsikkoyhdistettä värittömien kiteiden muodossa, joiden sulamispiste oli 140- 141 °C.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 20 1710, 1653, 1670, 1512, 1439, 1404, 1344.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), S ppm: 1,48-1,85 (2H, multipletti); 2,32-2,64 (6H, multipletti); 25 2,59 (2H, tripletti, J = 5,37 Hz); 3,03-3,16 (1H, multipletti); 3,30-3,71 (5H, multipletti); 3,65 (2H, tripletti, J = 5,37 Hz); 3,73 (2H, singletti); 30 3,79, 3,80 (yhteensä 3H, kaksi singlettiä); 3,82-4,07 (1H, multipletti); 66 96863 4,56, 4,61 (yhteensä 1H, kaksi triplettiä, J = 8,30 Hz); 5,02-5,31 (2H, multipletti); 6,85 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,23 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 5 7,43, 7,47 (yhteensä 2H, kaksi dublettia, I = 8,79 Hz); 8,18, 8,23 (yhteensä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz).

VALMISTUSESIMERKKI 7 10 (2S,4S)-2-[4-(2-Karbamoyylioksietyyli)-l-piperatsmyylikarbonyyli]-4-(4-metoksi-bentsyyIitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrroIidiini 1,43 ml triklooriasetyyli-isosyanaattia lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 5,59 g (2S,4S)-2-[4-(2-hydroksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-4-(4-15 metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiiniä 50 mlrssa vedetöntä metyleenikloridia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän jälkeen liuotin poistettin tislaamalla alennetussa paineessa, tuloksena saatu jäännös liuotettiin 120 ml:aan metanolia ja liuosta sekoitettiin huoneen lämmössä 4,5 tuntia 35 g silikageelin läsnäollessa (yhtiön Merck Co., Inc. tuote, silikageeli 60, 20 230-400 seulamitta). Silikageeli poistettiin suodattamalla ja suodos vapautettiin me- tanolista haihduttamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi. Nämä fraktiot eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin välisellä 8:1 tilavuusseoksella, kerättiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 5,76 g otsikkoyhdistettä värittömänä pulverina.

25

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 3353, 1711, 1652, 1608, 1513, 1344, 1242.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 30 270 MHz), 6 ppm: 1,38-1,57 (1H, multipletti); 67 96863 2,14-2,70 (7H, multipletti); 2,98-4,08 (9H, multipletti); 3,72, 3,74 (yhteensä, 3H, kaksi singlettiä); 3,77 (2H, singletti); 5 4,66, 4,77 (yhteensä 1H, kaksi triplettiä, J = 7,81 Hz); 5,02-5,25 (2H, multipletti); 6,45 (2H, leveä singletti); 6,88 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,26 (2H, dubletti, J - 8,79 Hz); 10 7,52, 7,60 (yhteensä, 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 8,20, 8,24 (yhteensä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz).

VALMISTUSESIMERKIT 8-9 15 Valmistusesimerkissä 6 kuvattu menetelmä toistettiin, mutta käyttämällä 1-karba-moyylimetyylipiperatsiinia, 1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyylimetyyli)piperatsiinia, 1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyylimetyyli)homopiperatsiinia ja 1,2-dimetyylipiperatsiinia, vastaavasti, l-(2-hydroksietyyli)piperatsiinin sijasta seuraavien yhdisteiden valmistamiseksi.

20 VALMISTUSESIMERKKI 8 (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylimetyyli)-l- piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 25

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1750, 1710, 1655, 1520, 1345.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 30 1,73-1,84 (1H, multipletti); 2,41-2,70 (5H, multipletti); 68 96863 3,02-3,17 (1H, multipletti); 3,29, 3,30 (yhteensä 3H, kaksi singlettiä); 3,37-3,70 (5H, multipletti); 3.72 (2H, singletti); 5 3,78, 3,79 (yhteensä 3H, kaksi singlettiä); 3,82-4,07 (1H, multipletti); 4,53-4,63 (1H, multipletti); 5.01- 5,31 (4H, multipletti); 6,85 (2H, dubletti, J = 8,3 Hz); 10 7,23 (2H, dubletti, J = 8,3 Hz); 7.42- 7,53 (4H, multipletti); 8,18-8,25 (4H, multipletti).

VALMISTUSESEMERKKI 9 15 (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylimetyyli)-l- homopiperatsinyyIikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini

Infrapuna-absorptiospektri (nestekalvo), vmax cm'1: 20 1748, 1709, 1650, 1608, 1520, 1429, 1404, 1346.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), S ppm: 1,71-2,03 (3H, multipletti); 2.42- 3,17 (6H, multipletti); 25 3,32-4,08 (8H, multipletti); 3.73 (2H, singletti); 3,80, 3,82 (yhteensä 3H, kaksi singlettiä); 4,49-4,63 (1H, multipletti); 5.02- 5,35 (4H, multipletti); 30 6,85 (2H, dubletti, J = 8,30 Hz); 7,23 (2H, dubletti, J = 8,30 Hz); 69 96863 7,43-7,52 (4H, multipletti); 8,15-8,25 (4H, multipletti).

VALMISTUSESIMERKKI 10 5 (2S,4S)-2-{4-[2-(4-Nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyIi]-l-piperatsinyylikar- bonyyli}-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyyIi)pyrrolidiini 5,86 g 4-dimetyyliaminopyridiiniä ja liuosta, joka sisälsi 10,35 g p-nitrobentsyyli-10 kloroformaattia 40 ml:ssa vedetöntä metyleenikloridia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 22,35 g (2S,4S)-2-[4-(2-hydroksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-4-(4-metoksi-bentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 7) 160 ml:ssa vedetöntä metyleenikloridia ja tuloksena saatua seosta sekoitetaan huoneen lämmössä 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen reaktioseos 15 liuotettiin 300 ml:aan etyyliasetaattia ja pestiin 100 mklla vettä, 100 ml:lla kyllästettyä natriumvetykarbonaatin vesiliuosta ja 100 mklla kyllästettyä natriumkloridin vesiliuoksessa mainitussa järjestyksessä. Liuottimet poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi. Nämä fraktiot, jotka eluoitiin etyyliasetaatilla, kerättiin ja väkevöitiin haihduttamalla alenne-20 tussa paineessa, jolloin saatiin 26,35 g otsikkoyhdistettä värittömänä pulverina.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm"1: 1748, 1710, 1655, 1608, 1521, 1346, 1251.

25 Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 1,72-1,84 (1H, multipletti); 2,26-2,73 (6H, multipletti); 2,97-3,16 (1H, multipletti); 3,29-4,10 (7H, multipletti); 30 3,72 (2H, singletti); 3,79, 3,80 (yhteensä 3H, kaksi singlettiä); 70 96863 4,24-4,31 (2H, singletti); 4,52-4,63 (1H, multipletti); 5,00-5,35 (4H, multipletti); 6,85 (2H, dubletti, J = 8,79Hz); 5 7,23 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 8,41-7,57 (4H, multipletti); 8,16-8,25 (3H, multipletti).

VALMISTUSESIMERKKI 11 10 (2S,4R)-4-Hydroksi-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-piperat- sinyyIikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini Tämä valmistusesimerkki kuvaa kolmea erilaista tapaa tuottaa sama otsikkoyhdiste.

15 11(a) 25,7 ml dietyylisyanofosfonaattia ja 68,7 ml trietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan jäällä jäähdyttäen liuokseen, joka sisälsi 47,8 g trans-4-hydroksi-l-(4-nitrobentsyyliok-20 sikarbonyyli)-L-proliinia ja 64,8 g l-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylioksi)etyyli]pipe-ratsiinidihydrokloridia 400 ml:ssa vedetöntä dimetyyliformamidia ja tuloksena saatua seosta sekoittiin samassa lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän jälkeen reaktioseos liuotettiin 1,5 l:aan etyyliasetaattia ja pestiin vedellä. Orgaaninen kerros kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa 25 paineessa, jolloin saatiin 87,6 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1749, 1709, 1650, 1607, 1522, 1499, 1347, 1263.

30 Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 1,63 (1H, singletti); 71 96863 1,92-2,38 (8H, multipletti); 3,41-3,83 (6H, multipletti); 4,24-4,32 (2H, multipletti); 4,55-4,60 (1H, multipletti); 5 4,79-4,90 (1H, multipletti); 5,03-5,35 (4H, multipletti); 7,44-7,57 (4H, multipletti); 8,17-8,25 (4H, multipletti).

10 11(b) 608 μΐ klooritrimetyylisilaania ja 670 μΐ trietyyliamiinia lisättiin jäällä jäähdyttäen liuokseen, joka sisälsi trans-4-hydroksi-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-L-proliinia, joka on liuotettu 20 mlissa vedetöntä asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin 15 huoneen lämmössä 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös sekoitettiin natriumkloridinliuoksen vesiliuokseen ja uutettiin sitten etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella, kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 648 mg trans-1 -(4-nitrobentsyylioksikar-20 bonyyli)-4-trimetyylisilyylioksi-L-proliinia jauheena. Koko tämä tuote liuotettiin sitten 14 ml:aan vedetöntä asetnitriiliä ja 330 mg Ν,Ν’-karbonyylidi-imadatsolia lisättiin liuokseen. Seosta sekoitettiin sitten huoneen lämmössä 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen liuos, joka sisälsi 630 mg l-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]piperatsiinia 2 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä lisättiin reaktioseokseen ja tuloksena saatua seosta 25 sekoitettiin yön yli huoneen lämmössä ja sitten lämpötilassa 40 °C 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen 14 ml IN vesipitoista kloorivetyhappoa lisättiin ja reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämmössä 1 tunnin ajan. Se tehtiin sitten emäksistä lisäämällä natriumvetykarbonaatin vesiliuosta, jonka jälkeen se uutettiin etyyliasetaatilla. Etyy-liasetaattikerros pestiin vedellä, kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja 30 vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saadulle jäännökselle tehtiin kolonnikromatografia silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja 72 96863 metanolin 9:1 tilavuusseosta eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdisteen, kerättiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 589 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa. Näin saadun tuotteen infrapuna-absorptiospektri ja ydinmagneettinen absorptiospektri, joka saatiin oli sama kuin sen yhdisteen, joka 5 valmistettiin edellä kuvatun vaiheen (a) mukaisesti.

11(0 674 mg trans-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-4-trimetyylisilyylioksi-L-proliinia 10 [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (2) edellä] liuotettiin 14 mliaan vedetöntä asetnitriiliä ja 343 mg Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia lisättiin tuloksena saatuun liuokseen. Tuloksena saatua seosta sekoitettiin sitten huoneen lämmössä 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen liuos, joka sisälsi 275 mg l-(2-hydroksietyyli)piperatsiinia 1 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä lisättiin reaktioseokseen ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin 15 yön yli huoneen lämpötilassa. Se väkevöitiin sitten haihduttamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös sekoitettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin vedellä ja kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 574 mg (2S,4S)-2-(4-(2-hydroksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli)-4-trimetyylisilyylioksi-l-(4-20 nitrobentsyylioksikarbonyylijpyrrolidiiniä öljyn muodossa. Koko tämä tuote liuotettiin 5,7 ml:an metyleeniklrodia ja 170 mg 4-dimetyyliaminopyridiiniä ja 300 mg 4-nitrobent-syylikloroformaattia lisättiin tuloksena saatuun liuokseen samalla jäähdyttäen jäällä. Seosta sekoitettiin sitten huoneen lämmössä 1 tunnin ajan , jonka jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös sekoitettiin 15 25 ml: aan IN vesipitoista kloorivety happoa ja sitä sekoitettiin sitten huoneen lämmössä 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen seos tehtiin heikosti emäksiseksi lisäämällä natrium-vetykarbonaatin vesiliuosta; se uutettiin sitten etyyliasetaatilla. Uute pestiin vedessä ja kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla; liuotin poistettiin sitten tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin samalla tavalla kuin edellä 30 olevassa vaiheessa (b), jolloin saatiin 348 mg otsikkoyhdistettä. Näin saadun tuotteen 73 96863 infrapuna-absorptiospektri ja ydinmagneettinen resonanssispektri oli sama kuin edellä olevan vaiheen (2) yhdiste.

VALMISTUSESIMERKKI 12 5 (2S,4S)-4-Asetyylitio-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-piperat- sinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini Tämä valmistusesimerkki kuvaa kahta erilaista tapaa tuottaa sama otsikkoyhdiste.

10 12(a) (2S,4S)-4-Asetyylitio-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]- l-piperatsinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 105 g (2S,4S)-4-hydroksi-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-piperat-15 sinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiiniä (valmistettu kuten on kuvattu vaimistusesimerkissa 15) ja 55 g trifenyylifosfiinia liuotettiin 700 ml:aan tetrahydrofuraania ja liuos, joka sisälsi 36,5 g dietyyliatsodikarboksylaattia 100 ml:ssa tetrahydrofuraania, lisättiin pisara kerrallaan siihen samalla jäähdyttäen jäällä. Tuloksena saatua seosta sekoitettiin sitten samassa lämpötilassa 10 minuuttia. Tämän 20 jälkeen liuos, joka sisälsi 15,9 g merkaptoetikkahappoa 100 ml:ssa tetrahydrofuraania, lisättiin pisara kerrallaan seokseen ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämmössä 1 tunnin ajan. Seos väkevöitiin sitten haihduttamalla alennetussa paineessa. Konsentraatti liuotettiin 1,5 l:aan etyyliasetaattia ja pestiin vedellä ja natriumkloridin vesiliuoksella mainitussa järjestyksessä. Orgaanine kerros kuivattiin vedettömän 25 natriumsulfaatin avulla ja väkevöitiin sitten haihduttamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös sekoitettiin 400 ml:aan di-isopropyylieetteriä ja liukeneva aine poistettiin. Tämä menetelmä toistettiin kaikkiaan neljä kertaa. Jäännökselle tehtiin kolonnikromatografia 3 kg:n silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin seoksia alueella 1-0 - 20:1 tilavuusosaa eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikko-30 yhdisteen, kerättiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 88,4 kg otsikkoyhdistettä värittömänä pulverina.

74 96863

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), cm'1: luvut puuttuu alkuperäisestä tekstistä

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), «S ppm: 5 1,82-1,93 (1H, multipletti); 2,34 (3H, singletti); 2,35-2,82 (7H, multipletti); 3,37-3,70 (5H, multipletti); 3,91-4,05 (1H, multipletti); 10 4,07-4,17 (1H, multipletti); 4,23-4,36 (2H, multipletti); 4,64-4,77 (1H, multipletti); 5,02-5,35 (4H, multipletti); 7,43-7,57 (4H, multipletti); 15 8,18-8,26 (4H, multipletti).

12(bl) (2S,4R)-4-Metaanisulfonyylioksi-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)oksietyyli]-l-piperatsinyyIikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrro-lidiini 20 89 μΐ trietyyliamiinia ja 50 μΐ metaanisulfonyylikloridia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 321mg(2s,4S)-4-hydroksi-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-piperat-sinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiiniä 3,2 ml:ssa vedetöntä tetrahydrofuraania samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin 25 lämpötilassa 0-5 °C 30 minuuttia ja sitten huoneen lämmössä 1 tunnin ajan. Reak-tioseos väkevöitiin sitten haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös sekoitettiin natriumvetykarbonaatin vesiliuokseen ja uutettiin sitten etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla; liuotin poistettiin sitten tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 345 mg otsikko-30 yhdistettä pulverin muodossa.

75 96863

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1751, 1710, 1654, 1607, 1523, 1436, 1406.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 5 2,22-3,01 (8H, multipletti); 3,06 (3H, singletti); 3,40-4,03 (6H, multipletti); 4,25-4,47 (2H, multipletti); 4,84 ja 4,89 (yhteensä 1H, kaksi triplettiä, J = 7,33 Hz); 10 5,04-5,37 (5H, multipletti); 7,46 ja 7,50 (yhteensä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 7,56 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 8,19-8,26 (4H, multipletti).

15 12(b2) (2S,4S)-4-AsetyyIitio-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l- piperatsinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 51 μΐ tioetikkahappoa lisättiin liuokseen, joka sisälsi 26 mg natriumhydridiä (55 %:sena p/p dispersiona mineraaliöljyssä) 1,4 ml:ssa vedetöntä dimetyyliformamidia 20 samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämmössä 30 minuuttia. Tämän jälkeen liuos, joka sisälsi 340 mg (2S,4S)-4-metaanisulfonyyliok-si-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-piperatsinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (bl) edellä] 2 ml:ssa vedetöntä dimetyyliformamidia lisättiin seokseen ja tuloksena saatua 25 seosta sekoitettiin lämpötilassa 80-90 °C 4 tuntia, jonka jälkeen reaktioseoksen annettiin jäähtyä huoneen lämpötilaan. Reaktioseos kaadettiin sitten natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin vedellä, kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja vapautettiin liuoksesta tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin samalla tavalla kuin edellä olevassa vaiheessa (a), jolloin saatiin 30 otsikkoyhdiste (166 mg). Näin saadun tuotteen infrapuna-absorptiospektri ja ydinmag- 76 96863 neettinen resonanssispektri oli sama kuin sen yhdisteen, joka saatiin edellä olevan vaiheen (a) mukaisesti.

VALMISTUSESIMERKKI 13 5 (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-l-homopi- peratsinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 860 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-2-pyrro-10 lidiinin karboksyylihappoa [valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 1(b)] liuotettiin 8 ml:ssa vedetöntä asetnitriiliä ja 410 mg N,n’-karbonyylidi-imidatsolia lisättiin tuloksena saatuun liuokseen. Tuloksena saatua seosta sekoitettiin sitten huoneen lämmössä 30 minuuttia, jonka jälkeen liuos, joka sisälsi 1250 mg 4-[2-(4-nitrobentsyy-lioksikarbonyyli)oksietyyli]homopiperatsiinin bis(trifluoriasetaatti)a 5 ml:ssa asetnitriiliä 15 ja 860 μ\ di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin mainitussa järjestyksessä. Tuloksena saatua seosta sekoitettiin sitten huoneen lämmössä 35 tuntia. Tämän jälkeen reak-tioseos liuotettiin 100 ml :11a etyyliasetaattia ja pestiin natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella ja natriumkloridin vesiliuoksella mainitussa järjestyksessä. Orgaaninen kerros kuivattiin sitten vedettömän natriumsulfaatin avulla ja väkevöitiin haihduttamalla 20 alennetussa paineessa. Jäännökselle tehtiin kolonnikromatografia silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välisiä seoksia alueella 98:2 - 95:5 tila-vuusosaa eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdisteen, kerättiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 900 mg otsikkoyhdistettä.

25 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), νβ cm'1: 1748, 1709, 1650, 1608, 1521, 1347, 1254.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), <5 ppm: 1,71-1,89 (2H, multipletti); 30 2,42-2,86 (7H, multipletti); 3,01-3,13 (1H, multipletti); 77 96863 3,32-3,88 (8H, multipletti); 3,72 (2H, singletti); 3,78 ja 3,80 (yhteensä 3H, kaksi singlettiä); 4,01-4,27 (3H, multipletti); 5 4,51-4,61 (1H, multipletti); 5,00-5,33 (4H, multipletti); 6,84 (2H, dubletti, J = 8,3 Hz); 7,23 (2H, dubletti, J = 8,3 Hz); 7,41-7,56 (4H, multipletti); 10 8,16-8,24 (4H, multipletti).

VALMISTUSESIMERKKI 14 (25.45) -2-[4-(2-Karbamoyylioksietyyli)-l-homopiperatsinyylikarbonyyli]-4-(4-15 metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini ja (25.45) -2-(4-Karbamoyylimetyyli-l-homopiperatsinyylikarbonyyli)-4-(4-metoksi-bentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 20 Meneteltiin samalla lailla kuin valmistetusesimerkissä 13 paitsi, että 4-(2-karbamoyy-lioksietyyli)homopiperatsiinin bis(trifluoriasetaatti)a ja 4-karbamoyylimetyylihomopipe-ratsiinin bis(trifluoriasetaatti)a käytettiin 4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyy-lijhomopiperatsiinin bis(trifluoriasetaatin) sijasta, jolloin saatiin otsikkoyhdisteet.

Claims

78 96863

1. Menetelmä lääkeaineina käyttökelpoisten kaavan (I) mukaisten [2-(l-homopiperat-siinikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksy-5 laattisuolojen valmistamiseksi: H °h * Λ f

10 CH I s-L N N+ H^C' N-/ V J—N- O COOR3 15 jossa R1 on vetyatomi tai metyyliryhmä; R3 on vetyatomi tai negatiivinen jonivaraus; 20 R6 on metyyliryhmä, 2-hydroksietyyliryhmä, karboksimetyyliryhmä, karbamoyylime-tyyliryhmä, 2-fluorietyyliryhmä, 2-aminoetyyliryhmä tai 2-karbamoyylietyyliryhmä; ja R7 on metyyliryhmä, 2-karbamoyylioksietyyliryhmä, 2-hydroksietyyliryhmä tai 25 karbamoyylimetyyliryhmä ja niiden suolojen valmistamiseksi, joissa R3 on vetyatomi, mainittujen yhdisteiden estereiden valmistamiseksi, tunnettu siitä, että se käsittää seuraavat vaiheet: 30 annetaan kaavan (IV) mukaisen yhdisteen: 79 96863 Ohi R1 5 'CHvA/Y

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lähtöaineet valitaan niin, että valmistetaan 2-[2-(4,4-Dimetyyli-l-homopiperatsiniokarbonyyli)pyrro-lidin-4-yy litio]-6-( 1-hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola. 5

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lähtöaineet valitaan niin, että valmistetaan 2-{2-[4-(2-Hydroksietyyli)-4-metyyli-l-homopiperat-siniokarbonyyli]pyrrolidin-4-yylitio} -6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola. 10

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lähtöaineet valitaan niin, että valmistetaan 2-[2-(4-Karboksimetyyli-4-metyyli-l-homopiperat-siniokarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-(l-hydroksietyyli)-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola. 15

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lähtöaineet valitaan niin, että valmistetaan 2-{2-[4-(2-Karbamoyylioksietyyli)-4-metyyli-l-homopi-peratsiniokarbonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli- l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola. 20

5 V f ? rv *c VjpY \s\T

10. COOR22 (jossa R1, R3, R6 ja R7 on määritelty kuten edellä ja R22 on karboksia suojaava 15 ryhmä, vaadittaessa poistetaan karboksia suojaava ryhmä, jolloin saadaan kaavan (Γ) mukainen yhdiste:

20 H SrXmTY y!—n—h

25. COOR© kaavan I mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa R3 on negatiivinen lataus, ja vaadittaessa esteröidään tuote tai valmistetaan sen suola. :l m i «in i i i rf 30 96863 81

5 H3C C>|—ι^ιρ- 0^^ COCR22 10 (j°ssa: R1 on määritelty kuten edellä; Y on kaavan -OR21 tai -SO-R23 mukainen ryhmä; R21 on alkyylisulfonyyliryhmä, aryylisulfonyyliryhmä, dialkyylifosforyyliryh-mä tai diaryylifosforyyliryhmä; R22 on karboksia suojaava ryhmä; ja R23 on alkyyyli-ryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, halogenisoitu alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia; 2-asetamidoetyyliryhmä; 2-asetamidovinyyliryhmä; aryyliryhmä, jossa on 6-10 15 rengashiiliatomia ja joka on substituoimaton tai joka on substituoitu ainakin yhdellä substituentilla, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluu halogeeniatomit, Cj-C3-alkyyli-ryhmät, Cj-C3-alkoksiryhmät, C2-C5-alkoksikarbonyyliryhmät, nitroryhmät, karba-omyyliryhmät, mono(Cj-C3-alkyyli)karbamoyyliryhmät, di(CrC3-alkyyli)karbamoyyli-ryhmät, hydroksiryhmät ja syanoryhmät; tai aromaattinen heterosyklinen ryhmä, jossa 20 on 5 tai 6 rengasatomia, joista yksi on heteratomi, joka on typpi- ja/tai happi- ja/tai rikkiheteroatomi ja 0 tai 1 on lisätyppiatomi, mainitun heterosyklisen ryhmän ollessa substituoimaton tai se on substituoitu ainakin yhdellä substituentilla, joka on valittu ryhnmästä, johon kuuluu halogeeniatomit ja Cj-Cj-alkyyliryhmät, reagoida kaavan (V) mukaisen yhdisteen kanssa: 25 H H,. rS ? ry

30 N \ 96863 80 jossa R6 ja R7 on määritelty kuten edellä; jolloin saadaan kaavan (I’) mukainen yhdiste:

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lähtöaineet valitaan niin, että valmistetaan (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4,4-Dimetyyli-l-homopiperat-siniokarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola. 25

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lähtöaineet valitaan niin, että valmistetaan (lR,5S,6S)-2-{(2S,4§)-2-[4-(2-Hydroksietyyli)-4-metyyli-1 -homopiperatsiniokarbonyyli]pyrrolidin-4-yylitio} -6- [(1R) -1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola. 30 82 96863

8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lähtöaineet valitaan niin, että valmistetaan (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-Karbamoyylimetyyli)-4-metyyli-l-homopiperatsiniokarbonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola. 5

9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lähtöaineet valitaan niin, että valmistetaan (lR,5£,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-Karboksimetyyli)-4-metyyli- l-homopiperatsinio-karbonyyli]pyrrolidin-4-yylitio} -6- [(1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli- l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola. 10

10. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lähtöaineet valitaan niin, että valmistetaan (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-Karbamoyylioksietyyli)-4-metyyli-1 -homopiperatsiniokarbonyyli]pyrrolidin-4-yylitio} -6- [(1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola. 15 il m i im i i i il ' ' 96863 83