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EP1660880A1 - Device and method for the quantitative evaluation of the polypeptides contained in a body fluid sample, and marker for the detection of pathological states - Google Patents

Device and method for the quantitative evaluation of the polypeptides contained in a body fluid sample, and marker for the detection of pathological states

Info

Publication number
EP1660880A1
EP1660880A1 EP04764788A EP04764788A EP1660880A1 EP 1660880 A1 EP1660880 A1 EP 1660880A1 EP 04764788 A EP04764788 A EP 04764788A EP 04764788 A EP04764788 A EP 04764788A EP 1660880 A1 EP1660880 A1 EP 1660880A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
polypeptides
combination
polypeptide
diabetes
diagnosis
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP04764788A
Other languages
German (de)
French (fr)
Inventor
Harald Mischak
Stefan Wittke
Thorsten Kaiser
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Mosaiques Diagnostics and Therapeutics AG
Original Assignee
Mosaiques Diagnostics and Therapeutics AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Mosaiques Diagnostics and Therapeutics AG filed Critical Mosaiques Diagnostics and Therapeutics AG
Publication of EP1660880A1 publication Critical patent/EP1660880A1/en
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
    • G01N33/6848—Methods of protein analysis involving mass spectrometry
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2550/00—Electrophoretic profiling, e.g. for proteome analysis
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/24—Nuclear magnetic resonance, electron spin resonance or other spin effects or mass spectrometry

Definitions

  • the invention relates to devices and methods for the quantitative evaluation of the polypeptides contained in a body fluid sample and comparison with reference values stored in a database, as well as markers for the detection of pathological conditions.
  • DE 100 21 737 C2 discloses a method and a device for the qualitative and / or quantitative determination of a protein and / or polypeptide pattern of a liquid sample. Proteins and / or polypeptides of a liquid sample are separated by capillary electrophoresis, then directly ionized and transferred online via an interface to a mass spectrometer coupled to them for detection.
  • Diabetes is often a precursor to diabetic nephropathy, which can develop over years and decades.
  • the nephropathy in diabetes goes through several Stadiums.
  • An early diagnosis of diabetic nephropathy is difficult with the currently available means, only with great effort and only at a relatively late point in time.
  • Timely diagnosis and consistent treatment of manifest nephropathy would not only prevent or delay the need for dialysis, but would also reduce the high cardiovascular risk of the patient with diabetes.
  • polypeptide patterns of a liquid sample e.g. Urine
  • a liquid sample e.g. Urine
  • Further studies show that the diagnosis of diseases other than the aforementioned diabetes and diabetic nephropathy is also possible via polypeptide patterns.
  • the invention is based on the object of specifying, in a device and a method for the quantitative evaluation of the polypeptides contained in a body fluid sample and comparison with reference values stored in a database, a definition of the polypeptides suitable for computer-controlled storage and evaluation.
  • This task is performed in a device for the quantitative evaluation of the polypeptides contained in a body fluid sample and comparison with reference values stored in a database, characterized in that the reference values are stored as data records of state-relevant polypeptides, each of which contains at least one indication of the probability of occurrence and / or the concentration of the polypeptides for a pathological condition in samples from healthy and sick test subjects, and in a method for the quantitative evaluation of the polypeptides contained in a body fluid sample and comparison with reference values stored in a database, characterized in that the reference values as data sets of condition-relevant polypeptides can be used for the comparison by giving an indication of the probability of the occurrence and / or concentration of the polypeptides in the body fluid sample with the Specification of at least one reference value about the probability of the occurrence and / or the concentration of the polypeptides for a pathological condition in samples from healthy and sick test subjects is compared.
  • the invention is also based on the object of specifying a marker for recognizing pathological conditions via a definition of the polypeptides contained which is suitable for storage and evaluation.
  • This task is identified in a marker for the detection of pathological conditions, characterized by a plurality of condition-relevant polypeptides, each of which is linked to an indication of the probability of the occurrence and / or the concentration of the polypeptide for a pathological condition in samples from healthy and sick test subjects , solved.
  • polypeptides are evaluated, the concentration of which changes significantly in the body fluid in a pathological state compared to a normal state.
  • concentration of which changes significantly in the body fluid in a pathological state compared to a normal state can be determined in preliminary studies with a large number of subjects.
  • Each polypeptide is linked to information which, for a pathological condition, includes information about the probability of occurrence or concentration in a healthy and in a sick subject.
  • polypeptides can be defined by specifying their associated mass and their associated capillary electrophoresis retention time.
  • the capillary electrophoresis retention time can be determined, for example, by capillary electrophoresis using a 90 cm long glass capillary with an inner diameter (ID) of 75 ⁇ m and an outer diameter (OD) of 360 ⁇ m at a voltage of 30 kV, using as solvent for the sample 30% methanol, 0.5% formic acid in water is used.
  • ID inner diameter
  • OD outer diameter
  • condition-relevant polypeptides were summarized in a database, which were determined and verified on the basis of urine samples from a large number of test subjects. Individual polypeptides, a combination of polypeptides or all polypeptides can be compared here.
  • polypeptides serving as markers can potentially also be therapeutic targets. This makes it possible to develop therapeutics that have these polypeptides either as a basis or as a target structure.
  • the occurrence and / or the concentration of the polypeptides are changed in each case by supplementation and / or antibodies in the body in such a way that their concentration in the examined body fluid again assumes normal values.
  • Fig. 2 graphical representations of polypeptide patterns and their relationship.
  • the presence and the concentration of a large number of polypeptides in the urine are analyzed. This is currently done by means of capillary electrophoresis coupled to a mass spectrometer (CE-MS), but can also be done with other methods.
  • CE-MS mass spectrometer
  • Fig. Lb shows the image of the "Raw data", from which relevant signals, referred to in FIG. 1c as “recognized signals”, are first filtered out using a filter and evaluation software, and then a polypeptide pattern, referred to in FIG. 1d as "polypeptide pattern", is calculated the polypeptides are annotated / identified by their mass and retention time in the CE and their concentration is calculated from the amplitude of the signal.
  • the data forming the polypeptide pattern are stored in a database.
  • the information required for unambiguous identification is stored in a separate data record for each relevant polypeptide.
  • Fig. Le symbolically shows a screen representation of several data records.
  • a typical polypeptide pattern of healthy kidneys was created from the database comparison of over 50 measurements. The same technology was used to measure urine samples from over 200 Type I and Type II diabetes patients. These patients represent groups of different stages of kidney disease, from completely normal to values of over 3 g protein / day in the urine.
  • a group-specific polypeptide pattern is developed from the collected polypeptide patterns of an investigation group.
  • the polypeptide patterns obtained in this way show typical deviations from the normal samples, ie changes in individual polypeptides.
  • graphical representations of the group-specific polypeptide patterns according to the table in FIG. 2 are shown.
  • polypeptide patterns of the group K0, PO, Pl, P2 are shown in Fig. 2a, 2b, 2c, 2d.
  • a synthetic overall picture is assembled from the polypeptide patterns of groups K0, PO, Pl, P2 and this is used as a marker profile to create a polypeptide pattern according to FIG. 2e.
  • the changes in the polypeptide pattern are partly due to the underlying disease diabetes and can therefore be found evenly in all diabetics, partly due to or also the cause of the beginning / progressing nephropathy. These polypeptides can thus be used as markers for the diagnosis of diabetes or diabetic nephropathy.
  • polypeptides present there are then searched for in the examined patient samples, after which their presence or absence is used for the diagnosis, as shown in FIG. 2f.
  • the following table summarizes the particularly relevant marker polypeptides found in the context of the detection of diabetic nephropathy.
  • the polypeptides mentioned here serve to identify the disease at an early stage and can be used individually, in part or in full combination.
  • the list contains 380 polypeptides, defined by their mass and their retention time in capillary electrophoresis. Sequence numbers 1 to 157 form the marker peptides used for the diagnosis "diabetes”. Sequence numbers 158 to 380 contain the marker peptides used for the diagnosis "kidney damage”. Within these two groups, the polypeptides are initially sorted according to whether they are a “Positive”, ie polypeptide that occurs more frequently in the event of illness, or a “negative”. The polypeptides are then sorted in ascending order according to their mass.
  • the device according to the invention or the method according to the invention is additionally characterized in that the polypeptides are defined by stating their associated mass and their associated capillary electrophoresis retention time, as can be determined in the case of capillary electrophoresis coupled to a mass spectrometer.
  • the database for the diagnosis "diabetes" comprises at least one, a sub-combination or all data records of the polypeptides No. 1 to No. 157 of the table above.
  • the database for the diagnosis "kidney damage" at least one, a sub-combination or all data sets of polypeptides No. 158 to 380 of the table above.
  • the marker according to the invention is additionally characterized in that the polypeptides are defined by stating their associated mass and their associated capillary electrophoresis retention time, as can be determined in the case of capillary electrophoresis coupled to a mass spectrometer.
  • the marker is characterized in that for the diagnosis “diabetes” at least one polypeptide, a sub-combination of the polypeptides or all polypeptides from No. 1 to 157 of the table above or for the diagnosis “kidney damage” at least one polypeptide, a sub-combination of the polypeptides or all polypeptides Nos. 158 to 380 of the table above are included.
  • particularly preferred polypeptide combinations can be used for the device, the method or the marker.
  • Polypeptides No. 32 (A), 1 (B), 48 (C), 2 (D), 44 (E), 22 (F), 9 (G), 23 (H) are "positive” polypeptides as diabetes. and 20 (I) and their combinations, in particular as indicated below, are preferred.
  • Polypeptides No. 123 (A), 153 (B), 155 (C), 105 (D), 150 (E), 121 (F), 157 (G), 92 (H) are "negative” polypeptides as diabetes. and 69 (I) and their combinations, in particular as indicated below, are preferred.
  • Polypeptides No. 225 (A), 208 (B), 164 (C), 166 (D), 171 (E), 204 (F), 206 (G), 182 (H) are “positive” polypeptides as nephropathy. and 210 (I) and their combinations, in particular as indicated below, are preferred.
  • Polypeptides No. 262 (A), 260 (B), 306 (C), 358 (D), 279 (E), 318 (F), 305 (G), 261 (H) are "nephropathy” negative and 278 (I) and combinations, particularly as indicated below, are preferred.
  • two of the preferred polypeptides A, B, C, D, E, F, G, H and I mentioned above are identified as “negative” as diabetes, “positive” as diabetes, and “negative” as nephropathy or "positive” polypeptides used as nephropathy.
  • these are the combinations of the polypeptides:
  • a and B A and C, A and D, A and E, A and F, A and G, A and H, A and I, - B and C, B and D, B and E, B and F, B and G, B and H, B and I, - C and D, C and E, C and F, C and G, C and H, C and I, - D and E, D and F, D and G, D and H, D and I, - E and F, E and G, E and H, E and I, - F and G, F and H, F and I, - G and H, G and I or - H and l.
  • three of the preferred polypeptides A, B, C, D, E, F, G, H and I mentioned above are "negative” as diabetes, "positive” as diabetes, “negative” as nephropathy or "positive” polypeptides used as nephropathy.
  • these are the combinations of the polypeptides:
  • four of the preferred polypeptides A, B, C, D, E, F, G, H and I mentioned above are "negative” as diabetes, "positive” as diabetes, “negative” as nephropathy or "positive” polypeptides used as nephropathy.
  • five of the preferred polypeptides A, B, C, D, E, F, G, H and I mentioned above are "negative” as diabetes, "positive” as diabetes, “negative” as nephropathy or "positive” polypeptides used as nephropathy.
  • these are the combinations of the polypeptides:
  • six of the preferred polypeptides A, B, C, D, E, F, G, H and I mentioned above are "negative” as diabetes, "positive” as diabetes, “negative” as nephropathy or "positive” polypeptides used as nephropathy.
  • these are the combinations of the polypeptides:
  • seven of the preferred polypeptides A, B, C, D, E, F, G, H and I mentioned above are "negative” as diabetes, "positive” as diabetes, “negative” as nephropathy or "positive” polypeptides used as nephropathy.
  • these are the combinations of the polypeptides:
  • eight of the preferred polypeptides A, B, C, D, E, F, G, H and I mentioned above are "negative” as diabetes, "positive” as diabetes, “negative” as nephropathy or "positive” polypeptides used as nephropathy.
  • these are the combinations of the polypeptides:
  • all nine of the preferred polypeptides A, B, C, D, E, F, G, H and I mentioned above are "negative” as diabetes, "positive” as diabetes, “negative” as nephropathy or "positive” polypeptides used as nephropathy.
  • these are the combinations of the polypeptides:

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Abstract

Disclosed are devices and methods for quantitatively evaluating the polypeptides contained in a body fluid sample and markers for detecting pathological states. The polypeptides are compared to reference values stored in a database. Said reference values are stored as data records of state-relevant polypeptides, which comprise at least one respective indication about the probability for the polypeptides to occur or the concentration thereof for a pathological state in samples of healthy and ill subjects.

Description

- 1- 1
Vorrichtung und Verfahren zur quantitativen Auswertung der in einer Körperflüssigkeitsprobe enthaltenen Polypeptide sowie Marker zur Erkennung von pathologischen ZuständenDevice and method for the quantitative evaluation of the polypeptides contained in a body fluid sample as well as markers for the detection of pathological conditions
Die Erfindung betrifft Vorrichtungen und Verfahren zur quantitativen Auswertung der in einer Körperflüssigkeitsprobe enthaltenen Polypeptide und Vergleich mit in einer Datenbank gespeicherten Referenzwerten sowie Marker zur Erkennung von pathologischen Zuständen.The invention relates to devices and methods for the quantitative evaluation of the polypeptides contained in a body fluid sample and comparison with reference values stored in a database, as well as markers for the detection of pathological conditions.
Aus der DE 100 21 737 C2 ist ein Verfahren und eine Vorrichtung zur qualitativen und/oder quantitativen Bestimmung eines Protein- und/oder Polypeptidmusters einer Flüssigkeitsprobe bekannt. Proteine und/oder Polypeptide einer Flüssigkeitsprobe werden mittels Kapillarelektrophorese getrennt, anschließend direkt ionisiert und online über ein Interface in ein daran gekoppeltes Massenspektrometer zur Detektion überführt.DE 100 21 737 C2 discloses a method and a device for the qualitative and / or quantitative determination of a protein and / or polypeptide pattern of a liquid sample. Proteins and / or polypeptides of a liquid sample are separated by capillary electrophoresis, then directly ionized and transferred online via an interface to a mass spectrometer coupled to them for detection.
Zur Kontrolle des Zustandes eines menschlichen oder tierischen Körpers über einen längeren Zeitraum werden Zustände beschreibende Referenz- und Probenwerte sowie hieraus abgeleitete Abweichungen und Übereinstimmungen in einer Datenbank automatisch gespeichert und es wird bei einer neuen Protein- und/oder Polypeptidmuster- bestimmung automatisch nach bestmöglichen Übereinstimmungen gesucht.To check the condition of a human or animal body over a longer period of time, reference and sample values describing the condition as well as deviations and correspondences derived from it are automatically stored in a database and the best possible matches are automatically searched for when a new protein and / or polypeptide pattern is determined ,
Es hat sich gezeigt, dass mit den bisher erfassten Polypeptidmustern bereits sehr zuverlässige Aussagen über Zustände des menschlichen oder tierischen Körpers möglich sind. Diese können bisher übliche Untersuchungs- und Diagnosemethoden ergänzen oder ersetzen. Insbesondere für Diabetes und diabetische Nephropathie wurden inzwischen umfangreiche Referenz- und Probenwerte zur Bestimmung von Polypeptidmustern gewonnen.It has been shown that with the polypeptide patterns recorded so far, very reliable statements about states of the human or animal body are already possible. These can supplement or replace conventional examination and diagnostic methods. For diabetes and diabetic nephropathy in particular, extensive reference and sample values for determining polypeptide patterns have now been obtained.
Diabetes ist häufig eine Vorstufe der diabetischen Nephropathie, die sich über Jahre und Jahrzehnte entwickeln kann. Dabei durchläuft die Nephropathie bei Diabetes mehrere Stadien. Eine Frühdiagnose der diabetischen Nephropathie ist mit den derzeit verfügbaren Mitteln schlecht, nur mit großem Aufwand und auch nur zu einem relativ späten Zeitpunkt möglich.Diabetes is often a precursor to diabetic nephropathy, which can develop over years and decades. The nephropathy in diabetes goes through several Stadiums. An early diagnosis of diabetic nephropathy is difficult with the currently available means, only with great effort and only at a relatively late point in time.
Rechtzeitige Diagnose und konsequente Therapie der manifesten Nephropathie würden nicht nur die Dialysepflichtigkeit verhindern bzw. verzögern, sondern auch das hohe kardiovaskuläre Risiko des Patienten mit Diabetes senken.Timely diagnosis and consistent treatment of manifest nephropathy would not only prevent or delay the need for dialysis, but would also reduce the high cardiovascular risk of the patient with diabetes.
Es hat sich gezeigt, dass Polypeptidmuster einer Flüssigkeitsprobe, z.B. Urin, bereits in einem frühen Stadium der Krankheit eine Diagnose ermöglichen. Weitere Untersuchungen lassen erkennen, dass über Polypeptidmuster auch die Diagnose weiterer Krankheiten als der vorerwähnten Diabetes und diabetischer Nephropathie möglich ist.It has been shown that polypeptide patterns of a liquid sample, e.g. Urine, enable diagnosis at an early stage of the disease. Further studies show that the diagnosis of diseases other than the aforementioned diabetes and diabetic nephropathy is also possible via polypeptide patterns.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, bei einer Vorrichtung und einem Verfahren zur quantitativen Auswertung der in einer Körperflüssigkeitsprobe enthaltenen Polypeptide und Vergleich mit in einer Datenbank gespeicherten Referenzwerten eine für eine rechnergesteuerte Speicherung und Auswertung geeignete Definition der Polypeptide anzugeben.The invention is based on the object of specifying, in a device and a method for the quantitative evaluation of the polypeptides contained in a body fluid sample and comparison with reference values stored in a database, a definition of the polypeptides suitable for computer-controlled storage and evaluation.
Diese Aufgabe wird bei einer Vorrichtung zur quantitativen Auswertung der in einer Körperflüssigkeitsprobe enthaltenen Polypeptide und Vergleich mit in einer Datenbank gespeicherten Referenzwerten, dadurch gekennzeichnet, dass die Referenzwerte als Datensätze von zustandsrelevanten Polypeptiden gespeichert sind, die jeweils wenigstens eine Angabe über die Wahrscheinlichkeit für das Auftreten und/oder die Konzentration der Polypeptide für einen pathologischen Zustand in Proben von gesunden und kranken Probanden umfassen, und bei einem Verfahren zur quantitativen Auswertung der in einer Körperflüssigkeitsprobe enthaltenen Polypeptide und Vergleich mit in einer Datenbank gespeicherten Referenzwerten, dadurch gekennzeichnet, dass die Referenzwerte als Datensätze von zustandsrelevanten Polypeptiden für den Vergleich herangezogen werden, indem eine Angabe über die Wahrscheinlichkeit für das Auftreten und/oder Konzentration der Polypeptide in der Körperflüssigkeitsprobe mit der Angabe jeweils wenigstens eines Referenzwertes über die Wahrscheinlichkeit für das Auftreten und/oder die Konzentration der Polypeptide für einen pathologischen Zustand in Proben von gesunden und kranken Probanden verglichen wird, gelöst.This task is performed in a device for the quantitative evaluation of the polypeptides contained in a body fluid sample and comparison with reference values stored in a database, characterized in that the reference values are stored as data records of state-relevant polypeptides, each of which contains at least one indication of the probability of occurrence and / or the concentration of the polypeptides for a pathological condition in samples from healthy and sick test subjects, and in a method for the quantitative evaluation of the polypeptides contained in a body fluid sample and comparison with reference values stored in a database, characterized in that the reference values as data sets of condition-relevant polypeptides can be used for the comparison by giving an indication of the probability of the occurrence and / or concentration of the polypeptides in the body fluid sample with the Specification of at least one reference value about the probability of the occurrence and / or the concentration of the polypeptides for a pathological condition in samples from healthy and sick test subjects is compared.
Ferner liegt der Erfindung die Aufgabe zugrunde, einen Marker zur Erkennung von pathologischen Zuständen über eine für eine Speicherung und Auswertung geeignete Definition der enthaltenen Polypeptide anzugeben. Diese Aufgabe wird bei einem Marker zur Erkennung von pathologischen Zuständen, gekennzeichnet durch eine Mehrzahl zustandsrelevanter Polypeptide, die jeweils mit einer Angabe über die Wahrscheinlichkeit für das Auftreten und/oder die Konzentration des Polypeptids für einen pathologischen Zustand in Proben von gesunden und kranken Probanden verknüpft sind, gelöst.The invention is also based on the object of specifying a marker for recognizing pathological conditions via a definition of the polypeptides contained which is suitable for storage and evaluation. This task is identified in a marker for the detection of pathological conditions, characterized by a plurality of condition-relevant polypeptides, each of which is linked to an indication of the probability of the occurrence and / or the concentration of the polypeptide for a pathological condition in samples from healthy and sick test subjects , solved.
Weiterbildungen und vorteilhafte Ausgestaltungen ergeben sich aus den jeweiligen Unteransprüchen.Further developments and advantageous refinements result from the respective subclaims.
Bei der Erfindung werden Daten der Polypeptide ausgewertet, deren Konzentration sich in der Körperflüssigkeit bei einem pathologischen Zustand gegenüber einem Normalzustand deutlich ändert. Diese Polypeptide können in Vorstudien mit einer Vielzahl von Probanden ermittelt werden.In the invention, data of the polypeptides are evaluated, the concentration of which changes significantly in the body fluid in a pathological state compared to a normal state. These polypeptides can be determined in preliminary studies with a large number of subjects.
Jedes Polypeptid wird mit Angaben verknüpft, die für einen pathologischen Zustand eine Angabe über die Wahrscheinlichkeit für das Auftreten bzw. die Konzentration bei einem gesunden und bei einem kranken Probanden umfassen.Each polypeptide is linked to information which, for a pathological condition, includes information about the probability of occurrence or concentration in a healthy and in a sick subject.
Bei dem Vergleich der Polypeptide aus Flüssigkeitsproben mit Referenzwerten ergibt sich für jedes verglichene Polypeptid der Flüssigkeitsprobe eine Zuordnung dahingehend, ob sein Auftreten und/oder seine Konzentration den gesunden oder den kranken Zustand repräsentiert. Durch Vergleich einer Mehrzahl von Polypeptiden können Verfälschungen des Gesamtergebnisses durch einzelne individuelle Abweichungen von der typischen Auftrittswahrscheinlichkeit und Konzentrationen reduziert oder vermieden werden.When comparing the polypeptides from liquid samples with reference values, for each compared polypeptide of the liquid sample there is an assignment as to whether its occurrence and / or its concentration represents the healthy or diseased state. By comparing a plurality of polypeptides, falsifications of the overall result can be reduced or avoided by individual individual deviations from the typical probability of occurrence and concentrations.
Gemäß einer Weiterbildung können die Polypeptide durch Angabe ihrer zugehörigen Masse und ihrer zugehörigen Kapillarelektrophorese-Retentionszeit definiert werden.According to a further development, the polypeptides can be defined by specifying their associated mass and their associated capillary electrophoresis retention time.
Es werden so die Daten der Kapillarelektrophorese und der Massenspektrometrie unmittelbar übernommen. Diese Angaben sind für alle Polypeptide unterschiedlich aber eindeutig, so dass die Angaben zur Definition ausreichen. Die Kapillarelektrophorese- Retentionszeit kann z.B. durch Kapillarelektrophorese unter Verwendung einer 90 cm langen Glaskapillare mit einem inneren Durchmesser (ID) von 75 μm und einem äußeren Durchmesser (OD) von 360 μm bei einer Spannung von 30 kV bestimmt werden, wobei als Lösungsmittel für die Probe wird 30 % Methanol, 0,5 % Ameisensäure in Wasser verwendet wird. Für die Diagnose „Diabetes" und „Nierenschädigung" wurden spezielle Datensätze von zustandsrelevanten Polypeptiden in einer Datenbank zusammengefasst, die anhand von Urinproben einer Mehrzahl von Probanden ermittelt und verifiziert wurden. Es können hier einzelne Polypeptide, eine Kombination von Polypeptiden oder alle Polypeptide verglichen werden.The data from capillary electrophoresis and mass spectrometry are thus taken over immediately. This information is different but clear for all polypeptides, so that the information is sufficient for the definition. The capillary electrophoresis retention time can be determined, for example, by capillary electrophoresis using a 90 cm long glass capillary with an inner diameter (ID) of 75 μm and an outer diameter (OD) of 360 μm at a voltage of 30 kV, using as solvent for the sample 30% methanol, 0.5% formic acid in water is used. For the diagnosis of "diabetes" and "kidney damage", special data sets of condition-relevant polypeptides were summarized in a database, which were determined and verified on the basis of urine samples from a large number of test subjects. Individual polypeptides, a combination of polypeptides or all polypeptides can be compared here.
Da die Repräsentanz vieler Polypeptide für den gesunden und den pathologischen Zustand redundant ist, könnte im einfachsten Fall der Vergleich nur eines dieser Polypeptide ausreichen. Um jedoch Fehler durch statistische Unsicherheiten oder individuelle Abweichungen auszuschalten, ist der Vergleich einer Kombination der zustandsrelevanten Polypeptide anzustreben. Ein optimales Ergebnis wird erzielt, wenn alle aufgelisteten Polypeptide verglichen werden.Since the representation of many polypeptides for the healthy and the pathological state is redundant, in the simplest case the comparison of only one of these polypeptides could be sufficient. However, in order to eliminate errors due to statistical uncertainties or individual deviations, the comparison of a combination of the state-relevant polypeptides should be aimed at. An optimal result is achieved if all polypeptides listed are compared.
Diese als Marker dienenden Polypeptide können potentiell auch therapeutische Targets sein. So ist die Entwicklung von Therapeutika möglich, die diese Polypeptide entweder zur Grundlage oder auch als Zielstruktur haben. Dabei werden das Vorkommen und/oder die Konzentration der Polypeptide jeweils durch Ergänzung und/oder Antikörper im Körper so verändert, dass ihre Konzentration in der untersuchten Körperflüssigkeit wieder normale Werte annimmt.These polypeptides serving as markers can potentially also be therapeutic targets. This makes it possible to develop therapeutics that have these polypeptides either as a basis or as a target structure. The occurrence and / or the concentration of the polypeptides are changed in each case by supplementation and / or antibodies in the body in such a way that their concentration in the examined body fluid again assumes normal values.
Nachfolgend wird die Erfindung anhand der Zeichnungen erläutert. Darin zeigen:The invention is explained below with reference to the drawings. In it show:
Fig. 1 grafische Darstellungen einzelner Zwischenschritte bei der Datengewinnung zur Definition von Polypeptidmustern,1 graphical representations of individual intermediate steps in data acquisition for the definition of polypeptide patterns,
Fig. 2 grafische Darstellungen von Polypeptidmustern und deren Zusammenhang.Fig. 2 graphical representations of polypeptide patterns and their relationship.
Bei dem Ausfuhrungsbeispiel der Erfindung werden die Anwesenheit sowie die Konzentration einer großen Zahl von Polypeptiden im Urin analysiert. Dies geschieht derzeit mittels Kapillarelektrophorese gekoppelt an ein Massenspektrometer (CE-MS), kann jedoch gezielt auch mit anderen Methoden erfolgen.In the exemplary embodiment of the invention, the presence and the concentration of a large number of polypeptides in the urine are analyzed. This is currently done by means of capillary electrophoresis coupled to a mass spectrometer (CE-MS), but can also be done with other methods.
Die Ergebnisse der CE-MS-Messung, symbolisiert durch die Grafik in Fig. la, führen nach dreidimensionaler Darstellung durch Auftragen der Retentionszeit über der x- Achse, der Masse über der y-Achse und der Signalamplitude über der z-Achse zu einem Polypeptidmuster von typischerweise 500-1500 Polypeptiden. Fig. lb zeigt die Abbildung der „Rohdaten", aus denen mittels einer Filter- und Auswertungssoftware zunächst relevante Signale, in Fig. lc als „Anerkannte Signale" bezeichnet, herausgefiltert werden, und anschließend ein Polypeptidmuster, in Fig. ld als „Polypeptid Pattern" bezeichnet, berechnet werden. Dabei werden die Polypeptide über ihre Masse und Retentionszeit in der CE annotiert/identifiziert. Ihre Konzentration wird über die Amplitude des Signals errechnet.The results of the CE-MS measurement, symbolized by the graphic in FIG. 1 a, lead to a polypeptide pattern after three-dimensional representation by plotting the retention time over the x-axis, the mass over the y-axis and the signal amplitude over the z-axis of typically 500-1500 polypeptides. Fig. Lb shows the image of the "Raw data", from which relevant signals, referred to in FIG. 1c as "recognized signals", are first filtered out using a filter and evaluation software, and then a polypeptide pattern, referred to in FIG. 1d as "polypeptide pattern", is calculated the polypeptides are annotated / identified by their mass and retention time in the CE and their concentration is calculated from the amplitude of the signal.
Die das Polypeptidmuster bildenden Daten werden in einer Datenbank abgelegt. Dabei sind für jedes relevante Polypeptid die zur eindeutigen Identifizierung nötigen Informationen in einem gesonderten Datensatz gespeichert. Fig. le zeigt symbolisch eine Bildschirmdarstellung mehrerer Datensätze.The data forming the polypeptide pattern are stored in a database. The information required for unambiguous identification is stored in a separate data record for each relevant polypeptide. Fig. Le symbolically shows a screen representation of several data records.
Zur Erkennung der wesentlichen Polypeptide wurde Urin von Patienten mit und ohne diagnostizierter diabetischer Nephropathie bzw. mit und ohne diagnostizierter Diabetes mittels CE-MS untersucht.To identify the essential polypeptides, urine from patients with and without diagnosed diabetic nephropathy or with and without diagnosed diabetes was examined using CE-MS.
Aus dem Datenbankvergleich von über 50 Messungen konnte ein typisches Polypeptidmuster von nierengesunden Probanden erstellt werden. Mit derselben Technologie wurden Urinproben von über 200 Patienten mit Diabetes Typ I und Typ II gemessen. Diese Patienten stellen Kollektive von unterschiedlichen Stadien an Nierenerkrankungen dar, von vollkommen unauffällig bis hin zu Werten von über 3 g Protein/Tag im Urin.A typical polypeptide pattern of healthy kidneys was created from the database comparison of over 50 measurements. The same technology was used to measure urine samples from over 200 Type I and Type II diabetes patients. These patients represent groups of different stages of kidney disease, from completely normal to values of over 3 g protein / day in the urine.
Zur Analyse der Daten wurden die Patienten in vier Gruppen aufgeteilt, wie in der nachfolgenden Tabelle dargestellt.To analyze the data, the patients were divided into four groups, as shown in the table below.
Aus den gesammelten Polypeptidmustern einer Untersuchungsgruppe wird ein gruppenspezifisches Polypeptidmuster entwickelt. Die so erhaltenen Polypeptidmuster zeigen typische Abweichungen gegenüber den Normalproben, d.h. Veränderungen in einzelnen Polypeptiden. Zur Veranschaulichung sind grafische Darstellungen der gruppenspezifi- sehen Polypeptidmuster nach der Tabelle in Fig. 2 gezeigt. A group-specific polypeptide pattern is developed from the collected polypeptide patterns of an investigation group. The polypeptide patterns obtained in this way show typical deviations from the normal samples, ie changes in individual polypeptides. For illustration, graphical representations of the group-specific polypeptide patterns according to the table in FIG. 2 are shown.
Die Polypeptidmuster der Gruppe K0, PO, Pl, P2 sind jeweils in Fig. 2a, 2b, 2c, 2d wiedergegeben. Aus den Polypeptidmustern der Gruppen K0, PO, Pl, P2 wird ein synthetisches Gesamtbild zusammengesetzt und dieses zur Erstellung eines Polypeptidmusters nach Fig. 2e als Markerprofil verwendet.The polypeptide patterns of the group K0, PO, Pl, P2 are shown in Fig. 2a, 2b, 2c, 2d. A synthetic overall picture is assembled from the polypeptide patterns of groups K0, PO, Pl, P2 and this is used as a marker profile to create a polypeptide pattern according to FIG. 2e.
Für die Suche nach relevanten Markern wurden nur solche Polypeptide herangezogen, die in wenigstens einer der Gruppen in relevanter Anzahl, hier größer 40% gefunden werden konnten. Anschließend wurden diejenigen Polypeptide betrachtet, die eine Unterscheidung zwischen den Klassen „gesund" und „krank" möglich machen. Dabei wurde auf eine konsistente Entwicklung über die Gruppen hinweg Rücksicht genommen.For the search for relevant markers, only those polypeptides were used that could be found in at least one of the groups in a relevant number, here greater than 40%. Then those polypeptides were considered that make it possible to differentiate between the classes "healthy" and "sick". A consistent development across the groups was taken into account.
Die Veränderungen im Polypeptidmuster sind zum Teil bedingt durch die Grunderkrankung Diabetes und somit gleichmäßig in allen Diabetikern zu finden, zum Teil bedingt oder auch Ursache der beginnenden/fortschreitenden Nephropathie. Somit können diese Polypeptide als Marker zur Diagnose von Diabetes bzw. von diabetischer Nephropathie herangezogen werden.The changes in the polypeptide pattern are partly due to the underlying disease diabetes and can therefore be found evenly in all diabetics, partly due to or also the cause of the beginning / progressing nephropathy. These polypeptides can thus be used as markers for the diagnosis of diabetes or diabetic nephropathy.
Die dort vorhandenen Polypeptide werden anschließend in den untersuchten Patientenproben gesucht, wonach deren Vorhandensein oder Fehlen zur Diagnosestellung verwendet wird, wie es Fig. 2f zeigt.The polypeptides present there are then searched for in the examined patient samples, after which their presence or absence is used for the diagnosis, as shown in FIG. 2f.
Die nachfolgende Tabelle stellt die im Rahmen der Erkennung einer diabetischen Nephropathie gefundenen besonders relevanten Markerpolypeptide zusammen. Die hier genannten Polypeptide dienen zur Erkennung der Krankheit in einem frühen Stadium und können dabei einzeln, auszugsweise oder in vollständiger Kombination verwendet werden.The following table summarizes the particularly relevant marker polypeptides found in the context of the detection of diabetic nephropathy. The polypeptides mentioned here serve to identify the disease at an early stage and can be used individually, in part or in full combination.
Die Liste enthält 380 Polypeptide, definiert über ihre Masse und ihre Retentionszeit in der Kapillarelektrophorese. Die laufenden Nummern 1 bis 157 bilden die für die Diagnose „Diabetes" verwendeten Markerpeptide. Die laufenden Nummern 158 bis 380 beinhalten die für die Diagnose „Nierenschädigung" herangezogenen Markerpeptide. Innerhalb dieser beiden Gruppen sind die Polypeptide zunächst danach sortiert, ob es sich um ein „positives", also im Krankheitsfalle vermehrt auftretendes Polypeptid, oder ein „negatives" handelt. Anschließend sind die Polypeptide in aufsteigender Reihenfolge nach ihrer Masse sortiert.The list contains 380 polypeptides, defined by their mass and their retention time in capillary electrophoresis. Sequence numbers 1 to 157 form the marker peptides used for the diagnosis "diabetes". Sequence numbers 158 to 380 contain the marker peptides used for the diagnosis "kidney damage". Within these two groups, the polypeptides are initially sorted according to whether they are a “Positive”, ie polypeptide that occurs more frequently in the event of illness, or a “negative”. The polypeptides are then sorted in ascending order according to their mass.
In der nachfolgenden Tabelle haben die einzelnen Spalten folgende Bedeutung:In the table below, the individual columns have the following meaning:
In einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung ist die erfindungsgemäße Vorrichtung oder das erfindungsgemäße Verfahren zusätzlich dadurch gekennzeichnet, dass die Polypeptide durch Angabe ihrer zugehörigen Masse und ihrer zugehörigen Kapillarelektrophorese-Retentionszeit, wie sie bei Kapillareletrophorese gekoppelt an ein Massenspektrometer ermittelbar sind, definiert sind. In einer weiter bevorzugten Ausfuhrungsform umfasst die Datenbank für die Diagnose „Diabetes" wenigstens einen, eine Unterkombination oder alle Datensätze der Polypeptide Nr. 1 bis Nr. 157 der obigen Tabelle. In einer anderen weiter bevorzugten Ausfuhrungsform umfasst die Datenbank für die Diagnose „Nierenschädigung" wenigstens einen, eine Unterkombination oder alle Datensätze der Polypeptide Nr. 158 bis 380 der obigen Tabelle.In a preferred embodiment of the invention, the device according to the invention or the method according to the invention is additionally characterized in that the polypeptides are defined by stating their associated mass and their associated capillary electrophoresis retention time, as can be determined in the case of capillary electrophoresis coupled to a mass spectrometer. In a further preferred embodiment, the database for the diagnosis "diabetes" comprises at least one, a sub-combination or all data records of the polypeptides No. 1 to No. 157 of the table above. In another further preferred embodiment, the database for the diagnosis "kidney damage" at least one, a sub-combination or all data sets of polypeptides No. 158 to 380 of the table above.
In einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung ist der erfindungsgemäße Marker zusätzlich dadurch gekennzeichnet, dass die Polypeptide durch Angabe ihrer zugehörigen Masse und ihrer zugehörigen Kapillarelektrophorese-Retentionszeit, wie sie bei Kapillarelektrophorese gekoppelt an ein Massenspektrometer ermittelbar sind, definiert sind. Insbesondere ist der Marker dadurch gekennzeichnet, dass für die Diagnose „Diabetes" wenigstens ein Polypeptid, eine Unterkombination der Polypeptide oder alle Polypeptide der Nr. 1 bis 157 der obigen Tabelle oder für die Diagnose „Nierenschädigung" wenigstens ein Polypeptid, eine Unterkombination der Polypeptide oder alle Polypeptide Nr. 158 bis 380 der obigen Tabelle enthalten ist/sind.In a preferred embodiment of the invention, the marker according to the invention is additionally characterized in that the polypeptides are defined by stating their associated mass and their associated capillary electrophoresis retention time, as can be determined in the case of capillary electrophoresis coupled to a mass spectrometer. In particular, the marker is characterized in that for the diagnosis “diabetes” at least one polypeptide, a sub-combination of the polypeptides or all polypeptides from No. 1 to 157 of the table above or for the diagnosis “kidney damage” at least one polypeptide, a sub-combination of the polypeptides or all polypeptides Nos. 158 to 380 of the table above are included.
In einer besonders bevorzugten Ausführungsform der Erfindung können für die Vorrichtung, das Verfahren oder den Marker besonders bevorzugte Polypeptidkombina- tionen verwendet werden.In a particularly preferred embodiment of the invention, particularly preferred polypeptide combinations can be used for the device, the method or the marker.
Als Diabetes „positive" Polypeptide sind die Polypeptide Nr. 32 (A), 1 (B), 48 (C), 2 (D), 44 (E), 22 (F), 9 (G), 23 (H) und 20 (I) und deren Kombinationen, insbesondere wie unten angegeben, bevorzugt. Als Diabetes „negative" Polypeptide sind die Polypeptide Nr. 123 (A), 153 (B), 155 (C), 105 (D), 150 (E), 121 (F), 157 (G), 92 (H) und 69 (I) und deren Kombinationen, insbesondere wie unten angegeben, bevorzugt.Polypeptides No. 32 (A), 1 (B), 48 (C), 2 (D), 44 (E), 22 (F), 9 (G), 23 (H) are "positive" polypeptides as diabetes. and 20 (I) and their combinations, in particular as indicated below, are preferred. Polypeptides No. 123 (A), 153 (B), 155 (C), 105 (D), 150 (E), 121 (F), 157 (G), 92 (H) are "negative" polypeptides as diabetes. and 69 (I) and their combinations, in particular as indicated below, are preferred.
Als Nephropathie „positive" Polypeptide sind die Polypeptide Nr. 225 (A), 208 (B), 164 (C), 166 (D), 171 (E), 204 (F), 206 (G), 182 (H) und 210 (I) und deren Kombinationen, insbesondere wie unten angegeben, bevorzugt.Polypeptides No. 225 (A), 208 (B), 164 (C), 166 (D), 171 (E), 204 (F), 206 (G), 182 (H) are “positive” polypeptides as nephropathy. and 210 (I) and their combinations, in particular as indicated below, are preferred.
Als Nephropathie „negative" Polypeptide sind die Polypeptide Nr. 262 (A), 260 (B), 306 (C), 358 (D), 279 (E), 318 (F), 305 (G), 261 (H) und 278 (I) und Kombinationen, insbesondere wie unten angegeben, bevorzugt.Polypeptides No. 262 (A), 260 (B), 306 (C), 358 (D), 279 (E), 318 (F), 305 (G), 261 (H) are "nephropathy" negative and 278 (I) and combinations, particularly as indicated below, are preferred.
In einer noch weiter bevorzugten Ausluhrungsform der Erfindung werden jeweils zwei der oben genannten bevorzugten Polypeptide A, B, C, D, E, F, G, H und I als Diabetes „negative", als Diabetes „positive", als Nephropathie „negative" oder als Nephropathie „positive" Polypeptide verwendet. Insbesondere sind dies die Kombinationen der Polypeptide:In a still further preferred embodiment of the invention, two of the preferred polypeptides A, B, C, D, E, F, G, H and I mentioned above are identified as “negative” as diabetes, “positive” as diabetes, and “negative” as nephropathy or "positive" polypeptides used as nephropathy. In particular, these are the combinations of the polypeptides:
- A und B, A und C, A und D, A und E, A und F, A und G, A und H, A und I, - B und C, B und D, B und E, B und F, B und G, B und H, B und I, - C und D, C und E, C und F, C und G, C und H, C und I, - D und E, D und F, D und G, D und H, D und I, - E und F, E und G, E und H, E und I, - F und G, F und H, F und I, - G und H, G und I oder - H und l.- A and B, A and C, A and D, A and E, A and F, A and G, A and H, A and I, - B and C, B and D, B and E, B and F, B and G, B and H, B and I, - C and D, C and E, C and F, C and G, C and H, C and I, - D and E, D and F, D and G, D and H, D and I, - E and F, E and G, E and H, E and I, - F and G, F and H, F and I, - G and H, G and I or - H and l.
In einer anderen weiter bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden drei der oben genannten bevorzugten Polypeptide A, B, C, D, E, F, G, H und I als Diabetes „negative", als Diabetes „positive", als Nephropathie „negative" oder als Nephropathie „positive" Polypeptide verwendet. Insbesondere sind dies die Kombinationen der Polypeptide:In another further preferred embodiment of the invention, three of the preferred polypeptides A, B, C, D, E, F, G, H and I mentioned above are "negative" as diabetes, "positive" as diabetes, "negative" as nephropathy or "positive" polypeptides used as nephropathy. In particular, these are the combinations of the polypeptides:
- A und B in Kombination mit einem der Polypeptide C, D, E, F, G, H oder I, - A und C in Kombination mit einem der Polypeptide D, E, F, G, H oder I, — A und D in Kombination mit einem der Polypeptide E, F, G, H oder I, - A und E in Kombination mit einem der Polypeptide F, G, H oder I, - A und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I, - A und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, - A und H in Kombination mit dem Polypeptid I, - B und C in Kombination mit einem der Polypeptide D, E, F, G, H oder I, - B und D in Kombination mit einem der Polypeptide E, F, G, H oder I, - B und E in Kombination mit einem der Polypeptide F, G, H oder I, - B und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I, - B und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, - B und H in Kombination mit I, - C und D in Kombination mit einem der Polypeptide E, F, G, H oder I, - C und E in Kombination mit einem der Polypeptide F, G, H oder I, . - C und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I, - C und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, - C und H in Kombination mit I, - D und E in Kombination mit einem der Polypeptide F, G, H oder I, - D und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I, - D und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, - D und H in Kombination mit I, - E und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I, - E und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — E und H in Kombination mit I, - F und G in Kombination mit H oder I, - F und H in Kombination mit I oder - G und H in Kombination mit I.- A and B in combination with one of the polypeptides C, D, E, F, G, H or I, - A and C in combination with one of the polypeptides D, E, F, G, H or I, - A and D in combination with one of the polypeptides E, F, G, H or I, - A and E in combination with one of the polypeptides F, G, H or I, - A and F in combination with one of the polypeptides G, H or I, A and G in combination with one of the polypeptides H or I, A and H in combination with the polypeptide I, B and C in combination with one of the polypeptides D, E, F, G, H or I, B and D in combination with one of the polypeptides E, F, G, H or I, - B and E in combination with one of the polypeptides F, G, H or I, - B and F in combination with one of the polypeptides G, H or I. , - B and G in combination with one of the polypeptides H or I, - B and H in combination with I, - C and D in combination with one of the polypeptides E, F, G, H or I, - C and E in combination with one of the polypeptides F, G, H or I,. - C and F in combination with one of the polypeptides G, H or I, - C and G in combination with one of the polypeptides H or I, - C and H in combination with I, - D and E in combination with one of the polypeptides F , G, H or I, - D and F in combination with one of the polypeptides G, H or I, - D and G in combination with one of the polypeptides H or I, - D and H in combination with I, - E and F in combination with one of the polypeptides G, H or I, - E and G in combination with one of the polypeptides H or I, - E and H in combination with I, - F and G in combination with H or I, - F and H in combination with I or - G and H in combination with I.
In einer anderen weiter bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden vier der oben genannten bevorzugten Polypeptide A, B, C, D, E, F, G, H und I als Diabetes „negative", als Diabetes „positive", als Nephropathie „negative" oder als Nephropathie „positive" Polypeptide verwendet. Insbesondere sind dies die Kombinationen der Polypeptide: - A, B und C in Kombination mit einem der Polypeptide D, E, F, G, H oder I, - A, B und D in Kombination mit einem der Polypeptide E, F, G, H oder I, - A, B und E in Kombination mit einem der Polypeptide F, G, H oder I, - A, B und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I, - A, B und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — A, B und H in Kombination mit I, - A, C und D in Kombination mit einem der Polypeptide E, F, G, H oder I, - A, C und E in Kombination mit einem der Polypeptide F, G, H oder I, - A, C und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I,In another further preferred embodiment of the invention, four of the preferred polypeptides A, B, C, D, E, F, G, H and I mentioned above are "negative" as diabetes, "positive" as diabetes, "negative" as nephropathy or "positive" polypeptides used as nephropathy. In particular, these are the combinations of the polypeptides: A, B and C in combination with one of the polypeptides D, E, F, G, H or I, A, B and D in combination with one of the polypeptides E, F, G, H or I, - A, B and E in combination with one of the polypeptides F, G, H or I, - A, B and F in combination with one of the polypeptides G, H or I, - A, B and G in combination with one of the polypeptides H or I, - A, B and H in combination with I, - A, C and D in combination with one of the polypeptides E, F, G, H or I, - A, C and E in combination with one of the polypeptides F, G, H or I, A, C and F in combination with one of the polypeptides G, H or I,
- A, C und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I,A, C and G in combination with one of the polypeptides H or I,
- A, C und H in Kombination mit I,- A, C and H in combination with I,
- A, D und E in Kombination mit einem der Polypeptide F, G, H oder I, - A, D und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I,A, D and E in combination with one of the polypeptides F, G, H or I, A, D and F in combination with one of the polypeptides G, H or I,
- A, D und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I,A, D and G in combination with one of the polypeptides H or I,
- A, D und H in Kombination mit I,- A, D and H in combination with I,
- A, E und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I,A, E and F in combination with one of the polypeptides G, H or I,
- A, E und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — A, E und H in Kombination mit I,A, E and G in combination with one of the polypeptides H or I, A, E and H in combination with I,
- A, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I,A, F and G in combination with one of the polypeptides H or I,
- A, F und H in Kombination mit I,- A, F and H in combination with I,
- A, G und H in Kombination mit I,- A, G and H in combination with I,
- B, C und D in Kombination mit einem der Polypeptide E, F, G, H oder I, — B, C und E in Kombination mit einem der Polypeptide F, G, H oder I,B, C and D in combination with one of the polypeptides E, F, G, H or I, B, C and E in combination with one of the polypeptides F, G, H or I,
- B, C und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I,B, C and F in combination with one of the polypeptides G, H or I,
- B, C und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I,B, C and G in combination with one of the polypeptides H or I,
- B, C und H in Kombination mit I,- B, C and H in combination with I,
- B, D und E in Kombination mit einem der Polypeptide F, G, H oder I, - B, D und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I,B, D and E in combination with one of the polypeptides F, G, H or I, B, D and F in combination with one of the polypeptides G, H or I,
- B, D und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I,B, D and G in combination with one of the polypeptides H or I,
- B, D und H in Kombination mit I,- B, D and H in combination with I,
- B, E und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I,B, E and F in combination with one of the polypeptides G, H or I,
- B, E und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, - B, E und H in Kombination mit I,- B, E and G in combination with one of the polypeptides H or I, - B, E and H in combination with I,
- B, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I,B, F and G in combination with one of the polypeptides H or I,
- B, F und H in Kombination mit I,- B, F and H in combination with I,
- B, G und H in Kombination mit I,- B, G and H in combination with I,
- C, D und E in Kombination mit einem der Polypeptide F, G, H oder I, — C, D und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I,C, D and E in combination with one of the polypeptides F, G, H or I, C, D and F in combination with one of the polypeptides G, H or I,
- C, D und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I,C, D and G in combination with one of the polypeptides H or I,
- C, D und H in Kombination mit I,- C, D and H in combination with I,
- C, E und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I,C, E and F in combination with one of the polypeptides G, H or I,
- C, E und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — C, E und H in Kombination mit I,- C, E and G in combination with one of the polypeptides H or I, - C, E and H in combination with I,
- C, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I,C, F and G in combination with one of the polypeptides H or I,
- C, F und H in Kombination mit I, — C, G und H in Kombination mit I, — D, E und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I, — D, E und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — D, E und H in Kombination mit I, - D, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — D, F und H in Kombination mit I, — D, G und H in Kombination mit I, — E, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — E, F und H in Kombination mit I, — E, G und H in Kombination mit I oder — F, G und H in Kombination mit I.- C, F and H in combination with I, C, G and H in combination with I, D, E and F in combination with one of the polypeptides G, H or I, D, E and G in combination with one of the polypeptides H or I, D, E and H in combination with I, - D, F and G in combination with one of the polypeptides H or I, - D, F and H in combination with I, - D, G and H in combination with I, - E, F and G in combination with one of the polypeptides H or I, - E, F and H in combination with I, - E, G and H in combination with I or - F, G and H in combination with I.
In einer anderen weiter bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden fünf der oben genannten bevorzugten Polypeptide A, B, C, D, E, F, G, H und I als Diabetes „negative", als Diabetes „positive", als Nephropathie „negative" oder als Nephropathie „positive" Polypeptide verwendet. Insbesondere sind dies die Kombinationen der Polypeptide:In another further preferred embodiment of the invention, five of the preferred polypeptides A, B, C, D, E, F, G, H and I mentioned above are "negative" as diabetes, "positive" as diabetes, "negative" as nephropathy or "positive" polypeptides used as nephropathy. In particular, these are the combinations of the polypeptides:
— A, B, C und D in Kombination mit einem der Polypeptide E, F, G, H oder I, — A, B, C und E in Kombination mit einem der Polypeptide F, G, H oder I, - A, B, C und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I, — A, B, C und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — A, B, C und H in Kombination mit Polypeptid I, — A, B, D und E in Kombination mit einem der Polypeptide F, G, H oder I, — A, B, D und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I, — A, B, D und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — A, B, D und H in Kombination mit Polypeptid I, — A, B, E und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I, — A, B, E und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — A, B, E und H in Kombination mit Polypeptid I, — A, B, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — A, B, F und H in Kombination mit Polypeptid I, — A, B, G und H in Kombination mit Polypeptid I, — A, C, D und E in Kombination mit einem der Polypeptide F, G, H oder I, — A, C, D und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I, — A, C, D und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — A, C, D und H in Kombination mit Polypeptid I, — A, C, E und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I, - A, C, E und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I,- A, B, C and D in combination with one of the polypeptides E, F, G, H or I, - A, B, C and E in combination with one of the polypeptides F, G, H or I, - A, B , C and F in combination with one of the polypeptides G, H or I, - A, B, C and G in combination with one of the polypeptides H or I, - A, B, C and H in combination with polypeptide I, - A , B, D and E in combination with one of the polypeptides F, G, H or I, - A, B, D and F in combination with one of the polypeptides G, H or I, - A, B, D and G in combination with one of the polypeptides H or I, - A, B, D and H in combination with polypeptide I, - A, B, E and F in combination with one of the polypeptides G, H or I, - A, B, E and G in combination with one of the polypeptides H or I, - A, B, E and H in combination with polypeptide I, - A, B, F and G in combination with one of the polypeptides H or I, - A, B, F and H in combination with polypeptide I, A, B, G and H in combination with polypeptide I, A, C, D and E in combination ation with one of the polypeptides F, G, H or I, - A, C, D and F in combination with one of the polypeptides G, H or I, - A, C, D and G in combination with one of the polypeptides H or I. , - A, C, D and H in combination with polypeptide I, - A, C, E and F in combination with one of the polypeptides G, H or I, A, C, E and G in combination with one of the polypeptides H or I,
- A, C, E und H in Kombination mit Polypeptid I,A, C, E and H in combination with polypeptide I,
- A, C, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I,A, C, F and G in combination with one of the polypeptides H or I,
- A, C, F und H in Kombination mit Polypeptid I, - A, C, G und H in Kombination mit Polypeptid I,- A, C, F and H in combination with polypeptide I, - A, C, G and H in combination with polypeptide I,
- A, D, E und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I,A, D, E and F in combination with one of the polypeptides G, H or I,
- A, D, E und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I,A, D, E and G in combination with one of the polypeptides H or I,
- A, D, E und H in Kombination mit Polypeptid I,A, D, E and H in combination with polypeptide I,
- A, D, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, - A, D, F und H in Kombination mit Polypeptid I,A, D, F and G in combination with one of the polypeptides H or I, A, D, F and H in combination with polypeptide I,
- A, D, G und H in Kombination mit Polypeptid I,A, D, G and H in combination with polypeptide I,
- A, E, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I,A, E, F and G in combination with one of the polypeptides H or I,
- A, E, F und H in Kombination mit Polypeptid I,A, E, F and H in combination with polypeptide I,
- A, E, G und H in Kombination mit Polypeptid I, - A, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I,- A, E, G and H in combination with polypeptide I, - A, F, G and H in combination with polypeptide I,
- B, C, D und E in Kombination mit einem der Polypeptide F, G, H oder I,B, C, D and E in combination with one of the polypeptides F, G, H or I,
- B, C, D und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I,B, C, D and F in combination with one of the polypeptides G, H or I,
- B, C, D und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I,B, C, D and G in combination with one of the polypeptides H or I,
- B, C, D und H in Kombination mit Polypeptid I, — B, C, E und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I,B, C, D and H in combination with polypeptide I, B, C, E and F in combination with one of the polypeptides G, H or I,
- B, C, E und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I,B, C, E and G in combination with one of the polypeptides H or I,
- B, C, E und H in Kombination mit Polypeptid I,B, C, E and H in combination with polypeptide I,
- B, C, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I,B, C, F and G in combination with one of the polypeptides H or I,
- B, C, F und H in Kombination mit Polypeptid I, - B, C, G und H in Kombination mit Polypeptid I,- B, C, F and H in combination with polypeptide I, - B, C, G and H in combination with polypeptide I,
- B, D, E und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I,B, D, E and F in combination with one of the polypeptides G, H or I,
- B, D, E und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I,B, D, E and G in combination with one of the polypeptides H or I,
- B, D, E und H in Kombination mit Polypeptid I,B, D, E and H in combination with polypeptide I,
- B, D, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, - B, D, F und H in Kombination mit Polypeptid I,- B, D, F and G in combination with one of the polypeptides H or I, - B, D, F and H in combination with polypeptide I,
- B, D, G und H in Kombination mit Polypeptid I,B, D, G and H in combination with polypeptide I,
- B, E, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I,B, E, F and G in combination with one of the polypeptides H or I,
- B, E, F und H in Kombination mit Polypeptid I,B, E, F and H in combination with polypeptide I,
- B, E, G und H in Kombination mit Polypeptid I, - B, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I,- B, E, G and H in combination with polypeptide I, - B, F, G and H in combination with polypeptide I,
- C, D, E und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I,C, D, E and F in combination with one of the polypeptides G, H or I,
- C, D, E und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — C, D, E und H in Kombination mit Polypeptid I, — C, D, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — C, D, F und H in Kombination mit Polypeptid I, — C, D, G und H in Kombination mit Polypeptid I, - C, E, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — C, E, F und H in Kombination mit Polypeptid I, — C, E, G und H in Kombination mit Polypeptid I, — C, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I, — D, E, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — D, E, F und H in Kombination mit Polypeptid I, — D, E, G und H in Kombination mit Polypeptid I, — D, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I oder — E, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I.C, D, E and G in combination with one of the polypeptides H or I, - C, D, E and H in combination with polypeptide I, - C, D, F and G in combination with one of the polypeptides H or I, - C, D, F and H in combination with polypeptide I, - C, D , G and H in combination with polypeptide I, - C, E, F and G in combination with one of the polypeptides H or I, - C, E, F and H in combination with polypeptide I, - C, E, G and H in combination with polypeptide I, - C, F, G and H in combination with polypeptide I, - D, E, F and G in combination with one of the polypeptides H or I, - D, E, F and H in combination with polypeptide I, - D, E, G and H in combination with polypeptide I, - D, F, G and H in combination with polypeptide I or - E, F, G and H in combination with polypeptide I.
In einer anderen weiter bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden sechs der oben genannten bevorzugten Polypeptide A, B, C, D, E, F, G, H und I als Diabetes „negative", als Diabetes „positive", als Nephropathie „negative" oder als Nephropathie „positive" Polypeptide verwendet. Insbesondere sind dies die Kombinationen der Polypeptide:In another further preferred embodiment of the invention, six of the preferred polypeptides A, B, C, D, E, F, G, H and I mentioned above are "negative" as diabetes, "positive" as diabetes, "negative" as nephropathy or "positive" polypeptides used as nephropathy. In particular, these are the combinations of the polypeptides:
— A, B, C, D und E in Kombination mit einem der Polypeptide F, G, H oder I, — A, B, C, D und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I, — A, B, C, D und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — A, B, C, D und H in Kombination mit Polypeptid I, — A, B, C, E und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I, — A, B, C, E und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — A, B, C, E und H in Kombination mit Polypeptid I, — A, B, C, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — A, B, C, F und H in Kombination mit Polypeptid I, — A, B, C, G und H in Kombination mit Polypeptid I, — A, B, D, E und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I, — A, B, D, E und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — A, B, D, E und H in Kombination mit Polypeptid I, — A, B, D, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — A, B, D, F und H in Kombination mit Polypeptid I, — A, B, D, G und H in Kombination mit Polypeptid I, — A, B, E, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — A, B, E, F und H in Kombination mit Polypeptid I,- A, B, C, D and E in combination with one of the polypeptides F, G, H or I, - A, B, C, D and F in combination with one of the polypeptides G, H or I, - A, B , C, D and G in combination with one of the polypeptides H or I, - A, B, C, D and H in combination with polypeptide I, - A, B, C, E and F in combination with one of the polypeptides G, H or I, - A, B, C, E and G in combination with one of the polypeptides H or I, - A, B, C, E and H in combination with polypeptide I, - A, B, C, F and G in combination with one of the polypeptides H or I, - A, B, C, F and H in combination with polypeptide I, - A, B, C, G and H in combination with polypeptide I, - A, B, D, E and F in combination with one of the polypeptides G, H or I, A, B, D, E and G in combination with one of the polypeptides H or I, A, B, D, E and H in combination with polypeptide I, A, B, D, F and G in combination with one of the polypeptides H or I, A, B, D, F and H in combination with polypeptide I, A, B, D, G and H in combination with polypeptide I, A, B, E, F and G in combination with one of the polypeptides H or I, A, B, E, F and H in combination with polypeptide I,
— A, B, E, G und H in Kombination mit Polypeptid I,A, B, E, G and H in combination with polypeptide I,
— A, B, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I,A, B, F, G and H in combination with polypeptide I,
— A, C, D, E und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I, — A, C, D, E und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I,A, C, D, E and F in combination with one of the polypeptides G, H or I, A, C, D, E and G in combination with one of the polypeptides H or I,
— A, C, D, E und H in Kombination mit Polypeptid I,A, C, D, E and H in combination with polypeptide I,
— A, C, D, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I,A, C, D, F and G in combination with one of the polypeptides H or I,
— A, C, D, F und H in Kombination mit Polypeptid I,A, C, D, F and H in combination with polypeptide I,
— A, C, D, G und H in Kombination mit Polypeptid I, — A, C, E, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I,A, C, D, G and H in combination with polypeptide I, A, C, E, F and G in combination with one of the polypeptides H or I,
— A, C, E, F und H in Kombination mit Polypeptid I,A, C, E, F and H in combination with polypeptide I,
— A, C, E, G und H in Kombination mit Polypeptid I,A, C, E, G and H in combination with polypeptide I,
— A, C, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I,A, C, F, G and H in combination with polypeptide I,
— A, D, E, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — A, D, E, F und H in Kombination mit Polypeptid I,A, D, E, F and G in combination with one of the polypeptides H or I, A, D, E, F and H in combination with polypeptide I,
— A, D, E, G und H in Kombination mit Polypeptid I,A, D, E, G and H in combination with polypeptide I,
— A, D, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I,A, D, F, G and H in combination with polypeptide I,
— A, E, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I,A, E, F, G and H in combination with polypeptide I,
— B, C, D, E und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I, - B, C, D, E und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I,- B, C, D, E and F in combination with one of the polypeptides G, H or I, - B, C, D, E and G in combination with one of the polypeptides H or I,
— B, C, D, E und H in Kombination mit Polypeptid I,B, C, D, E and H in combination with polypeptide I,
— B, C, D, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I,B, C, D, F and G in combination with one of the polypeptides H or I,
— B, C, D, F und H in Kombination mit Polypeptid I,B, C, D, F and H in combination with polypeptide I,
— B, C, D, G und H in Kombination mit Polypeptid I, - B, C, E, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I,B, C, D, G and H in combination with polypeptide I, B, C, E, F and G in combination with one of the polypeptides H or I,
— B, C, E, F und H in Kombination mit Polypeptid I,B, C, E, F and H in combination with polypeptide I,
— B, C, E, G und H in Kombination mit Polypeptid I,B, C, E, G and H in combination with polypeptide I,
— B, C, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I,B, C, F, G and H in combination with polypeptide I,
— B, D, E, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — B, D, E, F und H in Kombination mit Polypeptid I,- B, D, E, F and G in combination with one of the polypeptides H or I, - B, D, E, F and H in combination with polypeptide I,
— B, D, E, G und H in Kombination mit Polypeptid I,B, D, E, G and H in combination with polypeptide I,
— B, D, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I,B, D, F, G and H in combination with polypeptide I,
— B, E, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I,B, E, F, G and H in combination with polypeptide I,
— C, D, E, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, — C, D, E, F und H in Kombination mit Polypeptid I,- C, D, E, F and G in combination with one of the polypeptides H or I, - C, D, E, F and H in combination with polypeptide I,
— C, D, E, G und H in Kombination mit Polypeptid I,- C, D, E, G and H in combination with polypeptide I,
— C, D, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I, — C, E, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I oder - D, E, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I.- C, D, F, G and H in combination with polypeptide I, - C, E, F, G and H in combination with polypeptide I or - D, E, F, G and H in combination with polypeptide I.
In einer anderen weiter bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden sieben der oben genannten bevorzugten Polypeptide A, B, C, D, E, F, G, H und I als Diabetes „negative", als Diabetes „positive", als Nephropathie „negative" oder als Nephropathie „positive" Polypeptide verwendet. Insbesondere sind dies die Kombinationen der Polypeptide:In another further preferred embodiment of the invention, seven of the preferred polypeptides A, B, C, D, E, F, G, H and I mentioned above are "negative" as diabetes, "positive" as diabetes, "negative" as nephropathy or "positive" polypeptides used as nephropathy. In particular, these are the combinations of the polypeptides:
A,B ,C,, D, E und F in Kombination mit einem der Polypeptide G, H oder I, A,B ,C,, D, E und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, A,B ,C,, D, E und H in Kombination mit Polypeptid I, A,B ,C,, D, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, A,B ,C,, D, F und H in Kombination mit Polypeptid I, A,B ,C,, D, G und H in Kombination mit Polypeptid I, A,B C, E, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, A,B C,, E, F und H in Kombination mit Polypeptid I, A,B ,C,, E, G und H in Kombination mit Polypeptid I, A,B C,, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I, A,B D,, E, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, A,B ,D,, E, F und H in Kombination mit Polypeptid I, A,B D,, E, G und H in Kombination mit Polypeptid I, A,B ,D,, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I, A,B E,, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I, A,C ,D,, E, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, A,C ,D,, E, F und H in Kombination mit Polypeptid I, A,C ,D,, E, G und H in Kombination mit Polypeptid I, A,C ,D,, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I, A,C ,E,, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I, A,D ,E, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I, B,C: D, E, F und G in Kombination mit einem der Polypeptide H oder I, B,C: D, E, F und H in Kombination mit Polypeptid I, B,C: D, E, G und H in Kombination mit Polypeptid I, B,C: D, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I, B,C; E, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I, B,D E, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I oder C,D E, F, G und H in Kombination mit Polypeptid I. In einer anderen weiter bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden acht der oben genannten bevorzugten Polypeptide A, B, C, D, E, F, G, H und I als Diabetes „negative", als Diabetes „positive", als Nephropathie „negative" oder als Nephropathie „positive" Polypeptide verwendet. Insbesondere sind dies die Kombinationen der Polypeptide:A, B, C ,, D, E and F in combination with one of the polypeptides G, H or I, A, B, C ,, D, E and G in combination with one of the polypeptides H or I, A, B, C ,, D, E and H in combination with polypeptide I, A, B, C ,, D, F and G in combination with one of the polypeptides H or I, A, B, C ,, D, F and H in combination with polypeptide I, A, B, C ,, D, G and H in combination with polypeptide I, A, BC, E, F and G in combination with one of the polypeptides H or I, A, BC ,, E, F and H in combination with polypeptide I, A, B, C ,, E, G and H in combination with polypeptide I, A, BC ,, F, G and H in combination with polypeptide I, A, BD ,, E, F and G in combination with one of the polypeptides H or I, A, B, D ,, E, F and H in combination with polypeptide I, A, BD ,, E, G and H in combination with polypeptide I, A, B, D ,, F, G and H in combination with polypeptide I, A, BE ,, F, G and H in combination with polypeptide I, A, C, D ,, E, F and G in combination with one of the polypeptides H or I. , A, C, D ,, E, F and H in combination with polypeptide I, A , C, D ,, E, G and H in combination with polypeptide I, A, C, D ,, F, G and H in combination with polypeptide I, A, C, E ,, F, G and H in combination with Polypeptide I, A, D, E, F, G and H in combination with polypeptide I, B, C : D, E, F and G in combination with one of the polypeptides H or I, B, C : D, E, F and H in combination with polypeptide I, B, C : D, E, G and H in combination with polypeptide I, B, C : D, F, G and H in combination with polypeptide I, B, C ; E, F, G and H in combination with polypeptide I, B, DE, F, G and H in combination with polypeptide I or C, DE, F, G and H in combination with polypeptide I. In another further preferred embodiment of the invention, eight of the preferred polypeptides A, B, C, D, E, F, G, H and I mentioned above are "negative" as diabetes, "positive" as diabetes, "negative" as nephropathy or "positive" polypeptides used as nephropathy. In particular, these are the combinations of the polypeptides:
- A, B, C, D, E, F, G und H, - A, B, C, D, E, F, G und I, - A,B,C,D,E,F,HundI, - A, B, C, D, E, G, H und I, - A,B,C,D,F, G,HundI, - A, B, C, E, F, G, H und I, - A, B, D, E, F, G, H und I, - A, C, D, E, F, G, H und I oder - B, C, D, E, F, G, H und I.- A, B, C, D, E, F, G and H, - A, B, C, D, E, F, G and I, - A, B, C, D, E, F, HundI, - A, B, C, D, E, G, H and I, - A, B, C, D, F, G, HundI, - A, B, C, E, F, G, H and I, - A , B, D, E, F, G, H and I, - A, C, D, E, F, G, H and I or - B, C, D, E, F, G, H and I.
In einer anderen weiter bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden alle neun der oben genannten bevorzugten Polypeptide A, B, C, D, E, F, G, H und I als Diabetes „negative", als Diabetes „positive", als Nephropathie „negative" oder als Nephropathie „positive" Polypeptide verwendet. Insbesondere sind dies die Kombinationen der Polypeptide:In another further preferred embodiment of the invention, all nine of the preferred polypeptides A, B, C, D, E, F, G, H and I mentioned above are "negative" as diabetes, "positive" as diabetes, "negative" as nephropathy or "positive" polypeptides used as nephropathy. In particular, these are the combinations of the polypeptides:
- A,B,C,D,E,F, G,HundI. - A, B, C, D, E, F, G, HundI.

Claims

Patentansprüche Patent claims
Vorrichtung zur quantitativen Auswertung der in einer Körperflüssigkeitsprobe enthaltenen Polypeptide und Vergleich mit in einer Datenbank gespeicherten Referenzwerten, dadurch gekennzeichnet, dass die Referenzwerte als Datensätze von zustandsrelevanten Polypeptiden gespeichert sind, die jeweils wenigstens eine Angabe über die Wahrscheinlichkeit für das Auftreten und/oder die Konzentration der Polypeptide für einen pathologischen Zustand in Proben von gesunden und kranken Probanden umfassen.Device for the quantitative evaluation of the polypeptides contained in a body fluid sample and comparison with reference values stored in a database, characterized in that the reference values are stored as data sets of condition-relevant polypeptides, each of which provides at least one indication of the probability of occurrence and/or the concentration of the Include polypeptides for a pathological condition in samples from healthy and diseased subjects.
2. Vorrichtung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Polypeptide durch Angabe ihrer zugehörigen Masse und ihrer zugehörigen Kapillarelektrophorese- Retentionszeit, wie sie bei Kapillareletrophorese gekoppelt an ein Massenspektrometer ermittelbar sind, definiert sind.2. Device according to claim 1, characterized in that the polypeptides are defined by specifying their associated mass and their associated capillary electrophoresis retention time, as can be determined using capillary electrophoresis coupled to a mass spectrometer.
Vorrichtung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Datenbank für die Diagnose „Diabetes" wenigstens einen, eine Unterkombination oder alle Datensätze der Polypeptide gemäß der nachfolgenden Tabelle umfasst:Device according to claim 2, characterized in that the database for the diagnosis “diabetes” comprises at least one, a subcombination or all data sets of the polypeptides according to the following table:
4. Vorrichtung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Datenbank für die Diagnose „Nierenschädigung" wenigstens einen, eine Unterkombination oder alle Datensätze der Polypeptide gemäß der nachfolgenden Tabelle umfasst:4. Device according to claim 2, characterized in that the database for the diagnosis “kidney damage” comprises at least one, a subcombination or all data sets of the polypeptides according to the following table:
5. Verfahren zur quantitativen Auswertung der in einer Körperflüssigkeitsprobe enthaltenen Polypeptide und Vergleich mit in einer Datenbank gespeicherten Referenzwerten, dadurch gekennzeichnet, dass die Referenzwerte als Datensätze von zustandsrelevanten Polypeptiden für den Vergleich herangezogen werden, indem eine Angabe über die Wahrscheinlichkeit für das Auftreten und/oder Konzentration der Polypeptide in der Körperflüssigkeitsprobe mit der Angabe jeweils wenigstens eines Referenzwertes über die Wahrscheinlichkeit für das Auftreten und/oder die Konzentration der Polypeptide für einen pathologischen Zustand in Proben von gesunden und kranken Probanden verglichen wird.5. Method for the quantitative evaluation of the polypeptides contained in a body fluid sample and comparison with reference values stored in a database, characterized in that the reference values are used as data sets of condition-relevant polypeptides for the comparison by providing information about the probability of occurrence and / or Concentration of the polypeptides in the body fluid sample is compared with the indication of at least one reference value for the probability of the occurrence and / or the concentration of the polypeptides for a pathological condition in samples from healthy and sick subjects.
6. Verfaliren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass die Polypeptide durch Angabe ihrer zugehörigen Masse und ihrer zugehörigen Kapillarelektrophorese- Retentionszeit, wie sie bei Kapillarelektrophorese gekoppelt an ein Massenspektrometer ermittelt werden, definiert werden.6. Process according to claim 5, characterized in that the polypeptides are defined by specifying their associated mass and their associated capillary electrophoresis retention time, as determined by capillary electrophoresis coupled to a mass spectrometer.
Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass für die Diagnose „Diabetes" wenigstens einer, eine Unterkombination oder alle Datensätze der Polypeptide gemäß der nachfolgenden Tabelle zum Vergleich herangezogen werden:Method according to claim 6, characterized in that for the diagnosis of "diabetes" at least one, a subcombination or all data sets of the polypeptides according to the following table are used for comparison:
8. Verfaliren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass für die Diagnose „Nierenschädigung" wenigstens einer, eine Unterkombination oder alle Datensätze der Polypeptide gemäß der nachfolgenden Tabelle zum Vergleich herangezogen werden:8. Procedure according to claim 6, characterized in that for the diagnosis of “kidney damage” at least one, a subcombination or all data sets of the polypeptides according to the following table are used for comparison:
40 40
Marker zur Erkennung von pathologischen Zuständen, gekennzeichnet durch eine Mehrzahl zustandsrelevanter Polypeptide, die jeweils mit einer Angabe über die Wahrscheinlichkeit für das Auftreten und/oder die Konzentration des Polypeptids für einen pathologischen Zustand in Proben von gesunden und kranken Probanden verknüpft sind.Marker for detecting pathological conditions, characterized by a plurality of condition-relevant polypeptides, each of which is linked to an indication of the probability of the occurrence and/or concentration of the polypeptide for a pathological condition in samples from healthy and sick subjects.
10. Marker nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass die Polypeptide durch Angabe ihrer zugehörigen Masse und ihrer zugehörigen Kapillarelektrophorese- Retentionszeit, wie sie bei Kapillarelektrophorese gekoppelt an ein Massenspektrometer ermittelbar sind, definiert sind. 10. Marker according to claim 9, characterized in that the polypeptides are defined by specifying their associated mass and their associated capillary electrophoresis retention time, as can be determined using capillary electrophoresis coupled to a mass spectrometer.
1. Marker nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass für die Diagnose „Diabetes" wenigstens ein Polypeptid, eine Unterkombination der Polypeptide oder alle Polypeptide der nachfolgenden Tabelle enthalten sind:1. Marker according to claim 10, characterized in that for the diagnosis “diabetes” at least one polypeptide, a subcombination of the polypeptides or all polypeptides from the following table are included:
12. Marker nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass für die Diagnose „Nierenschädigung" wenigstens ein Polypeptid, eine Unterkombination der Polypeptide oder alle Polypeptide der nachfolgenden Tabelle enthalten sind:12. Marker according to claim 10, characterized in that for the diagnosis “kidney damage” at least one polypeptide, a subcombination of the polypeptides or all polypeptides from the following table are included:
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