[go: up one dir, main page]

FI119812B - Menetelmä uusien, terapeuttisesti käyttökelpoisten peptidijohdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Menetelmä uusien, terapeuttisesti käyttökelpoisten peptidijohdannaisten valmistamiseksi Download PDF

Info

Publication number
FI119812B
FI119812B FI955828A FI955828A FI119812B FI 119812 B FI119812 B FI 119812B FI 955828 A FI955828 A FI 955828A FI 955828 A FI955828 A FI 955828A FI 119812 B FI119812 B FI 119812B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
pab
cha
pro
aze
hooc
Prior art date
Application number
FI955828A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI955828A0 (fi
FI955828A7 (fi
Inventor
Ruth Elvy Bylund
Karl Thomas Antonsson
Nils David Gustafsson
Nils Olov Ingemar Nilsson
Original Assignee
Astrazeneca Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Astrazeneca Ab filed Critical Astrazeneca Ab
Publication of FI955828A0 publication Critical patent/FI955828A0/fi
Publication of FI955828A7 publication Critical patent/FI955828A7/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI119812B publication Critical patent/FI119812B/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/06—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D239/08—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms directly attached in position 2
    • C07D239/12—Nitrogen atoms not forming part of a nitro radical
    • C07D239/14—Nitrogen atoms not forming part of a nitro radical with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, attached to said nitrogen atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/62—Compounds containing any of the groups, X being a hetero atom, Y being any atom, e.g. N-acylcarbamates
    • C07C271/64—Y being a hydrogen or a carbon atom, e.g. benzoylcarbamates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D205/00—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D205/02—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D205/04—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon radicals, substituted by hetero atoms, attached to ring carbon atoms
    • C07D207/09—Radicals substituted by nitrogen atoms, not forming part of a nitro radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/06—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D211/08—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/18—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D211/26—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms with hydrocarbon radicals, substituted by nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/022—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -X-C(=O)-(C)n-N-C-C(=O)-Y-; X and Y being heteroatoms; n being 1 or 2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/022—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -X-C(=O)-(C)n-N-C-C(=O)-Y-; X and Y being heteroatoms; n being 1 or 2
    • C07K5/0222—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -X-C(=O)-(C)n-N-C-C(=O)-Y-; X and Y being heteroatoms; n being 1 or 2 with the first amino acid being heterocyclic, e.g. Pro, Trp
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • C07K5/06165—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic and Pro-amino acid; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

119812
Menetelmä uusien, terapeuttisesti käyttökelpoisten peptidi-johdannaisten valmistamiseksi - Förfarande för framställning av nya, terapeutiskt användbara peptidderivat 5
Keksintö koskee menetelmää uusien, terapeuttisesti käyttökelpoisten yhdisteiden valmistamiseksi, jotka yhdisteet ovat trypsiinimäisten seriiniproteaasien, erityisesti trombiinin ja kininogenaasien kuten kallikreiinin kompetitiivisia estä-10 jiä. Näitä yhdisteitä voidaan käyttää trombiinin estäjinä ja hyytymisenestäjinä ja anti-inflammatorisina estäjinä, vastaavasti .
Tausta 15 Veren hyytyminen on avainprosessi, joka liittyy sekä hemos-taasiin (ts. veren menetyksen estäminen vaurioituneesta verisuonesta) ja tromboosiin (ts. verihyytymän aiheuttama verisuonen patologinen tukkeutuminen). Hyytyminen on tulosta entsyymaattisten reaktioiden monimutkaisesta sarjasta, jossa 20 yksi viimeisistä vaiheista on proentsyymi protrombiinin muuttuminen aktiiviseksi trombiinientsyymiksi.
· * · · • * * • ·
Trombiinilla on veren hyytymisessä keskeinen merkitys. Se aktivoi verihiutaleita, se muuttaa f ibrinogeenin fibriini- • · : .*, 25 monomeereiksi, jotka polymeroituvat spontaanisti filamen- ·*« · : ,·. teiksi, ja se aktivoi tekijää XIII, joka puolestaan verk- • · · kouttaa polymeerin liukenemattomaksi fibriiniksi. Edelleen • · # * trombiini aktivoi tekijää V ja tekijää VIII positiivisessa takaisinkytkentäreaktiossa. Sen vuoksi trombiinin estäjien • · · *·*·* 30 odotetaan olevan tehokkaita hyytymisenestäjiä verihiutale!- * · *...* den, fibriininmuodostuksen ja fibriinin stabiloinnin estäji- ·;··· nä. Positiivisen takaisinkytkentämekanismin estämisen kautta niiden odotetaan aiheuttavan eston aikaisin tapahtumien >#*t ketjussa johtaen hyytymiseen ja verisuonitukokseen.
• · * ί ·* 35 f · 119812 2
Kininogenaasit ovat seriiniproteaaseja, jotka vaikuttavat kininogeeneihin tuottaen kiniinejä (bradykiniiniä, kallidii-nia ja Met-Lys-bradykiniiniä). Plasman kallikreiini, kudos-kallikreiini ja syöttösolun tryptaasi edustavat tärkeitä 5 kininogenaasej a.
Kiniinit (bradykiniini, kallidiini) liittyvät yleensä tulehdukseen. Esimerkiksi aktiivinen tulehdusprosessi liittyy verisuonten lisääntyneeseen läpäisevyyteen johtaen plasman 10 tihkumiseen verisuonen seinän läpi kudokseen. Seurauksena oleva ulos tihkunut plasma sisältää kaikkia verenkierron veren proteiinijärjestelmiä. Plasmaperäiset kininogeenit ovat väistämättä vuorovaikutuksessa eri kallikreiinien kanssa, muodostaen jatkuvasti kiniinejä niin pitkään kuin aktiivinen 15 plasmantihkumisprosessi jatkuu. Plasman tihkumista tapahtuu tulehdukseen liittyvistä mekanismeista riippumatta, olipa se allergiaa, tulehdusta tai muita tekijöitä (Persson et ai., Editorial, Thorax, 1992, 47:993-1000). Plasman tihkuminen on siten monien sairauksien ominaispiirre, mukaan lukien astman, 20 riniitin, vilustumisen ja suolitulehdussairauksien.
Erityisesti allergiassa vapautuu syöttösolutryptaasia V.: (Salomonsson et ai., Am. Rev. Respir. Dis., 1992, 146:1535- • · 1542) myötävaikuttaen kiniinin muodostumiseen ja muihin • · patogeenisiin tapahtumiin astmassa, riniitissä ja : :*: 25 suolisairauksissa.
··· · • · • · · • · * · · · ··* • · « *·* ’ Kiniinit ovat biologisesti hyvin aktiivisia aineita, joilla on vaikutuksia sileään lihakseen, eritysvaikutuksia, neuro- • · *.·.* geenisiä vaikutuksia, ja vaikutuksia, jotka voivat säilyttää • · · *...· 30 tulehdusprosesseja, mukaan lukien fosfolipaasi A2:n aktivaa- tion ja verisuonen läpäisevyyden lisääntymisen. Viimeksi ...,· mainittu vaikutus indusoi noidankehän, jossa kiniinit ai- • « . kaansaavat sen, että muodostuu lisää kiniinejä ja vastaavia.
• · · • · · • · • · "**: 35 Kudoskallikreiini katkaisee etupäässä pienimolekyylirnassaisia kininogeenejä tuottaen kallidiinia, ja plasman kallikreiini 119812 3 vapauttaa suosien bradykiniiniä suurimolekyylimassaisesta kininogeenistä.
Tekniikan taso 5 Trombiinin estäjät, jotka perustuvat aminohapposekvenssiin katkaisukohdan ympärillä fibrinogeenin Αα-ketjua varten, kuvattiin ensin julkaisussa: Blombäck et ai.; J. Clin. Lab. Invest. 24, suppl. 107, 59, (1969), jossa ehdotetaan sek venssin Phe-Val-Arg (P9-P2-P1, jota kutsutaan tässä P3-P2-P1 10 -sekvenssiksi) olevan parhaan estäjän.
Julkaisussa US 4,346,-078, S. Bajusz et ai., kuvataan trombiinin estäjä H-DPhe-Pro-Agm, dipeptidyylijohdannainen, jossa on aminoalkyyliguanidiini Pl-asemassa. Trombiinin estäjät, 15 jotka perustuvat peptidijohdannaisiin, joissa on Pl-asemassa syklinen aminoalkyyliguanidiini, esimerkiksi 3-aminometyyli-1-amidinopiperidiini, on kuvattu julkaisussa EP-A2-0,468,231.
Julkaisussa EP-A2-0,185,390, S. Bajusz et. ai., kuvataan, 20 että agmatiinin korvaaminen arginiinialdehydillä antoi trom-biininestäjän, jolla oli paljon suurempi tehokkuus.
• · * • · • · • ·
Kallikreiinin estäjät, jotka perustuvat katkaisukohdan Arg- • · ν,ϊ Ser ympärillä olevaan aminohapposekvenssiin, on kuvattu : 25 aikaisemmin.
··· · • · • · · * · · » · · ·
Arginiinikloorimetyyliketonit H-DPro-Phe-Arg-CHaCl ja H-D Phe-Phe-Arg-CH2C1 kuvattiin plasman kallikreiinin estäjiksi t.#.# julkaisuissa: Kettner ja Shaw, Biochemistry 1978, 17:4778- 30 4784; ja Meth. Enzym. 1981, 80:826-842.
• · • · ·»* *:**: Samoin julkaisussa: Fareed et ai.; Ann. N.Y. Acad. Sei. 1981, *:**: 370:765-784, kuvattiin, että esterit ja amidit, jotka sisältävät H-DPro-Phe-Arg -sekvenssin, olat plasman kalli- • « * *. 35 kreiinin estäjiä. Seriiniproteaasien estäjiä, jotka perustu vat elektrofiilisiin ketoneihin aldehydien sijasta Pl-asemassa, kuvataan seuraavissa patenttijulkaisuissa: 119812 4
Julkaisussa EP-A2-0,195,212 kuvataan peptidyyli-a-ketoesterit ja -amidit, julkaisussa EP-A1-0,362,002 kuvataan fluorialkyy-liamidiketönit, ja julkaisussa EP-A2-0,364,344 kuvataan a,β,gamma-triketoyhdisteet, joilla on erilaisia peptidaasia 5 estäviä ominaisuuksia. Trypsiinityyppisten seriiniproteaa-sien, kuten trombiinin ja kallikreiinin estäjät, jotka perustuvat arginiinin ja niiden isotiouroniumanalogien C-terminaalisiin boronihappojohdannaisiin, on kuvattu julkaisussa EP-A2-0,293,881.
10
Julkaisussa WO 92/04371 kuvatan kininogenaasin estäjät, esimerkiksi kallikreiinin estäjät, jotka perustuvat arginiini-johdannaisiin.
15 Julkaisussa EP-A1-0,530,167 kuvataan arginiinin a-alkoksike-tonijohdannaiset trombiinin estäjinä.
Keksinnön kuvaus
Keksinnön eräänä kohteena on aikaansaada uusia ja tehokkaita 20 trypsiinityyppisen seriinin proteaasinestäjiä, erityisesti hyytymisenesto- ja anti-inflammatorisia yhdisteitä, joilla on * · V.: kompetitiivista estoaktiivisuutta entsyymiään kohtaan, ts.
• φ *.*·· aiheuttavat reversiibelin eston. Erityisemmin hyytymisenes- :Y: täjiä estämään ennalta ja hoitamaan tromboembolisia sairauk- •:*; 25 siä kuten laskimonveritulppaa, keuhkotulppaa, valtimoveri- ··· * ϊ .*. tulppaa, erityisesti sydäninfarktia ja aivoveritulppaa, ylei- ·· · siä liikahyytymistiloja ja paikallisia liikahyytymistiloja, • · · esimerkiksi verisuonien muovausleikkauksen ja sepelvaltimon , . ohitusleikkausten jälkeisiä tiloja, ja muita tilanteita, • · · ;.· 30 joissa trombiinilla uskotaan olevan merkitystä, esimerkiksi • · ’···* Alzheimerin tautia, samoin kuin estämään kininogenaase j a *:··: tulehdushäiriöiden, esimerkiksi astman, riniitin, nokkosihot- ·;··· tuman, suolitulehdussairauden ja aniveltulehduksen hoitami- seksi. Edelleen eräänä kohteena on saada trombiinin estäjiä, i » f * \ 35 jotka ovat oraalisesti biosaatavia ja selektiivisiä trombii nin estossa muihin seriiniproteaaseihin verrattuna. Keksinnön edelleen eräänä kohteena on saada kininogenaasinestäjiä, 119812 5 jotka voidaan antaa oraalisesti, rektaalisesti, paikallisesti esimerkiksi dermaalisesti, tai inhalaatioreittiä.
Yhdisteet 5 Keksinnön mukaisesti on keksitty, että yleisen kaavan I mukaiset yhdisteet, joko sellaisenaan tai fysiologisesti hyväksyttävien suolojen muodossa, ja mukaan lukien stere-oisomeerit, ovat tehokkaita seriiniproteaasien, erityisesti trombiinin ja kininogenaasien kuten kallikreiinin estäjiä: 10
A1 - A2 - NH - (CH2)n “ B I
jossa: 15 A1 on kaavan Ha, Hb, Ile tai Ild mukainen tL· ccx
=:=:= T
• · R» • »·
Ila »b |,c I ccx Λ • ♦ • · · * * ♦ M Ild • · • · * '!'#8 20 • · rakennefragmentti; ♦ · · • ♦ · • * • · joissa kaavoissa: • * 25 k on kokonaisluku 0, 1, 2, 3 tai 4; q on kokonaisluku 0, 1, 2 tai 3; 6 119812 R1 on H, alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, tai R1100C-alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiiliatomia, ja on 5 mahdollisesti substituoitu karbonyyliryhmään nähden a-ase-maan, ja α-substituentti on ryhmä R17- (CH2)p-, jossa p on 0, 1 tai 2 ja R17 on metyyli, fenyyli, OH, COOR12, CONHR12, jossa R12 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, ja R11 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia, tai 10 R1 on Ph (4 - COOR12) - CH2 -, jossa R12 on edellä määritelty, tai R1 on R13-NH-CO-alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiili-atomia ja on mahdollisesti substituoitu karbonyyliin nähden 15 α-asemaan alkyyliryhmällä, jossa on 1-4 hiiliatomia, ja jossa R13 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia tai -CH2COOR12, jossa R12 on edellä määritelty, tai R1 on R12OOC-CH2-OOC-alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 20 hiiliatomia ja on mahdollisesti substituoitu karbonyyliin nähden α-asemaan alkyyliryhmällä, jossa on 1-4 hiiliatomia, a *.1.1 ja jossa R12 on edellä määritelty, tai • · • · · • «· • · :V: R1 on R14S02-, Ph(4-COOR12)-S02-, Ph(3-COOR12) -S02-, Ph(2- : 25 COOR12)-S02-, jossa R12 on edellä määritelty ja R14 on alkyy- • m 1 ·1; liryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, tai ··« · • · · • · a • · ♦ R1 on -CO-R15, jossa R15 on alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hii- . . 1iatomia, tai • · · »·« • 1 30 • a **”1 R1 on -CO-OR15, jossa R15 on edellä määritelty, tai • · *:1·: R1 on -CO-(CH2)p-COOR12, jossa R12 on edellä määritelty ja p on kokonaisluku 0, 1 tai 2, tai • · • · * 1. 35 R1 on -CH2PO(OR16)2, -CH2S03H tai -CH2-(5-(1H)-tetratsolyyli) , jossa R16 on, kussakin tapauksessa muista riippumatta, H, 119812 7 metyyli tai etyyli; R2 on H tai alkyy1iryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia tai R21OOC-alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiiliatomia, ja jossa 5 R21 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia; R3 on alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, ja alkyyliryhmässä voi olla tai olla olematta yksi tai useita fluori-atomeja, tai 10 R3 on syklopentyyli-, sykloheksyyli- tai fenyyliryhmä, joka voi olla substituoitu tai substituoimatta alkyyliryhmällä, jossa on 1-4 hiiliatomia, tai 15 R3 on 1-naftyyli- tai 2-naftyyliryhmä, ja k on 0 tai 1, tai R3 on cis- tai trans-dekaliiniryhmä, ja k on 0 tai 1, tai R3 on Si(Me)3 tai CH(R32)2/ jossa R32 on sykloheksyyli- tai 20 f enyy 1 iryhmä,- • » *.V R4 on H, alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, syklohek- • · V*: syyli- tai fenyyliryhmä; • · • * · • · · • e * 25 A2 on kaavan lila, Illb tai IIIc mukainen ··· · ?l'; V> -HvV -fO1! » X 4·· ····· .. f t tl me * · 111a m 0 * · ·*·*: rakenne f ragment t i, • · ·...; joissa kaavoissa: 30 p on kokonaisluku 0, 1 tai 2; m on kokonaisluku 1, 2, 3 tai 4; 119812 8 Y on metyleeniryhmä, tai Y on etyleeniryhmä, ja tulokseksi saadussa 5-jäsenisessä renkaassa voi olla tai olla olematta yksi tai kaksi fluori-atomia, hydroksiryhmä tai oksoryhmä 4-asemassa, tai voi olla 5 tai olla olematta tyydyttymätön, tai Y on -CH2-0-, -CH2-S-, -CH2-SO-, heteroatomifunktionaalisuuden ollessa 4-asemassa, tai 10 Y on n-propyleeniryhmä, ja tulokseksi saadussa 6-jäsenisessä renkaassa voi olla tai olla olematta 5-asemassa yksi fluori-atomi, hydroksiryhmä tai oksoryhmä, sisältää kaksi fluori-atomia toisessa asemista 4 tai 5, tai olla tyydyttymätön asemassa 4 ja 5, tai sisältää 4-asemassa alkyyliryhmän, jossa 15 on 1-4 hiiliatomia, tai Y on -CH2-0-CH2-, -CH2-S-CH2-, -CH2-SO-CH2-, tai Y on - CH2 - CH2 - CH2 - CH2 - ; 20 R3 on alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia; tai • · • 1 1 # · · • t ί/·{ R3 on Si (Me) 3-ryhmä; • 1 • 1 · • · 1 • • ;1· 25 R5 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, tai • «f · • · • · 1 ··· ! .···. R5 on - (CH2)p-COOR51, jossa p on 0, 1 tai 2, ja R51 on H tai i 1 · alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia; · f 1 · *·1·1 30 n on kokonaisluku 0, 1, 2, 3 tai 4; ··· ' ' ' ' • · *···1 B on kaavan iva, iVb tai IVc mukainen § • · * · M · • · · • 1 • · · 119812 9 — s,y x1 (ch2), ί,η ΤΛ ,> Kf^ ψ
X | J
X8 HN^^NI^ iVa IVb IVc rakenne f ragmen11 i joissa kaavoissa: 5 X1, X2 ja X4 ovat CH2, r on 1 ja X3 on CH-C(NH)-NH2 tai CH-NH-C(NH)-NH2; tai X1, X2 ja X4 ovat CH2, r on 0 tai 1 ja X3 on N-C(NH)-NH2; tai 10 X2 ja X4 ovat CH2, X1 puuttuu, r on 0 ja X3 on N-C(NH)-NH2; tai X1 on NH, X2 on C=NH, X4 on CH2, r on 1 ja X3 on NH; 15 X5 on C(NH)-NH2; ja • 1 1 • · » • · :1·.· B on mahdollisesti suojattu yhdellä tai useammalla bentsyyli- • · oksikarbonyyliryhmällä.
• · • · · · • · · ··· 1 - • 20 Kaavan I mukaiset yhdisteet, joilla on S-konfiguraatio A - • · 1 *".1 aminohapossa, ovat edullisia, niistä yhdisteet, joilla on R- • 1 · η * konfiguraatio A -aminohapossa, ovat erityisen edullisia.
« « *·1·1 Käsite "alkyyli ryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia" voi olla ··« *...· 25 keksinnön yhteydessä suoraketjuinen tai haarautunut, ellei ····{ muuta määritellä. Alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, voi olla metyyli, etyyli, n-propyyli, i-propyyli, n-butyyli, i-butyyli, s-butyyli ja t-butyyli.
• · · * · • » '·1" 30 Käsite "alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia" voi olla kek sinnön yhteydessä suoraketjuinen tai haaroittunut, ellei muuta määritellä. Alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia, voi 119812 10 olla metyyli, etyyli, n-propyyli, i-propyyli, n-butyyli, i-butyyli, s-butyyli, t-butyyli, n-pentyyli, i-pentyyli, t-pen-tyyli, neo-pentyyli, n-heksyyli tai i-heksyyli. Tyydytty-mättömyyteen viitattaessa tarkoitetaan hiili-hiili -kaksois-5 sidosta.
Aaltoviivat hiiliatomissa karbonyyliryhmässä kaavoissa Ha, Hb, Ile, Ild, lila, Illb, IIIc, typpiatomissa kaavoissa Ula, Illb, IIIc ja hiiliatomissa rengasjärjestelmässä 10 kaavoissa IVa, IVb, IVc merkitsevät fragmentin sidoksen asemaa.
Lyhenteet luetellaan tämän selityksen lopussa.
15 B on kaavan IVa mukainen rakennefragmentti jossa: X1 puuttuu, X2 ja X4 ovat CH2, X3 on N-C(NH)-NH2, r on 0 ja n on 1 tai 2; 20 X1 ja X3 ovat NH, X2 on C=NH, X4 on CH2, r on 1 ja n on 2, tai • · * « « * • * ·**·{ X1, X2 ja X4 ovat CH2, X3 on CH-C(NH)-NH2, r on 1 ja n on 1, tai S 25 ··· · : X1, X2 ja X4 ovat CH2/ X3 on N-C(NH)-NH2, r on 0 tai 1 ja n on • M * l tai 2.
• · · ♦ . . Erityisen edullisia ovat yhdisteet, joissa B on kaavan IVb 30 mukainen rakenne fragment ti • · • * *·· *:··: jossa: • * X5 on C(NH)-NH2 ja n = 1 • · · • * • * 35
Edullisia keksinnön mukaisia yhdisteitä ovat: 119812 11 HOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab HOOC - CH2 - CH2 - (R) Cgl - Pro - Pab 5 (HOOC-CH2) 2- (R) Cgl-Pro-Pab H-(R)Cgl-Pic-Pab HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Cgl-Pic-Pab H-(R)Cha-Aze-Pab HOOC-CH2- (R) Cha-Aze-Pab 10 HOOC-CH2- (R,S)CH(COOH) - (R) Cha-Aze-Pab HOOC-CH2-(R tai S)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab/a HOOC-CH2-(R tai S)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab/b HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Pab HOOC-CH2-NH-CO-CH2- (R) Cha-Aze-Pab H- (R) Cha-Pro-,Pab 15 HOOC - CH2 - (R) Cha-Pro-Pab HOOC-CH2-(Me) (R)Cha-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2-(Me) (R) Cha-Pro-Pab HOOC-CH2-(RtaiS)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab/a 20 HOOC-CH2- (RtaiS) CH (COOH) - (R) Cha-Pro-Pab/b HOOC-CH2-NH-CO-CH2- (R) Cha-Pro-Pab » · \V EtOOC-CH2-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pab V·: Ph(4-COOH) -S02- (R) Cha-Pro-Pab :Y: H- (R) Cha-Pic-Pab ; 25 HOOC-CH2- (R) Cha-Pic-Pab «»· · : HOOC-CH2- (RtaiS) CH(COOH) - (R) Cha-Pic-Pab/a .'·!·! HOOC-CH2- (RtaiS) CH (COOH) - (R) Cha-Pic-Pab/b * · » HOOC-CH2-CH2-(R) Cha-Pic-Pab . . HCOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab • · · *;!;* 30 HOOC-CH2-CO-(R) Cha-Pic-Pab • · *·;·* Me-OOC-CH2-CO- (R) Cha-Pic-Pab ·:··: H2N-co-CH2- (R) Cha-Pic-Pab ·:*·· Boc-(R) Cha-Pic-Pab
Ac-(R) Cha-Pic-Pab 4 · · ! \ 35 Me-S02-(R) Cha-Pic-Pab * * H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Cha- (R, S) betaPic-Pab 119812 12 HOOC-CH2- (R) Cha-Val-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Val-Pab H-(R)Hoc-Aze-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Hoc-Aze-Pab 5 HOOC-CHa- (R, S) CH (COOH) - (R) Hoc-Pro-Pab HOOC-CH2- (R) Hoc-Pic-Pab (HOOC-CH2)2- (R) Hoc-Pic-Pab HOOC-CH2- (R) Pro (3- (S) Ph) -Pro-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Pro (3- (S)Ph) -Pro-Pab 10 HOOC-CH2-CH2-(R)Tic-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Aze-Pig H00C-CH2- (R) Cgl-Pro-Pig H-(R)Cha-Aze-Pig H00C-CH2- (R) Cgl-Aze-Pac 15 H-(R)Cha-Pro-Pac H-(R)Cgl-Ile-Pab H-(R)Cgl-Aze-Pab H00C- (R, S) CH (Me) - (R) Cha-Pro-Pab MeOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab 20 EtOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab nBuOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab • * :.V nHeXOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab *.*·* H-(R) Cgl-Pro-Pac :V: HOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pac ; 25 HOOC-CH2-CH2-(R) Cgl-Pro-Pac ·»« · ; .·. HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Pac .·:·! HOOC-CH2-(R) Cha-Aze-Pig « · · HOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pig <v HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pig 30 (HOOC-CH2) 2-(R)Cgl-Pro-Pig • * *·;·* HOOC-CH2-CH2 (HOOC-CH2) - (R) Cha-Pro-Pig ·:·*:* hooc-ch2- (r) cgl-Aze- (R, S) itp ·;··: HOOC-CH2- (R) Cha-Aze- (R, S) Itp H-(R) Cha-Pic-(R,S) Itp * · · ** \ 35 HOOC-CH2-(R) Cha-Pic-(R,S) Itp * * H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig HOOC-CH2- (R) Cgl-Pro-(R,S)Hig 119812 13 H-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig H-(R)Cgl-Aze-Rig HOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Rig HOOC-CH2-(R) Cha-Pro-Rig 5 HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Rig HOOC-CH2- (R) Cha-Pro- (S) Itp H-(R) Cha-Pro-(R,S)Nig H-(R)Cha-Pro-Mig H-(R)Cha-Pro-Dig 10 H-(R)Cha-Aze-Dig Tällä hetkellä erityisen edullisia kaavan Ia mukaisia yhdisteitä ovat 15 HOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Pab HOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pab HOOC-CH2- (R) Cha-Pic-Pab 20 HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig EtOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab • · \V HOOC-CH2-(R) Cha-Pro-Pac !,**··* HOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pig • · • · · « · · • * * :*; 25 Edellä olevissa yhdisteiden taulukoissa kirjaimet /a ja /b ··· · ίviittaavat oleellisen puhtaaseen stereoisomeeriin hiiliatomin • · · * • ·® » kohdalla, jota merkitään "RtaiS". Stereoisomeeri voidaan · tunnistaa kullakin yhdisteellä tässä olevan kokeellisen osan . . avulla. "R,S" viittaaa stereoisomeerien seokseen. Keksinnön • · · « · · 30 mukaisesti on keksitty, että yleisen kaavan Ib mukaiset • · *···' yhdisteet, joko sellaisenaan tai fysiologisesti hyväksyttä- *:**: vien suolojen muodossa, ja stereoisomeerien mukaan lukien, ···*: ovat tehokkaita kininogenaasien estäjiä: ** · • · ·
: \ 35 A1-A2—NH-(CH2)n—B
Ib 119812 14 jossa: A1 on kaavan Ha tai Hb mukainen rakennefragmentti; jossa: 5 k on kokonaisluku 0, 1, 2, 3 tai 4, edullisesti 0, 1; q on kokonaisluku 0, 1, 2, tai 3, edullisesti 1; R1 on H, alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, tai R1100C-10 alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiiliatomia ja on mahdollisesti substituoitu karbonyyliin nähden α-asemaan, ja α-substituentti on ryhmä R17-(CH2)P-, jossa p on 1 tai 2 ja R17 on metyyli, fenyyli, OH, COOR12, jossa R12 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, ja R11 on H tai alkyyliryh-15 mä, jossa on 1-6 hiiliatomia, tai R1 on Ph (4 - COOR12) - CH2 -, jossa R12 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, tai 20 R1 on R13-NH-CO-alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiili-atomia ja on mahdollisesti substituoitu karbonyyliin nähden \V α-asemaan alkyyliryhmällä, jossa on 1-4 hiiliatomia ja jossa ·.1· R13 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia tai -CH2COOR12, jossa R12 on edellä määritelty, tai • ♦ · 05 9 9» “ ^ 999 · ·1· R1 on R12OOC-CH2-OOC-alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 *· · hiiliatomia ja on mahdollisesti substituoitu karbonyyliin
9 9 I
nähden α-asemaan alkyyliryhmällä, jossa on 1-4 hiiliatomia ja m.t jossa R12 on edellä määritelty, tai • · 1 * 1 30 *“· R1 on R14S02-, Ph (4 - COOR12) - S02 - , Ph (3 - COOR12) - S02, Ph (2 - COOR12)- *!··: S02-, jossa R12 on edellä määritelty ja R14 on alkyyliryhmä, ·;··· jossa on 1-4 hiiliatomia, tai • 99 · 9 9 9 * 1f 35 R1 on -CO-R15, jossa R15 on alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiili-atomia, tai 119812 15 R1 on -CO-OR15, jossa R15 on edellä määritelty, tai R1 on -CO-(CH2)p-COOR12, jossa R12 on edellä määritelty ja p on 0, 1 tai 2, tai 5 R1 on -CH2PO(OR16)2, -CH2S03H tai -CH2-(5-(1H)-tetratsolyyli) , jossa R16 on, kussakin tapauksessa muista riippumatta, H, metyyli tai etyyli; 10 R2 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia tai R21OOC-alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiiliatomia ja R21 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia; R3 on alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, ja alkyyli-15 ryhmässä voi olla tai olla olematta yksi tai useita fluori-atomeja, tai R3 on syklopentyyli-, sykloheksyyli- tai fenyyliryhmä, joka voi olla substituoitu tai substituoimatta alkyyliryhmällä, 20 jossa on 1-4 hiiliatomia, tai • · *.V R3 on 1-naftyyli- tai 1-naftyyliryhmä, ja k on 0, 1, tai • · • · · • ·· • · : R on cis- tai trans-dekaluniryhmä, ]a k on 0, 1, tai • · — _ « · O Eh • « * *14 * • j*« R3 on Si(Me)3 tai CH(R32)2, jossa R32 on sykloheksyyli- tai ·«· » fenyyliryhmä; • · · R4 on H, alkyyliryhmä, jossa on 1 - hiiliatomia, syklohek- • · » 3 0 syyli- tai fenyyliryhmä, edullisesti H; • · • · ·«· ·ϊ**ϊ A2 on kaavan mb tai IIIc, edullisesti Illb mukainen raken- ·♦··; nefragmentti 9 ·· m • * · : \ 35 jossa: 9 9 p on kokonaisluku 0, 1 tai 2; 119812 16 m on kokonaisluku 1, 2, 3, tai 4, edullisesti 2, 3; R3 on edellä määritelty; n on kokonaisluku 0, 1, 2, 3 tai 4, edullisesti 1, 2, 3; 5 B on kaavan IVa, IVb tai IVc, edullisesti IVa tai IVb mukainen rakennefragmentti; jossa: 10 X1, X2, x3, x4 ja r ovat edellä määritellyt edullisia X1:n, X2:n, X3:n ja X4:n yhdistelmiä ovat X1, X2 ja X4 ovat CH2, X3 on CH-C(NH)-NH2 ja r on 1, tai 15 X1, X2 ja X4 ovat CH2, X3 on N-C(NH)-NH2 ja r on 0 tai 1, tai X1 ja X3 ovat NH, X2 on C=NH, X4 on CH2 ja r on 1, tai 20 X1, X2 ja X4 ovat CH2, X3 on CH-NH-C(NH) -NH2 ja r on 1, tai •,V X1 puuttuu, X2 ja X4 ovat CH2, X3 on N-C(NH)-NH2 ja r on 0; • · t · » • · · • · erityisen edullisia xSn, x2:n, X3:n ja X4:n yhdistelmiä ovat • · : 25 • » · : .·. X1, X2 ja X4 ovat CH2, X3 on CH-C(NH) -NH2 ja r on 1, tai · · • 1 · · • · · • · · • X1, X2 ja X4 ovat CH2, X3 on N-C(NH)-NH2 ja r on 1; Φ · • · *·1·1 30 X5 on C(NH)-NH2.
··· • · • · • M * ·:1·· Edullisia keksinnön mukaisia yhdisteitä ovat: · • H-(R)Pro-Phe-Pab • 35 HOOC-CH2- (R) Pro-Phe-Pab *:,,ί H- (R) Phe-Phe-Pab ROOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab 17 119812 H00C-CH2- (R) Phe-Phe-Pab H-(R)Cha-Phe-Pab ROOC-CH2- (R) Cha-Phe-Pab H-(R)Phe-Cha-Pab 5 HOOC-CH2-(R) Phe-Cha-Pab H-(R)Cha-Cha-Pab HOOC-CH2- (R) Cha-Cha-Pab
Edelleen on keksitty, että yleisen kaavan v mukaiset yhdis-10 teet, joko sellaisenaan tai fysiologisesti hyväksyttävien suolojen muodossa, ja stereoisomeerit mukaan lukien, ovat oraalisen tai parenteraalisen annon jälkeen tehokkaita se-riiniproteaasien, erityisesti trombiinin ja kininogenaasien kuten kallikreiinin estäjiä: 15
A1 - A2 - NH - (CH2) n - B - D Kaava V
jossa: A1 on kaavan Ha, Hb, Ile tai Ild mukainen rakenne-20 fragmentti;
S Kv OCX
*** * B* 1« O
» «o • · · • * ♦ 1 ox
Jx ·· · • a · i ·* nd 25 • · 119812 18 jossa: k on kokonaisluku 0, 1, 2, 3 tai 4; q on kokonaisluku 0, 1, 2 tai 3; 5 R1 on RuOOC-alkyyli-> jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiili-atomia ja on mahdollisesti substituoitu karbonyyliryhmään nähden α-asemaan, ja cx-substituentti on ryhmä R17-(CH2)P-, jossa p on 0, 1 tai 2 ja R17 on COOR12, CONHR12, jossa R12 on H 10 tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, ja R11 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia, tai R1 on Ph (4 - COOR12) - CH2 -, jossa R12 on edellä määritelty, tai 15 R1 on R13-NH-CO-alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiili-atomia ja on mahdollisesti substituoitu karbonyyliin nähden α-asemaan alkyyliryhmällä, jossa on 1-4 hiiliatomia, ja jossa R13 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia tai -CH2COOR12, jossa R12 on edellä määritelty, tai 20 R1 on R12OOC-CH2-OOC-alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 • · *.·.· hiiliatomia ja on mahdollisesti substituoitu karbonyyliin • · !.1·· nähden α-asemaan alkyyliryhmällä, jossa on 1-4 hiiliatomia, :V: ja jossa R12 on edellä määritelty, tai : .·. 25 f · · : R1 on R14S02-, Ph (4 - COOR12) - S02 -, Ph (3-COOR12)-S02-, Ph(2- COOR12) -SO2-, jossa R12 on edellä määritelty ja R14 on alkyy- • · φ liryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, tai • · * · *;[·1 30 R1 on -CO-R15, jossa R15 on alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiili- * · *···1 atomia, tai * • · R1 on -CO-OR15, jossa R15 on edellä määritelty, tai f· · * ♦ · : 35 R1 on -CO- (CH2) -COOR12, jossa R12 on edellä määritelty ja p on 1 kokonaisluku 0, 1 tai 2, tai 119812 19 R2 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia tai R21OOC-alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiiliatomia, ja jossa R21 on H, tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia; 5 R3 on alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, ja alkyyliryhmässä voi olla tai olla olematta yksi tai useita fluori-atomeja, tai R3 on syklopentyyli-, sykloheksyyli- tai fenyyliryhmä, joka 10 voi olla substituoitu tai substituoimatta alkyyliryhmällä, jossa on 1-4 hiiliatomia, tai R3 on 1-naftyyli tai 2-naftyyliryhmä, ja k on 0, 1, tai 15 R3 on cis- tai trans-dekaliiniryhmä, ja k on 0, 1, tai R3 on Si(Me)3 tai CH(R32)2, jossa R32 on sykloheksyyli- tai f enyy1iryhmä; 20 R4 on H, alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, sykloheksyyli- tai fenyyliryhmä; • · * · • · · • f • # ·,*·· A , B ja n ovat edellä kaavan I alla määritellyt; • · • · · * * · • · j 25 D on Z tai (Z)2, jossa Z on bentsyylioksikarbonyyliryhmä.
• · • · · • · · Φ · · ·
Bentsyylioksikarbonyyliryhmä (Z tai (Z)2) kiinnittyy B:ssä läsnä oleviin amidino- tai guanidiinityppiatomeihin.
• * # · φ φ φ Φ 30 Edullisia ja erityisen edullisia yhdistelmiä ovat samat, Φ · *”·* jotka kuvattiin edellä kaavalle I.
• · ····· Edelleen on keksitty, että yleisen kaavan Va mukaiset yhdis- teet, joko sellaisenaan tai fysiologisesti hyväksyttävien S * * * \ 35 suolojen muodossa, ja stereoisomeerit mukaan lukien, ovat oraalisen tai parenteraalisen annon jälkeen tehokkaita trom-biinin estäjiä: 119812 20 A1 - A2 - NH - (CH2)n - B - D Kaava Va 5 jossa: A1 on kaavan Ila, lib, Ile tai lid, edullisesti Ha tai lib mukainen rakennefragmentti; 10 jossa: k on kokonaisluku 0, 1, 2, 3 tai 4, edullisesti 0, 1; q on kokonaisluku 0, 1, 2 tai 3, edullisesti 1; 15 R1 on R1:L00C-alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiili-atomia ja on mahdollisesti substituoitu karbonyyliryhmään nähden α-asemaan, ja a-substituent ti on ryhmä RX7-(CH2)P-, jossa p on 0, 1 tai 2 ja R17 on COOR12, CONHR12, jossa R12 on H 20 tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, ja R11 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia, tai • · « · · * · · • · ί.1·· R1 on Ph (4 - COOR12) - CH2 -, jossa R12 on edellä määritelty, tai φ · • · · * · · • · • ;1; 25 R1 on R13-NH-CO-alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiili-
*•1 I
: atomia ja on mahdollisesti substituoitu karbonyyliin nähden ··· t α-asemaan alkyyliryhmällä, jossa on 1-4 hiiliatomia, ja jossa • · · R13 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia tai . , -CH2COOR12, jossa R12 on edellä määritelty, tai t » t * · 1 30 119812 21 liryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, tai R1 on -CO-15, jossa R1S on alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiili-atomia, tai 5 R1 on -CO-OR15, jossa R15 on edellä määritelty, tai R1 on -CO-(CH2)p-COOR12, jossa R12 on edellä määritelty ja p on kokonaisluku o, l tai 2, tai 10
Edullisesti R1 on R11OOC-alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiiliatomia ja R11 on edellä määritelty.
R2 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, tai 15 R21OOC-alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiiliatomia ja R21 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia; R3 on alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, ja alkyyliryhmässä voi olla tai olla olematta yksi tai useita fluori-20 atomeja, tai • · \V R3 on syklopentyyli-, sykloheksyyli- tai fenyyliryhmä, joka t * *,*·· voi olla substituoitu tai substituoimatta alkyyliryhmällä, ίΥϊ jossa on 1-4 hiiliatomia, tai • · · 25 » I I ··· · • R3 on 1-naftyyli tai 2-naftyyliryhmä, ja k on 0, 1, tai ·· · • · · • · · • · * R3 on cis- tai trans-dekaliiniryhmä, ja k on 0, 1, tai • · • · * 30 R3 on Si(Me)3 tai CH(R32)2, jossa R32 on sykloheksyyli- tai • · *·;·* fenyyliryhmä; • · ····· R4 on alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, sykloheksyyli- tai fenyyliryhmä, edullisesti sykloheksyyli- tai fenyy- • · t * 35 liryhmä; • · A2, B ja n ovat edellä kaavalle Ia kuvatut; 119812 22 D on Z tax (Z)2; Z on bentsyylioksikarbonyyliryhmä.
5
Edullisia kokonaislukuja, ryhmiä tai yhdistelmiä ja erityisen edullisia yhdistelmiä ovat samat, jotka kuvattiin kaavalle Ia edellä, mutta R11 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiili-atomia.
10
Edullisia kaavan Va mukaisia yhdisteitä ovat:
BnOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (Z)
BnOOC- CH2 - CH2 - (R) Cgl - Aze - Pab (Z) 15 BnOOC-CH2- (R) Cgl-Pro-Pab(Z)
BnOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Pro-Pab (Z) (BnOOC-CH2)2- (R) Cgl-Pro-Pab(Z)
BnOOC-CH2- (R, S) CH (COOBn) - (R) Cgl-Pic-Pab(Z)
BnOOC-CH2- (R) Cha-Aze-Pab (Z) 20 BnOOC-CH2- (R,s)CH(COOBn) - (R) Cha-Aze-Pab
BnOOC-CH2- (RtaiS)CH (COOBn) - (R) Cha-Aze-Pab (Z) /a • ·
BnOOC-CH2- (RtaiS) CH(COOBn) - (R) Cha-Aze-Pab (Z) /b :/·: BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Pab(Z) :V: BnOOC - CH2-NH-CO-CH2- (R) Cha-Aze-Pab (Z) • * : 25 BnOOC-CH2-(R) Cha-Pro-Pab(Z) : .*. BnOOC-CH2- (Me) (R) Cha-Pro-Pab (Z) .'···.* BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pab (Z) • · ·
BnOOC-CH2-CH2-(Me) (R) Cha-Pro-Pab (Z) . . BnOOC-CH2-(R, S) CH (COOBn) - (R) Cha-Pro-Pab (Z) • · · 30 BnOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R) Cha-Pro-Pab (Z) *·”' Ph(4-COO-H) -S02- (R) Cha-Pro-Pab (Z) •j**i Boc-(R) Cha-Pic-Pab(Z) ·:··: BnOOC-CH2-(R) Cha-Pic-Pab (Z)
BnOOC-CH2- (R, S) CH (COOBn) - (R) Cha-Pic-Pab (Z) • · · Σ \ 35 BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pic-Pab (Z)
EtOOC-CO-(R) Cha-Pic-Pab (Z)
MeOOC - CH2 - CO - (R) Cha-Pic-Pab (Z) 119812 23 H2N-CO-CH2- (R) Cha-Pic-Pab (Z)
Ac-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
Me-S02-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
BnOOC-CH2- (R) Cha-Val-Pab (Z) 5 BnOOC-CH2-CH2- (R)Cha- (R, S) Val-Pab (Z)
BnOOC-CH2-CH2- (R) Hoc-Aze-Pab (Z)
BnOOC-CH2-(R,S)CH(COOBn)-(R)Hoc-Pro-Pab(Z)
BnOOC-CH2- (R) Hoc-Pic-Pab (Z) (BnOOC-CH2)2“ (R) Hoc-Pic-Pab(Z) 10 BnOOC-CH2- (R) Pro (3- (S) Ph) -Pro-Pab(Z)
BnOOC-CH2-CH2- (R) Pro (3- (5) Ph) -Pro-Pab(Z)
BnOOC-CH2-CH2- (R) Tic-Pro-Pab (Z)
BnOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Aze-Pig (Z)
BnOOC-CH2- (R) Cgl-Pro-Pig(Z)2 15 BnOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Pac (Z)
BnOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab(Z)
MeOOC-CH2- (R)Cgl-Aze-Pab(Z)
EtOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (Z) nBuOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (Z) 20 nHexOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab(Z)
BnOOC - CH2 - (R) Cha-Pro-Pac (Z) • ·
BnOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Pro-Pac (Z) V-j BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Pac (Z) :V: BnOOC-CH2- (R) Cha-Aze-Pig(Z) ; :‘i 25 BnOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pig (Z) ·*· * • .·. BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pig (Z) .'*!·! (BnOOC-CH2) 2- (R) Cgl-Pro-Pig (Z)
BnOOC - CH2 - CH 2 (BnOOC-CH2) - (R) Cha-Pro-Pig (Z) v> BnOOC-CH2- (R) Cha-Pic-(R,S)Itp(Z) 30 BnOOC-CH2- (R) Cgl-Pro- (R, S) Hig (Z) • · *·.*·* BnOOC - CH2 - (R) Cgl-Aze-Rig (Z) ·!·*! BnOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Rig (Z) ·:··: BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Rig (Z) ·· · • · · • · * *, 35 Erityisen edullisia yhdisteitä ovat: • t
BnOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (Z) 119812 24
BnOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pab(Z)
BnOOC-CH2- (R) Cha-Pic-Pab(Z)
BnOOC-CH2~ (R) Cgl - Pro-Pig (Z) 2 EtOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (Z) 5 BnOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pac (Z)
BnOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pig (Z)
Edelleen on keksitty, että yleisen kaavan Vb mukaiset yhdisteet, joko sellaisenaan tai fysiologisesti hyväksyttävien 10 suolojen muodossa, ja stereoisomeerit mukaan lukien, ovat oraalisen tai parenteraalisen annon jälkeen tehokkaita kal-likreiinin estäjiä: A1 - A2 - NH - (CH2) n - B - D 15 Kaava Vb jossa: A1 on kaavan Ha tai Hb mukainen rakenne fragmentti; 20 jossa: • ♦ *.V k on kokonaisluku 0, 12, 3 tai 4, edullisesti 0, 1; • · g on kokonaisluku 0, 1, 2, tai 3, edullisesti l; • · • * * t i · • « : :*: 25 R1 on R1100C-alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiili- ·«· * j j*j atomia ja on mahdollisesti substituoitu karbonyyliryhmään ··· * 17 nähden α-asemaan, ja a-substituent ti on ryhmä R - (CH2) p-,
jossa p on 0, 1 tai 2, ja R17 on COOR12, CONHR12, jossa R11 on H, tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, ja R11 on H
• · * 30 tai alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia, tai • · • · ·*· *:*·: R1 on Ph(4-COOR12) -CH2-, jossa R12 on edellä määritelty, tai * • · R1 on R13-NH-CO-alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiili-* *. 35 atomia ja on mahdollisesti substituoitu karbonyyliin nähden α-asemaan alkyyliryhmällä, jossa on 1-4 hiiliatomia, ja jossa R13 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, tai 25 119812 -CH2COOR12, jossa R12 on edellä määritelty, tai R1 on R12OOC-CH2-OOC-alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiiliatomia ja on mahdollisesti substituoitu karbonyyliin 5 nähden α-asemaan alkyyliryhmällä, jossa on 1-4 hiiliatomia, ja jossa R12 on edellä määritelty, tai R1 on R14S02-, Ph (4 - COOR12) - S02 - , Ph {3 - COOR12) - S02, Ph (2 - COOR12) -S02-, jossa R12 on edellä määritelty, ja R14 on alkyyliryhmä, 10 jossa on 1-4 hiiliatomia, tai R1 on -CO-R15, jossa R15 on alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiili-atomia, tai 15 R1 on -CO-OR15, jossa R1S on edellä määritelty, tai R1 on -CO-(CH2)P-COOR12, jossa R12 on edellä määritelty, ja p on 0, 1 tai 2, tai 20 R2 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia tai R21OOC-alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiiliatomia, ja R21 on · *.V H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia; • · • t * • · • · :Vi R3 on alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, ja alkyyli- ϊ :*· 25 ryhmässä voi olla tai olla olematta yksi tai useita fluori- ··· i • ·*· atomeja, tai • t» · • t· • · · ft· t 3 R on syklopentyyli-, sykloheksyyli- tai fenyyliryhmä, joka t* · voi olla substituoitu tai substituoimatta alkyyliryhmällä, • · i 30 jossa on 1-4 hiiliatomia, tai • • · ··· *"*: R3 on l-naf tyyli tai 1-naf tyyli ryhmä, ja k on 0, 1, tai t t · R3 on cis- tai trans-dekaliiniryhmä, ja k on 0, 1, tai • · R3 on Si(Me)3 tai CH(R32)2, jossa R32 on sykloheksyyli- tai fenyyliryhmä; 35 119812 26 R4 on H, alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, syklohek-syyli- tai fenyyliryhmä, edullisesti H; 5 A2, B ja n ovat edellä kaavalle Ib kuvatut; D on Z tai (Z)2-
Edulliset kokonaisluvut, ryhmät tai yhdistelmät ja erityisen 10 edulliset hdistelmät ovat samat, jotka kuvattiin edellä kaavalle Ib, mutta R11 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia.
Edullisia kaavan Vb mukaisia yhdisteitä ovat: 15
Boc-(R)Pro-Phe-Pab(Z)
BnOOC-CH2-(R) Pro-Phe-Pab(Z)
Boc-(R)Phe-Phe-Pab(Z)
MeOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z) 20 BnOOC-CHa-(R) Phe-Phe-Pab(Z) • « · • · · • · • · V·· Yhdistettä, jolla on kaava:
I --OC
• · • i · • · · • · ··· voidaan käyttää lähtöaineena peptidisen seriiniproteaasines-25 täjän synteesissä, ja erityisesti peptidisten trombiininestä- · jien tai kininogenaasien estäjien synteesissä. Sitä voidaan • · , käyttää sellaisenaan tai amidinoryhmän ollessa joko mono- tai ·· · | *.i disuojattuna typpiatomeissa suojaryhmä kuten bent syy lioksi- *:·*: karbonyyli. Amidinojohdannaisten suojaus suoritetaan alalla 30 amidinoyhdisteiden suojaukseen tunnetuilla menetelmillä. Tämän yhdisteen nimi on "l-amidino-4- aminometyylibentseeni" 119812 27 tai tässä "H-Pab". Yhdiste on kuvattu aikaisemmin mm. julkaisussa: Biochem. Pharm. voi. 23, s. 2247-2256.
Rakennefragmentti, jolla on kaava 5 tekee seriiniproteaasin estäjän, ja erityisesti trombiinin estäjän tai kininogenaasien estäjän arvokkaaksi.
Yhdistettä, jolla on kaava:
-^OC
voidaan käyttää lähtöaineena trombiininestäjän synteesissä.
10 Yhdisteen amidinoryhmä voi olla joko mono- tai disuojattu :V: typpiatomeihin suojaryhmällä kuten bentsyylioksikarbonyyli.
:*·,* Amidinojohdannaisten suojaus suoritetaan alalla amidino- • · yhdisteille tunnetuilla menetelmillä. Tämän yhdisteen nimi on • · • ,·. "1-amidino-4-aminometyyli sykloheksaani" tai tässä "H-Pac".
• I I
!*V 15 Yhdiste on kuvattu aikaisemmin julkaisussa DE 2748295.
• t t «·· · »ftft • · t *·* * Rakennefragmenttia, jolla on kaava 9 • · • · kuvataan tässä arvokkaana rakenne-elementtinä trombiinin- • · · * \ estäjässä.
ft · 119812 28
Yhdistettä, jolla on kaava: voidaan käyttää lähtöaineena seriiniproteaasinestäjän, erityisesti trombiininestäjän tai kininogenaasinestäjän synteesissä1 Yhdisteen amidinoryhmä voi olla joko mono- tai disuo-5 jattu typpiatomeihin suojaryhmällä kuten bentsyylioksikarbo-nyyli. Amidinojohdannaisten suojaus suoritetaan amidinoyhdis-teille alla tunnetuilla menetelmillä. Tämän yhdisteen nimi on "4-aminoetyyli-l-amidinopiperidiini" tai tässä "H-Rig".
10 Rakennefragmentti, jolla on kaava tekee seriiniproteaasinestäjän ja erityisesti trombiininestä-jän tai kininogenaasien estäjän arvokkaaksi.
• · • · • · • ·· • ·
Yhdistettä, jolla on kaava: I · I • · • · 1 • · · r v :1y h2n nh :T:
* NH
V.: 15 voidaan käyttää lähtöaineena seriiniproteaasinestäjän, eriini tyisesti trombiininestäjän tai kininogenaasinestäjän syntee- sissä. Yhdisteen amidinoryhmä voi olla joko mono- tai disuo- • ♦ jattu typpiatomeihin suojaryhmällä kuten bentsyylioksikarbo- • # . nyylillä. Amidinojohdannaisten suojaus suoritetaan alalla I· · • 20 amidinoyhdisteille tunnetuilla menetelmillä. Tämän yhdisteen *:·1: nimi on "1,3-diatsa-2-imino-4-aminoetyylisykloheksaani" tai tässä "H-Itp".
119812 29
Rakennefragmentti, jolla on kaava
-J-1L
Vr~{
NH
tekee seriiniproteaasinestäjän, ja erityisesti trombiinin-estajän tai kininogenaasien estäjän arvokkaaksi.
5 Yhdisteitä, joilla on kaava:
HaN-1(CH2)n (ch^
K
V^NH
H2N
jossa n on 1 tai 2 s on 0 tai 1, iV: voidaan käyttää lähtöaineena seriiniproteaasinestäjien, eri- ;1.J 10 tyisesti trombiininestäjien tai kininogenaasien estäjien syn- • · teesissä. Yhdisteen amidinoryhmä voi olla joko mono- tai di- ·1,·. suojattu typpiatomeihin suojaryhmällä kuten bent syy lioksi- • · · j1V karbonyyli. Amidinojohdannaisten suojaus suoritetaan alalla amidinoyhdisteille tunnetuilla menetelmillä. Nämä yhdisteet « · · 15 ovat nimeltään: 4 \V 1-amidino-3-aminometyylipyrrolidiini tai "Η-Nig", kun n on 1 ·· :,.,i ja s on 1 l-amidino-3-aminoetyylipyrrolidiini tai "H-Hig", kun n on 2 20 ja s on 1 • · . 3-aminometyyli-l-amidinoatsetidiini tai "H-Mig", kun n on 1 119812 30
Rakennefragmentti, jolla on kaava 0
(GHA '—K
y«H
h2n tekee seriiniproteaasinestäjän, ja erityisesti trombiinin estäjän tai kininogenaasien estäjän arvokkaaksi.
5 Yhdisteisiin, joiden amidinoryhmä on mono- tai disuojattu typpiatomeissa bentsyylioksikarbonyyliryhmällä, sisältyvät seuraavat: 4-aminometyyli-l-(N-bentsyylioksikarbonyylianidino)bentseeni 10 (H-Pab(Z)), 4-aminometyyli-l-(N,N'-di(bentsyylioksikarbonyyli)amidino)-bentseeni (H-Pab(Z)2)/ 4-aminometyyli-l-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidino)syklohek-saani (H-Pac(Z)), • · · • * .·. : 15 4-aminometyyli-l-(N,N'-di(bentsyylioksikarbonyyli)amidino)- • · · #·.·! sykloheksaani (H-Pac(Z)2), « · · .* I 4 -aminoetyyli -1 - (N-bentsyylioksikarbonyy 1 iamidinopiperidiini I»*/ (Η-Rig (Z)) , • · 0 7/ 4-aminoetyyli-l-N,N'-di(bentsyylioksikarbonyyli)amidinopipe- *.* * 20 ridiini (H-Rig(Z)2), (3RS)-1-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidino)-3-aminometyyli-ϊ.ϊ.ί pyrrolidiini (H-Nig(Z)), (3RS)-1-(N,N'-di(bentsyylioksikarbonyyli)amidino)-3-aminome-..1,: tyyl ipyrrol idi ini (H-Nig(Z)2), • φ . 25 (3RS)-1-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidino)-3-aminoetyylipyr- rolidiini (H-Hig(Z)) ♦ · · • (3RS) -1- (N,N' -di (bentsyylioksikarbonyyli) amidino) -3-amino- ·;·*: etyyl ipyrrol idi ini (H-Hig(Z)2), 3-aminometyyli-l-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidino)atseti-30 diini (H-Mig(Z)), 119812 31 3-aminometyyli-l-(N,Ν'-di(bentsyylioksikarbonyyli)amidino) atsetidiini (H-Mig(Z) 2) , 3-aminoetyyli-l-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidino)atsetidiini (H-Dig(Z)), 5 3-aminoetyyli-l-(N,Nl-di(bentsyylioksikarbonyyli)amidino)atsetidiini (Η-Dig(Z)2) .
Mainittuja yhdisteitä käytetään lähtöaineina kaavojen I, la, Ib, V, Va ja Vb mukaisten peptidijohdannaisten valmistukses-10 sa.
Lääketieteellinen ja farmaseuttinen käyttö
Keksinnön mukaisten, trombiinia estävien yhdisteiden odote-15 taan olevan käyttökelpoisia erityisesti eläimillä mukaan lukien ihmisellä verisuonitukoksen ja veren kudosten liiallisen hyytyvyyden hoidossa tai ennaltaestossa. Edelleen niiden odotetaan olevan käyttökelpoisia tilanteissa, joissa on ei-toivottu ylimäärä trombiinia ilman merkkejä liiallisesta 20 hyytyvyydestä, esimerkiksi kuten Alzheimerin taudissa ja haimatulehduksessa. Sairaustiloja, joissa näillä yhdisteillä • · V.! on mahdollista käyttöä, hoidossa ja/tai ennaltaestossa, ovat :\j mm. laskimon veritukos ja keuhkotulppa, valtimon veritukos, :*·*· kuten sydäninfarktissa, epästabiilissa angiinassa, • * : 25 veritukosperäisessä halvauskohtauksessa ja ääreisvalti- φ · * : .·. moveritukoksessa ja systeemisessä emboliassa tavallisesti • · · "λ* eteisestä eteisvärinän aikana, tai vasemmasta kammiosta • · · ' * · ♦ transmuraalisen sydäninfarktin jälkeen. Edelleen näillä yhdisteillä odotetaan olevan käyttöä valtimonkovetussairauk- • · · *·]·* 30 sien kuten sepelvaltimotaudin, aivovaltimotaudin ja ääreis- valtimotaudin ennaltaestossa. Edelleen näillä yhdisteillä ····· odotetaan olevan synergistisiä antitromboottisia vaikutuksia yhdistettäessä minkä hyvänsä antitromboottisen aineen kanssa, jolla on eri vaikutusmekanismi, kuten verihiutaleiden • · · : ·* 35 hyytymistä estävän aineen, asetyylisalisyylihapon kanssa.
« '’*· Edelleen näiden yhdisteiden odotetaan olevan käyttökelpoisia yhdessä veritulppia liuottavien aineiden kanssa veritukos- 119812 32 sairauksissa, erityisesti sydäninfarktissa. Edelleen näillä yhdisteillä odotetaan olevan käyttöä uudelleen tukkeutumisen ennaltaestossa trombolyysin, perkutaanin transluminaalisen angioplastian (PTCA) ja sepelvaltimo-ohitusleikkausten jäl-5 keen. Edelleen näillä yhdisteillä odotetaan olevan käyttöä suonen uudelleentukkeutumisen estossa mikrokirurgian ja yleensä verisuonikirurgian jälkeen. Edelleen näillä yhdisteillä odotetaan olevan käyttöä bakteerien, moninkertaisen vaurion, myrkytyksen tai minkä hyvänsä muun mekanismin aihe-10 uttaman laajalle levinneen verisuonensisäisen hyytymisen hoidossa ja ennaltaestossa. Edelleen näiden yhdisteiden odotetaan olevan käyttökelpoisia hyytymisenestohoidossa kun veri on kontaktissa kehossa olevien vieraiden pintojen kuten veri-suonisiirrännäisten, verisuoni-"stemts", suonikatetrien, me-15 kaanisten ja biologisten lisä- tai minkä hyvänsä muun lääketieteellisen laitteen kanssa. Edelleen näillä yhdisteillä odotetaan olevan käyttöä hyytymisenestohoidossa, kun veri on kontaktissa lääketieteellisten laitteiden kanssa kehon ulkopuolella, kuten sydänverisuonileikkauksen aikana käyttäen tai 20 sydän-keuhko -kone tai hemodialyysissä.
• · ;,V Keksinnön mukaisten, hyytymistä estävien yhdisteiden edelleen ϊ/.ί muuta käyttöä odotetaan olevan katetrien ja potilaissa in vivo käytettyjen mekaanisten laitteiden huuhtelu, ja hyytymi- • a • 25 senestäjinä veren, plasman, ja muiden verituotteiden säily- aaa a : .·. tykseen in vitro.
• · aaa · aaa • a a aa1
Keksinnön mukaisten anti-inflammatooristen, hyytymistä estä- .. vien yhdisteiden odotetaan olevan käyttökelpoisia erityisesti a a a ***** 30 eläimillä mukaan lukien ihmisellä tulehdussairaus ten, kuten • •a ' a a ’···1 astman, riniitin, haimatulehduksen, nokkosihottuman, suolitu- a *:··· lehdussairauksien ja niveltulehduksen hoidossa tai ennalta- .···· estossa. Kininogenaasia estävien yhdisteiden tehokasta määrää ..1. fysiologisesti hyväksyttävän väliaineen tai laimennusaineen a a a • 1| 35 kanssa tai ilman voidaan käyttää yksinään tai yhdistelmänä 1 muiden terapeuttisten aineiden kanssa.
119812 33
Yhdisteet estävät tunnetuilla menettelytavoilla kromogeeni-sillä substraateilla määritettyjen kallikreiinien aktiivisuuden. Keksinnön mukaisten yhdisteiden anti-inflammatoorisia vaikutuksia voidaan tutkia esimerkiksi sillä, miten ne estä-5 vät allergeenilla indusoituja eksudatiivisia tulehdusprosesseja ilmatiehyeiden limakalvolla tai suolen limakalvolla.
Farmaseuttiset valmisteet
Keksinnön mukaiset yhdisteet annetaan normaalisti oraalises-10 ti, rektaalisesti, dermaalisesti, nasaalisesti, henkitorveen, keuhkoputkeen, parenteraalisesti tai inhalaatiolla, farmaseuttisten valmisteiuden muodossa, jotka sisältävät aktiivisen valmistusaineen joko vapaana emäksenä tai farmaseuttisesti hyväksyttävänä ei-toksisena orgaanisena tai epäorgaa-15 nisena happoadditiosuolana, esimerkiksi hydrokloridina, hydrobromidina, sulfaattina, hydrosulfaattina, nitraattina, laktaattina, asetaattina, sitraattina, bentsoaattina, sukki-naattina, tartraattina, trifluoriasetaattina ja vastaavina farmaseuttisesti hyväksyttävässä annostelumuodossa. Koostu-20 muksia voidaan antaa vaihtelevat annokset häiriöstä ja hoidettavasta potilaasta ja antoreitistä riippuen.
• · • · ♦ • · · • · • · :#*.j Annosmuoto voi olla kiinteää, puolikiinteää tai nestemäistä valmistetta, joka on valmistettu sinänsä tunnetuilla teknii- • # • 25 koilla. Tavallisesti aktiivinen aine muodostaa määrän välillä ··· · : 0,1 ja 99 paino-% valmisteesta, erityisemmin määrän välillä ,···. 0,1 ja 50 paino-% parenteraaliseen antoon tarkoitetuilla vai- • * ♦ misteilla, ja määrän välillä 0,2 ja 75 paino-% oraaliseen an- . , toon tarkoitetuilla valmisteilla.
• · • · * .
• · 30 • * · • · *···* Keksinnön mukaisten yhdisteiden sopivia päivittäisannoksia ·;·*· ihmisten terapeuttisessa hoidossa ovat noin 0,001-100 mg/kg ·;··· kehonpainoa peroraalisessa annossa ja 0,001-50 mg/kg kehon- painoa parenteraalisessa annossa.
• · · • ·* 35 • · 119812 34
Valmistus
Kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan keksinnön mukaisesti valmistaa siten, että 5 a) (Menetelmä Ia) kytketään N-terminaalisesti suojattu di-peptidi, jolla on kaava (1), yhdisteen kanssa, jolla on kaava (2) käyttämällä standardipeptidinkytkentää, joka esitetään kaaviossa 10 W1-A1-A* —OH (1) HZN—(CH2)h—-Q1 (2) W1 A1 A2—HN—(CH2)n—^ ^ Q1 jossa A1, A2 ja n on kaavassa I määritellyt, W1 on N-terminaa- .. 15 linen aminosuojaryhmä, kuten tert-butyylioksikarbonyyli ja • · · *;*·) bentsyylioksikarbonyyli, ja Q1 on -C (NH) -NH2, -C (NW2)-NH-W2, :·**: -C(NH)-NH-W2, -NH-C(NH)-NH2, -NH-C (NH)-NH-W2, -N (W2)-C (NH)-NH- • · V.* W2 tai -NH-C(NW2)-NH-W2, jossa W2 on amiinin suojaryhmä kuten * · · tert-butyylioksikarbonyyli tai bentsyylioksikarbonyyli, tai jtj : 20 Q1 on -CN, -CO-NH2 tai -CS-NH2, jolloin ryhmä muutetaan seu- raavaksi amidinoryhmäksi tai Q1 on NH2 tai NH-W2, jossa W2 on edellä määritelty, jolloin aminoryhmä muutetaan seuraavaksi guanidiiniryhmäksi (jolloin saadaan Q1 = -NH-C(NH)-NH2) , W2- .··*. ryhmän suojauksenpoiston jälkeen kun Q1 on -NH-W2 (W2:n on • · *!* 25 oltava tässä tapauksessa W1:een nähden ortogonaalinen) , alal- ·* * la tunnetuilla menetelmillä, • · b) (Menetelmä Ib) kytketään N-terminaalisesti suojattu ami- • · [..)· nohappo, jolla on kaava (3) , yhdisteen kanssa, jolla on kaava * · 30 (2) käyttämällä standardipeptidinkytkentää, joka esitetään kaaviossa 119812 35 W1— A2-OH (3) H2N—(CHz)n— Q1 (2) W1— A2—HN-—(CH2),r—^ Q1 jossa A2, n, W1 ja Q1 ovat edellä määritellyt, minkä jälkeen 5 seuraa W1-ryhmän suojauksenpoisto ja N-terminaalisen aminohapon kytkeminen yhdisteen kanssa, jolla on kaava A1-OH, jossa A on edellä määritelty, suojatussa muodossa, johtaen edellä menetelmässä Ia kuvattuun suojattuun peptidiin, 10 c) (Menetelmä Ha) kytketään N-terminaalisesti suojattu di-peptidi, jolla on kaava (1), yhdisteen kanssa, jolla on kaava (4), käyttämällä standardipeptidinkytkentää, joka esitetään kaaviossa • * • t · • · 15 " W1-A1-A2-OH (1) • * * • · · • • · • · · • · · H2N—(CH^-YJ)—Q1 (4) • » I ' ' • · · * 1’ W1,-A1 A2—HN—(CH2)ti—( \ Q1 • · · \n—' • . jossa A1, A2, n, W1 ja Q1 ovat edellä määritellyt, !*V 20 ·:**: d) (Menetelmä Hb) kytketään N-terminaalisesti suojattu aminohappo, jolla on kaava (3) , yhdisteen kanssa, jolla on kaava (4) , käyttämällä standardipeptidinkytkentää, joka 119812 36 esitetään kaaviossa W1-A*-OH (3) H2N—(CH2)n——Q1 (4) W-A2—H N—(CH2)n—^ ^—Qi 5 jossa A2, n, W1 ja Q1 ovat edellä määritellyt, minkä jälkeen seuraa W1~ryhmän suojauksenpoisto ja N-terminaalisen aminohapon kytkeminen yhdisteen kanssa, jolla on kaava A1-OH, jossa A on edellä määritelty, suojatussa muodossa, mikä johtaa edellä menetelmässä Ha kuvattuun suojattuun peptidiin, 10 e) (Menetelmä lila) kytketään N-terminaalisesti suojattu di-peptidi, jolla on kaava (1), yhdisteen kanssa, jolla on kaava (5), käyttämällä standardipeptidinkytkentää, joka esitetään kaaviossa • · · • * Ϊ 15 " W*-A1— A2-OH (1) • · • · · • * ··* · L:: ^N—(CH2)n—( N—Q2 (5) XLX2 • · · (CH2)tXx4 ·.·.· W1-A1-A2 HN—(CH2)„—( N—Q2 O Vx2 • · jossa A1, A2 ja n ovat kaavassa I määritellyt ja r on 0 tai tf·. 1# kun X1, X2 ja X4 ovat CH2, tai r on 0, kun X2 ja X4 ovat CH2 • · · . η • · 20 ja X puuttuu, W on N-terminaalinen aminosuojaryhmä, kuten tert-butyylioksikarbonyyli tai bentsyylioksikarbonyyli, ja Q2 on -C(NH)-NH2, -C(NW2) -NH-W2, tai -C(NH)-NH-W2, jossa W2 on 119812 37 amiinin suojaryhmä kuten tert-butyyli-oksikarbonyyli tai bentsyylioksikarbonyyli, tai Q2 on W2, jolloin iminoryhmä, W2-ryhmän suojauksenpoiston jälkeen (W2:n on tässä tapauksessa oltava ortogonaalinen W1:een nähden), substituoidaan seuraa-5 vaksi ryhmällä -C(NH)-NH2 käyttäen suojaamatonta, N-suojattua tai N,N'-disuojattua guanidointireagenssia alalla tunnetuilla menetelmillä, f) (Menetelmä Illb) kytketään N-terminaalisesti suojattu 10 aminohappo, jolla on kaava (3) , yhdisteen kanssa, jolla on kaava (5) , käyttämällä standardipeptidinkytkentää, joka esitetään kaaviossa VV1- A2-OH (3) (CHJrX* H2N—(CH2)n-( N-Q2 (5) X— (ch2vxx4 W1-A1-A2 HN—(CH2)ö ( N— Q2 V-/2 15 • · :*·,· jossa A2, n, r, X1, X2 ja X4, W1 ja Q2 ovat edellä määritellyt, • ·*;*· minkä jälkeen seuraa W1-ryhmän suojauksenpoisto ja N-termi- • · : naalisen aminohapon kytkeminen yhdisteen kanssa, jolla on ··· · .
: ,·. kaava A -OH, jossa A on edellä määritelty, suojatussa muo- • · · *1·-* 20 dossa, johtaen edellä menetelmässä lila kuvattuun suojattuun • · · ’ peptidiin, • · • · · *·|·* g) (Menetelmä IVa) kytketään N-terminaalisesti suojattu di- peptidi, jolla on kaava (1), yhdisteen kanssa, jolla on kaava ····· 25 (6) , käyttämällä standardipeptidinkytkentää, joka esitetään kaaviossa • · » v* · • f · • · * · t • · 119812 38 W A1-A2 OH (1) H2N— (CHA-( \|H (6) HN—^ ,, N—W3 W1-A1-A?-HN-— (CH2)n-ζ \h HN—^ N—W3 jossa A1, A2 ja n on kaavassa I määritellyt, W1 on N-terminaalinen aminosuojaryhmä kuten tert-butyy1ioksikarbonyy1i tai 5 bentsyylioksikarbonyyli ja W3 on H tax aminosuojaryhmä kuten aryylisulfonyyli, bentsyylioksikarbonyyli tai tert-butyyli-oksikarbonyyli, h) (Menetelmä IVb) kytketään N-terminaalisesti suojattu 10 aminohappo, jolla on kaava (3), yhdisteen kanssa, jolla on kaava (6) , käyttämällä standardipeptidinkytkentää, joka esitetään kaaviossa
Wi-Az-OH (3) • a • Vt H2N—(CH2)n—( \lH (6) : .* hn—ς !.V N—W3
• V
• J J —
• ,·, W“—A1 ““A2—HN—(CHj),;—\ jvJH
:: : N—w» 15 ·*·*♦ jossa A2, n, W1 ja W3 ovat edellä määritellyt, minkä jälkeen • · .*·*. seuraa V^-ryhmän suojauksenpoisto ja N-terminaalisen amino- *·· , hapon kytkeminen yhdisteen kanssa, jolla on kaava A -OH, ] jossa A on edellä määritelty, suojatussa muodossa, johtaen * * 20 menetelmässä IVa kuvattuun suojattuun peptidiin, minkä "·*· jälkeen lopulliset yhdisteet voidaan tehdä millä hyvänsä • v seuraavista tavoista, käytettyjen Q1- tai Q2-ryhmien luonteesta riippuen: suojaryhm(ä/ie)n poisto (kun Q1 = -C(NH)- NH2, -C(NW2)-NH-W2, -C(NH)-NH-W2, -NH-C (NH) -NH2, -NH-C(NH)-NH- 119812 39 W2, -N(W2)-C(NH) -NH-W2 tai -NH-C(NW2)-NH-W2) , tai W1-ryhmän selektiivinen suojauksenpoisto (esimerkiksi kun Q1 tai Q2 = -C (NW2) -NH-W2, -C(NH)-NH-W2, -NH-C(NH) -NH-W2, -N (W2)-C (NH)-NH-W2 tai -NH-C(NW2)-NH-W2 (W2:n on tässä tapauksessa oltava 5 ortogonaalinen W1:een nähden), minkä jälkeen haluttaessa seuraa N-terminaalisen typen alkylointi.
Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus Seuraava kuvaus kuvaa keksinnön näkökantoja.
10
Kokeellinen osa
Yleiset koemenettelytavat.
Massaspektrit mitattiin Finnigan MAT TSQ 700 -kolmoisnelina-15 pamassaspektrometrillä, joka oli varustettu sähkösuihkulii-tännällä.
XH-NMR- ja 13C-NMR-mittaukset suoritettiin BRUKER AC-P 300- ja BRUKER AM 500-spektrometreillä, edellisen toimiessa ^-taa-20 juudella 500,14 MHz ja 13C-taajuudella 125,76 MHz, ja viimeksi mainitun 3Η- ja 13C-taajuudella 300,13 MHz ja 75,46 MHz, • · *.V vastaavasti. Näytteet olivat kooltaan noin 10-50 mg liuotet- !/·· tuna 0,6 ml:aan jotain seuraavista liuottimista: CDC13 (iso- ίΥϊ tooppipuhtaus >99,8 %) , CD3OD (isotooppipuhtaus >99,95 %) , • ·*· 25 D20 (isotooppipuhtaus >99,98 %) tai DMSO-d6 (isotooppipuhtaus ·«· · : >99,8 %) . Kaikki liuottimet ostettiin yhtiöstä Dr. Glaser AG, ··· · ,···, Basel.
• · · m . . 3Η- ja 13c-kemiallinen siirtymä -arvot CDCl3:ssa ja CD3OD:ssa • · · *·];* 30 ovat suhteessa tetrametyylisilaaniin ulkoisena standardina.
*···* H-kemialliset siirtymät D20:ssa ovat suhteessa 3-(trimetyy- *:*·: lisilyyli) -d4-propaanihapon natriumsuolaan, ja 13C-kemiallisia •••♦i siirtymiä D20:ssa verrataan 1,4-dioksaaniin (67,3 ppm) , mo- lemmat ulkoisena standardina. Kalibrointi ulkoisella stan- • * · • 35 dardilla voi joissain tapauksissa aiheuttaa vähäisiä siirty- * * mäeroja sisäiseen standardiin verrattuna, ero ^-kemialli- sessa siiirtymässä on kuitenkin alle 0,02 ppm ja 13C-siirty- 119812 40 mässä alle 0,1 ppm.
Proliini- tai "proliinimaisen" tähteen sisältävien pepti-disekvenssien ^-NMR-spektrissä on usein kaksi resonanssien 5 sarjaa. Tämä vastaa kahden myötävaikuttavan konformaation-muodostajan olemassaoloon suhteessa rotaatioon amidisidoksen ympäri, jossa proliini on amidisidoksen N-osa. Konformaa-tionmuodostajat ovat nimeltään cis ja trans. Yhdisteissämme sekvenssit (R)Cha-Aze-, (R)Cha-Pro- ja (R)Cha-Pic- aiheutta-10 vat usein cis-trans -tasapainon, jossa toinen konformaation-muodostaja on vallitsevana konformaationmuodostaja (>90 %) . Niissä tapauksissa esitetään vain pääasiallisen rotameerin 1H-kemialliset siirtymät. Vain tapauksissa, joissa vähemmän tärkeän rotameerin signaalit ovat selvästi eronneet, ne esi-15 tetään NMR-dokumentoinnissa. Sama kriteeri pätee NH-signaaleille CDCl3:ssa, vain tapaukset, joissa signaalit ovat selvästi eronneet, ne esitetään NMR-dokumentoinnissa. Tämä merkitsee, että joillain välituotteilla esitettyjen protonien lukumäärä on pienempi kuin kemiallisesta kaavasta odotettu 20 protonien lukumäärä.
• · V.: Ohutlevykromatografia suoritettiin kaupallisilla Merck Sili- • · !.*·· cagel 60F2s4-päällysteisillä lasi- tai alumiinilevyillä. Vi- :V: sualisointi tapahtui yhdistelmällä UV-valosta sen jälkeen • ·*· 25 tapahtuvalla suihkutuksella liuoksella, joka valmistettiin ·*· * i .*. sekoittamalla 372 ml EtOHita (95-%), 13,8 ml konsentroitua • · * · H2S04:ää, 4,2 ml konsentroitua etikkahappoa ja 10,2 ml p- • · · metoksibentsaldehydiä tai fosfomolybdeenihapporeagenssia (5-10 paino-% EtOH:ssa (95-%)) ja kuumentamalla.
• · « • ♦ · * · 30 t·· • · *···* Flash-kromätografia suoritettiin Merck-silikageelillä 60 (40 *:·*: - 63-mm, 230-400 mesh) paineilmalla.
Käänteisfaasi-HPLC (käänteisfaasi-high-performance liquid • \ 35 chromatography) (kutsutaan esimerkeissä RPLCrksi) suoritet tiin Waters M-590 -laitteella, joka oli varustettu kolmella käänteisfaasi-Kromasil 100,C8 -kolonnilla (Eka-Nobel), joilla 119812 41 oli eri mitat analyyttistä (4,6 mm x 250 mm), puoliprepa-ratiivista [2,54 cm (1") x 250 mm] ja preparatiivista [5,1 cm (2") x 500 mm] kromatografiaa varten detektoiden 226 nm:llä.
5 Pakastuskuivaus suoritettiin Leybold-Heraeus, malli Lyovac GT 2 -laitteella.
Lähtöaineiden valmistus
10 Boc-(R)Pgl-OH
Valmistettiin samalla tavalla kuin kuvataan Boc-(R)Cha-OH:lie (katso alla) H-(R)Pgl-OH:sta.
BOC-(R)Cha-OH
15 Liuokseen, jossa oli H-(R)Cha-OH, 21,55 g (125,8 mmol), 130 ml:ssa 1 M NaOH:ta ja 65 mltssa THF:ää, lisättiin 30 g (137,5 mmol) (Boc)20:ta ja seosta sekoitettiin 4,5 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. THF haihdutettiin, ja lisättiin vielä 150 ml vettä. Alkalinen vesifaasi pestiin kahdesti EtOAc:llä, 20 säädettiin sitten happamaan pH-arvoon2 M KHS04:llä, ja uutettiin 3 x 150 ml:11a EtOAcitä. Yhdistetty orgaaninen t · \V faasi pestiin vedellä, suolaliuoksella, ja kuivattiin • · :.**i (Na2S04) . Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 30,9 g (90,5 tV: %) otsikkoyhdistettä valkoisena kiinteänä aineena.
: 25 ··· ·
: Boc-(R)Hop-OH
«·· ·
Valmistettiin samalla menettelytavalla kuin kuvattiin Boc- i « t (R)Cha-OH:lie lähtien H-(R)Hop-OH:sta.
119812 42 annettiin saavuttaa huoneenlämpötilan, ja sekoitettiin 4 tunnin ajan (reaktion aikana muodostui sakkaa, ja suspensio muuttui punaiseksi). Liuotin poistettiin, ja jäännös liuotettiin EtOAc:hen, ja suodatettiin silikageelin läpi. Liuotin 5 haihdutettiin, jolloin saatiin otsikkoyhdiste punaisena öljynä, joka kiteytyi seisoessaan. Raakatuotetta käytettiin enempää puhdistamatta.
Hi-NMR (300 MHz, CDC13) : δ 1,45 (s, 9H) , 4,32 (d, 2H) , 5,05 10 (bs, 1H (NH)), 7,2 (d, 2H), 8,55 (d, 2H).
4-aminometyyli-l-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidino)bentseeni (H-Pab(z)) (i) 4-syaanibentsyyliatsidi 15 Liuosta, jossa oli 20,23 g (0,31 nol) natriumatsidia 50 ml:ssa vettä, lisättiin ympäristön lämpötilassa 49,15 g:aan (251 mmol) 4-syaanibentsyylibromidia 200 ml:ssa DMF:ää. Tapahtui eksoterminen reaktio, ja 1,5 tunnin kuluttua reak-tioseos laimennettiin 200 ml:11a tolueenia (varoitus: jotta 20 vältettäisiin mahdollisesti räjähtävien atsidiyhdisteiden erottuminen, on suositeltavaa lisätä tolueeni rektioseokseen • * ·,·.· ennen veden lisäämistä) ja 500 ml:11a vettä. Vesifaasi uu- • · *,*·: tettiin vielä 2 x 50 ml:11a tolueenia. Yhdistetyt orgaaniset :V: uutteet pestiin 2 x 50 ml:11a vettä ja suolaliuoksella, ja • ;** 25 lopuksi kuivattiin (MgSOi) ja suodatettiin. Liuosta käytet- e·· · ! tiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa.
• * · • et e ··· • · · • · · 1H-NMR (300 MHz, CDCI3) ; δ 4,4 (s, 2H) , 7,4 (d, 2H) , 7,7 (d, 2H) .
• « · • · · 30 • · **;·* (ii) 4-amidinobentsyyliatsidi *ϊ"ϊ Kloorivetyä kuplitettiin seokseen, jossa oli 250 ml abso- *:*·; luuttista etanolia, ja liuos edellä olevasta vaiheesta (i) (noin 200 ml) -5 °C:Ssa kylläiseksi asti. Säilytettiin 24 : \ 35 tunnin ajan 8 °C:ssa, ja haihdutettiin enin osa liuottimesta, minkä jälkeen saostettiin vedetöntä eetteriä lisäämällä, jolloin saatiin valkoisia kiteitä, jotka eristettiin suodat- 119812 43 tamalla, ja liuotettiin 1,8 l:aan alkoholista ammoniakkia. 48 tunnin kuluttua enin osa liuottimesta poistettiin, ja lisättiin 200 ml 3,75 M NaOH-liuosta, jolloin 4-amidinobentsyyli-atsidi saostui värittöminä kiteinä. Kiteet eristettiin suo-5 dattamalla. Tässä pisteessä 4-amidinobentsyyliatsidin saanto oli 22,5 g (yhteensä 51 %).
Etyyli-imidatobentsyyliatsidihydrokloridi: 10 1H-NMR (500 MHz, CD30D); δ 1,6 (t, 3H) , 4,5 (s, 2H), 4,65 (q, 2H), 4,8 (br s, 2H), 7,6 (d, 2H), 8,1 (d, 2H) 4-amidinobentsyyliatsidi: 1H-NMR (500 MHz, CDC13) ; δ 4,3 (s, 2H) , 5,7 (br s, 3H) , 7,3 15 (d, 2 H), 7,6 (d, 2H).
13C-NMR (125 MHz, CDC13) : amidiinihiili: δ 165,5.
(iii) 4-(bentsyylioksikarbonyyliamidino)bentsyyliatsidi 20 Kiteet edellä olevasta vaiheesta (ii) liuotettiin 500 ml:aan metyleenikloridia, ja tulokseksi saatu liuos kuivattiin • · (K2C03) , suodatettiin, ja lisättiin 27 ml (194 mmol) tri-:/.j etyyliamiinia. Hitaasti sekoitettuun liuokseen lisättiin 25 ml bentsyyliklooriformiaattia samalla kun reaktioseosta jääh- # · • ;*; 25 dytettiin jäähauteella. 30 min kuluttua lisättiin vielä 2 ml ·«« « : .·, bentsyyliklooriformiaattia, ja sekoitusta jatkettiin vielä 30 min ajan. Seuraavaksi lisättiin vettä, ja vesifaasi säädet- • · · tiin 2 M HCl:llä neutraaliin pH-arvoon 7. Orgaaninen faasi . . kuivattiin (MgS04) , ja liuotin poistettiin tyhjössä. Lopulta • * * *·]·* 30 eristettiin 4-(bentsyylioksikarbonyyliamidino) bentsyyliatsi- • · *···* dia värittöminä kiteinä eetteri/metyleenikloridi/heksaanista.
• · 1H-NMR (500 MHz, CDC13) δ 4,4 (s, 2H) , 5,3 (s, 2H) , 6,3-7,0 (br s, 1H) , 7,3-7,4 (m, 5H) , 7,5 (d, 2H) , 7,9 (d, 2H) , 9,3- • · · : ·] 35 9,6 (br s, 1H) .
• · 13C-NMR (125 MHz, CDC13) : amidiinihiili: δ 167,5.
119812 44 (iv) 4-aminometyyli-l-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidino)- bentseeni (H-Pab(Z)) 26,3 g (100 mmol) trifenyylifosfiinia lisättiin huoneenläm-5 pötilassa 4-(bentsyylioksikarbonyyliamidino)bentsyyliatsidiin edellä olevasta kohdasta (iii) liuotettuna 160 ml:aan THFrää. 16 tunnin kuluttua lisättiin vielä 6,6 g (25 mmol) trifenyy-lifosfiinia, ja liuoksen annettiin seistä 4 tunnin ajan ennen liuottimen poistamista tyhjössä. Jäännös liuotettiin metylee-10 nikloridiin, ja uutettiin 2 M HCl:llä. Vesifaasi pestiin metyleenikloridilla ja eetterillä, ja säädettiin seuraavaksi alkaliseen pH-arvoon 3,75 M natriumhydroksidiliuoksella. Uutettiin metyleenikloridilla, minkä jälkeen kuivattiin (K2C03) ja poistettiin liuotin tyhjössä, jolloin saatiin 20 g 15 (kokonaissaanto syaanibentsyylibromidista lähtien on 28 %) keltaista öljyä, joka kiinteytyi seisoessaan.
XH-NMR (500 MHz, CDC13) ; δ 1,2 - 2,2 (br s, 2H) , 3,8 (s, 2H) , 5,2 (s, 2H) , 7,2 - 7,35 (m, SH), 7,4 (d, 2H) , 7,8 (d, 2H) , 20 9,1-9,6 (br s, 1H).
• m :,V 13C-NMR (125 MHz, CDC13) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 164,6 ja 168,17.
• · • · · • · 1 · : 25 Η-Pig (Z) 2 ··· · : (i) 4-(tert-butyylioksikarbonyyli-aminometyyli)piperidiini * · · ·
Liuokseen, jossa oli 17,7 g 4-tert-butyylioksikarbonyyli- • · · aminometyylipyridiiniä 125 ml:ssa MeOH:ta lisättiin 2 g 5- .. %:ista Rh/Al203:a, ja seosta hydrogenoitiin 0,34 MPa:ssa yön • · · yli· 1H-NMR osoitti, että hydrogenointi oli epätäydellinen.
• 1 *·”1 Sen vuoksi katalysaattori suodatettiin pois ja liuotin pois- ·;··: tettiin tyhjössä ja jäännös liuotettiin 100 ml:ssa etikka- ·;··· happoa, lisättiin 2 g 5-%:ista Rh/Al203:a, ja seosta hydro- genoitiin 4 päivän ajan 0,34 MPaissa. Katalysaattori suoda- • · · • 35 tettiin pois, ja enin osa etikkahaposta poistettiin tyhjössä.
* 1 Kun jäännökseen oli lisätty vielä 50 ml vettä, seos säädet tiin alkaliseen pH-arvoon 5 M NaOH:lla, ja vesifaasi 119812 45 uutettiin 1 χ 200 + X x 100 ml :11a CH2Cl2:ta. Yhdistetty orgaaninen faasi pestiin 25 ml :11a vettä, ja kuivattiin (MgS04) . Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 17,2 g ruskehtavaa öljyä, joka liuotettiin 50 ml:aan dietyylieetteriä. 5 Lisättiin 200 ml pentaania, jolloin saatiin saostuma, joka suodatettiin pois, jolloin saatiin 7,7 g ruskeaa jauhetta. Emäliuos haihdutettiin, jolloin saatiin 7 g valkoista öljyä. Ruskea jauhe liuotettiin 100 ml:aan EtOAc:tä, ja orgaaninen faasi pestiin 1 x 50 ml :11a + 1 x 25 ml :11a 1 M KHS04:ää.
10 Yhdistetty hapan faasi säädettiiin alkaliseen pH-arvoon 2 M NaOH: 11a, ja uutettiin 1 x 200 + 1 x 75 ml:11a EtOAc:tä. Yhdistetty orgaaninen faasi kuivattiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 5,2 g otsikkoyhdistettä valkoisena jauheena.
15 Edellä emäliuoksesta saatu valkoinen öljy käsiteltiin samalla tavalla, jolloin saatiin vielä 3,4 g tuotetta. Kokonaissaanto 40 %.
1H-NMR (500 MHz, CDC13, kahden rotameerin seos, 3:1): pää- 20 asiallinen rotameeri: δ 1,11 (dq, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,49 - 1,60 (m, 1H), 1,63 - 1,70 (m, 2H), 2,58 (dt, 2H), 2,93 - 3,03 • · \V (m, 2H) , 3,07 (m, 2H) , 4,75 (bs, 1H (NH) ) .
f · • Φ · • ·· Φ * ;Y: Vähäisemmästä rotameeristä tulevat erottuneet signaalit näky- • ;*: 25 vät kohdassa δ 1,21 (dq) ja 1,91 (dt) .
··· · · • · · ··* s (ii) Boc-Pig(Z)2 * « »
Liuokseen, jossa oli 2 g (9,33 mmol) 4-(tert-butyylioksikar-. . bonyyliaminometyyli)piperidiini 60 ml:ssa CH3CN:ää, lisättiin 30 3,34 g (9,33 mmol) N,N-(dibentsyylioksikarbonyyli)metyyli- • · **;·* isotioureaa, ja seosta sekoitettiin 22 tunnin ajan 60 °C:ssa.
*:··; Liuotin haihdutettiin, ja jäännös liuotettiin EtOAc:hen.
·;··· Orgaaninen faasi pestiin 2 x 20 ml:11a 1 M KHS04:ää, 1 x 20 ml :11a vettä, 1 x 20 ml :11a suolaliuosta ja kuivattiin • · » • *] 35 (MgS04) . Liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen flash-kromato- ' * grafoitiin käyttämällä eluenttina petrolieetteri/EtOAc:tä (1/1), jolloin saatiin 2,43 g (50 %) haluttua tuotetta.
119812 46 ^-NMR (500 MHz, CDC13) : Jotkin signaalit, erityisesti pipe-ridiinirenkaassa, ovat selektiivisesti leventyneet molekyy-linsisäisestä vaihtoprosessista johtuen. Tämä on erityisen 5 selvää piperidiinirenkaan 2- ja 6-CH2 -ryhmillä, joilla on laaja huippu alueella 3,7 - 4,5 ppm.
δ 1,19 - 1,31 (m, 2H) , 1,43 (s, 9H) , 1,63 - 1,80 (m, 3H) , 2,66 - 3,05 (m, 4H), 3,7 - 4,5 (bs, 2H), 4,65 (bt, 1H(NH)), 5.13 (s, 4H), 7,2 - 7,4 (m, 10H), 10,5 (bs, 1H(NH)).
10 (iii) Η-Pig(Z)2
Liuosta, jossa oli 163 mg (0,31 mmol) Boc-Pig(Z)2:ta 5 ml:ssa EtOAc:tä, ja joka oli kyllästetty HCl(g):llä, sekoitettiin ympäristön lämpötilassa 3 tunnin ja 20 min ajan. Liuotin 15 haihdutettiin, ja jäännös liuotettiin 30 ml:aan CH2Cl2:ta. Orgaaninen faasi pestiin 5 ml:11a 2 M NaOH:ta, 1x5 ml:11a vettä, 1x5 ml:11a suolaliuosta ja kuivattiin (MgS04) . Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 100 mg (76 %) otsikko-yhdistettä.
20 1H-NMR (500 MHz, CDC13) : Jotkin signaalit, erityisesti pipe- • · *.·.· ridiinirenkaassa, ovat selektiivisesti leventyneet molekyy- !,**: linsisäisestä vaihtoprosessista johtuen. Tämä on erityisen ϊ selvää piperidiinirenkaan 2- ja 6-CH2-ryhmillä, joilla on • 25 laaja huippu alueella 3,7-4,5 ppm.
·· · : δ 1,18 - 1,37 (m, 2H) , 1,46 - 1,63 (m, 1H) , 1,68 - 1,83 (m, !·!·! 2H) , 2,57 (d, 2H) , 2,86 - 3,03 (m, 2H) , 3,7 - 4,5 (bs, 2H) , • f · 5.13 (s, 4H), 7,2 - 7,4 (m, 10H).
• · • · · ;.* 30 4-aminometyyli-l-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidino)syklohek- • · *···* saani (H-Pac(Z) x 2HC1) .
*:*·: (i) N-[N-4-(bentsyylioksikarbonyyli)amidinobentsyyli]-tert- ····· butyylikarbamaatti 1,466 g (6,7 mmol) (Boc)20:ta lisättiin sekoitettuun jääkyl-* \ 35 mään liuokseen, jossa oli 1,81 g (6,4 mmol) 4-(bentsyyliok sikarbonyyli) amidinobentsyyliamiinia ja 1 ml (7,1 mmol) tri-etyyliamiinia 25 ml:ssa metyleenikloridia. 20 min kuluttua 119812 47 lisättiin lisää metyleenikloridia, ja seos pestiin 5-%:isella etikkahapolla ja 10-%:isella natriumkarbonaattiliuosta. Kuivattiin (magnesiumsulfaatti), ja liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin jäljelle jäi jäännös, joka voitiin kiteyttää me-5 tyleenikloridi/heksaanista. Saanto oli 1,66 g (68 %).
(ii) N-[N-4-amidinobentsyyli]tert-butyylikarbamaatti Seosta, jossa oli 1,60 g (4,2 mmol) N-[4-(bentsyylioksikar-bonyyli)amidinobentsyyli]-tert-butyylikarbamaattia, 5 ml 10 etikkahappoa ja 160 mg 10-% Pd/C:tä 50 ml:ssa etanolia, sekoitettiin 2 tunnin ajan vetyilmakehässä. Katalysaattori poistettiin suodattamalla seliitin läpi, ja liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin saatiin asetaattiotsikkoyhdiste kvantitatiivisella saannolla.
15 (iii) N-[4-amidinosykloheksyylimetyyli]-tert-butyylikarbamaatti 17 mmol N-[4-amidinobentsyyli]-tert-butyylikarbamaatin ase-taattia hydrogenoitiin 20 tunnin ajan 3,4 MPa:ssa 100 ml:ssa 20 metanolia, kun läsnä oli 863 mg 5-%:ista Rh/Al203:a. Katalysaattori poistettiin suodattamalla, ja liuotin poistettiin · i *.V tyhjössä. Jäännös liuotettiin veteen, ja liuos säädettiin • ♦ \1·· natriumhydroksidilla emäksiseen pH-arvoon. Seuraavaksi uu- tettiin metyleenikloridilla, yhdistetyt orgaaniset faasit • :1· 25 kuivattiin (kaliumkarbonaatti) , ja liuotin poistettiin tyh- «·· · .1. jössä, jolloin saatiin 3,8 g (87 %) otsikkoyhdistettä.
··· · » · · 119812 48 metyleenikloridilla, joka sisältää kasvavat määrät etyyliasetaattia, jolloin saatiin 2,49 g (80 %) otsikkoyhdistettä.
(v) 4-aminometyyli-l-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidino)- 5 sykloheksaani (H-Pac(Z) x 2HC1).
Kloorivetyä ohjattiin liuoksen läpi, jossa oli 2 g (5,1 mmol) N-[4-(bentsyylioksikarbonyyli)amidinosykloheksyylimetyyli]-tert-butyylikarbamaattia 40 ml:ssa etyyliasetaattia. 10 min kuluttua lisättiin metanolia, ja kun oli poistettu jonkin 10 verran liuotinta tyhjössä, otsikkoyhdisteen dihydrokloridi kiteytyi.
4-aminometyy1i-1-(N-bentsyy1ioks ikarbonyy1iamidino) piperi-diini (H-Pig(Z) x HC1) 15 (i) 4-(N-tert-butyylioksikarbonyyliaminometyyli)-1-(N-bent- syylioksikarbonyyliamidino)piperidiini (Boc-Pig(Z)) 7,8 g (36,4 mmol) 4-(N-tert-butyylioksikarbonyy- liaminometyyli) piperidiiniä ja 8,98 g (40 mmol) N-bentsyyli- oksikarbonyyli-S-metyyliisotioureaa sekoitettiin 25 ml:aan 20 etanolia. Seosta kuumennettiin 6 tunnin ajan 60 - 70 °C:ssa, ja jätettiin 2 päiväksi huoneenlämpötilaan. Liuotin haihdu- V.: tettiin, ja jäännös liuotettiin CH2Cl2:een. Orgaaninen kerros • · \*·* pestiin kahdesti 0,3 M KHS04:llä ja kerran suolaliuoksella.
Yhdistetty orgaaninen kerros kuivattiin (Na2S04), suodatet-: :*: 25 tiin ja haihdutettiin. Raakatuote puhdistettiin flash-kroma- • tografialla käyttäen eluenttina vaiheittaista CH2Cl2/MeOH- • ·· t gradienttia (100/0,97/3, 95/5, 90/10), jolloin saatiin 5,22 g (37 %) otsikkoyhdistettä.
« · • · · M 30 (ii) H-Pig(Z) x HC1 (4-aminometyyli-l-(N-bentsyylioksikar- • · **;·* bonyyl iamidino) piper idiini *:*·ϊ 5,22 g (13,5 mmol) Boc-Pig(Z) .-aa liuotettiin 100 ml:aan ·:·*! etyyliasetaattia, joka oli kyllästetty HCl(g):llä. Seoksen annettiin seistä 1 tunnin ajan, ja haihdutettiin sitten.
• · * *. 35 Jäännös liuotettiin veteen ja pestiin dietyylieetterin ja etyyliasetaatin seoksella. Vesikerros pakastekuivattiin, jolloin saatiin 4,0 g (91 %) otsikkoyhdistettä.
49 119812 hl-NMR (D20, 300 MHz): δ 1, 40 - 1,60 (m, 2H) , 2,05 (bd, 2H) , 2,19 (m, 1H) , 3,07 (d, 2H) , 3,34 (bt, 2H) , 4,08 (bd, 2H) , 5,40 (S, 2H), 7,5 - 7,63 (m, 5H) 5 MS m/z 291 (M++l) 4-aminoetyy1i-1-bentsyy1ioks ikarbonyy1iamidinopiperidi ini (H-Rig(Z)) 10 (i) l-bentsyylioksikarbonyyliamidino-4-hydroksietyylipiperi- diini
Seosta, jossa oli 6,2 g (0,028 mol) 4-hydroksietyylipiperi-diiniä ja 3,6 g (0,028 mol) N-bentsyylioksikarbonyyli-S-metyyli-isotioureaa 50 ml:ssa asetonitriiliä, refluksoitiin 15 yön yli. Haihdutettiin ja flash-kromatografoitiin silikagee-lillä etyyliasetaatilla, jolloin saatiin 3,5 g (41 %) otsik-koyhdistettä.
1H-NMR (300 MHz, CDC13) : δ 1,1 - 1,85 (m, 7 H), 2,83 (bt, 2 20 H), 4,70 (bt, 2H), 4,18 (bd, 2H), 5,12 (s, 2H), 6,9 - 7,2 (m, 2H), 7,2 - 7,5 (m, 5H).
• · • · · * 1 « • • · (ii) l-bentsyylioksikarbonyyliamidino-4-mesyylioksietyylipi-:Y: peridiini ; 25 Jäällä jäähdytettyyn liuokseen, jossa oli 3,50 g (0,0115 mol) ·»« t 35 • · ;1. l-bentsyylioksikarbonyyliamidino-4-hydroksietyylipiperidii- »·1 · niä, 1,15 g (0,0115 mol) trietyyliamiinia 40 ml:ssa metylee-nikloridia ja 10 ml tetrahydrofuraania, lisättiin tipoittain t·. 1,30 g (0,115 mol) mesyylikloridia. Reaktioseoksen annettiin • · · \t1 30 sekoittua 1 tunnin ajan. Seos kaadetiin veteen, ja pidettiin • · *·;·1 orgaaninen kerros. Vesikerros uutettiin metyleenikloridilla, *:·1: ja yhdistetyt orgaaniset kerrokset pestiin vedellä, kuivat- ·;··· tiin (Na2504) ja haihdutettiin. Tuotetta käytettiin seuraa- vassa vaiheessa enempää puhdistamatta. Saanto: 4,4 g (100 %) .
• · 119812 50 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,15 - 1,3 (m, 2H) , 1,65 - 1,8 (m, 5H) , 2,84 (bt, 2 H), 3,01 (s, 3H) , 4,20 (bd, 2H) , 4,27 (t, 2H), 5,12 (S, 2H), 7,1 - 7,5 (m, 7H).
5 (iii) 4-atsidoetyyli-l-bentsyylioksikarbonyyliamidinopiperi-diini 100 ml:aan dimetyyliformamidia liuotettiin 4,4 g (0,0115 mol) raakaa 1-bent syy1ioks ikarbonyyliamidino-4-mesyy1ioks ietyyli-piperidiiniä, ja lisättiin 4,5 g (0,069 mol) natriumatsidia. 10 Seosta kuumennettiin 2,5 tunnin ajan 100 °C:ssa. Sitten se kaadettiin veteen, ja uutettiin kolmesti etyyliasetaatilla. Yhdistetty orgaaninen faasi pestiin vedellä, kuivattiin (Na2S04) ja haihdutettiin. Jäännös flash-kromatografoitiin silikageelillä käyttäen eluenttina etyyliasetaatti/heptaania 15 1/1. Saanto: 3,0 g (79 %).
1H-NMR (500 MHz, CDC13): δ 1,20 (dq, 2H) , 1,5 - 1,8 (m, 5 H), 2,85 (dt, 2 H), 3,35 (t, 2 H), 4,22 (bd, 2 H), 5,13 (s, 2 H), 6,9 - 7,2 (b, 2 H), 7,2 - 7,45 (m, 5H).
20 (iv) 4-aminoetyyli-l-bentsyylioksikarbonyyliamidinopiperi- :.V diini (H-Rig(Z)) * · :.*·· 30 ml:aan vettä lisättiin 0,40 g 10-%:ista Pd/C:tä. Natrium- • · borohydridiä, 1,0 g (0,031 mol), liuotettiin 30 ml:aan vettä, ! ϊ*ϊ 25 ja lisättiin varovasti sekoitettuun ja jäällä jäähdytettyyn • ;*· Pd/C:n ja veden suspensioon. 4-atsidoetyyli-l-bentsyylioksi- **· · karbonyyliamidinopiperidiiniä, 2,9 g (8,8 mmol) , liuotettiin 80 ml:aan tetrahydrofuraaniua, ja tämä liuos lisättiin t· . tipoittain edellä mainittuun jäällä jäähdytettyyn vesisus- * · · 30 pensioon. Kun oli sekoitettu 4 tuntia huoneenlämpötilassa,
**;·' seos jäähdytettiin jälleen jäällä, ja lisättiin 30 ml 2 M
HCl:ää. Seos suodatettiin seliitin läpi, ja seliittiä ·:·*: huuhdeltiin vielä vedellä. Tetrahydrofuraani haihdutettiin, ja vesifaasi pestiin etyyliasetaatilla. Vesifaasi säädettiin • · * *. 35 2 M NaOH:lla alkaliseen pH-arvoon, ja uutettiin kolmesti metyleenikloridilla. Yhdistetty orgaaninen faasi pestiin 51 119812 vedellä, kuivattiin (Na2S04) ja haihdutettiin. Tuotetta käytettiin seuraavassa vaiheessa enempää puhdistamatta.
^-NMR (500 MHz, CDC13) δ 1,1 - 1,5 (m, 6H) , 1,55 - 1,65 (m, 5 1H), 1,73 (bd, 2 H), 2,72 (b, 2 H), 2,81 (dt, 2 H), 4,20 (bd, 2 H), 5,12 (S, 2 H), 6,9 - 7,2 (b, 2 H), 7,2 - 7,5 (m, 5 H).
(3RS)-1-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidino)-3-aminometyyli-pyrrolidiini 10 (i) (3 RS)-3 -hydroks imetyy1ipyrrolidi ini 16,4 g (0,0857 mol) (3RS)-l-bentsyyli-3-hydroksimetyylipyr-rolidiiniä (katso H-(R,S)Hig(Z) (i) yllä) sekoitettiin 1,6 g:n kanssa Pd/C:tä (10-%), 5 ml:n kanssa vettä ja 150 ml:n kanssa etanolia, ja seosta hydrogenoitiin yön yli 0,26 MPa:-15 ssa. Kun oli suodatettu hyflon läpi ja liuotin haihdutettu, 1H-NMR osoitti, ettei reaktio ollut täydellinen. Hydro-genointia jatkettiin 3 päivän ajan 0,26 MPa:ssa 1,6 g:11a Pd/C:tä (10-%) 5 ml:ssa vettä/150 ml:ssa etanolia, jolloin pelkistys eteni loppuun. Suodatettiin hyflon läpi ja liuotin 20 haihdutettiin, jolloin tuote saatiin kvantitatiivisella saannolla.
• · • « * • » · • · • · *,*·· (ii) (3RS)-1-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidino)-3-hydroksi- :V: metyylipyrrolidiini • :*; 25 1,01 g (0,01 mol) (3RS)-3-hydroksimetyylipyrrolidiiniä ja ·«· « ϊ .*. 2,29 g (0,011 mol) N-bentsyylioksikarbonyyli-O-metyyli-iso- • · · ureaa liuotettiin (amiini ei ole kovin liukoinen) tolueeniin, • · · ja kuumennettiin 3 tunnin ajan 60 °C:seen, minkä jälkeen , . sekoitettiin huoneenlämpötilassa yön yli. Seos haihdutettiin, · · - 30 ja Hi-NMR osoitti, ettei reaktio ollut edennyt loppuun. Siksi ft · *·“* seos liuotettiin 15 ml:aan asetonitriiliä, ja kuumennettiin 3 *:**: tunnin ajan 60 °C:seen, minkä jälkeen sekoitettiin yön yli ····· huoneenlämpötilassa. Liuotin haihdutettiin, ja seos liuo- tettiin CH2Cl2:een, pestiin kerran vedellä, kuivattiin • · « • \ 35 (Na2S04) , suodatettiin 3a haihdutettiin. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä käyttämällä eluenttina CH2Cl2/MeOH:ta 95/5, jolloin saatiin 0,70 g (25 %) tuotetta.
119812 52 MS m/z 278 (M++l) (iii) (3RS)-1-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidino)-3-mesyy-1ioks imetyy1ipyrrolidi ini 5 0,7 g (2,53 mmol) (3RS)-1-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidino)- 3-hydroksimetyylipyrrolidiiniä ja 0,70 ml (5,05 mmol) trietyyliamiinia liuotettiin 15 ml:aan dietyylieette-ri/CH2Cl2ita 1/1, ja seos jäähdytettiin 0 °C:seen. Lisättiin hitaasti 0,25 ml (3,29 mmol) metaanisulfonyylikloridia 3 10 ml:ssa dietyylieetteriä, ja reaktioseosta sekoitettiin 3 tunnin ajan 0 °C:ssa. Liuotin haihdutettiin, ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin, ja uutettiin 0,3 M KHS04-li-uoksella. Vesikerros pestiin kerran CH2Cl2:lla. Vesikerros säädettiin neutraaliin pH-arvoon 10 M NaOtt-liuoksella, ja 15 uutettiin kahdesti CH2Cl2:lla. Yhdistetty orgaaninen kerros kuivattiin (Na2S04) , suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 0,450 g (50 %) otsikkoyhdistettä.
(iv) (3RS)-1-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidino)-3-atsidome-20 tyylipyrrolidiini 0,450 g (1,27 mmol) (3RS)-1-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidi-no)-3-mesyylioksimetyylipyrrolidiinia ja 0,124 g (1,9 mmol) • 1 2 3 *.1·· natriumatsidia liuotettiin 10 ml:aan dimetyyliformamidia, ja kuumennettiin 4 tunnin ajan 60 °C:seen, minkä jälkeen sekoi- • 25 tettiin huoneenlämpötilassa yön yli. Lisättiin vettä, ja seos ·1 · .1. uutettiin kahdesti tolueeni/etyyliasetaatilla 2/1. Yhdistetty 2 *·« · orgaaninen kerros kuivattiin (Na2S04) , suodatettiin ja haihdutettiin. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatogra-.. fiällä käyttämällä eluenttina CH2Cl2/MeOH:ta 95/5, jolloin 30 saatiin 0,262 g (68 %) tuotetta.
• t • · 3 * ·:··: MS m/z 303 (M++l) • · (v) (3RS)-1-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidino)-3-aminometyy- • · · * \ 35 lipyrrolidiini (H-(R,S)Nig(Z)) 32 mg Pd/C;tä (10 %) ja 2,6 ml H20:ta sekoitettiin, ja ohjattiin läpi pientä typpivirtaa. Lisättiin 98 mg NaBH4:tä 2,6 119812 53 ml:ssa H20:ta, minkä jälkeen lisättiin hitaasti 262 mg (0,87 mmol) (3RS)-1-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidino)-3-mesyyli-oksietyylipyrrolidiiniä liuotettuna 7 ml:aan MeOH:ta. Seoksen annettiin seistä 1 tunnin ajan. Lisättiin 5 ml IM HCl:ää, ja 5 seos suodatettiin hyflon läpi. Orgaaninen liuotin haihdutettiin alennetussa paineessa, ja jäljelle jäänyt vesikerros pestiin kerran etyyliasetaatilla, säädettiin alkaliseen pH-arvoon NaOH-liuoksella, ja uutettiin useita kertoja CH2Cl2:lla. Yhdistetty orgaaninen kerros kuivattiin 10 (Na2S04) , suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 130 mg (54 %) tuotetta.
MS rn/z 277 (M++l) (3RS)-1-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidino)-3-aminoetyylipyr-15 rolidiini (H-(R,S)Hig(Z)) (i) (3RS)-l-bentsyyli-3-hydroksimetyylipyrrolidiini
25,2 g (0,1063 mol) (3RS)-1-bentsyyli-2-okso-4-metoksikar-bonyylipyrrolidiiniä lisättiin hitaasti suspensioon, jossa oli 6,22 g litiumaluminiumhydridiä 160 ml:ssa dietyylieette-20 riä argonilmakehässä. Seosta sekoitettiin yön yli, ja kuumennettiin sitten 1 tunnin ajan refluksoiden. Reaktioseos jääh-dytettiin huoneenlämpötilaan, ja lisättiin 0,2 g Na2S04 X
• · *.**: 10H2O:ta, minkä jälkeen lisättiin hitaasti, tässä järjestyksiä sessä, 6 ml vettä, 18 ml 3,75 M NaOH-liuosta ja 6 ml vettä.
• 25 Suspensio kuivattiin ylimääräisestä vedestä Na2S04/selii-··· · • j*; tiliä, suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin (20,3 g) tuotetta.
• · · •
Hl-NMR (CDC13, 300 MHz): δ 1,64 - 1,77 (m, 1H) , 1,93 - 2,07 *:.V 30 (m, 1H) , 2,27 - 2,40 (m, 2H) , 2,51 (dd, 1H) , 2,62 (dd, 1H) , • » *;** 2,82 (m, 1H) , 3,52 (dd, 1H) , 3,59 (s, 2H) , 3,67 (dd, 1H) , *:··: 7,15 - 7,40 (m, 5H) • « (ii) (3RS)-l-bentsyyli-3-kloorimetyylipyrrolidiini * *, 35 Refluksoituvaan liuokseen, jossa oli 15,3 g (0,08 mol) (3RS)- l-bentsyyli-3-hydroksimetyylipyrrolidiiniä 220 ml:ssa CDCI3:a, lisättiin hitaasti liuos, jossa oli 330 ml tionyy- 119812 54 likloridia 60 ml:ssa CDCl3:a, ja refluksointia jatkettiin 1 tunnin ajan. Seos haihdutettiin, ja jäännös liuotettiin veteen. Vesikerros pestiin etyyliasetaatilla, ja säädettiin sitten alkaliseen pH-arvoon 0,2 M NaOH-liuoksella. Vesikerros 5 uutettiin kolmesti etyyliasetaatilla, ja yhdistetty orgaaninen kerros kuivattiin (Na2S04) , suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin tuote kvantitatiivisella saannolla (16,8 g).
10 1H-NMR (CDC13, 300 MHz): δ 1,55 (m, 1H) , 2,05 (m, 1H) , 2,38 (dd, 1H), 2,48 - 2,64 (m, 3H; siitä 2,58 (t, 2H))), 2,73 (dd, 1H), 3,51 (d, 2 H), 3,60 (s, 2H), 7,2 - 7,4 (m, 5H) (iii) (3RS)-l-bentsyyli-3-syaanimetyylipyrrolidiini 15 16,8 g (0,08 mol) (3RS)-l-bentsyyli-3-kloorimetyylipyrroli- diinia ja 5,88 g (0,12 mol) natriumsyanidia liuotettiin 250 ml:aan dimetyylisulfoksidia. Seosta sekoitettiin 2 päivän ajan 60 °C:ssa ja huoneenlämpötilassa yhden viikon ajan. Lisättiin vettä, ja seos uutettiin kolmesti etyyliasetaatil-20 la. Yhdistetty orgaaninen kerros pestiin suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04) , suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin V.· saatiin 14,7 g (92 %) tuotetta.
• · * * * • ·· • * :Y: 1H-NMR (CDCI3, 500 MHz): δ 1,55 (m, 1H) , 2,13 (m, 1H) , 2,35 ; 25 (dd, 1H) , 2,42 (t, 2H) , 2,44 - 2,59 (m, 2H) , 2,65 (m, 1H) , ·· · : 2,73 (dd, 1H) , 3,61 (s, 2H) , 7,2 - 7,4 (m, 5H) ··· · ··· • · · ### * (iv) (3RS)-l-bentsyyli-3-aminoetyylipyrrolidiini 14,7 g (0,0734 mol) (3RS)-l-bentsyyli-3-syaanimetyylipyrro- • · · 30 lidiinia liuotettuna 220 ml:aan dietyylieetteriä lisättiin • · *···* hitaasti suspensioon, jossa oli 2,94 g litiumaluminiumhydri- *:*·: diä 74 ml:ssa dietyylieetteriä argonilmakehässä. Seosta se- ·:··· koitettiin yön yli, ja seokseen lisättiin 6 ml vettä, 18 ml 3,75 M NaOH-liuosta ja 6 ml vettä. Suspensio kuivattiin yli-* ** 35 määräisestä vedestä Na2S04/seliitillä, suodatettiin imupul- lolla, ja haihdutettiin, jolloin saatiin 14,84 g (99 %) tuotetta.
119812 55 1H-NMR (CDC13, 300 MHz): δ 1,41 (m, 1Η), 1,51 (q, 2H) 1,90 - 2,10 (m, 2H; siltä 2,05 (dd, 1H) ) ) , 2,18 (m, 1H) , 2,43 (m, 1H) , 2,55 - 2,73 (m, 3H) , 2,80 (näennäinen t, 1H) , 3,58 5 (näennäinen d, 2H), 7,15 - 7,4 (m, 5H) (v) (3RS)-l-bentsyyli-3-(N-tert-butyylioksikarbonyyliami- noetyy1i) pyrrolidi ini
Seokseen, jossa oli 14,84 g (0,0726 mol) (3RS)-l-bentsyyli-3-10 aminoetyylipyrrolidiiniä, 72,6 ml 1 M NaOH-liuosta, 76 ml vettä ja 145 ml THF:ää, lisättiin 17,44 g (0,08 mol) di-tert-butyylidikarbonaattia, ja seosta sekoitettiin yön yli. Liuos konsentroitiin, ja uutettiin kolmesti etyyliasetaatilla. Yhdistetty orgaaninen kerros pestiin suolaliuoksella, kuivat-15 tiin (Na2S04) , suodatettiin ja haihdutettiin. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä käyttämällä eluenttina vaiheittaista CH2Cl2/MeOH-gradienttia (95/5, 90/10), jolloin saatiin 14,69 g (80 %) tuotetta.
20 1H-NMR (CDCI3, 300 MHz): δ 1,25 - 1,65 (m, 12H; siitä 1,40 (S, 9H) ) , 1,90 - 2,25 (m, 3H) , 2,46 (m, 1H) , 2,67 (m, 1H) , \0 2,80 (näennäinen t, 1H) , 3,09 (m, 2H) , 3,59 (s, 2H) , 4,60 (bs, NH) , 7,15 - 7,35 (m, 5H) • · • · · • f · • * • ;*; 25 (vi) (3RS)-3-(N-tert-butyylioksikarbonyyliaminoetyyli)pyrro- ··· · : lidiini • · · 3,1 g (0,01 mol) (3RS)-l-bentsyyli-3-(N-tert-butyylioksikar- • · · bonyyliaminoetyyli)pyrrolidiini hydrogenoitiin 0,28 MPa:ssa 0,6 g:lla Pearlmanin katalysaattoria (Pd(0H)2) 40 ml:ssa • · · *·[** 30 etanolia (95 %) yön yli. Katalysaattori suodatettiin selii- *···' tiliä, 3a liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen ^-H-NMR osoit- ·;··· ti, ettei pelkistys ollut täydellinen. Sen vuoksi lisättiin vielä kerran 0,6 g Pearlmanin katalysaattoria 40 ml:ssa etanolia (95-%),e ja seosta käsiteltiin H2-ilmakehässä 0,28 * · · • ·[ 35 MPa:ssa yön yli. Suodatettiin seliitin läpi, ja liuotin * * haihdutettiin, jolloin tuote saatiin kvantitatiivisella saannolla (2,18 g).
119812 56 MS m/z 214 (M+) (vii) (3RS)-1-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidino)-3-amino- etyylipyrrolidiini (H-(R,S)Hig(Z)) 5 2,18 g (0,0102 mmol) (3RS)-3-(N-tert-butyylioksikarbonyy- liarainoetyyli)pyrrolidiiniä ja 2,81 g (0,0125 mol) N-bent-syylioksikarbonyyli-S-metyyli-isotioureaa liuotettiin 30 ml:aan tolueenia, ja kuumennettiin 8 tunnin ajan 60- 70 °C:seen, minkä jälkeen sekoitettiin 1 päivän ajan huoneen-10 lämpötilassa. Lisättiin 0,3 M KHS04-liuosta, ja vesikerros pestiin tolueenin ja etyyliasetaatin seoksella, ja annettiin olla 2 päivää, minkä aikana Boc-ryhmä irtosi. Hapan vesifaasi säädettiin alkaliseen pH-arvoon, ja uutettiin neljästi CH2CI2:11a. Yhdistetty orgaaninen kerros kuivattiin (Na2S04) , 15 suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 2,0 g (51 %) otsikkoyhdistettä.
^-NMR (CDCI3, 330 K, 300 MHz): δ 1,45 - 1,7 (m, 3H) , 2,07 (m, 1H), 2,26 (m, 1H), 2,74 (t, 2H), 3,00 (näennäinen t, 1H), 20 3,33 (näennäinen q, 1H) , 3,45 - 3,80 (m, 2H), 5,12 (s, 2H), 6,72 (bs, 2 NH), 7,15 - 7,45 (m, 5H) • f * · · · · • * :/.j (4R5)-1,3-diatsa-2-tosyyli-imino-4-aminoetyylisykloheksaani :Y; (9-(R,S)Itp(Ts)) • · ! ;*; 25 (i) (4RS) -1,3-diatsa-2-tosyyli-imino-4-karboksisykloheksaani i·* · : .·. Valmistettiin käyttämällä samaa menetelmää, joka kuvataan • · · "Y julkaisussa Journal of Org. Chem., s. 46, 1971.
• · * .. (ii) (4RS)-1,3-diatsa-2-tosyyli-imino-4-hydroksimetyylisyk- * · · *·*·* 30 loheksaani * « · • · *···* 12,9 g (345 mmol) LiAlH4:ta lisättiin varovasti kylmään sus- ·:··· pensioon (jäähaudelämpötila) , jossa oli 9,9 g (33 mmol) ....i (4RS) -1,3-diatsa-2-tosyyli-imino-4-karboksisykloheksaania 330 ml:ssa kuivaa THF:ää. Reaktiota sekoitettiin huoneenlämpö- • · · * 35 tilassa yön yli. Reaktioseos käsiteltiin teoksen Fieser & * * Fieser mukaan, esimerkiksi lisäämällä seokseen 12,9 g vettä, 38,7 g 3,75 M NaOH:ta, 12,9 g vettä, Na2S04:ää, CH2Cl2:ta ja 119812 57 seliittiä, ja suodattamalla. Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 7,0 g (75 %) haluttua tuotetta.
MS m/z 284 (M++l) 5 (iii) (4RS)-1,3-diatsa-2-tosyyli-imino-4-mesyylioksimetyyli-sykloheksaani 2.9 ml MsCl.-ää (37,1 mmol) lisättiin varovasti kylmään (jää-haudelämpötila) susoensioon, jossa oli 7,0 g (24,7 mmol) 10 (4RS)-1,3-diatsa-2-tosyyli-imino-4-hydroksimetyylisyklohek- saania 6,9 ml:ssa (49,4 mmol) trietyyliamiinia ja 125 ml:ssa CH2C12: ta. Lisättiin vettä 1 tunnin 15 min kuluttua, ja orgaaninen faasi erotettiin, kuivattiin (Na2S04) , suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä kvanti-15 tatiivisella saannolla.
MS M/z 362 (M++l)) (iv) (4RS)-1,3-diatsa-2-tosyyli-imino-4-syaanimetyylisyklo-20 heksaani 8.9 g (24,7 mmol) (4RS)-1,3-diatsa-2-tosyyli-imino-4-mesyy- · :.V lioksimetyylisykloheksaania ja 1,3 g (27,2 mmol) NaCN:ää • · ϊ/·· liuotettiin 75 ml:aan DMS0:ta. Kun oli sekoitettu 60 tunnin :Y: ajan 40 °C:ssa, lisättiin lisämäärä 0,31 g (6 mmol) NaCN:ää, » · • ;*; 25 ja liuosta sekoitettiin 3 tunnin ajan 65 °C:ssa. Lisättiin «·* · : .*. 150 ml vettä, ja liuoksesta saostui kiteitä. Ne suodatettiin • · · J Ml · pois ja kuivattiin, jolloin saatiin 5,4 g (75 %) haluttua • * · tuotetta.
• · • · * 30 MS m/z 293 (M++l) • · Φ m ··· *;·*: (4RS) -1,3-diatsa-2-tosyyli-imino-4-aminoetyylisykloheksaani (H- (R, S) Itp (TS) )
Lisättiin varovasti 935 mg LiAlH4:ää jäähdytettyyn (jää- • · » • \ 35 haude lämpötila) suspensioon, jossa oli 2,4 g (8,2 mmol) (4RS)-1,3-diatsa-2-tosyy1i-imino-4-syaanimetyy1isykloheksaa-nia 90 ml:ssa THF:ää. Kun oli sekoitettu 2 tunnin ajan, 119812 58 lisättiin 1 g H20:ta# 3 g 3,75 M NaOH:ta, 1 g H20:ta, Na2S04:ää, seliittiä ja CH2Cl2:ta. Seos suodatettiin, ja liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin saatiin 2,2 g (90 %) haluttua tuotetta.
5 1H-NMR (500 MHz, MeOD) ; δ 1,52 - 1,71 (m, 3H) , 1,88 - 1,96 (m, 1H) , 2,37 (s, 3H) , 2,64 - 2,73 (m, 2H) , 3,2-3,4 (m, 2H, osaksi päällekkäin liuotinsignaalin kanssa), 3,44 - 3,53 (m, 1H), 7,28 (d, 2H), 7,71 (d, 2H).
10 (4S)-1,3-diatsa-2-tosyyli-imino-4-aminoetyylisykloheksaani (H-(S)Itp (Ts))
Valmistettiin samalla tavalla kuin kuvataan H-(R,S)Itp(Ts):lie lähtien optisesti puhtaasta 2,4-diaminovoi-15 haposta.
1H-NMR (300,13 MHz, CDC13) ; δ 0,97 - 1,15 (s leveä, 1H), 1,48 - 1,69 (m, 3H) , 1,84 - 1,95 (m, 1H) , 2,37 (s, 3H) , 2,68 - 2,82 (m, 1H) , 2,86 - 2,98 (m, 1H) , 3,22 - 3,44 (m, 2H) , 3,45 20 - 3,58 (m, 1H), 7,19 (d, 2H), 7,72 (d, 2H) • * •\v 13C-NMR (300,13 MHz, CDC13) ; δ guanidiinihiili 154,05 • · • · · * ·· • · :Y: H-Aze-OEt X HCl • · : :*: 25 Valmistettiin samalla tavalla kuin kuvataan H-Pic-OEt x ··* · • ;*. HCl:lie H-Aze-OH:sta (katso alempana).
·*· t ·** • · · ♦ * · H-Aze-OMe x HCl
Valmistettiin menettelytavalla, joka kuvataan julkaisussa: • · * 30 Seebach D. et. ai.; Liebigs Ann. Chem., s. 687, 1990.
• · • · • · · ·:*·: H-Pab(z) x hci ····· Valmistettiin lisäämällä 1 mooliekvivalentin 5 M HCl:ää iso- propanolissa liuokseen, jossa on raakaa H-Pab(Z) :aa EtOH:ssa • » t • ·] 35 (noin 1 g/10 ml), jolloin H-Pab(Z) x HCl saostui välittömästi • * liuoksesta. Suodattamisen jälkeen sakka pestiin kahdesti kyl mällä EtOH:lla ja kuivattiin, jolloin saatiin otsikkoyhdiste 119812 59 lähes kvantitatiivisella saannolla.
H-Pic-OEt x HC1 L-pipekoliinihappoa, 4,0 g (0,031 mol), suspendoitiin 100 5 ml:aan absoluuttista etanolia, ja kuplitettiin varovasti HCl(g):tä, kunnes saatiin kirkas liuos. Se jäähdytettiin jäähauteessa, ja lisättiin tipoittain 17 ml tionyylikloridia 15 min aikana. Jäähaude poistettiin, ja seosta refluksoitiin 2,5 tunnion ajan. Liuotin haihdutettiin, ja tuote saatiin 10 hydrokloridisuolanaan kvantitatiivisella saannolla.
1H-NMR (300 MHz, D20) : δ 1,33 (t, 3H), 1,8 - 2,1 (m, SH), 2,3 - 2,5 (m, 1H) , 3,1 - 3,3 (m, 1H) , 3,5 - 3,7 (m, 1H) , 4,14 (dd, 1H), 4,44 (q, 2H).
15 H-(RpS)betaPic-OMe x HCl
Seosta, jossa oli 2,0 g (15,5 mmol) nipekotiicihappoa 8 ml:ssa metanolia, jäähdytettiin jäähauteella, ja lisättiin 2,76 g (23,2 mmol) tionyylikloridia. Seosta sekoitettiin 20 20 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Liuotin haihdutettiin, ja jäännös liuotettiin pieneen määrään metanolia, lisättiin • « *.·.· dietyylieetteriä, ja H-(R, S)betaPic-OMe x HCl saostui vai- 4 · :,*·· koisina kiteinä. Kiteet 2,57 g (92 %) eristettiin suodatta- maila.
• · • “· 25 • · · IM 4
: Boc-(R) Cgl-OR
IM ·
Boc-(R)-Pgl-OH: ta, 32,6 g (0,13 mol), liuotettiin 300 ml: aan • · · metanolia, ja lisättiin 5 g Rh/Al203:a. Liuosta hydrogenoi-tiin 3 päivän ajan 5,2 - 2,8 MPa:ssa. Suodatettiin, ja liuo- • · 30 tin haihdutettiin, minkä jälkeen NMR:stä nähtiin, että läsnä • · ’·;·* oli noin 25 % metyyliesteriotsikkoyhdistettä. Raakamateriaali *:**: liuotettiin 500 ml:aan THF:ää, ja lisättiin 300 ml vettä ja ····· 20 g LiOH:ta. Seosta sekoitettiin yön yli, ja THF haihdutet- tiin. Jäljelle jäävä vesifaasi säädettiin KHSC>4:llä happamaan • · * * *] 35 pH-arvoon, ja uutettiin kolmesti etyyliasetaatilla. Yhdistet- * * ty orgaaninen kerros pestiin vedellä, kuivattiin (Na2S04) , ja haihdutettiin, jolloin saatiin 28,3 g (83 %) haluttua 119812 60 tuotetta.
^-NMR (300 MHz, CDC13) : δ 0,9 - 1,7 (m, 20H) , 4,0 - 4,2 (m, 1H) , 5,2 (d, 1H) .
5
Boc-(R)Cgl-OSu Jääkylmään liuokseen, jossa oli 2,01 g (7,81 mmol) Boc-(R)Cgl-OH:ta ja 1,83 g (15,6 mmol) HOSura 25 ml:ssa CH3CN:ää, lisättiin 1,69 g (8,2 mmol) DCC:tä, ja reaktion annettiin 10 saavuttaa huoneenlämpötilan. Kun oli sekoitettu 3 päivän ajan, saostunut DCU suodatettiin pois, ja liuotin haihdutettiin. Jäännös liuotettiin in EtOAc ja orgaaninen faasi pestiin with H20, KHS04, NaHC03, brine ja dried (Na2S04) . Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin otsikkoyhdiste 15 kvantitatiivisella saannolla.
Boc-(R)Cha-OSu
Boc-(R)Cha-OH:ta (1 ekvivalentti), HOSuita (1,1 ekvivalentti) ja DCCrttä tai CME-CDI:tä (1,1 ekvivalentti) liuotettiin ase-20 tonitriiliin (noin 2,5 ml/mmol happoa), ja sekoitettiin huoneenlämpötilassa yön yli. Reaktion aikana muodostunut sakka * · V.· suodatettiin pois, liuotin haihdutettiin, ja tuote kuivattiin • · !,*·· tyhjössä. (Käytettäessä reaktiossa CME-CDI:tä, jäännös liuo- :V: tettiin CH3CN:n haihduttamisen jälkeen EtOAc:hen, ja orgaa- * 25 ninen faasi pestiin vedellä ja kuivattiin) . Liuotin haihdu-··« « ί tettiin, jolloin saatiin otsikkoyhdiste.
·*« · ··· • · · * · ·
Hl-NMR (500 MHz, CDC13/ 2 rotameerti noin 1:1-suhteessa) 0,85 .. - 1,1 (m, 2H) , 1,1 - 1,48 (m, 4H), 1,5 - 1,98 (m, 16H; siitä • » » *^·* 30 1,55 (bs, 9H)) , 2,82 (bs, 4H) , 4,72 (bs, 1H, pääasiallinen • · *···* rotameeri), 4,85 (bs, 1H, vähemmän tärkeä).
• ·
·:··; Boc-(R)Roc-OH
Boc-(R)Hop-OH: ta (katso edellä), 3,2 g (li,46 mmol), liuo- • * · : \ 35 tettiin metanoliin (75 ml) . Lisättiin rodiumia aktivoidulla alumiinioksidilla (Rh/Al203) , 0,5 g, ja seosta sekoitettiin 18 tunnin ajan vetyilmakehässä 0,41 MPa:ssa. Katalysaattori 119812 61 suodatettiin pois hyflon läpi, ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin tuote lähes kvantitatiivisella saannolla.
^-NMR (500 MHz, CDCI3) : δ 0,90 (m, 2H) , 1,08 - 1,33 (m, 6H) , 5 1,43 (S, 9H) , 1,60 - 1,74 (m, 6H) , 1,88 (bs, 1H) , 4,27 (bs, 1H) .
Boc-(R)HOC-OSU
Valmistettiin samalla tavalla kuin kuvataan Boc-(R)Cha-OSu:-10 lie Boc-(R)Hoc-OH:sta.
Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-OH
Valmistettiin menetelmällä, joka kuvataan julkaisussa: J.Y.L Chung et ai.; Journal of Organic Chemistry, no. 1, s. 270-15 275, 1990.
Boc-(R)Cgl-Aze-OH
(i) Boc-(R)Cgl-Aze-OMe
Sekoitettuun seokseen, jossa oli 3,86 g (15 mmol) Boc-(R)Cgl-20 OH: ta, 2,27 g (15 mmol) H-Aze-OMe x HCl:ää ja 2,75 g (22,5 mmol) DMAP:tä 40 ml:ssa CH3CN:ää 5 °C:Ssa, lisättiin 3,16 g • · *.V (16,5 mmol) EDC:tä. Reaktioseosta sekoitettiin 48 tunnin ajan • · *,'·· huoneenlämpötilassa. Liuotin haihdutettiin, ja jäännös liuo- ::: tettiin 150 ml:aan EtOAc:tä ja 20 ml:aan H20:ta. Erotettu • 25 orgaaninen kerros pestiin 2 x 20 ml:11a 0,5 M KHS04:ää, 2 x t·· · 119812 62 = 9,2, 1H), 5,21 (dd, J = 9,1, J~5, 1H).
(ii) Boc-(R)Cgl-Aze-OH
Boc-(R)Cgl-Aze-OMe:n hydrolyysi suoritettiin Boc-(R)Cha-Pic-5 OEt:lle kuvatulla menettelytavalla (katso alla). Tuote kiteytettiin EtOH/asetoni/vedestä (1/1/3,95), saanto 80 %.
1H-NMR (500 MHz, CDC13): δ 0,85 - 1,3 (m, 5H) , 1,40 (s, 9H) , 1,5 - 1,9 (m, 6H), 1,95 - 2,2 (m, 2H), 3,92 (m, 1H), 4,09 (m, 10 1H), 4,35 (m, 1H), 4,95 (m, 1H), 5,16 (bd, 1H).
Boc-(R)Cgl-Pic-OH
(i) Boc-(R)Cgl-Pic-OMe
Pivaloyylikloridia (1,0 ml, 8,1 mmol) lisättiin liuokseen, 15 jossa oli Boc-(R)Cgl-OH:ta (2,086 g, 8,1 mmol) ja trietyy-liamiinia (1,13 ml, 8,1 mmol) tolueenissa (25 ml) ja DMF:ssä (5 ml) . Seuraavaksi lisättiin jäähaudelämpötilassa seosta, jossa oli H-Pic-OMe x HCl:ää (1,46 g, 8,1 mmol) ja trietyy-liamiinia (1,13 ml, 8,1 mmol) DMF:ssä (20 ml). Reaktioseoksen 20 annettiin lämmetä hitaasti huoneenlämpötilaan, ja 24 tunnin kuluttua se laimennettiin vedellä ja uutettiin tolueenilla.
* · *.*.· Kun oli pesty 0,3 M KHSO^llä, 10-%:isella Na2C03:lla ja suo- • · laliuoksella, liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin saatiin it.ei 2,52 g (81 %) väritöntä öljyä, jota käytettiin enempää puh- ; 25 distamatta.
·· * • · • * · t » i 1H-NMR (500 MHz, CDC13, 2 rotameeriä, suhde 5:1): δ 0,8 - 1,8 • · · (m, 25H) , 2,25 (d, 1H) , 2,75 (t, 1H, vähäisempi rotameeri) , 3,3 (t, 1H) , 3,7 (s, 3H), 3,85 (d, 1H), 4,3 (t, 1H, vähäisem- • · * 30 pi rotameeri), 4,5 - 4,6 (m, 1H) , 5,25 (d, 1H) , 5,30 (d, 1H) .
• · t · *·#
*:*·: (ii) Boc- (R) Cgl-Pic-OH
·:··· Valmistettiin Boc-(R) Cha-Pic-OEt :n hydrolyysimenettelytavalla (katso alla) käyttämällä tuotetta kohdasta (i) yllä. Tuote • · · * ·. 35 kiteytettiin di-isopropyylieetteristä ja heksaanista.
1H-NMR (500 MHz, CDC13, 2 rotameeriä, suhde 5:1) δ 0,8 - 1,8 (m, 25H), 2,3 (d, 1H), 2,8 (t, 1H, vähäisempi rotameeri), 3,3 119812 63 (t, 1H), 3,9 (d, 1H), 4,4 (t, 1H, vähäinen), 4,5-4,6 (m, 1H), 5,1 (s, 1H, vähäinen rotameeri), 5,3 (d, 1H), 5,40 (d, 1H).
Boc-(R)Cgl-Pro-OH
5 3,59 g (31,24 mmol) L-proliinia sekoitettiin 20 ml:n kanssa vettä ja 1,18 gm (29,7 mmol) kanssa natriumhydroksidia. Seokseen lisättiin 2,8 g (7,8 mmol) Boc-(R)Cgl-OSu:ta 10 ml:ssa DMF:ää. Liukoisuusongelman vuoksi lisättiin vielä 30 ml:aa DMF:ää, ja reaktioseosta sekoitettiin 3 päivän ajan. 10 Liuotin haihdutettiin, ja lisättiin vettä. Vesifaasi pestiin etyyliasetaatilla, säädettiin happamaan pH-arvoon with 0,3 M KHSO4-solution ja uutettiin kolmesti etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi pestiin kerran vedellä ja kerran suolaliuoksella (Na2S04) , suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saa-15 tiin 2,3 g (83 %) tuotetta.
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ 0,89 - 2,17 (m, 23H) , 2,37 (m, 1H) , 3,55 (q, 1H) , 3,90 (bs, 1H) , 4,28 (t, 1H) , 4,52 (bs, 1H), 5,22 (bs, 1H (NH)).
20
Boc-(R)Cha-Aze-OH
t · V.: Valmistettiin samalla tavalla kuin kuvataan Boc-(R)Cha-Pic- 0H:lle lähtien Boc- (R) Cha-OH: sta ja H-Aze-OEt x HCl:stä :Y: (katso alla).
::: 25 »·· · • Boc - (R) Cha-Pro-OH *·· · H-(S) Pro-OH: ta (680 mmol) liuotettiin 0,87 M natriumhydrok-sidiin (750 ml). Lisättiin tipoittain Boc-(R)Cha-OSu:ta (170 . . mol) liuotettuna DMF:ään (375 ml) 20 min aikana. Reaktioseos- • · · • ♦ · l.l 30 ta sekoitettiin 20 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Seos sää-• * *···* dettiin happamaan pH-arvoon (2 M KHS04), ja uutettiin kolmes- ·***: ti etyyliasetaatilla. Orgaaniset kerrokset yhdistettiin ja ·:··; pestiin kolmesti vedellä ja kerran suolaliuoksella. Kun oli kuivattu natriumsulfaatilla ja liuotin haihdutettu, siirappi-* *, 35 mainen öljy liuotettiin dietyylieetteriin, liuotin haihdutet tiin, ja tuote kuivattiin lopulta tyhjössä, jolloin saatiin Boc-(R)Cha-Pro-OH:ta valkoisena jauheena lähes kvantitatii- 119812 64 visella saannolla.
Hi-NMR (500 MHz, CDC13, kahden rotameerin seos 9:1) δ 0,8 - 1,05 (m, 2Η), 1,05 - 1,55 (m, 15Η; siitä 1,5 (bs, 9H)), 1,55 5 - 1,8 (m, 5H) , 1,8 - 2,15 (m, 3H) , 2,47 (m, 1H) , 3,48 (m, 1H) , 3,89 (m, 1H) , 4,55 (m, 2H) , 5,06 (m, 1H) ; Erottuneet signaalit vähäisemmästä rotameeristä näkyvät kohdassa d 2,27 (m), 3,58 (m), 4,33 (m), 5,0 (m) 10 Boc-(Xe)(R)Cha-Pro-OSu
(i) Boc-(Me)(R)Cha-Pro-OH
Valmistettiin samalla tavalla kuin edellä kuvattiin Boc-(R)Cha-Pro-OH:lie Boc-(Me)(R)Cha-OSu:sta ja H-Pro-OH:sta lähtien.
15 (ii) Boc-(Me)(R)Cha-Pro-OSu
Valmistettiin samalla tavalla kuin Boc-(R)Cha-OSu:lie kuvataan lähtien Boc-(Me)(R)Cha-Pro-OH:sta.
20 Boc-(R)Cha-Pic-OH
(ia) Boc-(R)Cha-Pic-OEt • · *.V Boc-(R)Cha-OH:ta, 6,3 g (0,023 mol), liuotettiin 150 ml:aan • · :.1·· CH2Cl2:ta. Liuos jäähdytettiin jäähauteessa, ja lisättiin 6,3 ίφϊ4ί g (0,047 mol) N-hydroksibentsotriatsolia ja 11,2 g (0,0265 : 25 mol) CME-CDI:tä. Jäähaude poistettiin 15 min kuluttua, ja
III I
·1· reaktioseosta sekoitettiin 4 tunnin ajan huoneenlämpötilassa.
119812 65 ^-NMR (500 MHz, CDC13/ 2 rotameeriä, suhde 3:1) d 0,7 - 1,0 (m, 2H) , 1,1 - 1,9 (m, 29H; siitä 1,28 (t, 3H) ) , 1,45 (bs, 9H), 2,01 (bd, 1H, pääasiallinen rotameeri) , 2,31 (bd, 1H) , 2,88 (bt, 1H, vähäisempi), 3,30 (bt, 1H, pääasiallinen), 3,80 5 (bd, 1H, pääasiallinen), 4,15 - 4,3 (m, 2H) , 4,5 - 4,7 (m, 2H, vähäisempi), 4,77 (bq, 1H, pääasiallinen), 4,90 (bd, 1H, vähäisempi), 5,28 (bd, 1H, pääasiallinen), 5,33 (bd, 1H, pääasiallinen).
10 (ib) Boc-(R)Cha-Pic-OMe 400 ml (3,23 mmol) pivaloyylikloridia lisättiin sekoitettuun seokseen, jossa oli 875 mg (3,22 mmol) Boc-(R)Cha-OH:ta ja 450 μΐ (3,23 mmol) trietyyliamiinia 10 ml:ssa tolueenia ja 2 ml:ssa DMF:ää. 45 min kuluttua tulokseksi saatuun suspensioon 15 lisättiin seosta, jossa oli 596 mg (3,32 mmol) metyyli-(S)-pipekolaattihydrokloridia ja 463 μΐ (3,32 mmol) trietyyliamiinia 5 ml:ssa DMFrää. 2 tunnin kuluttua lisättiin 100 μΐ (0,72 mmol) trietyyliamiinia, ja sekoitusta jatkettiin vielä 18 tunnin ajan. Reaktioseokseen lisättiin vettä ja tolueenia, 20 ja orgaaninen faasi pestiin 0,3 M KHS04:llä, 10-%:isella Na2C03:lla ja suolaliuoksella. Kuivattiin (MgS04) ja pois- \V tettiin liuotin tyhjössä, jolloin saatiin 1,16 g otsikko- * · !,*·· yhdistettä.
• · • · · • · · • ·
• :*: 25 (ii) Boc- (R) Cha-Pic-OH
·*» · ; Boc-(R) Cha-Pic-OEt: tä, 5,69 (0,014 mol), sekoitettiin 100 ··· · ml:n kanssa THF:ää, 100 ml:n kanssa vettä ja 7 g:n kanssa *·* *
LiOH:ta. Seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämpötilassa. THF
. . haihdutettiin, ja vesiliuos säädettiin happamaan pH-arvoon • S · 30 KHS04 (aq) : 11a, ja uutettiin kolmesti etyyliasetaatilla.
• · *·;·* Yhdistetty orgaaninen faasi pestiin vedellä, kuivattiin *:**: (Na2S04) ja haihdutettiin, jolloin saatiin 4,9 g (94 %) Boc- ·:*·· (R) Cha-Pic-OH: ta, jota käytettiin enempää puhdistamatta.
Yhdiste voidaan kiteyttää di-isopropyylieetteri/heksaanista.
Φ · • · * *. 35
Metyyliesteri, joka on muodostettu edellä menettelytavassa (ib) , voidaan hydrolysoida käyttämällä samaa menettelytapaa, 119812 66 joka kuvataan etyyliesterille kohdassa (ii).
^-NMR (500 MHz, CDC13/ 2 rotameeriä, suhde 3,5:1) δ 0,8 - 1,1 (m, 2H), 1,1 - 2,1 (m, 27H; siitä 1,43 (s, 9H, pääasial-5 linen rotameeri) , 1,46 (s, 9H, vähäisempi)), 2,33 (bd, 1H), 2,80 (bt, 1H, vähäisempi), 3,33 (bt, 1H, pääasiallinen), 3,85 (bd, 1H, pääasiallinen), 4,57 (bd, 1H, vähäisempi), 4,68 (m, 1H, vähäisempi), 4,77 (bq, 1H, pääasiallinen), 5,03 (bs, 1H, vähäisempi), 5,33 (bd, 1H, pääasiallinen), 5,56 (m, 1H, 10 pääasiallinen).
Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-OH
(i) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-OMe
Pivaloyylikloridia 0,9 ml (7,3 mmol) lisättiin liuokseen, 15 jossa oli 2,0 g (7,3 mmol) Boc-(R)Cha-OH: ta ja 0,81 ml (7,3 mmol) 4-N-metyylimorfoliinia 20 ml:ssa asetonitriiliä. Kun oli sekoitettu 1 tunti ja 30 min, lisättiin 1,3 g (7,3 mmol) H-(R,S)betaPic-OMe x HCl:ää ja 1,62 ml (14,6 mmol) 4-N-metyylimorfoliinia, ja reaktioseosta sekoitettiin 24 tunnin ajan. 20 Liuotin haihdutettiin, ja jäännös liuotettiin tolueeniin ja pieneen määrään dietyylieetteriä. Kun oli pesty 0,3 M
* * V.· KHSO4:11a ja KHCO3-liuoksella, ja kuivattu Na2S04:llä, liuotin • · *,*·· poistettiin tyhjössä. Flash-kromatograf itiin käyttämällä ij]: heptaani/etyyliasetaattia (7/3) eluenttina, jolloin saatiin ; ·*· 25 2,4 g (83 %) haluttua tuotetta.
• M * • · • · f
I * I
.*!·. (ii) Boc-(R) Cha-(R, S) betaPic-OH
I f * 2,35 g (5,9 mmol) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-OMe:tä liuotettiin .. huoneenlämpötilassa 35 ml:aan THF:ää, ja lisättiin 2,1 g t · * ;,* 30 LiOH:ta 35 ml.-ssa vettä. Kun oli sekoitettu 5 tunnin ajan, t · *”·' THF poistettiin tyhjössä. Vesifaasi säädettiin happamaan pH- ·:**: arvoon 2 M KHS04:llä, ja uutettiin etyyliasetaatilla, kuivat- ····· tiin Na2S04:llä, ja haihdutettiin, jolloin saatiin 2,0 g (89 %) tuotetta.
* · • · * ·. 35
* Boc- (R) Cha-Vai-OH
(i) Boc-(R)Cha-Val-OMe 119812 67 3,1 ml (25 mmol) pivaloyylikloridia lisättiin ympäristön lämpötilassa sekoitettuun seokseen, jossa oli 6,75 g (25 mmol) Boc-(R)Cha-OH:ta ja 3,5 ml (25 mmol) trietyyliamiinia 50 ml:ssa DMF:ää. 3 tunnin kuluttua lisättiin 4,16 g (25 5 mmol) valiinimetyyliesterihydrokloridia 50 ml:ssa DMF:ää ja
3.5 ml:ssa trietyyliamiinia. Kun oli sekoitettu yön yli, lisättiin muutamia DMAP-kiteitä, ja reaktioseosta kuumennettiin 5 min ajan 50 °C:seen. Liuotin poistettiin tyhjössä, ja jäännökseen lisättiin eetteriä ja tolueenia. Pestiin 0,3 M
10 KHS04:llä ja 10-%:isella Na2C03:lla, minkä jälkeen kuivattiin (MgS04) ja poistettiin liuotin tyhjössä, jolloin saatiin jäännös, joka alistettiin flash-kromatografiälle käyttämällä eluenttina tolueeni/etyyliasetaattia. Otsikkoyhdisteen saanto oli 6,99 g (73 %).
15
(ii) Boc-(R)Cha-Val-OH
Seosta, jossa oli 8,73 g (23 mmol) Boc-(R)Cha-Val-OMe:tä ja 5.6 g (230 mmol) litiumhydroksidia 75 ml:ssa THFrää ja 75 ml:ssa vettä, sekoitettiin 4 tunnin ajan. THF poistettiin 20 tyhjössä, ja jäljelle jäävä liuos laimennettiin vedellä ja uutettiin eetterillä. Säädettiin happamaan pH-arvoon 2 M KHS04:llä ja uutettiin etyyliasetaatilla, minkä jälkeen kui- · *.1·· vattiin (MgS04) ja poistettiin liuotin tyhjössä, jolloin saatiin 8,15 g (96 %) otsikkoyhdistettä.
f · _ _ I · t »·· ·
·1; Boc - (R) Hoc-Aze-OH
119812 68 tettiin, ja pestiin 0,3 M KHS04:llä, laimealla KHC03:lla, suolaliuoksella, kuivattiin NaS04:llä ja haihdutettiin. Flash-kromatografoitiin (1 % EtOH CH2Cl2:ssa ja heptaani:-
EtOAc), jolloin saatiin 0,35 g (25 %) haluttua tuotetta.
5
(ii) Boc-(R)Hoc-Aze-OH
0,65 g (1,6 mmol) Boc-(R)Hoc-Aze-OEt:tä liuotettiin huoneenlämpötilassa 10 ml:aan THF:ää, ja lisättiin 0,59 g LiOH:ta 10 ml:ssa vettä. Kun oli sekoitettu 24 tunnin ajan, lisättiin 2 10 M KHS04:ää, ja THF poistettiin tyhjössä. Sitten vesifaasi säädettiin happamaan pH-arvoon lisäämällä vielä 2 M KHS04.-ää, ja uutettiin etyyliasetaatilla, kuivattiin Na2S04:llä ja haihdutettiin, jolloin saatiin 0,5 g (85 %) otsikkoyhdistettä.
15
Boc-(R)Eoc-Pro-OH
Valmistettiin samalla tavalla kuin kuvataan Boc-(R)Cha-Pro-0H:lle Boc-(R)Hoc-OSu:sta.
20 1H-NMR (500 MHz, CDC13) : δ 0,80-0,94 (m, 2H) , 1,05-1,36 (m, 7H) , 1,36-1,48 (bs, 9H) , 1,48 - 1,78 (m, 7H) , 1,98-2,14 (m, V.: 2H) , 2,34 (m, 1H) , 3,48 (m, 1H) , 3,85 (m, 1H) , 4,43 (m, 1H) , • * :.*·· 4,52 (bd, 1H) , 5,26 (bd, 1H) , signaalit vähäisemmästä rota- • · ϊ,ϊ.ί meeristä näkyvät kohdassa: δ 1,92, 2,25, 3,58, 4,20 ja 4,93.
: 25 ft· ·
: :*. Boc- (R) Hoc-Pic-OH
··· · .*:*. (i) Boc-(R)Hoc-Pic-OMe ♦ · ·
Valmistettiin samalla tavalla kuin kuvattiin Boc-(R)Cha-Pic- 4·#.# OEtille (katso edellä) Boc-(R)Hoc-OH:sta ja H-Pic-OMe x *;!:* 30 HC1: stä.
• · • · ···
***** (ii) Boc-(R) Hoc-Pic-OH
·:··; Valmistettiin samalla tavalla kuin kuvattiin Boc-(R)Cha-Pic- OH: lie (katso edellä) Boc-(R)Hoc-Pic-OMe:stä.
• · · • · * *. 35 ^-NMR (500 MHz, CDC13) : δ 0,82 - 0,97 (m, 2H) , 1,10 - 1,36 (m, 7H) , 1,36-1,50 (bs, 9H) , 1,50 - 1,82 (m, UH), 2,35 (bd, 69 1 1 981 2 1H) 3,28 (bt, 1H), 3,85 (bd, 1H) 4,63 (m, 1H), 5,33 (bs, 1H), 5,44 (bd, 1H) , signaalise vähäisemmästä rotameeristä näkyvät kohdassa: δ 1,88, 2,80, 4,25, 4,55 ja 4,97.
5 Boc-(R)Pro-Phe-OH
(i) Boc-(R)Pro-Phe-OMe
Liuokseen, jossa oli 2,0 g (9,29 mmol) Boc-(R)Pro-OH:ta ja 0,94 g (9,29 mmol) trietyyliamiinia 70 ml:ssa tolueeni/DMF:ää (5/2), lisättiin 1,12 g (9,29 mmol) pivaloyylikloridia, ja 10 reaktiota sekoitettiin 30 min ajan huoneenlämpötilassa. Reaktio jäähdytettiin 0 °C:seen, ja lisättiin seosta, jossa oli 2,0 g (9,29 mmol) H-Phe-OMe:tä ja 0,94 g trietyyliamiinia 40 ml DMF:ssä, ja reaktiota sekoitettiin yön yli huoneenlämpötilassa. Reaktioseos laimennettiin tolueenilla, ja 15 orgaaninen faasi pestiin 3 x 50 ml:11a 0,3 M KHS04:ää, 1 x 50 ml:11a vettä ja kuivattiin (Na2S04) . Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin kvantitatiivisella saannolla otsikkoyhdis-tettä, jota käytettiin seuraavassa kohdassa enempää puhdistamatta.
20
(ii) Boc-(R)Pro-Phe-OH
:V: Seosta, jossa oli 4,0 g (10,6 mmol) Boc-(R)Pro-Phe-OMe:tä ja 8,93 g (21,3 mmol) LiOH x H20:ta 140 ml: ssa vesi/THF:ää • · (1/1) , sekoitettiin voimakkaasti yön yli huoneenlämpötilassa.
• · : ,·. 25 THF haihdutettiin, ja vesifaasi säädettiin happamaan pH- • · ·"·, arvoon 1 M KHS04:ää ja uutettiin 3 x 75 ml:11a EtOAc:tä.
• · ·
Yhdistetty orgaaninen faasi pestiin vedellä ja kuivattiin '** ’ (Na2S04) . Suodatettiin, ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin jäännös, joka puhdistettiin kiteyttämällä di-isopro-*·1.’ 30 pyylieetteristä, jolloin saatiin 2,329 g (60 %) otsikkoyh- • 1 φ *...· distettä valkoisena kiteisenä kiinteänä aineena.
• ·
Boc-(R) Pro (3-(S) Ph)-Pro-OH
• · (i) Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-OBn • · · : .1 35 Seokseen, jossa oli 1,61 g Boc- (R) Pro (3-(S) Ph) -OH: ta, 1,65 g *·**· Η-Pro-OBn x HCl:ää ja 0,75 g HOBT:tä 11 ml:ssa DMF:ää, li sättiin 0,84 ml NMM:ää ja 2,92 g CME-CDI:tä huoneenlämpöti- 119812 70 lassa, ja reaktioseosta sekoitettiin 3 päivän ajan. Liuotin haihdutettiin, ja jäännös liuotettiin 300 mlraan EtOAc:tä. Orgaaninen faasi pestiin 2 x 100 ml :11a H20:ta, 2 x 100 mlilla 1 M KHS04:ää, 3 x 100 ml:11a 1 M NaOH:ta, 3 x 100 ml 5 H20:ta ja kuivattiin (MgS04) . Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 2,53 g öljyä, joka puhdistettiin flash-kromatogra-fialla käyttämällä eluenttina CH2Cl2/MeOH:ta (97/3), jolloin saatiin 2,11 g (88 %) otsikkoyhdistettä.
10 (ii) Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-OH
0,94 g Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-OBn:ää liuotettiin 70 ml:aan EtOH:ta, ja hydrogenoitiin 3,5 tunnin ajan 0,42 g:11a 5- %:ista Pd/C:tä. Katalysaattori suodatettiin, ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin otsikkoyhdiste kvantitatiivi-15 sella saannolla valkoisina kiteinä.
Boc-(R)Tic-Pro-OH
Valmistettiin menettelytavalla, joka kuvataan julkaisussa EP-0,479,489-A2, P.D. Gesellchen ja R.T. Shuman.
20
BnOOC - CH2 - NH - CO - CH2 - Br • ·
Liuokseen, jossa oli p-TsOH x H-Gly-OBn:ää (5 mmol) ja trie- :*·.· tyyliamiinia (5 mmol) 10 mlrssa CH2Cl2:ta, lisättiin 2-bro- • · mietikkahappoa (5 mmol) liuotettuna 10 mlraan CH2Cl2:ta, ja • · : 25 disykloheksyylikarbodi-imidia (5 mmol). Seosta sekoitettiin • · · · : .·. huoneenlämpötilassa yön yli, ja suodatettiin. Orgaaninen • · · faasi pestiin kahdesti 0,2 M KHS04:llä, 0,2 M NaOH:lla, suo- • · · * laliuoksella, ja kuivattiin. Haihdutettiin ja flash-kromato-grafoitiin (CH2Cl2/MeOH, 95/5), jolloin saatiin haluttua • · *·*·* 30 yhdistettä kvantitatiivisella saannolla.
φφφ * * • · ·** 1H-NMR (300 MHz, CDC13) : δ 3,89 (s, 2H) , 4,05 - 4,11 (d, 2H) , 5,19 (s, 2H) , 7,06 (bs, 1H) , 7,3 - 7,4 (m, 5H) .
• · Φ Φ Φ Φ
: 35 Boc- (R) Cgl-Ile-OH
Φ *·*’· Valmistettiin samalla tavalla kuin kuvataan Boc-(R) Cgl-Pro- OH:lle käyttämällä H-Pro-0H:n sijasta H-Ile-OH:ta, 91- 119812 71 %:isella saannolla.
Boc-(R)Phe-Phe-OH
(i) Boc-(R)Phe-Phe-OMe 5 Boc-(R)Phe-OH:ta (18,8 mmol; ostettiin yhtiöstä Bachem Fein-chemicalien AG), Phe-OMe:tä (20,7 mmol) ja 4-dimetyyliami-nopyridiiniä (37,7 mmol) liuotettiin 30 ml:aan asetonitrii-liä. Liuos jäähdytettiin jääveden lämpötilaan, ja lisättiin 1-(3-dimetyyliaminopropyyli)-3-etyylikarbodi-imidihydro-10 kloridia (24,5 mmol). Jäähdytyshaude poistettiin ja reaktio-seosta sekoitettiin yön yli* Sitten liuotin poistettiin alennetussa paineessa, ja jäännös liuotettiin 50 ml:aan etyyliasetaattia. Orgaaninen faasi uutettiin 50-ml erillä 0,5 M kaliumvetysulfaattia, 1 M natriumbikarbonaattia ja lopuksi 15 vettä, minkä jälkeen liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 7,5 g Boc-(R)Phe-Phe-OMe:tä (94 %) , jota käytettiin seuraavassa vaiheessa enempää puhdistamatta.
(ii) Boc-(R)Phe-Phe-OH
20 Boc-(R)Phe-Phe-OMe:tä (16,4 mmol) liuotettiin 40 ml:aan tetrahydrofuraania, ja lisättiin nopeasti litiumhydroksidia • · V.: (32,8 mmol) liuotettuna 20 ml:aan vettä. Reaktioseosta Βει]·.: koitettiin 3,5 tunnin ajan, minkä jälkeen liuotin poistettiin alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin 50 ml:aan etyy- • t : 25 liasetaattia, ja uutettiin 50 ml:11a 0,5 M kaliumsulfaattia, • · · ' J # ' ··· · * .*. sen jälkeen 50 ml:lla vettä. Liuotin poistettiin alennetussa • · · "··] paineessa, jolloin saatiin 8,0 g Boc-(R) Phe-Phe-OH (kvanti- • · · tatiivisesti) amorfisena kiinteänä aineena. 1H-NMR (200 MHz, .. d-CHCl3) ; δ 7,4 - 6,7 (m, 10H) , 5,7 - 4,2 (m, 6H) , 1,34 (s, 30 9H) .
• · · • · • · • ·· ·:··; HO - ch2 - COOBn
Valmistettiin menettelytavalla, joka kuvataan julkaisussa: φ#·φ Lattes A. et ai.; Bull. Soc. Chim. France., No 11, s. 4018- : 35 23, 1971.
• · 119812 72
Bentsyyli-2-(orto-nitrobentseenisulfonyylioksi)asetaatti (2-N02) Ph- S02 -OCH2 - COOBn 1,66 g (10 mmol) bentsyyliglykolaattia liuotettiin 25 ml:aan CH2C12:ta ja 25 ml:aan dietyylieetteriä. Seos jäähdytettiin 0 5 °C:seen, ja lisättiin 2,8 ml (10 mmol) trietyyliamiinia. Pitäen lämpötilan 0 °C:ssa lisättiin pienissä erissä 15 min aikana 2,44 g (11 mmol) orto-nitrobentseenisulfonyyliklori-dia. Suspensiota sekoitettiin 0 °C:ssa 50 min ajan, ja lisättiin sitten 20 ml vettä ja 30 ml CH2Cl2:ta. Faasit ero-10 tettiin ja orgaaninen faasi pestiin 20 ml:11a 1 M HCl:ää ja 20 ml:lla H20:ta, kuivattiin (Na2S04) , suodatettiin ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 3,34 g jäännöstä, joka alistettiin flash-kromatografiälle käyttäen eluenttina hep-taani:EtOAc:tä 2:1, jolloin saatiin 1,18 g (34 %) otsikkoyh-15 distettä.
1H-NMR (300 MHz, CDCI3) : δ 4,92 (s, 2H) , 5,17 (s, 2H) , 7,83 (m, 5H), 7,76 (m, 3H), 8,16 (dd, 1H).
20 Bentsyyli-2-(para-nitrobentseenisulfonyylioksi)asetaatti (4-N02) Ph - S02 - 0CH2 - COOBn '·/·/· Valmistettiin samalla menettelytavalla, joka kuvataan bent- syyli-2- (orto-nitrobentseenisulfonyylioksi)asetaatille yllä. ;*·*· Lopullinen yhdiste saatiin kiteisessä muodossa liuottimen • φ : .*. 25 haihduttamisen jälkeen, ja se oli riittävän puhdasta käytet- ·"·. täväksi enempää puhdistamatta (saanto 64 %).
• · · 1·· · • · · • · · ‘ 1H-NMR (300 MHZ, CDCI3) : 6 4,79 (s, 2H) , 5,13 (s, 2H) , 7,2 - 7,4 (m, SH), 8,10 (d, 2H), 8,30 (d, 2H).
• · * * · * _ _ • · 30 · # !...: T f O - CH2 COOMe ·;·· 10,09 ml (60 mmol) trif luorimetaanisulfonihappoanhydridiä liuotettuna CH2Cl2:een lisättiin 25 min aikana 0 °C:ssa ti- φ · poittain seokseen, jossa oli 4,05 ml (50 mmol) metyyliglyko- φ · φ • ·’ 35 laattia ja 4,04 ml (50 mmol) pyridiiniä CH2Cl2:ssa (yhteensä Φ 62,5 ml), ja sekoitettiin sen jälkeen 1 tunnin ajan 0 °C:ssa. Kun oli pesty 0,3 M KHS04:llä ja kylläisellä NaaC03:lla, 119812 73 kuivattiin (Na2S04) ja suodatettiin, liuotin haihdutettiin tyhjössä, joloin saatiin 9,94 g (90 %) otsikkoyhdistettä.
Tf O- CH2COOEt 5 Valmistettiin samalla tavalla kuin kuvataan TfO-CH2COOMe:lie lähtien etyyliglykolaatista.
TfO-CH2COOnBu
Valmistettiin samalla tavalla kuin kuvataan TfO-CH2COOMe:lie 10 lähtien butyyliglykolaatista.
Tf0-CH2C00Bn
Valmistettiin samalla tavalla kuin kuvataan TfO-CH2COOMe:lie lähtien HO-CH2COOBn: stä 15 TFO - CH2 C00nHex (i) HO - CH2 COOnHex 215 mg:aan (2,82 mmol) glykolihappoa 12,8 ml:ssa CH3CN:ää lisättiin 719 mg (3,39 mmol) 1-heksyylijodidia ja 429 mg 20 (2,82 mmol) DBU:ta. Kun oli sekoitettu yön yli ja refluksoitu 4 tunnin ajan, liuotin haihdutettiin, lisättiin etyy- • · liasetaattia ja 1 M KHS04:ää, ja faasit erotettiin. Orgaani-:\j nen kerros pestiin suolaliuoksella, kuivattiin (MgS04) , suo- datettiin ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 333 mg • * : .*. 25 (74 %) tuotetta.
• · · ' ' v · · * • · * » · • · * (ii) Tf O - CH2COOnHex • · «
Valmistettiin samalla tavalla kuin kuvataan TfO-CH2COOMe: lie . . HO-CH2COOnHex:istä lähtien.
• · · *·*·* 30 Φ*· H-Mig(Z) (3-aminometyyli-l-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidi-·:··· no) atsetidiini (i) 3-aminometyyli-l-bentshydryyliatsetidiini valmistettiin kirjallisuuden mukaan, katso julkaisua: A.G. Anderson, Jr., ! *·| 35 ja R. Lok; J. Org. Chem., 37, 3953, 1972.
• « 119812 74 (ii) 3-(N-tert-butyylioksikarbonyyliaminometyyli)-1-bentshyd-ryyliatsetidiini 3,50 g:aan (13,9 mmol) 3-aminometyyli-l-bentshydryyliatseti-diinia liuotettuna 45 ml:aan THF:ää lisättiin liuos, jossa 5 oli 0,56 g (13,9 mmol) NaOH:ta 45 mltssa H20:ta. Reaktioseos jäähdytettiin 0 °C:seen, ja lisättiin 3,03 g (13,9 mmol) di-tert-butyylidikarbonaattia. Jäähdytyshaude poistettiin muutaman minuutin kuluttua, ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa yön yli. THF haihdutettiin, ja jäännös uutettiin 3 10 x 45 ml:11a dietyylieetteriä. Yhdistetty orgaaninen kerros pestiin suolaliuoksella, kuivattiin Na2S04:llä ja suodatettiin. Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 4,6 g (94 %) otsikkoyhdistettä.
15 (iii) 3-(N-tert-butyylioksikarbonyyliaminometyyli)atsetidiini 3,4 g (9,6 mmol) 3-(N-tert-butyylioksikarbonyyliaminometyyli) -1-bentshydryyliatsetidiinia liuotettiin 170 ml:aan MeOH:ta, ja hydrogenoitiin 0,30 g:11a Pd(0H)2:ta 5 MPa:ssa yön yli. Katalysaattori suodatettiin pois, ja liuotin haih-20 dutettiin. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä käyttämällä eluenttina MeOH/CH2Cl2: ta, 1/9, sen jälkeen ί,ϊ.ί MeOH (kyllästetty NH3 (g) : llä) /CH2C12, 1/9, jolloin saatiin 1,2 g (67 %) otsikkoyhdistettä.
• * • · · • · · · I .·. 25 (iv) 3-(N-tert-butyylioksikarbonyyliaminometyyli)-1-(N- e» t : .·. bentsyylioksikarbonyyliamidino)atsetidiini (Boc-Mig(Z)) • · · "··) 0,9 g (4,8 mmol) 3- (N-tert-butyylioksikarbonyyliaminometyy- • t · li)atsetidiinia ja 1,3 g (6,3 mmol) N-bentsyylioksikarbonyy- .. li-O-metyyli-isoureaa sekoitettiin 6,5 ml:aan tolueenia ja • · ♦ *·]·* 30 kuumennettiin 72 tunnin ajan 70 °C:seen, ja annettiin sitten • · *..·* olla huoneenlämpötilassa vielä 72 tunnin ajan. Haihdutettiin, *;··· minkä jälkeen f lash-kromatograf oitiin käyttäen eluenttina
EtOAc:tä, sen jälkeen MeOH (kyllästetty NH3 (g) : llä)/CH2C12: ta, 1/9, jolloin saatiin 0,67 g (38 %) otsikkoyhdistettä • · · • ·* 35 valkoisena jauheena.
* · 119812 75 (v) 3-aminometyyli-l-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidino)atse-tidiini (H-Mig(Z)) 0,67 g (1,85 mmol) Boc-Mig(Z):aa liuotettiin 10 ml:aan EtO-Ac:tä, joka oli kyllästetty HCl(g):llä, ja sekoitettiin 10 5 min ajan huoneenlämpötilassa. Lisättiin tipoittain 10 ml KOH(aq):n kylläistä liuosta. Kerrokset erotettiin, ja vesi-faasi uutettiin 3x8 ml:11a EtOAc:tä. Orgaaniset kerrokset yhdistettiin, pestiin suolaliuoksella, kuivattiin Na2S04:llä ja haihdutettiin, jolloin saatiin 0,43 g (89 %) otsikkoyh-10 distettä.
1H-NMR (300 MHz, CDC13) : δ 2,55 - 2,65 (m, 1H), 2,84 (d, 2H), 3,66 (dd, 2H) 4,03 (dd, 2H) 5,07 (s, 2H), 7,2 - 7,4 (m, 5H).
15 MS m/z 263 (M++l) 3 -aminoetyy1i-1-(N-bentsyy1ioks ikarbonyy1iamidino)atsetidiini (H-Dig(Z)) (i) 3-karboksyylihappo-l-bentshydryyliatsetidiini valmistet-20 tiin kirjallisuuden mukaan, katso julkaisua: A.G. Anderson, Jr., ja R. Lok; J. Org. Chem., 37, 3953, 1972.
• « • · · • * · • · :/.{ (ii) 3-hydroksimetyyli-l-bentshydryyliatsetidiini
Liuos, jossa oli 8,7 g (32,5 mmol) 3-karboksyylihappo-l- • · : 25 bentshydryyliatsetidiinia 80 ml:ssa kuivaa THF:ää, lisättiin ··· e : shitaasti suspensioon, jossa oli 4,9 g (130,2 mmol) LiAlH4:ää • · · .···] 30 ml:ssa THF:ää huoneenlämpötilassa. Reaktioseosta refluk- • · « soitiin 3,5 tunnin ajan. Ylimääräinen hydridireagenssi hydro- .. lysoitiin lisäämällä varovasti, jäähdyttäen, NH4C1(aq):ta, • · · *;]** 30 hyytelömäinen seos suodatettiin, ja suodatinkakku pestiin • · *..·* toistuvia kertoja THF:llä. Liuotin haihdutettiin, jolloin *:*·· saatiin 7,1 g (86 %) otsikkoyhdistettä vaaleankeltaisina kiteinä.
• · 9 · • · · ; ·' 35 (iii) 3-metaanisulfonatometyyli-l-bentshydryyliatsetidiini * * Liuokseen, jossa oli 6,62 g (26,1 mmol) 3-hydroksimetyyli-l- bentshydryyliatsetidiinia 50 ml:ssa kuivaa pyridiiniä, li- 119812 76 sättiin 4,50 g (39,2 mmol) metaanisulfonyylikloridia 0 °C:ssa. Reaktioseosta sekoitettiin 1 tunnin ajan, ja annettiin sitten seistä jääkaapissa yön yli. Reaktioseos kaadettiin jään ja H20:n seokseen. Sakka kerättiin, pestiin H20:lla 5 ja kuivattiin tyhjössä, jolloin saatiin 7,75 g (89,5 %) otsikkoyhdistettä.
(iv) 3-syaanimetyyli-l-bentshydryyliatsetidiini Liuokseen, jossa oli 7,75 g (23,4 mmol) 3-metaanisulfonato- 10 metyyli-1-bentshydryyliatsetidiinia 50 mlrssa DMF:ää, lisättiin liuos, jossa oli 3,44 g (70,0 mmol) NaCNiää 10 ml:ssa H20:ta. Seosta kuumennettiin 20 tunnin ajan 65 °0:ssa, jäähdytettiin, ja kaadettiin jään ja H20:n seokseen. Sakka kerättiin, pestiin H20:lla ja kuivattiin tyhjössä, jolloin 15 saatiin 5,7 g (93 %) otsikkoyhdistettä.
(v) 3-aminoetyyli-l-bentshydryyliatsetidiini 5,7 g (21,7 mmol) 3-syaanimetyyli-l-bentshydryyliatsetidiiniä lisättiin hitaasti suspensioon, jossa oli 2,9 g (76,0 mmol) 20 LiAlH4:ää 80 ml:ssa kuivaa THF:ää huoneenlämpötilassa. Reaktioseosta refluksoitiin 4 tunnin ajan. Ylimääräinen • * ί,ϊ,ϊ hydridireagenssi hydrolysoitiin lisäämällä varovasti, jääh- dyttäen, NH4C1 (aq) : ta, hyytelömäinen seos suodatettiin, ja suodatinkakku pestiin toistuvia kertoja THF:llä. Liuotin t ' · : 25 haihdutettiin, jäännös liuotettiin dietyylieetteriin, pestiin ··· » • ,·, suolaliuoksella ja kuivattiin Na2S04:llä. Liuotin haihdutet- • » « tiin, jolloin saatiin 5,0 g (87 %) otsikkoyhdistettä.
« · » (vi) 3-(N-tert-butyylioksikarbonyyliaminoetyyli)-l-bentshy- • t · ’·*·' 30 dryyliatsetidiini \..J Otsikkoyhdiste valmistettiin 3-aminoetyyli-l-bentshydryyli- ····· atsetidiinistä 3-(N-tert-butyylioksikarbonyyliaminometyyli)- 1-bentshydryyliatsetidiinille kuvatulla menettelytavalla, jolloin saatiin 6,5 g (95 %) .
t * * : ·* 35 *:* * (vii) 3-(N-tert-butyylioksikarbonyyliaminoetyyli)atsetidiini
Otsikkoyhdiste valmistettiin 3-(N-tert- butyylioksikarbonyy- 119812 77 liaminoetyyli)-1-bentshydryyliatsetidiinistä 3-(N-tert-butyy-lioksikarbonyyliaminometyyli)atsetidiinille kuvatulla menettelytavalla saannolla 1,2 g (70 %).
5 (viii) 3-(N-tert-butyylioksikarbonyyliaminoetyyli)-1-(N- bentsyylioksikarbonyyliamidino)atsetidiini (Boc-Dig(Z)) Otsikkoyhdiste valmistettiin 3-(N-tert-butyylioksikarbonyy-liaminoetyyli)atsetidiinistä 3-(N-tert-butyylioksikarbonyy- liaminometyyli)-1-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidino)atseti-10 diinille tarkoitetulla menettelutavalla, saannolla 0,090 g (34 %) .
(ix) 3-aminoetyyli-l-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidino)atsetidiini (H-Dig(Z)) 15 0,589 g (1,56 mmol) Boc-Dig(Z):aa liuotettiin 10 ml:aan
EtOAcitä, joka oli kyllästetty HCl(g):llä, ja sekoitettiin 10 min ajan huoneenlämpötilassa. Lisättiin tipoittain 10 ml kylläistä KOH(aq)-liuosta. Kerrokset erotettiin, ja vesifaasi uutettiin 3 x 8 ml EtOAc:llä. Orgaaniset kerrokset yhdis-20 tettiin, pestiin suolaliuoksella, kuivattiin Na2S04:llä ja haihdutettiin, jolloin saatiin 0,415 g (96 %) otsikkoyhdis- V.J tettä.
• · • · · • ·· • * :Y: ^-NMR (500 MHz, CDC13) : δ 1,60 (dt, 2H) , 2,52 - 2,54 (m, • ' · : 25 3H) , 3,53 (bs, 2H) , 4,0 (bt, 2H) , 5,00 (s, 2H) , 7,17 - 7,31 <11 · : (m, 5H) .
• · · ♦ ·♦ < ··· • · · • · ·
Työesimerkit . . Esimerkki 1 • * · 30 HOOC-CH2- (R)Cgl-Aze-Pab J**.J (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) ·:··· Sekoitettuun seokseen, jossa oli 3,40 g (10 mmol) Boc-(R)Cgl- ....i Aze-OH:ta (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) ja 5,13 g DMAP:tä (42 mmol) 120 mlrssa CH3CN:ää, lisättiin 3,18 g H- ♦ · · • ·] 35 Pab(z) x HCl:ää (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus). Kun * * oli sekoitettu 2 tunnin ajan huoneenlämpötilassa, seos jäähdytettiin -8 °C:seen, ja lisättiin 2,01 g (10,5 mmol) 119812 78 EDC:tä. Reaktion annettiin saavuttaa huoneenlämpötilan, ja sekoitusta jatkettiin vielä 47 tunnin ajan. Liuotin haihdutettiin, ja jäännös liuotettiin 200 ml:aan EtOAc-.tä. Orgaaninen faasi pestiin 1 x 50 ml:11a vettä, 1 x 50 + 2 x 25 5 ml :11a 0,5 M KHS04:ää, 2 x 25 ml :11a NaHC03:a (kylläistä), 1 x 50 ml:11a vettä, ja kuivattiin. Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 5,21 g (86 %) otsikkoyhdistettä.
^-NMR (500 MHz, CDC13) : δ 0,8 - 1,9 (m, 20H; siitä 1,30 (s, 10 9H)), 2,35 - 2,6 (m, 2H), 3,74 (bt, 1H), 4,10 (m, 1H), 4,25 - 4.4 (m, 2H) , 4,45 - 4,6 (m, 1H, rotameerit) , 4,75 - 5,0 (m, 1H, rotameerit), 5,08 (bd, 2H), 5,15 (s, 2H), 7,15 - 7,35 (m, 5H), 7,41 (d, 2H), 7,77 (d, 2H), 8,21 (m, 1H).
15 (ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)
Kylmään (jäähaudelämpötila) liuokseen, jossa oli 18,8 g HC1(g):tä 195 ml:ssa EtOAC:tä, lisättiin 4,69 g (7,743 mmol) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab(Z):aa yhdessä 40 ml:n kanssa EtOAc:tä. Reaktioseoksen annettiin saavuttaa huoneenlämpötilan, ja 20 sekoitettiin 30 min ajan. Kirkkaaseen liuokseen lisättiin 140 ml Et20:ta, jolloin muodostui sakkaa. Reaktio jätettiin • * V,: huoneenlämpötilaan vielä 1 tunnin ja 40 min ajaksi. Sakka s\j suodatettiin pois, pestiin nopeasti 150 ml:11a Et20:ta, ja ·*;*: kuivattiin tyhjössä. Sakka liuotettiin 50 ml:aan vettä, ja • · i ·’· 25 säädettiin alkaliseen pH-arvoon 15 ml:11a 2 M NaOH:ta. Aika- m · ♦ * «*· · j linen vesifaasi uutettiin 1 x 100 + 1 x 50 ml :11a CH2Cl2:ta.
• · · ”·.φ Yhdistetty orgaaninen faasi pestiin 1 x 20 ml:11a vettä, l x • · ♦ * 20 ml:lla suolaliuosta ja kuivattiin (MgS04) . Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 3,44 g (88 %) otsikkoyhdistettä.
• · · li» • * 30 1H-NMR (500 MHz, CDC13) : δ 0,8 - 2,0 (m, 11H) , 2,51 (m, 1H) , ·:··: 2,67 (m, 1H) , 3,07 (d, 1H) , 4,11 (m, 1H) , 4,18 (m, 1H) , 4,43 ....: (dd, 1H), 4,53 (dd, 1H) , 4,91 (M, IH) , 5,22 (S, 2H) , 7,2 - 7.4 (M, 7H) , 7,45 (d, 2H) , 8,51 (d, 2H) .
• · · : ·* 35 (iii) BnOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (Z)
Sekoitettiin 1,13 g (2,2 mmol) H-(R) Cgl-Aze-Pab(Z):aa, 0,9 g 119812 79 (2,6 mmol) bentsyyli-2-(orto-nitrobentseenisulfonyyliok-si) asetaattia ((2-N02) Ph-S02-0CH2-C00Bn) (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 0,99 g (5,6 mmol) K2C03:a ja 113 ml CH3CN:ää, ja kuumennettiin 60 °C:ssa Öljyhauteella 3 tunnin 5 ajan. Liuotin haihdutettiin tyhjössä. Lisättiin EtOAc:tä, ja seos pestiin vedellä, orgaaninen faasi uutettiin 1 M KHSO4: llä, ja tämä vesifaasi pestiin EtOAc:llä. Hapan vesi-faasi säädettiin 1 N NaOH:lla alkaliseen pH-arvoon >8, ja uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen faasi pestiin vedellä, kui-10 vattiin (Na2S04) , suodatettiin ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 1,17 g jäännöstä, joka alistettiin kahdesti flash-kromatografiälle käyttämällä ensin CH2Cl2/MeOH(NH3-kyllästetty) :ta 95/5 ja sitten dietyylieetteri/MeOH(NH3-satura-ted):ta 9/1 eluentteina, jolloin saatiin 0,525 g (36 %) 15 otsikkoyhdistettä. Alkylointi suoritettiin myös käyttämällä bentsyyli-2-(para-nitrobentseenisulfonyylioksi)asetaattia ( (4-N02) Ph-S02-0CH2-C00Bn) (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) käyttäen samaa menettelytapaa kuin edellä, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä saannolla 52 %.
20 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) : 5 0,85 - 2,15 (m, 11H) , 2,48 (m, V*!: 1H) , 2,63 (m, 1H) , 2,88 (d, 1H) , 3,24 (d, 1H) , 3,27 (d, 1H) , :/.j 3,95 (m, 1H) , 4,05 (m, 1H) , 4,44 (m, 1H) , 4,55 (m, 1H) , 4,91 :Y: (m, 1H), 5,07 (s, 2H), 5,22 (s, 2H), 7,2 - 7,4 (m, 10H), 7,45 • · 1 25 (d, 2H) , 7,79 (d, 2H) , 8,42 (m, 1H) .
• •Φ · • · t · · * · ♦ [···] (iva) HOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab x 2HC1 * * BnOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab(Z):aa, 20 mg (0,031 mmol), liuotet- . . tiin 5 ml:aan metanolia. Lisättiin muutamia tippoja kloro- » · » ';]·* 30 formia ja 5-%:ista Pd/C:tä, ja seosta hydrogenoitiin 1 tunnin • · *··* ajan ilmakehän paineessa. Suodatuksen ja haihdutuksen jälkeen ·:··· tuote lyofilisoitiin vedestä, jolloin saatiin 11 mg (72 %) otsikkoyhdistettä.
·* · • ·[ 35 Hi-NMR (500 MHz, D20) : δ 1,0 - 2,0 (m, UH), 2,10 (m, 1H) , 2,44 (m, 1H) , 2,82 (m, 1H) , 3,90 (s, 2H) , 4,09 (d, 1H) , 4,4 - 119812 80 4.55 (m, 2H), 4,66 (s, 2H), 5,08 (m, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,89 (d, 2H).
13C-NMR (75,5 MHz, D20): amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 5 167,3, 167,9, 169,9 ja 172,4.
(ivb) H00C-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab
BnOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab(Z):aa liuotettiin EtOH:hon (99-%), ja hydrogenoitiin 5 tunnin ajan 5-%:isella Pd/C:llä ilmakehän 10 paineessa. Katalysaattori suodatettiin seliitin läpi ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin otsikkoyhdiste saannolla 97 %.
^-NMR (500 MHz, CD3OD, kahden rotameerin seos) : pääasiani -15 nen rotameeri: δ 1,00 - 1,12 (m, 1H) , 1,13 - 1,34 (m, 4H) , 1.55 - 1,70 (m, 3H) , 1,73 - 1,85 (m, 2H) , 1,94 - 2,02 (bd, 1H) , 2,32 - 2,42 (m, 1H) , 2,54 - 2,64 (m, 1H) , 2,95 - 3,10 (AB-järjestelmä plus d, 3H) , 4,18 - 4,25 (bq, 1H) , 4,28 - 4,32 (bq, 1H), 4,43 - 4,60 (AB-järjestelmä, 2H), 4,80 - 4,85 20 (dd, 1H) , 7,48 - 7,54 (d,2H), 7,66 - 7,71 (d, 2H) .
Erottuneet signaalit vähäisemmästä rotameeristä näkyvät *.V kohdassa δ 0,95 (m), 1,43 (m), 2,24 (m), 2,84 (d) , 3,96 (m), 4,03 (m), 7,57 (bd) , 7,78 (bd) .
• · • · · « · · • ' · • ;*· 25 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ { .·. 168,0, 173,0, 176,3 ja 179,0 ·*« ·
• M
• · · * * *
Esimerkki 2 .. HOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab x 2 HC1 * · * '•t\l 30 (i) H-(R) Cgl-Aze-Pab (Z) • * *···* Valmistettiin samalla tavalla kuin esimerkissä 1 (ii) kuvat- e *:*·: tiin käsittelemällä muodostuneen hydrokloridiuolan emäksellä, *;··· jolloin saatiin vapaata emästä.
«* · * · · : ·[ 35 (ii) BnOOC-CH2-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab (Z) * * H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) :aa, 0,19 g (0,38 mmol) , ja 70 mg (0,43 mmol) bentsyyliakrylaattia liuotettiin 2 ml:aan isopro- 81 panolia. Seos jätettiin seisomaan 6 tunniksi. Flash-kromato-grafoitiin käyttämällä eluenttina CH2Cl2/THF:ää = 8/2, jolloin saatiin 0,12 g (48 %) otsikkoyhdistettä.
5 1H-NMR (500 MHz, CDC13) : δ 0,8 - 1,9 (m, 10H), 1,95 (bd, 1H), 2,4 - 2,6 (m, 4H) , 2,7 - 2,8 (m, 3 H; siitä 2,79 (d, 1H) ) , 4,13 (m, 1H) , 4,37 (dd, 1H) , 4,60 (dd, 1H) , 4,97 (dd, 1H) , 5,09 (dd, 2 H), 5,22 (s, 2H) , 7,25 - 7,4 (m, 10H) , 7,47 (d, 2H), 7,83 (d, 2H), 8,61 (bt, 1H).
10 (iii) HOOC-CH2-CH2- (R)Cgl-Aze-Pab x 2 HC1 BnOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) :aa, 0,10 g (0,15 mmol) , liuotettiin 10 ml:aan etanolia, ja hydrogenoitiin 1 tunnin ajan 5-%:isella Pd/C:llä ilmakehän paineessa. Liuos suoda-15 tettiin, haihdutettiin, ja raakatuote puhdistettiin RPLC:llä CH3CN/0,1 M NH4OAc:tä (1/4) käyttämällä. Tulokseksi saatu tuote pakastekuivattiin, käsiteltiin ylimäärällä konsentroitua HC1:ää, ja pakastekuivattiin jälleen, jolloin saatiin 31 mg dihydrokloridisuolaa.
20 ^-NMR (300 MHz, D20) δ 0,8 - 2,1 (m, UH) , 2,38 (m, 1H) , 2,7 0*.·' - 2,9 (m, 3H) , 3,2 - 3,4 (m, 2H) , 3,98 (d, 1H) , 4,35 - 4,55 :\| (m, 2H) , 4,60 (s, 2H) , 5,04 (dd, 1H) , 7,59 (d, 2H) , 7,83 (d, :V: 2h) .
• # : 25 ··· ♦ • .·. 13C-NMR (75 MHz, D20) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 167,2, ]·!·* 167,8, 172,3 ja 175,5.
• « · , . Esimerkki 3 * · · 30 HOOC-CHz- (R)Cgl-Pro-Pab x 2 HCl 5 (i) Boc-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) ·*··: Boc-(R) Cgl-Pro-OH: ta (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 2,3 g (6,49 mmol), DMAP: tä, 2,38 g (19,47 mmol) , ja H-Pab(Z) :aa (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 1,84 g • · · : ·" 35 (6,49 mmol), sekoitettiin 30 ml:ssa asetonitriiliä. Seos '***' jäähdytettiin -15 °C.*seen, ja lisättiin EDCrtä, 1,31 g (6,81 mmol). Lämpötilan annettiin saavuttaa huoneenlämpötilan, ja 119812 82 seosta sekoitettiin yön yli. Haihduttamisen jälkeen jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin ja 0,3 M KHSO4-liuokseen. Hapan vesifaasi uutettiin kolmesti etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi pestiin kahdesti 0,3 M KHSO4-liuoksella, kahdesti 5 NaHC03-liuoksella ja kerran suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04) , suodatettiin ja haihdutettiin. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla silikageelillä käyttäen eluenttina etyyliasetaattia, jolloin saatiin 1,77 g (44 %) tuotetta.
10 ^-NMR (500 MHz, CDC13) : δ 0,9 - 1,49 (m, 14H) , 1,5 - 2,1 (m, 9H) , 2,37 (bs, 1H) , 3,53 (q, 1H) , 3,94 (bs, 1H) , 4,02 (m, 1H) , 4,43 (bs, 2H) , 4,65 (d, 1H) , 5,09 (bs, 1H) , 5,20 (s, 2H) , 7,18 - 7,4 (m, 5H) , 7,45 (d, 2H) , 7,62 (bs, 1H) , 7,81 15 (m, 2H) , (ii) H-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) 1,45 g (2,34 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-Pab(Z):aa liuotettiin 75 ml:aan HCl:llä kyllästettyä etyyliasetaattia. Seoksen annet-20 tiin seistä 10 min ajan huoneenlämpötilassa. Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 1,3 g tuotteen dihydrokloridisuolaa.
• · • a · • · · * « !/.{ 1H-NMR (300 MHz, D20) : δ 1,0 - 1,45 Xm, 5H) , 1,58 - 2,2 (m, iYl 9H) , 2,3 - 2,5 (m, 1H) , 3,75 - 3,90 (m, 2H) , 4,25 (d, 2H) , • « • j*. 25 4,5 - 4,66 (m, 3H) , 5,49 (s, 2H) , 7,45 - 7,7 (m, 7H) , 7,87 : .*! (d, 2H) • · • M · *·· • * · · «
Amiini saatiin liuottamalla dihydrokloridisuolan 0,1 M NaOH- .. liuokseen ja uuttamalla vesifaasin kolmesti etyyliasetaatil- • · · 30 la. Orgaaninen faasi pestiin kerran suolaliuoksella, kuivat- t t *··* tiin (Na2S04) , suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin *:·*· 1,19 g (97 %) otsikkoyhdistettä.
(iii) BnOOC-CH2-(R) Cgl-Pro-Pab (Z) • · · : ·] 35 0,340 g (0,65 mmol) H-(R)Cgl-Pro-Pab(Z):aa sekoitettiin 0,215 * * g:n (0,65 mmol) kanssa BnOOC-CH2-OTf:ää (katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 0,299 g:n (2,17 mmol) kanssa 83 119812 K2CO3: a 4 ml:ssa dikloorimetaania, ja refluksoitiin puolen tunnin ajan. Sitten reaktioseosta sekoitettiin yön yli huoneenlämpötilassa. Reaktioseos laimennettiin CH2Cl2:lla, ja orgaaninen kerros pestiin kerran vedellä ja suolaliuoksella, 5 kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja haihdutettiin. Raaka-tuote puhdistettiin flash-kromatografiällä käyttämällä vaiheittaista CH2Cl2/MeOH-gradienttia (97/3, sen jälkeen 95/5), jolloin saatiin 299 mg TLC:n mukaan kahden tuotteen seosta. Siksi seosta puhdistettiin edelleen flash-kromatografiällä 10 käyttämällä vaiheittaista etyyliasetaatti/tolueeni-gradient-tia (9/1, 93/7, 95/5, 100/0), jolloin saatiin 46 mg (9 %) (BnOOC-CH2) 2-(R) Cgl-Pro-Pab(Z) :aa, joka eluoitui ensin pylväästä, sen jälkeen 133 mg (31 %) haluttua tuotetta BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z).
15 ^-NMR (300 MHZ, CDCl3) : Bn00C-CH2-(R) Cgl-Pro-Pab (Z) : δ 0,9 - 1,3 (m, 5H), 1,4-2,1 (m, 9H), 2,3-2,4 (m, 1H), 3,05 (d, 1H), 3,20-3,37 (AB-järjestelmä, jonka keskus oli kohdassa δ 3,29, 2 H), 3,5-3,6 (m, 2H) , 4,29-4,57 (ABX-järjestelmä, jonka 20 keskus oli kohdassa δ 4,43, 2 H), 4,62 (d, 1H), 4,91 (näennäinen singletti, 2H), 5,19 (s, 2H), 6,75 (bs, NH), 7,1- • · ·'.**.** 7,5 (m, 12H) , 8,7-8,8 (m, 2H+NH) , 9,45 (bs, NH) 1H-NMR (300 v-j MHz, CDC13) : (BnOOC-CH2) 2-(R) Cgl-Pro-Pab (Z) : δ 0,68-0,9 (m, 2H) , 1,0-1,3 (m, 3H) , 1,43 (bd, 1H) , 1,55-2,0 (m, 7 H), 2,05 • · : ;*: 25 (bd, 1H) , 2,3-2,4 (m, 1H) , 3,15 (d, 1H) , 3,25-3,48 (m, 2H) , ··· · : 3,55-3,79 (AB-järjestelmä, jonka keskus oli kohdassa δ 3,67, * * · · 4 H), 4,38-4,58 (ABX-järjestelmä, jonka keskus oli kohdassa δ • · · 4,48, 2 H), 4,68 (d, 1H) , 4,82-4,98 (AB-järjestelmä, jonka keskus oli kohdassa δ 4,91, 4 H), 5,19 (s, 2H) , 6,66 (bs, • · * 30 NH) , 7,1-7,5 (m, 17H) , 7,75 (d, 2H) , 7,80 (t, NH) , 9,37 (bs, !·;·: NH) * · ·;··· 13C-NMR (75 MHz, CDC13) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 164,7, 168,1, 171,5, 172,3 ja 172,6 • · * : ** 35 "(iv) HOOC-CHa-(R) Cgl-Pro-Pab x 2 HC1 0,133 g (0,20 mmol) BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z):aa sekoitet- 84 119812 tiin 0,060 g:n kanssa 5-%:ista Pd/C:tä, 1 ml:n kanssa 1 M HCl-liuosta ja 10 ml:n kanssa etanolia. Seosta käsiteltiin yhden tunnin ajan H2-ilmakehässä. Kun oli suodatettu hyflon läpi ja liuotin haihdutettu, tuote saatiin kahdesti vedestä 5 pakastekuivaamalla saannolla 93 mg, 90-%.
1H-NMR (300 MHz, D20) : δ 1,0 - 1,45 (m, 5H) , 1,5 - 2,1 (m, 9H) , 2,2 - 2,4 (m, 1H) , 3,55 - 3,85 (m, 4H; siitä 3,79 (s, 2H)), 4,23 (d, 1H), 4,33-4,57 (m, 3H), 7,44 (d, 2H), 7,69 (d, 10 2H) 13C-NMR (75 MHz, D20): amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 166,9, 167,2, 169,1, 174,5 15 Esimerkki 4 HOOC-CH2-CH2-(R) Cgl-Pro-Pab X 2 HC1 (i) BnOOC-CH2-CH2- (R) cgl-Pro-Pab(Z) 0,406 g (0,782 mmol) H-(R)Cgl-Pro-Pab(Z):aa (katso esimerkkiä 3) liuotettiin 3 ml:aan etanolia, ja lisättiin 132 μΐ (0,861 20 mmol) bentsyyliakrylaattia. Reaktioseosta sekoitettiin kolme päivää huoneenlämpötilassa. Seos haihdutettiin, ja raakatuote • · ·.*.· puhdistettiin flash-kromatograf iällä käyttämällä eluenttina vaiheittaista CH2C12:MeOH-gradienttia 95/5 ja 90/10, jolloin saatiin 0,399 g (75 %) tuotetta.
• · : .·. 25 • · • ·· · : 1H-NMR (300 MHz, CDCI3) : δ 0,8 - 1,0 (m, 1H) , 1,0 - 1,3 (m, "j\ 4H) , 1,35 - 2,2 (m, 9H) , 2,3 - 2,6 (m, 4H) , 2,65 - 2,78 (m, • · · 1H) , 3,05 (d, 1H) , 3,4 - 3,6 (m, 2H), 4,25 - 4,52 (ABX-jär- .. jestelmä, jonka keskus on kohdassa δ 4,40, 2 H), 4,64 (dd, • · · 30 1H) , 5,05 (S, 2H) , 5,20 (s, 2H) , 7,2 - 7,38 (m, 10H) , 7,43 :···: (d, 2H) , 7,78 (d, 2H) • » 13C-NMR (75 MHz, CDCI3) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 164,7, 167,9, 171,3, 172,7 ja 175,4.
• · · • * • · 35 (ii) HOOC-CH2-CH2-(R) Cgl-Pro-Pab x 2 HC1 0,261 g (0,383 mmol) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) :aa se- 119812 85 koitettiin 0,075 g;n kanssa 5-%:ista Pd/C:tä, 1 ml:n kanssa 1 M HCl-liuosta ja 10 ml: n kanssa etanolia. Seosta hydro-genoitiin 2 tunnin ajan ilmakehän paineessa. Kun oli suodatettu hyflon läpi ja liuotin haihdutettiu, tuote 0,196 g (96 5 %) saatiin pakastekuivaamalla kahdesti vedestä 'n-NMR (300 MHz, D20): δ 1,17 - 1,40 (m, 5H), 1,60 - 1,92 (m, 5H), 1,92 - 2,2 (m, 4H), 2,32 - 2,48 (m, 1H), 2,81 (t, 2H) , 3,11 - 3,36 (ABX2-järjestelmä, jonka keskus oli kohdassa δ 3,24, 2H), 3,63 - 3,90 (m, 2H), 4,25 (d, 1H), 4,42 - 4,63 (m, 3H), 7,54 10 (d, 2H) 7,78 (d, 2H) 13C-NMR (75 MHz, D20): amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 167,0, 167,30, 174,6 ja 174,7.
15 Esimerkki 5 (HOOC-CH2)2-(R)Cgl-Pro-Pab x 2 HC1 46 mg (0,056 mmol) (BnOOC-CH2)2- (R)Cgl-Pro-Pab(Z) :aa (katso esimerkkiä 3) sekoitettiin 25 mg:n kanssa 5-%:ista Pd/C:tä, 0,7 ml:n kanssa 1 M HCl-liuosta ja 7 ml:n kanssa etanolia. 20 Seosta hydrogenoitiin 1 tunti ilmakehän paineessa. Kata lysaattori suodatettiin pois hyflon kautta, ja liuotin haih- • * *.V dutettiin. Lopullinen tuote 25 mg (77 %) saatiin pakaste- • · ! kuivaamalla kahdesti vedestä.
• · • · • · · • ♦ · • · j ;·; 25 3H-NMR (300 MHz, D20) : Ö 1,0 - 1,4 (m, 5H) , 1,45 - 2,2 (m, : .*! 9H) , 2,25 - 2,45 (m, 1H) , 3,53 - 3,84 (m, 2H) , 3,84 - 4,22 • · * *·· · (AB-järjestelmä, jonka keskus oli kohdassa δ 4,03, 4 H), 4,26 • · · (d, 1H), 4,35 - 4,6 (m, 3 H), 7,53 (d, 2H), 7,77 (d, 2H) • · • · · *;!** 30 13C-NMR (75 MHz, D20) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 167,1, 167,3, 170,6 ja 174,5 * • · .··*! Esimerkki 6 • » H- (R) Cgl-Pic-Pab x 2 HC1 : ·; 35 (i) Boc-(R) Cgl-Pic-Pab(Z) 0,478 g (2,49 mmol) EDC:tä lisättiin -18 °C:ssa sekoitettuun liuokseen, jossa oli 0,875 g (2,37 mmol) Boc-(R)Cgl-Pic-OH:ta 119812 86 (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 1,22 g (9,97 mmol) DMAP:tä, ja 0,706 g (2,49 mmol) H-Pab(Z):aa (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) seoksessa, jossa oli 30 ml asetonitriilia ja 1 ml DMF:ää. Reaktioseoksen annettiin 5 saavuttaa huoneenlämpötilan muutaman tunnin aikana, ja sekoitusta jatkettii 48 tunnin ajan. Liuotin poistettiin tyhjössä, ja jäännös liuotettiin 50 ml:aan etyyliasetaattia. Liuos pestiin 15 ml:11a vettä, 3 x 15 ml:11a 0,3 M KHS04:ää, 2 x 15 ml:11a Na2C03-liuosta ja vettä. Liuotin poistettiin, 10 jolloin saatiin jäännöstä, joka alistettiin flash-kromato-grafialle käyttämällä eluenttina etyyliasetaatti/heptaania 9:1. Saanto oli 0,96 g (64 %).
(ii) H-(R)Cgl-Pic-Pab(Z) 15 Kloorivetyä kuplitettiin liuoksen läpi, jossa oli 0,56 g (0,88 mmol) Boc-(R)Cgl-Pic-Pab(Z):aa 25 ml:ssa etyyliasetaattia. Muutaman minuutin kuluttua liuoksesta saostui kiteitä. Liuotin poistettiin tyhjössä, ja lisättiin 50 ml etyyliasetaatti. Pestiin 2 x 15 ml:11a 2 M natriumhydroksi-20 diliuosta ja vesifaasi uutettiin 25 ml:11a etyyliasetaattia, minkä jälkeen yhdisteyt uutteet kuivattiin (natriumsulfaatti) • · ja liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin saatiin 0,448 g (95 !,*·: %) haluttua tuotetta.
• · · • · · • · • 25 (iii) H- (R) Cgl-Pic-Pab x 2 HC1 ·«· · : Liuosta, jossa oli 98 mg (0,18 mmol) Η-Cgl-Pic-Pab(Z) :aa 5 ··· · ml:ssa 95-%:ista etanolia ja 1 ml:ssa vettä, sekoitettiin 4 • · · tunnin ajan vetyilmakehässä 5-%:isen Pd/C:n läsnä ollessa.
.. Seos suodatettiin, ja lisättiin 0,3 ml 1 M suolahappoa.
• · · lii 30 Etanoli poistettiin tyhjössä, ja jäännös pakastekuivattiin, • * *"' jolloin saatiin 70 mg (81 %) haluttua yhdistettä.
• t ^-NMR (300 MHz, CD30D) : δ 1,00 - 1,56 (m, 7H) , 1,56-1,94 (m, 9H) , 2,32 (bd, 1H) , 3,32-3,45 (m, 1H) , 3,90 (bd, 1H) , 4,35 ♦ · · : \ 35 (d, 1H) , 4,50 (s, 2H) , 5,10 - 5,20 (m, 1H) , 7,55 (d, 2H) , 7,76 (d, 2H) 119812 87 13C-NMR (75 MHz, D20): amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 167,2, 170,5 ja 173,4.
Esimerkki 7 5 HOOC-CHa- (R, S) CR (COOR) - (R) Cgl-Pic-Pab X 2 HC1 (i) BnOOC-CH2- (R, S) CH (COOBn) - (R) Cgl-Pic-Pab (Z)
Seosta, jossa oli 350 mg (0,66 mmol) H-(R)Cgl-Pic-Pab(Z):aa (katso esimerkkiä 6) ja 233 mg dibentsyylimaleaattia 2,5 ml:ssa etanolia, pidettiin 4 päivän ajan huoneenlämpötilassa. 10 Etanoli poistettiin tyhjössä, ja jäännös alistettiin flash-kromatografialle käyttämällä eluenttina etyyliasetaat-ti/heptaania 9:1, jolloin saatiin 0,108 mg tuotetta.
(ii) HOOC-CH2-(R, S) CH(COOH) - (R) Cgl-Pic-Pab x 2 HC1 15 105 mg (0,13 mmol) BnOOC-CH2- (R, S) CH (COOBn) - (R) Cgl-Pic-
Pab (Z):aa liuotettuna 5 ml:aan 95-%:ista etanolia ja 1 ml:aan vettä hydrogenoitiin 5 tunnin ajan, kun läsnä oli 5-% Pd/C:tä. Lisättiin 0,3 ml 1 M suolahappoa, ja seos suodatettiin ja liuotin poistettiin tyhjössä. Jäännös liuotettiin 20 veteen ja pakastekuivattiin, jolloin saatiin 54 mg (73-%) haluttua ainetta.
• * • • · · • φ i,*·· 1H-NMR (300 MHz, CD30D, kahden diastereomeerin seosta 5/4): δ :Y: 1,10 - i,eo (m, 7H), i,eo - 2,04 (m, 9H), 2,23 - 2,42 (m, • · ; ;*; 25 1H) , 2,93 - 3,15 (m 2H) , 3,30 - 3,42 (m, 1H, osaksi MeOD- ··· · j huipun peittämänä) , 3,71 - 3,95 (m, 1H) , 3,98 - 4,10 (m, 1H) , !···! 4,40 - 4,60 (m, 3H) , 5,10 - 5,20 (m, 1H) , 7,49-7,60 (m, 2H) , * * * 7,70 - 7,81 (m, 2H) • · • · 30 13C-NMR (75 MHz D20) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 167,1, • · *·;·* 168,95, 169,6 ja 173,1.
· m/z 516 (M++l) * ·· · • · · : ·* 35 Esimerkki 8 H-(R) Cha-Aze-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-Aze-Pab(Z) 119812 88 409 mg (2,13 mmol) EDC:tä lisättiin -18 °C:ssa sekoitettuun seokseen, jossa oli 0,72 g (2,03 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-OH:ta (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 1,04 g (8,53 mmol) DMAP:tä, ja 604 mg (2,13 mmol) H-Pab(Z):aa (Katso kohtaa 5 Lähtöaineiden valmistus) 20 ml:ssa asetonitriiliä. Reak-tioseoksen annettiin saavuttaa huoneenlämpötilan yön yli, ja liuotin poistettiin seuraavaksi tyhjössä. Jäännös liuotettiin 40 ml:aan etyyliasetaattia, ja orgaaninen faasi pestiin peräkkäin 10 ml:11a vettä, 3 x 10 ml:11a 0,3 M KHSO^ää, 2 x 10 10 ml:lla Na2C03-NaCl(aq) :ta, ja lopuksi 10 ml:lla suolali uosta. Kuivattiin (Na2S04) ja liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin saatuun jäännöstä, joka alistettiin flash-kromato-grafialle käyttämällä eluenttina etyyliasetaatti/metanolia 9:1, jolloin saatiin 645 mg (51 %) otsikkoyhdistettä.
15 (ii) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z)
Kloorivetyä kuplitettiin liuoksen läpi, jossa oli 640 mg (1,03 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-Pab(Z):aa 25 ml:ssa etyyliasetaattia. Muutaman minuutin kuluttua TLC-analyysi osoitti 20 reaktion edenneen loppuun. Käytettiin tyhjöä ylimääräisen kloorivedyn poistamiseksi, ja sitten seos laimennettiin • * V.: etyyliasetaatilla 50 ml:aan. Pestiin 2 x 15 ml:11a • · !.**: Na2C03 (aq) :a, minkä jälkeen vesifaasi uutettiin 15 ml:lla :V: etyyliasetaattia. Yhdistetyt orgaaniset uutteet pestiin : 25 vedellä ja kuivattiin (Na2C03) , ja liuotin poistettiin tyh- • m · j .*. jössä, jolloin saatiin 513 mg (96 %) H-(R) Cha-Aze-Pab(Z) :aa.
·«· · • · · • · * * » · (iii) H-(R)Cha-Aze-Pab x 2HC1 .. 76 mg (0,15 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z):aa liuotettuna 5 ml:aan • « · 30 95-%:ista etanolia ja 1 ml:aan vettä hydrogenoitiin 4 tunnin • * *·"* ajan ilmakehän paineessa, kun läsnä oli 5-%:ista Pd/C:tä.
*:**: Katalysaattori poistettiin suodattamalla, lisättiin 0,4 ml 1 ·:··· M suolahappoa, ja liuotin haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin jäännös, joka liuotettiin 2 ml:aan vettä.
• · * * \ 35 Pakastekuivattiin, jolloin saatiin 57 mg (85 %) tuotetta.
···· • · ^-NMR (500 MHz, D20, 2 rotameeriä, 3:l-seosta) δ 1,02 - 1,20 89 119812 (m, 2H) , 1,22 - 1,92 (m, 11H) , 2,40 - 2,50 (m, 1H) , 2,80 - 2,90 (m, 1H) , 4,25 (bt, 1H) , 4,40 (dq, 1H) , 4,53 (dq, 1H) , 4,65 (S, 2H) , 5,05 - 5,10 (m, 1H) , 7,65 (d, 2H) , 7,88 (d, 2H) . Vähäisemmän rotameerin erottuneiden signaalien 5 kemialliset siirtymät: δ 0,57 (m), 0,85 (m), 2,95 (m), 4,06 (dq), 4,17 (dq), 4,63 (s), 5,33(m), 7,70(d), 7,93 (d).
13C-NMR (125 MHz D20): amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 167,2, 170,4 ja 172,8.
10
Esimerkki 9 HOOC-CHa- (R)Cha-Aze-Pab x 2HC1 (i) BnOOC-CH2- (R) Cha-Aze-Pab(Z) 0,119 g (0,52 mmol) bentsyylibromiasetaattia lisättiin seok-15 seen, jossa oli 0,27 g (0,52 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z):aa (katso esimerkkiä 8) ja 0,158 g (1,14 mmol) K2C03:a 5,2 ml:ssa asetonitriilia, ja kuumennettiin öljyhauteella 1 tunnin ajan 60 °C:seen. Liuotin poistettiin, ja lisättiin etyyliasetaattia ja vettä. Faasit erotettiin, ja orgaaninen 20 faasi pestiin suolaliuoksella ja kuivattiin (Na2S04) . Haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 0,344 g jäännöstä, joka V.· alistettiin flash-kromatografiälle käyttämällä eluenttina • 1 :.**i etyyliasetaattia, ja sitten toisen kerran etyyliasetaatti: - :Y: tetrahydrof uraani :NH3-kyllästettyä metanolia (60:5:2) käyt- • :1: 25 tämällä, jolloin saatiin 0,163 g haluttua tuotetta.
«·· · • 1 * 1 · • · · !':·! ^-NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,7 - 1,0 (m, 2H) , 1,05 - 2,05 (m, • · · 11H), 2,35 - 2,55 (m, 1H), 2,55 - 2,75 (m, 1H), 3,15 - 3,32 . (m, 3H) , 3,95 - 4,05 (t, 2H) , 4,4 ja 4,5 (ABX-järjestelmä, Y;‘ 30 2H) , 4,8 - 4,95 (m, 1H) , 5,05 (s, 2H) , 5,2 (s, 2H) , 7,2-7,5 • · *·;·' (m, 12H) , 7,7 - 7,85 (d, 2H) , 8,3 - 8,45 (t, 1H) .
* 1 ;··· 13C-NMR (75 MHz, CDC13) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 164,5, 167,8, 170,7, 171,9 ja 175,9.
• · • · 35 0,163 g (0,243 mmol) BnOOC-CH2-(R) Cha-Aze-Pab (Z) :aa liuotet- 1 (ii) HOOC-CH2-(R) Cha-Aze-Pab x 2HC1 119812 90 tuna 5,5 ml:aan etanolia (99,5 %) ja 0,7 ml:aan suolahappoa (1 N) hydrogenoitiin 4 tunnin ajan, kun läsnä oli 0,17 g 5-%:ista Pd/C:ta. Katalysaattori poistettiin suodattamalla ja liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen liuotettiin veteen ja 5 pakastekuivattiin, jolloin saatiin 107 mg (85 %) otsikkoyh-distettä.
1H-NMR (500 MHz, CD3OD, kahden rotameerin seos): pääasiallinen rotameeri: δ 0,95 - 1,95 (m, 13H) , 2,3 - 2,4 (m, 1H) , 10 2,6-2,75 (m, 1H) , 3,5 - 3,75 (m, 2H) , 4,05 - 4,15 (m, 1H) , 4,15 - 4,23 (m, 1H), 4,36 - 4,43 (m, 1H), 4,43 - 4,5 (m, 1H), 4,58 - 4,65 (m, 1H), 4,83 - 4,88 (m, 1H), 7,5 - 7,6 (m, 2H), 7,73 - 7,82 (m, 2H).
Vähäisemmän rotameerin erottuneet signaalit näkyvät kohdassa 15 δ 2,2 - 2,3 (m), 3,95 - 4,05 (m), 5,1 - 5,17 (m), 7,6 - 7,67 (m) .
13C-NMR (75 MHz, CD3OD): amidiini- ja karbonyylihiilet; δ 168,2, 169,8, 168,9 ja 172,3.
20
Esimerkki 10 • · VV HOOC-CHz- (R, S) CH (COOH) - (R) Cha-Aze-Pab x2 HC1 V·: (i) BnOOC-CH2-(R, S) CH(COOBn) - (R) Cha-Aze-Pab(Z) ί#:]ί Seosta, jossa oli 230 mg (0,443 mmol) H-(R) Cha-Aze-Pab (Z) :aa : ;*; 25 (katso esimerkkiä 8) ja 144 mg (0,487 mmol) dibentsyylimale- ··* · j ·*· aattia 1,5 ml:ssa 95-%:ista etanolia, sekoitettiin 5 päivän ··· · ajan ympäristön lämpötilassa. Kun etanoli oli poistettu tyhjössä, jäännös alistettiin flash-kromatografiälle käyttämällä eluenttina etyyliasetaatti/metanolia 95/5, jolloin *,* 30 saatiin 54 mg (15-%) tuotetta.
• m • · *:··: (ii) HOOC-CH2-(R, S) CH(COOH) - (R) Cha-Aze-Pab ·:··· 49 mg (0,06 mmol) BnOOC-CH2-(R, S) CH (COOBn) - (R) Cha-Aze-
Pab(Z) :aa liuotettuna 5 ml:aan 95-%:ista etanolia ja 1 ml:aan • · « * *, 35 vettä hydrogenoitiin 4,5 tunnin ajan, kun läsnä oli 5-%:ista
Pd/C:tä. Katalysaattori poistettiin suodattamalla, ja liuotin haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin jäännöstä, joka 119812 91 liuotettiin 2 ml:aan vettä ja 0,2 ml:aan 1 M suolahappoa. Pakastekuivattiin, jolloin saatiin 32 mg (93 %) tuotetta.
Otsikkoyhdisteen ’n-NMR-spektrissä D20:ssa näkyy kaksi sarjaa voimakkaasti päällekkäisiä signaaleja, jotka syntyvät 5 kahdesta diastereomeeristä. Lisäksi spektrissä näkyy myös erottuneet resonanssit vähäisemmästä rotameeristä, jonka integraali on noin 15 %.
1H-NMR (300 MHz, D20) : δ 1,03 - 2,00 (m, 13H) , 2,32 - 2,53 10 (m, 1H) , 2,72 - 2,96 (m, 1H) , 3,06 - 3,28 (m, 2H) , 4,10 - 4,55 (m, 4H), 4,62 (bs, 2H), 5,00 - 5,10 (m, 1H), 7,55 - 7,68 (m, 2H), 7,80 - 7,94 (m, 2H)
Erottuneet signaalit vähäisemmästä rotameeristä näkyvät kohdassa δ 0,65 (m), 0,80 (m), 4,00 (m), 5,24 (m), 5,35 (m). 15 13C-NMR (75 MHz D20): amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 167,2, 169,0, 171,0, 172,3 ja 174,1.
Esimerkki li 20 H00C-CE2-(Rtais)CH(COOH)-Cha-Aze-Pabla x 2HC1 (i) BnOOC-CH2- (RtaiS) CH (COOBn) - (R) Cha-Aze-Pab (Z) /a I · \V Seosta, jossa oli 2,0 g (3,8491 mmol) H- (R)Cha-Aze-Pab(Z) :aa • · *.**: (katso esimerkkiä 8) ja 1,37 g dibentsyylimaleaattia 10 •V: ml:ssa 95-%:ista etanolia, sekoitettiin 4 päivän ajan ympä- • :*· 25 ristön lämpötilassa. Kun etanoli oli poistettu tyhjössä, ··· · j jäännös alistettiin flash-kromatografiälle käyttämällä «·· · eluenttina etyyliasetaatti/metanolia 98/2, jolloin saatiin • · · 1,024 g (32 %) BnOOC-CH2- (R, S) CH (COOBn) - (R) Cha-Aze-Pab (Z) : aa.
.. Nämä kaksi diastereomeeriä erotettiin RPLC:llä käyttämällä • · · 30 eluenttina CH3CN/0,1 M NH4OAc:tä (65/35). Tämä diastereomeeri • · *·;·* eluoitui ensin pylväästä. Kun asetonitriili olipoistettu *:**: tyhjössä, vesifaasi uutettiin kolmesti etyyliasetaatilla.
····* Orgaaninen faasi pestiin kerran vedellä, kuivattiin (Na2S04) , suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 0,352 g • · * * \ 35 otsikkoyhdistettä puhtaana stereoisomeerinä.
• 119812 92 (ii) HOOC-CH2- (RtaiS)CH(COOH) - (R)Cha-Aze-Pab/a 2 x HC1 350 mg (0,43 mmol) BnOOC-CH2- (RtaiS) CH(COOBn) - (R) Cha-Aze-Pab (Z) /a: ta (Diastetereomeeri kohdasta (i) yllä) liuotettuna 15 ml:aan 95-%:ista etanolia ja 3 ml:aan vettä hydrogenoitiin 5 4,5 tunnin ajan, kun läsnä oli 5-%:ista Pd/C:tä. Kata lysaattori poistettiin suodattamalla, ja liuotin haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin jäännös, joka liuotettiin 5 ml:aan vettä ja 1,0 ml:aan 1 M suolahappoa. Pakastekuivat-tiin, jolloin saatiin 214 mg (87-%) tuotetta puhtaana stere-10 oisomeerinä.
1H-NMR (300 MHz, MeOD, kahden rotameerin seos): δ 0,85 - 1,93 (m, 13H), 2,25 - 2,38 (m, 1H), 2,60 - 2,75 (m, 1H), 2,88 (dd, 2H), 3,92 (t, 1H), 4,15 - 4,25 (m, 2H), 4,30 - 4,43 (m, 1H), 15 4,56 (AB-järjestelmä, 2H), 4,76 - 4,86 (m, 1H, osaksi liuotinsignaalin peittämä), 7,59 (d, 2H), 7,78 (d, 2H).
Vähäisemmästä rotameeristä tulevat erottuneet signaalit näkyvät kohdassa δ 0,70, 2,95, 3,82, 4,00, 5,08 ja 7,83 20 13C-NMR (75 MHz D20): amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 166,9, • · •*.V 168,8, 171,7, 172,3 ja 173,8.
• · • · · • ·· • · • :: Esimerkki 12 • · • 25 H00C-CH2-(RtaiS) CH(COOH) - (R)Cha-Aze-Pab/b X 2HC1 ·«* · 1 (i) Bn00C-CH2- (RtaiS) CH (COOBn) - (R) Cha-Aze-Pab (Z) /b ·*# ·
Otsikkoyhdiste saatiin käyttämällä samaa menettelytapaa, joka kuvattiin esimerkissä 11 edellä BnOOC~CH2-(R, S) CH (COOBn)- e. . (R)Cha-Aze-Pab(Z):llä. Tämä diastereomeeri tuli pylväästä • * * 30 ensimmäisen diastereomeerin jälkeen. Saanto 0,537 g.
• · • · ··· ·:**: (ii) HOOC-CH2- (RtaiS)CH(COOH) - (R)Cha-Aze-Pab/b x 2HC1 ·:··· 530 mg (0,65 mmol) BnOOC-CH2- (RtaiS) CH (COOBn) - (R) Cha-Aze-
Pab(Z)/b:tä liuotettuna 15 ml:aan 95-%:ista etanolia ja 3 • · · * *. 35 ml:aan vettä hydrogenoitiin 5 tunnin ajan, kun läsnä oli 5- %:ista Pd/C:tä. Katalysaattori poistettiin suodattamalla, ja liuotin haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin jäännös, joka 119812 93 liuotettiin 6 mlraan vettä ja 1,0 ml:aan 1 M suolahappoa. Pakastekuivattiin, jolloin saatiin 290 mg (78 %) tuotetta. ^H-NMR (300 MHz, MeOD, kahden rotameerin seos): δ 0,86 - 1,90 (m, 13H) , 2,30 - 2,42 (m, 1H) , 2,60 - 2,75 (m, 1H) , 2,75 - 5 2,85 (m, 1H), 2,95 - 3,05 (m, 1H), 3,65 - 3,71 (m, 1H), 4,00 - 4,10 (m, 1H) , 4,14 - 4,24 (m, 1H) , 4,36 - 4,62 (m, 3H) , 4,78 - 4,86 (m, 1H osaksi liuotinsignaalin peittämä), 7,57 (d, 2H), 7,75 (d, 2H).
10 Vähäisemmästä rotameeristä syntyvät erottuneet signaalit näkyvät kohdassa δ 0,78, 2,92, 3,82, 5,36 ja 7,80 13C-NMR (75 MHz D20): amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 166,8, 169,0, 172,0, 172,4 ja 175,2.
15
Esimerkki 13 HOOC-CH2-CH2-(R) Cha-Aze-Pab x 2 HC1 (i) BnOOC-CH2-CH2- (R)Cha-Aze-Pab(Z)
Seosta, jossa oli 182 mg (0,35 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z):aa 20 (katso esimerkkiä 8) ja 62,5 mg (0,385 mmol) bentsyyliakry-laattia 1,5 ml:ssa 95-%:ista etanolia, sekoitettiin 4 päivän • · :.V ajan huoneenlämpötilassa. Liuotin poistettiin tyhjössä, ja • · ♦.*·· jäännös alistettiin f lash-kromatograf iälle käyttämällä iV: eluenttina etyyliasetaatti/metanolia 9:1, jolloin saatiin 200 j :*· 25 mg (84 %) otsikkoyhdistettä.
«·· · • · • ♦ ♦ • · · !·:·! (ii) HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Pab x 2 HC1 ♦ « « 195 mg (0,29 mmol) BnOOC-CH2-CH2- (R)Cha-Aze-Pab(Z) :aa liuo- . . tettuna 10 ml:aan 95-%:ista etanolia ja 2 ml .-aan vettä hyd- • · · *.* 30 rogenoitiin 4 tunnin ajan, kun läsnä oli 5-%:ista Pd/C:tä.
• ♦ *···* Katalysaattori poistettiin suodattamalla, ja liuotin haihdu- ·;··: tettiin tyhjössä, jolloin saatiin jäännös, joka liuotettiin 2 ·;··· ml:aan vettä ja 0,4 ml:aan 1 M suolahappoa. Pakastekuivat- tiin, jolloin saatiin 130 mg (86 %) tuotetta.
• · t • · * *, 35 * * 1H-NMR (500 MHz, CD30D) : δ 0,98 - 1,27 (m, 2H) , 1,30 - 1,90 (m, 11H), 2,27 - 2,35 (m, 1H), 2,65 - 2,74 (m, 1H), 2,77 (t, 119812 94 2H) , 3,32 (t, 2H) , 4,10 (t, 1H) , 4,17-4,25 (m, 1H) , 4,40 -4,49 (m, 1H) , 4,55 (AB, 2H) , 4,83 - 4,90 (m, 1H) , 7,58 (d, 2H), 7,77 (d, 2H).
5 13C-NMR (125 MHz D2O): amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 167,0, 168,9, 172,4 ja 174,6.
Esimerkki 14 HOOC-CH2-NH-CO-CH2- (R) Cha-Aze-Pab x2HCl 10 (i) BnOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R) Cha-Aze-Pab (Z)
Seosta, jossa oli 0,212 g (0,408 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pab(Z):aa (katso esimerkkiä 8), 0,124 g (0,89 mmol) K2C03:a ja 0,128 g (0,449 mmol) BnOOC - CH2 - NH - CO - CH2 - Br: ää (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) 6 ml:ssa asetonitriiliä, 15 sekoitettiin kahden tunnin ajan 50 °C:ssa. Kun liuotin oli haihdutettu, jäännös liuotettiin veteen ja etyyliasetaattiin. Vesikerros uutettiin kahdesti etyyliasetaatilla, ja yhdistetty orgaaninen kerros kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja haihdutettiin. Tuote puhdistettiin flash-kromatogra-20 fiällä käyttämällä vaiheittaista etyyliasetaatti/tetrahydro-furaani-gradienttia (85/15, 4/1, 7/3), jolloin saatiin 0,190 • · V.: g (64 %) otsikkoyhdistettä.
» · • · · * ·· • · :V: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3) : δ 0,75 - 2,1 (m, 13H) , 2,43 1H) , • :1: 25 2,56 (d, 1H) , 2,79 (m, 1H) , 3,0 - 3,15 (m, 2H; siitä 3,05 (d, • · « m : 1H)), 3,89 - 4,18 (m, 5H) , 4,8 - 4,98 (m, 2H) , 5,15 (s, 2H) , !·!·! 5,18 (s, 2H) , 7,2 - 7,47 (m, 12H) , 7,72 (t, NH) , 7,86 (d, « « 2H), 8,14 (bs, NH), 8,31 (dd, NH), 9,42 (bs, NH) · • · · 30 13C-NMR (75 MHz, CDCI3) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ *·;·: 164,5, 168,7, 169,22, 169,83, 171,7, 175,5 • · ·:··· (ii) HOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Aze-Pab x2HCl 0,19 g (0,26 mmol) BnOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R) Cha-Aze-Pab(Z) :aa : \ 35 sekoitettiin 0,075 g:n kanssa 5-%:ista Pd/C:tä, 1,5 ml:n kanssa 1 N HCl-liuosta, 3 ml:n kanssa vettä ja 17 ml:n kanssa etanolia, ja seosta hydrogenoitiin 1 tunnin ajan ilmakehän 119812 95 paineessa. Katalysaattori suodatettiin, liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen pakastekuivattiin vedestä, jolloin saatiin 144 mg (97 otsikkoyhdistettä.
5 ^-NMR (D20, 300 MHz, kaksi rotameeriä 4:1): δ 0,88 - 1,88 (m, 13H), 2,25 - 2,42 (m, 1H), 2,63 - 2,89 (m, 1H), 3,94 (s, 2H), 3,99 (näennäinen dupletti, 2H) , 4,16 (t, 1H) , 4,28 (q, 1H), 4,41 (q, 1H), 4,56 (s, 2H), 4,98 (dd, 1H), 7,53 (d, 2H), 7,77 (d, 2H), 10 Vähäisemmästä rotameeristä olevat erottuneet signaalit näkyvät kohdassa δ 0,50 (bq), 0,77 (bq), 5,21 (dd), 7,56 (d) ja 7,81 (d).
15 13C-NMR (D20, 75 MHz): Karbonyylit ja amidiinihiili kohdissa δ 166,8, 166,9, 168,6, 172,3 ja 173,4.
Vähäisemmästä rotameeristä olevat erottuneet signaalit näkyvät kohdassa δ: 166,6, 169,6 ja 172,0 20
Esimerkki 15 • 1 V.·1 H- (R) Cha-Pro-Pab x 2HC1 01: (i) Boc-(R) Cha-Pro-Pab(Z) ϊβϊβΓ 0,135 ml (1,1 mmol) pivaloyylikloridia lisättiin huoneenläm- ; 25 pötilassa sekoitettuun seokseen, jossa oli 0,155 ml (1,1 «·· · j1. mmol) trietyyliamiinia ja 405 mg (1,1 mmol) Boc-(R) Cha-Pro- ··· · .·:1» OH:ta (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) 5 ml:ssa DMF:ää.
119812 96 (ii) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z)
Liuoksen läpi, jossa oli 1,246 g (2 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-Pab (Z):aa 20 ml:ssa etyyliasetaattia huoneenlämpötilassa, kuplitettiin kloorivetyä, kunnes liuos oli kylläinen. 30 min 5 kuluttua lisättiin natriumkarbonaattiliuosta (10-%), ja erottunut orgaaninen faasi kuivattiin (K2C03) . Kuivausaine pestiin metyleenikloridilla, ja liuotin haihdutettiin yhdistetyistä orgaanisista faaseista, jolloin saatiin 1,11 g (100 %) otsikkoyhdistettä.
10 (iii) H-(R)Cha-Pro-Pab x 2HC1 100 mg (0,19 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z):aa liuotettuna 15 ml:aan etanolia hydrogenoitiin 1,5 tunnin ajan, jolloin läsnä oli 38 mg 10-%:ista Pd/C:tä. Reaktioseos laimennettiin 15 tislatulla vedellä, ja katalysaattori poistettiin suodattamalla, minkä jälkeen etanoli poistettiin tyhjössä ja pakas-tekuivattiin, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä värittömänä jauheena. Lopulta peptidi muutettiin dihydrokloridiksi liuottamalla suolahappoon, ja pakastekuivattiin sen jälkeen, 20 jolloin saatiin 90 mg (100 %) otsikkoyhdistettä.
• * 1H-NMR (300 MHz, D20) ; δ 1,0 - 2,0 (m, 13H) , 2,0 - 2,3 (m, \*·:* 3H) , 2,3 - 2,5 (m, 1H) , 3,6 - 3,7 (m, 1H) , 3,8 - 3,9 (m, 1H) , :Y: 4,3 - 4,5 (t, 1H), 4,5 - 4,6 (m, 3H), 7,4 - 7,6 (m, 3H) , 7,6 : :*: 25 - 7,9 (m, 2H) .
• · · • · • · · • * · ··· · 13C-NMR (75 MHz, D20) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 167,2, 170,0, 174,9.
• · • · · 30 Esimerkki 16 • · ’·;** H00C-CH2-(R) Cha-Pro-Pab x 2HC1 *:*·: (i) BnOOC-CH2-(R) Cha-Pro-Pab (Z) ·:·*· Seosta, jossa oli 268 mg (0,5 mmol) H- (R) Cha-Pro-Pab(Z) :aa ;.\4 (katso esimerkkiä 15), 90 μΐ (0,55 mmol) bentsyylibro- • · * *. 35 miasetaattia ja 181 mg (1,3 mmol) K2C03:a 2 ml:ssa asetonit- riiliä, sonikoitiin 40 °C:ssa 2,5 tunnin ajan. Seos suodatettiin hyflon läpi ja liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin 119812 97 saatiin jäännös, joka alistettiin flash-kromatografiälle käyttämällä etyyliasetaattia eluenttina, jolloin saatiin 194 mg (57 %) otsikkoyhdistettä.
5 H00C-CH2-(R)Cha-Pro-Pab x 2HC1 194 mg (0,28 mmol) BnOOOCH2- (R)Cha-Pro-Pab(Z) :aa liuotttuna 10 ml:aan etanolia hydrogenoitiin 3 tunnin ajan, kun läsnä 011 77 mg 10-%:ista Pd/C:tä. Reaktioseos laimennettiin vedellä, ja katalysaattori poistettiin suodattamalla. Etanoli 10 haihdutettiin tyhjössä, minkä jälkeen pakastekuivattiin, jolloin saatiin valkoista jäännöstä. Lisättiin suolahappoa, ja tulokseksi saatu liuos pakastekuivattiin lopulta, jolloin saatiin 115 (68 %) haluttua tuotetta.
15 ^-NMR (300 MHz, D20) ; δ 1,0 - 1,2 (m, 2H) , 1,2 - 1,5 (m, 3H), 1,5 - 2,0 (m, 8H), 2,0 - 2,3 (m, 3H), 2,3 - 2,5 (m, 1H), 3,6 - 3,8 (m, 1H) , 3,8 - 4,0 (m, 3H), 4,4 - 4,7 (m, 4H) , 7,5 - 7,7 (d, 2H), 7,7 - 7,9 (d, 2H).
20 13C-NMR (75 MHz, D20) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 167,1, 168,2, 169,3, 174,6.
• * • · · • · · • · • · ϊ *·· Esimerkki 17 • m hooc-ch2-(Me) (R) Cha-Pro-Pab • · : 25 (i) Boc-(Me) (R) Cha-Pro-Pab (Z) ··* * ; Liuokseen, jossa oli 0,8 g (1,67 mmol) Boc-(Me) (R) Cha-Pro-
Ml · OSu: ta (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) 3 ml:ssa • · · DMF:ää, lisättiin liuosta, jossa oli 0,562 g (1,85 mmol) H- .. Pab(Z):aa (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) 3 ml:ssa • · · I.; 30 DMF:ää, ja tuloksekis saadun liuoksen pH säädettiin N-metyy- • · *·;·* limorfoliinilla emäksiseen pH-arvoon 8 - 9, minkä jälkeen ·:**: liuosta sekoitettiin 2 päivän ajan huoneenlämpötilassa. Liuos ·;··· kaadettiin veteen, ja tulokseksi saatu seos uutettiin 3 x 25 ml:11a etyyliasetaattia. Orgaaninen liuos pestiin 1 M KHS04- • · · * \ 35 liuoksella, 10-%:isella NaHC03-liuoksella, vedellä ja suolaliuoksella, ja kuivattiin (Na2S04) . Liuotin haihdutet 119812 98 tiin, jolloin saatiin 0,65 g (60 %) otsikkoyhdistettä kel-lertävänvalkoisena jauheena.
(ii) Me-(R)Cha-Pro-Pab(Z) 5 Liuosta, jossa oli 0,60 g (0,92 mmol) Boc-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z):aa 50 mlissa EtOH:ta, kyllästettiin Helillä 0 °C:ssa, ja liuosta säilytettiin jääkaapissa yön yli. Tulokseksi saatu liuos haihdutettiin kuiviin, ja jäännös liuotettiin Na2C03-liuokseen, uutettiin 3 x 25 ml :11a etyyliasetaattia. 0ute 10 pestiin suolaliuoksella ja haihdutettiin, jolloin saatiin 0,4 g (79 %) yhdistettä valkoisena hÖytäleisenä jauheena.
XH-NMR (CDCI3, 300 MHz): δ 0,8 - 1,0 (m, 2H) , 1,1 - 1,4 (m, 5H) , 1,4 - 1,55 (m, 1H) , 1,6 - 1,9 (m, 10H) , 1,9 - 2,05 (m, 15 2H) , 2,05 - 2,2 (m, 2H) , 2,19 (s, 3H) , 2,4 - 2,5 (m, 1H) , 3,28 (dd, 1H), 3,41 (q, 1H), 3,62 (m, 1H), 4,42 (m, 2H), 4,61 (d, 1H), 5,2 (s, 2H), 7,2 - 7,45 (m, 7H), 7,72 (t, 1H) , 7,79 (d, 2H).
20 (iii) BnOOC-CH2-(Me) (R)Cha-Pro-Pab(Z)
Seosta, jossa oli 0,40 g (0,73 mmol) Me-(R)Cha-Pro-Pab(Z):aa, • · *.*.* 0,17 g BnOOC-CH2Br:ää ja 0,20 g (2 ekviv.) K2C03:a • · *.*·· (huhmareessa murskattua) 15 ml:ssa CH3CN:ää, suodatettiin yön J#i#: yli huoneenlämpötilassa. Tulokseksi saatu seos haihdutettiin, : 25 etyyliasetaatti lisättiin, ja seos pestiin vedellä ja ··· · • ·*. suolaliuoksella, kuivattiin (Na2SC>4), ja haihdutettiin.
··♦ ·
Raakatuote (0,69 g) alistettiin f lash-kromatograf iälle (CH2Cl2/MeOH ίο/l), jolloin saatiin 0,39 g (77 %) vaalean-keltaista, hyvin viskoosia Öljyä.
• » * * * 30 »·· • · *·;·' HOOC-CH2-(Me) (R) Cha-Pro-Pab *:**: Liuokseen, jossa oli 0,39 g (0,56 mmol) BnOOC-CH2- (Me) (R)Cha- ·:**· Pro-Pab(Z) :aa 30 mlrssa EtOH:ta, lisättiin 0,1 g Pd/C:tä (10- %) , ja ainetta hydrogenoitiin ilmakehän paineessa. Liuos * \ 35 suodatettiin ja haihdutettiin, minkä jälkeen jäljelle jäävä siirappimainen materiaali pakastekuivattiin, jolloin saatiin 0,25 g (95 %) yhdistettä valkoisena kiteisenä jauheena.
119812 99 1H-NMR (300 MHz, CD3OD) : δ 0,85 - 1,1 (m, 2H) , 1,1 - 1,4 (m, 6H), 1,5 - 1,85 (m, 9H), 1,9 - 2,05 (m, 3H), 2,05 - 2,15 (m, 1H) , 2,15 - 2,3 (m, 1H), 2,57 (s, 3H), 3,32 (d, 1H) , 3,55 -5 3,75 (m, 2H) , 3,95 - 4,1 (m, 2H) , 4,35 - 4,5 (m, 3H) , 7,55 (d, 2H), 7,72 (d, 2H).
13C-NMR (75 MHz, CD3OD): amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 168,4, 171,5, 174,7, 175,1.
10
Esimerkki 18 HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pab X2HC1 (i) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pab (Z)
Seosta, jossa oli 149 mg (0,28 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z):aa 15 (katso esimerkkiä 15) ja 66 mg (0,4 mmol) bentsyyliakrylaat-tia 1,5 ml:ssa etanolia, pidettiin 36 tunni ajan huoneenlämpötilassa. Liuotin poistettiin tyhjössä, ja jäännös alistettiin flash-kromatografialle käyttämällä etyyliasetaattia eluenttina, jolloin saatiin 124 mg (64 %) haluttua tuotetta.
20 (ii) HOOC-CH2-CH2-(R) Cha-Pro-Pab X2HC1 • · 124 mg (0,18 mmol) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pab (Z) :aa liuo- • · tettuna 10 ml:aan etanoli hydrogenoitiin 1 tunnin ajan, kun ί#:#: läsnä oli 55 mg 10-%:ista Pd/C:tä. Katalysaattori poistettiin • :*· 25 suodattamalla, ja liuotin poistettiin tyhjössä. Jäännös « ;*· liuotettiin suolahappoon, ja tulokseksi saatu liuos pakaste- *·· * kuivattiin, jolloin saatiin 87 mg (79 %) otsikkoyhdistettä.
• 1 2 3 4 5 6 7 8 9 H-NMR (300 MHz, D20) : δ 1,0 - 2,0 (m, 13H) , 2,0 - 2,2 (m, 2 30 3H) , 2,2 - 2,4 (m, 1H) , 2,7 - 2,8 (t, 2H) , 3,2 - 3,3 (m, 1H) , 3 « · 4 3,3 - 3,4 (m, 1H), 3,5 - 3,7 (m, 1H), 3,7 - 3,9 (m, 1H), 4,3 5 ·:**: - 4,6 (m, 4H) , 7,4 - 7,6 (m, 2H) , 7,7,6 - 7,8 (m, 2H) .
6 • · 7 13C-NMR (75 MHz, D20) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 167,0, 8 • *. 35 168,3 ja 174,6 (kaksi hiiltä on päällekkäin).
9 m 119812 100
Esimerkki 19 HOOC-CH2-CH2- (Me) (R) Cha-Pro-Pab x 2HC1 (i) BnOOC-CH2-CH2- (Me) (R) Cha-Pro-Pab(Z)
Liuokseen, jossa oli 274 mg (0,5 mmol) Me-(R)Cha-Pro-5 Pab(Z):aa (katso esimerkkiä 17) 5 ml:ssa EtOHita (99-%), lisättiin 97,3 mg (0,6 mmol) bentsyyliakrylaattia, ja reaktiota sekoitettiin huoneenlämpötilassa. 72 tunnin kuluttua lisättiin vielä 16,2 mg (0,1 mmol) bentsyyliakrylaattia, ja sekoitusta jatkettiin 24 tunnin ajan. Liuotin haihdutettiin, 10 ja jäännös alistettiin flash-kromatografiälle (CH2Cl2/MeOH(NH3-kylläistä) , 95/5), jolloin saatiin 198 mg (56 %) otsikkoyhdistettä.
XH-NMR (500 MHz, CDC13) : δ 0,8 - 2,0 (useita m, 16 H), 2,14 15 (S, 3H) , 2,24 - 2,33 (m, 2H) , 2,38 - 2,46 (m, 1H) , 2,67 (t, 2H), 3,32 - 3,40 (m, 2H), 3,71 (m, 1H), 4,36 - 4,44 (m, 2H), 4,58 (m, 1H), 5,03 (näennäinen S, 2H), 5,20 (s, 2H) , 7,25 - 7,37 (m, 10H), 7,43 (d, 2H), 7,64 (t, 1H (NH)), 7,81 (d, 2H).
20 13C-NMR (125 MHz, CDC13) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 164,7, 167,9, 171,7, 172,3 ja 172,6.
• · • · · * 1 2 3 4 5 · • · 0·: (ii) HOOC-CH2-CH2-(Me) (R) Cha-Pro-Pab x2HCl
Liuokseen, jossa oli 198 mg (0,27 mmol) BnOOC-CH2-CH2-
: 25 (Me) (R) Cha-Pro-Pab (Z) : aa 10 ml:ssa EtOH:ta ja 1 ml 1 M
··· 1 .1. HC1:ää, lisättiin 60 mg 5-%:ista Pd/C:tä (joka sisälsi 50 2 *·· · paino-% H20:ta), ja seosta hydrogenoitiin 4 tunnin ajan il-makehän paineessa. Katalysaattori suodatettiin pois, ja liuotin haihdutettiin. Jäljelle jäävä öljy liuotettiin veteen 3 • 1 · ‘„1 30 ja pakastekuivattiin, jolloin saatiin otsikkoyhdiste 4 • · 5 kvantitatiivisella saannolla.
• ·:··: ’u-NMR (500 MHz, D20) : δ 1,08 - 1,2 (m, 2H) , 1,2 - 1,42 (m, 4H) , 1,68 - 1,91 (m, 5H) , 1,93 - 2,08 (m, 2H) , 2,09 - 2,26 Φ 1 1 \ 35 (m, 3H) , 2,49 (m, 1H) , 2,95 (m, 2H) , 3,03 (s, 3H) , 3,60 (näennäinen bs, 2H) , 3,82 (m, 1H) , 3,98 (m, 1H) , 4,53 (m, 1H), 4,61 (bs, 2H), 4,64 (m, 1H), 7,63 (d, 2H), 7,97 (d, 2H).
119812 ιοί 13C-NMR (75 MHz, D2O) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 167,2, 167,8 ja 174,5. Kaksi huippua on luultavasti päällekkäin.
5 Esimerkki 20 H00C-CH2-(RtaiS)CH(COOH)-(R)Cha-Pro-Pab/a X 2HC1 (i) BnOOC-CH2- (R, S) CH(COOBn) - (R) Cha-Pro-Pab(z)
Seosta, jossa oli 0,50 g (0,94 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(z):aa (katso esimerkkiä 15) ja 0,28 g (0,94 mmol) dibentsyylimale-10 aattia 20 ml-.ssa EtOH:ta, pidettiin 5 päivän ajan huoneenlämpötilassa. Liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen flash-kromatografoitiin käyttämällä CH2Cl2/MeOH:ta eluenttina, jolloin saatiin 0,15 g (19 %) diastereomeeriseosta.
15 1H-NMR (500 MHz, CDC13) : δ 0,7 - 2,1 (m, 17H) , 2,3 - 2,4 (m, 1H), 2,5 - 2,8 (m, 2H), 3,2 - 3,7 (m, 4H), 4,46 (d, 1H), 4,65 (bd, 1H), 4,81 (d, 1H) , 4,9 - 5,1 (m, 3H), 5,20 (s, 2H) , 7,1 - 7,4 (m, 15H), 7,4 - 7,5 (m, 2H) , 7,6 - 7,8 (m, 3H) .
20 (ii) H00C-CH2-(RtaiS) CH (COOH) - (R) Cha-Pro-Pab/a x 2HC1
Seosta, jossa oli 0,15 g (0,18 mmol) BnOOC-CH2- • · V.: (R,S)CH(COOBn)-(R)Cha-Pro-Pab(Z):aa, liuotettiin 5 ml:aan • :.*·· etanolia, ja hydrogenoitiin 1 tunnin ajan 5-%:isella Pd/C:llä :V: ilmakehän paineessa, jolloin saatiin H00C-CH2-(R, S) CH (COOH)- • ;*: 25 (R)Cha-Pro-Pab:tä. Kaksi diastereomeeriä erotettiin RPLC:llä • m · • .*. käyttäen eluenttina CH3CN/0,1 M NH40Ac:tä (15/85), minkä ··· · jälkeen pakastekuivattiin HCl:stä. Tämä diastereomeeri eluoitui ensin pylväästä. Saanto 19 mg (18 %).
• · • · · 30 1H-NM (500 MHz, D20, kahden rotameerin seosta) pääasiallinen *·;·* rotameeri: δ 1,0 - 2,0 (m, 15H) , 2,15 (m, 2H) , 2,44 (m, 1H) , ·:··: 3,00 (bd, 1H) , 3,05 (bd, 1H) , 3,69 (m, 1H) , 3,84 (m, 1H) , ·:··· 3,97 (bs, 1H), 4,5 - 4,7 (m, 3H) , 7,62 (d, 2H) , 7,87 (d, 2H) .
m mm · • · * : \ 35 13C-NMR (75 MHz, D20): amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 167,2, ""** 168,3, 173,8, 174,6 ja 178,2.
119812 102
Esimerkki 21 HOOC-CH2-(RtaiS)CR(COOB)-(R)Cha-Pro-Pab/b x 2HC1 Otsikkoyhdiste saatiin käyttämällä samaa menettelytapaa kuin kuvataan esimerkissä 20 HOOC-CH2-(R, S) CH (COOH) - (R) Cha-Pro-5 Pab:llä. Tämä diastereomeeri tuli pylväästä ensimmäisen diastereomeerin jälkeen. Saanto 19 mg (18 %).
^-NMR (500 MHz, D20, kahden rotameerin seosta) pääasiallinen rotameeri: δ 1,0 - 2,0 (m, 14H) , 2,15 - 2,25 (m, 3H) , 2,44 10 (m, 1H), 3,11 (bd, 1H), 3,19 (bd, 1H), 3,71 (m, 1H), 3,92 (m, 1H), 4,03 (bs, 1H), 4,5 - 4,7 (m, 3H), 7,58 (d, 2H), 7,84 (d, 2H) .
Vähäisemmästä rotameeristä tulevat erottuneet signaalit 15 näkyvät kohdassa: δ 7,66 (d) ja 7,91 (d).
13C-NMR (75 MHz, D20): amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 167,3, 168,5 ja 174,7. Kaksi hiiltä on luultavasti päällekkäin.
20 Esimerkki 22 HOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R)Cha-Pro-Pab X 2HC1 V.: (i) BnOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R) Cha-Pro-Pab(Z) • 1 0,246 g (0,460 mmol) of H-(R) Cha-Pro-Pab(Z) (katso esimerkkiä :V: 15), 0,140 g (1,01 mmol) K2C03 ja 0,145 g (0,506 mmol) BnOOC- : 25 CH2-NH-CO-CH2-Br (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) «·· t sekoitettiin in 6 ml asetonitriili. Seosta sekoitettiin at 50 ··» · °C for 2 h 30 min, liuotin haihdutettiin, ja jäännös jaettiin veden ja etyyliasetaatin välillä. Kerrokset erotettiin ja vesikerros uutettiin one more time etyyliasetaatilla.
119812 103 67,2, 127,5, 127,8, 128,2, 128,3, 128,4, 128,5, 128,6, 128,6, 134.1, 135,2, 137,0, 142,6, 164,7, 168,9, 169,3, 170,4, 172.2, 175,0 5 (ii) HOOC-CH2-NH-CO-CH2- (R)Cha-Pro-Pab x 2HC1 0,089 g (0,12 mmol) BnOOC-CH2-NH-CO-CH2- (R)Cha-Pro-Pab(Z) :aa sekoitettiin 30 mg:n kanssa 5-%:ista Pd/C:tä, ja liuotettiin 10 ml:aan etikkahappoa. Seosta hydrogenoitiin 1,5 tuntia ilmakehän paineessa. Katalysaattori suodatettiin hyflolla, ja 10 pakastekuivattiin 1 ml:n kanssa 1 N suolahappoa, jolloin saatiin 0,058 g (82 %) haluttua tuotetta.
^-NMR (300 MHz, D20) : δ 0,9 - 2,2 (m, 16H) , 2,25 - 2,47 (m, 1H) , 3,55 - 3,7 (m, 1H) , 3,7 - 4,1 (m, 5H) , 4,42 (t, 1H) , 15 4,48 - 4,6 (m, 3H), 7,51 (d, 2H), 7,77 (d, 2H) 13C-NMR (75 MHz, D20) : amidiini- ja karbonyylihiilet: 5 166,8, 167,1, 168,2, 173,6 ja 174,6 20 Esimerkki 23
EtOOC-CH2-CH2-CH2-(R) Cha-Pro-Pab x HOAc • 1 :.V (i) EtOOC-CH=CH-CH2-(R) Cha-Pro-Pab (Z) • · !.1·· H-(R) Cha-Pro-Pab(Z) :aa (katso esimerkkiä 15) (275 mg, 0,51 ί,ί.ϊ mmol) käsiteltiin K2C03:lla (141 mg, 1,02 mmol) ja : 25 BrCH2CH=CHCOOEt:llä (108 mg, 0,56 mmol) CH3CN:ssä (10 ml) 20 «·· · ;1· °C:ssa 20 tunnin ajan. Liuotin haihdutettiin, ja jäännös 119812 104 4,3 (d, 1H) , 4,6 - 4,7 (ra, 2H) , 5,2 (s, 2H) , 5,85 (d, 1H) , 6,75 (dt, 1H), 5,3 - 5,4 (m, 4H), 7,45 (d, 2H), 7,85 (d, 2H).
13C-NMR (75,0 MHz, CDC13) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 5 165,7, 171,2 ja 175,7 (kaksi huippua on luultavasti päällek käin) .
(ii) EtOOC-CH2-CH2-CH2-(R) Cha-Pro-Pab x HOAC
EtOOCCH=CHCH2-(R)Cha-Pro-Pab(Z) :aa (250 mg, 0,38 mmol) liuo-10 tettiin etanoliin, ja hydrogenoitiin noin 2 tunnin ajan kun läsnä oli 5-%:ista Pd/C:tä. Katalysaattori poistettiin suodattamalla, ja liuotin haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin RPLC:llä CH3CN/0,1 M NH4OAc:tä eluenttina käyttämällä puhdistamisen jälkeen 70 mg (36 %) haluttua tuotetta.
15 1H-NMR (500 MHz, CD30D) : δ 0,9 - 1,05 (m, 2H) , 1,15 - 1,55 (m, 5H) , 1,25 (t, 3H) , 1,6 - 1,85 (m, 7H) , 1,95 - 2,6 (m, 5H) , 3,55 - 3,65 (m, 2H), 3,8 (m, 1H), 4,1 (q, 2H) , 4,45 (m ja d, 2H), 4,55 (d, 1H), 7,55 ja 7,75 (kaksi d, 4H).
20 13C-NMR (75,0 MHz, CD3OD): amidiini- ja karbonyylihiilet: δ • · \V 168,3, 173,2, 174,6 ja 174,9.
• · • · · • ♦ · • ♦
Esimerkki 24 • * : 25 Ph (4-COOH)-S02-(R) Cha-Pro-Pab x HC1 : (i) Ph (4-COOH) -S02- (R) Cha-Pro-Pab (Z) ··· · 64 mg (0,32 mmol) 4-kloorisulfonyylibentsoehappoa lisättiin • · · jäähaudelämpötilassa liuokseen, jossa oli 156 mg (0,29 mmol) .. H-(R)Cha-Pro-Pab(Z):aa (katso esimerkkiä 15) ja 59 mg (0,58
I « I
30 mmol) trietyyliamiinia 4 mlrssa metyleenikloridia. Seoksen • · **;·* annettiin saavuttaa hitaasti huoneenlämpötilan, ja 24 tunnin *:·*: kuluttua se pestiin vedellä ja kuivattiin (Na2S04) . Liuotin ·:··· poistettiin tyhjössä, ja jäännös puhdistettiin flash-kroma- tograf iällä käyttämällä etyyliasetaatti/metanolia 9:1, sen • · · * ·] 35 jälkeen metyleenikloridi/metanolia 3:1 eluentteina, jolloin saatiin 82 mg (39 %) tuotetta.
119812 105 (ii) Ph(4-COOH) -SO2-(R)Cha-Pro-Pab x HC1 80 mg (0,11 mmol) Ph(4-COOH)-S02- (R) Cha-Pro-Pab(z) :aa hydro-genoitiin 5-%:isella Pd/C-.llä EtOHrssa. Katalysaattori suodatettiin pois, liuotin haihdutettiin, ja raakatuote puhdis-5 tettiin RPLC:llä käyttämällä eluenttina CH3CN/0,1 M NH4OAc:tä (1/4) ja muutettiin lopulta hydrokloridisuolaksi pakaste-kuivaamalla HCl:stä, jolloin saatiin 21 mg (29 %) tuotetta.
1H-NMR (300 MHz, CD3OD, kahden rotameerin seosta) 0,45 - 1,82 10 (m, 13H) , 1,90 - 2,30 (m, 4H) , 2,95 - 4,16 (useita m, yhteensä 3H) , 4,35 - 4,68 (m, 3H) , 7,54 (d, 2H) , 7,74 (d, 1H), 7,80 (d, 1H), 7,90 - 8,00 (m, 2H), 8,05 - 8,22 (m, 2H) 13C-NMR (75 MHz, CD3OD) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 15 168,4, 173,4, 173,9 ja 174,2 MS m/z 584 (M++l)
Esimerkki 25 20 H-(R)Cha-Pic-Pab X 2HC1 (i) Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z) ·1·1· *.·.1 3,57 g (18,6 mmol) EDC:tä lisättiin -15 °C:ssa seokseen jossa V·! oli 7,11 g (18,6 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-OH:ta (Katso kohtaa ϊ#ϊ4ϊ Lähtöaineiden valmistus), 9,07 g (74,2 mmol) DMAP:tä ja 5,26 ϊ 25 g (18,6 mmol) H-Pab(Z) :aa (Katso kohtaa Lähtöaineiden ··Φ · ·1· valmistus) 200 ml:ssa DMFrää. Lämpötilan annettiin kohota 20 119812 106 (dd, 1H), 4,4 - 4,6 (m, 2H), 5,1 (s, 2H), 5,1 - 5,3 (m, 2H), 7,2 - 7,3 (ra, 5H), 7,35 (d, 2H), 7,4 - 7,5 (m, 1H), 7,75 (d, 2H) .
5 13C-NMR (75 MHz, CDCl3) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 156,8, 164,6, 168,2, 170,0 ja 173,4.
(ii) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z)
Kloorivetyä kuplitettiin huoneenlämpötilassa kyllästykseen 10 asti liuoksen läpi, jossa oli 9,5 g (14,7 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z):aa 100 ml:ssa etyyliasetaattia. 10 min kuluttua lisättiin Na2C03-liuosta (10-%), ja erottunut orgaaninen faasi kuivattiin (K2C03), ja liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin saatiin otsikkoyhdiste kvantitatiivisella saannolla. 15 1H-NMR (500 MHz, CD30D) : δ 0,85 - 1,05 (m, 2H) , 1,15 - 1,90 (m, 16H) , 2,25 - 2,35 (m, 1H) , 3,20 - 3,30 (m, 1H) , 3,80 - 3,90 (d, 1H) , 3,90 - 4,0 (m, 1H) , 4,4 - 4,5 (kaksi d, 2H) , 4.7 (br s, 5H) 5,15 (s, 2H) , 5,20 (m, 1H) , 7,25 - 7,45 (m, 20 7H), 7,85 (d, 2H).
• « V.: (iii) H- (R) Cha-Pic-Pab x 2HC1 Φ m :.1·· 55 mg (0,1 mmol) H-(R) Cha-Pic-Pab(Z) :aa liuotettuna seokseen, :V: jossa oli 5 ml etanolia ja 0,45 ml 1 M suolahappoa, • ;1: 25 hydrogenoitiin 1,5 tunnin ajan, kun läsnä oli 33 mg 10-%:ista ·« t
Pd/C:tä. Katalysaattori poistettiin suodattamalla, ja liuotin ··« ♦ haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin jäännöstä, joka alistettiin RPLC:lle käyttäen eluenttina 0,1 M NH4OAc/-. ^ CH3CN:ää. Lopulta puhdistettu peptidi muutettiin dihydroklo- 30 ridisuolaksi liuottamalla suolahappoon, minkä jälkeen pakas- • · ’·;·1 tekuivattiin. Otsikkoyhdisteen santo oli 17 mg (35 %) .
• ·;··; ^-NMR (300 MHz, D20, 2 rotameeriä, 3:l-seos): δ 1,0 - 2,0 (m, 18H), 2,33 (d, 1H), 3,4 - 3,5 (m, 1H), 3,8 - 3,9 (m, 1H), • · · : \ 35 4,4 - 4,8 (m, 3H) , 5,15 - 5,25 (m, 1H) , 7,5 - 7,7 (m, 2H) , 7.8 - 8,0 (m, 2H).
119812 107 Vähäisemmästä rotameeristä olevat erottuneet signaalit näkyvät kohdassa δ: 0,5 - 0,7 (m) ja 3,0 - 3,1 (m) 13C-NMR (75 MHz, D20): amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 167,3, 5 171,6 ja 173,6.
Vähäisemmästä rotameeristä olevat erottuneet signaalit näkyvät kohdassa δ 170,6 ja 172,4.
10 Esimerkki 26 HOOC-CH2- (R)Cha-Pic-Pab x 2HC1 (i) BnOOC-CH2- (R)Cha-Pic-Pab(Z)
Seosta, jossa oli 742 mg (1,35 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z):aa (katso esimerkkiä 25), 230 ml (1,45 mmol) bentsyylibro- 15 miasetaattia ja 558 mg (4 mmol) K2C03:a 4 ml:ssa asetonit-riiliä, sonikoitiin 40 min ajan 40 °C:ssa. Liuotin poistettiin, ja jäännös alistettiin flash-kromatografiälle, jolloin saatiin 720 mg (77 %) haluttua tuotetta.
20 1H-NMR (500 MHz, CDC13) ; δ 0,8 - 1,0 (m, 2H) , 1,1 - 1,9 (m, 16H) , 2,1 - 2,4 (br s, 1 tai 2H) , 2,4 (d, 1H) , 3,0 (m, 1H) , v.: 3,25 (d, 1H) , 3,45 (d, 1H) , 3,55 - 3,65 (m, 1H) , 3,7 (m, 1H) , 4,35 (dd, 1H) , 4,55 (dd, 1H) , 4,80 (two d, 2H) , 5,2 (s, 2H) , 5,3 (m, ih) , 7,2 - 7,4 (m, 12H), 7,8 (d, 2H) .
• · ! .1· 25 ··· · j .·. 13C-NMR (125 MHz, CDC13) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 1-:-1 164,5, 167,9, 170,5, 173,4 ja 175,5.
• · · (ii) HOOC-CH2-(R) Cha-Pic-Pab x2HCl • · · *;!;1 30 509 mg (0,73 mmol) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Pab(Z) :aa liuotettuna • m *··1 25 ml:aan etanolia hydrogenoitiin 4 tunnin ajan, kun läsnä ·;··: oli 259 mg 10-%:ista Pd/C:tä. Katalysaattori poistettiin ·;··· suodattamalla, ja liuotin haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin jäännös, joka liuotettiin tislattuun veteen.
• · · : ·[ 35 Lisättiin suolahappoa, ja lopulta liuos pakastekuivattiin, 1 jolloin saatiin 281 mg (79 %) otsikkoyhdistettä.
119812 108 ^-NMR (500 MHz, D20, rotameerien seos 4:1): pääasiallinen rotameeri: δ 1,0 - 2,0 (m, 18H) , 2,25 - 2,40 (m, 1H), 3,4 - 3,5 (m, 1H), 3,8 - 3,95 (ra, 3H), 4,55 - 4,65 (kaksi d, 2H) , 5,15 (m, 1H), 7,55 - 7,75 (m, 2H), 7,8 - 8,0 (m, 2H).
5 13C-NMR (125 MHz, D20): amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 167,3, 169,9, 170,3 ja 173,5.
Vähäisemmästä rotameeristä oleva erottunut signaali näkyy kohdassa δ 166,9, 169,2 ja 172,0 10
Esimerkki 27 HOOC-CH2-(RtaiS)CR(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab/a x 2HC1 (i) BnOOC-CH2- (R, S) CH (COOBn) - (R) Cha-Pic-Pab (Z)
Seosta, jossa oli 592 mg (1,1 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z):aa 15 (katso esimerkkiä 25) ja 332 mg (1,1 mmol) dibentsyylimale-aattia 1 ml:ssa etanolia, pidettiin 1 viikko huoneenlämpötilassa. Liuotin poistettiin tyhjössä, ja jäännös alistettiin flash-kromatografiälle käyttämällä eluenttina metanoli/mety-leenikloridia, jolloin saatiin 275 mg (30 %) diastereomee-20 riseosta.
• m :.V (ii) HOOC-CH2-(RtaiS) CH(COOH) - (R) Cha-Pic-Pab/a x 2HC1 :.*·:* 275 mg BnOOC-CH2-(R, S) CH (COOBn) - (R) Cha-Pic-Pab (Z) : aa liuotti tettuna 20 ml:aan 95-%:ista etanolia hydrogenoitiin 18 tunnin • ;*: 25 ajan, kun läsnä oli 75 mg 10-% Pd/C:tä. Seos suodatettiin ··* f j ·*. hyflon läpi, ja liuotin poistettiin tyhjössä. Lisättiin • •1 · vettä, minkä jälkeen pakastekuivattiin, jolloin saatiin 166 mg HOOC-CH2-(R, S) CH (COOH) - (R) Cha-Pic-Pab: tä. Kaksi diastere-omeeriä erotettiin RPLC.-llä käyttäen eluenttina CH3CN/0,1 M 30 NH4OAC: tä (1/4), minkä jälkeen pakastekuivattiin HClrstä.
• · *·“* Tämä diastereomeeri eluoitui ensin pylväästä. Saanto 9 mg.
• · ····· ^-NMR (300 MHz, D20, rotameerien seosta): δ 1,0 - 2,0 (m, 18H) , 2,25 - 2,4 (m, 1H) , 3,0 - 3,2 (m, 2H) , 3,4 (t, 1H) , 3,8 • · « : ·] 35 (d, 1H) , 4,05 (t, 1H) , 4,5 - 4,7 (m, 3H) , 5,2 (s, 1H) , 7,55 (d, 2H) , 7,9 (d, 2H) .
119812 109 Vähäisemmästä rotameeristä olevat erottuneet signaalit näkyvät kohdassa δ 4,0(t) ja 7,7(d).
Esimerkki 28 5 HOOC-CHj- (Rtais) CE (COOH) - (R) Cha-Pic-Pab/b x 2HC1
Otsikkoyhdiste saatiin käyttämällä samaa menettelytapaa, joka kuvattiin esimerkissä 27 HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH)-(R)Cha-Pic-Pab:llä. Tämä diastereomeeri tuli pylväästä ensimmäisen diastereomeerin jälkeen.
10 1H-NMR (500 MHz, D20, rotameerien seosta; δ 1,0 - 2,0 (m, 18H) , 2,25 - 2,4 (m, 1H) , 3,0 - 3,2 (m, 2H) , 3,5 (t, 1H) , 3,85 (d, 1H), 4,15 (s, 1H), 4,5 - 4,7 (m, 3H), 5,15 (s, 1H), 7,55 (d, 2H), 7,8 (d, 2H).
15 Vähäisemmästä rotameeristä olevat erottuneet signaalit näkyvät kohdassa δ 4,35 (s), 7,65(d) ja 7,9(d).
Esimerkki 29 20 HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pic-Pab x 2HC1 (i) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pic-Pab (Z) • · V.: Seosta, jossa oli 851 mg (1,55 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z):aa • · *,*·· (katso esimerkkiä 25) ja 269 mg (1,71 mmol) bentsyyliakry- laattia 5 ml:ssa etanolia, pidettiin 40 tunnin ajan huoneen- • :*; 25 lämpötilassa. Liuotin poistettiin tyhjössä, ja jäännös alis- ··· * • .*. tettiin flash-kromatografiälle käyttämälläeluenttina mety- • * · · leenikloridi/metanolia, jolloin saatiin 812 mg (74 %) tuo- • φ · tetta.
* · « · » 30 1H-NMR (500 MHz, CDC13) : δ 0,8 - 1,0 (m, 2H) , 1,1 - 1,9 (m, • · *·;·* 16H) , 2,3 - 2,5 (m, 3H) , 2,6 - 2,8 (m, 2H) , 3,0 (m, 1H) , 3,5 ·:··: (m, 1H) , 3,6 - 3,7 (m, 1H) , 4,3 (dd, 1H) , 4,6 (dd, 1H) , 4,95 ·:··· - 5,05 (two d, 2H) , 5,2 (s, 2H) , 5,3 (m, 1H) , 6,5 - 6,9 (br s, 1H) , 7,0 - 7,1 (m, 1H) , 7,2 - 7,5 (m, 12H) , 7,75 - 7,85 • · · : \ 35 (d, 2H), 9,3 - 9,7 (br s, 1H).
• m 119812 110 (ii) HOOC-CH2-CH2-(R) Cha-Pic-Pab x 2HC1 780 mg (1,1 mmol) BnOOC-CH2-CH2-(R) Cha-Pic-Pab (Z) : aa liuotettuna 25 ml:aan etanoli hydrogenoitiin 4 tunnin ajan, kun läsnä oli 306 mg 15-%:ista Pd/C:tä. Katalysaattori poistet-5 tiin suodattamalla, ja liuotin poistettiin tyhjössä. Jäännös liuotettiin suolahappoon, ja tulokseksi saatu liuos pakaste-kuivattiin, jolloin saatiin 481 mg (78 %) otsikkoyhdistettä.
^-NMR (500 MHz, D20) : δ 0,95 - 1,1 (m, 2H) , 1,15 -1,9 (m, 10 16H) , 2,2 - 2,3 (m, 1H) , 2,7 - 2,8 (t, 2H) , 3,2 - 3,3 (m, 3H) , 3,4 - 3,5 (m, 1H) , 3,75 - 3,85 (m, 1H) , 4,4 - 4,6 (m, 3H), 5,15 (M, 1H), 7,5 - 7,6 (m, 2H), 7,8 - 7,9 (m, 2H), 8,6 - 8,7 (m, 1H).
15 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 170,6, 175,9, 179,5 ja 183,5.
Esimerkki 30 H00C-C0-(R)Cha-Pic-Pab x HOAC 20 (i) EtOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z) 0,12 g etyylioksalyylikloridia lisättiin seokseen, jossa oli • · \V 0,42 g (0,77 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z):aa (katso esimerkkiä :.*·· 25) ja 0,21 g (1,5 mmol) K2C03:a 10 ml:ssa CH3CN:ää huoneen- :V: lämpötilassa. 2 tunnin kuluttua lisättiin vielä 0,07 g (0,5 •;*; 25 mmol) etyylioksalyylikloridia. Seosta sekoitettiin huoneen- ··· · : lämpötilassa yön yli. Liuotin poistettiin tyhjössä, ja jään- M* « nös liuotettiin CH2Cl2:wwn ja pestiin vedellä. Haihdutettiin • * · ja flash-kromatografoitiin (tolueeni:etyyliasetaatti 1:2, sen .. jälkeen CH2C12:metanoli) , jolloin saatiin 0,21 g (42 %) • 1 · *;!** 30 tuotetta.
· • · ··· * ·:··: (ii) HOOC-CO-(R) Cha-Pic-Pab (Z) ···· 0,21 g (0,32 mmol) EtOOC-CO-(R) Cha-Pic-Pab(Z) :aa liuotettiin 3 ml: aan THF:ää, ja lisättiin 0,17 g (4,2 mmol) LiOH:ta • · · • *' 35 liuotettuna 3 ml:aan vettä. Seosta sekoitettiin huoneenläm-
Potilassa yön yli, ja kaadettiin sitten etyyliasetaatti/ve-teen. Faasit erotettiin, ja orgaaninen faasi uutettiin KHCO3- 119812 m liuoksella. Vesifaasi säädettiin happamaan pH-arvoon 0,5 M HClillä (pH 1), ja uutettiin CH2Cl2:lla, kuivattiin Na2S04:llä ja haihdutettiin, jolloin saatiin 80 mg tuotetta.
5 (iii) HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab x HOAC
HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab(Z):aa hydrogenoitiin 5-%:isella
Pd/C:llä EtOHrssa. Katalysaattori suodatettiin pois ja liuotin haihdutettiin. Jäännös alistettiin puhdistukselle RPLC:llä, jolloin saatiin otsikkoyhdiste.
10 1H-NMR (500 MHz, DMS0-ds) ; δ 0,8 - 1,0 (m, 2H) , 1,1 - 1,75 (m, 15H) , 1,86 - 1,94 (m, 1H) , 2,13 - 2,2 (m, 1H) , 3,75 - 3,81 (m, 1H), 4,32, 4,44 (AB, 2H), 4,71-4,77 (m, 1H), 4,98 - 5,02 (m, 1H) , 7,41 (d, 2H) , 7,75 (d, 2H) , 8,1 - 8,15 (m, 1H) , 15 8,22 - 8,27 (m, 1H) , 9,32 (leveä s), 9,90 (leveä s). Yhden protoneista signaali (3,25) on osaksi liuotinsignaalin peittämä.
MS m/z 486 (M++l) 20
Esimerkki 31 • · V.s HOOC-CH2-CO- (R) Cha-Pic-Pab V·: (i) MeOOC-CH2-CO-(R) Cha-Pic-Pab (Z) 0,39 g (0,72 mmol) H-(R) Cha-Pic-Pab(Z) :aa (katso esimerkkiä : 25 25) ja 0,9 g (0,8 mmol) monometyylimalonaattia liuotettiin 40 ··· · 119812 112 dattamalla ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 50 mg (70 %) otsikkoyhdistettä.
^-NMR (300 MHz, CD3OD) : δ 0,85 - 1,1 (m, 2H) , 1,1 - 1,9 (m, 5 16H) , 2,35 - 2,45 (m, 1H) , 3,2 - 3,4 (m, 3H) , 3,7 (s, 3H) , 3,95 - 4,05 (m, 1H), 4,4 - 4,55 (m, 3H), 5,15 - 5,25 (m, 1H), 7.4 - 7,55 (m, 2H), 7,7 - 7,85 (m, 2H).
13C-NMR (75 MHz, CD3OD) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 10 168,2, 168,7, 170,0, 172,4 ja 174,6.
MS m/z 514 (M++l) (iii) HOOC-CH2-CO- (R)Cha-Pic-Pab 15 Liuokseen, jossa oli 0,14 g (0,27 mmol) MeOOC-CH2-CO- (R)Cha-Pic-Pab:tä 5 ml:ssa metanolia, lisättiin 2 ml 0,5 M NaOH:ta huoneenlämpötilassa. Kun oli sekoitettu 5 tunnin ajan, lisättiin vettä, ja metanoli poistettiin tyhjössä. Vesifaasi pakastekuivattiin. Liukoinen materiaali uutettiin absoluut-20 tisella etanolilla liukenemattomista epäorgaanisista suoloista. Etanolin haihduttamisen jälkeen jäljelle jäänyt kiinteä aine suspendoitiin veteen, ja eristettiin 70 mg (52 • · *.*·· %) otsikkoyhdistettä suodattamalla.
• · • · · • · · * · : .**; 25 1H-NMR (300 MHz, DMS0-d6) : δ 0,8 - 1,0 (m, 2H) , 1,0 - 1,9 (m, «·· * • :*: 16H), 2,15 - 2,30 (m, ih) , 2,58, 2,86 (ab, 2H), 3,8 - 3,95 (m, 1H) , 4,2 - 4,5 (m, 2H) , 4,7 - 4,85 (m, 1H) , 4,95 - 5,05 • · · (m, 1H), 7,40 (d, 2H), 7,77 (d, 2H), 8,2 - 8,3 (m, 1H), 9,3 - 9.4 (m, 1H) , 9,90 (leveä s, 3H) . Yhden protoneista signaali · · I.* 30 (3,21) on osaksi liuotinsignaalin peittämä.
* ♦ • ♦ *:*·; 13C-NMR (75 MHz, DMS0-d6) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ *:··: 165,8, 168,8, 169,9, 172,2 ja 172,4.
e ·· · • · · : ** 35 MS m/z 500 (M++l) • · 119812 113
Esimerkki 32 HOOOC-CH2-CO- (R) Cha-Pic-Pab Katso esimerkkiä 31 (ii) edellä.
5 Esimerkki 33 H2N-CO-CH2- (R) Cha-Pic-Pab (i) H2N-CO-CH2-(R) Cha-Pic-Pab (2)
Yritetty 455 mg:n (0,83 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z):aa (katso esimerkkiä 25) alkylointi 80 mg:11a (0,86 mmol) klooriaseta-10 midia 3 ml:ssa asetonitriiliä kun läsnä oli 395 mg (2,86 mmol) kaliumkarbonaattia sonikoimalla 40 °C:Ssa, ilmeni olevan äärimmäisen hidas reaktio. Edes 230 mg:n (2,6 mmol) litiumbromidia lisääminen ei vaikuttanut parantavan reaktionopeutta. Litiumjodidin lisääminen ja kuumennus/sonikointi 15 antoi kuitenkin TLC:n mukaan pienet määrät tuotetta.
Käsiteltiin lisäämällä vettä, uutettiin etyyliasetaatti/to-lueenilla, kuivattiin orgaaninen faasi (MgS04) ja poistettiin liuotin tyhjössä, jolloin saatiin jäännös, joka alistettiin flash-kromatografiälle käyttämällä MeOH/CH2Cl2:ta eluenttina, 20 jolloin saatiin 118 mg (24 %) haluttua tuotetta.
• · V.: (ii) H2N-CO-CH2- (R) Cha-Pic-Pab x 2HC1 V·: 118 mg (0,2 mmol) H2N-CO-CH2-(R) Cha-Pic-Pab(Z) :aa liuotettuna ::: 10 ml:aan 95-%:ista etanolia, hydrogenoitiin 2 tunnin ajan, ; 25 kun läsnä oli 143 mg 10-%:ista Pd/C:tä. Seos laimennettiin «·· · ; .*. tislatulla vedellä ja suolahapolla, ja suodatettiin hyflon «·· · läpi. Pakastekuivattiin, jolloin saatiin 26 mg (24 %) haluttua tuotetta.
• · • ♦ · *:!:* 30 ^-NMR (300 MHz, CD30D) : δ 0,9 - 1,1 (m, 2H) , 1,1 - 1,9 (m, • · *·;·* 16H) , 2,3 (d, 1H) , 3,4 (t, 1H) , 3,6 (AB-järjestelmä, 2H) , 3,8 ·:··: (d, 2H) , 4,35 (t, 1H) , 4,5 (s, 2H) , 5,2 (s, 1H) , 7,55 (d, ·:··: 2H) , 7,8 (d, 2H) .
* · • 4 * \ 35 Esimerkki 34
Boc-(R)Cha-Pic-Pab 10 mg (0,015 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z):aa (katso esimerkkiä 119812 114 25) liuotettuna 5 ml:aan etanolia hydrogenoitiin 4 tunnin ajan, kun läsnä oli 38 mg 10-%:ista Pd/C:tä. Katalysaattori poistettiin suodattamalla, ja liuotin haihdutettiin tyhjössä, minkä jälkeen jäännös liuotettiin veteen ja pakas-5 tekuivattiin, jolloin saatiin 7,6 mg (95 %) tuotetta.
^-NMR (300 MHz, CD3OD) : δ 0,9-1,1 (m, 2H) , 1,1-1,9 (m, 16H) , 2,4 (d, 1H), 3,25 (t, 1H), 4,0 (d, 1H), 4,5 (AB-järjestelmä, 2H) , 4,5-4,6 (m, 1H) , 5,25 (s, 1H) , 7,45 (d, 2H) , 7,75 (d, 10 2H).
Esimerkki 35 Ac-(R)Cha-Pic-Pab x HC1 (i) Ac-(R)Cha-Pic-Pab(2) 15 Asetyylikloridia 0,06 g (0,8 mmol) lisättiin seokseen, jossa oli 0,37 g (0,68 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z):aa (katso esimerkkiä 25) ja 0,19 g (1,35 mmol) K2C03:a 10 ml:ssa CH3CN:ää huoneenlämpötilassa. Kun oli sekoitettu vielä 30 min ajan huoneenlämpötilassa, liuotin poistettiin tyhjössä. Jäännös 20 liuotettiin CH2Cl2:een, ja pestiin vedellä. Haihdutettiin ja flash-kromatografoitiin käyttämällä vaiheittaista CH2C12/- • · V.: MeOH - gradi ent t i a (99,9/0,1, 99,8/0,2, 99,6/0,4, 99,2/0,8 ja :.**i 98,4/1,6), jolloin saatiin 0,24 g (60 %) tuotetta.
• · * t · • 1 · • · : 25 (ii) Ac-(R) Cha-Pic-Pab x HC1 ··· 1
Ac-(R)Cha-Pic-Pab(Z) :aa hydrogenoitiin 5-%:isella Pd/C:llä ··· · ilmakehän paineessa. Kun katalysaattori oli suodatettu ja liuotin haihdutettu, raakamateriaali alsietttiin puhdistuk-selle RPLCrllä käyttäen eluenttina CH3CN/0,1 M NH4OAc:tä !.1 30 (35/65) . Liuotin ja ylimääräinen NH40Ac poistettiin, minkä • ♦ *·;·1 jälkeen pakastekuivattiin 1 M HCl:stä, jolloin saatiin ot- *:**: sikkoyhdiste.
• · ^-NMR (300 MHz, CD3OD) δ 0,85-1,1 (m, 2H) , 1,15-2,0 (m, : \ 35 19H), 2,35-2,47 (m, 1H), 3,2-3,33 (m, 1H) , 3,95-4,05 (m, 1H), 4,46-4,57 (ABX, 2H) , 5,16-5,22 (m, 1H) , 7,51 (d, 2H) , 7,76 (d, 2H) , 8,23 (m, 1H) . Yhden protoneista signaali on täysin 119812 115 liuotinsignaalin peitossa.
13C-NMR (75 MHz, CD3OD): amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 168,3, 172,5, 173,8, 175,1 5 MS m/z 456 (M++l)
Esimerkki 36
Me-S02-(R)Cha-Pic-Pab XHC1 10 (i) Me-S02- (R) Cha-Pic-Pab(Z)
Liuosta, jossa oli 48 mg (0,42 mmol) metaanisulfonyyliklori-dia 0,5 ml:ssa metyleenikloridia, lisättiin 0 °C:ssa sekoitettuun liuokseen, jossa oli 209 mg (0,382 mmol) H-(R)Cha-Pic-Pab(Z):aa (katso esimerkkiä 25) ja 0,11 ml (0,763 mmol) 15 trietyyliamiinia 5 ml:ssa metyleenikloridia. Reaktioseoksen annettiin saavuttaa huoneenlämpötilan yön yli. Pestiin vedellä, minkä jälkeen kuivattiin (Na2S04) ja liuotin haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin jäännöstä, joka alistettiin flash-kromatografiälle käyttämällä eluenttina etyy-20 liasetaatti/metanolia (95/5), jolloin saatiin 159 mg (67 %) tuotetta.
• · « · · • · · • · V·: (ii) Me-S02-(R)Cha-Pic-Pab x HC1 lY: 150 mg (0,24 mmol) Me-S02-(R)Cha-Pic-Pab(z):aa liuotettuna 5 • 25 ml:aan 95-%:ista etanolia ja 1 ml:aan vettä hydrogenoitiin 4 »M · ϊ tunnin aikana, kun läsnä oli 5-%:ista Pd/C:tä. Katalysaattori ·*· · poistettiin suodattamalla, lisättiin 0,2 ml 1 M suolahappoa, » · · ja liuotin haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin jäännöstä, .. joka liuotettiin 2 ml:aan vettä ja pakastekuivattiin, jolloin • · · 30 saatiin 116 mg (86 %) tuotetta.
• · • · · · ·:··: 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) : δ 0,90-1,10 (m, 2H) , 1,15-1,85 (m, ·:·.· 15H) , 1,90 (bd, 1H) , 2,30 (bd, 1H) , 2,85 (s, 3H) , 3,35 (dt, 1H) , 3,90 (bd, 1H) , 4,45 (AB-järjestelmä, 2H) 4,50-4,55 (m, • · · 1 \ 35 1H), 5,13 (dd, 1H), 7,50 (d, 2H), 7,75 (d, 2H).
· 119812 116 13C-NMR (125 MHz D20): amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 166,8, 173.0 ja 174,6.
Esimerkki 37 5 H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab x 2HC1 (i) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(z) EDC:tä lisättiin -18 °C:ssa sekoitettuun liuokseen, jossa oli 1.0 g (2,6 mmol) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-OH:a (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 1,28 g (10,5 mmol) DMAP:tä, 0,74 g 10 (2,6 mmol) H-Pab-(Z):aa (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) 35 ml:ssa DMF:ää. Reaktioseoksen annettiin saavuttaa huoneenlämpötilan yön yli, ja seuraavaksi liuotin poistettiin tyhjössä. Jäännös liuotettiin CH2Cl2:een, ja orgaaninen kerros pestiin peräkkäin 0,3 M KHS04:llä, KHC03-15 liuoksella ja suolaliuoksella. Kuivattiin (Na2S04) ja poistettiin liuotin, jolloin saatiin jäännöstä, joka alistettiin flash-kromatografiälle käyttäen eluenttina heptaani:etyyliasetaattia, jossa oli 4 % metanolia, jolloin saatiin 0,74 g (44 %) haluttua tuotetta.
20 (ii) H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z) • * *.·.· 0,68 g (1,05 mmol) Boc-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z) :aa liuo- • · :.*·· tettiin etyyliasetaattiin, joka oli kyllästetty HCl(g):llä.
::: Liuosta sekoitettiin 1 tunnijn ajan huoneenlämpötilassa.
• ;*: 25 Lisättiin vettä, ja seos säädettiin alkaliseen pH-arvoon *·· · • K2C03:lla. Vesifaasi uutettiin etyyliasetaatilla. Sitten ·«* * orgaaninen faasi pestiin vedellä ja kuivattiin (Na2S04) .
• · ·
Haihdutettiin, jolloin saatiin 0,5 g (87 %) haluttua tuotet- . . ta.
• · · » · * : * 30 ··· ^v • · **;·* (iii) H-(R) Cha-(R, S)betaPic-Pab x 2 HC1 *:**: 65 mg (0,19 mmol) H- (R)Cha-betaPic(R,S) -Pab(Z) :aa liuotettiin ·;··· 7 ml:aan etanolia, ja hydrogenoitiin 4 tunnin ajan, kun läsnä
oli 5-%:ista Pd/C:tä. Katalysaattori poistettiin suo-* \ 35 dattamalla, liuotin haihdutettiin ja pakastekuivattiin 1 M
HC1:stä ja vedestä, jolloin saatiin 41 mg (71 %) tuotetta.
119812 in ^-NMR (300 MHz, D20, 2 diastereomeeriä 4/5, ja rotaraeeriä) ,-δ 0,8-2,16 (m, ), 2,5-2,77 (m, 3H) , 3,13-3,43 (m, 3H) , 3,68-3,94 (m, 1H) , 4,18-4,41 (τη, 1H) , 4,41-4,52 (m, 3H) , 7,46-7,57 (m, 2H), 7,72-7,83 (m, 2H).
5
Esimerkki 38 HOOC-CH2-CH2-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab x 2HC1 (i) BnOOC-CH2-CH2- (R)Cha- (R, S)betaPic-Pab(Z) 0,21 g (0,38 mmol) H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab(Z):aa (katso 10 esimerkkiä 37) liuotettiin 2 mitään etanolia. Lisättiin 0,68 g (0,42 mmol) bentsyyliakrylaattia, ja liuosta sekoitettiin 5 päivän ajan. Haihdutettiin ja flash-kromatografoitiin CH2Cl2/MeOH:11a (95/5) eluenttina, jolloin saatiin 0,19 g (70 %) haluttua tuotetta.
15 (ii) HOOC-CH2-CH2- (R)Cha- (R, S) betaPic-Pab x 2HC1 170 mg (0,24 mmol) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha- (R, S) betaPic-Pab(Z)taa liuotettiin 10 mitään etanolia, ja hydrogenoitiin 4 tunnin ajan, kun läsnä oli 5-%tista Pd/Citä. Katalysaattori 20 poistettiin suodattamalla, liuotin haihdutettiin ja pa-kastekuivattiin 1 M Helistä ja vedestä, jolloin saatiin 103 :V: mg (77 %) tuotetta.
• · • · · • · * • · ^-NMR (300 MHz, d20, seosta 2 diastereomeeristä 4/5 ja ro- • · : 25 tameeristä) ; δ 0,92-2,03 (m, H), 2,51-2,78 (m, 1H) , 3,21-3,52 ;"·! (m, 1H) , 3,88-4,01 (m, 1H) , 4,07-4,3 (m, 2H) , 4,4-4,71 (m, • · 2H), 7,59 (d, 2H), 7,86 (d, 2H) • · · .. 13C-NMR (300,13 MHz, D20, seosta 2 diastereomeeristä 4/5 ja · · **!** 30 rotameeristä) t amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 167,0, 168,0, 168,1, 175,9, 176,0, 176,3, 176,4 ja 178,2.
• *
Esimerkki 39 Φ · HOOC-CH2-(R)Cha-Val-Pab x 2 HC1 : *·! 35 (i) Boc-(R)Cha-Val-Pab(Z) ♦ * * 1,77 g (9,2 mmol) EDCitä lisättiin -12 °C:sa seokseen, jossa oli 3,41 g (9,2 mmol) Boc-(R)Cha-Val-OHtta (Katso kohtaa 119812 118 Lähtöaineiden valmistus), 2,61 g (9,2 mmol) H-Pab(Z):aa (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), ja 4,5 g (36,8 mmol) DMAPitä 50 ml:ssa DMFrää. Reaktioseoksen annettiin saavuttaa huoneenlämpötilan yön yli, ja käsiteltiin laimentamalla 5 vedellä, minkä jälkeen uutettiin tolueenilla, eetterillä ja etyyliasetaatilla. Seuraavaksi yhdistetyt orgaaniset uutteet kuivattiin (MgS04) , liuotin poistettiin tyhjössä, ja flash-kromatografoitiin käyttämällä eluenttina CH2Cl2/MeOH:ta, jolloin saatiin 2,77 g (47 %) haluttua tuotetta.
10 (ii) H-(R)Cha-Val-Pab(Z)
Kloorivetyä kuplitettiin liuoksen läpi, jossa oli 2,77 g (4,4 mmol) Boc-(R)Cha-Val-Pab(Z):aa 75 ml:ssa etyyliasetaattia. 15 min kuluttua säädettiin alkaliseen pH-arvoon 10, lisäämällä 15 natriumkarbonaattiliuosta, ja vesifaasi uutettiin etyyliasetaatilla. Kuivattiin (kaliumkarbonaatti) ja poistettiin liuotin tyhjössä, jolloin saatiin 1,8 g (77 %) H-(R)Cha-Val-
Pab (Z):aa.
20 (iii) BnOOC-CH2-(R) Cha-Val-Pab (Z)
Seosta, jossa oli 326 mg (0,61 mmol) H-(R)Cha-Val-Pab(Z):aa, • · ί.ϊ.ί 105 ml (0,67 mmol) bentsyylibromiasetaattia ja 252 mg (1,83 mmol) kaliumkarbonaattia 2 ml:ssa asetonitriiliä, sonikoitiin • · 2,5 tunnin ajan 40 °C:ssa. Lisättiin lisää asetonitriilia * · : 25 tuotteen liuottamiseksi, ja seos suodatettiin, ja liuotin • · · i·· · ; .·. poistettiin tyhjössä. Jäännös puhdistettiin flash-kroma- • · · tografiällä käyttäen eluenttina metanoli/metyleenikloridia.
• · · • Lopulta tuote kiteytettiin etyyliasetaatista, jolloin saatiin 124 mg (30 %) värittömiä kiteitä.
• · · • · 0 _ _ 119812 119 jössä. Jäljelle jäävä liuos pakastekuivattiin, jolloin saatiin 55 mg (50 %) haluttua yhdistettä.
hl-NMR (500 MHz, D20) ; δ 0,75-1,4 (m, 12H) , 1,5-1,9 (m, 7H) , 5 2,0-2,15 (bs, 1H) , 3,45 (AB-järjestelmä, 2H) , 4,1 (m, 2H) , 4,5 (m, 2H), 7,5 (S, 2H), 7,7 (s, 2H), 8,9 (s, 1H).
Esimerkki 40 HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Val-Pab X2HC1 10 (i) H- (R)Cha- (R,S) Val-Pab(Z)
Otsikkoyhdiste valmistettiin liittämällä Boc-(R)Cha-Val-OH:ta H-Pab(Z):n kanssa käyttämällä pivaloyylikytkentää, joka kuvattiin Boc-(R)Cha-Pic-OMe:lie (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus). Tapahtui valiinin täydellinen epimeroituminen, 15 jolloin saatiin Boc-(R)Cha-(R,S)Val-Pab(Z):aa. Boc-suojaryhmä poistettiin samalla tavalla kuin kuvattiin Boc-(R)Cha-Val-Pab(Z):lle (katso esimerkkiä 39), jolloin saatiin otsikkoyhdiste.
20 (ii) BnOOC-CH2-CH2-(R) Cha-(R, S) Val-Pab (Z)
Liuosta, jossa oli 1,007 g (1,9 mmol) H-(R)Cha-(R,S)Vai- • ·
Pab(Z) :aa ja 308 mg (1,9 mmol) bentsyyliakrylaattia 3 ml:ssa • · !/·; etanolia, pidettiin 40 °C:Ssa yön yli. Liuotin poistettiin :V: tyhjössä, ja jäännös puhdistettiin flash-kromatografiällä • 25 käyttäen eluenttina metanoli/metyleenikloridia (10/90), ··· · : jolloin saatiin 1,086 g (82 %) otsikkoyhdistettä.
1·· · • · · • · · · · (iii) HOOC-CH2-CH2-(R) Cha-Val-Pab x 2HC1 .. 1,086 g (1,6 mmol) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha- (R, S) Val-Pab (Z) : aa • · · 30 hydrogenoitiin 2 tunnin ajan 25 ml:ssa THF:ää ja 14 ml:ssa * · **;·’ 0,5 M suolahappoa, kun läsnä oli 223 mg l0-%:ista Pd/C:tä.
·;·*: Katalysaattori poistettiin suodattamalla seliitin läpi, ja ····· THF poistettiin tyhjössä, minkä jälkeen jäljelle jäänyt vesiliuos pakastekuivattiin, jolloin saatiin jäännöstä, josta • · · • ·[ 35 noin 300 mg alistettiin HPLCrlle käyttämällä eluenttina 25- * * %:ista asetonitriiliä 0,1 M ammoniumasetaattipuskurissa.
Erisatettiin kaksi pääfraktiota, joista toinen fraktio 119812 120 sisälsi otsikkoyhdistettä. Eristettiin 67 mg otsikkoyh-distettä dihydrokloridina.
^-NMR (500 MHz, D20) ; δ 1,0-1,15 (m, 12H) , 1,2-1,4 (m, 7H) , 5 1,65-1,9 (m, 7H), 2,15-2,25 (m, 1H), 2,85 (t, 2H), 3,15-3,2 (m, IH) , 3,3-3,35 (m, 1H) , 4,15-4,2 (m, 1H) , 4,25 (d, 1H) , 4,55-4,65 (AB-järjestelmä, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,85 (d, 2H).
13C-NMR (75 MHz, D20): amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 167,0, 10 169,8, 173,96 ja 174,04.
Esimerkki 41 H-(R)Hoc-Aze-Pab x 2HC1 (i) Boc-(R)Hoc-Aze-Pab(Z) 15 Valmistettiin samalla tavalla kuin kuvataan Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z):lle (katso esimerkkiä 25) korvaamalla Boc-(R)Cha-Pic-OH:n Boc-(R)Hoc-Aze-OH:11a (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) . Raakatuote alistettiin flash-kromatografialle (to-lueeni/EtOAc 1/6), jolloin saatiin 0,32 g (37 %) haluttua 20 tuotetta.
:V·* (ii) H-(R)Hoc-Aze-Pab(Z)
Boc-(R) Hoc-Aze-Pab (Z) : aa käsiteltiin samalla tavalla kuin • · ;*;*· kuvattiin Boc-(R) Cha-Pic-Pab(Z) :lie esimerkissä 25, jolloin • · : 25 saatiin 0,23 g (88 %) otsikkoyhdistettä.
Il* · • a • · • · *^·* (iii) H- (R)Hoc-Aze-Pab x 2 HC1 • · a ' ' ' ' • · * * 20 mg (0,037 mmol) H-(R)Hoc-Aze-Pab(Z):aa liuotettiin 3 . . ml:aan etanolia, ja hydrogenoitiin 4 tunnin ajan ilmakehän • · · *·[·* 30 paineessa, kun läsnä oli 5-%:ista Pd/C:tä. Katalysaattori *...* poistettiin suodattamalla, liuotin haihdutettiin ja pakaste- ··*·· kuivattiin 1 M HCl:stä, jolloin saatiin 11 mg (63 %) tuotet- ta.
• · ·· ί ·* 35 ’n-NMR (300,13 MHz, D20, kahden rotameerin seos 3:1): pää- ***** asiallinen rotameeri: δ 0,9-2,1 (m, 1SH) , 2,4-2,6 (m, 1H) , 2,7-3,0 (m, 1H), 4,1-4,3 (m, 1H), 4,35-4,56 (m, 1H), 4,65 (s, 119812 121 2H) , 5,0-5,11 (m, 1H) , 7,62 (d, 2H) , 7,9 (d, 2H) . Yhden protoneista signaali on täysin H-O-D -signaalin peitossa.
Esimerkki 42
5 HOOC-CH2-CH2- (R)Hoc-Aze-Pab x 2 TPA
(i) BnOOC-CH2-CH2- (R) Hoc-Aze-Pab (Z) 0,067 g (0,41 mmol) bentsyyliakrylaattia lisättiin liuokseen, jossa oli 0,2 g (0,37 mmol) H-(R)Hoc-Aze-Pab(Z):aa (katso esimerkkiä 41) 2 ml:ssa etanolia (95-%) huoneenlämpötilassa. 10 Reaktio jätettiin huoneenlämpötilaan 5 päiväksi. Liuotin poistettiin tyhjössä, ja jäännös puhdistettiin flash-kromato-grafialla (CH2C12: MeOH, 96/4), jolloin saatiin 0,16 g (62 %) haluttua tuotetta.
15 (ii) HOOC-CH2-CH2-(R) Hoc-Aze-Pab x 2 TFA
160 mg (0,23 mmol) BnOOC-CH2-CH2-(R)Hoc-Aze-Pab(Z) :aa liuotettiin 10 ml:aan etanolia, ja alistettiin 3 tunniksi hydro-genoinnille ilmakehän paineessa, kun läsnä oli 5-%:ista Pd/C:tä. Katalysaattori poistettiin suodattamalla, liuotin 20 haihdutettiin, ja pakastekuivattiin vedestä ja TFA:sta, jolloin saatiin 120 mg (87 %) tuotetta.
• « • * · aaa • a ?/·· '‘n-NMR (300,13 MHz, D20, 2 rotameeriä 3:1); pääasiallinen :Y: rotameeri: δ 0,9-1,9 (m, 13H), 1,94-2,16 (m, 2H), 2,38-2,55 • a : 25 (m, 1H) , 2,7-2,97 (m, 3H) , 3,2-3,44 (m, 2H) , 4,16 (m, 1H) , : 4,35-4,58 (m, 2H) , 4,65 (s, 2H) , 5,0-5,12 (m, 1H) , 7,63 (d, !·!·! 2H) , 7,87 (d, 2H) aaa a .. 13C-NMR (300,13 MHz, D20): amidiini- ja karbonyylihiilet: δ • a a *:!:* 30 167,3, 168,7, 172,5 ja 176,6.
a a a a aaa a *:·*: Esimerkki 43 HOOC-CH2-(R,S)CH(COOH) - (R)Boc-Pro-Pab X 2 HC1 (i) Boc- (R) Hoc-Pro-Pab (Z) aaa • ] 35 Valmistettiin Boc-(R)Hoc-Pro-OH:sta (Katso kohtaa Lähtöainei den valmistus) samalla tavalla kuin kuvattiin Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z):lle esimerkissä 25. Flash-kromatografoitiin käyttäen 119812 122 etyyliasetaattia eluenttina, jolloin saatiin 0,886 g (58 %) otsikkoyhdistettä.
^-NMR (300 MHz, CDC13) ; δ 0,7-0,95 (m, 2H) , 0,95-2,1 (m, 27H 5 (siitä 1,2 (s, 9H) ) , 2,1-2,4 (m, 1H) , 3,3-3,5 (m, 1H) , 3,65-3,95 (m, 1H), 4,0-4,2 (ra, 1H), 4,2-4,45 (m, 2H) , 4,45-4,6 (d, 1H), 5,15 (näennäinen bs, 2H), 5,2-5,3 (d, 1H), 7,1-7,4 (m, 7H), 7,65 (m, 1H), 7,7-7,8 (d, 2H), 9,4 (bs, 1H).
10 13C-NMR (75 MHz, CDC13) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 156,3, 164,6, 168,1, 171,4 ja 172,4.
(ii) H-(R)Hoc-Pro-Pab(Z) 40 ml etyyliasetaattia, joka oli kyllästetty kloorivedyllä, 15 lisättiin 0,82 g:aan (1,266 mmol) Boc-(R)Hoc-Pro-Pab(Z):aa 0 °C:ssa. Lämpötilan annettiin kohota huoneenlämpötilaan. Reaktio ei ollut edennyt loppuun 1,5 tunnin kuluttua, ja sen vuoksi reaktioseoksen läpi kuplitettiin kloorivetyä 5 min ajan. Liuotin haihdutettiin, ja lisättiin etyyliasetaattia ja 20 kylläistä natriumkarbonaattia, ja faasit erotettiin. Orgaaninen faasi pestiin suolaliuoksella ja kuivattiin • · V.: (NaaS04) , ja liuotin haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin • · otsikkoyhdiste lähes kvantitatiivisella saannolla.
• « • · * · · • · * :'· 25 ^-NMR (300 MHz, CDC13); δ 0,75-0,95 (m, 2H) , 0,95-2,4 (m, ·»« · Ϊ .·. 17H) , 3,3-3,55 (m, 2H) , 3,55-3,7 (m, 1H) , 4,25-4,45 (m, 2H) , !*!\ 4,5-4,6 (m, 1H) , 5,15 (s, 2H) , 7,15-7,35 (m, 5H) , 7,35-7,45 • · · (rn, 2H), 7,6-7,7 (m, 1H), 7,7-7,85 (d, 2H).
· • · · **[;* 30 13C-NMR (75 MHz, CDC13) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ \··** 164,5, 167,8, 171,4 ja 175,3.
• · ·:··: (iii) BnCOOC-CH2-(R,S) CH(COOBn) - (R)Hoc-Pro-Pab(Z) 0,15 g taan (0,5 mmol) bentsyyliakrylaattia 1,5 mltssa EtOHtta • · · • \ 35 (99-%) lisättiin 0,273 g (0,498 mmol) H-(R)Hoc-Pro-Pab(Z)taa, ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 10 päivän ajan. Liuotin poistettiin tyhjössä, ja jäännös alistettiin flash- 119812 123 kromatografiälle käyttäen etyyliasetaattia eluenttina, jolloin saatiin 0,103 g (25 %) BnOOC-CH2- (R, S) CH (COOBn) - (R)Hoc-Pro-Pab(Z):aa.
5 1H-NMR (300 MHz, CDC13) ; δ 0,75-2,05 (m, 18H) , 2,3-2,45 (m, 1H), 2,45-2,8 (m, 3H), 3,15-3,45 (m, 3H), 3,5-3,65 (m, 1H) , 4.3- 4,5 (m, 2H), 4,55-4,7 (m, 1H), 4,8 (s, 1H), 4,9-5,1 (m, 3H), 5,2 (s, 2H), 7,1-7,2 (m, 1H), 7,2-7,4 (m, 13H), 7,4-7,45 (d, 2H) , 7,6-7,8 (m, 3H) .
10 (iv) HOOC-CH2-(R, S) CH(COOH) - (R) Hoc-Pro-Pab x 2 HC1 103 rag (0,122 mmol) BnOOC-CH2-(R, S) CH (COOBn) - (R) Hoc-Pro-Pab (Z):aa liuotettuna 4 ml:aan etanolia (99,5 %) ja 0,3 ml:aan kloroformia hydrogenoitiin 2 tunnin ajan, kun läsnä 15 oli 111 mg 5-%:ista Pd/C:tä. Katalysaattori poistettiin suodattamalla, ja liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen liuotettiin veteen ja pakastekuivattiin, jolloin nähtiin hydro-genoinnin olevan keskeneräisen. Hydrogenointia jatkettiin 5 tunnin ajan, kun läsnä oli etanolia, 1 N HCl:ää ja 5-%:ista 20 Pd/C:tä. Katalysaattori poistettiin suodattamalla, ja liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen liuotettiin veteen ja pa- • ♦ V.· kastekuivattiin, jolloin saatiin otsikkoyhdiste.
• · • · · « ·· XH-NMR (500 MHz, CD3OD, kahden diastereomeerin seosta); δ • t • ;·; 25 0,8-1,0 (m, 2H) , 1,1-1,4 (m, 6H) , 1,6-1,8 (m, 5H) , 1,9-2,15 ··· · : (m, 5H) 2,25-2,35 (m, 1H) , 2,9-3,2 (m, 2H) , 3,5-3,65 (m, 1H) , .···, 3,7-3,9 (2m, yhteensä 1H) , 4,15-4,4 (2m, yhteensä 1H) , • · · 4.4- 4,6 (m, 4H), 7,5-7,6 (m, 2H), 7,7-7,85 (m, 2H).
119812 124 neiden valmistus) ja H-Pab(Z):sta (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) samalla tavalla kuin kuvattiin Boc-(R)Cha-Pic-Pab(Z):lle (katso esimerkkiä 25). Plash-kromatografoitiin käyttämällä etyyliasetaattia eluenttina, jolloin saatiin 1,3 5 g (78 %) otsikkoyhdistettä.
3Η-ΝΜ (300 MHz, CDC13) : δ 0,75-0,95 (m, 2H) , 0,95-2,0 (m, 31H (siitä 1,3 (s, 9H) ) , 2,4-2,5 (m, 1H) , 3,0-3,1 (m, 1H) , 3,8 (m, 1H) , 4,2-4,45 (m, 2H) , 4,45-4,55 (m, 2H) , 5,15 10 (näennäinen bs, 3H), 5,25-5,3 (m, 1H), 7,0 (bs, 1H), 7,15-7,5 (m, 7H), 7,7-7,85 (d, 2H), 9,45 (bs, 1H).
13C-NMR (75 MHz, CDCI3) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 156,6, 164,7, 168,1, 170,0 ja 173,0.
15 (ii) H-(R)Hoc-Pic-Pab(Z) 100 ml etyyliasetaattia, joka oli kyllästetty kloorivedyllä, lisättiin 1,3 g:aan (1,96 mmol) Boc-(R)Hoc-Pic-Pab(Z):aa 0 20 °C:Ssa. Lämpötilan annettiin kohota huoneenlämpötilaan. Liuotin haihdutettiin 40 min kuluttua, ja lisättiin etyy- 9 · V.· liasetaattia ja kylläistä natriumkarbonaattia, ja faasit erotettiin. Orgaaninen faasi pestiin suolaliuoksella ja :Y: kuivattiin (Na2S04) , ja liuotin haihdutettiin tyhjössä, joi- • · 119812 125 ja 0,217 g (1,57 mmol) K2C03:a 7 ml:ssa asetonitriiliä.
Seosta kuumennetttiin 1 tunnin ajan 60 °C:seen öljyhauteella. Liuotin poistettiin, ja lisättiin etyyliasetaattia ja vettä. Faasit erotettiin, ja orgaaninen faasi pestiin 5 suolaliuoksella ja kuivattiin (Na2S04) . Haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 0,626 g jäännöstä, joka alistettiin flash-kromatografialle käyttämällä etyyliasetaattia eluent-tina, jolloin saatiin 2 tuotetta. Ensin pylväästä eluoitunut yhdiste oli (BnOOC-CH2) 2 (R) Hoc-Pic-Pab (2) : aa (0,28 g), ja 10 toiseksi eluoitunut yhdiste oli otsikkoyhdistettä (0,27 g).
BnOOC-CH2-(R) Hoc-Pic-Pab(Z): 1H-NMR (300 MHz, CDC13) : δ 0,7-0,95 (m, 2H) , 1,0-1,75 (m, 18H) , 2,3-2,5 (m, 1 tai 2H) , 2,9-3,05 (m, 1H) , 3,2-3,3 (m, 15 1H) , 3,35-3,5 (m, 2H) , 3,6-3,7 (m, 1H) , 4,35-4,55 (ABX- järjestelmä, 2H) , 4,75 (s, 2H) , 5,15 (näennäinen s, 3H) , 5,25-5,3 (m, 1H), 7,1-7,45 (m, 12H), 7,7-7,8 (d, 2H).
13C-NMR (75 MHz, CDC13) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 20 164,6, 167,9, 170,5, 173,4 ja 175,0.
(iv) HOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-Pab x 2HC1 259 mg (0,365 mmol) BnOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-Pab(Z) :aa liuotet-tuna 7,8 ml:aan etanolia (99,5 %) ja 1,2 ml:aan suolahappoa • · • ·*. 25 (1 N) hydrogenoitiin 4 tunnin ajan, kun läsnä oli 280 mg 5- ··· · : %:ista Pd/C:tä. Katalysaattori poistettiin suodattamalla, ja ]···. liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen liuotettiin veteen ja ♦ ♦ · pakastekuivattiin, jolloin saatiin 170 mg (83 %) otsikkoyh- . . distettä.
• · · ’·*·* 30 ··· '‘H-NMR (300 MHz, CDC13) : δ 0,4-1,85 (m, 20H) , 1,85-2,2 (m, ·:·: 1H) , 2,9-3,2 (m, 1H) , 3,4-3,9 (m, 3H) , 4,05-4,3 (m, 2H) , 4,3-5,05 (m, 2H) , 7,1-7,4 (m, 2H) , 7,4-7,7 (m, 2H) .
: ·] 35 13C-NMR (75 MHz, CDC13) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 167,8, 168,6, 169,6 ja 172,3.
119812 126
Esimerkki 45 (HOOC-CH2)2-(R)Roc-Pic-Pab x 2 HC1 (i) (BnOOC-CH2)2(R) Hoc-Pic-Pab (Z)
Otsikkoyhdiste saatiin alkyloimalla H-(R)Hoc-Pic-Pab(Z):aa 5 edellä esimerkissä 44 kuvatulla tavalla.
1H-NMR (300 MHz, CDC13) : δ 0,7-0,95 (m, 2H) , 0,95-1,95 (m, 18H), 2,35-2,5 (m, 1H) , 2,9-3,05 (m, 1H), 3,5-3,85 (m, 6H) , 4,35-4,55 (m, 2H), 4,9 (2s, 4H), 5,2 (s, 2H), 5,25-5,35 (m, 10 1H), 7,1-7,45 (m, 16H), 7,5-7,65 (m, 1H), 7,7-7,85 (d, 2H).
13C-NMR (75 MHz, CDCl3) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 164,7, 167,9, 170,5, 172,0 ja 172,4.
15 (ii) (HOOC-CH2)2-(R)Hoc-Pic-Pab x 2HC1 153 mg (0,178 mmol) (BnOOC-CH2)2- (R)Hoc-Pic-Pab(Z) :aa liuotettuna 4,5 ml:aan etanolia (99,5 %) ja 0,5 ml:aan suolahappoa (1 N) hydrogenoitiin 3,5 tunnin ajan, kun läsnä oli 150 mg 5-%:ista Pd/C:tä. Katalysaattori poistettiin suodattamal-20 la, ja liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen liuotettiin veteen ja pakastekuivattiin, jolloin saatiin 109 mg (99 %) • · :.V (HOOC-CH2)2- (R)Hoc-Pic-Pab:n dihydrokloridia. Tämä raakama- :#*.j teriaali (puhtaus 80 %) alistettiin RPLC-puhdistukselle käyttäen eluenttina CH3CN/0,1 M NH4OAc:tä, 1:4. Liuotin ja • · • ·'; 25 ylimääräinen NH4OAc poistettiin, minkä jälkeen pakaste- ··* · : kuivattiin 1 M HCl:stä, jolloin saatiin otsikkoyhdiste.
• φ · · • · · • · · • · · 1H-NMR (500 MHz, D20, kahden rotameerin seos): pääasiallinen .. rotameeri: δ 0,95-2,15 (m, 20H), 2,25-2,35 (m, 1H), 3,45-3,55 · · 30 (m, 1H) , 3,95-4,25 (m, 5H) , 4,6-4,65 (m, 2H) , 4,92-5,01 (m, :···** 1H) 5,15-5,20 (m, 1H) , 7,58-7,63 (d, 2H) , 7,84-7,89 (d, 2H) .
• · Vähäisemmästä rotameeristä tulevat erottuneet signaalit näkyvät kohdassa: δ 0,7-0,85 (m), 2,35-3,45 (m), 3,05-3,15 ί ·] 35 (m), 4,47-4,55 (m), 4,55-4,6 (m), 4,65-4,7 (m), 7,63-7,67 (d), 7,89-7,95 (d).
13C-NMR (75 MHz, D20) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 168,20, 169,70, 170,20 ja 172,71.
127 119812
Esimerkki 46 5 HOOC-CH2-(R) Pro (3- (S) Ph)-Pro-Pab x 2HC1 (i) Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z)
Liuokseen, jossa oli 570 mg (1,5 mmol) Boc-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-OH:ta (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 425 mg (1,5 mmol) H-Pab(Z):aa (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) ja 10 733 mg (6 mmol) DMAP: tä 25 ml:ssa CH3CN/DMF:ää (1,5/1), lisättiin 310 mg (1,62 mmol) EDC:tä, ja seosta sekoitettiin 23 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Enin liuotin haihdutettiin, ja jäännökseen lisättiin 50 ml vettä.
Vesifaasi uutettiin 1 x 75 ja 2 x 50 ml:11a EtOAcrtä. Yhdis-15 tetty orgaaninen faasi pestiin 1 x 20 + 1 x 10 ml:11a 1 M
KHSO4 :ää, 1 x 15 ml: 11a NaHC03 (aq) : ta, 3 x 15 ml:lla vettä, 1 x 15 ml:11a suolaliuosta, ja kuivattiin (MgS04) . Suodatettiin, ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 670 mg öljyä, joka puhdistettiin flash-kromatografiällä käyttäen eluenttina 20 EtOAc:tä, jolloin saatiin 529 mg (55 %) otsikkoyhdistettä.
• · V.·1 1H-NMR (300 MHz, CDC13) : δ 1,26 (s, 9H) , 1,53 - 1,88 (m, 5 :/.: 3H) , 2,1 - 2,31 (m, 3H) , 2,52 (q, 1H) , 3,58 - 3,77 (m, 4H) , :V: 4,31 (d, 1H) , 4,35 ja 4,47 (ABX-järjestelmä, 2H) , 4,65 (dd, • :1. 25 1H) , 5,19 (s, 2H) , 7,1 - 7,37 (m, IOH) , 7,42 (d, 2H) , 7,81 ··» · : .1. (d, 2H) , 8,0 (t, 1H (NH) ) .
• 1 · • · · · • · 1 • · « • · · 13C-NMR (75 MHz, CDC13) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ .. 154,6, 164,6, 168,1, 171,1 ja 171,3.
• » 1 • · · • · 30 • · · (ii) H- (R) Pro (3- (S) Ph) -Pro-P-ab (Z) *;·1; 529 mg (0,81 mmol) Boc-(R) Pro (3-(S) Ph)-Pro-Pab (Z) :aa liuo- tettiin huoneenlämpötilassa 15 ml:aan EtOAc/HCl:ää (g, kyl-Iäistä) , ja sekoitettiin 3 tunnin ajan. Liuotin haihdutet- • · : ·1 35 tiin, ja jäännös liuotettiin 70 ml:aan CH2Cl2:ta, orgaaninen 1 x 10 ml:11a suolaliuosta ja kuivattiin (MgS04) . Suoda- ' faasi pestiin 1 x 10 ml :11a 2 M NaOH:ta, 1 x 10 ml:11a vettä, 119812 128 tettiin, ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 403 mg (90 %) otsikkoyhdistettä valkoisena jauheena.
1H-NMR (300 MHz, CDC13): δ 1, 44-1,57 (m, 1H) , 1,62-1,86 (m, 5 2H), 1,96-2,35 (m, 3H), 2,45 (q, 1H), 3,05-3,35 (m, 4H), 3,83 (bd, 1H) , 4,25-4,45 (m, 2H) , 4,53 (m, 1H) , 5,19 (s, 2H) , 7,16-7,37 (m, 10H) , 7,42 (d, 2H) , 7,66 (t, 1H, (NH) ) , 7,77 (d, 2H).
10 13C-NMR (75 MHz, CDC13) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 164,4, 167,9, 171,1 ja 173,0.
(iii) BnOOC-CH2- (R) Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z)
Seosta, jossa oli 200 mg (0,36 mnol) H-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-15 Pab(Z) :aa, 105 mg (0,46 mmol) Br-CH2-COOBn:ää ja 125 mg (0,90 mmol) K2C03:a 10 ml: ssa CH3CN:ää, kuumennettiin 1 tunnij 30 min ajan 50 °C:seen. Liuotin haihdutettiin, ja jäännös liuotettiin 70 ml:aan EtOAc:tä. Orgaaninen faasi pestiin 10 ml:11a vettä ja kuivattiin (MgS04) . Suodatettiin ja liuotin 20 haihdutettiin, jolloin saatiin 260 mg öljyä. Raakamateriaali puhdistettiin flash-kromatografiällä käyttämällä vaiheit- • · V.· täistä CH2Cl2/MeOH (NH3-kylläistä) -gradienttia (95/5, sen jäi- • · ϊ/.ϊ keen 9/1) , jolloin saatiin 182 mg (72 %) otsikkoyhdistettä valkoisena kiinteänä aineena.
* · * *'· 25 • · · • · · : 1H-NMR (300 MHz, CDC13) : δ 1,43-1,82 (m, 3H) , 1,96-2,13 (m, !·;·! 1H) , 2,14-2,22 (m, 1H) , 2,26-2,43 (m, 2H) , 3,02-3,14 (m, 2H) , • · 3,24-3,51 (m, 4H), 3,83 (d, 1H) , 4,29-4,46 (ABX-järjestelmä, .. jonka keskus oli kohdassa 4,37, 2H), 4,58 (dd, 1H), 4,97-5,1 • · · 30 (AB-järjestelmä, jonka keskus oli kohdassa 5,03, 2H) , 5,19 :·;·** (S, 2H) , 7,16-7,38 (m, 15H) , 7,43 (d, 2H) , 7,5-7,8 (m, 3H, ·:*·; yksi NH) .
• · 13C-NMR (75 MHz, CDC13) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ • · · : \ 35 164,5, 167,9, 171,15, 171,2 ja 172,7.
• · 119812 129 (iv) HOOC-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph) -Pro-Pab x 2 HC1 0,18 g (0,26 mmol) BnOOC-CH2- (R) Pro (3- (S) Ph) -Pro-Pab(Z) :aa sekoitettiin 0,075 g:n kanssa 5-%:ista Pd/C:tä, 1,0 ml:n kanssa 1 N HCl-liuosta, 1 ml:n kanssa vettä ja 10 ml:n kanssa 5 etanolia, ja seosta hydrogenoitiin 1 tunnin ajan ilmakehän paineessa. Katalysaattori suodatettiin hyflon läpi, liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen pakastekuivattiin kahdesti vedestä, jolloin saatiin 129 mg raakatuotetta. Raakatuote puhdistettiiny RPLC:llä käyttämällä vaiheittaista 0,1 M 10 NH4OAc/CH3CN-gradienttia 4/1, sen jälkeen 3/1. Haihdutettiin, minkä jälkeen pakastekuivattiin vedestä ja IN HC1-liuoksesta, jolloin saatiin 70 mg (50 %) puhdasta tuotetta.
hi-NMR (300 MHz, D20) : δ 1,42-1,60 (m, 1H) , 1,65-1,83 1H) , 15 1,83-1,98 (m, 1H), 2,03-2,20 (m, 2H), 2,63 (t, 2H), 3,28-3,40 (m, 1H), 3,55-3,78 (m, 2H) , 3,81-3,96 (AB-järjestelmä, jonka keskus on kohdassa δ 3,88, 2H), 4,06-4,19 (m, 1H), 4,37-4,61 (AB-järjestelmä, jonka keskus on kohdassa δ 4,49, 2H), 4,48 (dd, 1H), 4,70 (d, 1H), 7,35-7,58 (m, 7H), 7,74 (d, 2H) 20 13C-NMR (7,5 MHz, CDCI3) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ • · \V 167,02, 167,2, 169,3 ja 174,4.
♦ · ♦ ♦ ♦ • ·# • ·
Esimerkki 47 • · : 25 HOOC-CH2-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab x 2HC1 «·· : (i) BnOOC-CH2-CH2-(R)Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z)
Liuokseen, jossa oli 190 mg (0,34 mmol) H-(R) Pro(3-(S) Ph) - • · φ
Pro-Pab(Z):aa (katso esimerkkiä 46) 7 ml:ssa EtOH:ta (99 %), .. lisättiin 114 mg (0,70 mmol) bentsyyliakrylaattia, ja reak- φ · · 30 tioseosta sekoitettiin 24 tunnin ajan huoneenlämpötilassa.
• · *···* Liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen flash-kromatografoitiin *:*·: käyttämällä vaiheittaista gradienttia CH2Cl2/MeOH(NH3-kylläi- ·:··· nen) (95/5, sen jälkeen 9/1) , jolloin saatiin 202 mg (83 %) otsikkoyhdistettä.
• * · • « • * 35 1H-NMR (300 MHz, CDC13) : δ 1,5-1,71 (m, 2H) , 1,74-1,9 (m, 1H), 1,9-2,05 (m, 1H), 2,2-2,64 (m, 5H), 2,69-2,82 (m, 2H) , 119812 130 2,84-2,96 (m, 1H), 3,18-3,48 (m, 4H) , 4,28-4,44 (m, 2H), 4,61 (ra, 1H) , 4,48-5,08 (AB-järjestelmä, jonka keskus oli kohdassa 5,03, 2H) , 5,19 (s, 2H) , 7,15-7,37 (m, 15H) , 7,44 (d, 2H) , 7,75-7,85 (m, 3H, yksi NH).
5 13C-NMR (75 MHz, CDC13) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 164,6, 168,0, 171,2, 172,5 ja 172,9.
(ii) HOOC-CH2-CH2-(R) Pro (3-(S) Ph) -Pro-Pab x 2HC1 10 0,20 g (0,28 mmol) BnOOC-CH2*-CH2- (R)Pro(3- (S)Ph) -Pro-
Pab (Z):aa sekoitettiin 0,075 g:in kanssa 5-%:ista Pd/C:tä, 1,0 ml:n kanssa 1 N HCl-liuosta, l ml:n kanssa vettä ja 10 ml:n kanssa etanolia, ja seosta hydrogenoitiin 1 tunnin ajan ilmakehän paineessa. Katalysaattori suodatettiin hyflon läpi, 15 liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen pakastekuivattiin kahdesti vedestä, jolloin saatiin 125 mg (79 %) otsikkoyh-distettä.
XH-NMR (300 MHz, D20) : δ 1,44 (m, 1H) , 1,65-1,9 (m, 2H) , 20 2,0-2,2 (m, 2H) , 2,62 (q, 2H) , 2,83 (t, 2H) , 3,27-3,4 (m, 1H) , 3,4-3,8 (m, 4H) , 4,0-4,15 (m, 1H) , 4,35-4,6 (m, 3H) , • « \V 4,68 (d, 1H) , 7,35-7,6 (m, 7H) , 7,77 (d, 2H) • · • · · • M • · :#:t: 13C-NMR (75 MHz, CDCI3) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ : 25 166,2, 167,1, 174,1 ja 174,2.
··· · • · • · • · · ··· ·
Esimerkki 48 • · · HOOC-CH2-CH2-(R)Tic-Pro-Pab x 2HC1 . . (i) Boc-(R)Tic-Pro-Pab(Z) • » * • · · 30 Valmistettiin samalla tavalla kuin kuvataan Boc-(R) Cha-Pic- • · *“·* Pab(Z):lle (katso esimerkkiä 25) käyttämällä Boc-(R)Tic-Pro- "**: OH: ta (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) Boc-(R) Cha-Pic- ·:··· OH: n sijasta. Flash-kromatografoitiin käyttämällä heptaa- ni/EtOAc:tä (4/1), sen jälkeen EtOAc:tä es eluentteina, • · * * *. 35 jolloin saatiin 425 mg (37 %) otsikkoyhdistettä.
• · 119812 131 1H-NMR (500 MHz, CDC13) : δ 1,35 (s, 9H) , 1,95-2,15 (m, 3H) , 2,4 (m, 1H), 2,8 (m, 1H), 3,3 (m, 1H), 3,55 (m, 2H), 4,25-4,4 (kaksi m, 2H) , 4,55-4,7 (kaksi m, 2H) , 7,15-7,5 (m, 10H) , 7,85 (d, 2H).
5 13C-NMR (75,0 MHz, CDCI3) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 164,6, 171,5 ja 171,6. (kaksi huippua on luultavasti pääl lekkäin) 10 (ii) H-(R)Tic-Pro-Pab(Z)
Boc-(R)Tic-Pro-Pab(Z):aa (379 mg, 0,59 mmol) liuotettiin EtQAc:hen, joka oli kyllästetty HCl(g):llä, ja sekoitettiin huoneenlämpötilassa. Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 251 mg (79 %) otsikkoyhdistettä valkoisena jauheena.
15 1H-NMR (500 MHz, CDC13) : δ 1,65 - 2,15 (two m, 7H), 2,45 (m, 1H) , 2,75 (m, 1H) , 2,9 (m, 1H) , 3,0 (m, 1H) , 3,25 (m, 1H) , 3,55 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 4,35-4,55 (m, 2H), 4,75 (d, 1H), 4,9 (S, 1H), 5,25 (S, 2H), 6,8-7,45 (usea m, 8H), 7,5 ja 7,85 20 (kaksi d, 4H).
· ·.*.· 13C-NMR (75,0 MHz, CDCI3) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ • :.*·ί 164,5, 171,3 ja 172,7 (kaksi huippua on luultavasti päällek- käin) .
• · ϊ .*. 25 . » » I·· .
i (iii) Bn02C-CH2-CH2-(R) Tic-Pro-Pab (Z) H-(R)Tic-Pro-Pab(Z) :aa (140 mg, 0,26 mmol) käsiteltiin bent- • · · syyliakrylaatilla (63 mg, 0,39 mmol) EtOH:ssa (1,3 ml) 20 °C:ssa 48 tunnin ajan. Liuotin haihdutettiin, ja flash-kro- • * * *;[;* 30 matografoitiin käyttämällä eluenttina 50-%.ista EtOAc/hep- • * **··* taania, sitten 10-%:ista MeOH/EtOAc:tä, jolloin saatiin 133 ·;·*: mg (73 %) haluttua tuotetta valkoisena kiinteänä aineena.
• · 1H-NMR (500 MHz, CDCI3) : δ 1,75-2,0 (two m, 4H) , 2,25 (m, • · · : \ 35 1H), 1,4-1,65 (m, 3H) , 2,7-2,95 (kaksi m, 4H), 3,05-3,2 (m, 2 H), 3,9 (m, 1H) , 4,45 (m, 2 H) , 4,65 (m, 1H) , 5,1 (kaksi d, 119812 132 2H), 5,25 (s, 2H), 6,85-7,45 (usea m, 12H), 7,5 ja 7,9 (kaksi d, 4H).
13C-NMR (75,0 MHz, CDC13) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 5 171,5, 171,9 ja 172,1 (kaksi huippua luultavasti päällek käin) .
(iv) HOOC-CH2-CH2-(R)Tic-Pro-Pab x 2 HC1
Bn02C-CH2-CH2-(R)Tic-Pro-Pab(Z) :aa (125 mg, 0,17 mmol) hydro-10 genoitiin 5-%:isella Pd/C:llä käyttäen liuottimena EtOH/-HCl:ää. Katalysaattori suodatettiin ja pakastekuivattiin, jolloin saatiin 73 mg (77 %) otsikkoyhdistettä valkoisena j auheena.
15 1H-NMR (500 MHz, D20) : δ 2,1-2,35 (kaksi m, 3H), 2,6 (m, 1H), 2,95-3,1 (m, 2H), 3,25-3,5 (kaksi m, 2H), 3,65 (m, 3H) , 4,65 (s, 2H) , 4,75 (m, 1H), 5,85 (s, 1H), 7,15-7,6 (kolme m, 4H), 7,6 ja 7,85 (kaksi d, 4H).
20 nC-NMR (75,0 MHz, D20): amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 166,9, 167,1 ja 174,3 (kaksi huippua luultavasti päällek- V.: käin) .
♦ · • ♦ * • ·* • ·
Esimerkki 49 • · : 25 HOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Aze-Pig x 2 HC1 ··· * J (i) Boc-(R) Cgl-Aze-Pig (Z) 2
Seokseen, jossa oli 0,623 g (1,83 mmol) Boc-(R)Cgl-Aze-OH:ta « · * (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 0,816 g (1,92 mmol) .. H-Pig(Z)2:ta (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) ja 0,89 g 1,1 30 (7,3 mmol) DMAP: tä 10 ml:ssa dikloorimetaania, lisättiin ’·"* 0,368 g (1,92 mmol) EDC:tä, ja seosta sekoitettiin yön yli.
·:**! Seos laimennettiin ja pestiin 0,3 M KHS04:llä ja kerran suo- ·;··· laliuoksella. Orgaaninen kerros kuivattiin (Na2S04) , suoda- tettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 1,4 g raakatuotet- • · * i 35 ta. Puhdistettiin flash-kromatografiällä käyttämällä etyy liasetaatti eluenttina, jolloin saatiin 0,3 g (22 %) puhdasta tuotetta.
119812 133 (ii) H-(R)Cgl-Aze-Pig(Z) 2 0,3 g (0,4 mmol) Boo (R)Cgl-Aze-Pig(Z)2:ta sekoitettiin 10 ml:n kanssa dikloorimetaania ja 2,5 ml:n kanssa trif-5 luorietikkahappoa. Seosta sekoitettiin 1,5 tuntia. Kun liuotin oli haihdutettu, jäännös liuotettiin dikloorimetaaniin ja pestiin kahdesti 0,2 M NaOH-liuoksella. Yhdistetty vesikerros uutettiin vielä kerran dikloorimetäänillä. Yhdistetty orgaaninen kerros kuivattiin (Na2S04) , suodatettiin ja haih-10 dutettiin, jolloin saatiin 0,24 g (93 %) tuotetta.
'H-NMR (300 MHz, CDC13, 339 K): δ 0,9-1,9 (m, 15H) , 1,94 (bd, 1H), 2,37-2,52 (m, 1H), 2,65-2,8 (m, 1H), 2,9-3,08 (m, 3H), 3,20 (t, 2H), 4,05-4,28 (m, 4H), 4,86 (dd, 1H), 5,16 (s, 4H), 15 7,2-7,42 (m, 10H), 7,98 (bs, NH).
(iii) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Aze-Pig (Z)2 0,231 g (0,36 mmol) liuotettiin 2 ml:aan etanolia, ja lisättiin 61 μΐ (0,40 mmol) bentsyyliakrylaattia. Reaktioseosta 20 sekoitettiin 5 päivän ajan huoneenlämpötilassa. Seos haihdutettiin, ja raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä • ·
V.· käyttämällä eluenttina vaiheittaista gradienttia CH2Cl2/MeOH
· :.*·· (95/5, 90/10), jolloin saatiin 0,218 g (75 %) puhdasta tuo- tetta.
• · * * . - • * · 25
• I » “ J
ΨΨΨ * : 1H-NMR (300 MHz, CDC13, 335K) : δ 0,93 (bq, 1H) , 1,02-1,85 (m, 14H) , 1,94 (bd, 1H) , 2,33-2,5 (m, 3H) , 2,58-2,77 (m, 2H) , • » * 2,79-3,02 (m, 4H), 3,17 (t, 2H), 4,0-4,25 (m, 4H), 4,86 (dd, .. 1H), 5,11 (s, 2H), 5,12 (s, 4H), 7,2-7,4 (m, 15H), 8,03 (bs, • · · *£ 30 NH) , 10,35 (bs, NH) • · • · ··· ·?··: (iv) HOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Aze-Pig x 2 HC1 ·:··: 0,218 g (0,27 mmol) BnOOC-CH2-CH2-(R)Cgl-Aze-Pig(Z)2:ta se- koitettiin 0,10 g:n kanssa 5-%:ista Pd/C:tä, 1 ml:n kanssa 1 • · ♦ * \ 35 M HCl-liuosta, 1 ml:n kanssa vettä ja 10 ml:n kanssa etano lia, ja seosta hydrogenoitiin 1 tunnion ajan ilmakehän paineessa. Katalysaattori suodatettiin hyflon läpi, liuotin 119812 134 haihdutettiin, minkä jälkeen pakastekuivattiin kahdesti vedestä, jolloin saatiin 134 mg (95 %) otsikkoyhdistettä.
’n-NMR (300 MHz, D20) : δ 1,0-1,4 (m, 7H) , 1,55-2,05 (m, 9H) , 5 2,22-2,34 (m, 1H), 2,61-2,76 (m, 1H), 2,88 (t, 2H), 3,08 (bt, 2H), 3,19 (d, 2H), 3,34 (m, 2H), 3,83 (bd, 2H), 3,95 (d, 1H), 4,29-4,49 (m, 2H), 4,90 (dd, 1H) 13C-NMR (75 MHz, D20): amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 156,4, 10 167,6, 172,1 ja 174,7
Esimerkki 50 HOOC-C52-(R)Cgl-Pro-Pig x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2 15 0,568 g (2,96 mmol) EDC:tä lisättiin -15 °C:ssa seokseen, jossa oli 1 g (2,82 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-OH:ta (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 1,197 g (2,82 mmol) H-Pig(Z)2:ta (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) ja 1,38 g (11,28 mmol) DMAP:tä asetonitriilissa. Lämpötilan annettiin kohota 20 huoneenlämpötilaan yön yli. Liuotin haihdutettiin tyhjössä, ja lisättiin metyleenikloridia ja 1 M KHS04:ää. Faasit ero- * · ί.ϊ.ϊ tettiin, ja orgaaninen faasi pestiin kylläisellä NaHC03:lla, vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04) , ja liuotti-met haihdutettiin, jolloin saatiin 2,033 g jäännöstä, joka • · •;1; 25 alistettiin flash-kromatografiälle käyttämällä etyyliase- «·1 · : .·. taattia eluenttina. Tästä saatiin kaksi tuotetta; 720 mg (34 • · · %) otsikkoyhdistettä, joka eluoitui pylväästä ensin, sen Φ t · jälkeen 775 mg (44 %) Boc-(R)Cgl-Pro-Pig(Z):tta, joka , . muodostui toisen Z-suojaryhmistä menetyksellä.
• · 1 * · · _ · 30 • · · *···1 ^H-NMR (300 MHz, CDCI3) ; Jotkin signaalit, erityisesti pipe- ·;··· ridiinirenkaassa, ovat selektiivisesti leventyneet molekyy- linsisäisestä vaihtoprosessista johtuen. Tämä on erityisen selvää piperidiinirenkaan 2- ja 6-CH2 -ryhmillä, joilla on * · 1 • ·1 35 leveä huippu alueella 3,5-4,5 ppm.
• · · · · • · 119812 135 δ 0,85-2,1 (m, 19Η), 2,3-2,45 (m, 1Η), 2,8-3,2 (m, 4H), 3,45-3,55 (m, 1H), 3,55-3,65 (m, vähäisempi rotameeri), 3,8-3,93 (m, 1H) , 3,97-4,1 (m, 1H) , 4,52-4,62 (d, 1H) , 5,1 (näennäinen bs, 5H), 7,12-7,41 (m, 10H).
5 13C-NMR (75 MHz, CDC13) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 155,2, 156,3, 171,0 ja 172,1.
(ii) H-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2 10 720 mg (0,946 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2: ta liuotettiin 35 ml:aan TFA/CH2C12:ta, 1/4 ja sekoitettiin 30 min ajan. Liuotin poistettiin tyhjössä, ja lisättiin etyyliasetaattia ja 2 M NaOH:ta. Orgaaninen kerros pestiin vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04), ja liuotin haihdutettiin tyhjös-15 sä, jolloin saatiin otsikkoyhdiste kvantitatiivisella saannolla.
1H-NMR (300 MHz, CDC13) ; Jotkin signaalit, erityisesti pipe-ridiinirenkaassa, ovat selektiivisesti leventyneet molekyy-20 linsisäisestä vaihtoprosessista johtuen. Tämä on erityisen selvää piperidiinirenkaan 2- ja 6-CH2 -ryhmillä, joilla on • · V,* leveä huippu alueella 3,5 - 4,5 ppm.
• * • · · • · • · δ 0,8-2,15 (m, 19H) , 2,22-2,4 (m, 1H) , 2,75-2,98 (m, 2H) , • · : 25 2,98-3,18 (m, 2H) , 3,18-3,35 (m, 1H) , 3,35-3,5 (kvart., 1H) , ***.·! 3,5-3,7 (m, 1H) , 4,42-4,58 (d, 1H) , 5,1 (s, 4H) , 7,1-7,5 (m, • · · • * · 10H .
* · · ' * * · , , 13C-NMR (75 MHz, CDCI3) : amidiini- ja karbonyylihiilet; δ • · · *·*· 30 154,96, 171,31, 174,82.
• * · • f • • · · * ·:··; (iii) BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig(z)2 0,298 g (0,999 mmol) BnOOC-CH2-OTf:ää (katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) lisättiin seokseen, jossa oli 0,64 g (0,999 ; ·* 35 mmol) H-(R) Cgl-Pro-Pig (Z) 2: ta ja 0,531 g (2,996 mmol) K2C03:a * *:**: 6,4 ml:ssa asetonitriiliä, ja kuumennettiin refluksoitumaan.
1 tunnin 20 min kuluttua seos pestiin vedellä, kuivattiin 136 119812 (Na2S04) , ja liuotin haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 729 mg jäännöstä, joka alistettiin flash-kromatografiälle käyttämällä etyyliasetaattia eluenttina. Tästä saatiin kaksi tuotetta: 120 mg (BnOOC-CH2) 2- (R) Cgl-Pro-Pig (Z) 2: ta, joka 5 eluoitui ensin pylväästä, ja 142 mg (18 %) otsikkoyhdistettä.
1H-NMR (300 MHz, CDC13) ; Jotkin signaalit, erityisesti pipe-ridiinirenkaassa, ovat selektiivisesti leventyneet molekyy-linsisäisestä vaihtoprosessista johtuen. Tämä on erityisen 10 selvää piperidiinirenkaan 2- ja 6-CH2 -ryhmillä, joilla on leveä huippu alueella 3,5 - 4,6 ppm.
δ 0,94 - 2,27 (m, 19H), 2,28 - 2,43 (m, 1H), 2,8 - 2,98 (m, 2H) , 2,98 - 3,06 (m, 1H) , 3,06 - 3,15 (d, 1H) , 3,15 - 3,25 15 (m, 1H), 3,3 - 3,5 (m, 4H), 4,5 - 4,61 (d, 1H), 5,1 (s, 6H) , 7,1 - 7,6 (m, 15H), 10,52 (bs, 1H).
(iv) H00C-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig x 2 HC1 142 mg (0,176 mmol) Bn00C-CH2-(R) Cgl-Pro-Pig(Z) 2: ta hydro-20 genoitiin 2 tunnin ajan, kun läsnä oli 0,88 ml 1 M suolahappoa, 10 ml etanolia (99,5-%) ja 180 mg 5-%:ista Pd/C:tä.
φ φ
Katalysaattori poistettiin suodattamalla hyflolla ja milli- :#*.j pore-suodattimella, minkä jälkeen liuotin haihdutettiin :V: tyhjössä ja pakastekuivattiin, jolloin saatiin 95 mg HOOC- • · • 25 CH2-(R)Cgl-Pro-Pig x 2 HCl:ää. Tämä raakamateriaali (puhtaus ··· ·
: 79 %) puhdistettiin RPLC:llä käyttäen eluenttina CH3CN/0,1 M
··· · NH4OAc:tä 15/85. Liuotin ja ylimääräinen NH40Ac poistettiin • « » pakastekuivaamalla, muutettiin suolahapposuolaksi liuotta-. . maila 1 M suolahappoon, minkä jälkeen pakastekuivattiin, • · φ 30 jolloin saatiin otsikkoyhdiste.
• * • · • · · ·:··: ^-NMR (500 MHz, D20) : δ 1,1 - 1,35 (m, 6H) , 1,63 - 2,14 (m, .;»· 13H) , 2,26 - 2,36 (m, 1H) , 3,01 - 3,23 (m, 4H) , 3,49 - 3,62 (kvart., 2H) , 3,62 - 3,77 (m, 2H) , 3,77 - 3,88 (näennäinen d, • « · : ·] 35 2H) , 4,18 - 4,32 (d, 1H) , 4,37 - 4,5 (m, 1H) .
•
Esimerkki 51 f7*· 119812 137 H-(R)Cha-Aze-Pig x 2HC1 (i) Boc-(R)Cha-Aze-Pig(Z)2
Hyvin sekoitettuun seokseen, jossa oli 86 mg (0,243 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-OH:ta (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 5 100 mg (0,236 mmol) H-Pig(Z)2:ta (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) ja 115 mg (0,944 mmol) DMAP:ta 5 ml:ssa CH3CN:ää, lisättiin 50 mg (0,260 mmol) EDC:tä, ja reaktiota sekoitettiin 20 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Liuotin haihdutettiin, ja jäännös liuotettiin 70 ml:aan EtOAcrtä, ja orgaani-10 nen faasi pestiin 3x5 ml :11a 1 M KHS04:ää, 1x5 ml :11a
NaHC03:a, 3x5 ml:lla H20:ta, 1 x 5 ml suolaliuosta, ja kuivattiin (MgS04) . Suodatettiin, ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 141 mg öljyä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä (36 g Si02) käyttämällä vaiheittaista 15 gradienttia CH2Cl2/MeOH (97/3, sen jälkeen 95/5), jolloin satiin 43 mg (24 %) otsikkoyhdistettä.
(ii) H-(R)Cha-Aze-Pig(Z)2
Kloorivetyä kuplitettiin 5 min ajan seoksen läpi, jossa oli 20 43 mg (0,0565 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-Pig(Z)2: ta 10 ml:ssa etyyliasetaattia 5 min. Liuotin haihdutettiin tyhjössä, ja • · V.: lisättiin etyyliasetaattia ja 0,1 M NaOH-liuosta. Faasit • · erotettiin, ja orgaaninen faasi pestiin vedellä ja suolali-uoksella, ja kuivattiin (Na2S04) . Liuotin haihdutettiin, Φ m j ·1 2 3 4 5. 25 jolloin saatiin 38 mg, joka alistettiin flash-kromatogra- ··· · : fialle käyttämällä eluenttina 10-%:ista NH3-kyllästettyä • · · [···. metanolia etyyliasetaatissa, jolloin saatiin 28 mg haluttua * · · tuotetta.
» 2 » 1 i 3 30 1H-NMR (300 MHz, CDC13) ; δ Jotkin signaalit, erityisesti 4 • · 5 piperidiinirenkaassa, ovat selektiivisesti leveämpiä mole- ·:··: kyylinsisäisestä vaihtoprosessista johtuen. Tämä on erityisen selvää piperidiinirenkaan 2- ja 6-CH2 -ryhmillä, joilla on leveä huippu alueella 3,7 - 4,5 ppm.
• ’1! 35 δ 0,75 - 1,85 (m, 18H) , 2,35 - 2,53 (m, 1H) , 2,62 - 2,78 (m, 1H) , 2,8 - 3,0 (m, 2H) , 3,0 - 3,28 (m, 2H) , 3,28 - 3,37 (m, 1H), 3,97 - 4,18 (m, 2H), 4,8 - 4,9 (m, 1H), 5,1 (s, 4H), 7,2 119812 138 - 7,45 (m, 9H), 8,05 - 8,15 (m, 1H).
(iii) H-(R)Cha-Aze-Pig x 2HC1 28 mg (0,042 raraol) H-(R)Cha-Aze-Pig(Z)2: ta liuotettuna 2 5 ml:aan etanolia (99,5-%) ja 0,13 ml:aan suolahappoa (1 N) hydrogenoitiin 4 tunnin ajan, kun läsnä oli 35 mg 5-%:ista Pd/C:tä. Katalysaattori poistettiin suodattamalla, ja liuotin haihdutettiin tyhjössä, minkä jälkeen liuotettiin veteen ja pakastekuivattiin, jolloin saatiin 12 mg (60 %) H-(R)Cha-Aze-10 Pig:n dihydrokloridia.
^-NMR (500 MHz, 300 K, CD3OD); Jotkin signaalit, erityisesti piperidiinirenkaassa, ovat selektiivisesti leveämpiä molekyylinsisäisestä vaihtoprosessista johtuen. Tämä on 15 erityisen selvää piperidiinirenkaan 2- ja 6-CH2 -ryhmillä, joilla on leveä huippu alueella 3,7 - 4,5 ppm. δ 0,75 - 2,1 (m, 18H) , 2,2 - 2,35 (m, 1H) , 2,62 - 2,75 (m, 1H), 3,0 - 3,12 (t, 2H), 3,12 - 3,23 (d, 2H), 3,85 - 3,95 (d, 2H) , 3,95 - 4,0 (dd, 1H) , 4,15 - 4,23 (m, 1H) , 4,35 - 4,42 20 (m, 1H), 4,72 - 4,78 (m, 1H).
V.· 13C-NMR (75 MHz, CD3OD) : guanidiini: δ 157,6; karbonyylihii- :/.: let: δ 170,0 ja 172,6.
• · • · · ♦ · · • · • ;*· 25 Esimerkki 52 :'!·! HOOC-CH2- (R)Cgl-AZQ-Pac x 2HC1 • · · ]''··[ (i) BOC- (R) Cgl-Aze-Pac (Z) • · ·
Liuokseen, jossa oli 0,47 g (1,4 mmol) Boc-(R)Cgl-Aze-OH:ta .. (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 0,40 g (1,4 mmol) H- • · *"* 30 Pac(Z):aa (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) ja 0,67 g * · ’···* (5,5 mmol) DMAPrtä 5 ml:ssa asetonitriiliä, lisättiin 0,27 g *:··: EDC:tä 0 °C:ssa. Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa yön ·;··· yli/ ja laimennettiin seuraavaksi etyyliasetaatilla. Liuos pestiin KHS04 (aq) : 11a ja NaHC03 (ag) : 11a, kuivattiin (Na2S04) , • · · • ·| 35 suodatettiin ja haihdutettiin. Flash-kromatografoitiin käyt- * * täen etyyliasetaattia, sen jälkeen etyyliasetaatti/metanolia 98/2 eluentteina, jolloin saatiin 0,25 g (30 %) otsikkoyh- 119812 139 distettä 1,4-cis- ja -trans-tuotteiden seoksena suhteessa molekyylin Pac-osaan.
^-NMR (500 MHz, CDC13) : δ 0,8 - 2,0 (m, 29 H; siitä 1,45 (s, 5 9H) ) , 2,15 ja 2,34 (m, 1H, isomeerit), 2,45 - 2,7 (m, 2H) , 3,0 - 3,4 (m, 2H), 3,85 (m, 1H), 4,14 (m, 1H), 4,33 (m, 1H), 4,85 (m, 1H) , 4,98 (m, 1H) , 5,04 (s, 2H) , 7,25 - 7,45 (m, 5H), 7,8-7,9 (m, 1H), 9,2-9,5 (m, 1H).
10 (ii) H-(R)Cgl-Aze-Pac(Z) x HC1
Boc-(R)Cgl-Aze-Pac(Z):aa, 0,25 g (0,41 mmol), liuotettiin 100 ml:aan etyyliasetaattia ja jäähdytettiin jäähauteella. Kuplitettiin HCl(g):tä läpi 5 min ajan, ja liuotin haihdutettiin.
15 ^-NMR (300 MHz, MeOD) 0,8 - 2,0 (m, 22 H), 2,05 - 2,35 (m, 1H) , 2,4 - 2,55 (m, 1H) , 2,6 - 2,75 (M, 1H) , 3,00 (d, 1H) , 3,05 ja 3,37 (multipletit, 0,6H ja 0,4H vastaavasti, isomeerit), 3,15 - 3,3 (m, 1H) , 4,05 - 4,2 (m, 2H) 4,88 (dd, 1H) , 20 5,11 (a, 2H), 7,2-7,45 (m, 5H) 8,0 - 8,15 (m, 1H).
:V: (iii) Bn02C-CH2-(R) Cgl-Aze-Pac (Z) :\j Seosta, jossa oli 0,17 g (0,33 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Pac(Z) x ·*;*· HCl:ää, 0,11 g (0,37 mmol) bentsyylitriflyloksiasetaattia ja • · : 25 0,14 g (1,0 mmol) K2C03:a 5 ml:ssa asetonitriiliä, sekoitet- • · · t ϊ .·. tiin 3 päivän ajan huoneenlämpötilassa. Raakamateriaali • · · "j/ flash-kromatografoitiin EtOAc/CH2Cl2/MeOH: 11a 95/20/5. Saan to: 70 mg (32 %).
• · 30 1H-NMR (500 MHz, CDC13) : δ 0,85 - 2,3 (m, 20 H), 2,48 (m, • •a 1H) , 2,63 (m, 1H) , 2,87 (m, 1H) , 3,05 - 3,25 (m, 1H) , 3,25 -·:··: 3,35 (m, 2H) , 3,38 (dd, 1H) , 3,95 (m, 1H) , 4,08 (m, 1H) , 4,88 (m, 1H) , 5,1 - 5,2 (m, 4H) , 5,9 - 6,3 (m, 1H) , 7,25 - 7,5 (m, 10H), 8,00 ja 8,08 (leveitä triplettejä, 1H, isomeerit).
i t » • · 35 *:**: (iv) H02C-CH2-(R) Cgl-Aze-Pac x 2 HC1
Bn02C-CH2-(R) Cgl-Aze-Pac (Z) : aa, 70 mg (0,11 ml), liuotettiin 119812 140 5 ml:aan etanolia, ja lisättiin 5-%:ista Pd/C:tä ja 0,1 ml konsentroitua HCl:ää. Seosta hydrogenoitiin 1 tunti ilmakehän paineessa. Suodatettiin ja haihdutettiin, minkä jälkeen tuote puhdistettiin preparatiivisella RPLC:llä käyttäen eluenttina 5 0,1 M NH4OAc/CH3CN:ää 4/1. Kun suola oli vaihdettu hydrokloridiksi ja otsikkoyhdiste pakastekuivattu, saatiin 1,4-cis- ja -trans-isomeerien 45/55-seosta suhteessa molekyylin Pac-osaan. Saanto: 40 mg (74 %).
10 ^-NMR (500 MHz, D20) δ 1,1 - 2,1 (m, 20H) , 2,32 (m, 1H) , 2,52 (m, 1H), 2,63 (m, 1H), 2,72 (m, 1H), 3,1 - 3,3 (m, 1H), 3,40 (m, 1H), 3,8 - 3,95 (m, 2H), 4,04 (d, 1H), 4,39 (m, 1H), 4,93 (m, 1H).
15 13C-NMR (125 MHz, D20) amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 167,7, 172,0, 174,9 ja 175,2.
Esimerkki 53 H-(R)Cha-Pro-Pac x 2HC1 20 (i) Boc-(R)Cha-Pro-Pac(Z) 211 mg (1,1 mmol) EDC:tä lisättiin 0 °C:ssa sekoitettuun • » ·*.·'.·* liuokseen, jossa oli 0,4 g (1,1 mmol) H-Pac(Z) x 2 HCl:ää • * !/·{ (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 0,4 g (1,1 mmol) Boc- (R) Cha-Pro-OH: ta (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), ja • • ·*· 25 0,55 g DMAP: tä 7 ml: ssa asetonitriiliä. Reaktioseosta *·· · : .·. sekoitettiin 1 tunnin ajan 0 °C:ssa ja 2 tuntia huoneenläm-
!·! S J J
,···, pötilassa. Liuotin poistettiin tyhjössä, ja jäännös laimen- • · · nettiin etyyliasetaatilla ja vedellä. Orgaaninen faasi pes- . . tiin etikkahapolla, vedellä ja natriumvetykarbonaattiliuok- * # · *·]** 30 sella ja kuivattiin (MgS04) . Liuotin poistettiin tyhjössä, *···* jolloin saatiin jäännöstä, joka puhdistettiin flash-kromato- ·:*·* graf iällä käyttäen etyyliasetaattia eluenttina, jolloin ..··! saatiin 196 mg (27 %) otsikkoyhdistettä.
e · • · » • 35 (ii) H-(R) Cha-Pro-Pac (Z) * * Kloorivetyä kuplitettiin liuoksen läpi, jossa oli 196 mg Boc- (R)Cha-Pro-Pac(Z):aa 25 ml:ssa etyyliasetaattia. 10 min 141 119812 kuluttua reaktioseos laimennettiin metyleenikloridilla, ja lisättiin natriumhydroksidiliuosta. Vesifaasi uutettiin useita kertoja metyleenikloridilla, ja yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin (K2C03) , ja liuotin poistettiin tyhjössä, 5 jolloin saatiin 86 mg (52 %) otsikkoyhdistettä.
(iii) H-(R)Cha-Pro-Pac x2HCl
Otsikkoyhdiste valmistettiin hydrogenoimalla H-(R)Cha-Pro-Pac(Z):aa etanolissaf 10-%:isen Pd/C:n läsnä ollessa.
10 ^-NMR (300 MHz, D20; Suunnilleen 1:1 -seosta 1,4-cis- ja 1,4-trans-isomeereistä molekyylin Pac-osan suhteen); δ 1,15 - 1,3 (q) , 1,6 - 1,85 (m), 1,9 - 2,0 (m), 2,0 - 2,1 (d) , 2,1 - 2,15 (m), 2,15 - 2,2 (m), 2,65 - 2,7 (m), 2,7 - 2,8 (m), 2,95 15 - 3,0 (d), 3,15 - 3,2 (d), 5,4 (s), 7,45 - 7,55 (m).
Esimerkki 54 H-(R)Cgl-Ile-Pab x2HCl (i) Boc-(R)Cgl-Ile-Pab(Z) 20 Sekoitettuun seokseen, jossa oli 1,33 g (3,6 mmol) Boc-(R)Cgl-Ile-OH:ta (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 1,12 • m *.V g (3,9 mmol) H-Pab(Z) :aa (Katso kohtaa Lähtöaineiden ί#*.ί valmistus) ja 1,76 g (14,4 mmol) DMAPrtä 50 ml:ssa CH3CN/- DMF:ää (l/l) , lisättiin 0,75 g (3,9 mmol) EDC:tä +5 °C:ssa.
• · • ·*· 25 Reaktioseoksen annettiin saavuttaa huoneenlämpötilan, ja ··· « : .·. annettiin olla 60 tunnin ajan. CH3CN poistettiin haihdut ta- ··· · .···. maila, ja jäännös kaadettiin 100 ml: aan vettä (muodostui • · · * keltaista sakkaa). Seos uutettiin 2 x 50 ml:11a EtOAc:tä, ja .. yhdistetty orgaaninen faasi pestiin 2 x 30 ml:11a NaHC03:a * · · 30 (kylläistä), 2 x 50 ml:11a 0,2 M HCl:ää, 1 x 50 ml:11a suo- • · *·”* laliuosta, ja kuivattiin (MgS04) . Haihdutettiin, minkä jäl- keen f lash-kromatografoitiin käyttämällä CH2Cl2/THF.*ää ····· (85/15) eluenttina, jolloin saatiin 510 mg (24 %) otsikkoyh- „·, distettä.
• · · J ·* 35 *Σ"Σ (ii) H-(R) Cgl-Ile-Pab(Z) 530 mg Boc-(R)Cgl-Ile-Pab(Z):aa liuotettiin 14 ml:aan 119812 142 CH2C12/TFA:ta (2,5/1), ja sekoitettiin 2 tuntia huoneenlämpötilassa. Liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen flash-kroma-tografoitiin käyttämällä CH2Cl2/MeOH: ta (NH3:lla kyllästettyä) (95/5) eluenttina, jolloin saatiin otsikkoyhdiste.
5 (iii) H-(R)Cgl-Ile-Pab x 2 HC1 75 mg (0,14 mmol) H-(R)Cgl-Ile-Pab(Z):aa hydrogenoitiin ilmakehän paineessa 6 tunnin ajan 10-%:isella Pd/C:llä 5 ml:ssa EtOH:ta, joka sisälsi ylimäärän HCl(g):tä, jolloin 10 saatiin dihydrokloridi. Lisättiin 2 g aktiivihiilä ja 20 ml EtOH:ta, minkä jälkeen suodatettiin seliitin läpi, liuotin haihdutettiin ja pakastekuivattiin vedestä, jolloin saatiin 50 mg (89 %) otsikkoyhdistettä valkoisena jauheena.
15 ^-NMR (500 MHz, MeOD) : δ 0,90 (t, 3H) , 0,94 (d, 3H) , 1,1 - 2,0 (m, 14H), 3,83 (bs, 1H), 4,26 (d, 1H), 4,50 (m, 2H), 7,57 (bd, 2H), 7,78 (bd, 2H).
Esimerkki 55 20 H-(R)Cgl-Aze-Pab
Hydrogenoitiin 257 mg (5,08 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z):aa t · *.·.* (katso esimerkkiä 1 (ii)) 5-%:isella Pd/C:llä 6 mltssa • · !,*·· Et0H/H20:ta ilmakehän paineessa 6 tunnin ajan, minkä jälkeen :V; katalysaattori suodatettiin, liuotin haihdutettiin, ja pa- • ·*; 25 kastekuivattiin vbedestä, jolloin saatiin 200 mg (89 %) ··· · : otsikkoyhdistettä.
*·· * • ·· • · t • · · ' 1H-NMR (500 MHz, D20) ; δ 1,0 - 2,0 (m, 11H) , 2,25 (m, 1H) , .. 2,70 (m, 1H), 3,30 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 4,30 (m, 1H), 4,45
• » I
*;];* 30 (m, 1H) , 4,55 (m, 2H) , 7,60 (m, 2H) , 7,77 (m, 2H) .
• · • « **f ·:··: MS m/z 372 (M++l) .
Φ · „·, Esimerkki 56 • · · J \ 35 HOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab x HOAc (i) BnOOC-(R, S) CH (Me) - (R) Cha-Pro-Pab (Z) 0,250 g (0,47 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pab(Z):aa (katso esimerkkiä 119812 143 15) liuotettuna 5 ml:aan CH2Cl2:ta jäähdytettiin -10 °C:seen, ja lisättiin hitaasti 150 mg (0,48 mmol) Tf OCH2COOBn: ää (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) liuotettuna 3 ml:aan CH2Cl2:ta. Lisättiin 200 mg (1,45 mmol) kaliumkarbonaattia, 5 ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 20 tunnin ajan. Seos laimennettiin CH2Cl2:lla, uutettiin vedellä ja kuivattiin (MgS04) . Liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen flash-kromtografoitiin käyttämällä CH2Cl2/MeOH:ta 9/1 eluenttina, jolloin saatiin 150 mg (46 %) otsikkoyhdistettä.
10
(ii) HOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab x HOAC
150 mg (0,2 mmol) BnOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab(Z):aa hydrogenoitiin 50 mg:11a 5-%:ista Pd/C:tä 20 ml:ssa EtOH:ta ilmakehän paineessa 4 tunnin ajan. Katalysaattori suodatet-15 tiin, liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen puhdistettiin RPLC:llä käyttäen CH3CN/0,1 M NH40Ac:tä 1/4 eluenttina, jolloin saatiin 35 mg (37 %) otsikkoyhdistettä.
XH-NMR (500 MHz, MeOD) : δ 1,00 (m, 1H) , 1,20 - 1,45 (m, 5H), 20 1,5 (m, 1H) , 1,6 - 1,8 (m, 6H) , 1,9 - 2,1 (m, 6H) , 2,25 (m, 1H) , 3,25 (m, 1H) , 3,5 (m, 1H) , 3,85 (m, 1H) , 4,15 (m, 1H) , • · V,: 4,35 - 4,6 (m, 3H) , 4,9 (m, osaksi HOD-linjan peitossa, 6H) , ϊ/.ί 7,55 (d, 2H) , 7,75 (d, 2H) .
m • · · • · · • ' · • ·*· 25 Esimerkki 57
MeOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab x 2 HC1 II· "\·\ (i) MeOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab (Z) * · 0,186 g (0,841 mmol) TfO-CH2-COOMe:tä (Katso kohtaa Lähtöai- .. neiden valmistus) liuotettiin CH2Cl2:een, ja lisättiin hi- • · *;]·* 30 taasti seokseen, jossa oli 0,425g (0,841 mmol) H- (R) Cgl-Aze- • · *···* Pab(Z) :aa (katso esimerkkiä 1), 0,894 g (5,04 mmol) K2C03:a *:··: CH2Cl2:ssa (yhteensä 4,3 ml) huoneenlämpötilassa, ja sekoi- ····· tettiin yön yli. Lisättiin vielä CH2Cl2:ta, ja seos pestiin vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin, suodatettiin, ja • i · s 35 liuotin haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 0,51 g jään- * * nöstä, joka alistettiin kolmesti flash-kromatografiälle silikageelillä käyttäen eluenttina ensin CH2Cl2/THF/MeOH:ta 119812 144 (16/4/1), sitten CH2Cl2/THF:ää (2 % NH3) (8/2) ja tviimeiseksi dietyylieetteri/MeOH:ta (NH3:lla kyllästetty) (95/5), jolloin saatiin 0,324 g (67 %) otsikkoyhdistettä.
5 (ii) MeOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab x 2 HC1 220 mg (0,38 mmol) MeOOC-CH2- (R)Cgl-Aze-Pab(Z) :aa hydro-genoitiin 2 tunnin ajan, kun läsnä oli 1,14 ml 1 N HCl:ää, 6.5 ml MeOHrta ja 300 mg Pd/C:tä. Katalysaattori poistettiin suodattamalla seliitillä ja millipore-suodattimena, minkä 10 jälkeen liuotin haihdutettiin tyhjössä ja pakastekuivattiin kahdesti, jolloin saatiin 178 mg (91 %) otsikkoyhdistettä, 1H-NMR (500 MHz, D20) ; δ 1,12 - 1,4 (m, 5H) , 1,68 - 1,81 (m, 2H) , 1,81 - 1,9 (m, 3H) , 1,97 - 2,1 (m, 1H) , 2,29 - 2,4 (m, 15 1H) , 2,68 - 2,8 (m, 1H) , 3,86 (s, 3H) , 4,1 (s, 2H) , 4,1 - 4.5 (d, 1H), 4,36 - 4,42 (t, 2H), 4,59 (s, 2H), 4,99 - 5,04 (m, 1H), 7,65 - 7,7 (d, 2H), 7,8 - 7,85 (d, 2H).
13C-NMR (75 MHz, MeOD): amidiini- ja karbonyylihiilet; δ 146,78, 167,68, 168,15, 172,29.
20
Esimerkki 58 ·1Λ·1 EtOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab x 2 HC1 (i) EtOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab (Z) :Y: 0,208 g (0,876 mmol) TfO-CH2-COOEt:tä (Katso kohtaa Lähtöai- • ·1; 25 neiden valmistus) liuotettiin CH2Cl2:een, ja lisättiin hi- ·1· · : taasti seokseen, jossa oli 0,443 g (0,876 mmol) H- (R) Cgl-Aze-
Pab(Z) :aa (katso esimerkkiä 1) ja 0,931 g (5,26 mmol) K2C03:a • · · CH2Cl2:ssa (yhteensä 4 ml), jota jäähdytettiin jäähauteella.
. . 2 tunnin kuluttua jäähaude poistettiin, ja sekoitusta • · 1 **];" 30 jatkettiin 2 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Lisättiin lisää • · *···1 CH2C12: ta, ja seos pestiin vedellä ja suolaliuoksella, ·;·1: kuivattiin, suodatettiinm ja liuotin haihdutettiin tyhjössä, *.·; jolloin saatiin 0,51 g jäännöstä, joka alistettiin flash- kromatograf iälle käyttämällä eluenttina dietyylieette- · · : ·] 35 ri/MeOH:ta (NH3:11a kyllästetty) (95/5), jolloin saatiin 1 0,387 g (75 %) otsikkoyhdistettä.
119812 145 (ii) EtOOC-CH2- (R)Cgl-Aze-Pab x 2 HC1 395 mg (0,668 mmol) EtOOC-CH2- (R)Cgl-Aze-Pab(Z) :aa hydro-genoitiin 5 tunnin ajan, kun läsnä oli 12 ml EtOH:ta (99,5 %) ja 390 mg Pd/C:tä. Katalysaattori poistettiin suodattamalla 5 seliitillä ja millipore-suodattimella, minkä jälkeen liuotin haihdutettiin tyhjössä ja pakastekuivattiin kahdesti, jolloin saatiin 281 mg (88 %) EtOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab:tä. Lisättiin 2 ekvivalenttia 1 N HCl:ää, ja pakastekuivattiin kolmesti, jolloin saatiin 288 mg (81 %) otsikkoyhdistettä.
10 1H-NMR (500 MHz, D20); δ 1,05 - 1,48 (m, SH), 1,6 - 2,05 (m, 6H), 2,15 - 2,33 (m, 1H), 2,58 - 2,79 (m, 1H), 3,89 - 4,0 (m, 3H), 4,2 - 4,33 (m, 3H), 4,33 - 4,44 (m, 1H), 4,44 - 4,66 (m, 2H) , 4,91 (m, 1H (osaksi H-O-D -signaalin peitossa)), 7,54 -15 7,63 (d, 2H), 7,72 - 7,84 (d, 2H).
Esimerkki 59 nBU00C-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab x HOAc (i) nBU00C-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab (Z) 20 Valmistettiin samalla tavalla kuin kuvataan nHexOOC-CH2- (R)Cgl-Aze-Pab(Z):lie (katso esimerkkiä 60 (i)) käyttämällä • · *.V TfO-CH2-COOnBu: ta alkylointireagenssina. Raakatuote puhdis- e * S/·· tettiin kahdesti flash-kromatografiällä, ensin käyttämällä CH2Cl2/MeOH:ta (95/l) eluenttina ja sitten CH2Cl2/i-propanolia ♦ · • ·*· 25 (9017) , jolloin saatiin 324 mg (47 %) otsikkoyhdistettä.
• •e · • · • · * • · ·
]»·*. (ii) nBuOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab xHOAC
• m ·
Suojauksenpoisto suoritettiin esimerkissä 57 (ii) kuvatulla .. menettelytavalla. Raakamateriaali puhdistettiin RPLCtllä • ♦ ·
*·|·* 30 käyttämällä CH3CN:ää (30 %) 0,05 M NH4OAc:Ssä ja 0,05 M
• · *···* HOAc:ssä eluenttina, jolloin saatiin 100 mg (53 %) otsikko- *:··: yhdistettä.
• · ^-NMR (300 MHz, MeOD) 0,85 - 2,1 (m, 18H) , 2,15 - 2,37 (m, • *·| 35 1H) , 2,58 - 2,8 (m, 1H) , 3,7 - 5,0 (m, 10H) , 4,88 - 5,0 * * (osaksi H-O-D -signaalin peitossa)), 7,46 - 7,65 (d, 2H) , 7,71 - 7,88 (d, 2H).
119812 146 13C-NMR (75 MHz, MeOD): amidiini- ja karbonyylihiilet; δ 146,8, 168,12, 168,2, 172,2.
5 Esimerkki 60 nHexOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab x 2 HC1 (i) nHexOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab(Z) 0,402 g (1,375 mmol) TfO-CH2-COOnHex:iä (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) liuotettiin CH2Cl2:een, ja lisättiin 10 hitaasti seokseen, jossa oli 0,695 g (1,375 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Pab (2):aa (katso esimerkkiä 1), 1,463 g (8,25 mmol) K2C03: a CH2C12: ssä (yhteensä 4 ml) <-10 °C:ssa. 1 tunnin kuluttua C02-jäähaude poistettiin, ja sekoitusta jatkettiin 45 min ajan huoneenlämpötilassa. Lisättiin lisää CH2Cl2:ta, ja 15 seos pestiin vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin, suodatettiin, ja liuotin haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 0,828 g jäännöstä, joka alistettiin kahdesti flash-kromato-grafialle, käyttäen eluenttina ensin dietyylieetteri/MeOH:ta (NH3:11a kyllästettyä) (95/5), ja sitten CH2Cl2/MeOH: ta 20 (NH3:11a kyllästettyä) (95/5), jolloin saatiin 0,42 g (47 %) otsikkoyhdistettä.
♦ · * » « • · · • · :/·: (ii) nHexOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab x2HCl :Y: Hydrogenoitiin 400 mg (0,617 mmol) "HexOOC-CH;.-(R) Cgl-Aze- • :*· 25 Pab(Z) :aa, kun läsnä oli 12 ml THF:ää ja 400 mg Pd/C:tä, 1,5 ··· ♦ I tunnin ajan, jolloin suojauksenpoisto ei ollut täydellinen.
• · · ·
Hydrogenointi eteni loppuun 4 tunnissa, kun läsnä oli 1,7 ml • · « 1 N HCl:ää, 12 ml MeOH:ta ja 340 mg Pd/C:tä. Katalysaattori poistettiin suodattamalla seliitillä ja millipore-suodatti-30 mella, minkä jälkeen liuotin haihdutettiin tyhjössä ja pa- • · ’·;·* kastekuivattiin kahdesti, jolloin saatiin 287 mg (79 %) ·;·*: otsikkoyhdistettä.
• · XH-NMR (300 MHZ, MeOD); δ 0,8 - 2,13 (m, 22H) , 2,13 - 2,31 • · · : \ 35 (m, 1H) , 2,61 - 2,81 (m, 1H) , 3,93 - 4,15 (m, 3H) , 4,15 - : : 4,37 (m, 3H), 4,37-4,7 (m, 3H) , 4,88-5,0 (m, 1H (osaksi H-O-D -signaalin peitossa)), 7,52 - 7,69 (d, 2H), 7,75 - 7,9 119812 147 (d, 2H).
13C-NMR (75 MHz, MeOD): amidiini- ja karbonyylihiilet; δ 146,84, 167,67, 167,84, 172,17.
5
Esimerkki 61 H-(R)Cgl-Pro-Pac x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cgl-Pro-Pac(Z) 377 mg (1,97 mmol) EDC:tä lisättiin 0 °C:ssa sekoitettuun 10 liuokseen, jossa oli 708 mg (1,95 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-OH:ta (Katso Lähtöaineiden valmistusta), 714 mg (2,0 mmol) H-Pac(Z) x 2 HC1:ää (katso Lähtöaineiden valmistusta) ja 1,078 g (8,8 mmol) DMAP:ta 12,5 ml:ssa asetonitriiliä. Reaktioseoksen annettiin saavuttaa huoneenlämpötilan yön yli. Liuotin 15 poistettiin tyhjössä, ja jäännös puhdistettiin ensin flash-kromatografiällä käyttäen eluenttina 10-%:ista metanolia metyleenikloridissa, ja seuraavaksi RPLC:llä. Eristettiin kaksi fraktiota (51 mg ja 150 mg) , jotka antoivat MS m/z = 626 (M+l).
20 (ii) H-(R)Cgl-Pro-Pac(Z) • · V,: Kloorivetyä kuplitettiin liuokseen, jossa oli 141 mg (0,22 :\i mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-Pac(Z):aa 50 ml:ssa etyyliasetaattia. 15 min kuluttua lisättiin 10-%:ista natriumkarbonaattiliuosta, • · J .*. 25 ja orgaaninen faasi erotettiin ja kuivattiin (K2CO3) . Liuotin • · · · : .*. haihdutettiin, jolloin saatiin 71 mg (61 %) tuotetta, • · · · • · · • · · (iii) H-(R)Cgl-Pro-Pacx2HCl
Seosta, jossa oli 71 mg (0,14 mmol) H-(R)Cgl-Pro-Pac(Z):aa ja • · · *·[·' 30 pieni spaat tel il linen 10-%:ista Pd/C:tä 10 ml:ssa etanolia, • · ’···* hydrogenoitiin huoneenlämpötilassa ja ilmakehän paineessa 2 ·;··· tunnin ajan. Katalysaattori poistettiin suodattamalla, ja ·...: liuotin poistettiin tyhjössä. Jäännös liuotettiin 50 ml:aan vettä ja 0,6 g:aan 1 M suolahappoa. Pakastekuivattiin, • · * ·] 35 jolloin saatiin 38 mg (58 %) otsikkoyhdistettä • · MS m/z 392 (M + 1) 119812 148
Esimerkki 62 HOOC-CH2-(R) Cha-Pro-PaC xHOAC BnOOC- CH2 - (R) Cha -pro - Pac {Z) 5 Seosta, jossa oli 84 mg (0,15 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pac (Z):aa (katso esimerkkiä 53 (ii)), yksi spaattelillinen kaliumkar bonaattia ja 47 mg TfOCH2-COOBn:ää (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) 3 ml:ssa metyleenikloridia, suodatettiin huoneenlämpötilassa yön yli. Reaktioseos suodatettiin, ja 10 liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin saatiin jäännös, joka alistettiin flash-kromatografialle käyttämällä eluenttina etyyliasetaatti/metyleenikloridi/metanolia 95:20:5. Eristettiin 29 mg haluttua tuotetta.
15 (ii) HOOC-CH2-(R) Cha-Pro-Pac xHOAC
Seosta, jossa oli 29 mg BnOOC-CH2-(R) Cha-Pro-Pac (Z) :aa ja 37 mg 10-%:ista Pd/C:tä 5 ml:ssa etanolia, sekoitettiin 4 tunnin ajan huoneenlämpötilassa ja ilmakehän paineessa. Katalysaattori suodatettiin, minkä jälkeen liuotin poistettiin, 20 ja puhdistettiin RPLC:llä, jolloin saatiin haluttu yhdiste.
Oi* MS m/z = 464 (M + 1) .
· I · » • ·* • ·
Esimerkki 63 • · : .·. 25 H00C-CH2-CH2-(R)Cgl-Pro-Pac !’!·! (i) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Pro-Pac (Z) • · · ,···, Liuosta, jossa oli 0,35 g (0,64 mmol) H-(R) Cgl-Pro-Pac (Z) :aa t · * (katso esimerkkiä 61 (ii)), 124 mg (0,76 mmol) bentsyyliak- .. rylaattia, ja 280 μΐ (2 mmol) trietyyliamiinia 1 ml:ssa • · · **[j* 30 etanolia, pidettiin 3 päivän ajan huoneenlämpötilassa. Liuo- • · *···* tin poistettiin, minkä jälkeen puhdistettiin HPLC:llä, jol- *:·*: loin saatiin 18 mg (4 %) otsikkoyhdistettä.
• · (ii) HOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Pro-Pac • * · : ·[ 35 Seosta, jossa oli 18 mg BnOOC-CH2-CH2-(R) Cgl-Pro-Pac (Z) :aa ja pieni spaattelillinen 10-%:ista Pd/C:tä, hydrogenoitiin 2 tunnin ajan huoneenlämpötilassa ja ilmakehän paineessa 119812 149
EtOH:ssa. Suodatettiin, minkä jälkeen liuotin poistettiin tyhjössä ja liuotettiin veteen ja pakastekuivattiin, jolloin saatiin 7 mg (78 otsikkoyhdistettä. MS m/z = 464 (M + 1).
5 Esimerkki 64 HOOC-CH2-CH2“ (R) Cha-Aze-Pac (i) Boc-(R)Cha-Aze-Pac(2)
Liuosta, jossa oli 0,4 g (1,38 mmol) H-Pac(Z):aa (Katso H-Pac(Z) x 2 HCl:n lähtöaineen valmistusta), 0,5 g (1,41 mmol) 10 Boc-(R)Cha-Aze-OH:ta (katso Lähtöaineiden valmistusta), ja 0,67 g (5,5 mmol) DMAP:tä 20 ml:ssa asetonitriiliä, sekoitettiin 0 °C:ssa liuioksen kanssa, jossa oli 0,26 g (1,4 mmol) EDC:tä 15 ml:ssa asetonitriiliä. Reaktioseosta pidettiin huoneenlämpötilassa yön yli, ja seuraavaksi liuotin 15 poistettiin tyhjössä. Jäännös jaettiin etyyliasetaatin ja veden välillä, vesifaasi uutettiin vielä kerran etyyliasetaatilla, ja yhdistetyt orgaaniset faasit pestiin natriumve-tysulfaattiliuoksella, natriumkarbonaattiliuoksella ja suolaliuoksella, ja kuivattiin sitten (natriumsulfaatti). Liuo-20 tin haihdutettiin, jolloin saatiin 0,54 g (63 %) otsikkoyhdistettä.
• · • · * f » · · (ii) H-(R)Cha-Aze-Pac(Z)
Kloorivetyä kuplitettiin liuokseen, jossa oli 0,54 g (0,9 • · : .*. 25 mmol) Boc-(R) Cha-Aze-Pac (Z) :aa etyyliasetaatissa. Liuosta ·· « : .·. pidettiin jääkaapissa yön yli, ja sitten liuotin poistettiin • · * ]···# tyhjössä, ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin. Liuos • · · pestiin natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella, vedellä ja .. suolaliuoksella, ja kuivattiin (natriumsulfaatti). Liuotin • · · 30 poistettiin, jolloin saatiin 0,35 g (77 %) tuotetta.
• · • * ··* ·;·: (iii) BnOOC-CH2-CH2-(R) Cha-Aze-Pac (Z)
Liuosta, jossa oli 180 mg (0,33 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pac(Z) :aa ja 53 mg (0,33 mmol) bentsyyliakrylaattia etanolissa, pidet- • * · : ** 35 tiin 60 tuntia huoneenlämpötilassa. Liuotin poistettiin tyh- * * jössä, ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin. Liuos pes tiin kaliumvetysulfaattiliuoksella ja natriumvetykarbonaat- 119812 150 tiliuoksella ja suolaliuoksella. Kuivattiin (natriumsulfaat-ti) ja liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin saatiin jäännöstä, joka puhdistettiin flash-kroraatografialla, käyttäen 10-%:ista metanolia metyleenikloridissa eluenttina, jolloin 5 saatiin 150 mg (66 %) otsikkoyhdistettä.
(iv) HOOC-CH2-CH2- (R)Cha-Aze-Pac x 2HC1
Seosta, jossa oli 115 mg BnOOC-CH2-CH2-(R)Cha-Aze-Pac(Z) :aa ja 67 mg 10-%:ista Pd/C:tä 10 ml:ssa etanolia, hydrogenoitiin 10 1,5 tunnin ajan huoneenlämpötilassa ja ilmakehän paineessa.
Suodatettiin, minkä jälkeen liuotin poistettiin tyhjössä ja jäännös liuotettiin veteen ja 1,5 mitään 1 M suolahappoa, jolloin saatiin liuosta, joka pakastekuivattiin, jolloin saatiin 30 mg (33 %) otsikkoyhdistettä.
15 MS m/z 464 (M + 1).
Esimerkki 65 HOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Pig x2HCl 20 (i) Boc-(R)Cha-Aze-Pig(Z) 0,249 g (1,298 mmol) EDCttä lisättiin <-15 °C:ssa seokseen, • « *.*,* jossa oli 0,473 g (1,236 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-OH:ta (Katso • · \**i kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 0,404 g (1,236 mmol) H- :V: Pig(Z) x HCltää (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) ja • ;*: 25 0,604 g (4,94 mmol) DMAPttä 13,5 mltssa DMFtää. Lämpötilan • t· · f annettiin kohota huoneenlämpötilaan yön yli. Liuotin haihdu- • · Φ · tettiin tyhjössä, ja lisättiin EtOAc:tä ja 2 M KHS04:ää.
• · » * *
Faasit erotettiin, ja orgaaninen faasi pestiin kylläisellä . . Na2C03:lla ja suolaliuoksella. Uuttoprosessi toistettiin, ♦ · · 30 kuivattiin (Na2S04), suodatettiin, ja liuottimet haihdutet- • · *·**' tiin, jolloin saatiin 0,612 g jäännöstä, joka alistettiin
*;**: flash-kromatografialle käyttämällä eluenttina EtOAc/MeOH
;··· 9/1 :tä, jolloin saatiin 407 mg (53 %) otsikkoyhdistettä.
·· * • ♦ · : ·' 35 (ii) H-(R) Cha-Aze-Pig(Z) 0,4 g (0,638 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-Pig(Z):aa liuotettiin 24,4 ml: aan TFA/CH2C12: ta 1/4, sekoitettiin 30 min ajan jää- 151 119812 hauteella ja 30 min ajan huoneenlämpötilassa. Liuotin poistettiin tyhjössä, ja lisättiin EtOAc:tä ja kylläistä Na2C03:a. Faasit erotettiin, ja orgaaninen kerros pestiin vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04) , suodatet-5 tiin, ja liuotin haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 336 mg (100 %) otsikkoyhdistettä.
(iii) BnOOC-CH2- (R) Cha-Aze-Pig (Z) 89 ml (0,562 mmol) BnDOC-CH2-Br:ää lisättiin hitaasti seok-10 seen, jossa oli 0,296 g (0,562 mmol) H-(R)Cha-Aze-Pig(Z):aa ja 0,171 g (1,236 mmol) K2C03:a 6 ml:ssa CH3CN:ssä, jota kuumennettiin öljyhauteella 60 °C:seen. 1 tunnin 45 min kuluttua liuotin haihdutettiin, lisättiin EtOAc:tä, ja seos pestiin vedellä, kuivattiin (Na2S04) , suodatettiin, ja liuotin 15 haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 346 mg jäännöstä, joka alistettiin flash-kromatografiälle käyttämällä eluent-tina CH2Cl2/THF/MeOH:ta (8/2/1), jolloin saatiin 297 mg (78 %) otsikkoyhdistettä.
20 (iv) H00C-CH2-(R) Cha-Aze-Pig x 2 HC1 243 mg (0,36 mmol) BnOOC-CH2-(R) Cha-Aze-Pig (Z) :aa hydroge- • · V.: noitiin 2 tunnin ajan, kun läsnä oli 1,7 ml 1 N HCl:ää, 10 ml
EtOH:ta (99,5-%) ja 300 mg Pd/C:tä. Katalysaattori pois-tettiin suodattamalla seliitillä ja millipore-suodattimella, • · • 25 minkä jälkeen liuotin haihdutettiin tyhjössä ja pakastekui-« · · · : ,·, vattiin kahdesti, jolloin saatiin 166 mg (88 %) otsikkoyh- • * *··· distettä.
• · · • · · . . 1H-NMR (500 MHz, D20) ; δ 0,6 - 1,9 (m, 18H) , 2,1 - 2,27 (m, • · · 30 1H) , 2,52 - 2,76 (m, 1H) , 2,82 - 3,2 (m, 4H) , 3,46 - 3,61 (m, 1H) , 3,61 - 3,81 (m, 2H) , 3,81 - 4,0 (m, 2H) , 4,0 - 4,24 (m, ·:*·: 2H) , 4,24 - 4,4 (m, 1H) .
• ·
Esimerkki 66 * *·| 35 HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pig x 2 HC1 * * (i) Boc-(R)Cha-Pro-Pig(Z)
Seokseen, jossa oli 0,3495 g (0,95 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH:ta 119812 152 (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 0,464 g (3,8 mmol) DMAP:tä, 0,310 g (0,95 mmol) H-Pig(Z)xHCl:ää (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) 5 ml:ssa CH2Cl2:ää, lisättiin 0,192 g (1 mmol) EDC:tä, ja seosta sekoitettiin yön yli 5 huoneenlämpötilassa. Seos haihdutettiin, ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin. Orgaaninen faasi pestiin kahdesti 0,3 M KHS04: llä ja kerran suolaliuoksella. Orgaaninen kerros kuivattiin (Na2S04) , suodatettiin ja haihdutettiin. Raaka-tuote puhdistettiin flash-kromatografiällä käyttämällä vai-10 heittaista gradienttia CH2Cl2/MeOH (100/0,97/3, 95/5, 90/10) eluenttina, jolloin saatiin 307 mg otsikkoyhdistettä.
(ii) H-(R)Cha-Pro-Pig(Z) 0,306 g (0,48 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-Pig(Z):aa liuotettiin 30 15 ml:aan HCl:llä kyllästettyä etyyliasetaattia. Seoksen annettiin seistä puoli tuntia. Liuotin haihdutettiin, ja jäännös liuotettiin CH2Cl2:een. Orgaaninen kerros pestiin kahdesti 0,2 M NaOH:lla. Yhdistetty vesikerros uutettiin kerran CH2Cl2:lla, ja yhdistetty orgaaninen kerros kuivattiin 20 (Na2S04) , suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 257 mg (99 %) otsikkoyhdistettä.
« * * · · » · * • · ί\.: (iii) BnOOC-CH2-(R) Cha-Pro-Pig(Z) ·*:*: Seosta, jossa oli 0,256 g (0,473 mmol) H- (R)Cha-Pro- • · : 25 Pig(Z) :aa, 0,144 g (1,04 mmol) K2C03:a ja 82 μΐ (0,521 mmol) ·«· · j .·. bentsyylibromiasetaattia 6 ml:ssa asetonitriiliä, kuumennt- • · · /··[ tiin 2 tunnin ajan 60 °C:seen sekoittaen. Liuotin haihdutet- $ · tiin, ja jäännös liuotettiin CH2Cl2:een, pestiin kerran ve- ,. dellä ja kerran suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04) , suoda- • * ’;]·* 30 tettiin, ja liuotin haihdutettiin. Raakatuote puhdistettiin * · '*»** f lash-kromatograf iällä käyttämällä eluenttina vaiheittaista ·:··· gradienttiä CH2Cl2/MeOH (97/3, 95/5, 90/10), jolloin saatiin ....Ϊ 0,2 g tuotetta (90-%:isen puhdasta RPLC:n mukaan). Lopullinen puhdistus suoritettiin kromatotronilla (Harrison research, • ·] 35 malli 7924T) 2-mm silikageelilevyllä CH2Cl2/MeOH: ssa 95/5, * * jolloin saatiin 0,158 g (48 %) puhdasta tuotetta.
119812 153 (iv) HOOC-CH2-(R) Cha-Pro-Pig x 2 HC1
0,158 g (0,227 mmol) BnOOC~CH2-(R) Cha-Pro-Pig(Z) :aa sekoitettiin 0,075 g:n kanssa Pd/C:tä (5-%), 1,0 ml:n kanssa 1 N
HCl-liuosta ja 10 ml:n kanssa etanolia. Seosta hydrogenoitiin 5 1 tunti ilmakehän paineessa. Suodatettiin seliitin läpi, ja liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen pakastekuivattiin kahdesti vedestä, jolloin saatiin 119 mg (97 %) tuotetta.
^-NMR (D20, 300 MHz): δ 0,95 - 1,44 (m, 7H) , 1,52 1H) , 1,60 10 - 2,20 (m, 13H), 2,39 (m, 1H), 3,07 - 3,32 (m, 4H), 3,68 (m, 1H), 3,77 - 4,02 (m, 5H; siitä 3,98 (s, 2H), 4,44 - 4,58 (m, 2H) 13C-NMR (D20, 75 MHz): karbonyyli- ja guanidiinihiilet: δ 15 156,5, 168,3, 169,6, 174,5
Esimerkki 67 HOOC-CH2-(R) Cha-Pro-Pig x 2 HCl (i) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pig (Z) 20 0,297 g (0,55 mmol) H-(R)Cha-Pro-Pig(Z):aa (katso esimerkkiä 66 (ii)) liuotettiin 2 ml:aan etanolia, ja lisättiin 90 μΐ t · *.1.1 (0,59 mmol) bentsyyliakrylaattia, Reaktioseosta sekoitettiin • · ί.1·ϊ 4 päivän ajan huoneenlämpötilassa. Liuotin haihdutettiin, ja :V: raakatuote kromatografoitiin kromatotronilla (Harrison re- • :1; 25 search, malli 7924T) käyttäen 2-mm silikageelilevyä vaiheit- ··· · • .1. täisellä gradientilla CH2Cl2/MeOH (95/5, 90/10) eluenttina, jolloin saatiin 0,338 g (87 %) otsikkoyhdistettä.
• · · φ (ii) HOOC-CH2-CH2-(R) Cha-Pro-Pig x 2 HCl • · · 30 0,238 g (0,227 mmol) BnOOC-CH2-CH2-(R) Cha-Pro-Pig (Z) :aa se- • · '·;·1 koitettiin 0,120 g:n kanssa Pd/C:tä (5-%) , 1,2 ml:n kanssa 1 •f! N HCl-liuosta ja 15 ml:n kanssa etanolia. Seosta hydrogenoi- ····· tiin 1 tunti ilmakehän paineessa. Katalysaattori suodatettiin seliitin läpi, liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen f · · * \ 35 pakastekuivattiin kahdesti vedestä, jolloin saatiin 178 mg (95 %) otsikkoyhdistettä.
119812 154 1H-NMR (D20, 300 MHz) 0,82 - 1,45 (m, 8H) , 1,45 - 2,15 (m, 13H) , 2,29 (m, 1H) , 2,83 (t, 2H) , 2,9 - 3,4 (m, 6H) , 3,57 (bq, 1H), 3,67 - 3,87 (m, 3H), 4,25 - 4,43 (m, 2H) 5 13C-NMR (D20, 75 MHz): karbonyyli- ja guanidiinihiilet: δ 156,3, 168,2, 174,3, 174,6 MS m/z 479 (M++l)
Esimerkki 68 (HOOC-CH2)2- (R)Cgl-Pro-Pig x 2 HC1 10 120 mg (0,126) mmol (BnOOC-CH2) 2- (R) Cgl-Pro-Pig (2) 2: ta (katso esimerkkiä 50 (iii)) hydrogenoitiin 4 tunnin ajan, kun läsnä oli 0,75 ml 1 N HCl:ää, 7 ml EtOHiha (99,5-%) ja 150 mg Pd/C:tä. Katalysaattori poistettiin suodattamalla seliitillä ja millipore-suodattimella, ja liuotin haihdutettiin tyhjös-15 sä, minkä jälkeen pakastekuivattiin, jolloin saatiin 66 mg (90 %) otsikkoyhdistettä 1H-NMR (500 MHz, D20); δ 1,05 - 1,38 (m, 7H), 1,53 - 1,64 (d, 1H) , 1,64 - 2,14 (m, 11H), 2,27 - 2,39 (m, 1H), 3,03 - 3,28 20 (m, 4H) , 3,58 - 3,70 (m, 1H) , 3,7 - 3,8 (m, 1H) , 3,8 - 3,9 (d, 2H), 4,07 - 4,22 (m, 2H), 4,22 - 4,35 (m, 1H), 4,38 - 4,5 0.*·* (m, 1H) .
· • * * • ·· • · :Y: 13C-NMR (75 MHz, D2O) : amidiini- ja karbonyylihiilet; δ • · : J*. 25 156,28, 166,73, 170,14, 174,01.
··* * • · • · ·
··· S
Esimerkki 69 ** HOOC-CH2-CH2- (H00C~CH2) - (R)Cha-Pro-Pig x 2 HC1 . . (i) BnOOC-CH2-CH2- (BnOOC-CH2) - (R) Cha-Pro-Pig (Z) • « ‘•V 30 Kylmään (jäähaudelämpötila) seokseen, jossa oli 100 mg (0,14 ’···* mmol) BnOOC-CH2-CH2-(R) Cha-Pro-Pig(Z) :aa (katso esimerkkiä 67 ····· (i)) ja 80 mg (0,57 mmol) kaliumkarbonaattia 4 ml:ssa CH2Cl2:ra, lisättiin varovasti luuos, jossa oli 64 mg (0,21 mmol) TfO-CH2-COOBn:ää liuotettuna 1 ml:aan CH2Cl2:ta. Reak- m · · • ·* 35 tioseos jätettiin 30 minuutiksi 0 °C:seen, ja annettiin * ‘ sitten saavuttaa huoneenlämpötilan 2 tunniksi, minkä jälkeen sitä kuumennettiin refluksoiden 30 min ajan, ja annettiin 119812 155 lopulta seistä yön yli huoneenlämpötilassa. Liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen flash-kromatografoitiin käyttämällä eluenttina CH2Cl2/MeOH:ta (97/3), jolloin saatiin 65 mg (54 %) otsikkoyhdistettä.
5 (ii) HOOC-CH2-CH2-(HOOC-CH2) - (R) Cha-Pro-Pig x 2 HC1 65 mg (0,08 mmol) BnOOC-CH2-CH2- (BnOOC-CH2) - (R) Cha- Pro-Pig(Z):aa liuotettiin 10 ml:aan EtOH/lM HCl:ää (9/1), ja hydrogenoitiin 10-%:isella Pd/C:llä 3 tunnin ajan ilmakehän 10 paineessa. Katalysaattori suodatettiin, liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen pakastekuivattiin vedestä, jolloin saatiin 40 mg (97 %) otsikkoyhdistettä valkoisena jauheena.
13C-NMR (125 MHz, MeOD): amidiini- ja karbonyylihiilet: δ 15 157,5, 167,2, 169,1, 173,7 ja 174,1.
Esimerkki 70 HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-(R,S) Itp x 2 HC1 (i) Boc- (R) Cgl-Aze- (R, S) Itp (Ts) 20 Boc-(R)Cgl-Aze-OH:ta (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) (400 mg, 1,17 mmol), H-(R,S)Itp(Ts):ää (Katso kohtaa Lähtö- 4 · ί,ϊ.ί aineiden valmistus) (366 mg, 1,23 mmol) ja DMAP:tä (286 mg, :\| 2,34 mmol) liuotettiin CH3CN.*ään (6 ml), ja jäähdytettiin 5 ·*:*· °C:seen. Lisättiin EDC:tä (236 mg, 1,23 mmol), ja tulokseksi • ♦
: 25 saatua seosta suodatettiin huoneenlämpötilassa yön yli. CH3CN
f*· · • .·. poistettiin, ja jäännös liuotettiin Me0H/Et0Ac/H20:hon.
• · ·
"j/ Erotettu orgaaninen kerros pestiin K2C03:lla (kylläistä), 2 M
« · · KHS04: llä, suolaliuoksella, ja kuivattiin (Na2S04) . Liuotin , , haihdutettiin, jolloin saatiin valkoista kiinteää ainetta, !·:·* 30 688 mg (85 %) .
»·· ^ • · • · *·· »··· MS m/z 620 (M++l) • * (ii) H- (R) Cgl-Aze - (R, s) Itp (Ts) : ·* 35 Boc-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts):ää (500 mg, 0,8 mmol) liuotettiin * ! CH2Cl2:een (50 ml), ja liuoksen läpi kuplitettiin HCl(g):tä noin 4 min ajan. 45 min kuluttua liuotin poistettiin 119812 156 haihduttamalla, ja tulokseksi saatu tuote liuotettiin Et0Ac/Me0H/H20:hon, ja happaman liuoksen pH säädettiin 2 M NaOHtlla (aq) emäksiseen pH-arvoon 8-9. Orgaaninen kerros erotettiin ja kuivattiin (Na2S04) . Liuotin haihdutettiin, 5 jolloin saatiin 425 mg (100 %) otsikkoyhdistettä valkoisena kiinteänä aineena.
MS m/z 520 (M++l) 10 (iii) BnOOC-CH2- (R) Cgl-Aze- (R, S) Itp (Ts) H-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts):ää (400 mg, 0,77 mmol), bentsyyli- 2-(para-nitrobentseenisulfonyylioksi)asetaattia (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) (325 mg, 0,92 mmol) ja K2C03:a (235 mg, 1,7 mmol) sekoitettiin CH3CN:ssä (5 ml) 45 °C:ssa. 15 Muutaman tunnin kuluttua konversio oli vain 25 %, ja sen vuoksi lämpötila kohotettiin 60 °C:seen, ja lisättin vielä bentsyyli-2-(para-nitrobentseenisulfonyylioksi)asetaattia. Reaktiota sekoitettiin 48 tunnin ajan, (lähtöaine:tuote/ 25:63), ja käsiteltiin sitten. Liuotin haihdutettiin, ja 20 jäännökseen lisättiin EtOAc/H20: ta. Faasit erotettiin, ja vesifaasi pestiin kahdesti EtOAc:llä, ja sitten yhdistetty • ·
\V orgaaninen faasi pestiin K2C03:lla (kylläisellä), 2 M
!/.; KHS04:llä, H20:lla, ja kuivattiin (Na2S04) , jolloin saatiin ;V: happaman KHS04:n takaisinuuton jälkeen noin 340 mg, joka ··1; 25 puhdistettiin RPLC:llä, jolloin saatiin 34 mg (7 %) otsikko- l«1 1 : yhdistettä.
• «S ♦ ··1 • · t * MS m/z 668 (M++l).
· 1 *£1 30 (iv) H00C-CH2-(R) Cgl-Aze-(R, S) Itp x 2 HC1
BnOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-(R, S) Itp (Ts) :ää (34 mg, 0,05 mmol) li-*:1·· uotettiin THF:ään (5 ml) , ja reaktioastiaan tislattiin .j..i NH3 (g) : tä (40 ml) hiilihappojääjäähdyttimellä. Lisättiin „·. Na(s):ää, ja ilmestyi tummansininen väri. Reaktiota suoda- » · 9 * ·] 35 tettiin 5 min ajan ennen kuin se sammutettiin HOAc:llä (50 * 1 μΐ) . Hiilihappojääjäähdytin poistettiin, ja NH3(l):n annet tiin haihtua. Jäännökseen lisättiin H20:ta ja HOAc:tä pH- 157 119812 arvoon 7. Pakastekuivattiin, ja suoritettiin preparatiivinen RPLC, jolloin saatiin useita fraktioita, jotka analysoitiin FAB-MS:llä. Kaksi fraktiota sisälsi toivottua tuotetta, 3 mg (10 %) 2,2 ekvivalentin kanssa 1 M HCl:ää pakastekuivattami-5 sen jälkeen.
MS m/z 424 (M++l).
Esimerkki 71 10 HOOC-CH2- (R) Cha-Aze- (R,B) Itp (i) Boc-(R) Cha-Aze-(R, S) Itp (Ts)
Boc-(R)Cha-Aze-OH:ta (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) (169 mg, 0,5 mmol), H-(R,S)Itp(Ts):ää (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) (155 mg, 0,52 mmol), DMAP:tä (122 mg, 1 15 mmol) liuotettiin CH3CN:ään (2,5 ml), ja jäähdytettiin 5 °C:seen. Lisättiin EDC x HCl:ää (115 mg, 0,6 mmol), ja tulokseksi saatua seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa yön yli. Yön yli sekoittamisen jälkeen lisättiin ylimääräistä (0,5 ekvivalenttia) H-(R,S)Itp(Ts):ää ja EDC:tä. Reak-20 tioseosta sekoitettiin vielä yön yli, ja käsiteltiin edellä Boc-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts):n (katso esimerkkiä 70) tapauk- • · *,V sessa kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 260 mg raakatuotet- !/·; ta. Puhdistettiin RPLC:llä, jolloin saatiin 180 mg (57 %) :Y: otsikkoyhdistettä.
: .·. 25 • · · «·· · : MS m/z 634 (M++l) .
* · « ··· 1 • * * • · * (ii) H-(R) Cha-Aze-(R, S) Itp (Ts)
Boc-(R)Cha-Aze-(R,S)Itp(Ts):ää (180 mg, 0,28 mmol) liuotet- • t · *;[j* 30 tiin CH2Cl2:een (20 ml), ja liuoksen läpi kuplitettiin noin 4 t · *···* min ajan HCl(g):tä. 45 min kuluttua liuotin poistettiin ·:··· haihduttamalla, ja tulokseksi saatu tuote liuotettiin ·;··ί CH2Cl2:een ja pestiin 2 M NaOH:lla emäksiseen pH-arvoon 8 - 9. Faasit erotettiin, ja orgaaninen faasi kuivattiin (Na2S04) • ♦ · * ·[ 35 ja haihdutettiin, jolloin saatiin 163 mg (noin 100 %): • · MS m/z 534 (M++l).
...ÄH
158 119812 (iii) BnOOC-CH2- (R) Cha-Aze- (R, S) Itp (Ts) H- (R)Cha-Aze- (R,S)Itp(Ts) :ää (80 mg, 0,15 mmol), K2C03:a (45 mg, 0,33 mmol) ja Br-CH2COOBn:ää (39 mg, 0,17 mmol) sekoi-5 tettiin 2,5 tunnin ajan CH3CN-.ssä (1,5 ml) 60 °C:ssa. Liuotin haihdutettiin, ja jäännös liuotettiin Et0Ac/H20:hon. Faasit erotettiin, ja orgaaninen faasi pestiin 10-%:isella sitruunahapolla ja kuivattiin (Na2S04) . Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 171 mg raakatuotetta, joka puhdistet-10 tiin RPLC:llä, jolloin saatiin 53 mg (52 %) otsikkoyhdistet-tä.
MS m/z 681 (M++l).
15 (iv) H00C-CH2-(R) Cha-Aze-(R, S) Itp
BnOOC-CH2-(R) Cha-Aze-(R, S) Itp (Ts) :ää (50 mg, 0,07 mmol) käsiteltiin BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-(R,S)Itp(Ts):lle kuvatulla tavalla (katso esimerkkiä 70 (iv)), jolloin saatiin tuo- teseosta, joka puhdistettiin RPLC:llä, jolloin saatiin 12 mg 20 otsikkoyhdisteen l:l-seosta yhdessä pelkistyneen muodosn kanssa, joka ilmenee massalla 439 (m/z).
• · * · * • · · • * MS m/z 438 (M++l) φ Φ • · • · * • · · • * ί .*. 25 Esimerkki 72 ( « · ·’*.·! H- (R) Cha-Pic- (R, S) Itp x 2HC1 • « « "!·,* (i) Boc- (R) Cha-Pic- (R, S) Itp (Ts) φ · Φ 2,1 g (5,5 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-OH:ta (Katso kohtaa Lähtöai-neiden valmistus), 1,0 g (8,2 mmol) DMAP:tä ja 1,7 g (5,8 φ φ * *;];* 30 mmol) H-(R, S) Itp (Ts) :ää (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmis- • # *···' tus) liuotettiin huoneenlämpötilassa 40 ml:aan asetonitrii- Φ ·:··· liä. Muutaman minuutin sekoittamisen jälkeen lisättiin 1,1 g (5,8 mmol) EDC:tä, ja sekoitusta jatkettiin 60 tunnin ajan.
Liuotin poistettiin tyhjössä, ja jäännös liuotettiin Φ · · • ·* 35 CH2Cl2:een, pestiin vedellä, 0,3 M KHS04:llä ja KHC03:lla * * (aq) , ja kuivattiin (Na2S04) . Liuotin haihdutettiin, ja suo datettiin silikageelin läpi, jolloin saatiin 2,43 g (67 %) .xatlUkj 119812 159 tuotetta.
MS m/z 661 (M++l) 5 (ii) Boc-(R) Cha-Pic-(R, S) Itp 2,4 g (3,6 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Ts):ää liuotettiin 15 ml:aan THF:ää, ja kolviin tiivistettiin NH3(g):tä, minkä jälkeen lisättiin Naita. Reaktio sammutettiin 5 min kuluttua etikkahapolla, ja NH3 ja THF haihdutettiin. Jäännös pakaste-10 kuivattiin vedestä, ja puhdistettiin RPLCillä (CH3CN/0,1 M NH4OAc, 6/4), jolloin saatiin 0,93 g (51 %) haluttua tuotetta.
MS m/z 507 (M++l) 15 (iii) H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp x 2 HC1 50 mg (0,099 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp:tä liuotettiin huoneenlämpötilassa etyyliasetaattiin, joka oli kyllästetty HClrllä (g). Kun oli sekoitettu 2 tunnin ajan, liuotin pois-20 tettiin tyhjössä. Jäännös pakastekuivattiin kolmesti vedestä, jolloin saatiin 35 mg (74 %) haluttua tuotetta.
* · • · * * · t • m !/.: MS m/z 407 (M++l) • · • * » • · « • · • ·'· 25 Esimerkki 73 : .·.* HOOC-CH2- (R) Cha-Pic- (R, S) Itp x 2HC1 • · · * .···, (i) Boc-(R) Cha-Pic-(R, S) Itp (Z) • · ♦
Huoneenlämpötilassa 0,84 g (1,66 mmol) Boc-(R)Cha-Pic- .. (R,S)Itp (katso esimerkkiä 72) liuotettiin in 10 ml CH2C12 ja • · · *·[·* 30 10 ml 0,5 M NaOH. 0,29 ml (1,82 mmol) Z-Cl lisättiin • · *···* tipoittain. After stirring for 3 h the phases was separated ·:*·· ja orgaaninen faasi pestiin vedellä ja dried over Na2S04.
....I Evaporation ja flash chromatography (etyyliasetaatti/ heptane 911) gave 0,5 g (47 %) haluttua tuotetta.
• · · : ·* 35 'V'1 MS m/z 641 (M++l) 119812 160 (ii) H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z) 0,5 g (0,78 mmol) Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z): aa liuotettiin huoneenlämpötilassa etyyliasetaattiin, joka oli kyllästetty HClrllä. Lisättiin vettä, ja seos säädettiin emäksiseen pH-5 arvoon K2C03:lla. Faasit erotettiin. Vesifaasi uutettiin CH2Cl2:lla, ja orgaaninen faasi pestiin vedellä. Sitten yhdistetty orgaaninen faasi kuivattiin (Na2S04) . Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 0,3 g (71 %) haluttua tuotetta.
10 MS m/z 541 (M++l) (iii) BnOOC-CH2- (R) Cha-Pic- (R,S)Itp(Z) 0,29 g (0,5 mmol) H-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z):aa, 0,15 g (1 mmol) K2C03: a otettiin 25 ml:aan asetonitriiliä. Lisättiin 15 154 mg (0,6 mmol) bentsyylibromiasetaattia, ja seosta sekoi tettiin 4 tunnin ajan 50 °C:ssa. Haihgdutettiin ja puhdistettiin RPLC:llä (asetonitriili: 0,1 M NH4OAc 70:30), jolloin saatiin noin 200 mg haluttua tuotetta.
20 (iv) HOOC-CH2-(R) Cha-Pic- (R, S) Itp x 2 HC1 200 mg BnOOC-CH2-(R) Cha-Pic-(R,S)Itp(Z):aa liuotettiin • · ϊ.ϊ,ϊ etanoliin. Lisättiin pieni lusikallinen 10-%:ista Pd/C:tä, ja !**.: seosta hydrogenoitiin 4 tunnin ajan. Suodatettiin hyflon ·*·*· läpi, liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen pakastekuivattiin · ί »*. 25 vedestä, jolloin saatiin 53 mg haluttua tuotetta.
··· · • * • · · • · * "1/ ^-NMR (300,13 MHz, D20) ; δ 1,0 - 2,35 (päällekkäiset m, **’ * 22H) , 3,28 - 3,51 (m, 5H) , 3,51 - 3,64 (m, 1H) , 3,75 - 4,03 tt (m, 3H) , 5,03 - 5,14 (s leveä, 1H) . Yhden protoneista sig- • · · ’;]·* 30 naali on osaksi H-O-D -signaalin peitossa.
ψ · • · ··· MS m/z 465 (M++l) * t * Esimerkki 74 ·· « !'·* 35 H- (R) Cgl-Pro- (R, S) Rig X 2HC1 ***** (i) Boc-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z)
Seokseen, jossa oli 1,0 g (2,95 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-OH:ta 119812 161 (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 1,44 g (11,8 mmol) DMAP:tä, 1,12 g (3,25 mmol) H-(R, S)Hig(Z):aa (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) 15 ml:ssa CH2Cl2:ta, lisättiin 0,62 g (3,2 mmol) EDC:tä, ja seosta sekoitettiin huoneenlämpöti-5 lassa yön yli. Liuotin haihdutettiin, ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin. Kun orgaaninen kerros pestiin kahdesti 0,3 M KHSO4-liuoksella, orgaanisesta kerroksesta erottui öljyä. Etyyliasetaattikerros kuivattiin (Na2S04) ja suodatettiin. Öljy ja vesikerros uutettiin sitten CH2Cl2:lla. Orgaaninen 10 kerros kuivattiin (Na2S04) , suodatettiin, ja yhdistettiin edellä olevan EtOAc-faasin kanssa. Haihdutettiin, ja raakatuote puhdistettiin kromatotronilla (Harrison research, malli 7924T) käyttämällä 2-mm silikageelilevyä vaiheittaisella gradientilla CH2Cl2/MeOH (97/3, 9515, 90/10 15 eluenttina, jolloin saatiin 1,1 g (59 %) otsikkoyhdistettä.
(ii) H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig x 2 HC1 81 mg (0,13 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z):aa liuotettiin 50 ml:aan etyyliasetaattia, joka oli kyllästetty HCl:llä. 20 Seoksen annettiin seistä 1 tunti, haihdutettiin, ja jäännös liuotettiin 10 ml:aan etanolia. Lisättiin 40 mg Pd/C:tä (5- • · V.: %) , 1 ml vettä ja 0,5 ml 1 M HCl-liuosta, ja seosta hydro- genoitiin ilmakehän paineessa yön yli. Katalysaattori suoda-tettiin seliitin läpi, ja liuotin haihdutettiin, minkä jäi- • · 119812 162 1 g (1,6 mmol) Boc-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z):aa (katso esimerkkiä 74 (i)) liuotettiin 100 ml:aan etyyliasetaattia, joka oli kyllästetty HCl:llä, ja seoksen annettiin seistä 1 tunti. Seos haihdutettiin, ja jäännös liuotettiin CH2Cl2:een. 5 Orgaaninen kerros pestiin kahdesti 0,2 M NaOH-liuoksella, kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 0,825 g (98 %) otsikkoyhdistettä.
(ii) BnOOC-CH2- (R)Cgl-Pro- (R,S)Hig(Z) 10 0,442 g (0,839 mmol) H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig(Z):aa, 0,256 g (1,85 mmol) K2C03:a ja 145 μΐ (0,521 mmol) bentsyylibro-miasetaattia sekoitettiin 12 ml:aan THF:ää. Seosta sekoitettiin 1 tunti 40 °C:ssa, ja huoneenlämpötilassa yön yli. Kun liuotin oli haihdutettu, jäännös liuotettiin CH2Cl2:een, ja 15 pestiin kerran vedellä ja kerran suolaliuoksella. Orgaaninen kerros kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja haihdutettiin, ja raakatuote puhdistettiin kromatotronilla (Harrison research, malli 7924T) käyttäen 2-mm silikageelilevyä vaiheittaisella gradientilla CH2Cl2/MeOH (97/3, 95/5, 90/10) eluenttina, 20 jolloin saatiin 0,165 g (29 %) otsikkoyhdistettä.
sV; (iii) HOOC-CH2-(R) Cgl-Pro-(R,S)Hig x 2 HC1 0,165 g (0,25 mmol) BnOOC-CH2-(R) Cgl-Pro- (R, S) Hig (Z) :aa se-koitettiin 0,050 g:n kanssa Pd/C:tä (5-%) , 0,7 ml:n kanssa l • · : 25 M HCl-liuosta ja 10 ml:n kanssa etanolia. Seosta hydrogenoi- ·«· · ; .·. tiin 4 tunnin ajan ilmakehän paineessa. Katalysaattori suo- \·\·[ datettiin seliitin läpi, ja liuotin haihdutettiin, minkä • · » jälkeen pakastekuivattiin kahdesti vedestä, jolloin saatiin .. 0,1 g (75 %) tuotetta.
• · · 30 ··· 1H-NMR (D20 300 MHz): δ 1,05 - 1,45 (m, 5H) , 1,55 - 2,5 (m, ·:··: 15H) , 3,08 (bt, 1H) , 3,2 - 4,05 (m, 9H) , 4,30 (d, 1H) , 4,44 (m, 1H) • · ·» · • · · • ·| 35 13C-NMR (D20, 75 MHz) : karbonyyli- ja guanidiinihiilet: δ 154,9, 167,2, 169,4, 174,1 119812 163
Esimerkki 76 E-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig(Z) 0,72 g (1,95 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH:ta (Katso kohtaa Lähtö-5 aineiden valmistus), 0,95 g (7,8 mmol) DMAP:tä, 0,74 g (2,14 mmol) 82-%:isen puhdasta H-(R,S)Hig(Z):aa (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) 10 ml:ssa CH2Cl2:ta lisättiin 0,486 g:aa (2,54 mmol) EDC:tä, ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 3 päivän ajan. Seos laimennettiin CH2Cl2:lla, ja 10 pestiin vedellä, kahdesti 0,3 M KHS04-liuoksella ja kerran suolaliuoksella. Orgaaninen kerros kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja haihdutettiin, ja raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla käyttämälläg CH2Cl2/MeOH:ta 95/5 eluenttina, jolloin saatiin 0,450 g (33 %) tuotetta.
15 (ii) H-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig x 2 HC1 50 mg (0,078 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig(Z):aa liuotettiin 20 ml:aan etyyliasetaattia, joka oli kyllästetty HCl:llä. Seoksen annettiin seistä 1 tunti, haihdutettiin, ja jäännös 20 liuotettiin 10 ml:aan etanolia. Lisättiin 20 mg Pd/C:tä (5-%) ja 0,3 ml 1 M HC1-liuosta, ja seosta hydrogenoitiin 2 tuntia * · ilmakehän paineessa. Katalysaattori suodatettiin seliitin läpi, ja liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen pa-kastekuivattiin kahdesti vedestä, jolloin saatiin 28 mg (76 * * : 25 %) otsikkoyhdistettä.
• ·· t • · • · · • · · [•'y, 1H-NMR (D20, 300 MHz): δ 0,9 - 1,6 (m, 6H) , 1,6 - 2,5 (m, • · · 16H) , 3,09 (t, 1H) , 3,31 (t, 1H) , 3,37 - 3,74 (m, 4H), 3,81 (m, 1H), 4,35 - 4,47 (m, 2H) · · **·* 30 • · · '·*·' 13C-NMR (D20, 75 MHz): karbonyyli- ja guanidiinihiilet: δ ·:··: 154,9, 169,8, 174,5 • *
Esimerkki 77 : ·] 35 H- (R) Cgl-Aze-Rig x 2 HC1 * * (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Rig(Z)
Liuokseen, jossa oli 0,50 g (1,6 mmol) H-Rig(Z):aa (Katso 119812 164 kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 0,59 g (1,6 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-OH:ta (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 0,84 g (6,9 mmol) dimetyyliaminopyridiiniä 30 ml:ssa ase-tonitriiliä ja 5 ml:ssa dimetyyliformamidia, lisättiin 0,33 g 5 (1,7 mmol) N-(3-dimetyyliaminopropyyli)-N'-etyylikarbodi- imidihydrokloridia. Reaktion annettiin sekoittua 3 päivän ajan, sitten haihdutettiin ja jaettiin kaliumvetysulfaatin vesiliuoksen ja metyleenikloridin välillä. Metyleenikloridi-kerros pestiin natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja vedel- 10 lä, kuivattiin (Na2S04) ja haihdutettiin. Raakamateriaali suodatettiin imupullolla silikageelikerroksen läpi mety-leenikloridi/metanolilla 9/1, jolloin saatiin haihduttamisen jälkeen 0,78 g (76 %) haluttua yhdistettä.
15 ^-NMR (300 MHz, CDC13): δ 0,8 - 1,9 (m, 27H) , 2,4 - 2,6 (m, 2H), 2,78 (bt, 2H), 3,15 - 3,4 (m, 2H), 3,80 (bt, 1H), 4,0 - 4,4 (m, 4H), 4,75 (bt, 1H), 4,97 (bd, 1H), 5,08 (S, 2H), 7,1 - 7,4 (m, 7H), 7,74 (b, 1H).
20 (ii) H-(R)Cgl-Aze-Rig(Z) x 2 HC1
Kolvia, joka sisälsi Boc-(R)Cgl-Aze-Rig(Z):aa, 0,76 g (1,2 • · mmol), 50 ml:ssa etyyliasetaattia, jäähdytettiin jäähauteel- la. Kuplitettiin läpi kuivaa HCl:ää 5 min ajan, ja liuos :Y; haihdutettiin, jolloin saatiin 0,74 g (100 %) dihydrokloridia « · 119812 165
Saanto: 8 mg (52 %) .
1H-NMR (300 MHz, D20) : δ 1,1 - 2,0 (m, 18H) , 2,37 (m, 1H) , 2,75 (m, 1H) , 3,08 (bt, 2H) , 3,39 (bt, 2H) , 3,8 - 4,0 (m, 5 3H), 4,35 - 4,5 (m, 2H), 4,90 (m, 1H).
13C-NMR (75,5 MHz, D20): guanidiini- ja karbonyylihiilet: δ 172,2, 169,4, 156,4.
10 Esimerkki 78 HOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Rig x 2 HC1 (i) BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Rig(Z)
Seosta, jossa oli 0,20 g (0,33 mmol) H-(R)Cgl-Aze-Rig(Z):aa (katso esimerkkiä 77), 0,13 g kaliumkarbonaattia, 80 mg 15 natriumjodidia, 10 ml tetrahydrofuraania ja 10 ml asetonit-rilliä, kuumennettiin 10 tunnin ajan 60 °C:ssa. Liuottimet haihdutettiin, ja raakamateriaali flash-kromatografoitiin silikageelillä käyttämällä metyleenikloridi/metanolia 92/8 eluenttina. Saanto: 0,13 g (58 %).
20 1H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,9 - 2,1 (m, 18H) , 2,45 (m, 1H) , • « \V 2,61 (m, 1H) , 2,81 (m, 2H) , 2,88 (d, 1H) , 3,2 - 3,5 (m, 4H) , V·! 3,94 (m# 1H) , 4,0 - 4,25 (m, 3H) , 4,85 (m, 1H) , 5,12 (s, 2H) , :Y: 5,14 (s, 2H), 6,9 - 7,2 (b. 2H), 7,2 - 7,5 (m, 10H), 7,95 (m, • 25 ih) .
·«· · • · • · · • · · (ii) H00C-CH2-(R) Cgl-Aze-Rig x 2 HC1 • · ·
Seosta, jossa oli 0,12 g (0,18 mmol) BnOOC-CH2- (R) Cgl-Aze- . , Rig(Z):aa, 5 ml etanolia, 3 tippaa konsentroitua HCl:ää ja • * · * * 30 pieni määrä 5-%:ista Pd/C:tä, hydrogenoitiin 1 tunti ilmake- • · *···* hän paineessa. Seos suodatettiin sellit in läpi ja haihdutet- *:**: tiin. Jäännös lyofilisoitiin vedessä, jolloin saatiin 91 mg ····· (98 %) tuotetta.
• · · • · · : ·] 35 XH-NMR (500 MHz, D20) : δ 1,1 - 1,9 (m, 17H) , 2,00 (m, 1H) , 2,29 (m, 1H) , 2,70 (m, 1H) , 3,10 (m, 2H) , 3,34 (t, 2H) , 3,83 (bd, 2H) , 3,89 (dd, 2H) , 4,00 (d, 1H) , 4,35 (m, 2 H), 4,87 119812 166 (m, 1H) .
13C-NMR (125,8 MHz, D20): guanidiini- ja karbonyylihiilet: δ 171,8, 169,6, 167,7, 156,3.
5
Esimerkki 79 HOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Rig x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-Pro-Rig(Z)
Liuokseen, jossa oli 0,25 g (0,82 mmol) 4-aminoetyyli-l-10 bentsyylioksikarbonyyliamidinopiperidiini(Η-Rig(z)):aa, (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 0,32 g (0,82 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH:ta (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 0,40 g (3,3 mmol) dimetyyliaminopyridiiniä 10 ml:ssa ase-tonitriiliä ja 2 ml dimetyyliformamidia, lisättiin 0,165 g 15 (0,86 mmol) N-(3-dimetyyliaminopropyyli)-N'-etyylikarbodi- imidihydrokloridia. Reaktio sai sekoittua 3 päivän ajan, haihdutettiin sitten ja jaettiin kaliumvetysulfaatin vesiliuoksen ja metyleenikloridin välillä. Metyleenikloridikerros pestiin natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä, 20 kuivattiin (Na2S04) ja haihdutettiin. Raakatuotteen NMR-spektri oli tyydyttävä, ja tuotetta, joka sisälsi hieman • · \V dimetyyliformamidia, käytettiin seuraavassa vaiheessa enempää • ♦ !/·· puhdistamatta.
• · • « 9 » * · • * • :*; 25 ^-NMR (500 MHz, CDC13) δ 0,8 - 2,2 (m, 32H; siitä 1,41 (s, **· « Ϊ 9H) ) , 2,34 (m, 1H) , 2,77 (bt, 2H) , 3,10 (m, 1H) , 3,29 (m, !·*·! 1H) , 3,40 (m, 1H) , 3,83 (m, 1H) , 4,17 (m, 2H) , 4,30 (m, 1H) , • · · 4,54 (m, 1H), 5,07 (m, 1H), 5,08 (s, 2H), 7,03 (m, 1H), 7,05 - 7,4 (m, 7H) .
• · · • · · Λ1. 30 :·;·** (ii) H-(R) Cha-Pro-Rig(Z) *:·*: KOlvia, joka sisälsi Boc- (R) Cha-Pro-Rig(Z) :n raakatuotetta ·:··· 100 ml:ssa etyyliasetaattia, jäähdytettiin jäähauteella.
Kuplitettiin läpi kuivaa HCl:ää 5 min ajan, ja liuos haihdu- • · · * \ 35 tettiin ylimääräisestä HCl:stä eroon pääsemiseksi. Tuote Ρ·ν«· liuotettiin veteen, ja uutettiin kahdesti etyyliasetaatilla edetävästä vaiheesta tulevan dimetyyliformamidin poistami 119812 167 seksi. Vesifaasi säädettiin alkaliseen pH-arvoon NaHC03:lla (aq) , ja uutettiin kahdesti metyleenikloridillä. Yhdistetty orgaaninen faasi pestiin vedellä, kuivattiin (Na2S04) ja haihdutettiin. Saanto: 0,37 g (81 %) kahden vaiheen yli.
5 1H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 0,8 - 2,4 (m, 24H) , 2,82 (bt, 2H) , 3,26 (m, 2H), 3,42 (bq, 1H), 3,70 (m, 2H), 4,19 (m, 2H), 4,49 (bd, 1H), 5,11 (s, 2H), 6,9 - 7,5 (m, 8H).
10 (iii) BnOOC-CH2-(R) Cha-Pro-Rig(Z)
Seosta, jossa oli 0,18 g (0,32 mmol) H-(R)Cha-Pro-Rig(Z):aa, ylimäärä kaliumkarbonaattia ja 10 ml asetonitriiliä, kuumennettiin 2 tuntia 60 °C:ssa. Liuottimet haihdutettiin, ja raakamateriaali flash-kromatografoitiin silikageelillä käyt-15 täen metyleenikloridi/metanolia 95/5 eluenttina. Saanto: 0,20 g (88 %) .
^-NMR (300 MHz, CDC13) : δ 0,8 - 2,1 (m, 23H) , 2,37 (m, 1H) , 3,1 - 3,5 (m, 7H) , 4,0 - 4,2 (m, 2H) , 4,54 (m, 1H) , 5,1 (m, 20 4H), 6,9 - 7,5 (m, 13H).
\V (iv) HOOC-CHs- (R) Cha-Pro-Rig x 2 HC1 :.*·· Seosta, jossa oli 0,15 g (0,21 mmol) BnOOC-CH2- (R) Cha-Pro- :/./. Rig(Z):aa, 10 ml etanolia, 4 tippaa konsentroitua HCl:ää ja • :*: 25 pieni määrä 5-%:ista Pd/C:tä, hydrogenoitiin 1 tunti ilmake- • * · 4 j hän paineessa. Seos suodatettiin seliitin läpi ja haihdutet- ··· · tiin. Jäännös lyofilisoitiin vedessä, jolloin saatiin 95 mg (64 %) tuotetta.
• # · · *:!:* 30 Hi-NMR (500 MHz, MeOD) δ 0,85 - 2,1 (m, 23 H), 2,30 (m, 1H) , *·"* 3,10 (m, 2H) , 3,25 (m, 1H) , 3,35 (m, 1H) , 3,54 (m, 1H) , 3,85 *:**: - 4,0 (m, 3H) , 4,03 (d, 1H) , 4,41 (m, 1H) , 4,50 (m, 1H) .
• · 13C-NMR (125,8 MHz, D20) : guanidiini- ja karbonyylihiilet: δ : 35 174,0, 168,9, 168,1, 157,5.
• 4 119812 168
Esimerkki 80 HOOC-CH2-CH2-(R) Cha-Aze-Rig x 2 HCl (i) Boc-(R)Cha-Aze-Rig(Z)
Liuokseen, jossa oli 0,25 g (0,82 mmol) 4-aminoetyyli-l-5 bentsyylioksikarbonyyliamidinopiperidiiniä (H-Rig(Z)), (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 0,31 g (0,86 mmol) Boc-(R)Cha-Aze-OH:ta (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 0,40 g (3,3 mmol) dimetyyliaminopyridiiniä 10 ml:ssa ase-tonitriiliä ja 2 ml:ssa dimetyyliformamidia, lisättiin 0,17 g 10 (0,86 mmol) N-(3-dimetyyliaminopropyyli)-N'-etyylikarbodi- imidihydrokloridia. Reaktion annettiin sekoittua 3 päivän ajan, haihdutettiin sitten ja jaettiin kaliumvetysulfaatin vesiliuoksen ja metyleenikloridin välillä. Metyleenikloridi-kerros pestiin natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja vedel-15 lä, kuivattiin (Na2S04) ja haihdutettiin. Raakatuotetta, joka sisälsi jonkin verran dimetyyliformamidia, käytettiin seuraavassa vaiheessa enempää puhdistamatta.
XH-NMR (500 MHz, CDC13) : δ 0,85 (m, 1H) , 0,97 (m, 1H) , 1,1 -20 1,75 (m, 26H; siitä 1,41 (s, 9 H) ) , 1,82 (bd, 1H) , 2,53 (m, 2H), 2,77 (bt, 2H), 3,25 (m, 2H), 4,03 (q, 1H), 4,08 (m, 1H), \V 4,18 (m, 2H) , 4,29 (m, 1H) , 4,78 (m, 1H) , 4,97 (m, 1H) , 5,09 V·: (s, 2H) , 7,1 - 7,4 (m, 7H) , 7,65 (m, 1H) .
• · • · · • · · • · • :*: 25 Ui) H- (R) Cha-Aze-Rig(Z) ··· · i .*. Kolvia, joka sisälsi Boc-(R) Cha-Aze-Rig (Z) :n raakatuotetta ··· · 100 ml:ssa etyyliasetaattia, jäähdytettiin jäähauteella. Kuplitettiin läpi kuivaa HCl:ää 5 min ajan, ja liuos haihdu- .. tettiin ylimääräisestä Helistä eroon pääsemiseksi. Tuote * · « ;,* 30 liuotettiin veteen, ja uutettiin kahdesti etyyliasetaatilla • · '···* edeltävästä vaiheesta olevan dimetyyliformamidin poistami- *!·*: seksi. Vesifaasi säädettiin alkaliseen pH-arvoon NaHC03:lla ···*: (aq) , ja uutettiin kahdesti metyleenikloridilla. Yhdistetty orgaaninen faasi pestiin vedellä, kuivattiin (Na2S04) ja * \ 35 haihdutettiin. Saanto: 0,31 g (70 %) kahden vaiheen yli.
• · 1 H-NMR (300 MHz, CDC13) : δ 0,8 - 1,9 (m, 20H) , 2,48 (m, 1H) , 119812 169 2,73 (m, 1H), 2,85 (bt, 2H), 3,25 (m, 1H), 3,35 (ra, 2H), 4,05 (q, 1H), 4,1 - 4,25 (m, 3H), 4,86 (m, 1H), 5,12 (s, 2H), 6,9 - 7,2 (m, 2H), 7,2 - 7,45 (m, 5H), 7,93 (m, 1H).
5 BnOOC-CH2-CH2- (R)Cha-Aze-Rig(Z)
Liuoksen, jossa oli 0,31 g (0,57 mmol) H-(R)Cha-Aze-Rig(Z):aa ja 93 mg (0,57 mmol) bentsyyliakrylaattia 5 ml:ssa etanolia, annettiin seistä huoneenlämpötilassa yhden viikon ajan. Se haihdutettiin ja flash-kromatografoltiin silikageelillä 10 käyttämällä eluenttina metyleenikloridi/metanolia 94/6. Saanto: 0,20 g (49 %) .
^-NMR (500 MHz, CDC13) δ 0,8 - 1,0 (m, 2H) , 1,1 - 1,8 (m, 18 H), 2,48 (m, 1H), 2,54 (bt, 2H), 2,68 (m, 2H), 2,81 (bt, 2H), 15 2,87 (m, 1H), 3,20 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 3,31 (m, 1H), 4,04 (q, 1H) , 4,1 - 4,2 (m, 3H) , 4,84 (dd, 1H) , 5,05 - 5,15 (m, 4H), 7,0 - 7,5 (m, 12H), 8,03 (m, 1H).
(iv) HOOC-CH2-CH2-(R) Cha-Aze-Rig x 2 HC1 20 Otsikkoyhdiste valmistettiin ja puhdistettiin samalla tavalla kuin kuvattiin esimerkissä 80 0,20 g:sta (0,28 mmol) BnOOC- • · *.V CH2-CH2-(R) Cha-Aze-Rig-(Z) : sta. Saanto: 30 mg (19 %) • · ί,*·ϊ dihydrokloridisuolaa.
• · ♦ · · • · * • · : 25 ^-NMR (500 MHz, CDCIa) δ 1,0 - 1,9 (m, 20H) , 2,33 (m, 1H) , ·*· · : 2,70 (m, 1H) , 2,83 (m, 2H) , 3,10 (m, 2H) , 3,3 - 3,4 (m, 4H) , 3,85 (bd, 2H) , 3,92 (m, rotameeri) , 4,14 (t, 1H) , 4,17 (m, • · * rotameeri), 4,31 (m, 1H) , 4,46 (m, 1H) , 4,89 (m, 1H) , 5,18 . . (m, rotameeri).
• · * *:!:* 30 • · *«·* 13C-NMR (125,8 MHz, D20) guanidiini- ja karbonyylihiilet: δ ·:·*: 175,4, 171,8, 168,8, 156,3.
•
Esimerkki 81 • · · : ·* 35 HOOC-CH2-(R)Cha-Pro-(S) Itp x 2 HC1 (i) Boc-(R)Cha-Pro-(S) Itp(Ts) 0,87 g (2,36 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH:ta (Katso kohtaa Lähtö- 119812 170 aineiden valmistus), 0,78 g (4,72 mmol) DMAP:tä ja 0,70 g (2,36 mmol) H-(S)Itp(Ts):ää (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) liuotettiin huoneenlämpötilassa 12 ml:aan ase-tonitriiliä. Kun oli sekoitettu 20 min ajan, lisättiin 0,59 g 5 (3,07 mmol) EDC.*tä. 18 tunnin kuluttua liuotin poistettiin tyhjössä, ja jäännös liuotettiin CH2Cl2:een, pestiin vedellä, sitruunahapolla (10-%), KHC03:lla (aq), vedellä, ja kuivattiin Na2S04:llä. Haihdutettiin, jolloin saatiin 1,74 g (> 100-%:inen saanto (puhtaus noin 60 %)) haluttua tuotetta, 10 jota käytettiin seuraavassa vaiheessa enempää puhdistamatta.
FAB-MS: m/z = 647 (M++l) (ii) H-(R) Cha-Pro-(S) Itp (Ts) 15 Boc-suojaryhmä poistettiin samalla tavalla kuin kuvattiin Boc-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z):lie (katso esimerkkiä 72 (ii)), jolloin saatiin 0,75 g (81 %) otsikkoyhdistettä.
FAB-MS: m/z = 547 (M++l) 20 (iii) BnOOC-CH2- (R) Cha-Pro- (S) Itp(Ts) 0!: 0,75 g (1,37 mmol) H-(R) Cha-Pro-(S) Itp(Ts) :ää, 0,38 g (2,74 mmol) K2CC>3:a otettiin 15 ml: aan asetoni triiliä. Lisättiin 0,39 g (1,65 mmol) bentsyylibromiasetaattia, ja seosta se- • ' * ! 25 koitettiin 2 tunnin ajan 50 °C:ssa. Liuotin haihdutettiin, «t· · ϊ ,*. minkä jälkeen flash-kromatografoitiin käyttämällä etyy- • •Ϊ · .···. liasetaatti/metanolia 95/5 eluenttina, jolloin saatiin noin « · * 530 mg haluttua tuotetta.
• · *·** 30 FAB-MS: m/z «= 695 (M++l) ··· ' • · • * ·:··: (iv) HOOC-CH2-(R) Cha-Pro-(S) Itp x 2 HC1 0,53 g (0,76 mmol) BnOOC-CH2-(R) Cha-Pro-(S) Itp (Ts) :ää liuo-tettiin 15 ml:aan THF:ää. Kolviin tiivistettiin NH3(g):tä, ja • t · • ·* 35 lisättiin Na:ta (m) . Reaktio sammutettiin 30 min kuluttua * * etikkahapolla, ja NH3 ja THF haihdutettiin. Jäännös pakaste- kuivattiin vedestä, ja raakatuote puhdistettiin RPLC-. llä 119812 171 (asetonitriili/O, IM HOAc 15/85), jolloin saatiin 0,25 g (61 %) haluttua tuotetta vesipohjaisesta HCl-.stä pakastekuivaa-misen jälkeen.
5 'H-NMR (500,13 MHz, D20) ; δ 0,9 - 2,09 (päällekkäiset m, 20H) , 2,22 - 2,35 (m, 1H) , 3,2 - 3,36 (m, 4H) , 3,44 - 3,62 (päällekkäiset m, 2H) , 3,7 - 3,8 (m, 1H) , 3,87 - 3,99 (m, 2H) , 4,33 - 4,48 (päällekkäiset m, 2H).
10 13C-NMR (500,13 MHz, D20); karbonyyli- ja guanidiinihiilet: δ 154,3, 168,1, 169,0 ja 174,2
Esimerkki 82 H-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig x 2 HC1 15 (i) Boc-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig(z) 174 mg (0,471 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH:ta (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 229 mg (1,87 mmol) DMAP:tä, 130 mg (0,471 mmol) H-(R,S)Nig(Z):aa (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) sekoitettiin 2 ml:ssa CH2Cl2:ta, ja lisättiin 117 20 mg (0,61 mmol) EDCrtä, ja seosta sekoitettiin neljän päivän ajan. Seos laimennettiin CH2Cl2:lla ja pestiin vedellä, kah- • · \V desti 0,3 M KHS04-liuoksella ja kerran suolaliuoksella. Or- • · !/.· gaaninen kerros kuivattiin (Na2S04) , suodatettiin ja haihdu- iV; tettiin, ja raakatuote puhdistettiin kahdesti flash-kromato- • ;1· 25 grafiällä käyttämällä CH2Cl2/MeOH 95/5 :ttä eluenttina ensim- ··· · ; mäisellä kerralla ja CH2Cl2/MeOH 97/3:a eluenttina toisella .···, kerralla, jolloin saatiin 0,104 g (35 %) otsikkoyhdistettä.
• 1 · . . MS m/z 627 (M++l) • « · ft 1 · · 30 * ft1 (ii) H-(R) Cha-Pro-(R, S) Nig x 2 HC1 *;··· 10 mg (0,016 mmol) Boc-(R) Cha-Pro-(R, S)Nig (Z) :aa liuotettiin ·.·.$ 15 ml: aan etyyliasetaattia, joka oli kyllästetty HCl:llä.
Seoksen annettiin seistä puoli tuntia. Seos haihdutettiin, ja • · · • ·1 35 jäännös liuotettiin 6 ml:aan etanolia, ja lisättiin 8 mg 5- * 1 %:ista Pd/C:tä (5-%) ja 0,1 ml 1 M HCl-liuosta, ja seosta hydrogenoitiin 1,5 tuntia ilmakehän paineessa. Kun oli suo- 119812 172 datettu hyflon läpi ja liuotin haihdutettu, saatiin 4 mg otsikkoyhdistettä tuote.
Hi-NMR (300 MHz, D20) : δ 0,9 - 1,58 (m, 6H) , 1,58 - 2,45 (m, 5 13H) , 2,65 (m, 1H) , 3,19 (m, 1H) , 3,34 (d, 2H) , 3,4 - 3,73 (m, 4H), 3,82 (m, 1H), 4,34 - 4,49 (m, 2H).
13C-NMR (75 MHz, D20): karbonyyli- ja guanidiinihiilet: 5 155,1, 169,9 ja 174,8.
10
Esimerkki 83 H-(R)Pro-Phe-Pab x 2 HC1 (i) Boc-(R)Pro-Phe-Pab(Z)
Seokseen, jossa oli 1,2 g (3,31 mmol) Boc-(R)Pro-Phe-OH:ta 15 (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) ja 1,70 g (13,91 mmol) DMAP:tä 40 ml:ssa CH3CN:ää huoneenlämpötilassa, lisättiin 0,98 g (3,35 mmol) H-Pab(Z):aa (Katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) liuotettuna 1 ml:aan DMF:ää. Kun oli sekoitettu 2 tunnin ajan, reaktioseos jäähdytettiin -18 °C:seen, ja 20 lisättiin erissä 0,66 g (3,48 mmol) EDC:tä, ja reaktio jätettiin huoneenlämpötilaan yön yli. Liuotin haihdutettiin, • · V.: ja jäännös liuotettiin 100 ml:aan EtOAcrtä, ja pestiin 1 x 30 :/.! ml:11a vettä, 3 x 30 ml:11a 0,3 M KHS04:ää, 1 x 30 ml:11a iV: Na2C03:a, 1 x 30 ml :11a vettä, ja kuivattiin. Liuotin • ·*· 25 haihdutettiin, minkä jälkeen f lash-kromatografoitiin ··« · ; käyttämällä CH2Cl2/MeOH:ta (95/5) eluenttina, jolloin saatiin .···* 0,691 g (38 %) otsikkoyhdistettä.
Λ · « * .. (ii) H-(R)Pro-Phe-Pab(Z) • · · 30 0,673 g Boc-(R) Pro-Phe-Pab(Z) :aa liuotettiin 30 ml:aan EtO- • ’ * *·;·* Ac: tä, ja liuosta kyllästettiin muutaman minuutin ajan *:·*: HCl(g):llä (liuoksesta saostui valkoista kiinteää ainetta).
·...$ Liuotin ja ylimääräinen HC1 haihdutettiin, ja jäännökseen lisättiin 60 ml EtOAc:tä, ja orgaaninen faasi pestiin 2 x 20 t · · t ·* 35 ml:11a 2 M NaOH:ta. Pesuvesi uutettiin 1 x 25 ml:11a EtOAc:- * * tä, joka yhdistettiin toisen EtOAc-faasin kanssa, ja yhdis tetty orgaaninen faasi pestiin vedellä, kuivattiin ja haih- 119812 173 dutettiin, jolloin saatiin 560 mg (98 %) haluttua tuotetta.
XH-NMR (500 MHz, CDC13) : δ 1,5 - 1,74 (m, 3H) , 1,98 - 2,05 (m, 1H), 2,78 - 2,85 (m, 1H), 2,90 - 2,96 (m, 1H), 3,0 - 3,2 5 (ABX-järjestelmä, jonka keskus oli kohdassa 3,1, 2H), 3,62 (dd, 1H) , 4,3 - 4,45 (ABX-järjestelmä, jonka keskus oli kohdassa 4,37, 2H) , 4,58 (q, 1H) , 5,22 (s, 2H) , 6,96 (bt, 1H), 7,1 - 7,4 (m, 10H), 7,46 (d, 2H), 7,76 (d, 2H), 8,12 (d, 1H) .
10 (iii) H-(R)Pro-Phe-Pab x 2 HC1 200 mg H-(R) Pro-Phe-Pab(Z) :aa liuotettiin 10 mlraan 95-%-.ista EtOH:ta ja 2 ml:aan vettä, ja seosta hydrogenoitiin 5 tuntia 5-%:isella Pd/C:llä ilmakehän paineessa. Katalysaattori 15 suodatettiin, ja lisättiin 1 ml 1 M HCl:ää, minkä jälkeen haihdutettiin ja pakastekuivattiin vedestä, jolloin saatiin otsikkoyhdiste saannolla 88 %.
XH-NMR (500 MHz, CD30D) : δ 1,51 - 1,59 (m, 1H) , 1,69 - 1,80 20 (m, 1H), 1,87 - 1,97 (m, 1H), 2,19 - 2,29 (m, 1H), 2,90 (dd, 1H), 3,20 - 3,33 (m, 3H, osaksi liuotinhuipun peitossa), 4,27 • * V.· (m, 1H) , 4,43 - 4,54 (AB-järjestelmä, jonka keskus oli kohdassa 4,48, 2H) , 4,75 - 4,81 (m, 1H) , 4,87 (s, 2H) , 7,2 - 7,3 (m, 5H) , 7,45 (d, 2H) , 7,75 (d, 2H) .
• t : .·. 25 • · · *·· · : .*, 13C-NMR (125 MHz, D20) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ i66,7,170,1 ja 173,4.
» · · , . Esimerkki 84 • · * *·*·* 30 HOOC-CH2-(R) Pro-Phe-Pab x2HCl ··« * ' ' :·*·’* (i) BnOOC-CH2-(R)Pro-Phe-Pab(Z) •j·*· Suspensioon, jossa oli 244 mg (0,463 mmol) H-(R) Pro-Phe- ·...· Pab(Z) :aa (katso esimerkkiä 83) ja 159,9 mg (1,157 mmol) K2C03: a 8 ml:ssa DMF/CH3CN:ää (5/3), lisättiin 127,2 mg (0,555 • · · • ·| 35 mmol) bentsyylibromiasetaattia liuotettuna 2 ml-.aan DMF:ää, * * ja seosta sekoitettiin 1,5 tunnin ajan 60 °C:ssa ja huoneenlämpötilassa yön yli. Liuotin haihdutettiin, ja jään- 119812 174 nös liuotettiin 50 ml:aan EtOAc:tä, pestiin 2 x 20 ml:11a vettä ja kuivattiin (Na2S04) . Liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen flash-kromatografoitiin käyttäen CH2Cl2/MeOH:ta (9/1) eluenttina, jolloin saatiin 176 mg (56 %) otsikkoyhdistettä 5 valkoisena kiinteänä aineena.
^-NMR (300 MHz), CDC13) : δ 1,45 - 1,80 (m, 3H) , 2,06 (m, 1H) , 2,54 (m, 1H) , 2,92 - 3,28 (m, 6H), 4,3 - 4,5 (ABX-jär jestelmä, jonka keskus oli kohdassa δ = 4,4, 2H), 4,60 (dd, 10 1H) , 5,10 (näennäinen s, 2H) , 5,2 (näennäinen s, 2H) , 7,1 - 7,4 (m, 15H), 7,43 (d, 2H), 7,75 (d, 2H), 7,932 (d, 1H).
(ii) HOOC-CH2-(R)Pro-Phe-Pab x 2 HC1 170 mg (0,252 mmol) Bn00C-CH2- (R) Pro-Phe-Pab (Z) :aa liuotet-15 tiin 12 ml:aan EtOH/vettä (5/1), ja hydrogenoitiin 4,5 tunnin ajan 5-%:isella Pd/C:llä ilmakehän paineessa. Katalysaattori suodatettiin pois, liuotin haihdutettiin, ja jäännös pakastekuivattiin HCl(aq):sta, jolloin saatiin ot-sikkoyhdiste.
20 1H-NMR (500 MHz, CD30D) : δ 1,62 (m, 1H) , 1,82 (m, 1H) , 2,08 « · \V (m, 1H) , 2,38 (m, 1H) , 2,90 (dd, 1H) , 3,25 - 3,35 (m, 2H) , i,*.: osaksi liuotinhuipun peittämä), 3,80 (m, 1H) , 4,08 - 4,19 :V: (AB-järjestelmä, jonka keskus oli kohdassa δ = 4,19, 2H), J ·*· 25 4,39 (m, 1H) , 4,45 - 4,58 (AB-järjestelmä, jonka keskus oli • · · · : kohdassa δ = 4,50, 2H) , 4,80 (m, 1H) , 7,20 - 7,35 (m, 5H) , !*··! 7,45 (d, 2H) , 7,75 (d, 2H) .
• · · « 13C-NMR (125 MHz, D20) : amidiini- ja karbonyylihiilet: δ • · · 30 166,8, 169,1, 169,5 ja 173,2.
• · • · ·*· *:**: Esimerkki 85 H- (R) Phe-Phe-Pab (i) Boc-(R) Phe-Phe-Pab(Z) • · · • \ 35 Boc-(R)Phe-Phe-OH:ta (16,4 mmol) (katso kohtaa Lähtöaineiden * valmistus), Pab(Z)-HC1:ää (18,0 mmol) ja 4-dimetyyliaminopy- ridiiniä (24,6 mmol) liuotettiin 50 ml:aan asetonitriiliä.
119812 175
Liuos jäähdytettiin jääveddn lämpötilaan, ja lisättiin l-(3-dimetyyliaminopropyyli)-3-etyylikarbodi-imidihydrokloridia (21,3 mmol). Jäähdytyshaude poistettiin, ja reaktioseosta sekoitettiin yön yli. Sitten liuotin haihdutettiin alenne-5 tussa paineessa, jäännös liuotettiin 50 ml:aan etyyliasetaattia, ja tulokseksi saatu liuos uutettiin 50 ml:11a vettä. Boc-(R)Phe-Phe-Pab(Z), joka saostui kaksifaasisesta seoksesta, suodatettiin ja pestiin vedellä, jolloin saatiin tyhjössä 45 °C:ssa 24 tunnin ajan kuivaamisen jälkeen 8,7 g 10 (78 %).
Hi-NMR (200 MHz, d-CHCl3 ja CD3OD) ; δ 8,35 - 7,00 (m, 19H) , 4,63 (t, 1H) , 4,3 - 4,1 (m, 1H) , 3,40 - 2,70 (m, 6H) , 1,30 (s, 9H) .
15 (ii) H-(R)Phe-Phe-Pab(Z)
Boc-(R)Phe-Phe-Pab(Z):aa (10,3 mmol) suspendoitiin 70 ml:aan etyyliasetaattia, ja lisättiin 31 ml 3,3 M etyyliasetaat-ti/HCl:ää. Suspensiota sekoitettiin tunnin ajan, minkä jäl-20 keen H-(R)Phe-Phe-Pab(Z):n hydrokloridisuola suodatettiin pois ja pestiin useilla erillä etyyliasetaattia. Suola liuo- « · *,*.· tettiin seokseen, jossa oli 50 ml metyleenikloridia, 50 ml 1 • · *.*·: M kalsiumkarbonaattia ja noin 5 ml etanolia. Orgaaninen ker- :V: ros kerättiin, ja liuotin poistettiin alennetussa paineessa, j 25 jolloin saatiin 5,0 g H-(R) Phe-Phe-Pab(Z) :aa (84 %) .
• M · • · • · e • · · 1 H-NMR (200 MHz, d6-DMSO) ; δ 9,1 (s, 2H) , 8,59 (m, 1H) , 8,1 • * · (m, 1H), 7,90 (d, 2H), 7,4 - 7,0 (m, 17H), 5,09 (s, 2H), 4,58 . . (m, 1H), 4,31 (m, 2H), 3,1 - 2,7 (m, 4H).
• · · • · · 30 • · "·;·* (iii) H-(R)Phe-Phe-Pab(Z) :aa (0,42 mmol) liuotettiin 10 *:·*: ml:aan tetrahydrofuraania ja 1 ml:aan vettä. Liuokseen li- ····* sättiin Pd/C:tä (42 mg), ja seosta hydrogenoitiin 2 päivän ajan vetypaineessa 310 kPa (45 psi) Parrin ravistelulaitees- *t 35 sa. Hydrogenolyysin edettyä loppuun seos laimennettiin me-tanolilla, ja katalysaattori suodatettiin pois. Liuottimet haihdutettiin, jolloin saatiin raakaa H-(R)Phe-Phe-Pab:tä, 119812 176 joka puhdistettiin kromatografoimalla neutraalilla alumiinioksidilla (70-230 Mesh) eluoiden metyleenikloridi/metano-li/ammoniumhydroksidilla (80:20:2), jolloin saatiin 76 mg otsikkoyhdistettä (41 %).
5 1H-NMR (200 MHz, d6-DMS0) ; δ 7,61 (d, 2H) , 7,4 - 7,0 (m, 12H), 4,64 (M, 1H), 4,44 (M, 2H), 4,13 (t, 1H), 3,1 - 2,8 (m, 4H) .
10 Esimerkki 86 HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab (i) MeOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z) H-(R)Phe-Phe-Pab(Z):aa (0,87 mmol) (katso esimerkkiä 85 (ii)) liuotettiin 10 ml:aan tetrahydrofuraania. Liuos jäähdytettiin 15 jäävesihauteella, ja lisättiin trietyyliamiinia (1,73 mmol), ja sen jälkeen metyylioksalyylikloridia (0,95 mmol). Jäähdytyshaude poistettiin, ja reaktioseosta sekoitettiin 18 tunnin ajan ympäristön lämpötilassa. Reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla, ja uutettiin vedellä. Or-20 gaaninen faasi kerättiin ja liuotin poistettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 0,45 g MeOOC-CO-(R)Phe-Phe- • · ·.·,* Pab(Z) :aa (78 %) , jota käytettiin seuraavassa vaiheessa • * !.*·· enempää puhdistamatta. TSP-MS havaittu m/z 664 (laskettu MH+:lle (C37H38N5O7) 664).
• · • ·*· 25 f · · ··· · : (ii) HOOC-CO-(R) Phe-Phe-Pab(Z)
MeOOC-CO-(R) Phe-Phe-Pab(Z) :aa (0,68 mmol) liuotettiin 4 • · · ml:aan tetrahydrofuraania ja 2 ml:aan vettä. Lisättiin li-tiumhydroksidia (2,6 mmol), ja reaktioseosta suekoitetiin 1,5 • * * ).;* 30 tuntia huoneenlämpötilassa. Hydrolyysin edettyä loppuun • · *·;·" reaktioseos laimennettiin 25 ml :11a vettä, ja säädettiin *:**: happamaan pH-arvoon lisäämällä 0,5 ml etikkahappoa. Sakka ·;··· suodatettiin, ja pestiin useilla erillä vettä, jolloin saa- tiin 0,40 g raakaa HOOC-CO- (R) Phe-Phe-Pab (Z) :aa kun oli • · · ' \ 35 kuivattu tyhjössä 45 °C:ssa 24 tunnin ajan. Raakatuote sus- pendoitiin 10 ml:aan etanoliia ja 1 ml:aan vettä. Liuos saatettiin refluksoitumaan, ja liukenematon otsikkoyhdiste 119812 177 suodatettiin pois, jolloin saatiin 0,23 g HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z) :aa (41 % kahden vaiheen yli) . ^-NMR (200 MHz, d6- DMSO); δ 8,62 (m, 2H), 8,41 (d, 1H) , 7,89 (d, 2H) , 7,4 - 6,9 (m, 17H), 5,10 (s, 2H), 4,54 (m, 2H), 4,34 (m, 2H), 3,2 - 2,6 5 (m, 4H).
(iii) HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab HOOC-CO-(R)Phe-Phe-Pab(Z):aa (0,20 mmol) suspendoitiin 20 ml:aan tetrahydrofuraania ja 5 ml:aan vettä. Liuokseen li-10 sättiin Pd/C:tä (52 mg), ja seosta hydrogenoitiin 2 päivän ajan vetypaineessa 310 kPa (45 psi) Parrin ravistelulaitees-sa. Hydrogenolyysin edettyä loppuun seos laimennettiin 40 ml:11a metanolia, ja katalysaattori suodatettiin pois. Liuottimet haihdutettiin, jolloin saatiin 50 mg otsikkoyhdis-15 tettä (49 %) . 1H-NMR (200 MHz, d6-DMS0) ; δ 9,2 (s), 8,78 (d) , 8,60 (m), 7,91 (m), 7,79 (d, 2H), 7,35 - 6,8 (m, 12H), 4,6 - 4,0 (m, 4H), 3,0 - 2,6 (m, 4H).
Esimerkki 87 20 HOOC-CH2- (R) Phe-Phe-Pab (i) BnOOC-CH2-(R)Phe-Phe-Pab(Z) • · V.: H-(R)Phe-Phe-Pab(Z):aa (0,87 mmol) (katso esimerkkiä 85 (ii)) • · !,*·· ja kaliumkarbonaattia (2,6 mmol) suspendoitiin 10 ml:aan :V: asetonitriiliä. Seokseen lisättiin jodibentsyyliasetaattia • ;*· 25 (0,95 mmol), ja liuos kuumennettiin 30 °C:seen ja • *· · ϊ sejkoitettiin tässä lämpötilassa 2päivän ajan. Alkyloinnin 1*· · edettyä loppuun liuotin poistettiin, ja jäännös liuotettiin « » · 10 ml:aan etyyliasetaattia. Liuos uutettiin nopeasti 10 .. ml:11a vettä, ja otsikkoyhdiste saostui kerätystä orgaani- • 1 · '£* 30 sesta faasista. BnOOC-CH2-(R) Phe-Phe-Pab(Z) suodatettiin pois φ · *···' ja kuivattiin tyhjössä 45 °C:ssa 24 tunnin ajan, jolloin
*:··: saatiin 177 mg BnOOC-CH2- (R) Phe-Phe-Pab (Z) :aa (28 %) . ^-NMR
·;··· (200 MHz, CDCI3) ; δ 7,79 (d, 2H) , 7,5 - 7,1 (m, 22H) , 6,55 (t, 1H) , 5,21 (s, 2H) , 5,03 (s, 2H) , 4,64 (m, 1H) , 4,41 (m Φ · · : ·] 35 2H) , 3,3-2,6 (m, 7H) .
• · (ii) BnOOC-CH2-(R) Phe-Phe-Pab (Z) 119812 178
BnOOC-CH2-(R) Phe-Phe-Pab(Z) :aa (0,32 mmol) suspendoitiin 30 ml:aan tetrahydrofuraania ja 3 ml:aan vettä. Liuokseen lisättiin Pd/C:tä (41 mg), ja seosta hydrogenoitiin 2 päivän ajan vetypaineessa 310 kPa (45 psi) Parrin ravistelulaitees-5 sa. Hydrogenolyysin edettyä loppuun seos laimennettiin 40 ml:11a vettä, ja katalysaattori suodatettiin pois. Liuottimet haihdutettiin, jolloin saatiin 95 mg otsikkoyhdistettä (59-%) . TSP-MS saatu m/z 502 (laskettu MH+: lie (C28H32N504) 502).
10 Esimerkki 88 H-(R)Cha-Pro-Mig (i) Boc-(R)Cha-Pro-Mig(Z)
Sekoitettuun seokseen, jossa oli 0,344 g (0,93 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH:ta (katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), 15 0,245 g (0,93 mmol) H-Mig(Z):aa (katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus) ja 0,227 g (1,86 mmol) DMAP:tä 10 ml:ssa CH3CN:ää, lisättiin 0,232 g (1,21 mmol) EDC:tä -10 °C:ssa. Reaktioseoksen annettiin saavuttaa huoneenlämpötilan, ja annettiin olla 5 min ajan. CH3CN haihdutettiin, ja jäännös 20 liuotettiin EtOAc:hen ja pestiin H20:lla, NaHC03:lla (aq) ja suolaliuoksella. Orgaaninen kerros kuivattiin Na2S04:llä ja • · haihdutettiin. Raakatuote puhdistettiin f lash-kromatogra- « ϊ,*·· f iällä käyttämällä eluenttina gradienttia EtOAc/MeOH, 95/5 - 90/10, jolloin saatiin 0,340 g (60 %) otsikkoyhdistettä.
: 25 ··* · : (ii) H-(R) Cha-Pro-Mig(Z) ,··*. 0,34 g (0,55 mmol) Boc-(R) Cha-Pro-Mig(Z) :aa liuotettiin 8 • · · ml:aan EtOAcrtä, joka oli kyllästetty HCl(g):llä, ja sekoi- . . tettiin 10 min ajan huoneenlämpötilassa. Lisättiin tipoittain • ♦ ♦ 30 10 ml KOH:n (aq) kylläsitä liuosta. Kerrokset erotettiin, ja • · *···* vesifaasi uutettiin 3x8 ml :11a EtOAc:tä. Orgaaniset ·;·*: kerrokset yhdistettiin, pestiin suolaliuoksella, kuivattiin •j··· NaS04:llä ja haihdutettiin, jolloin saatiin 0,286 g (100 %) otsikkoyhdistettä.
• · · : ·* 35 * * (iii) H-(R)Cha-Pro-Mig 0,050 g (0,132 mmol) H-(R)Cha-Pro-Mig(Z):aa liuotettiin 3 119812 179 ml:aan MeOH:ta ja hydrogenoitiin 10-%:isella Pd/C:llä ilmakehän paineessa yön yli. Liuos suodatettiin seliitin läpi ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 0,040 g (80 %) otsik-koyhdistettä.
5 1H-NMR (500 MHz, MeOD) : δ 0,92 - 1,02 (m, 2H) , 1,18 - 1,47 (m, 6H) , 1,66 - 1,73 (m, 4H) , 1,85 - 2,04 (m, 4H) , 2,17 -2,22 (m, 1H), 2,95 - 2,98 (m, 1H), 3,12 - 3,16 (m, 1H),3,47 - 3,55 (m, 2H), 3,62 - 3,66 (m, 1H), 3,75 - 3,78 (m, 1H), 3,85 10 - 3,89 (m, 1H), 4,05 - 4,12 (m, 3H), 4,34 - 4,37 (m, 1H).
Signaalit vähäisemmästä rotameeristä näkyvät kohdassa: δ 3,4, 3,7, 4,13 - 4,16, 4,3.
15 MS m/z 379 (M++l)
Esimerkki 89 H-(R)Cha-Pro-Dig (i) Boc-(R)Cha-Pro-Dig(Z) 20 Sekoitettuun seokseen, jossa oli 0,280 g (0,76 mmol) Boc-(R)Cha-Pro-OH:ta (katso kohtaa Lähtöaineiden valmistus), • · 0,210 g (0,76 mmol) H-Dig(Z):aa (katso kohtaa Lähtöaineiden v-j valmistus) ja 0,186 g (1,52 mmol) DMAP:tä 8 ml:ssa CH3CN:ää, :V: lisättiin 0,189 g (0,99 mmol) EDC:tä -10 °C:ssa. Reaktio- • 25 seoksen annettiin saavuttaa huoneenlämpötilan ja annettiin ··♦ ♦ i seistä 4 päivää. CH3CN haihdutettiin, ja jäännös liuotettiin ««« ·
EtOAc:hen ja pestiin H20:lla, NaHC03:lla (aq) ja suolaliuok- • · · sella. Orgaaninen kerros kuivattiin Na2S04:llä ja haihdutet- ,. tiin. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä käyt- • · · 30 täen eluenttina gradienttia EtOAc/MeOH, 95/5 - 90/10, jolloin • * **y* saatiin 0,210 g (44 %) otsikkoyhdistettä.
• · ·;··· (ii) H-(R) Cha-Pro-Dig(Z) 0,210 g (0,33 mmol) Boc- (R) Cha-Pro-Dig(Z) :aa liuotettiin 8 • 4 * * ·] 35 ml:aan EtOAc:tä, joka oli kyllästetty HCl(g):llä, ja sekoi- * * tettiin 10 min ajan huoneenlämpötilassa. Lisättiin tipoittain 8 ml KOH:n kylläistä vesiliuosta. Kerrokset erotettiin, ja 119812 180 vesifaasi uutettiin 3x8 ml:11a EtOAc:tä. Orgaaniset kerrokset yhdistettiin, pestiin suolaliuoksella, kuivattiin Na2S04:llä ja haihdutettiin, jolloin saatiin 0,146 g (83 %) otsikkoyhdistettä.
5 (iii) H-(R)Cha-Pro-Dig 0,046 g (0,087 mmol) H-(R)Cha-Pro-Dig(Z):aa liuotettiin 3 ml.-aan MeOH:ta, ja hydrogenoitiin 10-%:isella Pd/C:llä ilmakehän paineessa yön yli. Liuos suodatettiin seliitin läpi ja 10 liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 0,040 g (100 %) otsikkoyhdistettä .
^-NMR (500 MHz, MeOD) : δ 0,90 - 1,04 (m, 2H) , 1,10 - 1,47 (m, 6H) , 1,66 - 1,74 (m, 4H) , 1,78 - 2,05 (m, 4H) , 2,13 -15 2,21 (rn, 1H), 2,74 - 2,83 (m, 1H), 2,94 - 2,99 (m, 1H), 3,15 - 3,29 (m, 1H) , 3,44 - 3,57 (m, 2H) , 3,65 - 3,87 (m, 3H) , 4,07 - 4,25 (m, 3H), 4,35 - 4,39 (m, 2H).
Signaalit vähäisemmästä rotameeristä näkyivät kohdassa: δ 20 4,29 - 4,32.
* « !.V MS m/z 393 (M++l) • · • · · • · Φ * * ' : i Esimerkki 90 • · : 25 2-(R) Cha-Aze-Dig • M · • ·*· (i) Boc-(R) Cha-Aze-Dig(Z) ··· ·
Otsikkoyhdiste valmistettiin Boc-(R) Cha-Aze-OH: sta ja H-Dig(Z):sta (katso lähtöaineen valmistusta) Boc-(R)Cha-Pro-Dig(Z):lie tarkoitetulla menettelytavalla saannolla 0,253 g ‘:.Y 30 (54 %) .
• · • m *i**: (ii) H-(R) Cha-Aze-Dig(Z) *···: Otsikkoyhdiste valmistettiin Boc-(R) Cha-Aze-Dig(Z) :sta Boc- (R) Cha-Pro-Dig(Z) : lie tarkoitetulla menettelytavalla saan-** \ 35 nolla 0,210 g (100 %) .
m · (iii) H-(R)Cha-Aze-Dig 119812 181 0,060 g (0,117 mmol) H-(R)Cha-Aze-Dig(Z):aa liuotettiin 3 ml:aan MeOH:ta, ja hydrogenoitiin 10-%:isella Pd/C:llä ilmakehän paineessa yön yli. Liuos suodatettiin seliitin läpi, ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 0,042 g (95 %) 5 otsikkoyhdistettä.
^-NMR (500 MHz, MeOD) : δ 0,91 - 1,02 (m, 2H) , 1,18 - 1,48 (m, 6H) , 1,66 - 1,90 (m, 8H) , 2,15 - 2,17 (m, 1H) , 2,66 - 2,68 (m, 1H), 2,80 - 2,83 (m, 1H), 3,14 - 3,29 (m, 1H), 3,39 10 - 3,44 (m, 1H) , 3,72 - 3,80 (m, 2H) , 4,01 - 4,04 (m, 1H) , 4,14 - 4,23 (m, 2H) , 4,48 - 4,49 (m, 1H) , 4,60 - 4,64 (m, 1H) .
Signaalit vähäisemmästä rotameeristä näkyvät kohdassa: δ 15 2,25, 2,6, 4,3, 4,67.
MS m/z 379 (M++l).
Esimerkkejä farmaseuttisista valmisteista 20 Keksinnön mukainen yhdiste voidaan formuloida oraalisee antoon tarkoitettuihin kiinteisiin annostelumuotoihin, kuten • · V.: paljaiksi tableteiksi, päällystetyiksi tableteiksi tai modi- • · ·.*·· fioidusti vapauttaviksi tableteiksi. Rektaaliseen antoon • · ί.ί,ϊ tarkoitetuiksi nestemäiksiksi tai kiinteiksi-puolikiinteiksi : 25 annos te lumuodoiks i. Lyof ilisoiduksi aineeksi tai nesteiksi *·· * • j*· parenteraaliseen käyttöön tarkoitetuksi emulsioksi tai sus- ··· · pensioksi. Paikalliseen käyttöön tarkoitetuiksi nestemäisik-si, kiinteiksi tai puolikiinteiksi annostelumuotoiksi.
• · • · · • · · 30 Paineistetuiksi aerosoleiksi tai kuivajauheinhalaatiolait- • · "** teiksi oraaliseen tai nasaaliseen inhalaatioon.
• ♦ *:·*: Esimerkki P1
Oraaliseen antoon tarkoitetut tabletit • « · • · * *, 35 Valmistetaan 1 000 tablettia seuraavista valmistusaineista: • «
Aktiivinen yhdiste 100 g 119812 182
Laktoosi 200 g
Polyvinyylipyrrolidoni 30 g
Mikrokiteinen selluloosa 30 g
Magnesiumstearaatti 6 g 5
Aktiivinen ainesosa ja laktoosi sekoitetaan polyvinyylipyr-rolidonin vesiliuoksen kanssa. Seos kuivataan ja jauhetaan rakeiden muodostamiseksi. Sekoitetaan mukaan mikrokiteinen selluloosa ja sitten magnesiumstearaatti. Sitten seos puris-10 tetaan tablettikoneessa, jolloin saadaan 1 000 tablettia, jotka sisältävät kukin 100 mg aktiivista ainesosaa.
Esimerkki P2
Parenteraaliseen antoon tarkoitettu liuos 15 Valmistetaan liuos seuraavista valmistusaineista:
Aktiivinen yhdiste 5 g
Natriumkloridi injektioon 6 g
Natriumhydroksidi pH-arvon säätöön pH-arvoon 5-7 20 Injektioon tarkoitettua vettä 1 000 ml:aan • » *.1.1 Aktiivinen valmistusaine ja natriumkloridi liuotetaan veteen.
• ·.1·· pH säädetään 2 M NaOH:lla pH-arvoon 3 - 9, ja liuos täytetään • · ϊ^ί steriileihin ampulleihin.
• « • · · 25 • l| ώ-' *·· · • ;1· Esimerkki P3 ··· ·
Oraaliseen antoon tarkoitetut tabletit • · 1 1. Aktiivinen yhdiste 150 g .. 2. Natriumaluminiumsilikaatti 20 g M 30 3. Parafiini 120 g * · ’1;** 4. Mikrokiteinen selluloosa 20 g *:**: 5. Hydroksipropyyliselluloosa 5 g *:·1: 6. Natriumstearyylifumaraatti 3 g « *· · • · · • · * · · 119812 183 1-4 sekoitetaan, ja lisätään kohdan 5 vesiliuos. Seos kuivataan ja jauhetaan, ja 6 sekoitetaan mukaan. Sitten seos puristetaan tablettikoneella.
5 Esimerkki B6
Inhalaatioj auhe
Aktiivinen yhdiste mikronisoidaan suihkumyllyssä inhalaatioon sopivaan partikkelikokoon (massahalkaisija <4 pm) . 100 mg mikronisoitua jauhetta täytetään jauheelle tarkoitettuun 10 moniannosinhalaatiolaitteeseen (Turbohaler®). Inhalaatiolaite on varustettu annosteluyksiköllä, joka vapauttaa annoksen 1 mg.
Biologia 15 Trombiinihyytymisajän (TT) määrittäminen:
Ihmisen trombiinia (T 6769, Sigma Chem Co) puskuriliuoksessa, pH 7,4, 100 μΐ, ja inhibiittoriliuosta, 100 μΐ, inkuboitiin 1 min ajan. Sitten lisättiin normaalia sitraattipitoista ihmisen plasmapoolia, 100 μΐ, ja mitattiin hyytymisaika 20 automaattisessa laiteessa (KC 10, Amelung).
* *
Hyytymisaika yksikössä [s] piirrettiin estäjän konsentraation • !.*·· funktiona, ja määritettiin interpolaatiolla IC50TT. IC50TT on • 9 ί,ϊ,ϊ estäjän konsentraatio, joka kaksinkertaistaa trombiinihyy- ! ϊ*ϊ 25 tymisajan ihmisen plasmalla.
• · • · · • · · ··· ·
Aktivoidun osittaisen thromboplastiiniajan (APTT) määrittä" minen APTT määritettiin normaalissa ihmisen sitraattikäsitellyssä * i t M 30 plasmapoolissa reagenssilla PTT Automated 5, valmistaja yhtiö • · ·;· Stago. Estäjät lisättiin plasmaan (10 μΐ estäjäliuosta 90 * *"*: pl:aan plasmaa), ja seoksessa määritettiin APTT käyttämällä *!**: hyytymisanalysoijaa KC10 (Amelung) reagenssinvalmistajan ./· ohjeiden mukaan. Hyytymisaika yksikössä [s] piirrettiin • m * *. 35 plasman estäjäkonsentraation funktiona, ja IC50APTT määri tettiin interpolaatiolla.
119812 184 ICsoAPTT määritellään estäjän plasmakonsetnraatioksi, joka kaksinkertaistaa Aktivoidun osittaistromboplastiiniajan.
Trombiiniajän määritys ex vivo 5 Trombiinin esto yhdisteiden oraalisen annon jälkeen tutkittiin tajuissaan olevilla rotilla, jotka oli varustettu kaksi päivää ennen koetta katetrilla verinäytteiden ottoa varten pään valtimosta. Koepäivänä otettiin määrättyinä aikoina yhdisteen annon jälkeen verinäytteitä muoviputkiin, jotka 10 sisälsivät 1 osan natriumsitraattiliuosta (0,13 mol/1) ja 9 osaa verta. Putket sentrifugoitiin verihiutaleköyhän plasman saamiseksi. Plasmaa käytettiin trombiiniajan määritykseen alla kuvatulla tavalla.
15 Sitraattikäsitelty rotan plasma, 100 μΐ, laimennettiin 0,9-%:isella suolaliuoksella, 100 μΐ, ja plasman hyytyminen käynnistettiin lisäämällä ihmisen trombiinia (T 6769, Sigma Chem Co, USA) puskuriliuoksessa, pH 7,4, 100 μΐ. Hyytymisaika mitattiin automaattilaitteessa (KC 10, Amelumg, Saksa).
20
Estovakion Ki määritys plasman kallikreiinille *.V Ki-määritykset tehtiin kromogeenisen substraatin menetelmäl- • · *,**: lä, ja suoritettiin Cobas Bio -sentrifugianalysaattorilla, valmistaja yhtiö Roche (Basel, Sveitsi) . Ihmisen plasman : 25 kallikreiinin jäännösentsyymiaktiivisuuden määritys testiyh- • ·’· disteen eri konsetnraatioiden kanssa inkuboinnin jälkeen ··· « määritettiin kolmella eri substraattikonsentraatiolla, ja • · · * mitattiin optisen absorbanssin muutoksena 405 nm:llä ja 37 . . °C:ssa.
• · 1 • · · 1 30 • « 1 w w t · *·;·1 Ihmisen plasman kallikreiinia (E.C. 3.4.21.34, Chromogenix AB, "**: Mölndal, Ruotsi), 250 μΐ 0,4 nkat/ml puskurissa (0,05 mol/1 *:··· Tris-HCl, pH 7,4, 1 0,15 säädetty NaCl:llä), jossa oli naudan albumiinia 5 g/1 (luettelonumero 810033, ICI Biochemicals * \ 35 Ltd, High Wycombe, Bucks, GB) , inkubointiin 300 s ajan 80 μ1:η kanssa testiyhdisteliuosta 0,15 mol/1 NaCl:ssä, joka sisälsi albumiinia 10 g/1. Tässä vaiheessa lisättiin vielä 10 119812 185 μΐ vettä. Sitten lisättiin 40 μΐ kallikreiinisubstraattia (S-2302, Chromogenix AB, 1,25, 2,0 tai 4,0 mmol/1 vedessä) yhdessä vielä 20 μ1:η kanssa vettä, ja tarkkailtiin absorbanssin muutosta.
5 K± arvioitiin Dixon-kuvioista, ts. kaavioista, joissa oli estäjäkonsentraatio versus 1/(deltaA/min), jossa eri subst-raattikonsentraatioiden arvot muodostavat suoria linjoja, jotka leikkaavat kohdassa x= -Ki.
• · » · · · · • · • · • · ·
• M
* 4 * 4 4 4 4 • * * * · m m • · · • · · 444 * 4 · • · · « · · ·«· · ·· • ft • t · a • · • · · • * · • * ··· • m • · 4 44 * · • 4 · 4 44 * 4 4 4 • · 4 4 1 4 119812 186
Lyhenteet
Ac = asetyyli aq = vesipohjainen
Aze = Atsetidiini-2-karboksyylihappo 5 betaPic = Piperidiini-3-karboksyylihappo Boc = tert-butyylioksikarbonyyli
Boc-Dig(Z) = 3-(N-tert-butyylioksikarbonyyli-aminoetyyli)-1- (N-bentsyylioksikarbonyyliamidi-no)atsetidiini 10 Boc-Mig(Z) = 3-(N-ter-butyylioksikarbonyyli-aminometyyli)-1- (N-bent syy1ioks ikarbonyy1iamidi-no)atsetidiini
Boc-Pig(Z) = 4-(N-tert-butyylioksikarbonyyli-aminometyyli)-1- (N-bentsyy1ioks ikarbonyy1iamidi- 15 no)piperidiini
Boc-Pig(Z)2 = 4-(N-tert-butyylioksikarbonyyli-aminometyyli)- 1-(N,Nl-dibentsyylioksikarbonyy- liamidino)piperidiini
Suolaliuos = kylläinen vesi/NaCl-liuos 20 Bn = bentsyyli , , Bu = butyyli • · * '·*·* Cgl = sykloheksyyliglysiini • · « *. *: Cha = β -sykloheksyylialaniini • · *,·,* CME-CDI = l-sykloheksyyli-3-(2-morfolinoetyyli) karbodi- • · ·,· ί 25 imidimeto-p-tolueenisulfonaatti : DBU = l, 8-diatsabisyklo [5,4.0] undek-7-eeni ;*·*· DCC = disykloheksyylikarbodi-imidi DCU = disykloheksyyliurea DMAP= N,N-dimetyyliaminopyridiini • · 4 30 DMF = dimetyyliformamidi * · *1* DMSO = dimetyylisulfoksidi t '“'ί EDC e 1-(3-dimetyyliaminopropyyli)-3-etyylikarbodi- t *:**: imidihydrokloridi ;·[·. Et = etyyli • · *, 35 EtOAc = etyyliasetaatti * *
EtOH = etanoli Gly = glysiini 119812 187 h = tuntia HC1 = suolahappo Hex = heksyyli HOAc = etikkahappo 5 HOBT = N-hydroksibentsotriatsoli
Hoc = Homosykloheksyylialaniini Hop = Homofenyylialaniini HOSu = N-hydroksisukkinimidi H-Dig(Z) = 3-aminoetyyli-l-(N-bentsyylioksikarbonyyli-10 amidino)atsetidiini H-Dig = 3-aminoetyyli-l-amidino atsetidiini H-(R,S)Hig(Z) = (3RS)-1-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidino)-3- aminoetyylipyrrolidiini H-(R,S)Hig = (3 RS)-1-amidino-3-aminoetyy1ipyrrolidiini 15 H-Hig = 1-amidino-3-aminoetyylipyrrolidiini H-(R,S)Itp(Ts) = (4RS)-1,3-diatsa-2-tosyyli-imino-4-amino- etyylisykloheksaani H-(R,S)Itp = (4RS)-1,3-diatsa-2-imino-4-aminoetyylisyk- loheksaani 20 H-(S)Itp(Ts) = (4S)-1,3-diatsa-2-tosyyli-imino-4-amino- etyylisykloheksaani • · · *·*·' H-(S) Itp = (4S)-1,3-diatsa-2-imino-4-aminoetyyli-syk- * · \**: loheksaani • · *.*,* H-Itp = 1,3-diatsa-2-imino-4-aminoetyylisykloheksaani • : 25 H-Mig(Z) = 3-aminometyyli-l-(N-bentsyylioksikarbonyy- : liamidino) atsetidiini «M · ;*·*· H-Mig = 3-aminometyyli-l-amidinoatsetidiini « H-(R,S)Nig(Z) = (3RS)-1-(N-bentsyylioksikarbonyyliamidino)-3- aminometyylipyrrolidiini • « t !.* 30 H-(R,S)Nig = (3RS)-1-amidino-3-aminometyyli pyrrolidiini S s H-Nig = 1-amidino-3-aminometyylipyrrolidiini ***** H-Pab = l-amidino-4-aminometyylibentseeni *:*·: H-Pab(Z) = 4-aminometyyli-l- (N-bentsyylioksikarbonyy- ··)·. liamidino) bentseeni • · 35 H-Pac s l-amidino-4-aminometyylisykloheksaani H-Pac(Z) = 4-aminometyyli-l-(N-bentsyylioksikarbonyy- liamidino)sykloheksaani 119812 188 H-Pig = 4-aminometyyli-l-amidino piperidiini H-Pig(Z) = 4-aminometyyli-l-(N-bentsyylioksikarbonyy- liamidino)-piperidiini H-Pig(Z)2 = 4-aminometyyli-l-(N,Nl-dibentsyylioksikar- 5 bonyyliamidino)piperidiini H-Rig(Z) = 4-aminoetyyli-l-(N-bentsyylioksikarbonyy- liamidino)piperidiini H-Rig = 4-aminoetyyli-l-N-amidinopiperidiini Me 1 metyyli 10 MeOH = metanoli MPa = mega Pascal MS = mesyyli NDM = N-metyylimorfoliini Pd/C = palladium aktiivihiilellä 15 Pgl = fenyyliglysiini Phe = fenyylialaniini Pic s pipekoliinihappo Pro = proliini RPLC = käänteisfaasi-high performace liquid chromatography 20 Tf = trifluorimetyylisulfonyyli TFA = trifluorietikkahappo V.: THF = te trahydrof uraani • 1 :.1·· Tie = l-karboksi-l,2,3,4-tetrahydroisokinoliini :V: Ts = tosyyli • :1· 25 Vai = väliini ··· · Ϊ .1. Z = bentsyylioksikarbonyyli ··· · ··· • · · • · ·
Etuliitteillä n, s, i ja t on tavalliset merkityksensä: normaali, iso, see ja tert. Aminohappojen stereokemia on (S) *wl1 30 ellei muuta mainita.
f · • · ··· • · * « M · • · · • 1 • · · 119812 189
Lyhenteet (jatkoa, aaltoviivat typpiatomeissa alla olevissa ajankohtaisissa kaavoissa merkitsevät fragmentin sidoksen asemaa.)
^NH
(CH2)n (CH2)„ (CH2)„ ί ί { HN NH1 hnAnh2
Pab (n1l) Piff (n«l) Pac (n1l)
Rig (n-2) / ^nh \E ) Jp)B fa
K ΓΒ n A
;ν; Ί ] Γ:\· N HN NH2 HNT^NH1 ·2 · · ·«»
Itp (n12) Nig (n=l) Mig (n1l)
Hig (n=2) Dig (n12) • a • ♦ 1 a a a • a a· • · • · aaa a • 2 a a a a a • aa a a a a a a a a a a a

Claims (35)

119812
1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen yhdisteen valmistamiseksi, jolla yhdisteellä on yleinen kaava I 5 A1 - A2 - NH - (CH2)n - B I jossa:
10 A1 on kaavan Ha, Hb, Ile tai Ild mukainen CXX T‘ M Jrt A. R’ lla Hb »c ox 0·! X * · • · * # · · .* : Ild · · • * · ··· · • · • * · • · · • · · · 1C* ... -*=> * · · **’ * rakenne fragment ti; • · \V joissa kaavoissa: • * · • · • * ··· ....: 20 k on kokonaisluku 0, 1, 2, 3 tai 4; • · q on kokonaisluku 0, 1, 2 tai 3; • t • · · i *.* R1 on H, alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, tai R11OOC- '·*“ alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiiliatomia, ja on 25 mahdollisesti substituoitu karbonyyliryhmään nähden a-ase-maan, ja a-substituentti on ryhmä R17-(CH2)P-, jossa p on 0, 1 119812 tai 2 ja R17 on metyyli, fenyyli, OH, COOR12, CONHR12, jossa r12 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, ja R11 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia, tai
5 R1 on Ph (4-COOR12)-CH2-, jossa R12 on edellä määritelty, tai r1 on R13-NH-CO-alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiili-atomia ja on mahdollisesti substituoitu karbonyyliin nähden α-asemaan alkyyliryhmällä, jossa on 1-4 hiiliatomia, ja jossa 10 R13 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia tai -CH2COOR12, jossa R12 on edellä määritelty, tai R1 on R12OOC-CH2-OOC-alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiiliatomia ja on mahdollisesti substituoitu karbonyyliin 15 nähden α-asemaan alkyyliryhmällä, jossa on 1-4 hiiliatomia, ja jossa R12 on edellä määritelty, tai R1 on R14S02-, Ph(4-COOR12) -S02-, Ph(3-COOR12) -S02-, Ph(2- COOR12)-S02-, jossa R12 on edellä määritelty ja R14 on alkyy-20 liryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, tai • · • * * * · · • · R1 on -CO-R15, jossa R1S on alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiili-atomia, tai ♦ · · • ♦ • · • · · I1.’ 25 R1 on -CO-OR15, jossa R15 on edellä määritelty, tai • · · • · * • · · · *·· • · · R1 on -CO-(CH2)p-COOR12, jossa R12 on edellä määritelty ja p on kokonaisluku 0, 1 tai 2, tai • · • ♦ · ♦ · · * · O 30 R1 on -CH2PO(OR16)2, -CH2S03H tai -CH2-(5-(1H)-tetratSOlyyli) , jossa R16 on, kussakin tapauksessa muista riippumatta, H, • · metyyli tai etyyli; • · · : R2 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia tai R2100C- *:·*: 35 alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiiliatomia, ja jossa R21 on H tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia; 119812 R3 on alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, ja alkyyli-ryhmässä voi olla tai olla olematta yksi tai useita fluori-atomeja, tai
5 R3 on syklopentyyli-, sykloheksyyli- tai fenyyliryhmä, joka voi olla substituoitu tai substituoimatta alkyyliryhmällä, jossa on 1-4 hiiliatomia, tai R3 on 1-naftyyli- tai 2-naftyyliryhmä, ja k on 0 tai 1, tai 10 R3 on cis- tai trans-dekaliiniryhmä, ja k on 0 tai 1, tai R3 on Si(Me)3 tai CH(R32)2, jossa R32 on sykloheksyyli- tai fenyyliryhmä; 15 R4 on H, alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia, sykloheksyyli- tai fenyyliryhmä; A2 on kaavan lila, Illb tai IIIc mukainen 20 I -Λ V1 2 3 · I (ca8)p 1.:': i- ·«1 ' ♦ · · • · t . . t • ui1 11 II» Hio · • · · • « 2 1,1 rakenne fragmentti, • · 3 joissa kaavoissa: ·:··: 25 *:·1: p on kokonaisluku 0, 1 tai 2; ·.1. m on kokonaisluku 1, 2, 3 tai 4; • · *. Y on metyleeniryhmä, tai Y on etyleeniryhmä, ja tulokseksi saadussa 5-jäsenisessä 30 renkaassa voi olla tai olla olematta yksi tai kaksi 119812 fluoriatomia, hydroksiryhmä tai oksoryhmä 4-asemassa, tai voi olla tai olla olematta tyydyttymätön, tai Y on -CH2-0-, -CH2-S-, -CH2-SO-, heteroatomifunktionaalisuuden 5 ollessa 4-asemassa, tai Y on n-propyleeniryhmä, ja tulokseksi saadussa 6-jäsenisessä renkaassa voi olla tai olla olematta 5-asemassa yksi fluori-atomi, hydroksiryhmä tai oksoryhmä, sisältää kaksi fluorx- 10 atomia toisessa asemista 4 tai 5, tai olla tyydyttymätön asemassa 4 ja 5, tai sisältää 4-asemassa aikyyliryhmän, jossa on 1-4 hiiliatomia, tai Y on -CH2-0-CH2-, -CH2-S-CH2-, -CH2-SO-CH2-, tai 15 Y on - CH2 - CH2 - CH2 - CH2 - ; R3 on alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia; tai 20 R3 on Si (Me) 3-ryhmä; • · • · · • · ♦ • * t .·. : R on H tai alkyyliryhma, jossa on 1-4 hiiliatomia, tai • ·· • · • · • · ♦ • · · R5 on - (CH2)p-C00R51, jossa p on 0, 1 tai 2, ja RS1 on H tai • » · “*.* 25 alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia; • · · · · ··· · ··· • · * ’·* * n on kokonaisluku 0, 1, 2, 3 tai 4; B on kaavan IVa, ivb tai IVc mukainen • · • · · ♦ · # » · ·*** *···* «L· f! V ο Ό V V 1 fv Xe hn^nh2 IVa IVb IVc rakenne f ragment t i 30 119812 joissa kaavoissa: X1, X2 ja X4 ovat CH2, r on 1 ja X3 on CH-C(NH)-NH2 tai CH-NH-C(NH)-NH2; tai 5 X1, X2 ja X4 ovat CH2/ r on 0 tai 1 ja X3 on N-C(NH)-NH2; tai X2 ja X4 ovat CH2, X1 puuttuu, r on 0 ja X3 on N-C(NH)-NH2; tai 10 X1 on NH, X2 on C=NH, X4 on CH2, r on 1 ja X3 on NH; X5 on C(NH) -NH2; ja B on mahdollisesti suojattu yhdellä tai useammalla bentsyyli-15 oksikarbonyyliryhmällä; joko yhdiste sellaisenaan tai sen stereoisomeerit tai fysiologisesti hyväksyttävän suolan muodossa, tunnettu siitä, että: 20 a) (Menetelmä Ia) kytketään N-terminaalisesti suojattu di- • · .·. : peptidi, jolla on kaava (1) , yhdisteen kanssa, jolla on • ·* kaava (2) käyttämällä standardipeptidinkytkentää, joka • · · T esitetään kaaviossa • · · • · · *** * 25 • · • · · • « · »*· * :T: Wi-Ai—-A2-OH 0) • · • · · emt—^ H2N—(OH,),,-—( )}-Q’ (2) • I • ’ • · !*7 W1-A1 -A2-HN—(CHs)n -Q1 • · 119812 jossa A1, A2 ja n on kaavassa X määritellyt, W1 on N-terminaalinen aminosuojaryhmä, kuten tert-butyylioksikarbonyyli ja bentsyylioksikarbonyyli, ja Q1 on -C(NH)~NH2, -C(NW2)-NH-W2, -C(NH) -NH-W2, -NH-C(NH)-NH2, -NH-C (NH)-NH-W2, -N (W2)-C (NH)-NH-5 W2 tai -NH-C(NW2)-NH-W2, jossa W2 on amiinin suojaryhmä kuten tert-butyylioksikarbonyyli tai bentsyylioksikarbonyyli, tai Q1 on -CN, -CO-NH2 tai -CS-NH2, jolloin ryhmä muutetaan seuraavaksi amidinoryhmäksi tai Q1 on NH2 tai NH-W2, jossa W2 on edellä määritelty, jolloin aminoryhmä muutetaan seulo rasvaksi guanidiiniryhmäksi (jolloin saadaan Q1 = -NH-C(NH)-NH2) , W2-ryhmän suojauksenpoiston jälkeen kun Q1 on -NH-W2 (W2:n on oltava tässä tapauksessa W1:een nähden ortogo-naalinen), alalla tunnetuilla menetelmillä, 15 b) (Menetelmä Ib) kytketään N-terminaalisesti suojattu aminohappo, jolla on kaava (3), yhdisteen kanssa, jolla on kaava (2) käyttämällä standardipeptidinkytkentää, joka esitetään kaaviossa 20 • a V-l W-A1-OH (3) • · · • · · • · • · • » I I · * H2N—(CH2)n—^ λ—Q1 (2) a·· a ' • aa • •a • · » * *:.v W1"—A2—HN’ (CH2)n—L f) Q1 a·· ' * a a a a a jossa A2, n, W1 ja Q1 ovat edellä määritellyt, minkä jälkeen * 25 seuraa Wx-ryhmän suojauksenpoisto ja N-terminaalisen amino hapon kytkeminen yhdisteen kanssa, jolla on kaava A1-OH, jossa A on edellä määritelty, suojatussa muodossa, johtaen edellä menetelmässä Ia kuvattuun suojattuun peptidiin, 119812 c) (Menetelmä Ha) kytketään N-terminaali eesti suojattu dipeptidi, jolla on kaava (1) , yhdisteen kanssa, jolla on kaava (4), käyttämällä standardipeptidinkytkentää, joka 5 esitetään kaaviossa W1-Ai A2-OH (1) -Q1 (4) Wl-A’-A»—HN—(CHJn—^ ^-Q1 10 jossa A1, A2, n, W1 ja Q1 ovat edellä määritellyt, ·*·*· 15 • f · ^ • · :*·.· d) (Menetelmä Hb) kytketään N-terminaalisesti suojattu • · aminohappo, jolla on kaava (3) , yhdisteen kanssa, jolla on • · : .*. kaava (4) , käyttämällä standardipeptidinkytkentää, joka esi- • « · • · · * • · tetään kaaviossa * * · ( i 2o • · · • * · W1—Az—OH (3) • · • · · * · · • · H2N—(CH2)„——Q1 W • · , * M · III ftp*·· ....: W1— A2—HN—(CH2)n—/ y—Q1 119812 jossa A2, n, W1 ja Q1 ovat edellä määritellyt, minkä jälkeen seuraa W1-ryhmän suojauksenpoisto ja N-terminaalisen aminohapon kytkeminen yhdisteen kanssa, jolla on kaava A1-OH, jossa A on edellä määritelty, suojatussa muodossa, mikä joh-5 taa edellä menetelmässä Ha kuvattuun suojattuun peptidiin, e) (Menetelmä lila) kytketään N-terminaalisesti suojattu dipeptidi, jolla on kaava (1), yhdisteen kanssa, jolla on kaava (5) , käyttämällä standardipeptidinkytkentää, joka 10 esitetään kaaviossa W1-Ai — A2-OH (1) (CHyr-x* H2N—(CH2)n—·{ }l—Q2 (5) (CH2)r\4 W1--A’-A2— HN—(CH2)„—( N—Q2 V-X* • · f · · • · 9 • · 9 9 9 9 9 9 99 9 9 9 9 9 9 9 *·*.* 15 jossa A , A ja n ovat kaavassa I määritellyt ja r on 0 tai : 1, kun X1, x2 ja X4 ovat CH2, tai r on 0, kun X2 ja X4 ovat CH2 • · ·,· · ja X1 puuttuu, W1 on N-terminaalinen aminosuojaryhmä, kuten tj*i tert-butyylioksikarbonyyli tai bentsyylioksikarbonyyli, ja Q2 on -C(NH)-NH2, -C(NW2)-NH-W2, tai -C(NH) -NH-W2, jossa W2 on 20 amiinin suojaryhmä kuten tert-butyyli-oksikarbonyyli tai ,···. bentsyylioksikarbonyyli, tai Q2 on W2, jolloin iminoryhmä, W2- *·* ryhmän suojauksenpoiston jälkeen (W2:n on tässä tapauksessa * * oltava ortogonaalinen W1;een nähden), substituoidaan seu- *·*" raavaksi ryhmällä -C(NH)-NH2 käyttäen suojaamatonta, N-suo- IV. 25 jattua tai N,N'-disuojattua guanidointireagenssia alalla • · #.##j tunnetuilla menetelmillä, • · 119812 f) (Menetelmä Illb) kytketään N-terminaalisesti suojattu aminohappo, jolla on kaava (3), yhdisteen kanssa, jolla on kaava (5), käyttämällä standardipeptidinkytkentää, joka esitetään kaaviossa 5 W1-A2-OH (3) (CH2)tXx4 H2N—(CH2)n-(5> (CHzvx4 W1'-A1-A2-HN—(CH2)0-( N— Q2 X5-/2 jossa A2, n, r, X1, X2 ja X4, W1 ja Q2 ovat edellä määritellyt, 10 minkä jälkeen seuraa W1-ryhmän suojauksenpoisto ja N-termi- naalisen aminohapon kytkeminen yhdisteen kanssa, jolla on kaava A1-OH, jossa A on edellä määritelty, suojatussa muodos- . . sa, johtaen edellä menetelmässä lila kuvattuun suojattuun * · * ***·[ peptidiin, • · · '· " 15 • * • · · *.*.* g) (Menetelmä IVa) kytketään N-terminaalisesti suojattu · : dipeptidi, jolla on kaava (1) , yhdisteen kanssa, jolla on • * ·,: · kaava (6) , käyttämällä standardipeptidinkytkentää, joka :T: esitetään kaaviossa 20 W1-A1-A*-OH (1) • Φ * • · « · · • · • · ·:*·: H2N (CH2)„- ^ \lH (6) 1r N—w3 • · m * * * W1-A1-A? HN—(CH2)n / NH HN—ά N—W3 119812 jossa A1, A2 ja n on kaavassa I määritellyt, W1 on N-terminaalinen aminosuojaryhmä kuten tert-butyylioksikarbonyyli tai bentsyylioksikarbonyyli ja W3 on H tai aminosuojaryhmä kuten aryylisulfonyyli, bentsyylioksikarbonyyli tai tert-butyyli-5 oksikarbonyyli, h) (Menetelmä IVb) kytketään N-terminaalisesti suojattu aminohappo, jolla on kaava (3) , yhdisteen kanssa, jolla on kaava (6), käyttämällä standardipeptidinkytkentää, joka esi-10 tetään kaaviossa W1-A2-qH (3) H2N—(CH2)n—ί (0) hKm£ ,, N—W3 W-A1-A2-HN— (ΟΗ2)ή—{ \jH HN-<\ N—W8 • * • * · • · · • * :*·.· jossa A2, n, W1 ja W3 ovat edellä määritellyt, minkä jälkeen • · 15 seuraa W1-ryhmän suojauksenpoisto ja N-terminaalisen amino- ***** 1 : .·. hapon kytkeminen yhdisteen kanssa, jolla on kaava A -OH, ; .·. jossa A on edellä määritelty, suojatussa muodossa, johtaen • * · "I.* menetelmässä XVa kuvattuun suojattuun peptidiin, minkä • · · * jälkeen lopulliset yhdisteet voidaan tehdä millä hyvänsä seu- 20 raavista tavoista, käytettyjen Q1- tai Q2-ryhmien luonteesta *·*·* riippuen: suojaryhm(ä/ie)n poisto (kun Q = -C(NH)-NH2, • · · -C(NW2) -NH-W2, -C(NH) -NH-W2, -NH-C (NH)-NH2, -NH-C (NH)-NH-W2, -N(W2) -C(NH) -NH-W2 tai -NH-C(NW2) -NH-W2) , tai i^-ryhmän selektiivinen suojauksenpoisto (esimerkiksi kun Q1 tai Q2 = • ·
25 -C(NW2) -NH-W2, -C(NH)-NH-W2, -NH-C(NH)-NH-W2, -N(W2)-C(NH)-NH- · · ϊ .* W2 tai -NH-C(NW2) -NH-W2 (W2:n on tässä tapauksessa oltava ortogonaalinen W1:een nähden), minkä jälkeen haluttaessa seuraa N-terminaalisen typen alkylointi. 119812
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan patenttivaatimuksessa l määritelty kaavan I mukainen yhdiste, jossa A1 on kaavan Ila tai Hb mukainen rakennefragmentti. 5
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan patenttivaatimuksessa 1 tai 2 määritelty kaavan I mukainen yhdiste, jossa R1 on R^OOC-alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiiliatomia ja R11 on H. 10
4. Patenttivaatimuksen l mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan jossakin patenttivaatimuksista 1-3 määritelty kaavan I mukainen yhdiste, jossa A2 on kaavan lila mukainen rakennefragmentti. 15
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan jossakin patenttivaatimuksista 1-4 määritelty kaavan I mukainen yhdiste, jossa A2 on kaavan Illb mukainen rakennefragmentti. 20
6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu * · · siitä, että valmistetaan jossakin patenttivaatimuksista 1-5 * · · ; .* määritelty kaavan I mukainen yhdiste, jossa B on kaavan IVa • · · /*;* mukainen rakenne f ragmentti, jossa X1, X2 ja X4 ovat CH2, X3 on :·: : 25 CH-C(NH) -Nils, r on 1 ja n on 1. * * * · i I » i • · · * · · V · 7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan jossakin patenttivaatimuksista 1-6 :Y: määritelty kaavan I mukainen yhdiste, jossa B on kaavan IVa 30 mukainen rakenne f ragmentti, jossa X1, X2 ja X4 ovat CH2, X3 on * * * * , N-C(NH)-NH2, r on 0 tai 1 ja n on 1 tai 2. • · « ' * 8. Patenttivaatimuksen l mukainen menetelmä, tunnettu ;***; siitä, että valmistetaan jossakin patenttivaatimuksista 1-7 * · ·;··; 35 määritelty kaavan I mukainen yhdiste, jossa B on kaavan IVb mukainen rakennefragmentti, jossa n on 1. 119812
9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan jossakin patenttivaatimuksista 1-7 määritelty kaavan I mukainen yhdiste, jossa B on kaavan iva mukainen rakenne-elementti, jossa X1 ja X3 ovat NH, X2 on
5 C=NH, X4 on CH2, r on 1 ja n on 2.
10. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan jossakin patenttivaatimuksista 1-7 määritelty kaavan I mukainen yhdiste, jossa B on kaavan IVa 10 mukainen rakenne-elementti, jossa X1 puuttuu, X2 ja X4 ovat CH2, X3 on N-C(NH)~NH2, r on 0 ja n on 1 tai 2.
11. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan patenttivaatimuksessa 1 määritelty 15 kaavan I mukainen yhdiste, jossa n on 1 tai 2, A1 on kaavan Ila mukainen rakennefragmentti, jossa k on 0 tai 1, R1 on R11OOC-alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiiliatomia, R2 on H, R3 on sykloheksyyliryhmä, A2 on kaavan lila mukainen rakennefragmentti, jossa Y on metyleeniryhmä, etyleeniryhmä, 20 tai n-propyleeniryhmä, ja tulokseksi saadussa 6-jäsenisessä . . renkaassa voi olla tai olla olematta 4-asemassa alkyyliryhmä, • · * *;*\ jossa on 1-4 hiiliatomia, R5 on H, B on kaavan IVa mukainen "· rakennefragmentti, jossa X1, X2 ja X4 ovat CH2 ja X3 on CH- :.V C(NH)-NH2 ja r on 1, tai X1, X2 ja X4 ovat CH2, X3 on N-C(NH)- :,· ; 25 NH2, ja r on O tai 1, tai X1 ja X3 ovat NH, X2 on C=NH, X4 on ·.· · CH2, ja r on l, tai X1 puuttuu, X2 ja X4 ovat CH2, X3 on N- :T: C(NH)-NH2, ja r on 0. •
12. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu • · · • * .···. 30 siitä, että valmistetaan patenttivaatimuksessa 1 määritelty • · *·* kaavan I mukainen yhdiste, jossa n on l, A1 on kaavan Ila *:’*5 mukainen rakennefragmentti, jossa k on 0 tai 1, R1 on R31OOC- alkyyli-, jossa alkyyliryhmässä on 1-4 hiiliatomia, R2 on H, R3 on sykloheksyyliryhmä, A2 on kaavan lila mukainen 35 rakennefragmentti, jossa Y on metyleeniryhmä, etyleeniryhmä, • * tai n-propyleeniryhmä, ja tulokseksi saadussa 6-jäsenisessä renkaassa voi olla tai olla olematta 4-asemassa alkyyliryhmä, 119812 jossa on 1-4 hiiliatomia, R5 on H, B on kaavan IVb mukainen rakennefragmentti.
13. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu 5 siitä, että valmistetaan yhdiste, joka on HOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab HOOOCH2-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab HOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab 10 HOOC-CH2-CH2-(R) Cgl-Pro-Pab (HOOC-CHa) 2- (R) Cgl-Pro-Pab H- (R) Cgl-Pic-Pab HOOC-CHa-(R,S)CH(COOH)-(R)Cgl-Pic-Pab H-(R)Cha-Aze-Pab
15 HOOC-CH2- (R) Cha-Aze-Pab HOOC-CHa-(R,S)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab HOOC-CH2-(RtaiS)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab/a HOOC-CH2-(RtaiS)CH(COOH)-(R)Cha-Aze-Pab/b HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Pab
20 HOOC-CH2-NH-CO-CH2- (R) Cha-Aze-Pab .. H-(R)Cha-Pro-Pab • * * *:'·[ HOOC-CHa- (R) Cha-Pro-Pab HOOC-CH2-(Me) (R) Cha-Pro-Pab v.: HOOC-CH2“CH2~ (R) Cha-Pro-Pab • · * 25 HOOC-CH2-CH2-(Me) (R) Cha-Pro-Pab HOOC-CH2- (RtaiS) CH (COOH) - (R) Cha-Pro-Pab/a :T: H00C-CH2- (RtaiS) CH(COOH) - (R) Cha-Pro-Pab/b HOOC-CH2-NH-CO-CH2- (R) Cha-Pro-Pab EtOOC-CH2-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pab .···. 30 Ph (4-COOH)-SO2-(R) Cha-Pro-Pab • · " H-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CHa- (R) Cha-Pic-Pab * HOOC-CH2- (RtaiS) CH (COOH) - (R) Cha-Pic-Pab/a HOOC-CH2- (RtaiS) CH (COOH) - (R) Cha-Pic-Pab/b 35 HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pic-Pab Φ * HOOC-CO-(R)Cha-Pic-Pab HOOC-CH2-CO- (R) Cha-Pic-Pab 119812 Me-OOC-CH2-CO- (R) Cha-Pic-Pab H2N-CO-CH2- (R) Cha-Pic-Pab Boc-(R)Cha-Pic-Pab Ac-(R)Cha-Pic-Pab
5 Me-S02-(R)Cha-Pic-Pab H-(R)Cha-(R,S)betaPic-Pab HOOC-CH2-CH2- (r) Cha- (R, s) betaPic-Pab HOOC-CHa- (R) Cha-Val-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Val-Pab
10 H-(R)Hoc-Aze-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Hoc-Aze-Pab HOOC-CH2- (R,S)CH(COOH) - (R) Hoc-Pro-Pab HOOC-CH2- (R) Hoc-Pic-Pab (HOOC-CH2)2- (R) HOC-Pic-Pab
15 HOOC-CH2- (R)Pro(3- (S)Ph) -Pro-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Pro (3 - (S) Ph) -Pro-Pab HOOC-CH2-CH2- (r) Tic-Pro-Pab HOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Aze-Pig HOOC-CH2-(R) Cgl-Pro-Pig
20 H-(R)Cha-Aze-Pig HOOC-CH2- (R)Cgl-Aze-Pac *:**! H- (R) Cha-Pro-Pac • · · " H- (R) Cgl-ile-Pab :·:·** H- (R) Cgl-Aze-Pab • · :.:: 25 HOOC- (R,S)CH(Me) - (R) cha-Pro-Pab MeOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab :T: EtOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab nBuOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab nHexOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab • · .***. 30 H-(R) Cgl-Pro-Pac HOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pac HOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Pro-Pac HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Pac « HOOC-CH2- (R) Cha-Aze-Pig 35 HOOC-CH2-(R) Cha-Pro-Pig HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pig (HOOC-CH2) 2- (R) Cgl-Pro-Pig • · 119812 HOOC-CH2-CH2 (HOOC-CH2) - (R) Cha-Pro-Pig HOOC-CH2- (R) Cgl-Aze- (R, S) Itp HOOC-CH2- (R) Cha-Aze- (R, S) Itp H-(R)Cha-Pic-(R, S)Itp 5 HOOC-CH2-(R) Cha-Pic-(R,S) Itp H-(R)Cgl-Pro-(R,S)Hig HOOC-CH2- (R) Cgl-Pro- (R, S) Hig H-(R)Cha-Pro-(R,S)Hig H-(R)Cgl-Aze-Rig 10 HOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Rig HOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Rig HOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Rig HOOC-CH2- (R) Cha-Pro- (S) Itp H-(R)Cha-Pro-(R,S)Nig 15 H-(R)Cha-Pro-Mig H-(R)Cha-Pro-Dig H-(R)Cha-Aze-Dig joko sellaisenaan tai sen stereoisomeeri tai fysiologisesti 20 hyväksyttävän suolan muodossa. • · • · · i * t ' *. 14. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu • · · *; " siitä, että valmistetaan yhdiste, joka on t · · • · t • » * · : 25 HOOC-CHa-(R)Cgl-Aze-Pab l.f: HOOC-CH2-CH2- (R)Cha-Aze-Pab :T: HOOC-CH2~ (R) Cha-Pro-Pab HOOC - CH2 - CH2 - (R) Cha - Pro - Pab HOOC-CH2-(R)Cha-Pic-Pab .·*·. 30 HOOC-CH2- (R) Cgl-Pro-Pig *’t EtOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab HOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pac « *;**; HOOC-CHa-(R) Cha-Pro-Pig ·* I • · · • · • · · i * 35 joko sellaisenaan tai sen stereoisomeeri tai fysiologisesti hyväksyttävän suolan muodossa. 119812
15. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, joka on BnOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (Z)
5 BnOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (Z) BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Pro-Pab (Z) (BnOOC-CH2)2- (R) Cgl-Pro-Pab(z) BnOOC - CH2 -(R,S)CH(COOBn)-(R)Cgl-Pic-Pab(Z)
10 BnOOC-CH2- (R) Cha-Aze-Pab (Z) BnOOC - CH2 - (R, S) CH (COOBn) - (R) Cha-Aze-Pab (Z) BnOOC-CH2- (RtaiS)CH (COOBn) - (R) Cha-Aze-Pab (Z) /a BnOOC-CH2- (RtaiS)CH (COOBn) - (R) Cha-Aze-Pab (Z) /b BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Pab (Z)
15 BnOOC - CH2-NH-CO-CH2- (R) Cha-Aze-Pab (Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-(Me)(R)Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2- (Me) (R) Cha-Pro-Pab (Z)
20 BnOOC-CH2- (R, S) CH (COOBn) - (R) Cha-Pro-Pab (Z) . . BnOOC-CH2-NH-CO-CH2-(R) Cha-Pro-Pab (Z) » · · Ph(4- COOH) -S02- (R) Cha-Pro-Pab (Z) *· ** Boc- (R) Cha-Pic-Pab(Z) « · V.1 BnOOC-CH2- (R) Cha-Pic-Pab (Z) · : 25 BnOOC-CH2- (R,S)CH (COOBn) - (R) Cha-Pic-Pab (Z) !.:*· BnOOC-CH2-CH2- (r) Cha-Pic-Pab (z) EtOOC-CO- (R) Cha-Pic-Pab (z) MeOOC - CH2 - CO - (R) Cha-Pic-Pab (Z) H2N-CO-CH2- (R) Cha-Pic-Pab(Z) .**·. 30 Ac-(R) Cha-Pic-Pab (Z) • · Me-S02-(R)Cha-Pic-Pab(Z) BnOOC-CH2- (R) Cha-Val-Pab (Z) BnOOC-CH2-CH2- (R)Cha- (R,S) Val-Pab (Z) BnOOC-CH2-CH2- (R) Hoc-Aze-Pab (Z)
35 BnOOC-CH2- (R, S) CH (COOBn) - (R) Hoc-Pro-Pab (Z) • * BnOOC-CH2-(R)Hoc-Pic-Pab(Z) {BnOOC-CH2) 2- (R) Hoc-Pic-Pab (Z) 119812 BnOOC-CH2-(R) Pro(3-(S)Ph)-Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2- (R)Pro(3- (S) Ph) -Pro-Pab(Z) BnOOC-CH2-CH2- (R) Tic-Pro-Pab(Z) BnOOC- CH2 - CH2 - (R) Cgl - Aze - Pig {Z) 2 5 BnOOC-CH2-(R)Cgl-Pro-Pig(Z)2 BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pac(Z) BnOOC-(R,S)CH(Me)-(R)Cha-Pro-Pab(Z) MeOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (Z) EtOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (Z) 10 nBuOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab (Z) nHexOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (Z) BnOOC-CH2- (R) Cha-Pro-Pac (Z) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cgl-Pro-Pac (Z) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Pac (Z)
15 BnOOC-CH2-(R)Cha-Aze-Pig(Z) BnOOC-CH2 -(R)Cha-Pro-Pig(Z) BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Pro-Pig (Z) (BnOOC-CH2) 2- (R) Cgl-Pro-Pig (Z) BnOOC-CH2-CH2(BnOOC-CH2) - (R) Cha-Pro-Pig (Z)
20 BnOOC-CH2-(R)Cha-Pic-(R,S)Itp(Z) BnOOC-CH2- (R) Cgl-Pro- (R,S)Hig(z) BnOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Rig (Z) • · · *; / BnOOC-CH2- (R)Cha-Pro-Rig(Z) • ft · /*;’ BnOOC-CH2-CH2- (R) Cha-Aze-Rig(Z) * · · :·: : 25 • · :.: I joko sellaisenaan tai sen stereoisomeeri tai fysiologisesti ·· V : hyväksyttävän suolan muodossa, :V* 16. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu • · ·***. 30 siitä, että valmistetaan yhdiste, joka on ··· 1 BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) BnOOC - CH2 - (R) Cha-Pro-Pab (Z) ·*·*; BnOOC-CH2- (R) Cha-Pic-Pab (Z) « ·
35 BnOOC-CH2-(R) Cgl-Pro-Pig (Z) 2 EtOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pac(Z) 119812 BnOOC-CH2-(R)Cha-Pro-Pig(Z) joko sellaisenaan tai sen stereoisomeeri tai fysiologisesti hyväksyttävän suolan muodossa. 5 10 1. Förfarande för framställning av en terapeutiskt användbar förening med den allmänna formeln A1 - A2 - NH - (CH2) n - B I väri:
15 A1 representerar ett strukturfragment med formel Ha, Hb, Ile eller Ild, o;·· (ΡΤ^Ί ν·! K =:=:= i fl Jsc : .·. L R1 ° * : r* Ha Hb He ::: αχ Ö , V • · Ild • · väri: • · I : ·\ 20 k är ett heltal av 0, 1, 2, 3 eller 4; ·ΙΙ·| • · q är ett heltal av 0, 1, 2 eller 3; R1 representerar H, en alkylgrupp med 1-4 kolatomer, eller 119812 R^OOC-alkyl-, där alkylgruppen har 1-4 kolatomer och even-tuellt är substituerad i den position sora är a till karbonylgruppen, och α-substituenten är en grupp R17-(CH2)P-, väri p är 0, 1 eller 2 och R17 är metyl, fenyl, OH, COOR12, 5 CONHR12, där R12 är H eller en alkylgrupp med 1-4 kolatomer, och R11 är H eller en alkylgrupp med 1-6 kolatomer, eller R1 representerar Ph (4-COOR12) -CH2-, där R12 är säsom defi-nierats ovan, eller R1 representerar R13-NH-CO-alkyl -, där alkylgruppen har 1-4 10 kolatomer och eventuellt är substituerad a till karbonylen med en alkylgrupp med 1-4 kolatomer och där R13 är H eller en alkylgrupp med 1-4 kolatomer eller -CH2COOR12, där R12 är säsom definierats ovan, eller R1 representerar R12OOC-CH2-OOC-alkyl -, där alkylgruppen har 15 1-4 kolatomer och eventuellt är subsituerad a till karbonylen med en alkylgrupp med 1-4 kolatomer och där R12 är säsom definierats ovan, eller R1 representerar R14S02-, Ph(4-COOR12) -S02-, Ph(3-COOR12)-S02-, V.: Ph (2 - COOR12) - S02 -, där R12 är säsom definierats ovan och R14 • « :,*·· 20 är en alkylgrupp med 1-4 kolatomer, eller • · • * « φ · · R1 representerar -CO-R15, där R15 är en alkylgrupp med 1-4 * * » **'.* kolatomer, eller » * · • · · ··· « ··· 1 _ _ Λ ϊ.ί i R representerar -CO-OR , där R är säsom definierats ovan, eller • · • * * l.l 25 R1 representerar -CO- (CH2)p-COOR12, där R12 är säsom • · **;· definierats ovan och p är ett heltal av 0, 1 eller 2, eller • · ..... R1 representerar -CH2PO(OR16)2, -CH2S03H eller -CH2- (5-(1H) - . tetrazolyl), där R16, individuellt vid varje tillfälle, är H, ·· · i V metyl eller etyl;
30 R2 representerar H eller en alkylgrupp med 1-4 kolatomer eller R21OOC-alkyl-, där alkylgruppen har 1-4 kolatomer och • · 119812 där R21 är H eller en alkylgrupp med 1-4 kolatomer; R3 representerar en alkylgrupp med 1-4 kolatomer, och alkyl-gruppen eventuellt har en eller flera fluoratomer, eller R3 representerar en cyklopentyl-, cyklohexyl- eller en fenyl-5 grupp som eventuellt är substituerad med en alkylgrupp med 1-4 kolatomer, eller R3 representerar en 1-naftyl- eller 2-naftylgrupp och k är 0 eller 1, eller R3 representerar en cis- eller trans-dekalingrupp och k är 0 10 eller 1, eller R3 representerar Si(Me)3 eller CH(R32)2, där R32 är en cyklohexyl- eller fenylgrupp; R4 representerar H, en alkylgrupp med 1-4 kolatomer, en cyklohexyl- eller en fenylgrupp;
15 A2 representerar ett strukturfragment med formel lila, Illb t t eller IIIc I · · I * # • · | V> -fO-M· ··· ! I (CHj)j *:*· i- .. m. mi> IIIC • » k I k t * · ··· 9 · *···* väri: ·:*·· p är ett heltal av 0, 1 eller 2; 20 m är ett heltal av 1, 2, 3 eller 4; ·· · • · · · • · ....· Y representerar en metylengrupp, eller • · Y representerar en etylengrupp och den erhällna 5-ledade ringen eventuellt har en eller tvä fluoratomer, en hydroxyl- 119812 grupp eller en oxogrupp i position 4, eller eventuellt är omättad, eller Y representerar -~CH2-0-, ~CH2-S-, -CH2-SO-, med heteroatom- funktionaliteten i position 4, eller 5. representerar en n-propylengrupp och den erhällna 6-ledade ringen eventuellt i position 5 har en fluoratom, en hydroxyl-grupp eller en oxogrupp, har tvä fluoratomer i en av positionnerna 4 eller 5 eller är omättad i position 4 och 5, eller i position 4 har en alkylgrupp med 1-4 kolatomer, eller 10. representerar -CH2-0-CH2-, CH2-S-CH2-, -CH2-SO-CH2-, eller Y representerar -CH2 - CH2 - CH2 - CH2 -; R3 representerar en alkylgrupp med 1-4 kolatomer, eller R3 representerar en Si(Me)3-grupp; R5 representerar H eller en alkylgrupp med 1-4 kolatomer, 15 eller R5 representerar - (CH2)P-C00RS1, där p är 0, 1 eller 2 och RS1 • · * • '.#J är H eller en alkylgrupp med 1-4 kolatomer; • * • · • * · *·*·* n är ett heltal av 0, 1, 2, 3 eller 4; » · tew t ♦ · · • · · ··· * • ·*· B representerar ett strukturfragment med formel IVa, IVb 20 eller IVc * · · • a ^v*|^**· X’ (CH2)r rfS ^JTX v ^ > KJ V ·:··: X3 I I ....: X* • · :v. IVa IVb IVc • · φ · • · vari: X1, X2 och X4 representerar CH2, r är 1 och 119812 X3 representerar CH-C(NH)-NH2 eller CH-NH-C(NH)-NH2; eller X1, X2 och X4 representerar CH2, r är 0 eller 1 och X3 representerar N-C(NH)-NH2; eller X2 och X4 representerar CH2, X1 saknas, r är 0 och 5 X3 representerar N-(NH)-NH2; eller X1 representerar NH, X2 representerar C=NH, X4 representerar CH2, r är 1 och X3 representerar NH; X5 representerar C(NH)-NH2; och B är eventuellt skyddad med en eller flera benzyloxikarbonyl-10 grupper; antingen föreningen som sädan eller stereoisomerer darav eller i form av ett fysiologiskt acceptabelt salt, kännetecknat av att förfarandet inbegriper: :*:*· a) (Metod Ia) koppiing av en N-terminalt skyddad dipeptid, Φ · 15 som har formel (1) , med en förening med formel (2) genom • · användning av standarpeptidkoppling, som visas I formeln ·*· I.:*: W-A1 —“A2-OH 0) • · • · · • · · ··· · H2N—(CH,)„—/ )>-Q< (2) • · • · · • * • Φ P • ·· » · • · j ' v ··· /\ ..!.i W1-A1-Az—HN·—(CH2)ir—^ /b Q1 • · ·* · • · • · • · väri A1, A2 och n är säsom definierats i formel I, W1 är en N-20 terminal aminoskyddsgrupp, säsom tert-butyloxikarbonyl och bensyloxikarbonyl, och Q1 är -C(NH)-NH2, -C(NW2)-NH-W2, 119812 -C(NH)NH-W2, -NH-C(NH)-NH2, -NH-C(NH)-NH-W2, -N (W2)-C (NH)-NH-W2 eller -NH-C(NW2)-NH-W2, där W2 är en aminskyddsgrupp, säsom tert-butyloxikarbonyl eller bensyloxikarbonyl, eller Q1 är -CN, -CO-NH2 eller -CS-NH2, där gruppen i det följande 5 överförs till en amidinogrupp eller Q1 är NH2 eller NH-W2, där W2 är säsom definierats ovan, där aminogruppen il det följande Överförs till en guanidinogrupp (och ger Q1 = -NH-C(NH)-NH2), efter skyddsavlägsnande av W2-gruppen när Q1 är -NH-W2 (W2 mäste i detta fall vara ortogonal mot W1) , genom 10 metoder som är kända inom tekniken; b) (Metod Ib) koppling av en N-terminalt skyddad aminosyra, som har formel (3) , med en förening med formel (2) med användning av standardpeptidkoppling, som visas I formeln W1-A2-OH (3) li,N—(CH2)„—Q1 <2) • * ♦ · ♦ 0! W1”— A2—HN—(CH2)n——Q1 « · · • · · • « : .·. 15 • · · *·· · • · ϊ·ί · väri A2, n, W1 och Q1 är säsom definierats ovan, följt av • · · *.* · skyddsavlägsnande av W1-gruppen och koppling av den N- terminala aminosyran med en förening med formel A1-OH väri A1 :V: är säsom definierats ovan, i en skyddad form, vilket leder 20 tili den skyddade peptid som beskrivs i metod la ovan, • · · c) (Metod IXa) koppling av en N-terminalt skyddad dipeptid, *:**: som har formel (l) , med en förening med formel (4) genom j·*·. användning av standardpeptidkoppling, som visas i formeln • · • * • · 25 119812 W1-Αι-A2-OH (1) Η,^Γ-Ο-β. W 'r W1“—A1 —“A2—HN—(CH2)ö—^ -Q1 vari A1, A2, n, W1 och Q1 är säsom definierats ovan; 5 d) (Metod Hb) koppling av en N-terminalt skyddad aminosyra, som har formel (3) , med en förening med formel (4) med användning av standardpeptidkoppling, som visas i formeln Wi-A2-qH (3) H2N—(CH2)n—“Q1 (4) • · • 1 · • · · « · · ' φ · 1 • M Λ·! /—\ W1 A2—HN—(CH2)n—( y—Q1 : :1: V™/ • · 1 I • · * · · • · · "!/ vari A2, n, W1 och Q1 är säsom definierats ovan, följt av * 10 skyddsavlägsnande av W1-gruppen och koppling av den N- terminala aminosyran med en förening med formel A1-0H vari A1 • · 1 *·1.1 är säsom definierats ovan, i en skyddad form, vilket leder «·· ·...' tili den skyddade peptid som beskrivs i metod Ha ovan; • | e) Metod Ula) koppling av en N-terminalt skyddad dipeptid, 15 som har formel (1) , med en förening med formel (5) genom använding av standardpeptidkoppling, som visas i formeln • · 119812 Wi-Αι _ A2-OH (1) (CH2)r>^ H2N—(CH2)n—{ N—Q2 (6) XLX2 " (CH 2)rX4 W1 A1-A2 HN—(CH2)n—^ 'n—Q2 väri A1, A2 och n är säsom definierats i formel I och r är 0 eller 1 när X1, X2 och X4 är CH2 eller r är 0 när X2 och X4 är CH2 och X1 saknas, W1 är en N-terminal aminoskyddsgrupp, säsom 5 tert-butyloxikarbonyl eller bensyloxikarbonyl, och Q2 är -C(NH)-NH2, -C(NW2) -NH-W2, eller -C(NH) -NH-W2, där W2 är en aminskyddsgrupp säsom tert-butyloxikarbonyl, eller bensyloxikarbonyl, eller Q2 är lika med W2, varvid iminogruppen, efter skyddsavlägsnande av W2-gruppen (W2 mäste i detta fall vara 10 ortogonal mot W1) , i det följande substitueras med gruppen -C(NH)-NH2 med användning av ett oskyddat, N-skyddat eller N,N'-diskyddat guanideringsreagens genom metoder som är kända . . inom tekniken; • · · • · · * · f) (Metod Illb) koppling av en N-terminalt skyddad :V: 15 aminosyra, som har formel (3), med en förening med formel (5) • ;*· genom användning av standardpeptidkoppling, som visas i ··· · ϊ .·. formeln • · φ #·· · ··· • · # • · · W1-A®-OH (3) • * • · · • · · (CH 2)rX4 **:·' h2n—(CH2)n—( μ—Q2 (5) ·:··: V-X2 «···· T (CHz)rX4 ·*·*: W1,—A·»—A2—HN—(CH2)0—( n—Q2 W2 20 väri A2, n, r, X1, x2 och X4, W1 och Q2 är säsom definierats ovan, följt av skyddsavlägsnande av W1-gruppen och koppling • · 119812 av den N-terminala aminosyran med en förening med forme 1 A1-OH väri A1 är säsom definierats ovan, i en skyddad form, vilket leder tili den skyddade peptid som beskrivs i metod lila ovan, 5 g) (Metod IVa) koppling av en N-terminalt skyddad dipeptid, som har formel (1) , med en förening med formel (6) genom användning av standardpeptidkoppling, som visas i formeln W1-A1-A2 OH (1) H2N—(CHA—^ \|H (β) HN—£
FI955828A 1993-06-03 1995-12-04 Menetelmä uusien, terapeuttisesti käyttökelpoisten peptidijohdannaisten valmistamiseksi FI119812B (fi)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE19939301916A SE9301916D0 (sv) 1993-06-03 1993-06-03 New peptides derivatives
SE9301916 1993-06-03
SE9400535 1994-02-17
PCT/SE1994/000535 WO1994029336A1 (en) 1993-06-03 1994-06-02 New peptide derivatives

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI955828A0 FI955828A0 (fi) 1995-12-04
FI955828A7 FI955828A7 (fi) 1995-12-04
FI119812B true FI119812B (fi) 2009-03-31

Family

ID=20390165

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI955828A FI119812B (fi) 1993-06-03 1995-12-04 Menetelmä uusien, terapeuttisesti käyttökelpoisten peptidijohdannaisten valmistamiseksi

Country Status (39)

Country Link
US (4) US5602253A (fi)
EP (2) EP1067136A1 (fi)
JP (3) JP3205558B2 (fi)
KR (1) KR100339456B1 (fi)
CN (2) CN1099425C (fi)
AT (1) ATE200783T1 (fi)
BR (1) BR9406746A (fi)
CA (1) CA2162900C (fi)
CZ (1) CZ290104B6 (fi)
DE (3) DE122004000045I2 (fi)
DK (1) DK0701568T3 (fi)
EE (1) EE03264B1 (fi)
EG (1) EG20671A (fi)
ES (1) ES2128277T3 (fi)
FI (1) FI119812B (fi)
GR (1) GR3036258T3 (fi)
HR (1) HRP940311B1 (fi)
HU (2) HU226825B1 (fi)
IL (2) IL123996A (fi)
IS (1) IS1805B (fi)
LT (1) LT3768B (fi)
LU (1) LU91173I2 (fi)
MX (1) MX9404114A (fi)
MY (1) MY119155A (fi)
NL (1) NL300178I2 (fi)
NO (2) NO314406B1 (fi)
NZ (1) NZ267534A (fi)
PL (1) PL181968B1 (fi)
PT (1) PT701568E (fi)
RS (1) RS49576B (fi)
RU (1) RU2142469C1 (fi)
SA (1) SA94150051B1 (fi)
SE (1) SE9301916D0 (fi)
SG (1) SG48013A1 (fi)
SI (1) SI0701568T1 (fi)
SK (1) SK283150B6 (fi)
TW (1) TW403731B (fi)
UA (1) UA65518C2 (fi)
WO (1) WO1994029336A1 (fi)

Families Citing this family (129)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5583146A (en) * 1992-12-02 1996-12-10 Bristol-Myers Squibb Company Heterocyclic thrombin inhibitors
US6984627B1 (en) * 1993-06-03 2006-01-10 Astrazeneca Ab Peptide derivatives
SE9301916D0 (sv) * 1993-06-03 1993-06-03 Ab Astra New peptides derivatives
SE9900043D0 (sv) * 1999-01-11 1999-01-11 Astra Ab New use
KR100342275B1 (ko) * 1993-10-21 2002-12-05 지.디. 썰 엘엘씨 산화질소신타제저해제로서유용한아미디노유도체
JP4561696B2 (ja) * 1994-01-27 2010-10-13 三菱化学株式会社 プロリンアミド誘導体
US5726159A (en) * 1994-03-04 1998-03-10 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
CA2143533A1 (en) * 1994-03-04 1995-09-05 Kenneth D. Kurz Antithrombotic agents
IL112795A (en) 1994-03-04 2001-01-28 Astrazeneca Ab Peptide derivatives as antithrombic agents their preparation and pharmaceutical compositions containing them
US5707966A (en) * 1994-03-04 1998-01-13 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5602101A (en) * 1994-03-04 1997-02-11 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5885967A (en) * 1994-03-04 1999-03-23 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
ZA951618B (en) * 1994-03-04 1996-08-27 Lilly Co Eli Antithrombotic agents
US5705487A (en) * 1994-03-04 1998-01-06 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
AU2790895A (en) * 1994-06-10 1996-01-05 Universitaire Instelling Antwerpen Purification of serine protease and synthetic inhibitors thereof
DE4421052A1 (de) 1994-06-17 1995-12-21 Basf Ag Neue Thrombininhibitoren, ihre Herstellung und Verwendung
SE9404196D0 (sv) * 1994-12-02 1994-12-02 Astra Ab New antithrombotic formulation
DE4443390A1 (de) * 1994-12-06 1996-06-13 Basf Ag Neue dipeptidische p-Amidinobenzylamide mit N-terminalen Sulfonyl- bzw. Aminosulfonylresten
FI973282L (fi) * 1995-02-10 1997-08-08 Basf Ag Trombiinin inhibiittoreita
JPH11500120A (ja) * 1995-02-17 1999-01-06 ビーエーエスエフ アクチェンゲゼルシャフト 新規なトロンビンインヒビター
US5710130A (en) * 1995-02-27 1998-01-20 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5914319A (en) * 1995-02-27 1999-06-22 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5629324A (en) * 1995-04-10 1997-05-13 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
US5610308A (en) * 1995-05-18 1997-03-11 Bristol-Myers Squibb Company Process for preparing intermediates for thrombin inhibitors
US5523308A (en) * 1995-06-07 1996-06-04 Costanzo; Michael J. Peptidyl heterocycles useful in the treatment of thrombin related disorders
SA96170106A (ar) 1995-07-06 2005-12-03 أسترا أكتيبولاج مشتقات حامض أميني جديدة
JP2008024720A (ja) * 1995-07-26 2008-02-07 Mitsubishi Chemicals Corp ペニシラミンアミド誘導体
JP4050316B2 (ja) 1995-07-26 2008-02-20 三菱化学株式会社 ペニシラミンアミド誘導体
TW455580B (en) * 1995-12-09 2001-09-21 Roche Diagnostics Gmbh 3-aminoethyl-N-amidino-2,5-dihyropyrrole-derivatives having arginine mimentic properties and pharmaceutical compositions containing these compounds
AR005245A1 (es) 1995-12-21 1999-04-28 Astrazeneca Ab Prodrogas de inhibidores de trombina, una formulación farmaceutica que las comprende, el uso de dichas prodrogas para la manufactura de un medicamento y un procedimiento para su preparacion
GB9526273D0 (en) * 1995-12-21 1996-02-21 Astra Ab New prodrugs
SE9600216D0 (sv) * 1996-01-18 1996-01-18 Hans Arne Hansson Styrning av läkningsprocesser
CA2246256A1 (en) * 1996-02-13 1997-08-21 Akzo Nobel Nv Serine protease inhibitors
IL120310A (en) * 1996-03-01 2002-02-10 Akzo Nobel Nv Serine protease inhibitors and pharmaceuticals containing them
IL120311A (en) * 1996-03-01 2001-10-31 Akzo Nobel Nv Serine protease inhibitors and pharmaceuticals containing them
US5811402A (en) * 1996-03-22 1998-09-22 Eli Lilly And Company Antithrombotic diamides
SE9602145D0 (sv) * 1996-05-31 1996-05-31 Astra Ab New improved formulation for treatment of thromboembolism
SE9602263D0 (sv) 1996-06-07 1996-06-07 Astra Ab New amino acid derivatives
US6200967B1 (en) 1996-06-25 2001-03-13 Eli Lilly And Company Anticoagulant agents
AU3496297A (en) 1996-06-25 1998-01-14 Eli Lilly And Company Anticoagulant agents
SE9602646D0 (sv) 1996-07-04 1996-07-04 Astra Ab Pharmaceutically-useful compounds
US6756389B2 (en) * 1996-08-09 2004-06-29 Cambridge Neuroscience, Inc. Pharmaceutically active compounds and methods of use
US5792761A (en) * 1996-08-12 1998-08-11 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
DE19632773A1 (de) * 1996-08-14 1998-02-19 Basf Ag Neue Thrombininhibitoren
DE19632772A1 (de) * 1996-08-14 1998-02-19 Basf Ag Neue Benzamidine
IL121474A0 (en) * 1996-08-23 1998-02-08 Akzo Nobel Nv Thrombin inhibitors
SE9603724D0 (sv) * 1996-10-11 1996-10-11 Astra Ab New pharmaceutical parenteral formulation of a thrombin inhibitor
US5798377A (en) * 1996-10-21 1998-08-25 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
US5869487A (en) * 1996-10-24 1999-02-09 Merck & Co., Inc. Pyrido 3,4-B!pyrazines for use as thrombin inhibitors
AR013084A1 (es) 1997-06-19 2000-12-13 Astrazeneca Ab Derivados de amidino utiles como inhibidores de la trombina, composicion farmaceutica, utilizacion de dichos compuestos para la preparacion demedicamentos y proceso para la preparacion de los compuestos mencionados
US6740682B2 (en) 1997-08-29 2004-05-25 Tularik Limited Meta-benzamidine derivatives as serine protease inhibitors
AU8875398A (en) * 1997-08-29 1999-03-22 Proteus Molecular Design Ltd 1-amino-7-isoquinoline derivatives as serine protease inhibitors
US6087373A (en) * 1997-09-23 2000-07-11 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
SE9704543D0 (sv) 1997-12-05 1997-12-05 Astra Ab New compounds
DE19755682A1 (de) * 1997-12-15 1999-06-17 Knoll Ag Verfahren zur Ermittlung eines Dosierungschemas für Thrombininhibitoren
AU2424499A (en) * 1998-01-26 1999-08-09 Basf Aktiengesellschaft Heterocyclic amidines as callicrein protease inhibitors
WO1999037668A1 (de) 1998-01-26 1999-07-29 Basf Aktiengesellschaft Thrombininhibitoren
JP2003529528A (ja) 1998-04-24 2003-10-07 ３−ディメンショナル ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド プロテアーゼインヒビターとしてのアミノ酸アミジノヒドラゾン、アルコキシグアニジン、およびアミノグアニジン
SE9802938D0 (sv) * 1998-09-01 1998-09-01 Astra Ab Improved stability for injection solutions
SE9802939D0 (sv) 1998-09-01 1998-09-01 Astra Ab New process
SE9802973D0 (sv) 1998-09-03 1998-09-03 Astra Ab Immediate release tablet
SE9802974D0 (sv) 1998-09-03 1998-09-03 Astra Ab New crystalline forms
EP0987274A1 (en) * 1998-09-15 2000-03-22 Hoechst Marion Roussel Deutschland GmbH Factor VIIa Inhibitors
SE9804313D0 (sv) 1998-12-14 1998-12-14 Astra Ab New compounds
KR20000047461A (ko) * 1998-12-29 2000-07-25 성재갑 트롬빈 억제제
TR200102037T2 (tr) 1999-01-13 2001-10-22 Astrazeneca Ab Yeni amidinobenzilamin türevleri ve trombin engelleyiciler olarak kullanılmaları.
SE9900070D0 (sv) 1999-01-13 1999-01-13 Astra Ab New use
CZ20013577A3 (cs) * 1999-04-09 2002-07-17 Basf Aktiengesellschaft Inhibitory komplementních proteáz s nízkou molekulovou hmotností
AR023510A1 (es) 1999-04-21 2002-09-04 Astrazeneca Ab Un equipo de partes, formulacion farmaceutica y uso de un inhibidor de trombina.
US6239132B1 (en) 1999-04-23 2001-05-29 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
AR023819A1 (es) * 1999-05-03 2002-09-04 Astrazeneca Ab FORMULACIoN FARMACEUTICA, KIT DE PARTES Y UTILIZACION DE DICHA FORMULACION
DE50008187D1 (de) * 1999-05-10 2004-11-18 Abbott Gmbh & Co Kg Salze von Thrombininhibitoren
WO2000074682A1 (en) 1999-06-04 2000-12-14 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
EP1059302A1 (en) * 1999-06-08 2000-12-13 Aventis Pharma Deutschland GmbH Factor VIIa inhibitors
SE9902550D0 (sv) * 1999-07-02 1999-07-02 Astra Ab New crystalline forms
CA2383358A1 (en) * 1999-08-31 2001-03-08 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions of a novel serine protease inhibitor
SK10842002A3 (sk) * 2000-01-28 2003-04-01 Aventis Pharma Deutschland Gmbh Spôsob prípravy acetyl-amidiniofenylalanyl-cyklohexylglycyl- pyridinioalanínamidov a medziprodukty používané pri tomto spôsobe
SE0001803D0 (sv) 2000-05-16 2000-05-16 Astrazeneca Ab New compounds i
DE10029015A1 (de) * 2000-06-15 2001-12-20 Curacyte Ag Hemmstoffe für den Gerinnungsfaktor Xa
DE10029014A1 (de) 2000-06-15 2001-12-20 Univ Schiller Jena Urokinase-Hemmstoffe
US6433186B1 (en) 2000-08-16 2002-08-13 Astrazeneca Ab Amidino derivatives and their use as thormbin inhibitors
DE10049937A1 (de) * 2000-10-06 2002-04-11 Knoll Ag Niedermolekulare Inhibitoren von Serinproteasen mit Polyhydroxyalkyl- und Polyhydroxycycloalkylresten
EP1358200A4 (en) 2000-10-06 2005-07-20 Xenoport Inc COMPOUNDS DERIVED FROM GALLENIC ACID TO IMPROVE THE ORAL ABSORPTION AND SYSTEMIC BIOVERABILITY OF MEDICAMENTS
US6462021B1 (en) * 2000-11-06 2002-10-08 Astrazeneca Ab Use of low molecular weight thrombin inhibitor
US7129233B2 (en) 2000-12-01 2006-10-31 Astrazeneca Ab Mandelic acid derivatives and their use as thrombin inhibitors
AR035216A1 (es) 2000-12-01 2004-05-05 Astrazeneca Ab Derivados de acido mandelico ,derivados farmaceuticamente aceptables, uso de estos derivados para la fabricacion de medicamentos, metodos de tratamiento ,procesos para la preparacion de estos derivados, y compuestos intermediarios
AU2002230836A1 (en) 2000-12-18 2002-07-01 Merck & Co., Inc. Benzylamine derivatives and their use as thrombin inhibitors
US6528503B2 (en) 2000-12-18 2003-03-04 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
JP2005504003A (ja) 2001-02-09 2005-02-10 メルク　エンド　カムパニー　インコーポレーテッド トロンビン阻害剤
DE10117730A1 (de) 2001-04-09 2002-10-10 Basf Ag Umsetzung von (Di)Aminen in Gegenwart einer Lysinoxidase und eines Reduktionsmittels
AR034517A1 (es) 2001-06-21 2004-02-25 Astrazeneca Ab Formulacion farmaceutica
DE10133786A1 (de) * 2001-07-16 2003-02-06 Boehringer Ingelheim Pharma Verwendung von Thrombin-Inhibitoren zur Behandlung von Arthritis
SE0103590D0 (sv) 2001-10-26 2001-10-26 Astrazeneca Ab New Combination
SE0200198D0 (sv) 2002-01-23 2002-01-23 Astrazeneca Ab New use
DE10210590A1 (de) * 2002-03-11 2003-10-02 Curacyte Ag Hemmstoffe des Gerinnungsfaktors Xa, ihre Herstellung und Verwendung
DE50310038D1 (de) 2002-03-11 2008-08-07 Curacyte Ag Hemmstoffe der urokinase, ihre herstellung und verwendung
US7084134B2 (en) 2002-05-02 2006-08-01 Merk & Co., Inc. Thrombin inhibitors
EP1513553B1 (en) * 2002-05-21 2008-11-19 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and materials for treating and diagnosing kallikrein-6 related inflammatory conditions
SE0201661D0 (sv) 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab New salts
SE0201659D0 (sv) 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab Modified release pharmaceutical formulation
DK1569912T3 (en) 2002-12-03 2015-06-29 Pharmacyclics Inc 2- (2-hydroxybiphenyl-3-yl) -1h-benzoimidazole-5-carboxamidine derivatives as factor VIIa inhibitors.
DE10301300B4 (de) 2003-01-15 2009-07-16 Curacyte Chemistry Gmbh Verwendung von acylierten 4-Amidino- und 4-Guanidinobenzylaminen zur Inhibierung von Plasmakallikrein
US7781424B2 (en) * 2003-05-27 2010-08-24 Astrazeneca Ab Modified release pharmaceutical formulation
SE0301879D0 (sv) * 2003-06-25 2003-06-25 Astrazeneca Ab New process
DE10342108A1 (de) * 2003-09-11 2005-04-14 Curacyte Chemistry Gmbh Basisch-substituierte Benzylaminanaloga als Inhibitoren des Gerinnungsfaktors Xa, ihre Herstellung und Verwendung
FR2867780B1 (fr) * 2004-03-19 2006-05-19 Servier Lab Nouveaux derives de 4-oxo-4,6,7,8-tetrahydropyrrolo (1,2-a) pyrazine-6-carboxamides, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
JP4775259B2 (ja) 2004-03-31 2011-09-21 味の素株式会社 アニリン誘導体
US7795205B2 (en) 2004-04-12 2010-09-14 Canyon Pharmaceuticals, Inc. Methods for effecting regression of tumor mass and size in a metastasized pancreatic tumor
US7907985B2 (en) * 2005-02-14 2011-03-15 Optiscan Biomedical Corporation Fluid handling cassette with a fluid control interface and sample separator
WO2006117358A1 (en) * 2005-05-03 2006-11-09 Bayer Cropscience Sa New heterocyclylethylamide derivatives
US7524354B2 (en) * 2005-07-07 2009-04-28 Research Foundation Of State University Of New York Controlled synthesis of highly monodispersed gold nanoparticles
CN101501216B (zh) * 2006-03-06 2013-10-02 胡玛基因公司 制备重组人凝血酶的方法
DE102006050672A1 (de) 2006-10-24 2008-04-30 Curacyte Discovery Gmbh Hemmstoffe des Plasmins und des Plasmakallikreins
TW200827336A (en) 2006-12-06 2008-07-01 Astrazeneca Ab New crystalline forms
US20090061000A1 (en) * 2007-08-31 2009-03-05 Astrazeneca Ab Pharmaceutical formulation use 030
GB0807828D0 (en) * 2008-04-29 2008-06-04 Vantia Ltd Aminopyridine derivatives
CN102924567B (zh) * 2008-10-28 2014-06-04 上海医药工业研究院 一类肽化合物、其制备方法及用途
US20110165279A1 (en) * 2010-01-06 2011-07-07 Academia Sinica Office of Public Affairs (Technology Licensing) Sweet potato trypsin inhibitor and methods for treating inflammation and hyperalgesia
EP2590945B1 (en) 2010-07-07 2014-04-30 The Medicines Company (Leipzig) GmbH Serine protease inhibitors
CN102464701B (zh) * 2010-11-08 2015-10-21 上海医药工业研究院 一类新型化合物、其制备方法及用途
US9193762B2 (en) 2010-12-01 2015-11-24 University Of Mississippi Selective inhibitors of prolylcarboxypeptidase
DE102014108210A1 (de) 2014-06-11 2015-12-17 Dietrich Gulba Rodentizid
WO2019231935A1 (en) * 2018-05-29 2019-12-05 Omeros Corporation Masp-2 inhibitors and methods of use
US11584714B2 (en) 2018-05-29 2023-02-21 Omeros Corporation MASP-2 inhibitors and methods of use
AU2020396565C1 (en) 2019-12-04 2025-05-15 Omeros Corporation MASP-2 inhibitors and methods of use
WO2021113682A1 (en) 2019-12-04 2021-06-10 Omeros Corporation Masp-2 inhibitors and methods of use
CA3159159A1 (en) 2019-12-04 2021-06-10 Neil S. Cutshall Masp-2 inhibitors and methods of use
BR112022010881A2 (pt) 2019-12-04 2022-08-23 Omeros Corp Composto, composição farmacêutica, e, método para tratar uma doença ou distúrbio associado a serina protease-2 associada à lectina de ligação ao manan
EP4070658A1 (de) 2021-04-06 2022-10-12 BIORoxx GmbH Verwendung von blutgerinnungshemmenden verbindungen als rodentizide

Family Cites Families (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2748295A1 (de) * 1977-10-27 1979-05-03 Bayer Ag Neue derivate des bpti
HU178398B (en) * 1979-06-12 1982-04-28 Gyogyszerkutato Intezet Process for producing new agmatine derivatives of activity against haemagglutination
US4568636A (en) * 1981-03-25 1986-02-04 Pentapharm Ag Tripeptide derivatives
US4395401A (en) * 1981-09-09 1983-07-26 Smithkline Beckman Corporation Renally active dipeptides
HU192646B (en) * 1984-12-21 1987-06-29 Gyogyszerkutato Intezet Process for preparing new n-alkyl-peptide aldehydes
ZA86746B (en) 1985-02-04 1986-09-24 Merrell Dow Pharma Novel peptidase inhibitors
DE3505555A1 (de) * 1985-02-18 1986-09-11 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Neue oligopeptidylargininolderivate und deren homologe, verfahren zu deren herstellung, deren verwendung und diese enthaltende mittel
PT84170B (pt) * 1986-01-24 1989-03-30 Sanofi Sa Processo para a preparacao de derivados n alfa-substituidos das n alfa-aril-sulfonilaminoacil d-amidinofenil-alaninamidas
DE3606480A1 (de) * 1986-02-28 1987-09-03 Behringwerke Ag Oligopeptidylnitrilderivate, diese enthaltende mittel, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
US5187157A (en) * 1987-06-05 1993-02-16 Du Pont Merck Pharmaceutical Company Peptide boronic acid inhibitors of trypsin-like proteases
EP0362002B1 (en) * 1988-09-01 1995-07-26 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. HIV protease inhibitors
ZA897514B (en) * 1988-10-07 1990-06-27 Merrell Dow Pharma Novel peptidase inhibitors
US5273982A (en) * 1990-03-09 1993-12-28 Hoffmann-La Roche Inc. Acetic acid derivatives
US5110812A (en) * 1990-06-04 1992-05-05 Bristol-Myers Squibb Co. Azetidin-2-one derivatives as serine protease inhibitors
US5037819A (en) * 1990-06-04 1991-08-06 Bristol-Myers Squibb Company Azetidin-2-one derivatives as serine protease inhibitors
TW201303B (fi) * 1990-07-05 1993-03-01 Hoffmann La Roche
GB9017694D0 (en) * 1990-08-13 1990-09-26 Sandoz Ltd Improvements in or relating to organic chemistry
GB9019558D0 (en) * 1990-09-07 1990-10-24 Szelke Michael Enzyme inhibitors
NZ239846A (en) * 1990-09-27 1994-11-25 Merck & Co Inc Sulphonamide derivatives and pharmaceutical compositions thereof
IL99538A0 (en) * 1990-09-27 1992-08-18 Merck & Co Inc Fibrinogen receptor antagonists and pharmaceutical compositions containing them
IL99527A (en) * 1990-09-28 1997-08-14 Lilly Co Eli Tripeptide antithrombotic agents
GB9024129D0 (en) * 1990-11-06 1990-12-19 Thrombosis Research Trust Inhibitors and substrates of thrombin
CA2073776A1 (en) * 1990-11-15 1992-05-16 Joerg Stuerzebecher Meta-substituted phenyl alanine derivatives
DE4115468A1 (de) * 1991-05-11 1992-11-12 Behringwerke Ag Amidinophenylalaninderivate, verfahren zu deren herstellung, deren verwendung und diese enthaltende mittel als antikoagulantien
SE9102462D0 (sv) * 1991-08-28 1991-08-28 Astra Ab New isosteric peptides
ZA928581B (en) * 1991-11-12 1994-05-06 Lilly Co Eli Antithrombotic agents
SE9103612D0 (sv) * 1991-12-04 1991-12-04 Astra Ab New peptide derivatives
US5583146A (en) * 1992-12-02 1996-12-10 Bristol-Myers Squibb Company Heterocyclic thrombin inhibitors
US5783563A (en) * 1993-06-03 1998-07-21 Astra Aktiebolag Method for treatment or prophylaxis of venous thrombosis
SE9301916D0 (sv) * 1993-06-03 1993-06-03 Ab Astra New peptides derivatives
CA2140598C (en) * 1994-01-27 2010-03-09 Masahiro Ohshima Prolineamide derivatives
US5705487A (en) * 1994-03-04 1998-01-06 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5726159A (en) * 1994-03-04 1998-03-10 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5707966A (en) * 1994-03-04 1998-01-13 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
SE504185C2 (sv) * 1994-11-08 1996-12-02 Astra Ab Lagringsstabil vattenlösning för infusion av trombininhibitorer
SE9404196D0 (sv) * 1994-12-02 1994-12-02 Astra Ab New antithrombotic formulation
US5710130A (en) * 1995-02-27 1998-01-20 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
AR005245A1 (es) * 1995-12-21 1999-04-28 Astrazeneca Ab Prodrogas de inhibidores de trombina, una formulación farmaceutica que las comprende, el uso de dichas prodrogas para la manufactura de un medicamento y un procedimiento para su preparacion

Also Published As

Publication number Publication date
HRP940311B1 (en) 2002-02-28
US5723444A (en) 1998-03-03
CN1278530A (zh) 2001-01-03
EP0701568A1 (en) 1996-03-20
TW403731B (en) 2000-09-01
NZ267534A (en) 1997-08-22
PL311819A1 (en) 1996-03-18
BR9406746A (pt) 1996-03-19
EP0701568B1 (en) 2001-04-25
LU91173I2 (fr) 2005-07-11
HUT74739A (en) 1997-02-28
CN1127509A (zh) 1996-07-24
US5939392A (en) 1999-08-17
CA2162900C (en) 2009-06-09
JP2001322974A (ja) 2001-11-20
SI0701568T1 (en) 2001-08-31
HRP940311A2 (en) 1996-10-31
JP2002047264A (ja) 2002-02-12
NO954873L (no) 1996-02-01
PT701568E (pt) 2001-08-30
FI955828A0 (fi) 1995-12-04
DE122004000045I2 (de) 2011-06-16
IS1805B (is) 2002-03-08
NO954873D0 (no) 1995-11-30
CN1178905C (zh) 2004-12-08
IL109634A0 (en) 1994-08-26
HK1031375A1 (en) 2001-06-15
IS4166A (is) 1994-12-04
HU0103039D0 (en) 2001-09-28
AU6986994A (en) 1995-01-03
LTIP1947A (en) 1994-12-27
LT3768B (en) 1996-03-25
SK283150B6 (sk) 2003-03-04
IL123996A (en) 2008-07-08
GR3036258T3 (en) 2001-10-31
NL300178I2 (nl) 2005-10-03
FI955828A7 (fi) 1995-12-04
PL181968B1 (pl) 2001-10-31
SE9301916D0 (sv) 1993-06-03
ATE200783T1 (de) 2001-05-15
CZ290104B6 (cs) 2002-05-15
NO314406B1 (no) 2003-03-17
SA94150051B1 (ar) 2006-06-12
US20050222395A1 (en) 2005-10-06
DE701568T1 (de) 1999-06-02
IL109634A (en) 1999-04-11
ES2128277T3 (es) 2001-07-01
AU684086B2 (en) 1997-12-04
JPH08511018A (ja) 1996-11-19
US5602253A (en) 1997-02-11
HU9503445D0 (en) 1996-01-29
SG48013A1 (en) 1998-04-17
EG20671A (en) 1999-11-30
MY119155A (en) 2005-04-30
JP3205558B2 (ja) 2001-09-04
NO2004009I1 (no) 2004-12-20
EP1067136A1 (en) 2001-01-10
EE03264B1 (et) 2000-04-17
CA2162900A1 (en) 1994-12-22
DK0701568T3 (da) 2001-06-18
KR100339456B1 (ko) 2002-12-06
UA65518C2 (en) 2004-04-15
DE122004000045I1 (de) 2005-04-21
HU226825B1 (en) 2009-11-30
SK145495A3 (en) 1996-10-02
WO1994029336A1 (en) 1994-12-22
CN1099425C (zh) 2003-01-22
RS49576B (sr) 2007-04-10
YU33694A (sh) 1997-12-05
DE69427150D1 (de) 2001-05-31
ES2128277T1 (es) 1999-05-16
NL300178I1 (nl) 2005-05-02
RU2142469C1 (ru) 1999-12-10
CZ302095A3 (en) 1996-04-17
MX9404114A (es) 1995-01-31
DE69427150T2 (de) 2001-09-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI119812B (fi) Menetelmä uusien, terapeuttisesti käyttökelpoisten peptidijohdannaisten valmistamiseksi
US5780631A (en) Starting materials in the synthesis of thrombin and kininogenase inhibitors
JP3453357B2 (ja) トロンビンの阻害剤および基質
FI115770B (fi) Menetelmä farmakologisesti aktiivisten peptidijohdannaisten valmistamiseksi
US6337343B1 (en) Amino acid derivatives
US6984627B1 (en) Peptide derivatives
US6774110B2 (en) Orally available peptidic thrombin inhibitors
EP0832879A1 (en) Process for preparing intermediates for thrombin inhibitors
AU684086C (en) New peptide derivatives
HK1033139A (en) New peptide derivatives

Legal Events

Date Code Title Description
FG Patent granted

Ref document number: 119812

Country of ref document: FI