FI82075C - Foerfarande foer framstaellning av a-21978c-derivat och vid foerfarandet anvaend streptomyces roseosporus. - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av a-21978c-derivat och vid foerfarandet anvaend streptomyces roseosporus. Download PDFInfo
- Publication number
- FI82075C FI82075C FI853910A FI853910A FI82075C FI 82075 C FI82075 C FI 82075C FI 853910 A FI853910 A FI 853910A FI 853910 A FI853910 A FI 853910A FI 82075 C FI82075 C FI 82075C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- culture
- fermentation
- hours
- production
- complex
- Prior art date
Links
- 241000958215 Streptomyces filamentosus Species 0.000 title description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 50
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 33
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 13
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 11
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 11
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- 241000828294 Streptomyces roseosporus NRRL 15998 Species 0.000 claims description 7
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N decanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC(O)=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000005632 Capric acid (CAS 334-48-5) Substances 0.000 claims description 2
- 241000828296 Streptomyces roseosporus NRRL 11379 Species 0.000 claims description 2
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 claims 2
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 claims 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 abstract description 45
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 abstract description 45
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 abstract description 22
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 abstract description 19
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 4
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 abstract description 2
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 abstract description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 20
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 11
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 11
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 11
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 9
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- QYDYPVFESGNLHU-UHFFFAOYSA-N elaidic acid methyl ester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OC QYDYPVFESGNLHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- QYDYPVFESGNLHU-KHPPLWFESA-N methyl oleate Chemical group CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC QYDYPVFESGNLHU-KHPPLWFESA-N 0.000 description 8
- 229940073769 methyl oleate Drugs 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 7
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- -1 n-decanoyl Chemical class 0.000 description 7
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 7
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 6
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 5
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 5
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 4
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 4
- 230000009105 vegetative growth Effects 0.000 description 4
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 241000544912 Melanoides Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000970904 Streptomyces moderatus Species 0.000 description 3
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 3
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 3
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 3
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 2
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- QJRRBVNPIKYRQJ-UHFFFAOYSA-N 10-methylundecanoic acid Chemical compound CC(C)CCCCCCCCC(O)=O QJRRBVNPIKYRQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-SOOFDHNKSA-N D-ribopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Chemical compound CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000145847 Moria Species 0.000 description 2
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 241000958233 Streptomyces candidus Species 0.000 description 2
- 241000187392 Streptomyces griseus Species 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 2
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229960005069 calcium Drugs 0.000 description 2
- 230000035425 carbon utilization Effects 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- RGXWDWUGBIJHDO-UHFFFAOYSA-N ethyl decanoate Chemical compound CCCCCCCCCC(=O)OCC RGXWDWUGBIJHDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- GVVPGTZRZFNKDS-JXMROGBWSA-N geranyl diphosphate Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\CO[P@](O)(=O)OP(O)(O)=O GVVPGTZRZFNKDS-JXMROGBWSA-N 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- FBUKVWPVBMHYJY-UHFFFAOYSA-N nonanoic acid Chemical compound CCCCCCCCC(O)=O FBUKVWPVBMHYJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002801 octanoyl group Chemical group C(CCCCCCC)(=O)* 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- ZDPHROOEEOARMN-UHFFFAOYSA-N undecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCC(O)=O ZDPHROOEEOARMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012808 vapor phase Substances 0.000 description 2
- SBPPWJIDARICBS-PGCXOGMSSA-N (5r,5ar,8ar,9r)-5-[[(4ar,6r,7r,8r,8as)-7,8-dihydroxy-2-phenyl-4,4a,6,7,8,8a-hexahydropyrano[3,2-d][1,3]dioxin-6-yl]oxy]-9-(3,4,5-trimethoxyphenyl)-5a,6,8a,9-tetrahydro-5h-[2]benzofuro[6,5-f][1,3]benzodioxol-8-one Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4OC(OC[C@H]4O3)C=3C=CC=CC=3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 SBPPWJIDARICBS-PGCXOGMSSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000187840 Actinoplanes utahensis Species 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101001066726 Concholepas concholepas Hemocyanin subunit A Proteins 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 1
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 1
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 1
- 239000004641 Diallyl-phthalate Substances 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 101000864782 Homo sapiens Surfactant-associated protein 2 Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000407429 Maja Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 240000003183 Manihot esculenta Species 0.000 description 1
- 235000016735 Manihot esculenta subsp esculenta Nutrition 0.000 description 1
- 241000191938 Micrococcus luteus Species 0.000 description 1
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GFRROZIJVHUSKZ-FXGMSQOLSA-N OS I Natural products C[C@@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CO)[C@@H]2NC(=O)C)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GFRROZIJVHUSKZ-FXGMSQOLSA-N 0.000 description 1
- 241000364057 Peoria Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 102100036162 Phosphatidylinositol N-acetylglucosaminyltransferase subunit H Human genes 0.000 description 1
- 101710109736 Phosphatidylinositol N-acetylglucosaminyltransferase subunit H Proteins 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 240000000111 Saccharum officinarum Species 0.000 description 1
- 235000007201 Saccharum officinarum Nutrition 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N Salicin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(CO)cccc1 NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102100030059 Surfactant-associated protein 2 Human genes 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N aldehydo-L-rhamnose Chemical compound C[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N alpha-salicin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- CJIAXHWXANNZPB-UHFFFAOYSA-N azanium;decanoate Chemical compound [NH4+].CCCCCCCCCC([O-])=O CJIAXHWXANNZPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052788 barium Inorganic materials 0.000 description 1
- DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N barium atom Chemical compound [Ba] DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 229910052792 caesium Inorganic materials 0.000 description 1
- TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N caesium atom Chemical compound [Cs] TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004227 calcium gluconate Substances 0.000 description 1
- 229960004494 calcium gluconate Drugs 0.000 description 1
- 235000013927 calcium gluconate Nutrition 0.000 description 1
- NEEHYRZPVYRGPP-UHFFFAOYSA-L calcium;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoate Chemical compound [Ca+2].OCC(O)C(O)C(O)C(O)C([O-])=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C([O-])=O NEEHYRZPVYRGPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000001589 carboacyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 238000005266 casting Methods 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000003245 coal Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 230000020176 deacylation Effects 0.000 description 1
- 238000005947 deacylation reaction Methods 0.000 description 1
- HABLENUWIZGESP-UHFFFAOYSA-N decanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC(O)=O.CCCCCCCCCC(O)=O HABLENUWIZGESP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012527 feed solution Substances 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 125000000400 lauroyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004816 paper chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N salicin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N 0.000 description 1
- 229940120668 salicin Drugs 0.000 description 1
- 238000004626 scanning electron microscopy Methods 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000012807 shake-flask culturing Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001974 tryptic soy broth Substances 0.000 description 1
- 108010050327 trypticase-soy broth Proteins 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 125000000297 undecanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- GRJUENNHVNYCHD-UHFFFAOYSA-N ξ-3-methyldodecane Chemical compound CCCCCCCCCC(C)CC GRJUENNHVNYCHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Treating Waste Gases (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
Description
Menetelmä A-21978C-johdannaisten valmistamiseksi sekä me netelmässä käytetty Streptomyces roseosporus 1 82075 Tämä keksintö koskee parannettua menetelmää 5 A-21978C:n syklisen peptidiantibioottijohdannaisen valmis tamiseksi, jolla on kaava (1) I Γ Αγ“ ΛΛ A i 1 v! A · YAi h /»· 15 H Hac/ γΥ Y Y^ ·χ /es=0 6h2 I A L-Y \
< \h loJ !! I
> / Y V
γ Vo A
20 s· 7« ?H3 o H-Y
Y\V
HOsC^ 25 jossa R on C8-CI2-alkanoyyliryhmä. Menetelmälle on tunnusomaista, että syötetään vastaavaa C8-C12-alkaanihappoa, sen esteriä tai suolaa viljelmään, joka käsittää kannan Streptomyces roeosporus NRRL 11379 tai NRRL 15998, lämpötilan 30 ollessa noin 25 - 40 °C. Tämän menetelmän etuja ovat: 1) menetelmä käsittää harvempia vaiheita kuin aikaisemmat menetelmät, 2) tuotteen saanto suurenee; ja 3) tarvitaan . vähemmän aikaa.
A-21978C-heimoon kuuluvat antibiootit ovat oivalli-35 siä bakteerinvastaisia aineita. Erityisen merkittävä ryhmä 2 82075 A-21978C-johdannaisia ovat kaavan I mukaiset johdannaiset (katso myös: Berbard J. Abbott, Davis S. Fukuda ja Manuel Debono, US-patentti nro 4 537 717). Näiden johdannaisten valmistukseen tarvittiin aikaisemmin monivaiheinen mene-5 telmä, joka oli aikaavievä, saantoa pienentävä ja kallis. Esillä oleva keksintö tarjoaa käytettäväksi parannetun menetelmän näiden A-21978C-johdannaisten valmistamiseksi suoraan. Aikaisempi menetelmä kaavan I mukaisen johdannaisen, kuten A-21978C:n n-dekanoyylijohdannaisen, valmistalo miseksi vaati seuraavat vaiheet: 1. A-21978C:tä tuottavan viljelmän käyminen.
a. Käymisen saattaminen alkuun nestemäistä typpeä sisältävän ampullin avulla.
b. Primäärinen siirrosvaihe (48 tuntia).
15 c. Sekundäärinen siirrosvaihe (24 tuntia).
d. Tertiäärinen siirrosvaihe (24 tuntia).
e. Käyminen (140 tuntia).
2. Suodatus, adsorptio hartsiin ja eluointi sekä väkevöinti .
20 3. t-Boc-(t-butoksikarbonyylisuojatun) kompleksin valmis tus.
4. Suojatun kompleksin väkevöinti 5. Deasyloidun viljelmän käyminen käyttämällä esim. Actinoplanes utahensis'ta 25 a. Käymisen saattaminen alulle nestemäistä typpeä sisältävän ampullin avulla.
b. Primäärinen siirrosvaihe (72 tuntia).
c. Käyminen (67 tuntia).
6. Kompleksin deasylointi deasyloidun viljelmän avulla.
30 7. Suodatus, adsorptio hartsiin ja eluointi sekä väkevöin ti.
8. Uudelleenasylointi.
9. Suojaavan ryhmän hydrolyysi.
10. Lopullinen puhdistus.
35 Esillä oleva uusi menetelmä käsittää C8-C12-alkaa- nihapon (ROH-yhdisteen, jossa R on sama kuin edellä on 11 3 82075 määritelty) tai sen esterin tai suolan lisäämisen A-21978C:tä tuottavaan viljelmään käymisen tuotantovaiheen (vaihe le) aikana vastaavan kaavan I mukaisen yhdisteen saamiseksi. Tämän menetelmän avulla voidaan eliminoida 5 aikaisemman menetelmän vaiheet 3, 4, 5, 6, 7, 8 ja 9. Uusi menetelmä suurentaa sitäpaitsi saannot huomattavasti suuremmiksi kuin ne saannot, jotka on saatu käyttämällä aikaisempaa menetelmää.
Streptomyces roseosporus-kannat NRRL 11379 10 (A-21978,6) ja NRRL 15998 (A-21978,65), eräs NRRL 11379:n mutanttikanta, ovat käyttökelpoisia A-2l978C:tä tuottavia viljelmiä. Nämä viljemät ovat osa perusviljelmäkokoelmaa, jota ylläpitää Northern Regional Research Center, U.S. Department of Agriculture, Agricultural Research Service, 15 Peoria, Illinois 61604, josta ne ovat yleisön saatavissa vastaanottonumeroilla NRRL 11379 ja NRRL 15998. S. roseos-porus NRRL 11379-viljelmää sekä olosuhteita sen käyttämiseksi A-21978C-antibioottien tuotannossa ovat selostaneet Robert L. Hamil ja Marvin M. Hoehn US-patentissa 20 4 331 594, joka on sisällytetty tähän viittauksena.
Luonnossa esiintyviä, US-patentissa 4 331 594 selostettuja A-21978C-teki jöitä ovat tekijät C0, Cx, C2, C3, C4 ja C5. Tekijöissä ja C5 on R kaavassa I erityinen C10-C12-alkanoyyliryhmä. A-21978C-tekijän C0, jonka aikai-25 semmin arveltiin omaavan erityisen haarautuneen C10-alka-noyylisivuketjun, on todettu olevan kahden komponentin seos likimain suhteessa 2:1. Pääkomponentissa on haarautunut -C10-sivuketju ja vähäisemmässä komponentissa on suorako- sivuketju.
30 Valmistettaessa kaavan I mukaista yhdistettä tämän keksinnön mukaisella menetelmällä kutsutaan sitä mukavuussyistä myös A-21978C-tekijäksi. Lukuunottamatta luonnossa • - esiintyviä tekijöitä käytetään sivuketjun pituutta tar koittamaan tekijää. Niinpä esimerkiksi kaavan I mukaista 35 yhdistettä, jossa R = oktanoyyli, kutsutaan siinä tapauk- 4 82075 sessa, että se on valmistettu tämän menetelmän avulla, A-21978Ce-tekij äksi.
Tämän keksinön mukaisessa menetelmässä käytetyn C8-C12-alkaanihapon, esterin tai suolan (substraatin) alkyy-5 liosa voi olla suora tai haarautunut ketju. Luonnossa esiintyvän A-21978C-tekijoiden C1, C2 tai C3 valmistamiseksi voitaisiin käyttää esimerkiksi 8-metyylidekaani-, 10-me-tyylidodekaani- tai 10-metyyliundekaanihappoa, -esteriä tai -suolaa. C8-C12-suoraketjuisia happoja, -estereitä ja 10 -suoloja suositellaan käytettäväksi menetelmässä niiden saatavuuden ja halpuuden vuoksi. Erityisen edullinen substraatti on n-dekaanihappo, sen esterit tai suolat.
Käytettäessä C8-C12-alkaanihappoesteriä pidetään C^-C^-alkyyliestereitä edullisina. Tällaisessa esterissä 15 voi C1-C4-alkyyliryhmä olla myös suora tai haarautunut ketju.
Tyypillisiä sopivia C8-C12-alkaanihappojen suoloja, joita voidaan käyttää menetelmässä, ovat sellaiset, jotka on muodostettu käyttämällä alkalimetalleja ja maa-alkali-20 metalleja, kuten natriumia, kaliumia, litiumia, sesiumia, ribidiumia, bariumia, kalsiumia tai magnesiumia. Sopivia amiinisuoloja ovat ammonium-, primääriset, sekundääriset ja tertiääriset C^C^-alkyyli-ammonium- ja hydroksi-C2-C4-alkyyli-arnmoniumsuolat.
25 Substraatti lisätään käymisalustaan edullisesti steriilin liuoksen muodossa. Erityisen käyttökelpoinen liuotin tähän tarkoitukseen on metyylioleaatti, vaikkakin muitakin liuottimia voidaan käyttää, kuten etanolia, etyyliasetaattia ja tyydyttymättornien rasvahappojen C1-C4-este-30 reitä. Mikäli substraatti on sopivasti nestemäinen käymis-lämpötilassa, voidaan se lisätä suoraan.
Substraatin lisäysnopeuden tulee olla kyllin alhainen sen seikan välttämiseksi, että muodostuu käymistä myrkyttävä vaikutus, mutta kyllin korkea toivotun, kaavan I 35 mukaisen yhdisteen saannon suurentamiseksi. Lisäysnopeuk-
II
5 82075 siksi suositellaan noin 0,05 - noin 0,5 ml litraa kohti käymislientä tunnissa. Lisäysnopeutena noin 0, 1 - noin 1,2 ml litraa kohti käymislientä tunnissa on edullinen.
Substraattia lisätään kasvavaan, A-21978C:tä tuot-5 tavaan viljelmään käymisen tuotantovaiheen aikana noin 15. - noin 32. tunnista alkaen ja jatkaen siihen asti kunnes käyminen on päättynyt. Substraatti voidaan lisätä eri menetelmillä, mutta on edullista lisätä se sellaisella menetelmällä, jolla parhaiten saavutetaan tasainen virtaus.
10 Käymisen jälkeen voidaan muodostunut kaavan I mu kainen yhdiste ottaa haluttaessa talteen käyttämällä tällä alalla tunnettuja menetelmiä (katso esim. US-patenttia 4 331 594.
Tämän keksinnön kohteena on myös aikaisemmin mai-15 nittu uusi mikro-organismi, Streptomyces roseosporus NRRL 15998 ja sen jälkeläiset. Tämä mikro-organismi tuottaa myös A-21978C-antibiootteja.
Luonnontilasta eristetty viljelmä ("villi laji") tuottaa antibioottia vähäisen saannon. Antibiootin muodos-20 tuminen on usein oikullista. Sellaiset kannat, joilla on parantunut teho, ja sellaiset kannat, jotka tuottavat jatkuvasti antibioottia, ovat tämän vuoksi erittäin arvokkaita.
Keksinnön tämän osuuden mikro-organismista on käy-25 tetty merkintää A-21978.65. Tätä kantaa kehitettiin kantaa valikoimalla ja mutatoimalla viljelmästä, josta käytetään merkintää A-21978.6 (NRRL 11379). A-21978.6-kanta, jota tutkivat ja luonnehtivat Frederick P. Mertz ja Ralph E. Kastner (Lilly Research Laboratories), kehitettiin vuoros-30 taan alkuperäiskannasta, joka oli saatu Turkista Ararat-vuoren maaperästä. A-21978.6-kanta luokitellaan uudeksi kannaksi, jonka nimitys on Streptomyces roseosporus, Falä-co de Morias and Daliä Maia 1961. Tämä luokitus suoritettiin sen jälkeen kun oli vertailtu julkaistuja selostuksia 35 [R.E. Buchanan ja N.E. Gibbons, "Bergey's Manual of Deter- 6 82075 minative Bacteriology, "The Williams and Wilkins Company, 9. painos, 1974; ja E.B. Shirling ja D. Cottlieb, "Cooperative Description of Type Strains of Streptomyces," Intern. Journal of Systematic Bacteriol., 808-809 (1972)].
5 Luokitus perustui menetelmiin, joita on suositeltu
International Streptomyces Project-ohjelmaa varten [E.B. Shirling ja D. Cottlieb, "Methods of Characterization of Streptomyces Species, "Intern. Journal of Systematic Bec-teriol. 16, 313-340 (1966)] yhdessä määrättyjen täydennys-10 kokeiden kanssa. Hiilen hyväksikäyttö määritettiin ISP nro 9 perusalustassa, johon hiilen lähteitä lisättiin niin paljon, että lopulliseksi konsentraatioksi tuli 1,0 %. Hiilen lähteet steriloitiin suodattamalla; perusalusta steriloitiin kuumentamalla autoklaavissa. Levyt tutkittiin 15 sen jälkeen kun niitä oli inkuboitu 14 päivää 30 °C:ssa. Soluseinämien sokerit määritettiin käyttämällä Lecheva-lier'in menetelmää, (M.P. Lechevalier, "Chemical Methods as Criteria for the Separation of Actinomycetes into Genera", American Society of Microbiology-nimisen yhdistyksen 20 Actinomycetes-luokkaa käsittelevän alakomitean tukema se minaari, puheenjohtajana tri. Thomas G. Pridham, joka seminaari pidettiin Institute of Microbiology-nimisessä laitoksessa (Rutgers University, The State University of New Jersey, New Brunswick, New Jersey, 1971). Diaminopimelii-25 nihapon isomeeri määritettiin käyttämällä Becker'in ja muiden menetelmää [B. Becker, et ai., "Rapid Differentiation Between Norcardia ja Streptomyces by Paper Chromatography of Whole Cell Hydrolysates," Appi. Microbiol. 11, 421-423)]. Aminohappoanalyysi suoritettiin pesemällä solu-30 seinämien fragmentit. Melanoidi-pigmentit määritettiin käyttämällä ISP nro 1-koetta (tryptoni-hiivauuteliemi), ISP nro 6-koetta (peptoni-hiivaute rauta agar), ISP nro 7-koetta (tyrosiini agar), ISP nro 7-koetta muunnettuna (ISP nro 7 ilman tyrosiinia) ja tyrosiini-koetta [Yuzuru Mika-35 mi, et.ai., "Modified Arai ja Mikani Melanin Formation li 7 82075
Test of Streptomyces", Intern. Journal of Systematic Bac-teriol. 27(3), 290 (1977)]. Tärkkelyksen hydrolyysi suoritettiin testaamalla läsnä oleva tärkkelys jodilla.
Lämpötila-alue, NaCl:n sietokyky, pH-alue ja anti-5 biootin herkkyys tutkittiin käyttämällä ISP nro 2:n agar-alustaa. Lämpötilojen vaihtelualue oli seuraava; 25, 28, 30, 34, 37, 40, 45, 50 ja 55°C. NaClrn sietokyky mitattiin lisäämällä NaCl agariin niin paljon että väkevyyksiksi tuli; 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10 ja 12 %. Näitä inkuboi-10 tiin 30 C°:ssa. pH-alue mitattiin säätämällä agar'in pH-ar-vosta 3,0 arvoon 11,0 l,0:n suuruisin pH-arvoyksikköjen lisäyksin juuri ennen valamista. Antibioottien herkkyys määritettiin käyttämällä herkkyyskiekkoja, jotka oli levitetty siirrostetuille agar-levyille.
15 Värien nimet merkittiin ISCC-NBS-menetelmän mukaan (K.L. Kelly ja D.B. Judd, "The ISCC-NBS Methods of Designating Colors and a Dictionary of Color Names", U.S. Department of Commerce Cire. 553 Washington, D.C., 1955).
Suluissa olevat numerot tarkoittavat Tresner'in ja 20 Backus'in värisarjaa [H.D. Tresner ja E.J. Backus, "System of Color heels for Streptomycete Taxonomy", Appi. Microbiol. 11, 335-338 (1956)]. Värisuikalemerkinnät on alle-viitattu. Merz'in ja Paul’in värilaattamerkinnät on suljettu hakasulkuihin (A. Maerz ja M.R. Paul, "Dictionary of 25 Color", McGraw-Hill Book Company, Inc., New York, N.Y. 1950).
Morfologia
Viljelmän A-21978.6 morfologia koostuu sporoforeis-ta, jotka ovat Rectus-Flexibilis (RF)-luokitusta. Itiöket-30 juissa on >10 itiötä ketjua kohti. Itiön pinta on sileä.
Viljelmää A-21978.6 luonnehditaan siten, että se tuottaa pääasiallisesti punaisen väristä ilmaitiömassaa kääntöpuolen värin ollessa punaisenruskeata. Vaaleanruskeata vesiliukoista pigmenttiä on myös läsnä. Nämä tunnus-35 omaiset piirteet esiintyvät kolmella neljästätoista agar-levyviljelyalustasta (ISP nro 2, ISP nro 7, TPO). Nämä 8 82075 kolme alustaa ovat ainoat sellaiset, jotka kannattavat runsasta ilma- ja vegetatiivista kasvua.
Kaksi agar-levyviljelyalustaa, ISP nro 4 ja glukoo-si-asparagiini-agar, tuottivat väriltään valkoisen ja har-5 maan välillä olevaa ilmaitiömassaa kääntöpuolen värin ollessa keltainen. Mitään vesiliukoista pigmenttiä ei havaittu. Nämä kaksi alustaa kannattivat hyvää, joskaan ei runsasta ilma- ja vegetatiivista kasvua.
Yhdeksää muuta agar-levyviljelyalustaa käytettiin, 10 mutta nämä tuottivat heikon tai olemattoman kasvun ja itiöiden muodostuksen. Ilmamassan väri, mikäli tällaista massaa oli läsnä vaikkakin heikosti, kuului värisarjassa valkoisen ja harmaan välille.
Melanoidi-pigmentit puuttuvat. Soluseinämän pää-15 asialliset aineosat ovat: LL-DAP, glysiini, glukoosi ja riboosi. Tämä osoittaa tyyppiä I olevaa soluseinämää ja tyyppiä C olevaa sokerirakennetta. (R.E. Buchanan ja N.E. Gibbons, Eds., "Bergeys's Manual of Determinative Bacteriology", The Williams & Wilkins Company, 8. painos, 1974, 20 s. 685).
Seuraavia viittä viljelmää verrattiin laboratoriokokeissa A-21978.6:en:
Streptomyces albovinaceous ISP 5136; ATCC 15833 Streptomyces candidus ISP 5141; ATCC 19891 25 Streptomyces moderatus ISP 5529, ATCC 23443
Streptomyces roseosporus ISP 5122, ATCC 23958 Streptomyces setonii ISP 5395; ATCC 25497 Nämä viljelmät kuuluvat valkoiseen ja punaiseen vä-risarjaan, niillä on RF-tyyppiä oleva sporofori-morfolo-30 gia, sileä itiön pintakoristelu ja ISP-kuvausten mukaan ne ovat melaniini-negatiivisia eikä niissä ole tunnusmerkillistä kääntöpuolen väriä tai vesiliukoisia pigmenttejä. Nämä tunnusomaiset piirteet yhdessä hiilen hyväksikäyttö-mallin ja muiden sekundääristen piirteiden kanssa sopivat 35 yhteen viljelmän A-21978.6 ominaisuuksien kanssa.
li g 82075
Kun näitä viljelmiä verrattiin A-21978.6:n kanssa laboratorio-olosuhteissa, hylättiin niistä neljä S. candi-dus ja S. setonii tuottivat keltaista ilmaitiömassaa monilla alustoilla erottuen siten viljelmästä A-21978.6.
5 S. albivinaceuos ja S. moderatus osoittivat tummaa selvästi erottuvaa kääntöpuolen väriä, vesiliukoisia pigmenttejä sekä tuottivat melanoidi-pigmenttejä, mitkä kaikki osoittivat erilaisuutta viljelmään A-21978.6 näiden S. modera-tus-viljemän ISP-kuvaus osoittaa punaisenruskeata tai voi-10 makkaan ruskeata kääntöpuolen väriä, mutta ei osoita tällaista piirrettä S. albovinaceous-viljelmälle. Kumpaakaan viljelmää ei luokitella melaniini-positiiviseksi.
Viljelmä A-21978.6 luokiteltiin tämän vuoksi kannaksi, joka oli nimitykseltään Streptomyces roseosporus, 15 Falcäo de Morias and Dalia Maia 1961. Tämä luokitus pohjautui vertailuun julkaistujen kuvausten ja välittömien laboratoriovertailujen kanssa. Seuraavat viljelyä koskevat tyyppitiedot esittävät pääkohdittain suorat vertailututkimukset.
20 Viljelmän ominaispiirteet
Morfologia A21978.6 S.roseosporus
Sporoforit suoria tai mutkittelevia (RF), niissä ei havaittu koukkuja, silmukoita tai kierukoita. Itiöiden ket-25 juja >10. Itiön pintasileä määritettynä pyyhkäisyelektronimikroskopian avulla.
Itiöt: pitkulaisia - pitkulaisia - lieriömäisiä soikeita
Keskikoko: 0,85 x 1,78 pm 1,01 x 2,47 pm 30 Vaihtelualue: 0,65-0,97 x 0,97-2,6 pm 0,97-1,3 x 1,63-3,25 pm 10 , 82075
C I I
ai οι oi oi c 3
•A (0 A
id A C
-P Ο -A :(0
(O H C > -A
0) (0 0) (0 -A 44
AS 0) C AS 01 -A -P
UI AS (1)C Ή c f-t c 3 oi C <0 :(0 (0 a) O 0)
A 3 -A 0) 0) (0 C · E
A O H A > -A H CP
CC C AS (0 43 (0 (0 -A
:(0 CD :(0 C H (0 -A 44 (0 (0 a
-A :(0 tn :(0 -H (0 > > (0 .-I > (D
A -μ-H 4->(fi > I''-- U 0) Γ'-» AS (0
:(0 43 (0 :(0 43 tfi (Ml :(0 m m ΓΜ -P
> >1 4-> -A >1 C :(0 (01 W -H d 01
rH 4-1 (0 -A Ο -P —r (N -A
01 -A (D 4-1 ·γ4 A 4J IS IH 44 OS IH O
3 0) AS C Q) 0 4-) ~~ \l C '—’ \l a; A (D C <D 3 ο ε ai ε -a o. cp ε σι r-ι 01 -r4 Cp -r4 _
S a u Ä a S
01 (0 (0 !-l (0 <D
O 4-1 4-1 (0 -P — Ai — P 01 U) t? 01 A O) (0 -A -A (0 -H (0 3
0 O O O Cp A
AS UI | AS CAS01 AS <0 C
4-i 3 0) 3 O 3) 3 (0 3 C -H c a -H 4-> -H 01 01
n > :<0 i—I :(0 -A H 3 i—l O i—I
^ 01 MO :(0(03 4-1 01 3 (0 4-1 -H 4-1 .—I Ή (0 -A 3 01 (0 (0 4-i as x ai es (oai>oo a)3(0 oi >
01 >1 :(0 >,4-1 -A CC 0101C
01 > AS-AOO (0C3
4-1 *A >, -A O 40 3 3 H 3 A
A 01 43 0) AS I 40 40 HA
A -A (0 •a c ε a. o i 01 4-1 (0 •A Q, ϊ>
(0 4-1 > -A
C (0 A -A
-Aa 4-> 4-1 43 I
ε rH (0 — '— 3 0 3a 3 (0 44 iH :(0 >H (N A 0) :(0
C (0 3 -A C AS -A
:(0 C 4J 4JOQ1 OCOl-P
ε (0 (0 4JA01 AO) 3 44
rH AS C CC -A C01AC
01 AS 3 01(0 -A CO) •n AC AC ε 0< -P Λ(00ΐε rH O 01 0)0) CP CO rH CO 44 01 tp
•A Λ C CU C -AH 01 M iH -A -A
> -a -h acAS oiC(oa
(0 (0 0) C AS 01 C
C C (dC(0 · C 3 <0
3 Md 3 -A -A 01 MO MO ε -A a -P
a -a a oi orHoi-H Α(0·ω
C 44 C -A AS (0 A 4J (OC-H-A
3 44 3 o A (0 43 4J 433(0 O
01 C 01 AS (0 > -A C afOAS
3 01 3 3 > l\ > 0) Λ C > 3
3 ε 3 -a hi ε U 3 -A
•A A tP A H (OI < CP m 01 OI H
A -A r-- O -A H ^
mo 10 ma κι (0(0 s h a — q 4J
> 01 01 44 — \l OS un (0 (0 AS (0 (0 AS (0 (Ο-^-ΉΟΙ
(0 01 4J (0 OI 01 C 44 AS
8 3 «1 g 3 Q) 01 OI
A A -A A A 01 C -A 3
(0 O W 3 -A O A
to 43 AS 43 A (0 AS C
• 013 01 C H 3 0101(0 00 (0 -A (0(0(0 -A (0 Ifl 0)
Γ- MO 01 H :(0ϋΐέ 4J:(0H 01 01 H
σι >C > C g A3 > CC<0 H >1 3 -A >,33 ΟίΑ-Α 33(0 (N 43 A 01 43 A 44 AS 43 01 A A > < 3 3 3 3 .. I > ·· I > ·· I > ·· I > 3 -a 01 3 -A 01 3 -A 01 3 -A 01 3 > -A (0 > -A (0 > -A (0 > -A (0
> 01 44 AS 01 44 3*S 01 -P AS 01 44AS
01(0(0 (0(0 (0(0 (0(0
(0 AS 44 c AS 44 C AS 44 C AS 44 C
SS (00101 (00)01 (0(001 Ό 0101 ε cp c ε trc ε tp c ε tpc
H 01 *A H 0) -A 1—I 01 *A H 01 -A
H > > H>> H > > H >> n 82075
I I
c tn 3 I C 0) -H 3
h a; C a P
G O G -H G
G λ; ·η to rO :ra G
g G G 4-> 4-> > -P
P :G -H -P :G h in :G G in
G -H ΙΛ i—I -H a) -H 4-1 O -H
X 4-> in o 4-> X O P X O
C 4-> G X 4J x o c in x :G G G CG G 3 H O 3 3 in > o P go g -h h c p -h
3 G :G g 0 > B G > i—I Ο -H G H
p o 4-> tn g g tn o g x g o
O G P -H (0 4-1 ·Η G -P Π) GGG
a -h o a o x a -η x 4-> · g -h 4-> O -H ΟΧ λ (H G O G G g a g g op x ·η g ρ g e m χ g o p c -p o
O :G H>4->GGGP4-> H P X G 3 H X
g > g c g tn t> o (0 g G G m .Gin o in :rxj O > m -H G G X -H > X G X G -h
P O O <N -H |\ O 1^ P X) Ι'ή p 4J
föI ,—i ^ n U id Lni χ ΛΙ ni G :aJ o mi G 44 • — (0 p ^ n+J m 3 — U G -H in W G c CO s (0 -H H .—. i—I -H Gl -— O <U -M .— Ή <D qj — > i—I CL) GG |i—I i—I G IS IH HP « l<—I He — X — \l t? w \l Id G - \l G tr,
G .L -H X -H G G O <0 -H
o 03 a) p o > B > a X h :G in -h i G in tn
4-> G O <0 4-1 (0 G G O G G
G > G 4-) :G g -h 4-> G :iu in in
•n m O G C 4-) > C ·Η £·Η > G G
— G 3 0 0 G Pn G tn O <0 >i G G
4-> x x x c h x p g x h x p p
O OP
Q)—i G G
4-> p en a
p G tn P
H tn 4-> G G
-H G <1) G tn
a in i G G
in o h > •H Xl G -H G -Hl
G G G H 41 CG
G G G O X I :G -H G
•H -n tn p G G -H -H G
g G G P O > G 4-) tn G
O P O O G in -h tn 4-> o G G
G G G :G O >!> GCPP G
G G -H O :G a dl :G H 3 O Po G >
:G X G G -H O -H -H tn G P g 4-> O G :G
g -* 4-> -H 4-> ^ rö 4-1 — 4J G tn—in 4-) -H
iH H G 4-> 4-)4-) i—I G O Ή -H P 4-> O ro OGC^r h cm G o g ar^G O 4->
•ro G X 3 O O O P G -H 4J CC
H O O GagOG X gOG-H G G O Ή G G O
•h pc g e tn p <d G tnpao χ x ρ o o a g > G H O G -H C C G :G -H G aX H G G G G · tn
O I-Hina Ή ooa p i—I OOH · -H λ: -H
a x gg a o Hp aGG x e o a g g GGa
CO H G 3 G CO X G X G CO a P> · -H X CO P G -HO
H G >V44JHH G-H4-)h g G 3 H G 3 X X G
>1-^. in G >>tn g pc -h x a inin4-> 041 -H > Ι-'-.-Η X) <0 G H OGin
•H Gl < O HIO ro X a XI P -H
P — O X XJl ¢0 X H l\ G O l\0
:G S IH G — oG l 4J m in i X
> — \I H IS IH -H — CQ in H G
H ^ '-J H IS |Π -H — Xl H
" \i <0 oi ir- h
G G G —' '-J
4-) 4-> G G
g g a 4->
e G O O G G G
O O X X O G O
G G in WC G X
-H -H G G -H G G
G G P P G G G
h h G ch pininp
GGG GG GGG
4-) 4-) O :G :G O 4-> :G · G in G
X X H > > H X > g g G j§ O O G >i >i G O Ph P G Gg χ i x g x ι x g x i x g p ip g
to -H > -H > -H X -H X
• ·· ^ «· Il ^ ·· ·· ^ «I ·» ^ ··
OO G -H G G -H G G -H G G -H G
I'"' > -H > > -H > > -H > > -H > m in x ο inxt/i tnxin inxo
H GGG GGG GGG GGG
in g x xi x Λίχχ
<C>GO GO GO GO
G gtnc g tn G gtnc gtnc
G HOO HOO HOO HOO
X H>G H > G H G H > G
i2 82075 tr
I -3 I
3 a 3
Cij :rö p :<ΰ c -h m c -3 3 4-1 4-> 3 4-1 3 44 3 tO 4->
3 C C -3 3 C
3 Q) 0) O 3 0)
3 C E :3 Λί ME
C -3 tn Q) 3 C tn
0) 3 -3 (-( -3 <L) C -H
3 4-> P X r-i 3 tl) P
W ·Η rH -Η -3 C
3 (0 0)05 > :3 3 ·Η 3 >4 4-> ,¾ 4-> I 4*4 4-)34-) Ο -3 C 3 C .’3 Η 4) Μ Ρ 33-3 33 II 3 —I ·Η to A! > O G C 3 X 3 3 0 O C (0 0) -3 χ; · <D Ai Χί 3 3 C 4->3 C 3 -3 EC *3 tn 3 3 -C -3 -3 4-) > (4 -3 E -3
O EC 3 >-H O i-4 (0 (0 3 M
(4-3 (4-3 E -V 3 C X C 3
• 3o5(0305 ma:Q) X) (O
U5:3 X! C 34-) 3 C 3 Λ 1^- 4-> > ΧΙ3>3·3 ϋΐΛΙ3 X) l\ O) 33 lT) M3 U ΌΊ Ai 31 (-4 4-) ^ .3 Ai 3 in Q 3 ^ (0 M PS 1-3 3 O M 3 5 03 3 CC “ \l 3
Ai PS 13 M — > Ai :3 :3 3
4-) — \l C C :3 :3 :3 C
3 3 3-3 4-)4-· 3 3 3 -n 3 3 0) 4-) -C -C 333 '— 3 ι-H i—H 4-) >1 >i 3 3 r—t eri 3 3 e C e 3 4-> 33 33 3d) -3 -3 3 3 Λ 3 3 3 3 > O O > E G) O) 3 3>
3 > 3 3 3 CC
4-> 3 4-) C C 300 3 3 3-3 3 3 333 (0 -3 t*i O 3 3 tr -C x: tr -3-3 3 3 P 04 to -3 -3 3 3 •3 Ό 3 0 3 3 0 3 :3 3 tr C E 3 -3-3 3
•3 3 3 i—I
EC r3 3 C
0-3 3 CC -3 E QJ -3
C 3 E E C
:3 3 3 tr Ai O
Ed) -3 -3 0) 3 i~4 C 3 P a 3 3 C <3 3 3
•n 3 3 3 N E
^ CQ Ai 3 U W
-3 :3 3 :3 > 1-3 -3 -3 C 3 O 3 :3 3 3 X 3 -3 3 C · 3 3 C C 3» •3 3 X 3 -3 3 0) 4-»
3 E C Ai M C E C
3 tr -3 3 -3 3 tr 3
.-4-3 X 3 3 O > -3 E
3 0) P 3 3-3 X (OP tr M Ai 3 C 3 r-4 3 -1-1
:3 IC(0 l Ai 0) 0) 3 -G OS I^P
> 333 3 Ai >33 I 131 3 3 3 (NI-3 3 S3 (3 3 ΗΛί -3 ,3 (0 3 31 3-3 Γ03 330 i3 C (4 —* 3 0 1.3 3
333J lr- 3 G "S- X X \IO
>33 \IP3 — 3 3 •3 3 -3 -3 .3 1—I r4 *3 3 0-3 3 -3 -3 C 3 > 003 33 O C C 0 3 3 O O C 3
X 3 3 O C
vo I I X! I X 3 13 • -3 -3 e -3 X -3 (4 co ·· I> ·· ·* ^ ·· (1) ·* i> ·· ·· £> ·* t 3 C -3 3 3 C -3 3 C 3-3 3 3 -3 3 tr > :3 -3 > > :3 -3 > -3 > -3 > > -3 > r4 3 :(0 4-> 3 3 :oJ -P 3 (0 3 -P 3 3 4J3 (N <tj4-)t0(0 n) 4) n) ui 3 njranJ nl aJ (ti <C3 a: -3 4-> a; Ai x: -p a: ίο x xx a: -pa: > oJ E 0) (O >4 0) -Ρ Π3 ω mo
3 EtrC E tn C -C Etre EtrC
rö .3-3 0) tl) .3-3(1)0)0 .30)0) .3 0)0)
X MO) > C M <L> > G Ai M > C H > C
i3 82075 :g
•H
-μ :ta -Ρ
<D C I
μ α> 3^ λ e £ ·«
•H O'1 G ‘H
> -H G -P
G GO. G tn G -P
ni G G 13 1) G
tn G nJ E 3 A 0)
tn -h :G -h -P P :G P tn S
3 ta -h tOtO G *H C G O'
G +J4J 4-> -H AS -P G P -H
O rH -p -HO G-Ptn ΟιX Q) G G A G G G G
tn c A g G A 3 G tn G -h c o ta
O d) G E G G -H a) -h E to O G -P
<d c ta tr- G ta h c to cp -p g -h tn
tn -H d) ·Η -H (U -H -P -H -H -H (O -H
o o ή o. o ή to ο-ho. ajto-p o g a g a g -p a g a g -h a -h ta to -h ta o -h *a ta o 3 . g > -p g > a tac-p λα -h c/5 > tn > i\ tn >ratn οι\ ή (ni -h roi G a) -h in r-i •H Λ CQ O ΛΙ O P ΛΙ -H O pi to
G — fN^^OC -— <TJ -^CN -P
:tO S irH G 12 ΙΉ fO S G G OS ΙΉ G
> —· \| -h \l O ~ > H “ "-l G
r~\ -H ι-H G A!
_ G G G
G G -H G G -H CP 3
O 0(1) > O (DG P
A PC G
+J G -H -HO
G CP G P G AS
•rt G-H G G G -H G G G
G G tjiGG G GGG
> -h -P :G G G G +J :G -n G G
-P tn G AS > CG AS > GGG
O G -H O >i -H G G 0>i P G G
<1) A -H A AS GPP Αί X! GPP
•G CP -H t0 P G Ή Ai
•HP G
-H G >· a o -h g
G G Cp G
•H G P -G
G I G G
β| D3 -P G
•H Ή G I I tl)
g -H rH -H G G A
O G CO O -P Q) 0) G
o Q)P -p -P G G G
G O Gtl) G G -H -H P
:G A -H G · -Hl 2 ^ t° J ^
E G G > G >C E-PGE-tO
rH rH +) H p:GG G O-HGP -H
tl) O rH O G -H Oi G E-< 0) O- G A
•n tu as -p -h AGxi-p
rH GA G G A G · 2 · G
•H (1)· G O G -P E G E G
> GE 1 A 0) -H P G g E
-H p :G EGE d):G GGG (ΤΟ G -H G G St A Ή XJP-P -H
A AS -G -PP-H G-P 1^ O.
•H rH l\ -p l\ O. G G A Λ (NI
PGcnIG <N I G G G O Ή G
:G > as G I rH G l -H g G m-G -P
> — (N E G-P G P E — l°o g
s IH a- 100 G G G CP OS "G -H
— \| -H 'G-H > AS Ή ' O
O. O o. A
A 3
GGG -H
G -H G G Ή
tn rH :G G
H :G -H G
O GGG OG G G
a: ogg as o a g gg :G:GG GGG SP G G G Gd)
> > -H o Cd) C-H G GA
>1 SP rH GGA -H G -H G 3 tn
AG I AG AS I P G G I AS P |PG
VO -H -H -H G -H -H -H P
• ·· £> · φ ·· ^ ·· P ·· ^ ·· G *· r> **
oo G H G G -H G G H G G -H G
I" > H > > -H > > H > > -H > av tn-pG ιη-PG tn-PG g+jg
rH GGG GGG GGG GGG
(NG A-PA A-PA A -PA A -PA
< > G G GG GG GG
G ECPC ECPG E CC E CP G
G -H G G -H G G -H G G rH a) G
i*S H > G H > G H > G H>C
i4 82075
Hiilen hyväksikäyttö
Substraatti A21978.6 S. roseosporus L-arabinoosi + + 5 D-fruktoosi + D-galaktoosi + + D-glukoosi + + i-inositoli D-mannitoli + 10 D-raffinoosi L-ramnoosi + + salisiini + + sakkaroosi D-ksyloosi + + 15
Selitykset: + = positiivinen hyväksikäyttö -= negatiivinen hyväksikäyttö is 82075
H
tn tn >1 G >i
P HO
O 0 0
P p H LO ÖP
U) Ό H ^
O III ll+^+ll+VO
dj d m m
tn (M
o P > o • Ή
CO H
•H
tn u CD >1 o
• >i HO ckO
CO H H *1·
H O | I I O
<y\ lii ι i p + m m h
h Ό fN
<N >1
< -G
:<Ö > d)
♦H
f—i tn 3 c
•PE G
d <u
(0 Γ» G
λ H
Q) O E
4-> Q) >-l >1
d P G -O
d d — tn
(0 G M Λ H
> rö (0 co G Ό H > td h O 0)
•H H (¾ O
x: H H G
I Jd H (0 —. H H Cd H H I fi G -H to tn o > Λί G H H dc E >1 c «
X O G H p H tn >1 H (TJ
M -P O tn P H >. G H E
ο p a p o o tn -Pdo >i E-H >, Q, P P O >t 3 P p ·* o-PMtu^dPtucu-PTi tn tn -pgpo.pg>iOPp>i -mx
CdiwwwEtJjii ιη·Ηί ω>ί>ι dE H d) P 3 H Λ<
tntdHCOHH G G O G H d) O
H H d d) (d Oi -p
O. O O O O -H G Λ! M I O
H p p p P 0) H X <0 G H
OGGCC OGtn>i H H tn H pH d H <D ·Η -P
O Λ Pj Λ CU >i H-Pd)3P<tJC G 1Ä 10 to M -P -P 3 Λ H fl <0 ·· tOHHHH Π3ΛίΛ!<0Ο<ΡΗ
H H H P I E -p U
d) d) (β oO BJ :<o H dl
E td > P CU H G Z
ie 82075 tn
O
M
O
a tn + + i i i + + + o tu tn
O
G
toi <o 00 + + i i + + + + CTi rH CN <
•H
T3 -H •H G Ή tn -h -a — •H O Ή *H Ht3 (tj -H g -H X r-l 4-> 4-1
Ό ίο Ό -H >o 4* Oi -H
tn x -h ra -h e -h .h >1 0) a; >- θΉ4-»ιηα>Γοεριηα, x
> G0440<D-H0<Ö0 X
X i_4G(t54<i>i4JGG4i: >1
X X i—\ >i «H Oi -H 4-> >ι X
3- 1 rtJ I r-l O Φ 6 O ·-< ·Ό a) 601^0404(04-10^ >1 43 > C tn -H *Η 44 ^-:(0
0 0 4-> X
ΟΧ :π3 :π3 (1) Λ -rH X :0 :0 0) Ο 43 0) XX 4* •Η Ή Λί 4^ Αί -Η 4- > X ·Η ·Η >ι (1) G NtotJitJiin tn
<ζ tnGGG444*:GGG: O
>1 \ \ \ >Ί >1 \ \ \ >i G
>, m o cn o o o > φ
> *Η ro o O I—I ro ro >1 G
0) o o tn -h X rH ro -H >1
:n3 :rö X
> Λί >i
.G
dj tn
— G
44 :rtJ tn
4* G
Λ! 4-1 G tn ai (ö g >
Il II
CQ -H +1
•H G -H
G -H -H -H G -H
•H -H -H G G -H -H G
4-1 *H G Ή Ή Ή tn *H -H
4-> tn -H -H G Ή >i rH -H
0>i-Htn-HtngAitn 0g+J>1-Hr*0>1>1 •HOOg4->>i44tng 43GiHO(dgQ4(t30 •H 44 (04^4-1 >i <D G 4*3 44>iM-lCtnrHG4JC GG(U-r4>i04JQ)te <! Q)4^i—I G O4W44
II
i7 82075 A-21978.6-kannan määrätyt ominaisuudet eroavat S. roseosporus-kannan julkaistuista ominaisuuksista. Viljelmä A-21978.6 eroaa julkaistusta kannasta itiökoon, porkkana-ja peruna-tulppakasvun, NaCl:n sietokyvyn ja nitraatin 5 pelkistymisen osalta Tämän keksinnön mukaisella A-21978.65-kannalla on A-21978.6-kannan identifiointiominaisuudet, mutta se eroaa siitä tuotettujen A-21978C-antibioottien määrässä. Aikaisempi kanta ei tuottanut parhaassa tapauksessa enempää 10 kuin 100 pg A-21978C-antibiootteja ml kohti käymisalustaa. Tämän keksinnön mukainen parannettu A-21978.65-kanta tuottaa ainakin 2 1/2 kertaa tämän määrän säiliökäymisissä ja se on tuottanut niinkin paljon kuin 18 kertaa tämän määrän suoritettaessa käyminen ravistuspullossa. Tällä parantu-15 neella A-21978C:n tuotto-ominaisuudella uusi kanta tarjoaa suuresti parantuneen menetelmän näiden antibioottien saamiseksi .
Samoin kuin kysymyksen ollessa muista organismeista ovat tämän keksinnön mukaisen uuden A-21978C:tä tuottavan 20 viljelmän, Streptomyces roseosporus NRRL 15998, ominaisuudet alttiita vaihtelulle. Streptomyces roseosporus NRRL 15998:n jälkeläiset voidaan myös käyttää tässä keksinnössä.
Streptomyces roseosporus NRRL 15998-viljelmän kas-25 vatukseen käytetty viljelyalusta voi olla jokin lukuisista alustoista. Tuotannon taloudellisuuden, optimaalisen saannon ja tuotteen eristämisen helppouden vuoksi ovat eräät viljelyalustat suositeltavia. Niinpä esimerkiksi eräs edullinen hiilen lähde suuressa mittakaavassa suoritetussa 30 käymisessä on tapioka-dekstriini, vaikkakin voidaan käyttää myös glukoosia, fruktoosia, galaktoosia, maltoosia, mannoosia, puuvillansiemenöljyä, metyylioleaattia, glyserolia, puhdistettua soijapapuöljyä ja niiden kaltaisia. Eräs edullinen typen lähde on entsyymillä hydrolysoitu 35 kaseiini, vaikkakin käyttökelpoisia ovat myös liukoinen ib 82075 lihapeptoni, soijapapujauho, soijapapuhydrolysaatti, soi-japapusuurimot, hiiva, aminohapot, kuten L-asparagiini ja DL-leusiini ja niiden kaltaiset. Ravintoaineeksi soveltuvia epäorgaanisia suoloja, joita voidaan sisällyttää vil- 5 jelyalustoihin, ovat liukoiset suolat, jotka kykenevät tuottamaan kalium-, ammonium-, kloridi-, sulfaatti-, nit raatti-ioneja ja tämän kaltaisia ioneja. Näiden joukossa K2S04 on erityisen käyttökelpoinen antibiootin valmistukselle. Melassin tuhka, tuhkan dialysaatti ja synteettinen 10 mineraaliseos ovat myös käyttökelpoisia.
A-21978C-antibioottien valmistukseen on edullista käyttää tislattua tai deionisoitua vettä käymisen alustassa. Eräät vesijohtovedessä olevat mineraalit, kuten esimerkiksi kalsium ja karbonaatti näyttävät olevan haitaksi 15 antibiootin tuottamiselle.
Organismin kasvulle ja kehitykselle myös välttämättömiä oleellisia hivenalkuaineita tulee sisällyttää vilje-lyalustaan. Tällaisia hivenalkuaineita esiintyy yleensä alustan muissa aineksissa riittävässä määrässä täyttämään 20 organismin kasvuvaatimukset.
Pienien määrien (esim. 0,2 ml/litra) vaahdonesto-ainetta, kuten polypropyleeniglykolia, lisääminen suuressa mittakaavassa tapahtuvan käymisen alustoihin voi olla välttämätöntä mikäli vaahtoaminen muodostaa ongelman.
25 Huomattavien A-21978C-antibioottimäärien valmista miseksi on edullista suorittaa aerobinen, upoksissa tapahtuva käyminen säiliöissä. A-21978C-antibioottien pieniä määriä voidaan kuitenkin saada ravistuspulloviljelmän avulla. Antibioottien tuotannossa tavallisesti tapahtuvan 30 hidastuksen vuoksi, mikä yleensä liittyy organismin itiö- muodolla suoritettuun siirrostukseen suurissa säiliöissä, on edullista käyttää vegetatiivista siirrosta. Vegetatii-vinen siirros valmistetaan siirrostamalla pieni tilavuus viljelyalustaa organismin itiömuodolla tai huovastofrag-35 menteilla organismin tuoreen, aktiivisesti kasvavan vil-
II
i9 82075 jelmän saamiseksi. Vegetatiivinen siirros siirretään sen jälkeen suurempaan säiliöön.
Uutta A-21978C:tä tuottavaa organismia voidaan kasvattaa lämpötiloissa välillä noin 20 - noin 40 °C. Optimaa-5 linen A-21978C:n tuotanto näyttää tapahtuvan lämpötiloissa välillä noin 30 - 32 °C.
Kuten tavanomaisissa aerobisissa uppoviljelymene-telmissä dispergoidaan steriiliä ilmaa viljelyalustan läpi. A-21978C-antibioottien tehokasta tuotantoa varten tu-10 lee ilmakyllästyksen prosentuaalisen määrän olla säiliö-tuotantoa varten yli 20 %, edullisesti yli 30 % (30 °C:ssa ja yhden ilmakehänpaineessa).
Säiliössä suoritettavaa käymistä varten on edullista pysyttää käymisalustan pH-arvo välillä noin 6,5-7,0. 15 Tämä voidaan suorittaa lisäämällä sopivat määrät esimerkiksi natriumhydroksidia (varhaisissa vaiheissa) ja kloo-rivetyhappoa (myöhemmissä vaiheissa).
A-21978C-antibioottien valmistusta voidaan seurata käymisen aikana testaamalla liemestä tai huovaston kiin-20 teiden aineiden uutoksista otettuja näytteitä tutkimalla niiden antibioottista aktiviteettia organismeja vastaan, joiden tiedetään olevan herkkiä antibiooteille. Eräs koe-organismi, joka on käyttökelpoinen näiden antibioottien testauksessa on Micrococcus luteus. Biokoe suoritetaan 25 edullisesti paperikiekkomäärityksellä agar-maljoilla.
Vaihtoehtoisesti voidaan viljelmän kiinteitä aineita, mukaanluettuna alustan ainekset ja huovasto, käyttää uuttamatta tai erottamatta, mutta edullisesti veden poistamisen jälkeen, A-21978C-antibioottien lähteenä. Esimer-30 kiksi A-21978C-antibioottiaktiviteetin tuottamisen jälkeen voidaan viljelyalustan kuivata lyofilisoimalla ja sekoittaa suoraan syötettävään esiseokseen.
Kaavan I mukaiset yhdisteet ovat oivallisia anti-bakteriaalisia aineita.
35 Tämän keksinnön käytäntöön saattamisen valaisemi seksi täydellisemmin esitetään seuraavat esimerkit.
20 8 2 0 7 5
Esimerkki 1 A-21978C-kompleksin tuottaminen
Kantaviljelmä valmistetaan ja pidetään nestemäisen typen höyryfaasissa. Edeltäpäin nestemäisen typen höyry-5 faasissa varastoitua Streptomyces roseosporus NRRL 15998 käytettiin koostumukseltaan seuraavanlaisen 50 ml:n suuruisen kasvualustan siirrostamiseen:
Aineosa Määrä (%)
Trypticase Soy Broth* 3,0 10 dekstriiniä 2,5 vettä (deionisoitua ) 94,5 ♦Baltimore Biological Laboratories, Cockeysville MD.
Siirrostettua alustaa inkuboitiin 250 ml:n vetoi-15 sessa Erlenmeyer-pullossa 30 °C:ssa 48 tuntia ravistuslait-teessa, joka pyöri 5,08 cm:n kaarta pitkin nopeudella 250 kierrosta minuutissa. Valmis kasvuviljelmä siirrettiin useaaan säiliöön (0,5 ml/säiliö) ja varastoitiin nestemäisen typen höyryfaasissa.
20 Varastoidun materiaalin suuremman yhdenmukaisen erän saamiseksi käytettiin 1 ml nestemäisessä typessä varastoitua viljelmää 80 ml:n suuruisen erän edellä kuvattua kasvualustaa siirrostamiseen. Siirrostettua kasvualustaa inkuboitiin 250 ml:n Erlenmeyer-pullossa 30 °C:ssa 48 tun-25 tia ravistuslaitteessa, joka pyöri halkaisijaltaan 5,08 cm:n kaarta pitkin nopeudella 250 kierrosta minuutissa.
10 ml tällaista viljelmää käytettiin 450 ml:n suuruisen toisen vaiheen vegetatiivisen kasvualustan siirrostamiseen, jolla alustalla oli sama koostumus kuin edellä 30 kuvatulla primäärisellä vegetatiivisella alustalla. Toisen vaiheen alusta inkuboitiin 2 litran Erlenmeyer-pullossa 24 tuntia 30 °C:ssa ravistuslaitteessa, joka pyöri halkaisijaltaan 5,08 cm:n kaarta pitkin nopeudella 250 kierrosta minuutissa.
35 1 litra toisen vaiheen vegetatiivista viljelmää käytettiin koostumukseltaan seuraavanlaisen 39 litran suu-
II
2i 82075 ruisen steriilin tertiäärisen siirroksen kehitysalustan siirrostamiseen:
Aineosa Määrä (%) soijapapujauhoa 0,5 5 hiivauutetta* 0,5 kalsiumglukonaattia 1,0 KClb 0,02
MgS04 · 7H2Ob 0,02
FeS04 · 7H2Ob 0,0004 10 Sag 471 (vaahdonestoaine)c 0,03 vettä 97,9296
aDifco Laboratories, Detroit MI
bHivenmineraalit valmistettiin seuraavalla tavalla: 15 FeS04*7H20 (7,8 g) liuotettiin väkevään HCl:ään (76 ml).
MgS04*7H20 (380 g), KC1 (380 g) ja deionisoitua vettä lisättiin niin paljon, että kokonaistilavuudeksi tuli 3800 ml. Spesifioitujen mineraalien saamiseksi käytetään 80 ml liuosta 39 litraa kohti tertiääristä siirroksenkehitysvai-20 hetta.
cUnion Carbide, Danbuty CT.
Siirrostettua alustaa inkuboitiin 24 tuntia ruostumattomassa teräsastiassa 30 °C:ssa. Astiaa ilmastettiin steriilillä ilmalla määrän ollessa 0,85 til./til./min ja 25 hämmennettiin tavanomaisilla hämmennyslaitteilla nopeudella 350-450 kierrosta minuutissa. Astiassa vallitseva paine pysytettiin arvossa 0,35 kg/cm2 ylipainetta (5 PSIG).
1 litra inkuboitua tertiääristä siirrosvaihetta käytettiin 119 litran suuruisen, koostumukseltaan seuraa-30 vanlaisen steriilin tuotantoalustan siirrostamiseen: Aineosa Määrä (%) soijapapujauhoa 2,2
Fe(NH4 )2S04 · 6H20 0,066 dekstroosia 0,825 35 Sag 471 0,022 perunadekstriiniä 3,3 melassia (sokeriruokomelassia) 0,275 vesijohtovettä 93,312 22 82075 pH säädettiin arvoon 7,0 ensimmäisten kahden aineosan lisäämisen jälkeen ja uudelleen sen jälkeen kun kaikki aineosat oli lisätty ja välittömästi ennen sterilointia.
Siirrostettua tuotantoväliainetta inkuboitiin 6 5 päivää ruostumattomassa teräsastiassa 30 °C:ssa ja ilmastettiin steriilillä ilmalla nopeudella 0,5 til./til./min. Alustaa hämmennettiin tavanomaisilla hämmennyslaitteilla nopeudella 250 kierrosta minuutissa ensimmäiset 15 tuntia ja nopeudella 350 kierrosta minuutissa näiden 15 tunnin 10 jälkeen. pH pysytettiin arvossa 6,5 tai sen yläpuolella lisäämällä ammoniumhydroksidiliuosta. A-21978C-kompleksin saanto oli 0,282 g litraa kohti lientä käymisen päätyttyä. Tekijöiden jakautuminen on esitetty taulukossa 1.
Esimerkki 2 15 A-21978CH:n kohotettu tuotanto
Primäärinen, sekundäärinen ja tertiäärinen kasvatusvaihe suoritettiin esimerkissä 1 kuvatulla tavalla. Tuotantovaihe aloitettiin esimerkissä 1 kuvatulla tavalla lukuunottamatta sitä, että 28 tunnilta alkaen syötettiin 20 käymisastiaan steriiliä liuosta, joka sisälsi 50 % til./-til. kapryylihappoa (oktaanihappoa) ja metyylioleaattia, nopeudella 0,13 ml litraa kohti käymislientä tunnissa ja tämä nopeus pidettiin käymisen lopettamiseen asti 144 tuntina. A-21978C-kompleksin saanto oli 1,255 g litraa kohti 25 lientä, mikä merkitsee 445 %:n suurenemista saannossa verrattuna esimerkin 1 saantoon. Tekijää A-21978Ce (kaavan I yhdistettä, jossa R = oktanoyyli) edusti 9 % tällä menetelmällä valmistetusta kaikesta A-21978C-kompleksista; yhtään A-21978Ca ei todettu esimerkin 1 mukaisella menetel-30 mällä valmistetussa A-21978C-kompleksissa.
Esimerkki 3 A-21978Co:n kohotettu tuotanto
Primäärinen, sekundäärinen ja tertiäärinen siirroksen kehitysvaihe suoritettiin samalla tavalla kuin esimer-35 kissä 1 on esitetty. Tuotantovaihe aloitettiin esimerkissä 1 kuvatulla tavalla lukuunottamatta sitä, että 28 tunnilta
II
23 82075 alkaen lisättiin käymisastiaan steriiliä liuosta, joka sisälsi 25 % til./til. nonaanihappoa ja 75 % metyyli-oleaattia, nopeudella 0,13 ml litraa kohti käymislientä tunnissa ja tämä lisäysnopeus pidettiin käymisen päättämi-5 seen asti 144 tuntina. A-21978C-kompleksin saanto oli 0,821 g litraa kohti lientä, mikä merkitsee 293 %:n suurenemista esimerkissä 1 saatuun nähden. Tekijää A-21978C9 (kaava I: R = nonanyyli) edusti 10 % tällä menetelmällä valmistetusta kaikesta A-21978C-kompleksista; yhtään 10 A-21978C9 ei todettu esimerkin 1 menetelmän avulla valmis tetusta A-21978C-kompleksissa.
Esimerkki 4 A-21978Cin-tekijän kohotettu tuotanto (kaava I: R = n-dekanoyyli 15 Primäärisen ja sekundäärisen vaiheen vegetatiiviset kasvuvaiheet viljeltiin esimerkissä 1 kuvatulla tavalla. Tertiäärisessä vaiheessa käytettiin 800 ml sekundääristä siirrosviljelmää 950 litran suuruisen steriilin tertiääri-sen siirroksen, kokoomukseltaan seuraavanlaisen kehitys-20 alustan siirrostamiseen:
Aineosa Määrä (%) dekstroosia 2,0 kalsiumkarbonaattia 0,2 soijapapujauhoa 2,0 25 hiivauutetta 0,1 KC1“ 0,02
MgS04 · 7H2Oa 0,02
FeS04-7H20a 0,0004
Sag 471 (vaahtoamisen estoaine) 0,02 30 vettä 95,6396 “Hivenmineraaliliuos valmistettiin esimerkissä 1 kuvatulla tavalla.
Siirrostettua alustaa inkuboitiin 24 tuntia ruostu-35 mattomassa teräsastiassa 30 °C:ssa. Astiaa ilmastettiin steriilillä ilmalla nopeudella 0,8 til./til./min ja häm- 24 82075 mennettiin tavanomaisten hämmennyslaitteiden avulla. Yksi litra tätä tertiäärisen vaiheen siirrosta käytettiin 119 litran suuruisen, koostumukseltaan esimerkissä 1 kuvatun tuotantovaiheen alustan siirrostamiseen. Tuotantovaihe 5 aloitettiin myös samalla tavalla kuin esimerkissä 1 lukuunottamatta sitä, että 28 tunnilta alkaen syötettiin käymisalustaan steriiliä liuosta, joka sisälsi 50 % til./ til. kapriinihappoa (dekaanihappoa) ja 50 % metyylioleaat-tia, nopeudella 0,26 ml litraa kohti käymislientä tunnissa 10 ja tätä lisäysnopeutta ylläpidettiin käymisen päättymiseen asti 223 tuntina. A-21978C-kompleksin saanto oli 1,94 g litraa kohti lientä, mikä merkitsee 687 %:n suurenemista esimerkissä 1 saavutettuun verrattuna. A-21978C10-tekijän konsentraatio (kaava I: R = n-dekanoyyli) oli 1,63 g lit-15 raa kohti eli 84 % kaikesta A-21978C-kompleksista. Tämä oli 13583 % suurempi kuin esimerkin 1 menetelmää käyttäen tuotettu A-21978C10:n määrä.
Esimerkki 5 A-21978Cin:n kohotetun tuotannon vaihtoehtoinen me- 20 netelmä
Primäärinen, sekundäärinen ja tertiäärinen siirroksen kehitysvaihe suoritettiin esimerkissä 1 kuvatulla tavalla. Tuotantovaihe aloitettiin esimerkissä 1 kuvatulla tavalla lukuunottamatta sitä, että 28 tunnista alkaen li-25 sättiin käymistilaan steriiliä liuosta, joka sisälsi 25 % til./til. kapriinihapon etyyliesteriä (etyylikaptaattia) ja 75 % metyylioleaattia, nopeudella 0,13 ml litraa kohti käymislientä tunnissa ja tämä lisäysnopeus pysytettiin käymisen päättymiseen asti 144 tuntina. A-21978C-komplek-30 sin saanto oli 1,022 g litraa kohti, mikä merkitsee 362 %:n suurenemista esimerkissä 1 saatuun verrattuna. Tekijän A-21978C10 väkevyys oli 0,202 g litraa kohti eli 20 % kaikesta A-21978C-kompleksista. Tämä oli 1683 % suurempi kuin esimerkin 1 menetelmää käyttäen saavutettu A-21978C10:n 35 konsentraatio.
Il 25 82075
Esimerkki 6 A-21978C,n:n kohotetun tuotannon vaihtoehtoinen menetelmä
Primäärisen ja sekundäärisen vaiheen vegetatiivisen 5 kasvun vaiheet viljeltiin esimerkissä 1 kuvatulla tavalla. Tertiäärisen vaiheen siirrosta viljeltiin esimerkissä 4 kuvatulla tavalla lukuunottamatta sitä, että alustan tilavuus oli 1900 litraa ja vaiheen kesto oli pidennetty 48 tuntiin. Ilmastusnopeus oli 0,3 til./til./min tunteina 10 0,24, 0,45 til./til./min tunteina 24-40 ja 0,90 til./til./ min tunteina 40-48. Tuotantovaihe aloitettiin esimerkissä 1 kuvatulla tavalla. 23 tuntina lisättiin 0,004 % hiiva-uutetta steriilinä lietteenä yhtenä eränä käymisastiaan. 36 tunnista alkaen lisättiin glyserolin ja ammoniumdekano-15 aatin liuosta nopeudella 0,84 ml litraa kohti käymislientä tunnissa. Syötetty liuos sisälsi glyserolia (3600 g), de-ionisoitua vettä (9000 ml), kapriinihappoa (1 litra) ja väkevää ammoniumhydroksidiliuosta (620 ml). Syöttö pysytettiin tässä nopeudessa siksi kunnes käyminen lopetettiin 20 43 tuntina. A-21978C-kompleksin saanto oli 1,772 g litraa kohti, mikä merkitsee 628 %:n suurenemista esimerkissä 1 saavutettuun verrattuna. Tekijän A-21978C10 konsentraatio määritettiin 0,739 g:ksi litraa kohti eli 42 %:ksi kaikesta A-21978C-kompleksista. Tämä oli 6158 % suurempi kuin 25 esimerkin 1 menetelmällä tuotetun A-21978C10:n konsentraatio.
Esimerkki 7 A-2l978C11:n kohotettu tuotanto
Primäärinen, sekundäärinen ja tertiäärinen siirros-30 vaihe suoritettiin esimerkissä 1 kuvatulla tavalla. Tuotantovaihe aloitettiin esimerkissä 1 kuvatulla tavalla lukuunottamatta sitä, että 28 tunnista alkaen lisättiin käymisastiaan steriiliä liuosta, joka sisälsi 25 % til./ til. undekaanihappoa ja 75 % metyylioleaattia, nopeudella 35 0,13 ml litraa kohti käymislientä tunnissa siksi kunnes 26 82075 käyminen lopetettiin 144 tuntina. A-21978C-kompleksin saanto oli 1,62 g litraa kohti, mikä merkitsee 574 %:n suurenemista verrattuna esimerkissä 1 saatuun. Tekijän A-21978Cn (kaava I: R = undekanoyyli) konsentraatio määri-5 tettiin 0,70 g:ksi litraa kohti eli 43 %:ksi kaikesta A-21978C-kompleksista. Tekijää A-21978C11 ei voitu todeta esimerkin 1 menetelmällä valmistetussa A-21978C-komplek-sissa.
Esimerkki 8 10 A-21978Cti:n kohotettu tuotanto
Primäärinen, sekundäärinen ja tertiäärinen siirros-vaihe suoritettiin esimerkissä 1 kuvatulla tavalla. Tuotantovaihe aloitettiin esimerkissä 1 kuvatulla tavalla lukuunottamatta sitä, että 28 tunnista alkaen lisättiin 15 käymisastiaan steriiliä liuosta, joka sisälsi 25 % til./ til. lauriinihappoa ja 75 % metyylioleaattia, nopeudella 0,13 ml litraa kohti käymislientä tunnissa siksi kunnes käyminen lopetettiin 144 tuntina. A-21978C-kompleksin saanto oli 1,12 g litraa kohti, mikä merkitsee 400 %:n 20 suurenemista esimerkissä 1 saavutettuun verrattuna. Tekijän A-21978C5 (kaava I: R = dodekanoyyli) konsentraatio määritettiin 0,372 g:ksi litraa kohti eli 33 %:ksi kaikesta A-21978C-kompleksista. Tämä oli 5314 % suurempi kuin esimerkin 1 menetelmällä valmistetussa A-21978C-komplek-25 sissa todettu A-21978C5:n konsentraatio.
Il :3 27 82075 6 il >ι --1 Ρ I -—I ·Η ω u -π c -Ρ >i O -H C Π3 >-i ο p O h-i 3 -p 3 r-H <0
C 3 (0 o I
(0 in > I—I r—I
4_) - I I I I I I O I -H U rH
o -IIIIIIOIC+J u 3 o ή 4-1 * -p _ -H Q) σι <0 Λ . ,, _ _ 4-J I—I Ο -n c J· υ n v v -ho
φ 3dlNOOOCN<riaOmO-H * I
•r-ι '~‘H-Hr'CnmororHf^-H> ooo
.p rH Ul Ή CO IN Γ'· rH rH > (0 U<H
+> ε γη h ^ u
C J; 3 -P
m CTdllnillll rH :ro
c — UI I I 00 I I I l I :3 3 -PI
o r in -H cn
a -2., in C :0 U
P 4J J I f-l I I I ( I I d) -H -( 1 0 ti H I rH I I I I I I e -H -H -
λ: S ul H <u -p I
1 Si -p a> oo
6 Q . rH QJ -P U
00 & I t^iriCNi^rHooncM -ο i [-«. s “ι ι^σΓ'ίησι^Γ'ΐΰο u -h σ 8 01 ή rH cm cn cn tn -p oo -p cn y . 3 σι 3 1 CO I CN^LDCOv-DCOCOrH -Ρ*Γ. rH>
f£ r^d t^rHCH-J'LncNLOrt' <u CN 3 -H
συ| INrH rH<Mr-(>—i -P?, | 3 rH
in Γί ιβ 2 < -P >1 p ™ , -a 5 w >1
7j I niNC^OiOrH^O^OoO :3 3 O
p <drHrHrs'in3't>-om 3&1 -p > C
_ y UI -h n rH in cn cn cn <n κ *> rd 3 " Λ 8 S Ir^coc^-Lncoinn^-H-H c Pi ts 72 -jr^r-nccniocnoo-pp -p i
3 £ ^1 CNrHrHrHfOrHCN^d) -P 3 C
. (U 3 in in
3 -H P ·* (LI tn -H
3 -P -P 3 ·Η -P
p_( 4-1 G -—i 3 0 in 3 G-) —13 *i I G) 3 3 3 3«
.--- 3-1 C > O *· -H
4J -r-l O 3 C 13 rH
3 P >; C -P -H
n (1) C 0 -P O
3 4-1 3 3 3 <L> CD
3 3 a) -H rH 4J rH
-H Q) -p l*H 3 O
-0 -P 4-1 3 II -H
-p -p rH -P -P P Ό C
a. -H >, -p ccni3x:3 -P irt >i +> Q)Oa>i> rH 3} -P 3 G -P 3
ΰ <1)3 0 3· 3 3 O rH
-p +3 O O 04 E 3 -r-ι -P U O
p a oogcooeo-h w -a 0.00.0 3 0 0 0 PH ro-p:3 3
S 0.0.0404 Λ! 3 Ο 3 O 3 -r-ι -P
-p 3033 CD -C 3 IQ)> Λί·Ρ4->
Ό C ,G 3 .G £ Ό ·Ρ .G -P-P3 * 3 AC <D
•P :3 -Η Λ ·Ρ ·Ρ § G -Ρ -Ρ 3 cn Ε Ο Ό
0· :3 rH -ρ G G 3 3 G -Ρ <D G U -PO
3 -Ρ >h C -Ρ -Ρ -P 3 -P O G Ο Η -P
43 >1 3 -Ρ -P G A! -Ρ 0 -P G
>1 p 3 ρ p oop -p c -p rpcoc
0300. £ TJ 3 X)0)OU3CO
•P 3033 E C 3 -P3P > G
Q) .¾ C A! -X 3 3 H 4J-P0 * 3 O G
e C03033·· •P < X! .O CJ A! rH «
i! h rg n <f m icr^oo3 3 ,0 OO
W
ζβ 82075
Esimerkki 9 A-21978C-kompleksin vaitoehtoinen tuotanto A-21978C-kompleksia tuotetaan käyttämällä esimerkin 1 menetelmää mutta käytetään Streptomyces roseosporus NRRL 5 11379-viljelmää.
Esimerkki 10
Vaihtoehtoinen menetelmä A-2l978C10:n tuotannon kohottamiseksi
A-21978C10:tä tuotetaan käyttämällä esimerkin 6 me-10 netelmää, mutta käytetään Streptomyces roseosporus NRRL
11379-viljelmää.
Esimerkki 11 A-21978C-kompleksin tuottaminen ravistuspullossa Käytetään esimerkissä 1 esitettyä yleistä menetel-15 mää, mutta ravistuspullo-olosuhteita sekä seuraavaa käy- misalustaa:
Aineosa Määrä (g/litra) glukoosia 7,5 dekstriiniä® 30 20 entsyymillä hydrolysoitua kaseiiniab 5 peptoniac 5 melassia 2,5 deionisoitua vettä q.s. yhteen litraan asti “Statex 11, A.E. Staley Co., Decatur IL 25 bNZ Amine A, Humko Sheffield Chemical, Lyndhurst NJ cBiosa-te, Baltimore Biological Laboratories, Cockeysville MD A-21978C-kompleksin saanto tästä käymisetä oli 1800 pg ml kohti lientä.
Il
Claims (6)
1. Menetelmä A-21978C-johdannaisen valmistamiseksi, jolla on kaava (I): 5 | P /\/CHä /v\ < i „ I I „ V °=\ *//Νγ/ΧΧ5/Ϊ H /C0NHz /*“7* H ® H 9 1 \ 9 /NH-R “K ·A·^ ! f Y / " > > L Y-; ~ “AaaA'^" - ϊ i M HOzC jossa R on Ce-C12-alkanoyyliryhmä, tunnettu siitä, 25 että syötetään vastaavaa C8-C12-alkaanihappoa, sen esteriä tai suolaa viljelmään, joka käsittää kannan Streptomyces roseosporus NRRL 11379 tai NRRL 15998, lämpötilan ollessa noin 25-40 °C.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 30 tunnettu siitä, että käytetään C8-C12-alkaanihap-poa.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään C10-alkaanihapon etyyliesteriä.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 30 82075 tunnettu siitä, että käytetään C10-alkaanihapon ammoniumsuolaa.
5. Jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään kapriinihap- 5 poa, sen etyyliesteriä tai sen ammoniumsuolaa.
6. Streptomyces roseosporus NRRL 15998 ja sen jälkeläiset. Il 31 82075
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI900314A FI86082C (fi) | 1984-10-09 | 1990-01-19 | Foerfarande foer framstaellning av antibiotikakomplex a-21978c genom odling av streptomyces roseosporus nrrl 15998. |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US65897984A | 1984-10-09 | 1984-10-09 | |
| US65897984 | 1984-10-09 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI853910A0 FI853910A0 (fi) | 1985-10-08 |
| FI853910L FI853910L (fi) | 1986-04-10 |
| FI82075B FI82075B (fi) | 1990-09-28 |
| FI82075C true FI82075C (fi) | 1991-01-10 |
Family
ID=24643546
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI853910A FI82075C (fi) | 1984-10-09 | 1985-10-08 | Foerfarande foer framstaellning av a-21978c-derivat och vid foerfarandet anvaend streptomyces roseosporus. |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0178152B1 (fi) |
| JP (1) | JPH0787796B2 (fi) |
| KR (1) | KR890000800B1 (fi) |
| CN (2) | CN1013120B (fi) |
| AT (1) | ATE67788T1 (fi) |
| AU (2) | AU4837785A (fi) |
| BG (1) | BG47040A3 (fi) |
| CS (2) | CS276983B6 (fi) |
| CY (1) | CY1633A (fi) |
| DD (2) | DD238068A5 (fi) |
| DE (1) | DE3584218D1 (fi) |
| DK (2) | DK165416C (fi) |
| EG (1) | EG17619A (fi) |
| ES (2) | ES8700862A1 (fi) |
| FI (1) | FI82075C (fi) |
| GR (1) | GR852432B (fi) |
| HK (1) | HK24292A (fi) |
| HU (1) | HU196845B (fi) |
| IE (1) | IE58655B1 (fi) |
| IL (1) | IL76608A (fi) |
| NZ (1) | NZ213731A (fi) |
| PH (1) | PH21217A (fi) |
| PL (1) | PL152359B1 (fi) |
| PT (1) | PT81265B (fi) |
| SG (1) | SG3292G (fi) |
| SU (1) | SU1452484A3 (fi) |
| ZA (1) | ZA857759B (fi) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0294990A3 (en) * | 1987-06-10 | 1990-05-09 | Eli Lilly And Company | Chromatographic purification process |
| US4930494A (en) * | 1988-03-09 | 1990-06-05 | Olympus Optical Co., Ltd. | Apparatus for bending an insertion section of an endoscope using a shape memory alloy |
| US4977083A (en) * | 1988-04-11 | 1990-12-11 | Eli Lilly And Company | Processes for preparing A54145 compounds |
| DE3832362A1 (de) * | 1988-09-23 | 1990-03-29 | Sandoz Ag | Neue cyclopeptolide, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| US6911525B2 (en) | 1999-12-15 | 2005-06-28 | Cubist Pharmaceuticals, Inc. | Lipopeptides as antibacterial agents |
| MXPA02006030A (es) * | 1999-12-15 | 2004-08-23 | Cubist Pharm Inc | Lipopeptidos como agentes antibacterianos. |
| US6696412B1 (en) * | 2000-01-20 | 2004-02-24 | Cubist Pharmaceuticals, Inc. | High purity lipopeptides, Lipopeptide micelles and processes for preparing same |
| US20060014674A1 (en) | 2000-12-18 | 2006-01-19 | Dennis Keith | Methods for preparing purified lipopeptides |
| NZ594019A (en) | 2008-12-22 | 2013-08-30 | Cubist Pharm Inc | Novel antibacterial agents for the treatment of gram positive infections |
| CA2781666C (en) | 2009-11-23 | 2017-02-21 | Cubist Pharmaceuticals, Inc. | Lipopeptide compositions and related methods |
| WO2012177986A2 (en) | 2011-06-22 | 2012-12-27 | Vyome Biosciences | Conjugate-based antifungal and antibacterial prodrugs |
| IT201600127655A1 (it) | 2016-12-16 | 2018-06-16 | Gnosis Spa | Processo per la purificazione di antibiotici lipopolipeptidici |
| CN107964557B (zh) * | 2018-01-17 | 2020-11-20 | 自然资源部第三海洋研究所 | 一种提高芽孢杆菌抗菌脂肽产量的发酵方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4208403A (en) * | 1978-10-16 | 1980-06-17 | Eli Lilly And Company | A-21978 Antibiotics and process for their production |
| IL68700A0 (en) * | 1982-05-21 | 1983-09-30 | Lilly Co Eli | Improvements relating to a-21978c cyclic peptide derivatives and their production |
-
1985
- 1985-10-08 KR KR1019850007397A patent/KR890000800B1/ko not_active Expired
- 1985-10-08 DD DD85281515A patent/DD238068A5/de not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 ES ES547689A patent/ES8700862A1/es not_active Expired
- 1985-10-08 JP JP60225925A patent/JPH0787796B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-10-08 PT PT81265A patent/PT81265B/pt unknown
- 1985-10-08 GR GR852432A patent/GR852432B/el unknown
- 1985-10-08 EG EG634/85A patent/EG17619A/xx active
- 1985-10-08 PH PH32894A patent/PH21217A/en unknown
- 1985-10-08 HU HU853912A patent/HU196845B/hu unknown
- 1985-10-08 DK DK457585A patent/DK165416C/da not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 IE IE246685A patent/IE58655B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 CS CS868192A patent/CS276983B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 FI FI853910A patent/FI82075C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 EP EP85307185A patent/EP0178152B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-10-08 NZ NZ213731A patent/NZ213731A/en unknown
- 1985-10-08 BG BG071957A patent/BG47040A3/xx unknown
- 1985-10-08 DE DE8585307185T patent/DE3584218D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-10-08 CN CN85107552A patent/CN1013120B/zh not_active Expired
- 1985-10-08 PL PL1985255683A patent/PL152359B1/pl unknown
- 1985-10-08 AU AU48377/85A patent/AU4837785A/en not_active Abandoned
- 1985-10-08 SU SU853964395A patent/SU1452484A3/ru active
- 1985-10-08 IL IL76608A patent/IL76608A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 AT AT85307185T patent/ATE67788T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 CN CN90109304A patent/CN1051200A/zh active Pending
- 1985-10-08 ZA ZA857759A patent/ZA857759B/xx unknown
- 1985-10-08 CS CS857198A patent/CS276978B6/cs not_active IP Right Cessation
-
1986
- 1986-03-25 DD DD86288284A patent/DD247023A5/de unknown
- 1986-04-01 ES ES553603A patent/ES8800362A1/es not_active Expired
-
1990
- 1990-04-20 AU AU53752/90A patent/AU634766B2/en not_active Expired
-
1991
- 1991-08-21 DK DK148791A patent/DK165757C/da not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-01-11 SG SG32/92A patent/SG3292G/en unknown
- 1992-04-02 HK HK242/92A patent/HK24292A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-11-06 CY CY1633A patent/CY1633A/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI82075C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av a-21978c-derivat och vid foerfarandet anvaend streptomyces roseosporus. | |
| JPWO1997032975A1 (ja) | 環状リポペプチド物質の脱アシル化法 | |
| US4800157A (en) | Process for producing the A-21978C antibiotics | |
| JPH0691816B2 (ja) | Ｆｋ−５０６の新規な製造方法 | |
| CA1337758C (en) | Peptide antibiotics | |
| FI86082B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av antibiotikakomplex a-21978c genom odling av streptomyces roseosporus nrrl 15998. | |
| HUT60526A (en) | Fermenting process for producing staurosporin | |
| US4628046A (en) | Antibiotic LL-C23201δ | |
| US4600691A (en) | R-(Z)-4-amino-3-chloro-2-pentenedioic acid, novel antibacterial agent | |
| US4670466A (en) | R-(Z)-4-amino-3-chloro-2-pentenedioic acid, novel antibacterial agent | |
| US3780016A (en) | Dipeptide antibiotic and method for the production thereof | |
| US5021549A (en) | Physiologically active substances, probestin and prostatin and production thereof | |
| CA1274795A (en) | Process for producing the a-21978c antibiotics | |
| GB2068372A (en) | Process for preparing narasin | |
| CA1263621A (en) | Fr-900848 substance and preparation thereof | |
| HU189578B (en) | Process for preparing narasin | |
| PL152518B1 (pl) | Sposób wytwarzania kompleksu antybiotycznego A-21978C i jego czynników | |
| KR890002698B1 (ko) | 헤테로 폴리사카라이드 s-184 및 이의 제조방법 | |
| US4534970A (en) | Antibacterial antibiotics LL-CO8078α1, α2, α3 and β | |
| EP0137498A2 (en) | R-(Z)-4-amino-3-chloro-2-pentenedioic acid, novel antibacterial agent | |
| FI90566B (fi) | Mikrobiologinen menetelmä 4'-13(S)-dihydro-4'-jodidoksorubisiinin valmistamiseksi | |
| FI79545B (fi) | Nya cykliska a-21978c-kaernpeptider och foerfarande foer deras framstaellning. | |
| GB2131793A (en) | A daunorubicin derivative | |
| JPH0637519B2 (ja) | 新規抗生物質グロボペプチンおよびその製造法 | |
| JPH0631234B2 (ja) | 新規生理活性物質ナグスタチン及びその製造法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG | Patent granted |
Owner name: ELI LILLY AND COMPANY |
|
| MA | Patent expired |