ES2288183T3 - Potenciacion de los derivados de retinol de sustancias activas por medio de una preparacion micelar. - Google Patents
Potenciacion de los derivados de retinol de sustancias activas por medio de una preparacion micelar. Download PDFInfo
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Abstract
Un compuesto que tiene una fórmula estructural escogida entre las siguientes (I-VI): (Ácido N-(all-trans-Retinoil)-L-cistéico) (Ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-cistéico) (Ácido N-(all-trans-Retinoil)-L-homocistéico) (Ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-homocistéico) (Ácido N-(all-trans-Retinoil)-L-cisteinsulfínico) (Ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-cisteinsulfínico)
Description
Potenciación de los derivados de retinol de
sustancias activas por medio de una preparación micelar.
La invención se relaciona con nuevos compuestos
que tienen propiedades terapéuticas por si mismas, y que son
capaces de potenciar la eficacia de otros compuestos
terapéuticamente activos, por ejemplo compuestos citotóxicos
utilizados en el tratamiento de cáncer. Los nuevos compuestos han
mostrado que poseen una propiedad de inhibición del crecimiento
celular, y además de esto, que incrementan también la actividad
farmacológica de una formulación convencional de paclitaxel y para
hacer posible la fabricación de una nueva formulación de paclitaxel,
que exhibe una mejor solubilidad y eficacia terapéutica.
Mientras que el término "quimioterapia"
originalmente tenía un significado muy amplio, abarcando el
tratamiento de diferentes enfermedades con agentes químicos, hoy en
día tiene un significado más específico. En una lengua moderna, el
término "quimioterapia" usualmente se refiere al uso de agentes
químicos para destruir células cancerosas. Entre los agentes
químicos actualmente utilizados como drogas contra el cancer, la
mayoría funcionan deteriorando la habilidad de las células
cancerosas para replicarse interfiriendo con las actividades del
ADN y del ARN asociados con la división celular.
El paclitaxel es un compuesto diterpenoide del
ácido
{(2R,3S)-3-Benzamido-3-fenil-2-hidroxi
propiónico-[(2aR,
4S,4aS,6R,9S,11S,12S,12aR,12bS)-6,12b-diacetoxi-12-benzoiloxi-2a,3,4,4a,5,6,9,10,11,12,12a,12b-dodecahidro-4,
11-dihidroxi-4a,8,13,13-tetrametil-7,11-metano-5-oxo-1H-ciclodeca[3,4]benz[1,2-b]oxet-9-il]éster, el ingrediente activo en Taxol®, Bristol-Miers Squibb} originalmente aislado a partir del tejo occidental, un árbol siempre verde que produce conos del género Taxus. El paclitaxel es un ejemplo de un importante agente quimioterapéutico o droga contra el cáncer actualmente en uso. Tiene un amplio espectro de actividad contra tumores sólidos: principalmente cáncer de seno, de ovario, de colon y carcinomas de pulmón de células no pequeñas. Se une a la subunidad \beta de tubulina, lo que resulta en la formación de haces de microtúbulos estables no funcionales interfiriendo de esta forma con la mitosis. La droga también puede inducir apoptosis y tuene propiedades antiangiogénicas.
4S,4aS,6R,9S,11S,12S,12aR,12bS)-6,12b-diacetoxi-12-benzoiloxi-2a,3,4,4a,5,6,9,10,11,12,12a,12b-dodecahidro-4,
11-dihidroxi-4a,8,13,13-tetrametil-7,11-metano-5-oxo-1H-ciclodeca[3,4]benz[1,2-b]oxet-9-il]éster, el ingrediente activo en Taxol®, Bristol-Miers Squibb} originalmente aislado a partir del tejo occidental, un árbol siempre verde que produce conos del género Taxus. El paclitaxel es un ejemplo de un importante agente quimioterapéutico o droga contra el cáncer actualmente en uso. Tiene un amplio espectro de actividad contra tumores sólidos: principalmente cáncer de seno, de ovario, de colon y carcinomas de pulmón de células no pequeñas. Se une a la subunidad \beta de tubulina, lo que resulta en la formación de haces de microtúbulos estables no funcionales interfiriendo de esta forma con la mitosis. La droga también puede inducir apoptosis y tuene propiedades antiangiogénicas.
El paclitaxel está muy ligado a proteína, tiene
grandes volúmenes de distribución, pero pobre penetración en el
sistema nervioso central. Este compuesto se elimina principalmente
del organismo a través del metabolismo hepático, y su uso se ve por
lo tanto generalmente impedido en una disfunción hepática
severa.
En años recientes, se ha dado un énfasis
considerable al desarrollo de nuevas formulaciones de paclitaxel
que son adecuadas para administración intravenosa, con el propósito
de dirigir los problemas de solubilidad y toxicidad asociados con
esta droga particular. Los ejemplos incluyen sistemas de
dispersiones tales como emulsiones, liposomas, micelas mezcladas
preparadas por coprecipitación utilizando sales biliares y
fosfolípidos (Alkan-Onyuksel H, y colaboradores,
Pharm. Res. Vol. 2, páginas 206-212, 1994),
ciclodextrinas, y microesferas. También se han desarrollado
prodrogas solubles en agua tales como polietilén
glicol-paclitaxel y
poliglutamato-paclitaxel con una prometedora
actividad antitumoral.
El producto comercialmente disponible, Taxol®
(un concentrado de paclitaxel para la preparación de soluciones por
infusión, comercializado por Bristol-Myers Squibb
Co., New York, NY, Estado Unidos de América), actualmente se
formula en un vehículo que contiene una mezcla de aceite de ricino
polioxietilado (Cremophor® EL) y etanol, en las proporciones
aproximadas 1:1 (v/v). Cremophor® EL, que es un tensoactivo
comúnmente utilizado para compuestos lipofílicos, ha sido asociado
sin embargo con efectos secundarios adversos, tales como
broncoespasmos, hipotensión, y otras manifestaciones de
hipersensibilidad particularmente después de una administración
rápida. Por lo tanto, los tiempos de infusión prolongados, la alta
dilución del etanol:Cremophor® EL y la premedicación (por ejemplo
utilizando corticosteroides, antihistamina, y bloqueadores H2) son
acciones a las cuales se recurre con el propósito de reducir estos
efectos adversos.
Además, la formulación comercialmente disponible
está asociada con un gran número de difíciles problemas técnicos
tales como problemas de estabilidad, que incluyen la posibilidad de
precipitación de la droga por dilución, requerimientos de
filtración y restricciones referentes al uso de recipientes que
contienen PVC y elementos para su administración. Es claro por lo
tanto que existe la necesidad de una nueva formulación de paclitaxel
que sea eficiente y menos tóxica que el producto comercial y cuya
formulación pueda aliviar los efectos secundarios, y anular los
problemas actualmente asociados con la preparación y administración
de esta droga.
Además, la pequeña diferencia entre la
concentración terapéutica y la tóxica limita severamente la utilidad
clínica del paclitaxel. La eficacia terapéutica podría ser
mejorada por medio del suministro de la droga con un sistema
microportador apropiado, que sea capaz de cambiar la biodistribución
temporal y espacial de la droga. Se ha hecho esta propuesta por la
alta toxicidad y baja solubilidad de la anfotericina B, que ha sido
exitosamente incorporada en micelas tipo disco de sulfato de
colesterilo (Lasic D.D. Nature. Vol. 355, 16 de Enero.,
páginas 279-280, 1992).
En años recientes, se ha hecho un gran esfuerzo
para el desarrollo de formulaciones poliméricas micelares de
paclitaxel utilizando copolímeros anfifílicos dibloque (K. Kataoka y
colaboradores, JMS-Pure Appl. Chem. A31
(11), páginas 1759-1769,1994).
En un estudio, utilizando un modelo de línea
celular de cáncer humano, una nueva formulación que contiene un
copolímero anfifílico biodegradable de bloque monometoxi
poli(etilen
glicol)-bloque-poli (D,L - láctido)
(mPEG-PDLLA) y paclitaxel (Genexol® -PM) y Taxol®
mostró una citotoxicidad comparable in vitro con las
mismasconcentraciones. La formulación micelar polimérica de
paclitaxel produjo un incremento en una dosis máxima tolerada (MTD)
comparada con aquella de Taxol® cuando se administra
intraperitonealmente in vivo. Se dijo que esta formulación
tiene ventajas sobre la preparación inyectable comercialmente
disponible de Taxol® en términos de bajos niveles de toxicidad y
dosis mayores de paclitaxel (niveles 2 a 3 veces mayores) (Kim S.
C. Y colaboradores, J. Controlled Release, v.72, páginas
191-202, 2001).
Las ventajas mencionadas por los autores
anteriores se relacionan con la liberación lenta de paclitaxel a
partir de las micelas, debido a una fuerte asociación hidrófoba
entre paclitaxel y mPEG-PDLLA de alto peso
molecular. Al mismo tiempo, de acuerdo con los autores, estudios
adicionales de una formulación micelar polimérica, se requerirán
dosis inusualmente altas que contiene paclitaxel para caracterizar
completamente la naturaleza de las toxicidades y especialmente las
consecuencias más distantes de esta clase de tratamiento.
Los presentes inventores han seguido un camino
fundamentalmente diferente. Ellos han puesto a disposición
compuestos nuevos, que contiene únicamente los residuos de
sustancias de ocurrencia natural. Estos compuestos, numerados desde
I hasta VI, por sí mismos tienen baja toxicidad. Se llevo a cabo un
estudio de toxicidad de una dosis única intraperitoneal en ratas,
de acuerdo con los principios de la OECD de Buenas Prácticas de
Laboratorio. Se encontró que los compuestos I-VI,
con un nivel de dosis de 100 mg/kg de peso corporal no produjeron
mortalidad. La dosis mínima letal esta por lo tanto por encima de
100 mg/kg de peso corporal de estos compuestos
(I-VI).
Considerando la "quimioterapia" en su
sentido más amplio, esto es, la administración de agentes químicos
para la prevención, el tratamiento o el alivio de una condición
médica, surgen una multitud de problemas similares. Es importante
para una eficacia óptima, por ejemplo la asimilación y la
especificidad objetivo del compuesto, su distribución en el
organismo y su eliminación, al mismo tiempo que se minimizan los
posibles efectos secundarios, los riesgos para el cuerpo médico
etc. También se deben tener en cuenta los costos de producción, la
facilidad de preparación, las formas de administración, la
estabilidad durante el almacenamiento etc. En particular, es
deseable poder incrementar la solubilidad y la biodisponibilidad de
agentes farmacéuticos pobremente solubles, incrementando su
eficacia y reduciendo sus efectos secundarios.
Considerando la "quimioterapia" en su
sentido más específico, esto es el uso de agentes químicos para
destruir células cancerosas, subsiste una tarea urgente para poner
a disposición nuevas sustancias y formulaciones, que exhiban al
menos una eficacia mejorada y menos efectos secundarios, pero
preferiblemente también características mejoradas relacionadas con
la solubilidad, seguridad, estabilidad, etc.
En particular, es deseable poner a disposición
una nueva formulación de paclitaxel, que exhiba una mejor
estabilidad, una mayor eficacia y efectos secundarios reducidos,
comparada con las formulaciones actualmente disponibles. Los
problemas adicionales y las correspondientes soluciones innovadoras
serán evidentes a partir de la siguiente descripción y
reivindicaciones.
DE 40 32 187 (Hermes Fabrik pharmazeutischer
Präparate Franz Gradinger GmbH & Co., DE) divulga diferentes
compuestos de
N-Retinol-L-aminomercapto
y sus sales fisiológicamente aceptables. Los compuestos están
sugeridos para ser utilizados en el tratamiento sistémico y tópico
de enfermedades de las membranas mucosas. Un estudio más reciente
de las fórmulas estructurales revela que elementos estructurales,
centrales para los compuestos (I-VI) de acuerdo con
la presente invención están ausentes o son diferentes en DE 40 32
187. Notablemente, los compuestos de DE 40 32 187 contienen un
azufre en estado de oxidación -2 y -1 respectivamente. La función
fisiológica, así como las propiedades físicas y químicas de estos
compuestos que contienen azufre están determinadas por este estado
de oxidación. No existe tampoco indicación de que estos compuestos
influenciarían las propiedades del paclitaxel o de otras sustancias
insolubles en agua o parcialmente solubles en ella.
Kalemkerian y colaboradores, Activity of
fenretinide plus chemotherapeutic agents in
small-cell lung cancer cell lines, Cancer
Chemother Pharmacol, (1999) 43:145-150. Este
artículo describe un retinoide sintético que es un inductor potente
de apoptosis en células cancerosas, y que puede tener la capacidad
de reforzar la actividad de otros agentes citotóxicos. Todos los
estudios de combinación se llevaron a cabo con un rango de
concentraciones de cada agente individual y de ambos agentes juntos
en una proporción fija correspondiente a la relación de los valores
de IC_{50} de cada agente solo como se identificó en experimentos
preliminares. Los autores establecen que sus estudios no permiten
decir si los agentes experimentales interactuaron en una forma
mutuamente exclusiva o mutuamente no exclusiva. Los problemas de
solubilización y de almacenamiento de paclitaxel o de otros
compuestos farmacéuticos insolubles en agua o escasamente solubles
no se discuten.
Zhang y colaboradores, An investigation of the
antitumour activity and biodistribution of polymeric micellar
paclitaxel, Cancer Chemother Pharmacol, (1997)
40:81-86. En este estudio, se comparó la formulación
convencional del Paclitaxel Cremophor con un paclitaxel micelar
polimérico, administrado por medio de inyección intraperitoneal. Se
utilizó un copolímero anfifílico dibloque biodegradable, monometoxi
poli(etilen
glicol)-bloque-poli
(D,L-láctido) [m PEG-PDLLA]. La
formulación micelar mostró resultados muy promisorios. Las ventajas
mencionadas están sin embargo relacionadas con la liberación lenta
de paclitaxel de las micelas, debido a una fuerte asociación
hidrófoba entre paclitaxel y el mPEG-PDLLA de alto
peso molecular. Además, la toxicidad y las consecuencias a largo
plazo de esta forma de administración de liberación lenta necesita
ser más estudiada.
Los presentes inventores han encontrado que los
compuestos terapéuticamente activos se pueden disolver en micelas
de un compuesto que muestra mismo la actividad terapéutica deseada
o una actividad de interacción favorable con, o una potenciación de
la actividad deseada, y cuyos compuestos exhiben baja toxicidad. La
presente invención pone por lo tanto a disposición un grupo de
nuevos compuestos, ácido
N-(all-trans-Retinoil)-L-cistéico
(I), ácido
N-(13-cis-Retinoil)-L-cistéico
(II), ácido
N-(all-trans-Retinoil)-L-homocistéico
(III), ácido
N-(13-cis-Retinoil)-L-homocistéico (IV),
ácido N-(all-Retinoil)-L-cisteinsulfínico (V), y
ácido
N-(13-cis-Retinoil)-L-cisteinsulfínico
(VI), que exhiben por si mismos efectos terapéuticos, y que en
combinación con compuestos farmacéuticos conocidos exhiben un efecto
sinergístico. En combinación con compuestos farmacéuticos
citotóxicos o citostáticos, dichos compuestos nuevos introducen
posibilidades mejoradas para combatir el cáncer. Además, la
presente invención divulga una posibilidad de elaborar formulaciones
solubles en agua de compuestos farmacéuticos insolubles en agua o
parcialmente solubles, tales como paclitaxel, con actividad
farmacológica mejorada y propiedades mejoradas de almacenamiento y
manipulación.
Los términos "potenciación" y
"refuerzo" son usados para definir una acción por medio de la
cual el efecto terapéutico de dos o más compuestos, suministrados
simultáneamente o sustancialmente simultáneamente, es mayor que el
efecto de dichos compuestos suministrados separadamente.
El término "simultáneamente" debe ser
interpretado en este contexto en forma amplia, esto es, abarcando
tanto situaciones donde dos o más compuestos se administran en una
mezcla, como situaciones donde los compuestos se administran
separadamente, ya sea a través de rutas de administración similares
o diferentes, al mismo tiempo o en forma secuencial, siempre que
los compuestos ejerzan su influencia terapéutica en el organismo al
mismo tiempo o prácticamente al mismo tiempo.
El término "concentración crítica de
micela" o "CMC" es una medida de la concentración de un
componente de una solución que representa un valor crítico por
encima del cual las concentraciones crecientes de dicho componente
fuerzan la formación de micelas.
Los presentes inventores sorprendentemente han
encontrado que el ácido
N-(all-trans-Retinoil)-L-cistéico
(I), el ácido
N-(13-cis-Retinoil)-L-cistéico
(II), el ácido
N-(all-trans-Retinoil)-L-homocistéico
(III), el ácido
N-(13-cis-Retinoil)-L-homocistéico (IV),
el ácido
N-(all-trans-Retinoil)-L-cisteinsulfínico
(V), y el ácido
N-(13-cis-Retinoil)-L-cisteinsulfínico
(VI) son capaces de incrementar la solubilidad de compuestos
parcialmente solubles, así como de potenciar su eficacia
terapéutica.
Estos nuevos compuestos de acuerdo con la
presente invención son amidas del ácido
all-trans-retinóico o ácido
13-cis-retinóico con ácido
L-cistéico
(3-sulfo-L-alanina),
ácido L-homocistéico, ácido
L-cisteinsulfínico. Las formulas estructurales de
estos compuestos se presentan a continuación:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Las moléculas de estos compuestos exhiben
simultáneamente una parte hidrofílica y una parte hidrófoba en
soluciones acuosas. En la forma de sales, estos compuestos son
capaces de formar micelas en soluciones acuosas a concentraciones
iguales a, o superiores a la concentración crítica de la micela
(CMC).
La presente invención hace posible el uso de los
anteriores compuestos, o de derivados de los mismos, para la
fabricación de un medicamento. La presente invención hace posible el
uso de los anteriores compuestos, o de un derivado de los mismos,
para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de
cáncer.
Además la presente invención hace posible una
composición farmacéutica que contiene una sustancia activa en una
cantidad terapéuticamente efectiva, y uno de los anteriores
compuestos (compuestos I-VI) o un derivado de los
mismos. En particular, la presente invención hace posible una
composición farmacéutica en donde la sustancia activa es un
compuesto citotóxico, y el compuesto de refuerzo es uno de los
compuestos anteriores (compuestos I-VI), o un
derivado de los mismos. De acuerdo a una modalidad de la invención,
dicha sustancia activa es paclitaxel.
Otra modalidad de la presente invención es un
método para reforzar la eficacia de una sustancia farmacéuticamente
activa, donde dicha sustancia se prepara en forma de micela con al
menos uno de los compuestos anteriores (compuestos
I-VI), o un derivado de los mismos.
Otra modalidad es un método para incrementar la
solubilidad de una sustancia farmacéuticamente activa, en donde
dicha sustancia se prepara en forma de micela con al menos uno de
los compuestos anteriores (compuestos I-VI), o un
derivado de los mismos.
Aún otra modalidad es un método para mejorar la
biodisponibilidad de una sustancia farmacéuticamente activa, en
donde dicha sustancia se prepara en forma de micela con al menos uno
de los compuestos anteriores (compuestos I-VI), o
un derivado de los mismos.
Los inventores han mostrado que el compuesto
pobremente soluble paclitaxel se puede disolver en micelas de ácido
N-(all-trans-Retinoil)-L-cistéico (I),
ácido
N-(13-cis-Retinoil)-L-cistéico
(II), ácido
N-(all-trans-Retinoil)-L-homocistéico
(III), ácido
N-(13-cis-Retinoil)-L-homocistéico
(IV), ácido
N-(all-trans-Retinoil)-L-cisteinsulfínico
(V), y ácido
N-(13-cis-Retinoil)-L-cisteinsulfínico
(VI), creando micelas mixtas. En esta forma, se logró una excelente
solubilidad del paclitaxel en la forma de micelas mezcladas en
solución salina. Las soluciones de estos compuestos (compuestos
I-VI) en solución salina se prepararon en un amplio
rango de concentraciones, y se añadieron en MEM con suero fetal
bovino al 5% (FBS) a cultivos de adenocarcinoma de seno humano (la
línea celular MDA-MB-231).
Los análisis para evaluar la citotoxicidad de
los compuestos de la invención en concentración de 40 nM han
mostrado que se obtienen mejores resultados en el rango de 0,005
mg/ml a 0,5 mg/ml de los compuestos en solución salina
(concentraciones iniciales). Se observó una inhibición máxima en el
crecimiento celular cercana al 38% con la concentración inicial de
1 mg/ml (en solución salina) antes de la adición a los cultivos de
adenocarcinoma (la línea celular
MDA-MB-231).
Los análisis para evaluar la citotoxicidad de
los compuestos de la invención en el rango de concentración de
10^{-11} M a 10^{-6} M en cultivos de células
MDA-MB-231 ha revelado la siguiente
dependencia: un incremento de las concentraciones de los compuestos
de la invención conduce al mejoramiento de la inhibición del
crecimiento celular, alcanzando un valor cercano al 42% a la
concentración de 10^{-6} M.
La citotoxicidad de la formulación de
paclitaxel/compuesto (I-VI), y de los compuestos I a
VI solos, se comparó con la de paclitaxel y Taxol® en cultivos de
la línea celular MDA-MB-231. En el
caso del paclitaxel y Taxol®, la inhibición en el crecimiento
celular alcanzó el 46% con concentraciones cercanas a la
concentración de IC_{50}.
En particular, a la misma concentración de
paclitaxel, la formulación de paclitaxel y del compuesto I o de
paclitaxel y del compuesto II, ambos en una relación molar de los
componentes de 1:5, exhibió una inhibición sorprendentemente alta
en el crecimiento celular del 70%. El grado de inhibición del
crecimiento celular utilizando al producto comercialmente
disponible Taxol® (control positivo) fue de 45%. Ya la acción
citotóxica de los compuestos I o II solos, a una concentración de
40 nM, era cercana al 40%. Las formulaciones de paclitaxel y del
compuesto I (o del compuesto II) muestran un incremento en la
inhibición del crecimiento celular dentro del rango de relación
molar de 1:3-1:5 (paclitaxel:compuesto I (o
compuesto II)). Cuando se incrementa adicionalmente la relación de
los componentes hasta 1:10, el grado de inhibición del crecimiento
celular permanece prácticamente inalterado.
La formulación de la invención de ácido
N-(all-trans-Retinoil)-L-cistéico (I),
ácido
N-(13-cis-Retinoil)-L-cistéico
(II), ácido
N-(all-trans-Retinoil)-L-homocistéico
(III), ácido
N-(13-cis-Retinoil)-L-homocistéico
(IV), ácido
N-(all-trans-Retinoil)-L-cisteinsulfínico
(V), y ácido
N-(13-cis-Retinoil)-L-cisteinsulfínico
(VI) y paclitaxel se prepara de la siguiente manera: Se preparan
primero soluciones de paclitaxel y de cualquier compuesto
(I-VI) en etanol (u otro alcohol alifático) en
concentraciones apropiadas. Luego se mezclan alícuotas de estas
soluciones para formar una solución mezclada con la proporción molar
deseada de paclitaxel:compuesto (I-VI). La solución
obtenida se puede almacenar al menos durante 3 meses a bajas
temperaturas, sin un cambio apreciable en las propiedades del
compuesto (I-VI). Además, la formulación retiene sus
efectos citotóxicos durante un almacenamiento prolongado. Antes de
usarla, la solución se evapora al vacío para producir un sólido
ceroso que se disuelve en solución salina o en otro vehículo
comúnmente utilizado para infusión intravenosa a un paciente.
Taxol® (Bristol-Myers Squibb
Co.) es una comulación que contiene Paclitaxel (6 mg), etanol (396
mg) y Cremo-
phor® EL (527 mg). Los presentes inventores han mostrado que los compuestos de la invención, ácido N-(all-trans-Retinoil)-L-cistéico (I), ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-cistéico (II), ácido N-(all-trans-Retinoil)-L-homocistéico (III), ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-homocistéico (IV), ácido N-(all-trans-Retinoil)-L-cisteinsulfínico (V), y ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-cisteinsulfínico (VI), tienen excelente solubilidad en la preparación comercialmente disponible de Taxol®. Por lo tanto es posible mejorar fácilmente la formulación convencional de paclitaxel utilizando los compuestos de la invención. Se prepara una solución de etanol de uno de los compuestos de ácido N-(all-trans-Retinoil)-L-cistéico (I), ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-cistéico (II), ácido N-(all-trans-Retinoil)-L-homocistéico (III), ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-homocistéico (IV), ácido N-(all-trans-Retinoil)-L-cisteinsulfínico (V), o de ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-cisteinsulfínico (VI). La solución obtenida se evapora al vacío para producir un sólido ceroso después de lo cual se añade Taxol®, disolviendo el sólido ceroso. La emulsión de Taxol® forma un sistema líquido con los compuesto (I-VI) incluso con una relación molar de paclitaxel con respecto al compuesto (I-VI) mayor a 1:20.
phor® EL (527 mg). Los presentes inventores han mostrado que los compuestos de la invención, ácido N-(all-trans-Retinoil)-L-cistéico (I), ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-cistéico (II), ácido N-(all-trans-Retinoil)-L-homocistéico (III), ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-homocistéico (IV), ácido N-(all-trans-Retinoil)-L-cisteinsulfínico (V), y ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-cisteinsulfínico (VI), tienen excelente solubilidad en la preparación comercialmente disponible de Taxol®. Por lo tanto es posible mejorar fácilmente la formulación convencional de paclitaxel utilizando los compuestos de la invención. Se prepara una solución de etanol de uno de los compuestos de ácido N-(all-trans-Retinoil)-L-cistéico (I), ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-cistéico (II), ácido N-(all-trans-Retinoil)-L-homocistéico (III), ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-homocistéico (IV), ácido N-(all-trans-Retinoil)-L-cisteinsulfínico (V), o de ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-cisteinsulfínico (VI). La solución obtenida se evapora al vacío para producir un sólido ceroso después de lo cual se añade Taxol®, disolviendo el sólido ceroso. La emulsión de Taxol® forma un sistema líquido con los compuesto (I-VI) incluso con una relación molar de paclitaxel con respecto al compuesto (I-VI) mayor a 1:20.
Los análisis para evaluar la citotoxicidad de
una formulación mejorada de paclitaxel (Taxol® más compuesto
I-VI) en las proporciones molares de
paclitaxel:compuesto I (hasta compuesto VI) desde 1:1 hasta 1:20, se
llevaron a cabo en cultivos de adenocarcinoma de seno humano (la
línea celular MDA-MB-231) los
resultados de estos análisis son similares a los resultados
obtenidos para la formulación de paclitaxel y compuesto I (hasta
VI) en solución salina. El grado de inhibición del crecimiento
celular para esta formulación mejorada de paclitaxel (Taxol® y
compuesto I-VI) en la proporción molar 1:10 se
incrementó casi en un 50% (comparado con aquel de Taxol® solo).
La presente invención ejemplifica así el
concepto inventivo, de que los agentes terapéuticos escasamente
solubles pueden hacerse más solubles, y se puede reforzar su
eficacia terapéutica, por medio de la presentación de dice nuevas
formulaciones terapéuticas que contienen al paclitaxel como droga
contra el cáncer:
\vskip1.000000\baselineskip
1) paclitaxel y ácido
N-(all-trans-Retinoil)-L-cistéico
en solución salina,
2) paclitaxel y ácido
N-(13-cis-Retinoil)-L-cistéico
en solución salina,
3) paclitaxel y ácido
N-(all-trans-Retinoil)-L-homocistéico
en solución salina,
4) paclitaxel y ácido
N-(13-cis-Retinoil)-L-homocistéico
en solución salina,
5) paclitaxel y ácido
N-(all-trans-Retinoil)-L-cisteinsulfínico
en solución salina,
6) paclitaxel y ácido
N-(13-cis-Retinoil)-L-
cisteinsulfínico en solución salina,
7) Taxol® y ácido
N-(all-trans-Retinoil)-L-cistéico,
8) Taxol® y ácido
N-(13-cis-Retinoil)-L-cistéico,
9) Taxol® y ácido
N-(all-trans-Retinoil)-L-homocistéico,
10) Taxol® y ácido
N-(13-cis-Retinoil)-L-homocistéico,
11) Taxol® y ácido
N-(all-trans-Retinoil)-L-
cisteinsulfínico, y
12) Taxol® y ácido
N-(13-cis-Retinoil)-L-
cisteinsulfínico.
\vskip1.000000\baselineskip
Estas formulaciones mostraron tanto buena
estabilidad física como química, lo cual se cree que reduce los
efectos conectados con la precipitación del paclitaxel por dilución.
También se cree que resuelve los problemas relacionados con los
requerimientos rigurosos relacionados con las instalaciones y
recipientes para la preparación y almacenamiento de las
preparaciones convencionales de paclitaxel.
Notablemente, los compuestos
(I-VI) tiene baja toxicidad, pero muestran una
significativa inhibición del crecimiento celular, incrementándose
el efecto en los ranos de concentración apropiados.
Los resultados obtenidos por los presentes
inventores han conducido al establecimiento para el desarrollo de
una técnica para la síntesis a gran escala de los compuestos
(I-VI), de las sales farmacéuticamente útiles de
los mismos, y en particular de las sales sódicas de los mismos. La
síntesis de los compuestos (I-VI) de la invención
involucra una acilación directa de los grupos amino del ácido
L-cistéico, del ácido
L-homocistéico, y del ácido
L-cisteinsulfínico por medio del ácido
carbónico-anhídrido del ácido carboxílico mezclados
en medio acuoso-orgánico, con un contenido de
Na_{2}CO_{3}. La solubilidad de las sales de sodio de los
compuestos (I-VI) en mezclas de
2-propanol-agua hace posible separar
los contaminantes insolubles (sales inorgánicas y aminoácidos de
partida). Los compuestos puros (I-VI) se obtienen
entonces por precipitación a partir de sus soluciones concentradas
en 2-propanol-agua utilizando una
mezcla de metanol-2-propanol.
El método anterior de síntesis desarrollado por
los inventores hace posible producir sales sódicas de los
compuestos (I-VI) con buenos rendimientos. El método
es simple y ahorra tiempo. Los productos finales se pueden preparar
en forma pura, sin la necesidad de cromatografía. Los compuestos
(I-VI) en forma de sales sódicas se pueden
almacenar en una solución de
2-propanol-agua 2:1 (v/v) o
etanol-agua 2:1 (v/v) al menos durante seis meses a
bajas temperaturas sin ningún cambio apreciable en sus propiedades.
Con el propósito de preparar las formulaciones de los compuestos
(I-VI) de la invención con paclitaxel o Taxol® se
convierten fácilmente las sales sódicas de estos compuestos en las
correspondientes formas ácidas, y se disuelven en metanol.
Los análisis para evaluar la citotoxicidad de
los compuestos I a VI, en la forma de sales sódicas ene. Rango de
concentración desde 10^{-11} Mhasta 10^{-6} M, se han llevado a
cabo en cultivos de células
MDA-MB-231, y revelaron la
siguiente dependencia: un incremente de las concentraciones de los
compuestos de la invención condujo a un mejoramiento de la
inhibición del crecimiento celular, logrando un valor cercano al 50%
para los compuestos I y II; un valor cercano al 35% para los
compuestos III y IV; y un valor cercano al 30% para los compuestos
V y VI.
Las sales sódicas de los compuestos I a VI se
convirtieron en las correspondientes formas ácidas de los compuestos
y se disolvieron en metanol, con el propósito de preparar las
formulaciones de paclitaxel/compuesto (I-VI). Con
la misma concentración de paclitaxel, la formulación de paclitaxel y
de compuesto I, o de paclitaxel y de compuesto II, exhibieron una
alta inhibición en el crecimiento celular cercana al 70% (cercana al
45% comparada con el paclitaxel solo como control positivo); la
formulación de paclitaxel y de compuesto III o de paclitaxel y de
compuesto IV exhibió una inhibición en el crecimiento celular
cercana al 60% (cercana al 30% comparada con el paclitaxel solo
como control positivo); la formulación de paclitaxel y de compuesto
V o de paclitaxel y de compuesto VI exhibió una inhibición en el
crecimiento celular cercana al 55% (cercana al 25% comparada con el
paclitaxel solo como control positivo). La proporción molar de
paclitaxel:compuesto (I-VI) era de 1:7.
Las sales sódicas de los compuestos
(I-VI) fueron convertidas en las formas ácidas
correspondientes de los compuestos y disueltas en Taxol® para
prepara las formulaciones de Taxol®/compuesto
(I-VI).
El grado de inhibición del crecimiento celular
para la formulación de Taxol®/compuesto I o de Taxol®/compuesto II
fue cercano al 75% (cercano al 50% comparado con el Taxol® solo como
control positivo); para la formulación de Taxol®/compuesto III o de
Taxol®/compuesto IV, la inhibición fue cercana al 65% (cercana al
35% comparado con el Taxol® solo como control positivo); para la
formulación de Taxol®/compuesto V o de Taxol®/compuesto VI, cercana
al 60% (cercana al 30% comparado con el Taxol® solo como control
positivo). La proporción molar de paclitaxel:compuesto
(I-VI) fue de 1:10.
Los compuestos (I-VI) combinan
sorprendentemente una habilidad para la inhibición del crecimiento
de células tumorales con el poder para disolver paclitaxel, creando
micelas mezcladas en solución salina. Los inventores muestran
además que estos compuestos (I-VI) son capaces de
potenciar la eficacia del paclitaxel. Los presentes inventores
también han desarrollado un método de producción y produjeron una
composición liofilizada de compuesto
(I-VI)/paclitaxel en sistemas mezclados de
micelas.
La optimización de sistemas micelares mezclados
de compuestos (I-VI)/paclitaxel se llevó a cabo
utilizando diferentes proporciones molares de paclitaxel:compuesto
(I-VI) y de vehículo. Los sistemas micelares
mezclados de acuerdo con la invención no causaron precipitación de
la droga por dilución 100 veces y más en soluciones acuosas.
Se mezclaron las soluciones de paclitaxel y el
compuesto (I-VI) en metanol en diferentes
proporciones molares de paclitaxel:compuesto (I-VI)
iguales a 1:3, 1:5 y 1:7. Después de la evaporación del solvente
orgánico a presión reducida, se disolvió la película seca
resultante por medio de la adición de agua destilada o amortiguador
de acetato de sodio 0,05 M, pH 5,6 o solución al 10% de etanol o
solución 0,15 M de NaCl o amortiguador de acetato de sodio 0,05 M,
pH 5,6 en solución al 10% de etanol para obtener una solución
micelar mezclada de compuesto (I-VI)/paclitaxel.
Estas soluciones se filtraron a través de un filtro estéril de 0,22
\mum y se almacenaron a 4ºC. Todos estos sistemas prototipo
produjeron una significativa actividad antitumoral in vitro
durante tres semanas. No se observó precipitación u otro tipo de
cambios brutos durante el almacenamiento.
Las micelas mezcladas no parecieron ser muy
estables en solución. Las preparaciones de compuesto
(I-VI)/pacli-
taxel en sistemas micelares mezclados en la proporción molar paclitaxel:compuesto (I-VI) de 1:7 se liofilizaron (como solución acuosa, W o solución en amortiguador de acetato de sodio 0,05 M, pH 5,6, SAB) y se almacenaron el forma de polvo durante 6 meses a 4ºC. Las preparaciones de compuesto (I-VI)/paclitaxel en sistemas micelares mezclados en forma seca mostraron ser estables durante un periodo de tiempo suficiente en espera de uso. No hubo cambio en la concentración de los ingredientes activos al menos durante un almacenamiento de 6 meses a 4ºC.
taxel en sistemas micelares mezclados en la proporción molar paclitaxel:compuesto (I-VI) de 1:7 se liofilizaron (como solución acuosa, W o solución en amortiguador de acetato de sodio 0,05 M, pH 5,6, SAB) y se almacenaron el forma de polvo durante 6 meses a 4ºC. Las preparaciones de compuesto (I-VI)/paclitaxel en sistemas micelares mezclados en forma seca mostraron ser estables durante un periodo de tiempo suficiente en espera de uso. No hubo cambio en la concentración de los ingredientes activos al menos durante un almacenamiento de 6 meses a 4ºC.
Por reconstitución ya sea con agua destilada, o
con amortiguador de acetato de sodio 0,05 M, pH 5,6, o etanol al
10%, o solución 0,15 M de NaCl, o amortiguador de acetato de sodio
0,05 M, pH 5,6 en etanol al 10%, se obtuvo inmediatamente una
solución clara.
Las preparaciones del compuesto
(I-VI) seco/paclitaxel en sistemas micelares
mezclados (OF) que fueron reconstituidas con amortiguador de
acetato de sodio 0,05 M (W/SAB) o las que fueron liofilizadas como
la solución en amortiguador de acetato de sodio 0,05 M y
reconstituidas con agua (SAB/W) exhiben la mejor acción citotóxica
sobre líneas celulares MDA-MB-231.
La acción citotóxica fue similar a aquella de las formulaciones de
compuesto (I-VI)/paclitaxel en solución salina
(Tabla 1):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Las formulaciones de la invención se comparan
favorablemente con Taxol®, pero se cree que remueven o alivian los
afectos adversos asociados a Cremophor® EL. Los análisis in
vitro muestran resultados notables y existen razones
sustanciales para creer que la actividad farmacológica en pacientes
humanos se mejora, comparada con aquella de formulaciones
convencionales de paclitaxel.
Consecuentemente, la presente invención hace
posible un método para preparar una formulación soluble en agua de
paclitaxel, que comprende las etapas de disolver paclitaxel en un
primer solvente, disolver un compuesto (I-VI) en un
segundo solvente, mezclar las alícuotas de las soluciones
resultantes de paclitaxel y dicho compuesto en una proporción molar
deseada, y evaporar la mezcla resultante hasta sequedad.
Además, la invención hace posible un método para
la preparación de una formulación mejorada soluble en agua de
Taxol®, que comprende la etapa de disolver un compuesto
(I-VI) en un solvente, evaporar la alícuota deseada
de la solución resultante hasta sequedad y disolver el residuo en
Taxol®.
Además, la invención hace posible un método para
la preparación de una formulación estable en almacenamiento de
paclitaxel, que comprende las etapas de disolver paclitaxel en un
primer solvente, disolver un compuesto (I-VI) en un
segundo solvente, mezclar las alícuotas de las soluciones
resultantes de paclitaxel y dicho compuesto en una proporción molar
deseada.
Además, la invención hace posible un método para
la preparación de la formulación de paclitaxel para administrarla a
un paciente, que comprende las etapas de disolver paclitaxel en un
primer solvente, disolver un compuesto (I-VI) en un
segundo solvente, mezclar las alícuotas de las soluciones
resultantes de paclitaxel y dicho compuesto en una proporción molar
deseada, evaporar la mezcla resultante hasta sequedad formando un
residuo de paclitaxel y de dicho compuesto, disolver dicho residuo
en una solución acuosa, la liofilización de la solución formada,
seguido por la reconstitución del producto liofilizado utilizando un
vehículo adecuado para administrarlo a un paciente.
Se ilustrará la invención con más detalle en los
siguientes ejemplos no limitantes.
Los ácidos all-trans-Retinóico,
13-cis-Retinóico,
L-cistéico, L-homocistéico, y
L-cisteinsulfínico se adquirieron a Sigma Chemicals
Co., St. Louis, MO, Estados Unidos de América. Todos los otros
reactivos químicos y solventes fueron adquiridos a Aldrich Chemical
Co.
Los espectros de RMN ^{1}H se determinaron a
400 MHz utilizando un espectrómetro marca Varian modelo
Unity-400. Se determinaron los espectros para las
formas ácidas de los compuestos, no obstante que se utilizaron los
derivados del ácido L-homocistéico III y IV en la
forma de sales sódicas. Se utilizó DMSO-d_{6} como
solvente.
Se utilizaron placas prerrecubiertas con gel de
sílice 60 de Merck para cromatografía en capa delgada (TLC) y se
las desarrolló en un sistema de solventes de cloroformo : metanol :
ácido acético : agua (65:25:5:5, v/v/v/v). La detección de los
compuestos sobre placas de TLC se logró rociando con H_{2}SO_{4}
en metanol, calentando a 150ºC, o utilizando una solución de
ninhidrina al 0,3% en 1-butanol-ácido acético 100:3
(v/v).
La determinación de las concentraciones de los
compuestos sintetizados se llevó a cabo por medio de un espectro UV
(espectrofotómetro marca Shimadzu modelo
UV-mini-1240, \lambda \div
4250-500 nm, \lambda_{max} 346 nm,
\varepsilon 45000, MeOH) para los derivados del ácido
all-trans-retinóico, y por peso para los derivados
del ácido 13-cis-retinóico. Las concentraciones determinadas
por medio del espectro UV fueron iguales a los pesos de las
muestras.
Los compuestos sintetizados (en ácido fórmico)
son solubles en cloroformo, THF, etanol, metanol, y en etanol
acuoso al 70%. Las sales de sodio de los derivados de los ácidos
L-cistéico y L-cisteinsulfínico (I,
II, V, VI) son solubles únicamente en mezclas que contienen agua
(por ejemplo, metanol-agua,
etanol-agua, THF-agua, etc.). Las
sales de sodio de los derivados del ácido
L-homocistéico (III, IV) se disuelven también en
metanol y en algunas mezclas que contienen metanol (por ejemplo,
cloroformo-metanol, THF-metanol,
etc.).
Todas las etapas de la síntesis se llevaron a
cabo en atmósfera de nitrógeno seco.
Se adquirió el paclitaxel a Sigma (St. Louis,
MO, Estados Unidos de América) y se adquirió el Taxol® a
Bristol-Myers Squibb Co. Se adquirió la línea
celular MDA-MB-231 de adenocarcinoma
de seno humano de la American Type Culture Collection
(ATTC-HTB-26, Lot. 1227150). Se
propagó la línea celular por medio del cultivo en frascos Nunclon
de 25 cm^{2} (Nunc A/S, Dinamarca) en Medio Esencial Mínimo de
Eagle (MEM), que contiene antibióticos y está suplementado con
suero fetal bovino al 10% (v/v) (FBS) (Sigma, St. Louis, MO, Estados
Unidos de América). Se mantuvieron los cultivos en medio de
crecimiento a 37ºC en una atmósfera húmeda, 95% de aire y 5% de
CO_{2}.
Se preparó una suspensión de células de tumor
(60 x 10^{3} células/mL) en MEM con FBS al 5% y antibióticos. Se
sembró la suspensión celular (200 \muL) en pozos de placas de 96
micropozos de Nunclon (Nunc A/S, Dinamarca) con una densidad de 12
x 10^{3} células/pozo. Las soluciones de las drogas que van a ser
analizadas fueron añadidas a los cultivos el día 0 o el día 1 en
volúmenes de 2 \muL. En todas las casas, las células se incubaron
durante 3 días.
Al final del período de incubación, se
desprendieron las células adheridas por medio de tripsinización y se
contó el número de células viables utilizando análisis de exclusión
con colorante azul tripán y un hemocitómetro.
Todos los experimentos se llevaron a cabo al
menos dos veces y los recuentos de células se hicieron por
triplicado para cada concentración de droga. Cada control y series
de análisis consistieron de 6-8 cultivos. Los
resultados se expresan como el número medio de células \pm SD
(Desviación Estándar) y las diferencias entre las series de control
y de análisis fueron evaluadas por medio de la prueba t de Student.
La citotoxicidad de cada droga analizada fue evaluada por medio del
grado de inhibición del crecimiento celular. La inhibición del
crecimiento celular se evaluó de la siguiente forma:
Inhibición del
crecimiento celular, % = \frac{Control \ \text{-} \ Serie \ de \
Prueba}{Control} x
100
Se disolvieron ácido all-trans
Retinóico (150 mg, 0,5 mmol) y trietilamina (71 \muL, 0,51 mmol)
en 1 ml de tetrahidrofurano anhidro, después de lo cual se añadió
acetonitrilo anhidro (2 ml), se enfrió la mezcla a -20ºC, y se
añadieron 66 \mul (0,51 mmol) de cloroformato de butilo. Después
de 30 min, la mezcla, libre del clorhidrato de trietilamina
precipitado, se pipeteó en una solución de monohidrato de ácido
L-cistéico (140 mg, 0,75 mmol) en 3 ml de
Na_{2}CO_{3} 1 M y 1,5 ml de H_{2}O. Se agitó la mezcla
obtenida aproximadamente durante 5 horas a 20-25ºC,
se la acidificó con KHSO_{4} 1 M a pH 3-4 y se la
filtró. Se extrajo la solución con
cloroformo-2-propanol-metanol
(2:1:1, v/v/v, 15 ml) y se la concentró a presión reducida. Se
añadió la mezcla de metanol-agua (1:1, v/v, 15 ml)
al residuo. Se lavó la suspensión obtenida con éter (2x10 ml), se
evaporó bajo presión reducida, se disolvió en 10 ml de metanol y se
filtró. Después de la evaporación a presión reducida, se disolvió
el residuo en 7 ml de tetrahidrofurano anhidro, se enfrió a -20ºC y
se centrifugó (3000 rpm, -20ºC, 20 min). Se evaporó el sobrenadante
claro a presión reducida para producir un sólido ceroso de color
amarillo. Rendimiento: 40%.
R_{f} 0.30-0.35. RMN ^{1}H
(CD_{3}SOCD_{3}, 400 MHz) \delta 1.00 [6H, s,
C(CH_{3})_{2}], 1.42 y 1.55 [2H+2H, 2m,
CH_{2}CH_{2}C(CH_{3})_{2}], 1.66
[3H, s, CH_{3}C=CC(CH_{3})_{2}], 1.94
[3H, s,
CH_{3}C=(CH)_{3}C(CH_{3})CHCO],
2.00 (2H, m, CH_{2}C=), 2.25 (3H, s,
CH_{3}C=CHCO), 2.79-2.90 (2H, m,
SCH_{2}), 4.40 (1H, m, NCH), 5.84 (1H, s,
=CHCO), 6.10-6.35 [4H, m,
CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 6.91
(1H, dd, J 15.2, 11.5 Hz, CHCH=CH), 8.08 (1H, d,
J 6.4 Hz, NH), \sim 12.4 (1H, br s,
CO_{2}H).
Se prepararon soluciones iniciales del compuesto
I en concentraciones desde 0,005 hasta 5,0 mg/ml por medio de la
disolución de la sustancia seca en solución salina. Se prepararon
soluciones salinas del compuesto I con las siguientes
concentraciones: 0,005; 0,05; 0,5; 1,0 y 5,0 mg/ml. A partir de
estas soluciones, se prepararon soluciones de trabajo en MEM con
FBS al 5% para añadirlas a los cultivos en una concentración de 4
mM.
Se trataron los cultivos de la línea celular
MDA-MB-231 con soluciones del
compuesto I después de la siembra de células el día 1. Se añadieron
alícuotas de las soluciones de trabajo (2 \muL) a cultivos de 200
\muL hasta una concentración final de 40 nM en los cultivos. En
los cultivos de control, se añadieron 2 \muL de medio con FBS al
5% como control para el solvente. Después de cultivar por dos días
consecutivos, se hizo un recuento del número de células vivas en
los cultivos, y se calculó el grado de inhibición del crecimiento
de la línea celular MDA-MB-231 para
evaluar la citotoxicidad de las soluciones analizadas del compuesto
I.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (49,9 \pm 3,85) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con soluciones del
compuesto I tenían el siguiente número de células vivas:
\vskip1.000000\baselineskip
0.005 mg/mL: (33,3 \pm 2,55) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 33.3% (p < 0.01);
0.05 mg/mL: (33,9 \pm 2,78) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 32.1% (p < 0.01);
0.5 mg/mL: (34,2 \pm 5,09) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 31,5% (p < 0,05);
1.0 mg/mL: (30,8 \pm 3,53) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 38,3% (p < 0,01);
5.0 mg/mL: (36,1 \pm 4,10) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 27,7% (p < 0,05).
\vskip1.000000\baselineskip
Se observa por lo tanto, que el compuesto I (en
una concentración de 40 nM) ejerce una acción citotóxica
significativa en cultivos de adenocarcinoma de seno humano (la
línea celular MDA-MB-231). Una
acción citotóxica más pronunciada es desplegada por la solución,
preparada a partir de una solución salina inicial del compuesto I en
una concentración de 1 mg/mL. En este caso el grado de inhibición
del crecimiento celular fue del 38,3% (p < 0,01).
Se preparó una solución salina patrón inicial
del compuesto I (1 mg/ml) por medio de la disolución de la sustancia
seca en solución salina. A partir de esta solución se prepararon
soluciones de trabajo del compuesto I en MEM con FBS al 5% en
diferentes concentraciones para añadirlas a los cultivos, por medio
de disoluciones consecutivas.
Se trataron los cultivos de células
MDA-MB-231 con soluciones de droga
en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la siembre el día 1. Se
añadieron alícuotas de las soluciones de trabajo (2 \muL) con
diferentes concentraciones del compuesto I a cultivos de 200 \muL
hasta concentraciones finales del compuesto I desde 10^{-11} hasta
10^{-6} mol/L en los cultivos. En los cultivos de control, se
añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5% como control para el
solvente. Después de cultivar durante 2 días consecutivos, se hizo
un recuento del número de células vivas en los cultivos y se
calculó el grado de inhibición del crecimiento de las células
MDA-MB-231 para la evaluación de la
citotoxicidad de las soluciones analizadas del compuesto I.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (49,9 \pm 3,85) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con soluciones del
compuesto I tenían el siguiente número de células vivas:
\vskip1.000000\baselineskip
10^{-11} mol/L: (36,3 \pm 3,82) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 27,3% (p < 0,05);
10^{-10} mol/L: (40,6 \pm 1,69) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 18,6% (p < 0,05);
10^{-9} mol/L: (40,0 \pm 2,31) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 19,8% (p < 0,05);
10^{-8} mol/L: (35,0 \pm 4,38) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 29,9% (p < 0,05);
4 x 10^{-8} mol/L: (30,9 \pm 1,62) x
10^{3}, inhibición del crecimiento celular del 38,1% (p <
0,001);
10^{-7} mol/L: (30,4 \pm 1,83) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 39,1% (p < 0,001);
10^{-6} mol/L: (28,9 \pm 2,68) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 42,1% (p < 0,001),
\vskip1.000000\baselineskip
Se observa por lo tanto, que el compuesto I
ejerce una acción citotóxica significativa contra las células
MDA-MB-231 de adenocarcinoma de seno
humano. El grado de inhibición del crecimiento celular se puede
incrementar hasta un 42,1% (p < 0,001) incrementando la
concentración del compuesto I.
Se preparó una solución patrón de paclitaxel en
etanol. Las soluciones de Taxol®, la formulación de
paclitaxel-compuesto I, y el compuesto I se
prepararon en solución salina. Se preparó una solución de trabajo de
cada droga en MEM con FBS al 5% en las siguientes concentraciones
para añadirla a los cultivos:
- Formulación:
- 8 x 10^{-7} mol/L de paclitaxel y 4 x 10^{-6} mol/L del compuesto I
- Compuesto I:
- 4 x 10^{-6} mol/L
- Paclitaxel:
- 8 x 10^{-7} mol/L
- Taxol®:
- 8 x 10^{-7} mol/L de paclitaxel
Se trataron los cultivos de células
MDA-MB-231 con soluciones de droga
en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la siembre el día 0. Se
añadieron alícuotas de las soluciones de trabajo (2 \muL) a
cultivos de 200 \muL hasta concentraciones finales de las drogas
en los cultivos:
- Formulación:
- 8 x 10^{-9} mol/L de paclitaxel y 4 x 10^{-8} mol/L del compuesto I
- Compuesto I:
- 4 x 10^{-8} mol/L
- Paclitaxel:
- 8 x 10^{-9} mol/L
- Taxol®:
- 8 x 10^{-9} mol/L de paclitaxel
En los cultivos de control, se añadieron 2
\muL de medio con FBS al 5% como control para el solvente. Después
de cultivar durante tres días consecutivos, se hizo un recuento del
número de células vivas en los cultivos y se calculó el grado de
inhibición del crecimiento de las células
MDA-MB-231 para evaluar la
citotoxicidad de cada droga analizada.
Los cultivos tratados con drogas tenían el
siguiente número de células vivas:
- Formulación:
- (8,1 \pm 0,65) x 10^{3}, inhibición celular del 70% (p < 0,001)
- Compuesto I:
- (16,3 \pm 2,50) x 10^{3}, inhibición celular del 39,6% (p < 0,05)
- Paclitaxel:
- (15,5 \pm 1,63) x 10^{3}, inhibición celular del 42,6% (p < 0,02)
- Taxol®:
- (14,7 \pm 2,33) x 10^{3}, inhibición celular del 45,6% (p < 0,02)
Se observó por lo tanto, que la formulación de
paclitaxel y del componente I ejerce un efecto citotóxico
significativo contra las células de adenocarcinoma de seno humano,
excediendo tanto a aquella del Taxol® (control positivo) y de
paclitaxel solo. La inhibición del crecimiento de células
MDA-MB-231 con referencia al Taxol®
fue de un 45% (p < 0,02). La acción citotóxica del compuesto I
solo, fue de un 39,6% (p < 0,05).
Se prepararon soluciones iniciales de la
formulación en solución salina en las proporciones molares
paclitaxel/compuesto I 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7 y 1:10. A partir de
estas soluciones se prepararon las soluciones de trabajo en MEM con
FBS al 5% para añadirlas a los cultivos. La concentración de
paclitaxel era igual a 10^{-6} M.
Los cultivos de células
MDA-MB-231 fueron tratados con
soluciones de droga en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la
siembra el día 1. Se añadieron alícuotas de las soluciones de
trabajo (2 \muL) a cultivos de 200 \muL hasta una concentración
final de paclitaxel en los cultivos igual a 10^{-8} M. En los
cultivos de control, se añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5%
como control para el solvente. Después de cultivar durante dos
días consecutivos, se calculó el número de células vivas en los
cultivos para la evaluación de la citotoxicidad de las soluciones
analizadas de la formulación.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (54,8 \pm 3,53) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con paclitaxel en una
concentración de 10 nM, contenían (37,6 \pm 2,12) x 10^{3}
células, y exhibieron una inhibición del crecimiento celular del
31,4% (p < 0,001).
Los cultivos, tratados con soluciones de la
formulación en las proporciones molares paclitaxel/compuesto I
iguales a 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7 y 1:10 en medio con FBS al 5%,
tenían el siguiente número de células vivas:
- 1:3: (25,7 \pm 1,46) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 53,1% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 31,6% (p < 0,001);
- 1:4: (28,0 \pm 1,78) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 48,9% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 25,5% (p < 0,01);
- 1:5: (22,8 \pm 2,13) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 58,4% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 39,4% (p < 0,001);
- 1:6: (21,7 \pm 1,52) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 60,4% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 42,3% (p < 0,001);
- 1:7: (21,6 \pm 1,81) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 60,6% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 42,6% (p < 0,001);
- 1:10: (20,3 \pm 1,21) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 63,0% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 46,0% (p < 0,001).
Se prepararon soluciones iniciales de la
formulación de la invención en las proporciones molares de
paclitaxel con relación al compuesto I de 1:1, 1:3, 1:6, 1:10, 1:15
y 1:20. A partir de estas soluciones se prepararon las soluciones
de trabajo en MEM con FBS al 5% para añadirlas a los cultivos. La
concentración de paclitaxel era igual a 10^{-6} M.
Los cultivos de células
MDA-MB-231 fueron tratados con
soluciones de droga en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la
siembra el día 1. Se añadieron alícuotas de las soluciones de
trabajo (2 \muL) a cultivos de 200 \muL hasta una concentración
final de paclitaxel en los cultivos igual a 10^{-8} M. En los
cultivos de control, se añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5%
como control para el solvente. Después de cultivar durante dos
días consecutivos, se calculó el número de células vivas en los
cultivos para la evaluación de la citotoxicidad de las soluciones
analizadas.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (52,3 \pm 2,78) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con Taxol® en una
concentración de 10 nM, contenían (32,5 \pm 2,04) x 10^{3}
células, y exhibieron una inhibición del crecimiento celular del
37,9% (p < 0,001).
Los cultivos, tratados con soluciones de la
formulación de la invención (Taxol® + compuestos) en las
proporciones molares paclitaxel/compuesto I iguales a 1:1, 1:3,
1:6, 1:10, 1:15 y 1:20, en medio con FBS al 5%, tenían el siguiente
número de células vivas:
\newpage
- 1:1: (26,9 \pm 1,60) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 48,6% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 17,2% (p < 0,05);
- 1:3: (22,2 \pm 1,79) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 57,6% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 31,7% (p < 0,002);
- 1:6: (17,5 \pm 1,34) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 66,5% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 46,2% (p < 0,001);
- 1:10: (15,8 \pm 1,38) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 69,8% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 51,4% (p < 0,001);
- 1:15: (15,1 \pm 1,47) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 71,1% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 53,5% (p < 0,001);
- 1:20: (14,4 \pm 1,16) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 72,5% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 55,7% (p < 0,001).
Se disolvieron el ácido
13-cis-Retinóico (150 mg, 0,5 mmol) y
trietilamina (71 \mul, 0,51 mmol) en 1 ml de tetrahidrofurano
anhidro, después de lo cual se añadió acetonitrilo anhidro (2 ml),
se enfrió la mezcla a -20ºC, y se añadieron 66 \mul (0,51 mmol)
de cloroformato de butilo. Después de 30 min, la mezcla, libre del
clorhidrato de trietilamina precipitado, se pipeteó en una solución
de monohidrato de ácido L-cistéico (140 mg, 0,75
mmol) en 3 ml de Na_{2}CO_{3} 1 M y 1,5 ml de H_{2}O. Se agitó
la mezcla obtenida aproximadamente durante 5 horas a
20-25ºC, se la acidificó con KHSO_{4} 1 M a pH
3-4 y se la filtró. Se extrajo la solución con
cloroformo-2-propanol-metanol
(2:1:1, v/v/v, 15 ml) y se la concentró a presión reducida. Se
añadió la mezcla de metanol-agua (1:1, v/v, 15 ml)
al residuo. Se lavó la suspensión obtenida con éter (2x10 ml), se
evaporó bajo presión reducida, se disolvió en 10 ml de metanol y se
filtró. Después de la evaporación a presión reducida, se disolvió
el residuo en 7 ml de tetrahidrofurano anhidro, se enfrió a -20ºC y
se centrifugó (3000 rpm, -20ºC, 20 min). Se evaporó el sobrenadante
claro a presión reducida para producir un sólido ceroso de color
amarillo. Rendimiento: 30%.
R_{f} 0.30-0.35. RMN ^{1}H
(CD_{3}SOCD_{3}, 400 MHz) \delta 1.00 [6H, s,
C(CH_{3})_{2}], 1.42 y 1.57 [2H+2H, 2m,
CH_{2}CH_{2}C
(CH_{3})_{2}], 1.67 [3H, s, CH_{3}C=CC(CH_{3})_{2}], 1.95 y 1.97 [3H+3H, 2s, CH_{3}C=(CH)_{3}C(CH_{3})CHCO], 1.99 (2H, m, CH_{2}C=), 2.83 (2H, m, SCH_{2}), 4.38 (1H, m, NCH), 5.68 (1H, s, =CHCO), 6.12-6.26 [3H, m, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 6.87 (1H, dd, J 15.4, 11.4 Hz, CHCH=CH), 7.85 [1H, d, J 15.4 Hz, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 8.03 (1H, d, J6,4 Hz, NH), \sim 12.4 (1H, br s, CO_{2}H).
(CH_{3})_{2}], 1.67 [3H, s, CH_{3}C=CC(CH_{3})_{2}], 1.95 y 1.97 [3H+3H, 2s, CH_{3}C=(CH)_{3}C(CH_{3})CHCO], 1.99 (2H, m, CH_{2}C=), 2.83 (2H, m, SCH_{2}), 4.38 (1H, m, NCH), 5.68 (1H, s, =CHCO), 6.12-6.26 [3H, m, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 6.87 (1H, dd, J 15.4, 11.4 Hz, CHCH=CH), 7.85 [1H, d, J 15.4 Hz, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 8.03 (1H, d, J6,4 Hz, NH), \sim 12.4 (1H, br s, CO_{2}H).
Se prepararon soluciones iniciales del compuesto
II en concentraciones desde 0,005 hasta 5,0 mg/ml por medio de la
disolución de la sustancia seca en solución salina. Se prepararon
soluciones salinas del compuesto II con las siguientes
concentraciones: 0,005; 0,05; 0,5; 1,0 y 5,0 mg/ml. A partir de
estas soluciones, se prepararon soluciones de trabajo en MEM con
FBS al 5% para añadirlas a los cultivos en una concentración de 4
mM.
Se trataron los cultivos de la línea celular
MDA-MB-231 con soluciones del
compuesto II después de la siembra de células el día 1. Se
añadieron alícuotas de las soluciones de trabajo (2 \muL) a
cultivos de 200 \muL hasta una concentración final de 40 nM en
los cultivos. En los cultivos de control, se añadieron 2 \muL de
medio con FBS al 5% como control para el solvente. Después de
cultivar por dos días consecutivos, se hizo un recuento del número
de células vivas en los cultivos, y se calculó el grado de
inhibición del crecimiento de la línea celular
MDA-MB-231 para evaluar la
citotoxicidad de las soluciones analizadas del compuesto II.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (51,6 \pm 3,46) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con soluciones del
compuesto I tenían el siguiente número de células vivas:
\vskip1.000000\baselineskip
0.005 mg/mL: (34,8 \pm 3,27) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 32,6% (p < 0.01);
0.05 mg/mL: (33,4 \pm 2,91) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 35,3% (p < 0.002);
0.5 mg/mL: (33,1 \pm 3,01) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 35,9% (p < 0,002);
1.0 mg/mL: (32,2 \pm 2,14) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 37,6% (p < 0,001);
5.0 mg/mL: (36,5 \pm 3,88) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 29,3% (p < 0,02).
\vskip1.000000\baselineskip
Se observa por lo tanto, que el compuesto n - en
una concentración de 40 nM - ejerce una acción citotóxica
significativa en cultivos de la línea celular
MDA-MB-231 de adenocarcinoma de seno
humano. Una acción citotóxica más pronunciada es desplegada por la
solución, preparada a partir de una solución salina inicial del
compuesto I en una concentración de 1 mg/mL. En este caso el grado
de inhibición del crecimiento celular fue del 37,6% (p <
0,001).
Se preparó una solución salina patrón inicial
del compuesto II (1 mg/ml) por medio de la disolución de la
sustancia seca en solución salina. A partir de esta solución se
prepararon soluciones de trabajo del compuesto II en MEM con FBS al
5% en diferentes concentraciones para añadirlas a los cultivos, por
medio de disoluciones consecutivas.
Se trataron los cultivos de células
MDA-MB-231 con soluciones de droga
en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la siembre el día 1. Se
añadieron alícuotas de las soluciones de trabajo (2 \muL) con
diferentes concentraciones del compuesto II a cultivos de 200
\muL hasta concentraciones finales del compuesto I desde
10^{-11} hasta 10^{-6} mol/L en los cultivos. En los cultivos
de control, se añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5% como
control para el solvente. Después de cultivar durante 2 días
consecutivos, se hizo un recuento del número de células vivas en
los cultivos y se calculó el grado de inhibición del crecimiento de
las células MDA-MB-231 para la
evaluación de la citotoxicidad de las soluciones analizadas del
compuesto II.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (51,6 \pm 3,46) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con soluciones del
compuesto II tenían el siguiente número de células vivas:
\vskip1.000000\baselineskip
10^{-11} mol/L: (36,7 \pm 3,65) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 28,9% (p < 0,02);
10^{-10} mol/L: (42,4 \pm 1,93) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 17,8% (p < 6,05);
10^{-9} mol/L: (40,5 \pm 2,11) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 21,5% (p < 0,02);
10^{-8} mol/L: (37,4 \pm 3,86) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 27,5% (p < 0,02);
4 x 10^{-8} mol/L: (32,6 \pm 2,52) x
10^{3}, inhibición del crecimiento celular del 36,8% (p <
0,001);
10^{-7} mol/L: (31,8 \pm 2,05) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 38,4% (p < 0,001);
10^{-6} mol/L: (30,0 \pm 2,14) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 41,9% (p < 0,001).
\vskip1.000000\baselineskip
Se observa por lo tanto, que el compuesto II
ejerce una acción citotóxica significativa contra las células de
adenocarcinoma de seno humano. El grado de inhibición del
crecimiento celular se puede incrementar con una concentración
creciente del compuesto II, hasta un 41,9% (p < 0,001).
Se preparó una solución patrón de paclitaxel en
etanol. Las soluciones de Taxol®, la formulación de
paclitaxel-compuesto II, y el compuesto II se
prepararon en solución salina. Se preparó una solución de trabajo de
cada droga en MEM con FBS al 5% en las siguientes concentraciones
para añadirla a los cultivos:
- Formulación:
- 8 x 10^{-7} mol/L de paclitaxel y 4 x 10^{-6} mol/L del compuesto I
- Compuesto II:
- 4 x 10^{-6} mol/L
- Paclitaxel:
- 8 x 10^{-7} mol/L
- Taxol®:
- 8 x 10^{-7} mol/L de paclitaxel
Se trataron los cultivos de células
MDA-MB-231 con soluciones de droga
en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la siembre el día 0. Se
añadieron alícuotas de las soluciones de trabajo (2 \muL) a
cultivos de 200 \muL hasta concentraciones finales de las drogas
en los cultivos:
- Formulación:
- 8 x 10^{-9} mol/L de paclitaxel y 4 x 10^{-8} mol/L del compuesto I
- Compuesto II:
- 4 x 10^{-8} mol/L
- Paclitaxel:
- 8 x 10^{-9} mol/L
- Taxol®:
- 8 x 10^{-9} mol/L de paclitaxel
En los cultivos de control, se añadieron 2
\muL de medio con FBS al 5% como control para el solvente. Después
de cultivar durante tres días consecutivos, se hizo un recuento del
número de células vivas en los cultivos y se calculó el grado de
inhibición del crecimiento de las células
MDA-MB-231 para evaluar la
citotoxicidad de cada droga analizada.
Los cultivos tratados con drogas tenían el
siguiente número de células vivas:
- Formulación:
- (14,7 \pm 2,61) x 10^{3}, inhibición celular del 68,2% (p < 0,001)
- Compuesto II:
- (29,9 \pm 2,38) x 10^{3}, inhibición celular del 35,3% (p < 0,01)
- Paclitaxel:
- (26,3 \pm 1,96) x 10^{3}, inhibición celular del 43,1% (p < 0,002)
- Taxol®:
- (25,5 \pm 2,15) x 10^{3}, inhibición celular del 44,8% (p < 0,001)
Esto muestra que la formulación de
paclitaxel-componente II ejerce un efecto citotóxico
significativo contra las células de adenocarcinoma de seno humano,
excediendo tanto a aquella del Taxol® (control positivo) y del
paclitaxel. La inhibición del crecimiento de células
MDA-MB-231 comparada con aquella del
Taxol® se incrementó en un 42,4% (p < 0,01). La acción
citotóxica del compuesto II solo, fue de un 35,3% (p < 0,01).
Se prepararon soluciones iniciales de la
formulación en solución salina en las proporciones molares
paclitaxel:compuesto II 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7 y 1:10. A partir de
estas soluciones se prepararon las soluciones de trabajo en MEM con
FBS al 5% para añadirlas a los cultivos. La concentración de
paclitaxel era igual a 10^{-6} M.
Los cultivos de células
MDA-MB-231 fueron tratados con
soluciones de droga en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la
siembra el día 1. Se añadieron alícuotas de las soluciones de
trabajo (2 \muL) a cultivos de 200 \muL hasta una concentración
final de paclitaxel en los cultivos igual a 10^{-8} M. En los
cultivos de control, se añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5%
como control para el solvente. Después de cultivar durante dos
días consecutivos, se calculó el número de células vivas en los
cultivos para la evaluación de la citotoxicidad de las soluciones
analizadas de la formulación.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (53,2 \pm 2,84) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con paclitaxel en una
concentración de 10 nM, contenían (32,1 \pm 1,29) x 10^{3}
células, y exhibieron una inhibición del crecimiento celular del
39,7% (p < 0,001).
Los cultivos, tratados con soluciones de la
formulación en las proporciones molares de paclitaxel con respecto
al compuesto II iguales a 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7 y 1:10 en medio
con FBS al 5%, tenían el siguiente número de células vivas:
- 1:3: (22,4 \pm 2,75) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 57,9% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 30,2% (p < 0,01);
- 1:4: (21,3 \pm 2,46) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 60,0% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 33,6% (p < 0,01);
- 1:5: (19,8 \pm 2,37) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 62,8% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 38,3% (p < 0,001);
- 1:6: (18,7 \pm 2,03) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 64,8% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 41,7% (p < 0,001);
- 1:7: (18,1 \pm 1,89) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 66,0% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 43,6% (p < 0,001);
- 1:10: (17,5 \pm 1,24) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 67,1% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 45,5% (p < 0,001).
Se prepararon soluciones iniciales de la
formulación de la invención en las proporciones molares de
paclitaxel con relación al compuesto II iguales a 1:1, 1:3, 1:6,
1:10, 1:15 y 1:20. A partir de estas soluciones se prepararon las
soluciones de trabajo en MEM con FBS al 5% para añadirlas a los
cultivos. La concentración de paclitaxel era igual a 10^{-6}
M.
Los cultivos de células
MDA-MB-231 fueron tratados con
soluciones de droga en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la
siembra el día 1. Se añadieron alícuotas de las soluciones de
trabajo (2 \muL) a cultivos de 200 \muL hasta una concentración
final de paclitaxel en los cultivos igual a 10^{-8} M. En los
cultivos de control, se añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5%
como control para el solvente. Después de cultivar durante dos
días consecutivos, se calculó el número de células vivas en los
cultivos para la evaluación de la citotoxicidad de las soluciones
analizadas.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (48,7 \pm 3,12) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con Taxol® en una
concentración de 10 nM, contenían (29,5 \pm 2,68) x 10^{3}
células, y exhibieron una inhibición del crecimiento celular del
39,4% (p < 0,001).
Los cultivos, tratados con soluciones de la
formulación de la invención (Taxol® + compuesto II) en las
proporciones molares paclitaxel/compuesto II iguales a 1:1, 1:3,
1:6, 1:10, 1:15 y 1:20, en medio con FBS al 5%, tenían el siguiente
número de células vivas:
- 1:1: (19,4 \pm 2,37) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 60,2% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 34,2% (p < 0,02);
- 1:3: (18,2 \pm 2,28) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 62,6% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 38,3% (p < 0,01);
- 1:6: (16,0 \pm 2,03) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 67,1% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 45,8% (p < 0,002);
- 1:10: (14,9 \pm 1,81) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 69,4% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 49,5% (p < 0,001);
- 1:15: (14,2 \pm 1,85) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 70,8% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 51,9% (p < 0,001);
- 1:20: (13,6 \pm 1,59) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 72,1% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 53,9% (p < 0,001).
Los ejemplos 13-18 se relacionan
con un método de síntesis no cubierto por las reivindicaciones.
Se disolvieron el ácido
all-trans-Retinóico (150 mg, 0,5 mmol) y
trietilamina (71 \mul, 0,51 mmol) en 1 ml de tetrahidrofurano
anhidro, después de lo cual se añadió acetonitrilo anhidro (2 ml),
se enfrió la mezcla a -20ºC, y se añadieron 66 \mul (0,51 mmol)
de cloroformato de butilo. Después de 30 min, la mezcla, libre del
clorhidrato de trietilamina precipitado, se pipeteó en una solución
de monohidrato de ácido L-cistéico (94 mg, 0,5
mmol) en 3 ml de Na_{2}CO_{3} 1 M y 1,5 ml de H_{2}O. Se agitó
la mezcla obtenida aproximadamente durante 5 horas a
20-25ºC, se la diluyó 15 ml de
2-propanol-agua 2:1 (v/v), se la
filtró y se la concentró a presión reducida aproximadamente hasta 5
ml. Se añadieron entonces 20 ml de
2-propanol-agua 5:1 (v/v) y se
agitó la solución durante unos pocos minutos mientras se formaba un
precipitado blanco. Se filtró la suspensión obtenida, se la
concentró como se describió anteriormente, y se la diluyó con 20 ml
de 2-propanol-metanol 1:1 (v/v). Se
separó un precipitado de color amarillo del producto deseado, se lo
disolvió en 15 ml de 2-propanol-agua
2:1 (v/v) y se lo almacenó durante la noche a -18ºC con el
propósito de remover las trazas de impurezas. Después de la
remoción del material insoluble, se obtuvo una solución clara de
producto puro. Se utilizó esta solución para almacenamiento del
compuesto I.
\global\parskip0.950000\baselineskip
Rendimiento: 40%.
R_{f} 0.30-0.35. RMN ^{1}H
(CD_{3}SOCD_{3}, 400 MHz) \delta 1.00 [6H, s,
C(CH_{3})_{2}], 1.43 y 1.56 [2H+2H, 2m,
CH_{2}CH_{2}C(CH_{3})_{2}], 1.67
[3H, s, CH_{3}C=CC(CH_{3})_{2}], 1.95
[3H, s, CH_{3}C=(CH)_{3}C(CH_{3})=CHCO],
1.99 (2H, m, CH_{2}C=), 2.25 (3H, s,
CH_{3}C=CH-CO), 2.78-2.89
(2H, m, SCH_{2}), 4.40 (1H, m, NCH), 5.84 (1H, s,
=CHCO), 6.11-6.36 [4H, m,
CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 6.91
(1H, dd, J 15.2, 11.5 Hz,
CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH), 8.07 (1H, d, J6,4
Hz, NH), \sim 12.4 (1H, br s, CO_{2}H).
Con el propósito de obtener la forma ácida del
compuesto I, se evaporó una solución del compuesto
(2-propanol-agua 2:1, v/v) a
presión reducida, se disolvió en agua, se la acidificó
cuidadosamente con HCl 0,1 M hasta pH 3,5 y se la extrajo con
cloroformo-2-propanol-metanol
(2:1:1, v/v/v). Después de la evaporación de los solventes
orgánicos a presión reducida, se disolvió el residuo en metanol seco
(aproximadamente 5 mg/mL), se lo almacenó durante la noche a -18ºC,
se lo filtró y utilizó inmediatamente.
Este compuesto fue sintetizado como se describió
anteriormente para I, utilizando 150 mg (0,5 mmol) de ácido
13-cis-retinóico y 94 mg (0,5 mmol) de
monohidrato del ácido L-cistéico.
Rendimiento: 35%.
R_{f} 0.30-0.35. RMN ^{1}H
(CD_{3}SOCD_{3}, 400 MHz) \delta 1.00 [6H, s,
C(CH_{3})_{2}], 1.43 y 1.57 [2H+2H, 2m,
CH_{2}CH_{2}C
(CH_{3})_{2}], 1.67 [3H, s, CH_{3}C=CC(CH_{3})_{2}], 1.95 y 1.98 [3H+3H, 2s, CH_{3}C=(CH)_{3}C(CH_{3})=CHCO], 1.99 (2H, m, CH_{2}C=), 2.82 (2H, m, SCH_{2}), 4.37 (1H, m, NCH), 5.68 (1H, s, =CHCO), 6.13-6.26 [3H, m, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 6.87 [1H, dd, J 15.4, 11.4 Hz, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 7,85 [1H, dd, J 15.4 Hz, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 8.07 (1H, d, J6,4 Hz, NH), \sim 12.4 (1H, br s, CO_{2}H).
(CH_{3})_{2}], 1.67 [3H, s, CH_{3}C=CC(CH_{3})_{2}], 1.95 y 1.98 [3H+3H, 2s, CH_{3}C=(CH)_{3}C(CH_{3})=CHCO], 1.99 (2H, m, CH_{2}C=), 2.82 (2H, m, SCH_{2}), 4.37 (1H, m, NCH), 5.68 (1H, s, =CHCO), 6.13-6.26 [3H, m, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 6.87 [1H, dd, J 15.4, 11.4 Hz, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 7,85 [1H, dd, J 15.4 Hz, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 8.07 (1H, d, J6,4 Hz, NH), \sim 12.4 (1H, br s, CO_{2}H).
Este compuesto fue sintetizado como se describió
anteriormente para I, utilizando 150 mg (0,5 mmol) de ácido
all-trans-retinóico y 92 mg (0,5 mmol) de
ácido L-homocistéico.
Rendimiento: 31%.
R_{f} 0.30-0.35. RMN ^{1}H
(CD_{3}SOCD_{3}, 400 MHz) \delta 1.00 [6H, s,
C(CH_{3})_{2}], 1.43 y 1.56 [2H+2H, 2m,
CH_{2}CH_{2}C
(CH_{3})_{2}], 1.67 [3H, s, CH_{3}C=CC(CH_{3})_{2}], 1.87 (2H, m, SCH_{2}CH_{2}), 1.94 [3H, s, CH_{3}C=(CH)_{3}C(CH_{3})=CHCO], 1.99 (2H, m, CH_{2}C=), 2,25 (3H, s, CH_{3}C=CHCO), 2.41 (2H, m, SCH_{2}), 3.94 (1H, m, NCH), 5.98 (1H, s, =CHCO), 6.11-6.32 [4H, m, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 6.86 [1H, dd, J 15.0, 11.5 Hz, =CHCH=CH], 7.43 (1H, d, J7,1 Hz, NH).
(CH_{3})_{2}], 1.67 [3H, s, CH_{3}C=CC(CH_{3})_{2}], 1.87 (2H, m, SCH_{2}CH_{2}), 1.94 [3H, s, CH_{3}C=(CH)_{3}C(CH_{3})=CHCO], 1.99 (2H, m, CH_{2}C=), 2,25 (3H, s, CH_{3}C=CHCO), 2.41 (2H, m, SCH_{2}), 3.94 (1H, m, NCH), 5.98 (1H, s, =CHCO), 6.11-6.32 [4H, m, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 6.86 [1H, dd, J 15.0, 11.5 Hz, =CHCH=CH], 7.43 (1H, d, J7,1 Hz, NH).
Este compuesto fue sintetizado como se describió
anteriormente para I, utilizando 150 mg (0,5 mmol) de ácido
13-cis-retinóico y 92 mg (0,5 mmol) del ácido
L-homocistéico.
Rendimiento: 25%.
R_{f} 0.30-0.35. RMN ^{1}H
(CD_{3}SOCD_{3}, 400 MHz) \delta 1.00 [6H, s,
C(CH_{3})_{2}], 1.42 y 1.56 [2H+2H, 2m,
CH_{2}CH_{2}C
(CH_{3})_{2}], 1.68 [3H, s, CH_{3}C=CC(CH_{3})_{2}], 1,87 (2H, m, SCH_{2}CH_{2}), 1.93 y 1.94 [3H+3H, 2s, CH_{3}C=(CH)_{3}C(CH_{3})=CH
CO], 1.99 (2H, m, CH_{2}C=), 2.41 (2H, m, SCH_{2}), 3.95 (1H, m, NCH), 5.83 (1H, s, =CHCO), 6.18 [3H, m, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 6.81 [1H, dd, J 15.4, 11.4 Hz, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 7,42 [1H, dd, J 7.3 Hz, NH], 7.93 [1H, d, J 15.4 Hz, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH].
(CH_{3})_{2}], 1.68 [3H, s, CH_{3}C=CC(CH_{3})_{2}], 1,87 (2H, m, SCH_{2}CH_{2}), 1.93 y 1.94 [3H+3H, 2s, CH_{3}C=(CH)_{3}C(CH_{3})=CH
CO], 1.99 (2H, m, CH_{2}C=), 2.41 (2H, m, SCH_{2}), 3.95 (1H, m, NCH), 5.83 (1H, s, =CHCO), 6.18 [3H, m, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 6.81 [1H, dd, J 15.4, 11.4 Hz, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 7,42 [1H, dd, J 7.3 Hz, NH], 7.93 [1H, d, J 15.4 Hz, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH].
Este compuesto fue sintetizado como se describió
anteriormente para I, utilizando 150 mg (0,5 mmol) del ácido
all-trans-retinóico y 77 mg (0,5 mmol) del
ácido L-cisteinsulfínico.
Rendimiento: 28%.
R_{f} 0.30-0.35. RMN ^{1}H
(CD_{3}SOCD_{3}, 400 MHz) \delta 1.00 [6H, s,
C(CH_{3})_{2}], 1.43 y 1.56 [2H+2H, 2m,
CH_{2}CH_{2}C(CH_{3})_{2}], 1.67
[3H, s, CH_{3}C=CC(CH_{3})_{2}], 1.96
[3H, s, CH_{3}C=(CH)_{3}C(CH_{3})=CHCO],
2.00 (2H, m, CH_{2}C=), 2.26 (3H, s,
CH_{3}C=CH-CO), 2.88-3.00
(2H, m, SCH_{2}), 4.51 (1H, m, NCH), 5.84 (1H, s,
=CHCO), 6.11-6.36 [4H, m,
CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 6.94 (1H, dd,
J 15.0, 11.4 Hz, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH),
8.47 (1H, d, J7.9 Hz, NH), \sim 12.6 (1H, br s,
CO_{2}H).
\global\parskip1.000000\baselineskip
Este compuesto fue sintetizado como se describió
anteriormente para I, utilizando 150 mg (0,5 mmol) del ácido
13-cis-retinóico y 77 mg (0,5 mmol) del ácido
L-cisteinsulfínico.
Rendimiento: 23%.
R_{f} 0.30-0.35. RMN ^{1}H
(CD_{3}SOCD_{3}, 400 MHz) \delta 1.00 [6H, s,
C(CH_{3})_{2}], 1.42 y 1.56 [2H+2H, 2m,
CH_{2}CH_{2}C
(CH_{3})_{2}], 1.67 [3H, s, CH_{3}C=CC(CH_{3})_{2}], 1.95 y 1.97 [3H+3H, 2s, CH_{3}C=(CH)_{3}C(CH_{3})CHCO], 1.99 (2H, m, CH_{2}C=), 2.51 (1H, dd, J 13.2, 2.9 Hz, SCH^{a}H^{b}), 2.65 (1H, dd, J 13.2, 8.2 Hz, SCH^{a}H^{b}), 4.77 (1H, m, NCH), 5.72 (1H, s, =CHCO), 6.20 [3H, m, CH=CHC(CH3)=CHCH=CH], 6.87 [1H, dd, J 15.6, 11.5 Hz, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 7.88 [1H, d, J 15.6 Hz, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 8.21 (1H, d, J 7.9 Hz, NH).
(CH_{3})_{2}], 1.67 [3H, s, CH_{3}C=CC(CH_{3})_{2}], 1.95 y 1.97 [3H+3H, 2s, CH_{3}C=(CH)_{3}C(CH_{3})CHCO], 1.99 (2H, m, CH_{2}C=), 2.51 (1H, dd, J 13.2, 2.9 Hz, SCH^{a}H^{b}), 2.65 (1H, dd, J 13.2, 8.2 Hz, SCH^{a}H^{b}), 4.77 (1H, m, NCH), 5.72 (1H, s, =CHCO), 6.20 [3H, m, CH=CHC(CH3)=CHCH=CH], 6.87 [1H, dd, J 15.6, 11.5 Hz, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 7.88 [1H, d, J 15.6 Hz, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 8.21 (1H, d, J 7.9 Hz, NH).
Se disolvió la sal sódica del compuesto I en
solución salina (1 mg/ml). A partir de esta solución se prepararon
soluciones de trabajo del compuesto I en MEM con FBS al 5% en
diferentes concentraciones para añadirlas a los cultivos, por medio
de disoluciones consecutivas.
Se trataron los cultivos de células
MDA-MB-231 con soluciones de droga
en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la siembre el día 1. Se
añadieron alícuotas de las soluciones de trabajo (2 \muL) con
diferentes concentraciones del compuesto I a cultivos de 200 \muL
hasta concentraciones finales del compuesto I desde 10^{-11} hasta
10^{-6} mol/L en los cultivos. En los cultivos de control, se
añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5% como control para el
solvente. Después de cultivar durante 2 días consecutivos, se hizo
un recuento del número de células vivas en los cultivos y se
calculó el grado de inhibición del crecimiento de las células
MDA-MB-231 para la evaluación de la
citotoxicidad de las soluciones analizadas del compuesto I.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (58,7 \pm 2,24) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con soluciones del
compuesto I tenían el siguiente número de células vivas:
\vskip1.000000\baselineskip
10^{-11} mol/L: (41,9 \pm 2,17) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 28,6% (p < 0,001);
10^{-10} mol/L: (37,3 \pm 2,84) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 36,5% (p < 0,001);
10^{-9} mol/L: (35,4 \pm 2,23) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 39,7% (p < 0,001);
10^{-8} mol/L: (31,6 \pm 1,69) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 46,2% (p < 0,001);
4 x 10^{-8} mol/L: (31,2 \pm 1,72) x
10^{3}, inhibición del crecimiento celular del 46,8% (p <
0,001);
10^{-7} mol/L: (30,5 \pm 0,89) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 48,0% (p < 0,001);
10^{-6} mol/L: (29,5 \pm 1,36) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 49,7% (p < 0,001)
\vskip1.000000\baselineskip
Se observa por lo tanto, que el compuesto I
ejerce una acción citotóxica significativa contra las células de
adenocarcinoma de seno humano. El grado de inhibición del
crecimiento celular se puede incrementar hasta un 49,7% (p <
0,001) incrementando la concentración del compuesto I.
Se convirtió la sal sódica del compuesto I en la
forma ácida del compuesto I y se la disolvió en metanol. Se
mezclaron juntas una solución de paclitaxel en metanol y una
solución del compuesto I en metanol. Después de agitar el solvente
orgánico se lo evaporó. La película seca resultante se disolvió en
solución salina.
Se prepararon soluciones iniciales de la
formulación en solución salina en las proporciones molares
paclitaxel:compuesto I iguales a 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7 y 1:10. A
partir de estas soluciones se prepararon las soluciones de trabajo
en MEM con FBS al 5% para añadirlas a los cultivos. La concentración
de paclitaxel era igual a 10^{-6} M.
Los cultivos de células
MDA-MB-231 fueron tratados con
soluciones de droga en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la
siembra el día 1. Se añadieron alícuotas de las soluciones de
trabajo (2 \muL) a cultivos de 200 \muL hasta una concentración
final de paclitaxel en los cultivos igual a 10^{-8} M. En los
cultivos de control, se añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5%
como control para el solvente. Después de cultivar durante dos
días consecutivos, se calculó el número de células vivas en los
cultivos para la evaluación de la citotoxicidad de las soluciones
analizadas de la formulación.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (54,4 \pm 2,51) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con paclitaxel en una
concentración de 10 nM, contenían (29,3 \pm 1,13) x 10^{3}
células, y exhibieron una inhibición del crecimiento celular del
46,1% (p < 0,001).
Los cultivos, tratados con soluciones de la
formulación en una proporción molar de paclitaxel:compuesto I
igual a 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7 y 1:10 en medio con FBS al 5%,
tenían el siguiente número de células vivas:
- 1:3: (20,1 \pm 1,53) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 63,1% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 31,4% (p < 0,002);
- 1:4: (18,9 \pm 0,92) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 65,3% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 35,5% (p < 0,001);
- 1:5: (17,4 \pm 1,18) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 68,0% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 40,6% (p < 0,001);
- 1:6: (16,9 \pm 1,08) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 68,9% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 42,3% (p < 0,001);
- 1:7: (15,8 \pm 1,34) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 71,0% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 46,1% (p < 0,001);
- 1:10: (15,2 \pm 0,72) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 72,1% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 48,1% (p < 0,001).
Se convirtió la sal sódica del compuesto I en la
forma ácida del compuesto I y se la disolvió en metanol. Se evaporó
el solvente orgánico. La película seca resultante se disolvió en
Taxol®.
Se prepararon soluciones iniciales de la
formulación de la invención en proporciones molares de paclitaxel
con relación al compuesto I iguales a 1:1, 1:3, 1:6, 1:10, 1:15 y
1:20. A partir de estas soluciones se prepararon las soluciones de
trabajo en MEM con FBS al 5% para añadirlas a los cultivos. La
concentración de paclitaxel era igual a 10^{-6} M.
Los cultivos de células
MDA-MB-231 fueron tratados con
soluciones de droga en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la
siembra el día 1. Se añadieron alícuotas de las soluciones de
trabajo (2 \muL) a cultivos de 200 \muL hasta una concentración
final de paclitaxel en los cultivos igual a 10^{-8} M. En los
cultivos de control, se añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5%
como control para el solvente. Después de cultivar durante dos
días consecutivos, se calculó el número de células vivas en los
cultivos para la evaluación de la citotoxicidad de las soluciones
analizadas.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (54,0 \pm 1,60) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con Taxol® en una
concentración de 10 nM, contenían (29,0 \pm 0,91) x 10^{3}
células, y exhibieron una inhibición del crecimiento celular del
46,3% (p < 0,001).
Los cultivos, tratados con soluciones de la
formulación de la invención (Taxol® + compuesto I) en las
proporciones molares paclitaxel/compuesto I iguales a 1:1, 1:3,
1:6, 1:10, 1:15 y 1:20, en medio con FBS al 5%, tenían el siguiente
número de células vivas:
- 1:1: (21,5 \pm 2,37) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 60,2% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 25,9% (p < 0,01);
- 1:3: (18,5 \pm 1,08) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 65,7% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 36,2% (p < 0,001);
- 1:6: (14,2 \pm 0,75) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 73,7% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 51,0% (p < 0,001);
- 1:10: (13,8 \pm 0,63) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 74,4% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 52,4% (p < 0,001);
- 1:15: (13,4 \pm 1,22) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 75,2% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 53,8% (p < 0,001);
- 1:20: (13,5 \pm 1,14) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 75,0% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 53,4% (p < 0,001).
Se disolvió la sal sódica del compuesto II en
solución salina (1 mg/ml). A partir de esta solución se prepararon
soluciones de trabajo del compuesto II en MEM con FBS al 5% en
diferentes concentraciones para añadirlas a los cultivos, por medio
de disoluciones consecutivas.
Se trataron los cultivos de células
MDA-MB-231 con soluciones de droga
en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la siembre el día 1. Se
añadieron alícuotas de las soluciones de trabajo (2 \muL) con
diferentes concentraciones del compuesto I a cultivos de 200 \muL
hasta concentraciones finales del compuesto I desde 10^{-11} hasta
10^{-6} mol/L en los cultivos. En los cultivos de control, se
añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5% como control para el
solvente. Después de cultivar durante 2 días consecutivos, se hizo
un recuento del número de células vivas en los cultivos y se
calculó el grado de inhibición del crecimiento de las células
MDA-MB-231 para la evaluación de la
citotoxicidad de las soluciones analizadas del compuesto II.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (58,7 \pm 2,24) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con soluciones del
compuesto I tenían el siguiente número de células vivas:
\vskip1.000000\baselineskip
10^{-11} mol/L: (42,3 \pm 2,32) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 27,9% (p < 0,001);
10^{-10} mol/L: (38,1 \pm 1,18) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 35,1% (p < 0,001);
10^{-9} mol/L: (34,5 \pm 1,94) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 41,2% (p < 0,001);
10^{-8} mol/L: (31,4 \pm 1,62) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 46,5% (p < 0,001);
4 x 10^{-8} mol/L: (31,2 \pm 2,33) x
10^{3}, inhibición del crecimiento celular del 46,8% (p <
0,001);
10^{-7} mol/L: (31,7 \pm 1,54) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 46,0% (p < 0,001);
10^{-6} mol/L: (28,4 \pm 1,02) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 51,6% (p < 0,001).
\vskip1.000000\baselineskip
Se observa por lo tanto, que el compuesto II
ejerce una acción citotóxica significativa contra las células de
adenocarcinoma de seno humano. El grado de inhibición del
crecimiento celular se puede incrementar hasta un 51,6% (p <
0,001) cuando se incrementó la concentración del compuesto II.
Se convirtió la sal sódica del compuesto II en
la forma ácida del compuesto II y se la disolvió en metanol. Se
mezclaron una solución de paclitaxel en metanol y una solución del
compuesto II en metanol. Después de agitar, se evaporó el solvente
orgánico. La película seca resultante se disolvió en solución
salina.
Se prepararon soluciones iniciales de la
formulación en solución salina en las proporciones molares
paclitaxel:compuesto II iguales a 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7 y 1:10. A
partir de estas soluciones se prepararon las soluciones de trabajo
en MEM con FBS al 5% para añadirlas a los cultivos. La concentración
de paclitaxel era igual a 10^{-6} M.
Los cultivos de células
MDA-MB-231 fueron tratados con
soluciones de droga en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la
siembra el día 1. Se añadieron alícuotas de las soluciones de
trabajo (2 \muL) a cultivos de 200 \muL hasta una concentración
final de paclitaxel en los cultivos igual a 10^{-8} M. En los
cultivos de control, se añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5%
como control para el solvente. Después de cultivar durante dos
días consecutivos, se calculó el número de células vivas en los
cultivos para la evaluación de la citotoxicidad de las soluciones
analizadas de la formulación.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (54,4 \pm 2,51) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con paclitaxel en una
concentración de 10 nM, contenían (29,3 \pm 1,13) x 10^{3}
células, y exhibieron una inhibición del crecimiento celular del
46,1% (p < 0,001).
Los cultivos, tratados con soluciones de la
formulación en una proporción molar de paclitaxel:compuesto II
igual a 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7 y 1:10 en medio con FBS al 5%,
tenían el siguiente número de células vivas:
- 1:3: (20,9 \pm 1,52) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 61,6% (p < 0,002), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 28,7% (p < 0,01);
- 1:4: (18,6 \pm 1,27) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 65,8% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 36,5% (p < 0,001);
- 1:5: (17,3 \pm 1,16) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 68,2% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 41,0% (p < 0,001);
- 1:6: (16,8 \pm 0,75) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 69,1% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 42,7% (p < 0,001);
- 1:7: (16,3 \pm 1,20) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 70,0% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 44,4% (p < 0,001);
- 1:10: (15,9 \pm 0,86) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 70,8% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 45,7% (p < 0,001).
Se convirtió la sal sódica del compuesto II en
la forma ácida del compuesto II y se la disolvió en metanol. Se
evaporó el solvente orgánico. La película seca resultante se
disolvió en Taxol®.
Se prepararon soluciones iniciales de la
formulación de la invención en las proporciones molares de
paclitaxel con relación al compuesto II iguales a 1:1, 1:3, 1:6,
1:10, 1:15 y 1:20. A partir de estas soluciones se prepararon las
soluciones de trabajo en MEM con FBS al 5% para añadirlas a los
cultivos. La concentración de paclitaxel era igual a 10^{-6}
M.
Los cultivos de células
MDA-MB-231 fueron tratados con
soluciones de droga en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la
siembra el día 1. Se añadieron alícuotas de las soluciones de
trabajo (2 \muL) a cultivos de 200 \muL hasta una concentración
final de paclitaxel en los cultivos igual a 10^{-8} M. En los
cultivos de control, se añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5%
como control para el solvente. Después de cultivar durante dos
días consecutivos, se calculó el número de células vivas en los
cultivos y se evaluó la citotoxicidad de las soluciones
analizadas.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (54,0 \pm 1,60) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con Taxol® en una
concentración de 10 nM, contenían (29,0 \pm 0,91) x 10^{3}
células, y exhibieron una inhibición del crecimiento celular del
46,3% (p < 0,001).
Los cultivos, tratados con soluciones de la
formulación de la invención (Taxol® + compuesto II) en las
proporciones molares paclitaxel/compuesto II iguales a 1:1, 1:3,
1:6, 1:10, 1:15 y 1:20, en medio con FBS al 5%, tenían el siguiente
número de células vivas:
- 1:1: (21,1 \pm 1,76) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 60,9% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 27,2% (p < 0,01);
- 1:3: (19,8 \pm 1,81) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 63,3% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 31,7% (p < 0,001);
- 1:6: (14,7 \pm 1,46) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 72,8% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 49,3% (p < 0,001);
- 1:10: (14,2 \pm 1,15) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 73,7% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 51,0% (p < 0,001);
- 1:15: (13,9 \pm 1,02) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 74,3% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 52,1% (p < 0,001);
- 1:20: (13,3 \pm 1,27) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 75,4% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 54,1% (p < 0,001).
Se disolvió la sal sódica del compuesto III en
solución salina (1 mg/ml). A partir de esta solución se prepararon
soluciones de trabajo del compuesto III en MEM con FBS al 5% en
diferentes concentraciones para añadirlas a los cultivos, por medio
de disoluciones consecutivas.
Se trataron los cultivos de células
MDA-MB-231 con soluciones de droga
en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la siembre el día 1. Se
añadieron alícuotas de las soluciones de trabajo (2 \muL) con
diferentes concentraciones del compuesto III a cultivos de 200
\muL hasta concentraciones finales del compuesto III desde
10^{-11} hasta 10^{-6} mol/L en los cultivos. En los cultivos
de control, se añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5% como
control para el solvente. Después de cultivar durante 2 días
consecutivos, se hizo un recuento del número de células vivas en
los cultivos y se calculó el grado de inhibición del crecimiento de
las células MDA-MB-231 para la
evaluación de la citotoxicidad de las soluciones analizadas del
compuesto III.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (54,3 \pm 2,12) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con soluciones del
compuesto III tenían el siguiente número de células vivas:
\vskip1.000000\baselineskip
10^{-11} mol/L: (45,1 \pm 3,51) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 16,9% (p < 0,05);
10^{-10} mol/L: (45,9 \pm 2,84) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 15,5% (p < 0,05);
10^{-9} mol/L: (43,6 \pm 2,57) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 19,7% (p < 0,01);
10^{-8} mol/L: (40,3 \pm 3,36) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 25,8% (p < 0,01);
4 x 10^{-8} mol/L: (36,5 \pm 2,08) x
10^{3}, inhibición del crecimiento celular del 32,8% (p <
0,001);
10^{-7} mol/L: (35,6 \pm 1,68) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 34,4% (p < 0,001);
10^{-6} mol/L: (34,7 \pm 1,52) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 36,1% (p < 0,001).
\vskip1.000000\baselineskip
Se observa por lo tanto, que el compuesto III
ejerce una acción citotóxica significativa contra las células de
adenocarcinoma de seno humano. El grado de inhibición del
crecimiento celular se puede incrementar hasta un 36,1% (p <
0,001) por medio del incremento de la concentración del compuesto
III.
Se convirtió la sal sódica del compuesto III en
la forma ácida del compuesto III y se la disolvió en metanol. Se
mezclaron una solución de paclitaxel en metanol y una solución del
compuesto III en metanol. Después de agitar, se evaporó el solvente
orgánico. La película seca resultante se disolvió en solución
salina.
Se prepararon soluciones iniciales de la
formulación en solución salina en las proporciones molares
paclitaxel:compuesto III iguales a 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7 y 1:10.
A partir de estas soluciones se prepararon las soluciones de
trabajo en MEM con FBS al 5% para añadirlas a los cultivos. La
concentración de paclitaxel era igual a 10^{-6} M.
Los cultivos de células
MDA-MB-231 fueron tratados con
soluciones de droga en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la
siembra el día 1. Se añadieron alícuotas de las soluciones de
trabajo (2 \muL) a cultivos de 200 \muL hasta una concentración
final de paclitaxel en los cultivos igual a 10^{-8} M. En los
cultivos de control, se añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5%
como control para el solvente. Después de cultivar durante dos
días consecutivos, se calculó el número de células vivas en los
cultivos para la evaluación de la citotoxicidad de las soluciones
analizadas de la formulación.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (53,7 \pm 1,96) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con paclitaxel en una
concentración de 10 nM, contenían (31,8 \pm 1,85) x 10^{3}
células, y exhibieron una inhibición del crecimiento celular del
40,8% (p < 0,001). Los cultivos, tratados con soluciones de la
formulación en una proporción molar de paclitaxel:compuesto III
igual a 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7 y 1:10 en medio con FBS al 5%,
tenían el siguiente número de células vivas:
- 1:3: (24,7 \pm 2,17) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 54,0% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 22,3% (p < 0,05);
- 1:4: (24,0 \pm 2,23) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 55,3% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 24,5% (p < 0,05);
- 1:5: (22,5 \pm 1,91) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 58,1% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 29,2% (p < 0,01);
- 1:6: (22,3 \pm 1,88) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 58,5% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 29,9% (p < 0,01);
- 1:7: (21,9 \pm 1,90) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 59,2% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 31,1% (p < 0,01);
- 1:10: (21,7 \pm 1,56) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 59,6% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 31,8% (p < 0,002).
Se convirtió la sal sódica del compuesto III en
la forma ácida del compuesto III y se la disolvió en metanol. Se
evaporó el solvente orgánico. La película seca resultante se
disolvió en Taxol®.
Se prepararon soluciones iniciales de la
formulación de la invención en las proporciones molares de
paclitaxel con relación al compuesto III iguales a 1:1, 1:3, 1:6,
1:10, 1:15 y 1:20. A partir de estas soluciones se prepararon las
soluciones de trabajo en MEM con FBS al 5% para añadirlas a los
cultivos. La concentración de paclitaxel era igual a 10^{-6}
M.
Los cultivos de células
MDA-MB-231 fueron tratados con
soluciones de droga en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la
siembra el día 1. Se añadieron alícuotas de las soluciones de
trabajo (2 \muL) a cultivos de 200 \muL hasta una concentración
final de paclitaxel en los cultivos igual a 10^{-8} M. En los
cultivos de control, se añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5%
como control para el solvente. Después de cultivar durante dos
días consecutivos, se calculó el número de células vivas en los
cultivos y se evaluó la citotoxicidad de las soluciones
analizadas.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (55,8 \pm 1,78) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con Taxol® en una
concentración de 10 nM, contenían (31,4 \pm 1,61) x 10^{3}
células, y exhibieron una inhibición del crecimiento celular del
43,7% (p < 0,001).
Los cultivos, tratados con soluciones de la
formulación de la invención (Taxol® + compuesto III) en las
proporciones molares paclitaxel/compuesto III iguales a 1:1, 1:3,
1:6, 1:10, 1:15 y 1:20, en medio con FBS al 5%, tenían el siguiente
número de células vivas:
- 1:1: (27,4 \pm 1,56) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 50,9% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 12,7% (p < 0,05);
- 1:3: (23,7 \pm 1,42) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 57,5% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 24,5% (p < 0,01);
- 1:6: (20,5 \pm 1,17) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 63,3% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 34,7% (p < 0,001);
- 1:10: (19,6 \pm 1,23) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 64,9% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 37,6% (p < 0,001);
- 1:15: (19,8 \pm 1,64) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 64,5% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 36,9% (p < 0,001);
- 1:20: (19,5 \pm 1,49) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 65,1% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 37,9% (p < 0,001).
Se disolvió la sal sódica del compuesto IV en
solución salina (1 mg/ml). A partir de esta solución se prepararon
soluciones de trabajo del compuesto IV en MEM con FBS al 5% en
diferentes concentraciones para añadirlas a los cultivos, por medio
de disoluciones consecutivas.
Se trataron los cultivos de células
MDA-MB-231 con soluciones de droga
en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la siembre el día 1. Se
añadieron alícuotas de las soluciones de trabajo (2 \muL) con
diferentes concentraciones del compuesto IV a cultivos de 200
\muL hasta concentraciones finales del compuesto IV desde
10^{-11} hasta 10^{-6} mol/L en los cultivos. En los cultivos
de control, se añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5% como
control para el solvente. Después de cultivar durante 2 días
consecutivos, se hizo un recuento del número de células vivas en
los cultivos y se calculó el grado de inhibición del crecimiento de
las células MDA-MB-231 para la
evaluación de la citotoxicidad de las soluciones analizadas del
compuesto IV.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (52,7 \pm 1,85) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con soluciones del
compuesto IV tenían el siguiente número de células vivas:
\vskip1.000000\baselineskip
10^{-11} mol/L: (44,9 \pm 3,02) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 14,8% (p < 0,05);
10^{-10} mol/L: (44,2 \pm 3,35) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 16,1% (p < 0,05);
10^{-9} mol/L: (43,6 \pm 3,21) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 17,3% (p < 0,05);
10^{-8} mol/L: (39,6 \pm 2,74) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 24,9% (p < 0,01);
4 x 10^{-8} mol/L: (37,1 \pm 2,56) x
10^{3}, inhibición del crecimiento celular del 29,6% (p <
0,001);
10^{-7} mol/L: (36,3 \pm 2,08) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 31,1% (p < 0,001);
10^{-6} mol/L: (35,9 \pm 2,29) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 31,9% (p < 0,001).
\vskip1.000000\baselineskip
Se observa por lo tanto, que el compuesto IV
ejerce una acción citotóxica significativa contra las células de
adenocarcinoma de seno humano. Incrementando la concentración del
compuesto IV, fue posible incrementar el grado de inhibición del
crecimiento celular hasta un 31,9% (p < 0,001).
Se convirtió la sal sódica del compuesto IV en
la forma ácida del compuesto IV y se la disolvió en metanol. Se
mezclaron una solución de paclitaxel en metanol y una solución del
compuesto IV en metanol. Después de agitar, se evaporó el solvente
orgánico. La película seca resultante se disolvió en solución
salina.
Se prepararon soluciones iniciales de la
formulación en solución salina en las proporciones molares
paclitaxel:compuesto IV iguales a 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7 y 1:10. A
partir de estas soluciones se prepararon las soluciones de trabajo
en MEM con FBS al 5% para añadirlas a los cultivos. La concentración
de paclitaxel era igual a 10^{-6} M.
Los cultivos de células
MDA-MB-231 fueron tratados con
soluciones de droga en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la
siembra el día 1. Se añadieron alícuotas de las soluciones de
trabajo (2 \muL) a cultivos de 200 \muL hasta una concentración
final de paclitaxel en los cultivos igual a 10^{-8} M. En los
cultivos de control, se añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5%
como control para el solvente. Después de cultivar durante dos
días consecutivos, se calculó el número
de células vivas en los cultivos para la evaluación de la citotoxicidad de las soluciones analizadas de la formulación.
de células vivas en los cultivos para la evaluación de la citotoxicidad de las soluciones analizadas de la formulación.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (55,1 \pm 2,38) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con paclitaxel en una
concentración de 10 nM, contenían (30,7 \pm 2,15) x 10^{3}
células, y exhibieron una inhibición del crecimiento celular del
44,3% (p < 0,001).
Los cultivos, tratados con soluciones de la
formulación en una proporción molar de paclitaxel:compuesto IV
igual a 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7 y 1:10 en medio con FBS al 5%,
tenían el siguiente número de células vivas:
- 1:3: (24,3 \pm 1,74) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 55,9% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 20,8% (p < 0,05);
- 1:4: (23,7 \pm 2,03) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 57,0% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 22,8% (p < 0,05);
- 1:5: (22,1 \pm 1,52) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 59,9% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 28,0% (p < 0,01);
- 1:6: (21,9 \pm 1,16) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 60,3% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 28,7% (p < 0,01);
- 1:7: (21,8 \pm 1,98) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 60,4% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 29,0% (p < 0,02);
- 1:10: (21,6 \pm 1,45) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 60,8% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 29,6% (p < 0,01).
Se convirtió la sal sódica del compuesto IV en
la forma ácida del compuesto IV y se la disolvió en metanol. Se
evaporó el solvente orgánico. La película seca resultante se
disolvió en Taxol®.
Se prepararon soluciones iniciales de la
formulación de la invención en las proporciones molares de
paclitaxel con relación al compuesto IV iguales a 1:1, 1:3, 1:6,
1:10, 1:15 y 1:20. A partir de estas soluciones se prepararon las
soluciones de trabajo en MEM con FBS al 5% para añadirlas a los
cultivos. La concentración de paclitaxel era igual a 10^{-6}
M.
Los cultivos de células
MDA-MB-231 fueron tratados con
soluciones de droga en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la
siembra el día 1. Se añadieron alícuotas de las soluciones de
trabajo (2 \muL) a cultivos de 200 \muL hasta una concentración
final de paclitaxel en los cultivos igual a 10^{-8} M. En los
cultivos de control, se añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5%
como control para el solvente. Después de cultivar durante dos
días consecutivos, se calculó el número de células vivas en los
cultivos para evaluar la citotoxicidad de las soluciones
analizadas.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (50,4 \pm 2,45) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con Taxol® en una
concentración de 10 nM, que contenían (29,5 \pm 1,32) x 10^{3}
células, la inhibición del crecimiento celular fue del 41,5% (p <
0,001).
Los cultivos, tratados con soluciones de la
formulación de la invención (Taxol® + compuesto IV) en las
proporciones molares paclitaxel/compuesto IV iguales a 1:1, 1:3,
1:6, 1:10, 1:15 y 1:20, en medio con FBS al 5%, tenían el siguiente
número de células vivas:
- 1:1: (26,2 \pm 1,15) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 48,0% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 11,2% (p < 0,05);
- 1:3: (23,3 \pm 1,68) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 53,8% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 21,0% (p < 0,02);
- 1:6: (19,8 \pm 1,26) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 60,7% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 32,9% (p < 0,001);
- 1:10: (19,1 \pm 1,04) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 62,1% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 35,3% (p < 0,001);
\newpage
- 1:15: (18,9 \pm 1,73) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 62,5% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 35,9% (p < 0,001);
- 1:20: (19,3 \pm 1,42) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 61,7% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 34,6% (p < 0,001).
Se disolvió la sal sódica del compuesto V en
solución salina (1 mg/ml). A partir de esta solución se prepararon
soluciones de trabajo del compuesto IV en MEM con FBS al 5% en
diferentes concentraciones para añadirlas a los cultivos, por medio
de disoluciones consecutivas.
Se trataron los cultivos de células
MDA-MB-231 con soluciones de droga
en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la siembre el día 1. Se
añadieron alícuotas de las soluciones de trabajo (2 \muL) con
diferentes concentraciones del compuesto V a cultivos de 200 \muL
hasta concentraciones finales del compuesto V desde 10^{-11} hasta
10^{-6} mol/L en los cultivos. En los cultivos de control, se
añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5% como control para el
solvente. Después de cultivar durante 2 días consecutivos, se hizo
un recuento del número de células vivas en los cultivos y se
calculó el grado de inhibición del crecimiento de las células
MDA-MB-231 para la evaluación de la
citotoxicidad de las soluciones analizadas del compuesto V.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (54,3 \pm 2,12) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con soluciones del
compuesto V tenían el siguiente número de células vivas:
\vskip1.000000\baselineskip
10^{-11} mol/L: (47,1 \pm 2,41) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 13,3% (p < 0,05);
10^{-10} mol/L: (46,3 \pm 2,49) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 14,7% (p < 0,05);
10^{-9} mol/L: (45,5 \pm 2,80) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 16,2% (p < 0,05);
10^{-8} mol/L: (41,1 \pm 2,34) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 24,3% (p < 0,002);
4 x 10^{-8} mol/L: (39,6 \pm 1,75) x
10^{3}, inhibición del crecimiento celular del 27,1% (p <
0,001);
10^{-7} mol/L: (39,3 \pm 1,22) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 27,6% (p < 0,001);
10^{-6} mol/L: (38,1 \pm 1,86) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 29,8% (p < 0,001).
\vskip1.000000\baselineskip
Se observa por lo tanto, que el compuesto V
ejerce una acción citotóxica significativa contra las células de
adenocarcinoma de seno humano. Incrementando la concentración del
compuesto V solo, fue posible incrementar el grado de inhibición
del crecimiento celular hasta un 29,8% (p < 0,001).
Se convirtió la sal sódica del compuesto V en la
forma ácida del compuesto V y se la disolvió en metanol. Se
mezclaron una solución de paclitaxel en metanol y una solución del
compuesto V en metanol. Después de agitar, se evaporó el solvente
orgánico. La película seca resultante se disolvió en solución
salina.
Se prepararon soluciones iniciales de la
formulación en solución salina en las proporciones molares
paclitaxel:compuesto V iguales a 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7 y 1:10. A
partir de estas soluciones se prepararon las soluciones de trabajo
en MEM con FBS al 5% para añadirlas a los cultivos. La concentración
de paclitaxel era igual a 10^{-6} M.
Los cultivos de células
MDA-MB-231 fueron tratados con
soluciones de droga en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la
siembra el día 1. Se añadieron alícuotas de las soluciones de
trabajo (2 \muL) a cultivos de 200 \muL hasta una concentración
final de paclitaxel en los cultivos igual a 10^{-8} M. En los
cultivos de control, se añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5%
como control para el solvente. Después de cultivar durante dos
días consecutivos, se calculó el número de células vivas en los
cultivos y se evaluó la citotoxicidad de las soluciones
analizadas.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (53,7 \pm 1,96) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con paclitaxel en una
concentración de 10 nM, contenían (31,8 \pm 1,85) x 10^{3}
células, y exhibieron una inhibición del crecimiento celular del
40,8% (p < 0,001). Los cultivos, tratados con soluciones de la
formulación en una proporción molar de paclitaxel:compuesto V
igual a 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7 y 1:10 en medio con FBS al 5%,
tenían el siguiente número de células vivas:
- 1:3: (26,1 \pm 2,33) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 51,4% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 17,9% (p < 0,05);
- 1:4: (25,7 \pm 2,14) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 52,1% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 19,2% (p < 0,05);
- 1:5: (24,3 \pm 2,06) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 54,7% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 23,6% (p < 0,05);
- 1:6: (24,1 \pm 1,87) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 55,1% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 24,2% (p < 0,02);
- 1:7: (23,9 \pm 2,08) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 55,5% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 24,8% (p < 0,02);
- 1:10: (23,7 \pm 1,65) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 55,9% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 25,5% (p < 0,01).
Se convirtió la sal sódica del compuesto V en la
forma ácida del compuesto V y se la disolvió en metanol. Se evaporó
el solvente orgánico. La película seca resultante se disolvió en
Taxol®.
Se prepararon soluciones iniciales de la
formulación de la invención en las proporciones molares de
paclitaxel con relación al compuesto V iguales a 1:1, 1:3, 1:6,
1:10, 1:15 y 1:20. A partir de estas soluciones se prepararon las
soluciones de trabajo en MEM con FBS al 5% para añadirlas a los
cultivos. La concentración de paclitaxel era igual a 10^{-6}
M.
Los cultivos de células
MDA-MB-231 fueron tratados con
soluciones de droga en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la
siembra el día 1. Se añadieron alícuotas de las soluciones de
trabajo (2 \muL) a cultivos de 200 \muL hasta una concentración
final de paclitaxel en los cultivos igual a 10^{-8} M. En los
cultivos de control, se añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5%
como control para el solvente. Después de cultivar durante dos
días consecutivos, se calculó el número de células vivas en los
cultivos y se evaluó la citotoxicidad de las soluciones
analizadas.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (55,8 \pm 1,78) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con Taxol® en una
concentración de 10 nM, que contenían (31,4 \pm 1,61) x 10^{3}
células, la inhibición del crecimiento celular fue del 43,7% (p <
0,001).
Los cultivos, tratados con soluciones de la
formulación de la invención (Taxol® + compuesto V) en las
proporciones molares paclitaxel:ompuesto V iguales a 1:1, 1:3,
1:6, 1:10, 1:15 y 1:20, en medio con FBS al 5%, tenían el siguiente
número de células vivas:
- 1:1: (28,1 \pm 2,14) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 49,6% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 10,5% (p < 0,05);
- 1:3: (25,3 \pm 1,78) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 54,7% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 19,4% (p < 0,05);
- 1:6: (22,8 \pm 1,85) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 59,1% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 27,4% (p < 0,01);
- 1:10: (21,9 \pm 1,12) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 60,8% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 30,3% (p < 0,001);
- 1:15: (21,8 \pm 1,33) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 60,9% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 30,6% (p < 0,001);
\newpage
- 1:20: (22,0 \pm 1,57) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 60,6% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 29,9% (p < 0,002).
Se disolvió la sal sódica del compuesto VI en
solución salina (1 mg/ml). A partir de esta solución se prepararon
soluciones de trabajo del compuesto VI en MEM con FBS al 5% en
diferentes concentraciones para añadirlas a los cultivos, por medio
de disoluciones consecutivas.
Se trataron los cultivos de células
MDA-MB-231 con soluciones de droga
en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la siembre el día 1. Se
añadieron alícuotas de las soluciones de trabajo (2 \muL) con
diferentes concentraciones del compuesto VI a cultivos de 200
\muL hasta concentraciones finales del compuesto VI desde
10^{-11} hasta 10^{-6} mol/L en los cultivos. En los cultivos
de control, se añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5% como
control para el solvente. Después de cultivar durante 2 días
consecutivos, se hizo un recuento del número de células vivas en
los cultivos y se calculó el grado de inhibición del crecimiento de
las células MDA-MB-231, y se evaluó
la citotoxicidad de las soluciones analizadas del compuesto VI.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (52,7 \pm 1,85) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con soluciones del
compuesto VI tenían el siguiente número de células vivas:
\vskip1.000000\baselineskip
10^{-11} mol/L: (46,2 \pm 3,54) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 12,3% (p < 0,05);
10^{-10} mol/L: (45,5 \pm 2,68) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 13,7% (p < 0,05);
10^{-9} mol/L: (45,3 \pm 2,55) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 14,0% (p < 0,05);
10^{-8} mol/L: (40,9 \pm 2,88) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 22,4% (p < 0,01);
4 x 10^{-8} mol/L: (39,6 \pm 2,70) x
10^{3}, inhibición del crecimiento celular del 24,9% (p <
0,01);
10^{-7} mol/L: (39,1 \pm 2,16) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 25,8% (p < 0,001);
10^{-6} mol/L: (38,3 \pm 2,34) x 10^{3},
inhibición del crecimiento celular del 27,3% (p < 0,001).
\vskip1.000000\baselineskip
Se observa por lo tanto, que el compuesto VI
ejerce una acción citotóxica significativa contra las células de
adenocarcinoma de seno humano. Incrementando la concentración del
compuesto VI, fue posible incrementar el grado de inhibición del
crecimiento celular hasta un 27,3% (p < 0,001).
Se convirtió la sal sódica del compuesto VI en
la forma ácida del compuesto VI y se la disolvió en metanol. Se
mezclaron una solución de paclitaxel en metanol y una solución del
compuesto VI en metanol. Después de agitar, se evaporó el solvente
orgánico. La película seca resultante se disolvió en solución
salina.
Se prepararon soluciones iniciales de la
formulación en solución salina en las proporciones molares
paclitaxel:compuesto VI iguales a 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7 y 1:10. A
partir de estas soluciones se prepararon las soluciones de trabajo
en MEM con FBS al 5% para añadirlas a los cultivos. La concentración
de paclitaxel era igual a 10^{-6} M.
Los cultivos de células
MDA-MB-231 fueron tratados con
soluciones de droga en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la
siembra el día 1. Se añadieron alícuotas de las soluciones de
trabajo (2 \muL) a cultivos de 200 \muL hasta una concentración
final de paclitaxel en los cultivos igual a 10^{-8} M. En los
cultivos de control, se añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5%
como control para el solvente. Después de cultivar durante dos
días consecutivos, se calculó el número de células vivas en los
cultivos y se evaluó la citotoxicidad de las soluciones
analizadas.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (55,1 \pm 2,38) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con paclitaxel en una
concentración de 10 nM, contenían (30,7 \pm 2,15) x 10^{3}
células, y la inhibición del crecimiento celular fue del 44,3% (p
< 0,001).
Los cultivos, tratados con soluciones de la
formulación en una proporción molar de paclitaxel:compuesto VI
igual a 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7 y 1:10 en medio con FBS al 5%,
tenían el siguiente número de células vivas:
- 1:3: (25,6 \pm 2,42) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 53,5% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 16,6% (p < 0,05);
- 1:4: (25,0 \pm 2,23) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 54,6% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 18,6% (p < 0,05);
- 1:5: (24,0 \pm 1,84) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 56,4% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 21,8% (p < 0,05);
- 1:6: (23,7 \pm 1,69) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 57,0% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 22,8% (p < 0,05);
- 1:7: (23,4 \pm 1,36) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 57,5% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 23,8% (p < 0,02);
- 1:10: (23,1 \pm 1,75) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 58,1% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del paclitaxel en un 24,8% (p < 0,02).
Se convirtió la sal sódica del compuesto VI en
la forma ácida del compuesto VI y se la disolvió en metanol. Se
evaporó el solvente orgánico. La película seca resultante se
disolvió en Taxol®.
Se prepararon soluciones iniciales de la
formulación de la invención en las proporciones molares de
paclitaxel con relación al compuesto VI iguales a 1:1, 1:3, 1:6,
1:10, 1:15 y 1:20. A partir de estas soluciones se prepararon las
soluciones de trabajo en MEM con FBS al 5% para añadirlas a los
cultivos. La concentración de paclitaxel era igual a 10^{-6}
M.
Los cultivos de células
MDA-MB-231 fueron tratados con
soluciones de droga en MEM, que contenía FBS al 5%, después de la
siembra el día 1. Se añadieron alícuotas de las soluciones de
trabajo (2 \muL) a cultivos de 200 \muL hasta una concentración
final de paclitaxel en los cultivos igual a 10^{-8} M. En los
cultivos de control, se añadieron 2 \muL de medio con FBS al 5%
como control para el solvente. Después de cultivar durante dos
días consecutivos, se calculó el número de células vivas en los
cultivos y se evaluó la citotoxicidad de las soluciones
analizadas.
Después de tres días de cultivo, los cultivos de
control contenían (50,4 \pm 2,45) x 10^{3} células.
Los cultivos, tratados con Taxol® en una
concentración de 10 nM, que contenían (29,5 \pm 1,32) x 10^{3}
células, la inhibición del crecimiento celular fue del 41,5% (p <
0,001).
Los cultivos, tratados con soluciones de la
formulación de la invención (Taxol® + compuesto VI) en las
proporciones molares paclitaxel:compuesto VI iguales a 1:1, 1:3,
1:6, 1:10, 1:15 y 1:20, en medio con FBS al 5%, tenían el siguiente
número de células vivas:
- 1:1: (27,9 \pm 2,08) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 44,6% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 5,4% (p < 0,05);
- 1:3: (24,2 \pm 1,66) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 52,0% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 18,0% (p < 0,05);
- 1:6: (21,9 \pm 1,54) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 56,5% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 25,8% (p < 0,01);
- 1:10: (21,3 \pm 1,27) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 57,7% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 27,8% (p < 0,001);
- 1:15: (20,9 \pm 1,40) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 58,5% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 29,2% (p < 0,001);
- 1:20: (20,7 \pm 1,72) x 10^{3}, siendo la inhibición del crecimiento celular del 58,9% (p < 0,001), y se incrementó la inhibición del crecimiento celular comparada a aquella del Taxol® en un 29,8% (p < 0,002).
Se mezclaron paclitaxel (5 mg) en 1 mL de
metanol y el compuesto I (19,5 mg) en 10 ml de metanol en un balón
de fondo redondo. Después de agitación (2 min) y de sonicación (1
min) en un baño de ultrasonido, se evaporó el solvente orgánico en
un evaporador rotatorio a presión reducida a 40ºC. Se disolvió la
película seca resultante por medio de la adición de agua (W) a 25ºC
o de amortiguador de acetato de sodio 0,05 M, pH 5,6 (SAB) hasta
obtener una solución micelar del compuesto I/paclitaxel. La
solución, obtenida en este proceso, se la filtró a través de un
filtro estéril de 0,22 \mum y se la liofilizó por medio de un
sistema de liofilización hasta obtener el sistema micelar mezclado
seco del compuesto I/paclitaxel (OF-1SAB).
Las preparaciones de OF-1SAB y
OF-1SAB se almacenaron en forma de polvo para una
duración de 1, 36, 64, 92, 127 ó 183 días a 4ºC.
Se reconstituyeron las preparaciones de
OF-1W con: agua destilada (OF-1W/W);
solución de etanol al 10% (OF-1W/E); solución de
NaCl 0,15 M (OF-1W/S); amortiguador acetato de sodio
0,05 M, pH 5,6 (OF-1W/SAB); amortiguador acetato de
sodio 0,05 M, pH 5,6 en etanol al 10%
(OF-1W/SAB/E).
Se reconstituyó OF-1 SAB con
agua destilada (OF-1 SAB/W).
En todos los casos se obtuvo una solución clara
inmediatamente. No se observó cambio de color, precipitación u
otros cambios apreciables.
Se analizó la citotoxicidad de
OF-1 sobre la línea celular
MDA-MB-231 después de diferentes
períodos de almacenamiento (los resultados se aprecian en la Tabla
2). Las concentraciones finales de paclitaxel y del compuesto I en
el cultivo celular fueron 1 x 10^{-8} M y 7 x 10^{-8} M,
respectivamente.
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(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
(Continuación)
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(Continuación)
El sistema micelar mezclado seco del compuesto
II/paclitaxel (OF-2W) y el sistema micelar mezclado
seco del compuesto II/paclitaxel (OF-2SAB) se
obtuvieron como se describió para el sistema micelar mezclado seco
del compuesto I/paclitaxel (OF-1). Se almacenaron
las preparaciones OF-2W y OF-2SAB
como un polvo durante 1 ó 180 días a 4ºC.
Las preparaciones OF-2W y
OF-2SAB fueron reconstituidas ya sea con
amortiguador acetato de sodio 0,05 M, pH 5,6
(OF-2W/SAB) o con agua destilada
(OF-2SAB/W). Se analizó la citotoxicidad de las
soluciones OF-2W/SAB y OF-2SAB/W
sobre la línea celular MDA-MB-231
después del almacenamiento (los resultados aparecen en la Tabla 3).
Las concentraciones finales de paclitaxel y del compuesto II en el
cultivo celular fueron 1 x 10^{-8} M y 7 x 10^{-8} M,
respectivamente.
El sistema micelar mezclado seco del compuesto
III/paclitaxel (OF-3W) y el sistema micelar mezclado
seco del compuesto III/paclitaxel (OF-3SAB) se
obtuvieron como se describió para el sistema micelar mezclado seco
del compuesto I/paclitaxel (OF-1).
Se almacenaron las preparaciones
OF-3W y OF-3SAB como un polvo
durante 1 ó 180 días a 4ºC.
Las preparaciones OF-3W y
OF-3SAB fueron reconstituidas ya sea con
amortiguador acetato de sodio 0,05 M, pH 5,6
(OF-3W/SAB) o con agua destilada
(OF-3SAB/W). Se analizó la citotoxicidad de las
soluciones OF-3W/SAB y OF-3SAB/W
sobre la línea celular MDA-MB-231
después del almacenamiento (los resultados aparecen en la Tabla 4).
Las concentraciones finales de paclitaxel y del compuesto III en el
cultivo celular fueron 1 x 10^{-8} M y 7 x 10^{-8} M,
respectivamente.
El sistema micelar mezclado seco del compuesto
IV/paclitaxel (OF-4W) y el sistema micelar mezclado
seco del compuesto IV/paclitaxel (OF-4SAB) se
obtuvieron como se describió para el sistema micelar mezclado seco
del compuesto I/paclitaxel (OF-1).
Se almacenaron las preparaciones
OF-4W y OF-4SAB como un polvo
durante 1 ó 180 días a 4ºC.
Las preparaciones OF-4W y
OF-4SAB fueron reconstituidas ya sea con
amortiguador acetato de sodio 0,05 M, pH 5,6
(OF-4W/SAB) o con agua destilada
(OF-4SAB/W). Se analizó la citotoxicidad de las
soluciones OF-4W/SAB y OF-4SAB/W
sobre la línea celular MDA-MB-231
después del almacenamiento (los resultados aparecen en la Tabla 5).
Las concentraciones finales de paclitaxel y del compuesto IV en el
cultivo celular fueron 1 x 10^{-8} M y 7 x 10^{-8} M,
respectivamente.
El sistema micelar mezclado seco del compuesto
V/paclitaxel (OF-5W) y el sistema micelar mezclado
seco del compuesto V/paclitaxel (OF-5SAB) se
obtuvieron como se describió para el sistema micelar mezclado seco
del compuesto I/paclitaxel (OF-1).
Se almacenaron las preparaciones
OF-5W y OF-5SAB como un polvo
durante 1 ó 180 días a 4ºC.
Las preparaciones OF-5W y
OF-5SAB fueron reconstituidas ya sea con
amortiguador acetato de sodio 0,05 M, pH 5,6
(OF-5W/SAB) o con agua destilada
(OF-5SAB/W). Se analizó la citotoxicidad de las
soluciones OF-5W/SAB y OF-5SAB/W
sobre la línea celular MDA-MB-231
después del almacenamiento (los resultados aparecen en la Tabla 6).
Las concentraciones finales de paclitaxel y del compuesto V en el
cultivo celular fueron 1 x 10^{-8} M y 7 x 10^{-8} M,
respectivamente.
(Continuación)
El sistema micelar mezclado seco del compuesto
VI/paclitaxel (OF-6W) y el sistema micelar mezclado
seco del compuesto VI/paclitaxel (OF-6SAB) se
obtuvieron como se describió para el sistema micelar mezclado seco
del compuesto I/paclitaxel (OF-1).
Se almacenaron las preparaciones
OF-6W y OF-6SAB como un polvo
durante 1 ó 180 días a 4ºC.
Las preparaciones OF-6W y
OF-6SAB fueron reconstituidas ya sea con
amortiguador acetato de sodio 0,05 M, pH 5,6
(OF-6W/SAB) o con agua destilada
(OF-6SAB/W). Se analizó la citotoxicidad de las
soluciones OF-6W/SAB y OF-6SAB/W
sobre la línea celular MDA-MB-231
después del almacenamiento (los resultados aparecen en la Tabla 7).
Las concentraciones finales de paclitaxel y del compuesto VI en el
cultivo celular fueron 1 x 10^{-8} M y 7 x 10^{-8} M,
respectivamente.
Aunque se ha descrito la invención con relación
a sus modalidades preferidas, que constituye el mejor modo
actualmente conocido por los inventores, se debe entender que pueden
hacerse diferentes cambios y modificaciones que serían obvios para
alguien normalmente entrenado en el arte sin apartarse del alcance
de la invención como se expone en las reivindicaciones anexas a
ésta.
Este listado de referencias citado por el
solicitante es únicamente para conveniencia del lector. No forma
parte del documento europeo de la patente. Aunque se ha tenido gran
cuidado en la recopilación, no se pueden excluir los errores o las
omisiones y la OEP rechaza toda responsabilidad en este sentido.
\bullet DE 4032187 [0016] [0016] [0016]
\bulletALKAN-ONYUKSEL
H y colaboradores, Pharm. Res., 1994, vol. 2,
206-212 [0005]
\bulletLASIC D.D. Nature, 16 de
enero de 1992, vol. 355, 279-280 [0008]
\bullet K. KATAOKA y colaboradores,
JMS-Pure Appl. Chem., 1994, vol. A31
(11), 1759-1769 [0009]
\bulletKIM S. C. y colaboradores,
J. Controlled Release, 2001, vol. 72,
191-202 [0010]
\bulletKALEMKERIAN y colaboradores,
Activity of fenretinide plus chemotherapeutic agents in
small-cell lung cancer cell lines. Cancer
Chemother Pharmacol, 1999, vol. 43,
145-150 [0017]
\bulletZHANG y colaboradores, An
investigation of the antitumour activity and biodistribution of
polymeric micellar paclitaxel. Cancer Chemother Pharmacol,
1997, vol. 40, 81-86 [0018]
Claims (23)
1. Un compuesto que tiene una fórmula
estructural escogida entre las siguientes
(I-VI):
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\vskip1.000000\baselineskip
2. Una sal farmacéuticamente aceptable de un
compuesto de acuerdo a la reivindicación 1.
3. Una sal de sodio farmacéuticamente aceptable
de un compuesto de acuerdo a la reivindicación 1.
4. El uso de un compuesto de acuerdo con la
reivindicación 1, o un derivado del mismo, para la fabricación de un
medicamento.
5. El uso de un compuesto de acuerdo con la
reivindicación 1, o un derivado del mismo, para la fabricación de un
medicamento para el tratamiento de cáncer.
6. Una composición farmacéutica que comprende un
compuesto citotóxico en una cantidad terapéuticamente efectiva,
caracterizada porque dicha composición comprende además un
compuesto de acuerdo a la reivindicación 1.
7. Una composición farmacéutica de acuerdo a la
reivindicación 6, caracterizada porque la sustancia activa es
un compuesto citotóxico o citostático.
8. Una composición farmacéutica de acuerdo a la
reivindicación 6, caracterizada porque la sustancia activa
es paclitaxel.
9. Una composición farmacéutica de acuerdo a la
reivindicación 6, caracterizada porque la sustancia activa
es paclitaxel presente en la forma de Taxol®.
10. Una composición farmacéutica de acuerdo a la
reivindicación 6, caracterizada porque el compuesto de la
reivindicación 1 está presente en la forma de su sal sódica.
11. Una composición farmacéutica de acuerdo a la
reivindicación 6, caracterizada porque el compuesto de la
reivindicación 1 está presente en forma ácida.
12. Un método para reforzar la eficacia de una
sustancia farmacéuticamente activa, caracterizado porque
dicha sustancia se prepara en forma micelar con un compuesto de
acuerdo a la reivindicación 1.
13. Un método para incrementar la solubilidad de
una sustancia farmacéuticamente activa, caracterizado porque
dicha sustancia se prepara en forma micelar con un compuesto de
acuerdo a la reivindicación 1.
14. Un método para mejorar la biodisponibilidad
de una sustancia farmacéuticamente activa, caracterizado
porque dicha sustancia se prepara en forma micelar con un compuesto
de acuerdo a la reivindicación 1.
15. Un método para mejorar las propiedades de
almacenamiento de una sustancia farmacéuticamente activa,
caracterizado porque dicha sustancia se prepara en forma
micelar con un compuesto de acuerdo a la reivindicación 1.
16. Un método para preparar una formulación
soluble en agua de paclitaxel, que comprende las etapas de disolver
paclitaxel en un primer solvente, disolver un compuesto de acuerdo a
la reivindicación 1 en un segundo solvente, mezclar las alícuotas de
las soluciones resultantes de paclitaxel y dicho compuesto en una
proporción molar deseada, y evaporar la mezcla resultante hasta
sequedad.
17. Un método para preparar una formulación
soluble en agua de Taxol®, que comprende las etapas de disolver un
compuesto de acuerdo a la reivindicación 1 en un solvente,
evaporación de una alícuota deseada de la solución resultante hasta
sequedad, y disolver el residuo en Taxol®.
18. Un método para preparar una formulación
estable de paclitaxel durante el almacenamiento, que comprende las
etapas de disolver paclitaxel en un primer solvente, disolver un
compuesto de acuerdo a la reivindicación 1 en un segundo solvente,
mezclar las alícuotas de las soluciones resultantes de paclitaxel y
dicho compuesto en una proporción molar deseada.
19. Un método para preparar una formulación de
paclitaxel para administrarla a un paciente, que comprende las
etapas de disolver paclitaxel en un primer solvente, disolver un
compuesto de acuerdo a la reivindicación 1 en un segundo solvente,
mezclar las alícuotas de las soluciones resultantes de paclitaxel y
dicho compuesto en una proporción molar deseada, evaporar la mezcla
resultante hasta sequedad formando un residuo de paclitaxel y de
dicho compuesto, y disolver dicho residuo en una solución acuosa, la
liofilización de la solución formada, seguido por la reconstitución
del residuo con un tercer solvente adecuado para administrarlo a un
paciente.
20. Un método de acuerdo a cualquiera de las
reivindicaciones 16-19, caracterizado
porque dicho primer y segundo solventes son al menos un alcohol
alifático.
21. Un método de acuerdo a cualquiera de las
reivindicaciones 16-19, caracterizado porque
dicho primer y segundo solventes se escogen entre etanol, metanol,
2-propanol y butanol.
22. Un método de acuerdo a cualquiera de las
reivindicaciones 16-19, caracterizado
porque dicho primer y segundo solventes son metanol.
23. Un método de acuerdo a cualquiera de las
reivindicaciones 16-19, caracterizado porque
paclitaxel se utiliza en la forma de Taxol®.
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|---|---|---|---|
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|---|---|---|---|---|
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| CN100360502C (zh) * | 2002-07-23 | 2008-01-09 | 阿登尼亚投资有限公司 | 视黄醇衍生物、它们在治疗癌症和增强其它细胞毒性剂功效中的应用 |
| SE0202311D0 (sv) * | 2002-07-23 | 2002-07-23 | Ardenia Investments Ltd | Novel compounds, cytotoxic preparations comprising said compounds, methods of manufacture of said preparations, as well as methods of treatment |
| US9572886B2 (en) | 2005-12-22 | 2017-02-21 | Nitto Denko Corporation | Agent for treating myelofibrosis |
| JP2010539245A (ja) * | 2007-09-14 | 2010-12-16 | 日東電工株式会社 | 薬物担体 |
| WO2009078754A1 (en) | 2007-12-19 | 2009-06-25 | Ardenia Investments, Ltd. | Drug delivery system for administration of poorly water soluble pharmaceutically active substances |
| WO2009078756A1 (en) * | 2007-12-19 | 2009-06-25 | Ardenia Investments, Ltd. | Drug delivery system for administration of a water soluble, cationic and amphiphilic pharmaceutically active substance |
| WO2009078755A1 (en) * | 2007-12-19 | 2009-06-25 | Ardenia Investments, Ltd. | Drug delivery system for administration of a water soluble, cationic and amphiphilic pharmaceutically active substance |
| KR20140065017A (ko) * | 2008-07-30 | 2014-05-28 | 닛토덴코 가부시키가이샤 | 약물 담체 |
| LT3386947T (lt) | 2015-12-09 | 2021-09-10 | Oasmia Pharmaceutical Ab | N-retinoilaminoalkano sulfonrūgšties gamybos būdas |
| GB2550346B (en) | 2016-05-13 | 2021-02-24 | Phytoceutical Ltd | Micelles |
| CN107149684B (zh) * | 2017-05-08 | 2019-10-25 | 西南大学 | 半胱氨酸双加氧酶、基因及其催化产物半胱亚磺酸的新用途 |
| CN110218168B (zh) * | 2018-03-02 | 2022-09-20 | 上海现代药物制剂工程研究中心有限公司 | 一种n-(全反式-视黄酰基)-l-半胱磺酸甲酯的钠盐的制备方法 |
| CN112239418B (zh) * | 2019-07-18 | 2023-07-07 | 上海现代药物制剂工程研究中心有限公司 | 视黄醇类化合物及其钠盐的制备方法 |
| CN112321465B (zh) * | 2019-07-18 | 2023-06-06 | 上海现代药物制剂工程研究中心有限公司 | 一种含苯基化合物、其中间体、制备方法及应用 |
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Family Cites Families (115)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2542386A (en) * | 1947-12-03 | 1951-02-20 | John O Beattie | Manufacture of plastic lenses from monomeric materials |
| US3240854A (en) * | 1961-09-08 | 1966-03-15 | Laubman & Pank Ltd | Manufacture of mouldable plastic articles |
| US3494326A (en) * | 1968-02-01 | 1970-02-10 | American Optical Corp | Spin-coating machine |
| US3555611A (en) * | 1969-12-15 | 1971-01-19 | Armorlite Lens Co Inc | Mold for casting optical elements and the like |
| US3871803A (en) * | 1971-12-21 | 1975-03-18 | Beattie Dev Company | Apparatus for producing an optical molding plaque |
| CH556773A (de) * | 1973-05-02 | 1974-12-13 | Involvo Ag | Leimgeraet fuer verpackungsmaschine. |
| JPS5845445B2 (ja) * | 1975-03-26 | 1983-10-11 | 日本原子力研究所 | 透明プラスチック成形体の製法 |
| US4077858A (en) * | 1976-10-04 | 1978-03-07 | Celanese Corporation | Completely polymerized ultraviolet cured coatings |
| US4190621A (en) * | 1977-03-10 | 1980-02-26 | Martin Greshes | Method for molding optical plastic lenses of the standard and bifocal type |
| US4095772A (en) * | 1977-05-13 | 1978-06-20 | Weber Hermann P | Casting apparatus for plastic lenses |
| US4132518A (en) * | 1977-10-18 | 1979-01-02 | Realite Optical Company | Apparatus for manufacturing plastic lenses |
| US4252753A (en) * | 1977-10-18 | 1981-02-24 | Irving Rips | Manufacture of plastic lenses |
| US4257988A (en) * | 1978-09-12 | 1981-03-24 | Optical Warehouse Showroom And Manufacturing, Inc. | Method and assembly for molding optical lenses |
| US4246207A (en) * | 1979-05-14 | 1981-01-20 | Corning Glass Works | Method for casting glass-plastic lenses comprising allyl diglycol carbonate plastic |
| US4273809A (en) * | 1979-10-25 | 1981-06-16 | American Optical Corporation | Method of preparing cast resin lenses |
| DE3002545A1 (de) * | 1980-01-25 | 1981-07-30 | Basf Ag, 6700 Ludwigshafen | 5-amino-tetrazol-derivate von retinsaeuren, ihre herstellung und diese enthaltende pharmazeutische zubereitungen |
| FR2477059A1 (fr) * | 1980-02-28 | 1981-09-04 | Medicornea Sa | Procede de fabrication par moulage de lentilles de contact et lentilles obtenues |
| US4441795A (en) * | 1980-03-24 | 1984-04-10 | Camelot Industries Corporation | Molded multifocal lens and mold assembly |
| US4329622A (en) * | 1980-05-19 | 1982-05-11 | Xerox Corporation | Low pressure gas discharge lamp with increased end illumination |
| US4369298A (en) * | 1980-05-27 | 1983-01-18 | Tokuyama Soda Kabushiki Kaisha | Novel cured resin, process for production thereof, and lens composed of said resin from bis(alkyleneoxyphenyl)-diacrylate, bis(alkyleneoxyphenyl)diallyl ether, bis(alkyleneoxyphenyl)diallyl carbonate monomers |
| US4640489A (en) * | 1981-04-30 | 1987-02-03 | Mia-Lens Production A/S | Mold for making contact lenses, either the male or female mold sections being relatively more flexible |
| NL8200634A (nl) * | 1982-02-18 | 1983-09-16 | Philips Nv | Werkwijze en inrichting voor het vormen van een doorzichtig voorwerp. |
| CA1221795A (en) * | 1982-02-24 | 1987-05-12 | Bolesh J. Skutnik | Optical fiber cladding |
| US4720356A (en) * | 1982-03-22 | 1988-01-19 | American Optical Corporation | Photochromic composition resistant to fatigue |
| US4464389A (en) * | 1982-10-20 | 1984-08-07 | Sri International | Esters of retinoic acid and pentaerythritol and monobenzal acetals thereof |
| US4512340A (en) * | 1983-02-22 | 1985-04-23 | Johnson & Johnson Products, Inc. | Visible light cured orthopedic polymer casts |
| JPH0642002B2 (ja) * | 1983-07-29 | 1994-06-01 | セイコーエプソン株式会社 | プラスチックレンズ |
| FR2550349B1 (fr) * | 1983-08-03 | 1985-10-18 | Essilor Int | Procede pour la realisation de lentilles optiques a revetement antirayures et lentilles ainsi obtenues |
| JPS6049038A (ja) * | 1983-08-29 | 1985-03-18 | Toyobo Co Ltd | ナイロンレンズ表面硬化剤 |
| DE3331157A1 (de) * | 1983-08-30 | 1985-03-14 | Basf Ag, 6700 Ludwigshafen | Photopolymerisierbare mischungen, enthaltend tertiaere amine als photoaktivatoren |
| US4576766A (en) * | 1983-09-07 | 1986-03-18 | The Plessey Company Plc | Photochromic compounds and their use in photoreactive lenses |
| US4677120A (en) * | 1985-07-31 | 1987-06-30 | Molecular Design International | Topical prodrugs for treatment of acne and skin diseases |
| EP0226123A3 (en) * | 1985-12-03 | 1988-08-10 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Method for producing transparent plastic article |
| US4618685A (en) * | 1985-12-18 | 1986-10-21 | Mccully Kilmer S | N-homocysteine thiolactonyl retinamide and use thereof as an antineoplastic agent |
| US4746716A (en) * | 1985-12-27 | 1988-05-24 | Ppg Industries, Inc. | Compositions for producing polymers of high refractive index and low yellowness |
| FR2598520B1 (fr) * | 1986-01-21 | 1994-01-28 | Seiko Epson Corp | Pellicule protectrice minerale |
| US5364256A (en) * | 1986-01-28 | 1994-11-15 | Ophthalmic Research Group International, Inc. | Apparatus for the production of plastic lenses |
| US6201037B1 (en) * | 1986-01-28 | 2001-03-13 | Ophthalmic Research Group International, Inc. | Plastic lens composition and method for the production thereof |
| US5415816A (en) * | 1986-01-28 | 1995-05-16 | Q2100, Inc. | Method for the production of plastic lenses |
| US4728469A (en) * | 1986-01-28 | 1988-03-01 | Sperti Drug Products, Inc. | Method and apparatus for making a plastic lens |
| US5529728A (en) * | 1986-01-28 | 1996-06-25 | Q2100, Inc. | Process for lens curing and coating |
| US4985186A (en) * | 1986-04-11 | 1991-01-15 | Canon Kabushiki Kaisha | Process for producing optical element |
| GB8610709D0 (en) * | 1986-05-01 | 1986-06-04 | Plinkington Bros Plc | Photochromic lenses |
| DE3750846T2 (de) | 1986-08-29 | 1995-05-11 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Mitomycin-derivate. |
| US4731264A (en) * | 1986-10-03 | 1988-03-15 | Ppg Industries, Inc. | Sol-gel compositions containing silane and alumina |
| US4842782A (en) * | 1986-10-14 | 1989-06-27 | Allergan, Inc. | Manufacture of ophthalmic lenses by excimer laser |
| US4902725A (en) * | 1986-12-22 | 1990-02-20 | General Electric Company | Photocurable acrylic coating composition |
| US5091171B2 (en) | 1986-12-23 | 1997-07-15 | Tristrata Inc | Amphoteric compositions and polymeric forms of alpha hydroxyacids and their therapeutic use |
| US4800122A (en) * | 1987-09-22 | 1989-01-24 | Gentex Corporation | Siloxane-based tintable coating |
| US4895102A (en) * | 1987-10-29 | 1990-01-23 | Techna Vision Incorporated | Spin coater |
| US5219497A (en) * | 1987-10-30 | 1993-06-15 | Innotech, Inc. | Method for manufacturing lenses using thin coatings |
| US4919850A (en) * | 1988-05-06 | 1990-04-24 | Blum Ronald D | Method for curing plastic lenses |
| JPH01163027A (ja) * | 1987-12-21 | 1989-06-27 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 光学素子の成形方法およびその装置 |
| US4929278A (en) * | 1988-01-26 | 1990-05-29 | United States Department Of Energy | Sol-gel antireflective coating on plastics |
| JP2613436B2 (ja) * | 1988-06-10 | 1997-05-28 | 旭光学工業株式会社 | プラスチックレンズ用反射防止膜の形成方法 |
| DE4011056A1 (de) * | 1989-04-05 | 1990-10-11 | Gradinger F Hermes Pharma | N-retinoyl-l-thiazolidinverbindungen |
| US5880171A (en) * | 1989-05-01 | 1999-03-09 | 2C Optics, Inc. | Fast curing polymeric compositions for ophthalmic lenses and apparatus for preparing lenses |
| US5110514A (en) * | 1989-05-01 | 1992-05-05 | Soane Technologies, Inc. | Controlled casting of a shrinkable material |
| US5105126A (en) * | 1990-01-16 | 1992-04-14 | Cooper Industries, Inc. | Brightness control for flashing xenon lamp |
| US5104692A (en) * | 1990-04-20 | 1992-04-14 | Pilkington Visioncare Holdings, Inc. | Two-layer antireflective coating applied in solution |
| US5118142A (en) * | 1990-10-09 | 1992-06-02 | Bish Stephen L | Traction device |
| DE4032187C2 (de) | 1990-10-10 | 1995-03-30 | Gradinger F Hermes Pharma | N-Retinoyl-L-aminomercapto-Verbindungen und Zwischenprodukte, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung |
| US5178955A (en) * | 1990-12-17 | 1993-01-12 | Allied-Signal Inc. | Polymeric anti-reflection coatings and coated articles |
| US5716679A (en) * | 1991-09-13 | 1998-02-10 | Institut Fur Neue Materialien Gemeinnutzige Gmbh | Optical elements containing nanoscaled particles and having an embossed surface and process for their preparation |
| FR2693558B1 (fr) * | 1992-07-09 | 1994-08-19 | Commissariat Energie Atomique | Procédé de fabrication de couches minces présentant des propriétés optiques. |
| US6074579A (en) * | 1992-08-19 | 2000-06-13 | Greshes; Martin | Lens blanks and method of making a lens therefrom |
| AU666042B2 (en) * | 1992-09-25 | 1996-01-25 | Transitions Optical, Inc | Photochromic compositions of improved fatigue resistance |
| US5412016A (en) * | 1992-09-28 | 1995-05-02 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Process for making polymeric inorganic-organic compositions |
| US5817321A (en) | 1992-10-08 | 1998-10-06 | Supratek Pharma, Inc. | Biological agent compositions |
| US5385955A (en) * | 1992-11-05 | 1995-01-31 | Essilor Of America, Inc. | Organosilane coating composition for ophthalmic lens |
| US5405958A (en) * | 1992-12-21 | 1995-04-11 | Transitions Optical, Inc. | Photochromic spiro(indoline)naphthoxazine compounds |
| US5316791A (en) * | 1993-01-21 | 1994-05-31 | Sdc Coatings Inc. | Process for improving impact resistance of coated plastic substrates |
| WO1994020869A1 (en) * | 1993-03-12 | 1994-09-15 | Ppg Industries, Inc. | Novel benzopyrans |
| US5384077A (en) * | 1993-06-21 | 1995-01-24 | Transitions Optical, Inc. | Photochromic naphthopyran compounds |
| DE4325154C1 (de) * | 1993-07-27 | 1994-09-29 | Rodenstock Optik G | Verfahren zur Herstellung eines photochromen Gegenstandes |
| US5422046A (en) * | 1993-08-31 | 1995-06-06 | Essilor Of America, Inc. | Method for producing optical lenses |
| US5514214A (en) * | 1993-09-20 | 1996-05-07 | Q2100, Inc. | Eyeglass lens and mold spin coater |
| US5627434A (en) * | 1993-10-26 | 1997-05-06 | Canon Kabushiki Kaisha | Apparatus for operating a fluorescent lamp of an image forming apparatus |
| JPH07138248A (ja) * | 1993-11-22 | 1995-05-30 | Takeda Shokuhin Kogyo Kk | レチノイドとアスコルビン酸からなるエステル化合物およびその誘導体ならびにそれらの製造法 |
| US5424611A (en) * | 1993-12-22 | 1995-06-13 | At&T Corp. | Method for pre-heating a gas-discharge lamp |
| JP3471073B2 (ja) * | 1994-04-27 | 2003-11-25 | 株式会社トクヤマ | フォトクロミック組成物 |
| DE4417405A1 (de) * | 1994-05-18 | 1995-11-23 | Inst Neue Mat Gemein Gmbh | Verfahren zur Herstellung von strukturierten anorganischen Schichten |
| US5836323A (en) * | 1994-06-10 | 1998-11-17 | Johnson & Johnson Vision Products, Inc. | Automated method and apparatus for hydrating soft contact lenses |
| IL113904A0 (en) * | 1994-06-10 | 1995-08-31 | Johnson & Johnson Vision Prod | Mold clamping and precure of a polymerizable hydrogel |
| US5597519A (en) * | 1994-06-10 | 1997-01-28 | Johnson & Johnson Vision Products, Inc. | Ultraviolet cycling oven for polymerization of contact lenses |
| US6040342A (en) | 1994-09-16 | 2000-03-21 | Bar-Ilan University | Retinoyloxy (alkyl-substituted) methyl butyrates useful for the treatment of cancer and other proliferative diseases |
| AU4391096A (en) * | 1995-01-14 | 1996-07-31 | Gerhart Schroff | Method and device for checking tightness |
| US5619288A (en) * | 1995-01-23 | 1997-04-08 | Essilor Of America, Inc. | Impact resistant plastic ophthalmic lens |
| US5623184A (en) * | 1995-03-03 | 1997-04-22 | Gulton Industries, Inc. | Lamp circuit with filament current fault monitoring means |
| US5580819A (en) * | 1995-03-22 | 1996-12-03 | Ppg Industries, Inc. | Coating composition, process for producing antireflective coatings, and coated articles |
| JPH08319481A (ja) * | 1995-05-26 | 1996-12-03 | Tokuyama Corp | フォトクロミック硬化体の製造方法 |
| US5719705A (en) * | 1995-06-07 | 1998-02-17 | Sola International, Inc. | Anti-static anti-reflection coating |
| US5968940A (en) * | 1995-06-08 | 1999-10-19 | Institute Of Materia Medica | Retinoids and methods of use of same |
| US5753301A (en) * | 1995-06-08 | 1998-05-19 | Essilor Of America, Inc. | Method for spin coating a multifocal lens |
| US5747102A (en) * | 1995-11-16 | 1998-05-05 | Nordson Corporation | Method and apparatus for dispensing small amounts of liquid material |
| US6022498A (en) * | 1996-04-19 | 2000-02-08 | Q2100, Inc. | Methods for eyeglass lens curing using ultraviolet light |
| US5861934A (en) * | 1996-05-06 | 1999-01-19 | Innotech, Inc. | Refractive index gradient lens |
| EP0927033A1 (en) | 1996-07-02 | 1999-07-07 | Bar-Ilan University | Retinoyloxy(substituted)alkylene butyrates useful for the treatment of cancer and other proliferative diseases |
| GB9614804D0 (en) | 1996-07-15 | 1996-09-04 | Chiroscience Ltd | Resolution process |
| US5914174A (en) * | 1996-12-05 | 1999-06-22 | Innotech, Inc. | Lens or semi-finished blank comprising photochromic resin compositions |
| US5827533A (en) * | 1997-02-06 | 1998-10-27 | Duke University | Liposomes containing active agents aggregated with lipid surfactants |
| US5903105A (en) * | 1997-07-21 | 1999-05-11 | Samsung Electronics Co., Ltd. | Apparatus and method for controlling lighting of fluorescent lamp for refrigerator |
| US5989462A (en) * | 1997-07-31 | 1999-11-23 | Q2100, Inc. | Method and composition for producing ultraviolent blocking lenses |
| JPH11197571A (ja) * | 1998-01-12 | 1999-07-27 | Nordson Kk | 吐出ガンの弁機構の開閉速度制御方法及び装置並びに液状体の吐出塗布方法 |
| US6478990B1 (en) * | 1998-09-25 | 2002-11-12 | Q2100, Inc. | Plastic lens systems and methods |
| US6042754A (en) * | 1998-10-30 | 2000-03-28 | Optima, Inc. | Continuous extrusion-compression molding process for making optical articles |
| US6218494B1 (en) * | 1998-11-18 | 2001-04-17 | Essilor International - Compagnie Generale D'optique | Abrasion-resistant coating composition process for making such coating composition and article coated therewith |
| US6419873B1 (en) * | 1999-03-19 | 2002-07-16 | Q2100, Inc. | Plastic lens systems, compositions, and methods |
| IT1311924B1 (it) * | 1999-04-13 | 2002-03-20 | Nicox Sa | Composti farmaceutici. |
| IT1311923B1 (it) | 1999-04-13 | 2002-03-20 | Nicox Sa | Composti farmaceutici. |
| US6054595A (en) * | 1999-06-30 | 2000-04-25 | Baylor University | Method for synthesis of N-homocysteine thiolactonyl retinamide |
| IT1314184B1 (it) | 1999-08-12 | 2002-12-06 | Nicox Sa | Composizioni farmaceutiche per la terapia di condizioni di stressossidativo |
| WO2001093836A2 (en) | 2000-06-09 | 2001-12-13 | Teni Boulikas | Encapsulation of polynucleotides and drugs into targeted liposomes |
| WO2002061537A2 (en) * | 2001-02-01 | 2002-08-08 | Worldpak, Inc. | Method and apparatus for facilitating shipment of goods |
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