FI90082C - Foerfarande och kromatografikolonn foer rening av antikroppar - Google Patents
Foerfarande och kromatografikolonn foer rening av antikroppar Download PDFInfo
- Publication number
- FI90082C FI90082C FI874431A FI874431A FI90082C FI 90082 C FI90082 C FI 90082C FI 874431 A FI874431 A FI 874431A FI 874431 A FI874431 A FI 874431A FI 90082 C FI90082 C FI 90082C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- antibody
- column
- matrix
- affinity matrix
- release agent
- Prior art date
Links
- 238000000746 purification Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 13
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 title claims description 6
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims abstract description 46
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 23
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 claims description 9
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- 108010058683 Immobilized Proteins Proteins 0.000 claims 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 abstract description 15
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 6
- BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N trisodium borate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]B([O-])[O-] BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 4
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 4
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 241001132374 Asta Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000003398 denaturant Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- ZNNZYHKDIALBAK-UHFFFAOYSA-M potassium thiocyanate Chemical compound [K+].[S-]C#N ZNNZYHKDIALBAK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940116357 potassium thiocyanate Drugs 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- -1 salt ions Chemical class 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
- C07K16/065—Purification, fragmentation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Control Of El Displays (AREA)
Description
1 90082
Menetelmä ja kromatografiakolonni vasta-aineiden puhdistamiseksi Tämä keksintö koskee menetelmää ja kromatografiako-5 lonnia I(g)G3 vasta-aineiden puhdistamiseksi.
, Aiemmin on käytetty erilaisia menetelmiä vasta-ai neiden puhdistukseen. Vasta-aineita on puhdistettu esimerkiksi antigeeni-affiniteetti-kromatografialla tai proteiini A:n affiniteetti-kromatografialla. Yritettäessä puh-10 distaa alaluokan I(g)G3 vasta-aineita on kohdattu vaikeuksia, koska tällaisissa menetelmissä vasta-aine I(g)G3 usein saostuu liuoksesta, ja tällaiset sakat tulevat yleensä palautumattomasti liukenemattomiksi, ja näin menetetään puhdistettua vasta-ainetta.
15 Tämä keksintö kohdistetaan vasta-aineiden, ja eri tyisesti alaluokan I(g)G3 vasta-aineiden puhdistuksen ja varastoinnin parantamiseen. Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista se, mitä patenttivaatimuksessa 1 esitetään.
20 Keksinnön mukaisesti alaluokan I(g)G3 vasta-ainetta puhdistetaan saattamalla affiniteettimatriisi kosketukseen nesteen kanssa, joka sisältää I(g)G3 -vasta-ainetta, ja tämä kosketus saadaan aikaan pH:ssa 9,0 - 9,6, vasta-aineen I(g)G3 sitomiseksi matriisiin. Sitten I(g)G3-vasta-25 aine vapautetaan matriisista, ja I(g)G3 kerätään nesteessä, joka on puskuroitu pH 9,0 - 9,6:een, ja useimmiten pH :ssa noin 9,3. Vasta-aine vapautetaan affiniteettimat-riisista käyttämällä vapautusainetta, ja I(g)G3-vasta-aine erotetaan välittömästi vapautusaineesta ja kerätään pusku-30 rin vesiliuokseen, jonka pH on 9,0 - 9,6.
Erityisen edullisen toteutustavan mukaisesti affi-niteettimatriisia käytetään kolonnissa, ja kolonnissa on myös suolanpoistomatriisi, ja affiniteettimatriisi on sijoitettu sellaiseen kohtaan kolonnissa, että se on suolan-····: 35 poistomatriisin tai -geelin yläpuolella. Tällä tavalla 2 ) J O 8 2 vapautunut vasta-aine kulkee suolanpoistomatriisiin tai -geeliin, jossa vapauttamisaine erotetaan I(g)G3 -vasta-aineesta.
Kolonni tasapainotetaan pH 9,0 - 9,6 välille, jol-5 loin puhdistuksen aikana vasta-aine pysyy tässä pHrssa, ja kosketus vasta-aineen ja vapauttamisaineen välillä minimoituu .
Keksinnön kohteena on myös kromatografiakolonni, jolle on tunnusomaista se, mitä patenttivaatimuksessa 5 10 esitetään. Kolonni sisältää sekä affiniteettimatriisin että suolanpoistomatriisin tai -geelin, ja affiniteetti-matriisi sijoitetaan kolonniin suolanpoistogeelin yläpuolelle, ja koko kolonni tasapainotetaan pH 9,0 - 9,6 välille, ja yleisimmin pH-arvoon noin 9,3.
15 Alaluokan I(g)G3-vasta-aine, joka puhdistetaan tä män keksinnön mukaisesti, voi olla läsnä osana polykloo-nista vasta-ainetta, tai keksinnön edullisen aspektin mukaisesti, puhdistettu vasta-aine on monoklonaalinen vasta-aine, alaluokkaa I(g)G3. Jos vasta-aine on polyklooninen 20 vasta-aine, puhdistettava vasta-aine voi sisältää muitakin vasta-aineita kuin I(g)G3-vasta-ainetta ja/tai se voi sisältää useamman kuin yhden alaluokan I(g)G3-vasta-aineen.
Alaluokan I(g)G3-vasta-ainetta, joka puhdistetaan tämän keksinnön mukaisesti, voidaan saada millä tahansa 25 erilaisista menetelmistä, ja se voi olla mikä tahansa hyvin suuresta määrästä vasta-aineita. Kuten on esitetty yllä, I(g)G3-vasta-aine on edullisesti monoklonaalinen vasta-aine. Menetelmiä monoklonaalisten vasta-aineiden valmistamiseksi tunnetaan alalla yleisesti, ja tällaisia : 30 vasta-aineita voidaan puhdistaa tämän keksinnön mukaisesti.
Käytettävä affiniteettimatriisi on sellainen, joka kykenee adsorboimaan I(g)G3-vasta-ainetta. Esimerkiksi affiniteettimatriisi voi sisältää A-proteiinia; antigeeniä 35 I(g)G3-vasta-aineelle, joka on puhdistettava, tai vasta- 3 ) il G 3 2 aineen I(g)G3-vasta-aineelle, joka on puhdistettava, immo-bilisoidussa muodossa (kiinteällä tuella, kuten esimerkiksi ristiinkytketyllä dekstraanilla). Sopivan affiniteetti-matriisin valintaan I(g)G3-vasta-aineen adsorboimiseksi 5 katsotaan alaa tuntevien kykenevän tässä olevien opetusten mukaan; näinollen lisäyksityiskohtia tässä suhteessa ei katsota tarpeellisiksi esittää, jotta alaa tuntevat kykenisivät toimimaan tämän keksinnön mukaan.
Tässä keksinnössä käytettävä suolanpoistomatriisi 10 tai -geeli on mikä tahansa suuresta määrästä matriiseja, jotka ovat sopivia suolanpoistoon (pienien suolaionien tai -molekyylien erotukseen suuremmista molekyyleistä). Tällaisia matriiseja nimitetään usein geeleiksi, ja tällaisten matriisien käyttömenetelmää kutsutaan usein geelisuo-15 datukseksi. Tämän keksinnön mukaisesti suolanpoistomatrii-sia käytetään I(g)G3-vasta-aineen, joka on vapautunut af-finiteettimatriisilta, ja materiaalin tai materiaalien, joita käytetään I(g)G3-vasta-aineen vapauttamiseen affini-teettimatriisista, erottamiseen. Edustavina esimerkkeinä 20 tällaisista suolanpoistomatriiseista voidaan mainita: ristiinkytketty dekstraani (esimerkiksi tyyppi, jota myydään merkillä "Sephadex G-25") ja polyakryyliamidihelmet (esimerkiksi tyyppiä, jota myydään merkillä "Bio-Rad P-2").
Kolonni voidaan tasapainottaa pH-arvoon, joka on 25 vähintään 9,0 ja enintään 9,6, käyttämällä laajaa valikoimaa puskureita, ja sopivan puskurin valinnan katsotaan käyvän alaa taitavalle ilmi tässä olevasta esityksestä. Puskuri voi olla esimerkiksi natriumbikarbonaatti, nat-riumboraatti tai Tris-puskuri. Edustava puskuri on 0,1M 30 natriumboraatti, joka antaa pH-arvoksi noin 9,3.
Vapauttamisaine, jota käytetään vapauttamaan vasta-ainetta affiniteettimatriisilta, voi olla mikä tahansa tällaisista vapauttamisaineista. Yleensä tällaiset vapaut-tamisaineet ovat vesipitoisia puskureita, jotka on pusku-35 roitu pH-arvoon enintään 4,0. Useimmissa tapauksissa pus- 4 '' u 8 2 kurin pH ei ole alle 2,0; on kuitenkin ymmärrettävä, että alhaisempaa pH:ta voidaan käyttää. Vapauttamisaine voi olla kaotrooppinen aine (esimerkiksi natrium- tai kalium-tiosyanaatti); tai denaturointiaine, kuten guanidiinivety-5 kloridi tai urea, jne. Katsotaan, että alaa taitava kykenee valitsemaan sopivan vapauttamisaineen tämän esityksen perusteella.
Kuten on esitetty yllä, tämän keksinnön mukaisesti kontakti vasta-aineen ja vapauttamisaineen välillä mini-10 moidaan, ja puhdistettaessa affiniteettimatriisia käyttäen vasta-aine pidetään ja kerätään pH:ssa vähintään noin 9,0 ja enintään noin 9,6.
Tätä keksintöä kuvataan edelleen liitteenä olevalla piirroksella, jossa: 15 Piirros esittää kaavakuvaa keksinnön mukaisesti kromatografiakolonnista.
Piirroksen mukaan esitetään kromatografiakolonni 10, joka sisältää suolanpoistogeelin 11 ja affiniteetti-geelin 12 suolanpoistogeelin 11 yläpuolella. Kuten on esi-20 tetty yllä, affiniteettigeeli on edullisesti proteiini Asta ja suolanpoistogeeli on edullisesti Sephadexia.
Kolonni muodostetaan yleensä sillä tavalla, että suolanpoistomatriisin 11 tilavuus on vähintään kaksi kertaa, ja edullisesti vähintään neljä kertaa affiniteetti-25 matriisin 12 tilavuus. Tilavuuksien eroavaisuus edistää nopeaa erottumista vapauttamisaineen ja vapautuneen vasta-aineen välillä suolanpoistogeelissä 11.
Kolonni 10 tasapainotetaan pH-arvoon vähintään 9,0 ja enintään 9,6, kuten on esitetty yllä.
30 Vasta-ainetta I(g)G3 sisältävä näyte pannaan kolon nin 10 yläpäähän. Näyte voi olla seerumia, kudosviljely-liuosta, askiittiliuosta jne. Näyte sisältää edullisesti alaluokan I(g)G3 monokloonista vasta-ainetta. Näyte voidaan lisätä sellaisenaan tai kirkastettuna supernatantti-35 na.
5 90082
Vasta-aine adsorboidaan affiniteettimatriisiin 12 ja kolonni pestään vesipitoisella puskurilla, jonka pH on vähintään 9,0 ja enintään 9,6.
Pesun jälkeen vapauttamisainetta lisätään kolonnin 5 10 yläpäähän; esimerkiksi vesipitoista puskuria, jonka pH
on enintään 4,0. Muutos pH:ssa vapauttaa vasta-aineen af-finiteettimatriisilta 12, ja vapautunut vasta-aine kulkeutuu ennen vapauttamisainetta suolanpoistomatriisiin 11, jossa vapautunut vasta-aine, vesipitoisessa puskurissa, 10 joka on esitasapainotetussa pH arvossa vähintään 9,0 ja enintään 9,6, erotetaan vapauttamisaineesta. Tällä tavalla minimoidaan kontakti vapautetun vasta-aineen ja vapautta-misaineen välillä, ja vasta-aine pidetään tehokkaasti pHsssa, joka on vähintään 9,0, ja enintään 9,6, puhdistuk-15 sen aikana kolonnissa 10.
Kolonniin 10 lisättävän vapauttamisaineen tilavuutta kontrolloidaan siten, että aikaansaadaan vasta-aineen vapautuminen affiniteettimatriisista ja vapautuneen vasta-aineen erottuminen vapauttamisaineesta, ja pidetään vasta-20 aine vähintään 9,0 ja enintään 9,6 pH:ssa. Näinollen va-pauttamisainetta voidaan esimerkiksi lisätä tilavuus, joka on yksi tai kaksi kertaa affiniteettimatriisin 12 tilavuus .
Näinollen affiniteettimatriisin 12, suolanpoisto-25 matriisin 11 ja kolonniin lisättävän vapauttamisaineen suhteellisia tilavuuksia kontrolloidaan siten, että saadaan aikaan vapautuneen vasta-aineen erottuminen vapauttamisaineesta ja vapautuneen vasta-aineen talteenotto puskurin vesiliuoksessa, jonka pH on vähintään 9,0 ja enintään 30 9,6.
Kolonnia voidaan käyttää yllä kuvatulla tavalla vasta-aineen I(g)G3 puhdistukseen ja erityisesti alaluokan I(g)G3 monoklonaalisen vasta-aineen puhdistukseen.
Keksinnön lisäaspektin mukaan esitetään yhdistelmä, 35 joka sisältää vasta-ainetta I(g)G3 vesipitoisessa pusku- 6 10 O 3 2 rissa, jonka pH on vähintään noin 9,0 ja enintään noin 9,6 ja tavallisimmin noin 9,3. Vasta-aine I(g)G3 voi olla mo-noklonaalinen vasta-aine tai se voi olla polykloonisesta vasta-aineseoksesta. Tällaisen vesipitoisen puskurin käyt-5 tö parantaa I(g)G3 -vasta-aineiden varastointistabiili-suutta.
Keksintöä kuvataan edelleen seuraavan esimerkin avulla; sillä ei kuitenkaan rajoiteta keksinnön laajuutta:
Esimerkki 10 Kolonnia, jonka halkaisija oli noin 1 cm ja pituus 30 cm (tilavuus 24 ml), käytettiin monokloonisen vasta-aineaskiitin IgG(3) puhdistukseen. Kolonni konstruoitiin täyttämällä se ensin 19 ml:11a (24 cm) ristiinkytkettyä dekstraania (Sephadex G-25). Ristiinkytketylle dekstraa-15 nille (Sepharose C1-4B Sigma P-3391) tuettu proteiini A turvotettiin tislatussa vedessä ja noin 5 ml (6 cm) pantiin Sephadex G-25 päälle. Kolonni esitasapainotettiin useilla läpäisyillä 0,1M natriumboraattia (pH 9,3). As-kiittiseos pantiin kolonniin ja sitten se pestiin useilla 20 kolonnin tilavuuksilla natriumboraattipuskuria. Tämä poistaa askiitista eronneet jäljellä olevat proteiinit. Tämän pesuvaiheen jälkeen pantiin 10 ml 0,1M natriumsitraattia (pH 3,5) proteiini A/Sepharose CL-4B matriisiin, kunnes kaikki natriumsitraattipuskuri kulkeutui affiniteettimat-25 riisiin. 0, IM natriumboraattisäiliö yhdistettiin kolonniin, kun natriumsitraattipuskuri meni kolonniin, proteiinin eluoimiseksi. Vaihetta jatkettiin, kunnes kaikki vasta-aine eluoitui kolonnista, ja kolonni tasapainotettiin 0,1M natriumboraatilla pH 9,3:ssa. Tässä vaiheessa kolon-30 nia voidaan käyttää uudelleen vasta-aineen puhdistukseen. IgG(3) eluoitui fraktiossa 11, ja sitraattipuskuri eluoitui fraktiossa 24.
Tämä keksintö on erityisen edullinen, koska on mahdollista saada erittäin puhdasta vasta-ainetta nopealla ja : 35 toistettavalla tavalla ilman ongelmia, joita on aiemmin 7 -)0082 kohdattu vasta-aineen palautumattoman saostumisen muodossa. Lisäksi menetelmä sopii automaatiolle tietokoneohjatuissa ja ohjelmoitavissa puhdistussysteemeissä.
Edelleen on mahdollista ottaa talteen ja varastoida 5 I(g)G3-vasta-ainetta ilman ongelmia, joita alalla on tähän asti kohdattu, esim. ilman vasta-aineen palautumatonta saostumista.
Nämä ja muut edut käyvät alaa taitavalle ilmeisiksi tästä esityksestä.
10
Claims (6)
1. Menetelmä I(g)G3-vasta-aineen puhdistamiseksi, tunnettu siitä, että 5 saatetaan I(g)G3-vasta-ainetta sisältävä neste kos ketukseen affiniteettimatriisin kanssa, joka pidetään pH-arvossa, joka on vähintään 9,0 ja enintään 9,6 I(g)G3-vas-ta-aineen adsorboimiseksi; vapautetaan adsorboitu l(g)G3-vasta-aine affiniteettimatriisista saattamalla affiniteet-10 timatriisi kosketukseen vapauttamisaineen kanssa ja erottamalla vapauttamisaine ja vapautunut I(g)G3-vasta-aine suolanpoistomatriisissa, jonka pH pidetään vähintään arvossa 9,0 ja enintään 9,6 ja jonka tilavuus on vähintään kaksi kertaa suurempi kuin affiniteettimatriisin tilavuus; 15 ja otetaan talteen vapautunut I(g)G3-vasta-aine eluaatis-sa, jonka pH on vähintään 9,0 ja enintään 9,6.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vapauttamisaine on vesipitoinen puskuri, jonka pH on enintään 4,0.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että I (g)G3-vasta-aine on mono-klonaalinen vasta-aine.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että suolanpoistomatriisin, affiniteet- 25 timatriisin ja eluaatin pH on noin 9,3.
5. Kromatografiakolonni I(g)G3-vasta-aineen puhdistamiseksi, tunnettu siitä, että se käsittää: kolonnin, joka sisältää affiniteettimatriisin ja suolanpoistomatriisin, jonka tilavuus on vähintään kaksi 30 kertaa suurempi kuin affiniteettimatriisin tilavuus, af-finiteettimatriisilta vapautuneen materiaalin vastaanottamiseksi, ja mainittu kolonni tasapainotetaan pH-arvoon, joka on vähintään 9,0 ja enintään 9,6.
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen kolonni, t u n -35 n e t t u siitä, että affiniteettimatriisi on immobili- soitua A-proteiinia. 9 ') O O 8 2
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CA000548559A CA1323567C (en) | 1987-10-05 | 1987-10-05 | Method for purification of antibodies |
| CA548559 | 1987-10-05 | ||
| EP87308900A EP0310719B1 (en) | 1987-10-05 | 1987-10-07 | Method for purification of antibodies |
| EP87308900 | 1987-10-07 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI874431A0 FI874431A0 (fi) | 1987-10-08 |
| FI874431L FI874431L (fi) | 1989-04-09 |
| FI90082B FI90082B (fi) | 1993-09-15 |
| FI90082C true FI90082C (fi) | 1993-12-27 |
Family
ID=25671537
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI874431A FI90082C (fi) | 1987-10-05 | 1987-10-08 | Foerfarande och kromatografikolonn foer rening av antikroppar |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0310719B1 (fi) |
| JP (1) | JPH0696598B2 (fi) |
| AT (1) | ATE76082T1 (fi) |
| AU (1) | AU600311B2 (fi) |
| CA (1) | CA1323567C (fi) |
| DE (1) | DE3779125D1 (fi) |
| ES (1) | ES2041690T3 (fi) |
| FI (1) | FI90082C (fi) |
| GR (1) | GR3004622T3 (fi) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5151504A (en) * | 1989-11-17 | 1992-09-29 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Method for purification of monoclonal antibodies |
| DE4118912C1 (fi) * | 1991-06-08 | 1992-07-02 | Biotest Pharma Gmbh, 6072 Dreieich, De | |
| US8084032B2 (en) | 2004-01-21 | 2011-12-27 | Ajinomoto Co., Inc. | Purification method which prevents denaturation of an antibody |
| WO2016031932A1 (ja) * | 2014-08-27 | 2016-03-03 | 田辺三菱製薬株式会社 | アルカリ洗浄によるＦｃ領域を有するタンパク質の製造方法 |
| AU2016233557B2 (en) * | 2015-03-13 | 2021-06-24 | Bristol-Myers Squibb Company | Use of alkaline washes during chromatography to remove impurities |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES8404858A1 (es) * | 1982-04-12 | 1984-05-16 | Hybritech Inc | Un procedimiento para la purificacion de un anticuerpo. |
| JPS60228421A (ja) * | 1984-04-27 | 1985-11-13 | Shionogi & Co Ltd | モノクロ−ナル抗ヒトＩｇＧ抗体およびその製造法 |
-
1987
- 1987-10-05 CA CA000548559A patent/CA1323567C/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-10-07 ES ES198787308900T patent/ES2041690T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1987-10-07 EP EP87308900A patent/EP0310719B1/en not_active Expired
- 1987-10-07 AT AT87308900T patent/ATE76082T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-10-07 DE DE8787308900T patent/DE3779125D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1987-10-08 FI FI874431A patent/FI90082C/fi not_active IP Right Cessation
- 1987-10-12 AU AU79556/87A patent/AU600311B2/en not_active Ceased
- 1987-11-13 JP JP62287203A patent/JPH0696598B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1992
- 1992-05-18 GR GR920400948T patent/GR3004622T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GR3004622T3 (fi) | 1993-04-28 |
| JPH0696598B2 (ja) | 1994-11-30 |
| FI90082B (fi) | 1993-09-15 |
| EP0310719B1 (en) | 1992-05-13 |
| ES2041690T3 (es) | 1993-12-01 |
| DE3779125D1 (de) | 1992-06-17 |
| FI874431A0 (fi) | 1987-10-08 |
| AU7955687A (en) | 1989-04-13 |
| JPH01135798A (ja) | 1989-05-29 |
| FI874431L (fi) | 1989-04-09 |
| EP0310719A1 (en) | 1989-04-12 |
| CA1323567C (en) | 1993-10-26 |
| AU600311B2 (en) | 1990-08-09 |
| ATE76082T1 (de) | 1992-05-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4584075A (en) | Process and apparatus for electrically desorbing components selectively sorbed on an electrolytically conducting barrier | |
| Pensky et al. | Studies on thyroxine-binding globulin (TBG): II. Separation from human serum by affinity chromatagraphy | |
| US4661224A (en) | Process and apparatus for electrically desorbing components selectively sorbed on an electrolytically conducting barrier | |
| JPH04234899A (ja) | 免疫グロブリンｇ分子の単離方法 | |
| Doellgast et al. | Purification of human IgA by salt-mediated hydrophobic chromatography | |
| US4909944A (en) | Removal of metal ions from aqueous solution | |
| Zoller et al. | Antigen and antibody purification by immunoadsorption: elimination of non-biospecifically bound proteins | |
| EP0368092B1 (en) | Ion exchange and separation method | |
| EP0332323B1 (en) | Carrier for affinity chromatography immobilized with antibodies and preparation thereof | |
| FI90082C (fi) | Foerfarande och kromatografikolonn foer rening av antikroppar | |
| US4969995A (en) | Removal of metal ions from aqueous solution | |
| Josić et al. | Isolation of plasma proteins from the clotting cascade by heparin affinity chromatography | |
| US4275196A (en) | Glyoxal agarose | |
| US5077391A (en) | Purification of immunoglobulin M | |
| JOSIĆ et al. | Purification of monoclonal antibodies by hydroxylapatite HPLC and size exclusion HPLC | |
| US4841024A (en) | Purification of antibodies | |
| US4414336A (en) | Method for preparing sample for use in endotoxin test | |
| Haiech et al. | Ligand binding to macromolecules: determination of binding parameters by combined use of ligand buffers and flow dialysis; application to calcium-binding proteins | |
| KR910009283A (ko) | 백일해 독소 및 또는 사상혈구 응집소 항원의 정제 방법(Process) | |
| Ljungberg et al. | Exploitation of a monoclonal antibody for weak affinity‐based separation in capillary gel electrophoresis | |
| Cox et al. | Chromatographic purification of human serum accelerator globulin | |
| Josić et al. | High-performance liquid affinity chromatography of liver plasma membrane proteins | |
| Morgan et al. | Investigations into the controlling factors of electrophoretic desorption: A widely applicable, nonchaotropic elution technique in affinity chromatography | |
| US4476093A (en) | Kit for preparing sample for use in endotoxin test | |
| Zeheb et al. | An analytical method for the selective retrieval of iminobiotin-derivatized plasma membrane proteins |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: BECTON, DICKINSON AND COMPANY |