EA030908B1

EA030908B1 - Соединения в качестве ингибиторов nik

Info

Publication number: EA030908B1
Application number: EA201790688A
Authority: EA
Inventors: Джордж Хинд; Патриция Тисселли; Януш Йозеф Кулаговский; Калум Маклеод; Самьюэль Эдвард Манн; Стефен Колин Прайс; Джон Гари Монтана
Original assignee: Янссен Фармацевтика Нв
Priority date: 2014-10-23
Filing date: 2015-10-22
Publication date: 2018-10-31
Also published as: IL251780A0; CN107074855A; WO2016062792A1; JP2017531681A; BR112017008045A2; EA201790688A1; EP3209662B1; JP6676048B2; KR20170066473A; IL251780B; ES2718557T3; MX371153B; US20170334906A1; AU2015334917A1; CA2960336C; EP3209662A1; AU2015334917B2; US10005776B2; KR102500071B1; MX2017005282A

Abstract

Настоящее изобретение относится к фармацевтическим средствам, применимым для терапии и/или профилактики у млекопитающего, в частности к ингибиторам NF-κB-индуцирующей киназы (NIK, также известной как MAP3K14), применимым для лечения заболеваний, таких как рак, воспалительные нарушения, нарушения метаболизма и аутоиммунные нарушения. Настоящее изобретение направлено также на фармацевтические композиции, содержащие такие соединения, на способы получения таких соединений и композиций, а также на применение таких соединений или фармацевтических композиций для предупреждения или лечения заболеваний, таких как рак, воспалительные нарушения, нарушения метаболизма, в том числе ожирение и диабет, а также аутоиммунные нарушения.

Description

Настоящее изобретение относится к фармацевтическим средствам, применимым для терапии и/или профилактики у млекопитающего, в частности к ингибиторам NF-кВ-индуцирующей киназы (NIK, также известной как МАРЗК14), применимым для лечения заболеваний, таких как рак, воспалительные нарушения, нарушения метаболизма и аутоиммунные нарушения. Настоящее изобретение направлено также на фармацевтические композиции, содержащие такие соединения, на способы получения таких соединений и композиций, а также на применение таких соединений или фармацевтических композиций для предупреждения или лечения заболеваний, таких как рак, воспалительные нарушения, нарушения метаболизма, в том числе ожирение и диабет, а также аутоиммунные нарушения.

030908 В1

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к фармацевтическим средствам, применимым для терапии и/или профилактики у млекопитающего, в частности к ингибиторам NF-кБ-индуцирующей киназы (NIK, также известной как MAP3K14), применимым для лечения заболеваний, таких как рак, воспалительные нарушения, нарушения метаболизма, в том числе ожирение и диабет, а также аутоиммунные нарушения. Настоящее изобретение направлено также на фармацевтические композиции, содержащие такие соединения, на способы получения таких соединений и композиций, а также на применение таких соединений или фармацевтических композиций для предупреждения или лечения заболеваний, таких как рак, воспалительные нарушения, нарушения метаболизма, в том числе ожирение и диабет, а также аутоиммунные нарушения.

Предпосылки изобретения

Настоящее изобретение относится к фармацевтическим средствам, применимым для терапии и/или профилактики у млекопитающего, и в частности к ингибиторам NF-кБ-индуцирующей киназы (NIK, также известной как MAP3K14), применимым для лечения заболеваний, таких как рак и воспалительные нарушения. Ядерный фактор каппа В (NF-кВ) представляет собой фактор транскрипции, регулирующий экспрессию различных генов, задействованных в иммунной реакции, пролиферации клеток, апоптозе и канцерогенезе. NF-кБ-зависимая активация транскрипции представляет собой сигнальный путь, четко контролируемый посредством последовательных явлений, в том числе фосфорилированием и разрушением белка. NIK представляет собой серин/треонин-киназу, которая регулирует путь активации NF-кБ. Существуют два сигнальных пути NF-кБ - канонический и неканонический. NIK принимает участие в обоих, однако было показано, что он является незаменимым для неканонического сигнального пути, где он фосфорилирует IKKa, приводя к частичному протеолизу p100; высвобождая р52, который затем гетеродимеризуется с RclB. транслоцируется в ядро и опосредует экспрессию генов. Неканонический путь активируется с помощью лишь небольшого числа лигандов, таких как СЭ40-лиганды, фактор активации В-клеток (BAFF), лиганды рецептора лимфотоксина-β и TNF-подобный слабый индуктор апоптоза (TWEAK), и было показано, что NIK необходим для активации пути с помощью этих лигандов. Вследствие его ключевой роли, теперь конкурируют за TRAF с диссоциацией TRAF-NIK-комплексов и, таким образом, повышением уровней NIK. (Thu и Richmond, Cytokine Growth F.R. 2010, 21, 213-226).

Исследование показало, что блокирование сигнального пути NF-кБ в раковых клетках может быть причиной прекращения пролиферации клеток, причиной смерти клеток и привести к большей чувствительности клеток к действию других противораковых средств. Роль NIK была показана в патогенезе как гемобластозов, так и солидных опухолей.

NF-кБ-путь является разрегулированным при множественной миеломе вследствие ряда различных генетических аномалий, которые приводят к вовлечению канонического и неканонического путей (Annuziata et al. Cancer Cell 2007, 12, 115-130; Keats et al. ibid 2007, 12, 131-144; Demchenko et al. Blood 2010, 115, 3541-3552). Образцы, взятые у пациентов с миеломой, часто характеризуются повышенными уровнями активности NIK. Это может быть связано с амплификацией хромосом, транслокациями (что приводит к потере NIK-белками доменов связывания TRAF), мутациями (в домене связывания TRAF NIK) или потерей TRAF функциональных мутаций. Исследователи показали, что клеточные линии миеломы могут быть зависимыми от NIK в отношении пролиферации; при этом в данных линиях клеток, если активность NIK снижена с помощью либо shRNA, либо ингибирования соединениями, это приводит к сбою при передаче сигнала NF-кБ И индукции клеточной смерти (Annuziata, 2007).

Подобным образом мутации в TRAF и повышенные уровни NIK также были установлены в образцах, взятых у пациентов с лимфомой Ходжкина (HL). И снова, пролиферация клеточных линий, полученных от пациентов с HL, подвержена ингибированию функции NIK как посредством shRNA, так и посредством соединений (Ranuncolo et al. Blood First Edition Paper, 2012, DOI 10.1182/blood-2012-01405951).

Уровни NIK также увеличены в клетках, обусловливающих Т-клеточный лейкоз взрослых (ATL), и целенаправленное воздействие NIK посредством shRNA снижало рост ATL in vivo (Saitoh et al. Blood 2008, 111, 5118-5129).

Было показано, что API2-MALT1 слитый онкобелок, созданный путем рекуррентной транслокации t(11;18)(q21;q21) в лимфоидной ткани слизистых оболочек (MALT) при лимфоме, индуцирует протеолитическое расщепление NF-кБ-индуцирующей киназы (NIK) при аргинине 325. Посредством расщепления NIK образуется С-концевой фрагмент NIK, который поддерживает киназную активность и является устойчивым к протеасомальному разрушению (вследствие потери TRAF-связывающего участка). Присутствие данного усеченного NIK приводит к конститутивной неканонической передаче сигнала NF-кБ, увеличенной адгезии В-клеток и устойчивости к апоптозу. Таким образом, ингибиторы NIK могут представлять собой новый подход в лечении рефрактерной Д11;18)-положительной MALT-лимфомы (Rosebeck et al. Science 2011, 331, 468-472).

NIK аберрантно накапливается в клетках диффузной В-крупноклеточной лимфомы ^ЕБСЕ) вследствие конститутивной активации фактора активации В-клеток (БЛЕГ) посредством взаимодействия с

- 1 030908 лигандом аутохтонного стимулятора В-лимфоцитов (BLyS). Накопление NIK в клеточных линиях DLBCL человека и образцах опухолей пациентов позволили предположить, что конститутивная активация NIK-киназы, вероятно, является ключевым механизмом передачи сигнала, задействованном при аномальной пролиферации клеток опухоли - лимфомы. Анализы роста показали, что использование shRNA для ингибирования экспрессии белка NIK-киназы в GCB- и АВС-подобных DLBCL-клетках снижало рост клеток лимфомы in vitro, подразумевая значительную роль NIK-индуцированной активации пути NF-kB в пролиферации DLBCL (Pham et al. Blood 2011, 117, 200-210).

Как упоминалось, роль NIK в пролиферации клеток опухоли не ограничивается гематологическими клетками, имеются отчеты, что уровни белка NIK стабилизированы в некоторых клеточных линиях рака поджелудочной железы и, как наблюдают в клетках крови, пролиферация данных клеточных линий, обусловливающих рак поджелудочной железы, подвержена лечению с помощью NIK siRNA (Nishina et al. Biochem. Bioph. Res. Co. 2009, 388, 96-101). Конститутивная активация NF-kB является преимущественно задействованной при пролиферации клеточных линий базальноподобного подтипа рака молочной железы, в том числе повышенных уровней белка NIK в конкретных линиях (Yamamoto et al. Cancer Sci. 2010. 101, 2391-2397). В меланомных опухолях анализ тканевых матриц экспрессии NIK показал, что было статистически значимое повышение экспрессии NIK по сравнению с доброкачественной тканью. Кроме того, были применены методики shRNA для разрушения NIK, при этом полученные в результате NIK-истощенные меланомные клеточные линии проявляли сниженную пролиферацию, повышенный апоптоз, замедленное развитие клеточного цикла и пониженный рост опухолей в мышиной модели ксенотрансплантата (Thu et al. Oncogene 2011, 1-13). Существует множество фактических данных, показывающих, что NF-kB часто конститутивно активируется в образцах ткани немелкоклеточного рака легкого и клеточных линиях. Истощение NIK с помощью RNAi индуцировало апоптоз и влияло на эффективность независимого от прикрепления роста клеток NSCLC.

Кроме того, исследование показало, что NF-kB контролирует экспрессию множества генов, задействованных при воспалении, и оказалось, что передача сигнала NF-kB постоянно активна при многих воспалительных заболеваниях, таких как ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника, сепсис и другие. Таким образом, фармацевтические средства, способные к ингибированию NIK и таким образом снижению активности сигнального пути NF-kB, могут иметь терапевтическое преимущество для лечения заболеваний и нарушений, для которых наблюдают сверхактивацию передачи сигнала NFkB.

Разрегулированная активность NF-kB ассоциирована с воспалением толстой кишки и раком, и было показано, что мыши с недостатком Nlrp12 были крайне подвержены колиту и колит-ассоциированному раку толстой кишки. В данном контексте работа показала, что NLRP12 действует в качестве отрицательного регулятора пути NF-kB посредством его взаимодействия и регуляции NIK и TRAF3, а также в качестве контрольной точки критических путей, ассоциированных с воспалением, и ассоциированного с воспалением онкогенеза (Allen et al. Immunity 2012, 36, 742-754).

Фактор некроза опухоли (TNF)-a секретируется в ответ на воспалительное воздействие при заболеваниях, таких как ревматоидный артрит и воспалительное заболевание кишечника. В серии экспериментов в эпителиальных клетках толстой кишки и фибробластах эмбриона мыши TNF-α опосредует как апоптоз, так и воспаление, активизируя каскад воспалительных реакций посредством неканонического пути активации NF-kB, приводя к повышенным уровням ядерных RelB и р52. TNF-α индуцировал убиквитинирование TRAF, которые взаимодействуют с NIK, приводя к повышенным уровням фосфо-NIK (Bhattacharyya et al. J Biol. Chem. 2011, 285, 39511-39522).

Воспалительные реакции являются ключевым компонентом хронического обструктивного заболевания легких (COPD) как такового, при этом было показано, что NIK играет ключевую роль в обострении заболевания, следующего за инфицированием грамотрицательной бактерией нетипируемого Hemophilus influenza (Shuto et al. PNAS 2001, 98, 8774-8779). Подобным образом, сигаретный дым (CS) содержит многочисленные реакционноспособные частицы кислорода/азота, реакционноспособные альдегиды и хиноны, которые считаются одними из наиболее важных причин патогенеза хронических воспалительных заболеваний легких, таких как COPD и рак легкого. Повышенные уровни NIK и р-IKKa были обнаружены в периферических отделах легких курильщиков и пациентов с COPD. Кроме того, было показано что эндогенный NIK рекрутируется к сайтам промоторов провоспалительных генов для индукции посттрансляционной модификации гистонов, модифицируя таким образом профили экспрессии генов в ответ на CS или TNFa (Chung et al. PLoS ONE 2011, 6(8): e23488. doi: 10.1371/journal.pone.0023488). Применяли скрининг shRNA в in vitro модели окислительного стресса, индуцировавшего клеточную смерть (в качестве модели COPD), для детального исследования геномной библиотеки siRNA человека, поддающейся воздействию лекарственных средств, с целью идентификации генов, которые модулируют клеточную реакцию на стресс. NIK был одним из генов, идентифицированных при данном скрининге в качестве потенциальной новой терапевтической мишени для модуляции эпителиального апоптоза при хронических заболеваниях легких (Wixted et al. Toxicol. In Vitro 2010, 24, 310-318).

Индивидуумы с диабетом могут страдать от ряда дополнительных проявлений, ассоциированных с

- 2 030908 воспалением. Одно такое осложнение представляет собой сердечно-сосудистое заболевание, и было показано, что наблюдаются повышенные уровни p-NIK, p-IKK-α/β и р-IKB-a в тканях аорты, пораженных диабетом (Bitar et al. Life Sci. 2010, 86, 844-853). Подобным образом было показано, что NIK регулирует провоспалительные реакции проксимальных тубулярных эпителиальных клеток почек посредством механизмов, задействующих TRAF3. Данный факт предполагает роль неканонического пути активации NFkB при модуляции индуцированного диабетом воспаления в тубулярном эпителии почек (Zhao et al. Exp. Diabetes Res. 2011, 1-9). Такая же группа показала, что NIK играет решающую роль в неканоническом пути активации NF-kB, индуцирующем резистентность к инсулину в скелетных мышцах in vitro, предполагая, что NIK может быть важной терапевтической мишенью для лечения резистентности к инсулину, ассоциированной с воспалением при ожирении и диабете 2-го типа (Choudhary et al. Endocrinology 2011, 152, 3622-3627).

NF-kB представляет собой важный компонент как аутоиммунитета, так и разрушения кости при ревматоидном артрите (RA). Мыши, характеризующиеся недостаточностью функциональной NIK, не имеют периферических лимфатических узлов, поврежденных В- и Т-клеток и поврежденного активатора рецептора NF-kB лиганд-стимулированного остеокластогенеза. Aya et al. (J. Clin. Invest. 2005, 115, 18481854) исследовали роль NIK в мышиных моделях воспалительного артрита с использованием мышей Nik-/-. Модель артрита с переливанием сыворотки была задействована с помощью преформированных антител, и требовались только система интактных нейтрофилов и система комплемента у реципиентов. Наряду с тем, что мыши Nik-/- характеризовались воспалением, эквивалентным таковому у контролей Nik+/+, они показали значительно меньший уровень вокруг суставного остеокластогенеза и меньший уровень эрозии кости. В противоположность этому, мыши Nik-/- были полностью устойчивы к антигениндуцированному артриту (AIA), для чего необходима презентация интактного антигена и действие лимфоцитов, но не лимфатических узлов. Кроме того, переливание спленоцитов Nik+/+ или Т-клеток мышам Rag2-/- обеспечивало чувствительность к AIA, при этом переливание клеток Nik-/- - не обеспечивало. Мыши Nik-/- также были устойчивыми к генетической, спонтанной форме артрита, полученной у мышей, экспрессирующих как Т-клеточный рецептор KRN, так и H-2g7. Такая же группа использовала трансгенных мышей с экспрессией ОС-линией NIK с недостаточностью своего домена связывания TRAF3 (NT3) для демонстрации того, что конститутивная активация NIK приводит к увеличенному уровню остеокластогенеза и резорбции кости как в базальных условиях, так и в ответ на воспалительное воздействие (Yang et al. PLoS One 2010, 5, 1-9, e15383). Таким образом, данная группа сделала заключение о том, что NIK является важным в иммунных и разрушающих кость компонентах воспалительного артрита, и представляет собой возможную терапевтическую мишень для данных заболеваний.

Также было высказано предположение, что регулирование уровней NIK в Т-клетках может иметь терапевтическое значение. Снижение активности NIK в Т-клетках может значительно ослабить аутоиммунный и аллоиммунный ответы, подобно GVHD (реакция трансплантат против хозяина) и отторжению трансплантата, без нанесения настолько сильного вреда иммунной системе, насколько наносят ингибиторы канонической активации NF-kB.

В WO 2010/042337 описывают новые 6-азаиндол-аминопиримидиновые производные, характеризующиеся NIK-ингибиторной активностью.

В WO 2009/158011 описаны алкинильные спирты в качестве ингибиторов киназ.

В WO 2012/123522 описаны соединения на основе 6,5-гетероциклического пропаргилового спирта и области их применения.

Описание изобретения

Настоящее изобретение относится к новым соединениям группы А

- 3 030908

N -4 Н он__U N	он___	рЛ Ν-Ά / Y / ^N\ XT h₂n^n	OH	X_r 0
X) H₂N^N^	у
	А		a		a
N-Х Р но 7/ VЧ	он	»-. P // γ—N	OH	»-.P // ^-N
)—		к, ^АР		^:::: \AA
	F	As	>L у	aⁿ	nA^F
X J			нА¹		A J h₂n^n^
	А		Λ
ΝΆ ОН__// \	У		А	OH	/a
				o'^N
A N Υ	XX	0ⁿ	X Н₂Р/		H,nA
			Ν-Ά Η // γ—N ^Χ/		Λ
Η ОН ___// у— N		он	OH	P »-Ч_/
v А	у		X у	xy	aa
к Н₂м^м^х			A J Η₂Ν^Ν^		X У XT h₂n^n
					A
N-А Н ОН___/J 7—N		он	ΑΎ)
/---			--Α==χΑ	9^H
Ν^,ί	у	V^N	У If	A^ 'A/ A R или S T
aJ			aJ
H₂N N			H₂N N		H₂nA
он 7/^ХЧ			// γ—N		// A- N
		он	OH
R или S ΊΓ		Z—	AAA		aaa
	у	<7 R или S	<7 R или S
н/А'			XT hAP		N^jX H₂nA
ОН Л 7—N	}___/ O'	ОН	/ NA. / // y-N		«-vP^ // y— N
		Y—==^	AA	\L—==^	AA
У R или S Т	у	R или S J _F	R или S J _F
X/ н₂Л			X J H₂N N		^N if H₂nA
ΝΆ / ОН _// у— N	0^ ( R или S		m	OH	A-
Ху'			Aaa	aA^-	AA
R или S Т	у	<7 <^{R or s} R или S	D₃c^~^	i у
X/ h₂n^n			H₂nA		XT Η,ν'^ΝΓ
^Р⁴^ s^hr	PcXY^-D₃C^^	уЛ -X J ^N\ R или S ^AA	OH d₃cA-^	Xv J /A SiuhR ^A/
<7 R или S I	_F			n /
nA H₂nA			XT H₂N N		XJ H₂I\An
ΝΆ ОН // Э—	ч		A	OH	//Άν
	OH	..P __// y— N	_упА”или S^XjT_f
А			........\AA		AZ
H₂N N		А^Кили§ X^f		H₂N N
			AJ
			H₂N N
Ν-Χ\ Η ОН // \—N		/		N^\ H ^{0 H} // 7^{- N},
/A S или R	АУ	OH	X /PA^N	x(	S или R ' jJ
XJn	А ^Ν<ι^	/ A S или R I F	0^	nAZ A J
H	₂ЛХ		XT h₂n^n^		Η,ΑΡ
OH // Ύ—	£А		..J-X. \ J \ R или S		nA JI / ^N\ S или R
si	OH	OH
		\=aa		р=АР
_νΆ Η₂Λ	___у X		нА/		XT h₂n--'x^/

и их таутомерам и стереоизомерным формам, а также их фармацевтически приемлемым солям и их

- 4 030908 сольватам.

Подробное описание изобретения

Термин субъект, применяемый в данном документе, относится к животному, предпочтительно млекопитающему (например, кошке, собаке, примату или человеку), более предпочтительно человеку, которое является или являлось объектом лечения, наблюдения или эксперимента.

Термин терапевтически эффективное количество, применяемый в данном документе, означает такое количество активного соединения или фармацевтического средства, которое вызывает биологический или медицинский эффект в системе тканей у животного или человека, желаемый исследователем, ветеринаром, врачом или другим клиницистом, что включает облегчение или нивелирование симптомов заболевания или нарушения, лечение которого осуществляют.

Термин композиция предназначен для охвата продукта, содержащего определенные ингредиенты в определенных количествах, а также любого продукта, который получают прямо или опосредованно в результате комбинаций определенных ингредиентов в определенных количествах.

Термин лечение, применяемый в данном документе, предназначен для обозначения всех способов, которые могут предусматривать замедление, нарушение, подавление или прекращение развития заболевания, но необязательно означает полное устранение всех симптомов.

Как используется в данном документе, любая химическая формула со связями, показанными только в виде сплошных линий, а не в виде сплошных клиновидных или пунктирных клиновидных связей или иным образом показанная как имеющая конкретную конфигурацию (например, R, S) вокруг одного или нескольких атомов, подразумевает каждый возможный стереоизомер или смесь двух или более стереоизомеров.

Выше и ниже в данном документе подразумевается включение в термин соединение(-ния) группы А его(их) таутомеров и стереоизомерных форм, а также его(их) фармацевтически приемлемых солей и сольватов.

Под термином соединение(-ния) по (настоящему) изобретению или соединение(-ния) в соответствии с (настоящим) изобретением имеются в виду соединение(-ния) группы А.

Термины стереоизомеры, стереоизомерные формы или стереохимически изомерные формы выше или ниже в данном документе применяются взаимозаменяемо.

Настоящее изобретение включает все стереоизомеры соединений по настоящему изобретению либо в виде чистого стереоизомера, либо в виде смеси двух или более стереоизомеров.

Энантиомеры являются стереоизомерами, которые представляют собой несовпадающие зеркальные отражения друг друга. Смесь 1:1 пары энантиомеров представляет собой рацемат или рацемическую смесь.

Атропизомеры (или атропоизомеры) представляют собой стереоизомеры, которые имеют конкретную пространственную конфигурацию, образованную в результате ограниченного вращения вокруг одинарной связи, в связи со значительным стерическим несоответствием. Для включения в объем настоящего изобретения предназначены все атропизомерные формы соединений группы А.

Диастереомеры (или диастереоизомеры) представляют собой стереоизомеры, которые не являются энантиомерами, т.е. они не соотносятся как зеркальные отражения. Если соединение содержит двойную связь, то заместители могут находиться в Е- или Z-конфигурации.

Заместители в бивалентных циклических (частично) насыщенных радикалах могут находиться либо в цис-, либо в транс-конфигурации; например, если соединение содержит дизамещенную циклоалкильную группу, то заместители могут находиться в цис- или транс-конфигурации.

Таким образом, настоящее изобретение включает энантиомеры, атропизомеры, диастереомеры, рацематы, Е-изомеры, Z-изомеры, цис-изомеры, транс-изомеры и их смеси в случаях, когда это возможно с химической точки зрения.

Значения всех данных терминов, т.е. энантиомеры, атропизомеры, диастереомеры, рацематы, Eизомеры, Z-изомеры, цис-изомеры, транс-изомеры и их смеси, известны специалисту в данной области.

Абсолютную конфигурацию определяют согласно системе Кана-Ингольда-Прелога. Конфигурация по асимметрическому атому указана с помощью либо R, либо S. Выделенные стереоизомеры, абсолютная конфигурация которых неизвестна, могут быть обозначены как (+) или (-) в зависимости от направления, в котором они вращают плоскость поляризации света. Например, выделенные энантиомеры, абсолютная конфигурация которых неизвестна, могут быть обозначены как (+) или (-) в зависимости от направления, в котором они вращают плоскость поляризации света.

При определении конкретного стереоизомера это означает, что указанный стереоизомер практически не содержит другие стереоизомеры, т.е. связан с менее 50%, предпочтительно с менее 20%, более предпочтительно с менее 10%, еще более предпочтительно с менее 5%, в частности с менее 2% и наиболее предпочтительно с менее 1% таковых. Таким образом, если соединение группы А определено, например, как (R), то это означает, что соединение практически не содержит ^)-изомера.

Некоторые соединения, соответствующие группе А, могут существовать также в их таутомерной форме. Предполагается, что такие формы, ввиду того, что они могут существовать, хотя явно и не показаны, включены в объем настоящего изобретения. Из этого следует, что одно соединение может сущест

- 5 030908 вовать как в стереоизомерной, так и в таутомерной форме.

Что касается применения в медицине, то соли соединений по настоящему изобретению относятся к нетоксичным фармацевтически приемлемым солям. Однако при получении соединений в соответствии с настоящим изобретением или их фармацевтически приемлемых солей могут быть применимыми другие соли. Подходящие фармацевтически приемлемые соли соединений включают соли присоединения кислоты, которые могут быть образованы, например, путем смешивания раствора соединения с раствором фармацевтически приемлемой кислоты, такой как хлористоводородная кислота, серная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, янтарная кислота, уксусная кислота, бензойная кислота, лимонная кислота, винная кислота, угольная кислота или фосфорная кислота.

И наоборот, упомянутые формы солей можно превратить в форму свободного основания путем обработки соответствующим основанием.

Кроме того, если соединения по настоящему изобретению имеют кислотный фрагмент, то их подходящие фармацевтически приемлемые соли могут включать соли щелочных металлов, например соли натрия или калия; соли щелочноземельных металлов, например соли кальция или магния; и соли, образованные с помощью подходящих органических лигандов, например соли четвертичного аммония.

Характерные кислоты, которые можно использовать при получении фармацевтически приемлемых солей, включают без ограничения следующие: уксусную кислоту, 2,2-дихлоруксусную кислоту, ацилированные аминокислоты, адипиновую кислоту, альгиновую кислоту, аскорбиновую кислоту, L-аспарагиновую кислоту, бензолсульфоновую кислоту, бензойную кислоту, 4-ацетамидобензойную кислоту, (+)камфорную кислоту, камфорсульфоновую кислоту, каприновую кислоту, капроновую кислоту, каприловую кислоту, коричную кислоту, лимонную кислоту, цикламовую кислоту, этан-1,2-дисульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, 2-гидроксиэтансульфоновую кислоту, муравьиную кислоту, фумаровую кислоту, галактаровую кислоту, гентизиновую кислоту, глюкогептоновую кислоту, D-глюконовую кислоту, D-глюкуроновую кислоту, L-глутаминовую кислоту, бета-оксоглутаровую кислоту, гликолевую кислоту, гиппуровую кислоту, бромистоводородную кислоту, хлористоводородную кислоту, (+)-Lмолочную кислоту, (±)-DL-молочную кислоту, лактобионовую кислоту, малеиновую кислоту, (-)-Lяблочную кислоту, малоновую кислоту, (±)-DL-миндальную кислоту, метансульфоновую кислоту, нафталин-2-сульфоновую кислоту, нафталин-1,5-дисульфоновую кислоту, 1-гидрокси-2-нафтойную кислоту, никотиновую кислоту, азотную кислоту, олеиновую кислоту, оротовую кислоту, щавелевую кислоту, пальмитиновую кислоту, памоевую кислоту, фосфорную кислоту, L-пироглутаминовую кислоту, салициловую кислоту, 4-аминосалициловую кислоту, себациновую кислоту, стеариновую кислоту, янтарную кислоту, серную кислоту, дубильную кислоту, (+)-Б-винную кислоту, тиоциановую кислоту, птолуолсульфоновую кислоту, трифторметилсульфоновую кислоту и ундециленовую кислоту.

Характерные основания, которые можно использовать при получении фармацевтически приемлемых солей, включают без ограничения следующие: аммиак, L-аргинин, бенетамин, бензатин, гидроксид кальция, холин, диметилэтаноламин, диэтаноламин, диэтиламин, 2-(диэтиламино)этанол, этаноламин, этилендиамин, N-метилглюкамин, гидрабамин, Ш-имидазол, L-лизин, гидроксид магния, 4-(2-гидроксиэтил)морфолин, пиперазин, гидроксид калия, 1-(2-гидроксиэтил)пирролидин, вторичный амин, гидроксид натрия, триэтаноламин, трометамин и гидроксид цинка.

И наоборот, упомянутые формы солей можно превратить в формы свободных кислот путем обработки соответствующей кислотой.

Термин сольват включает формы присоединения растворителя, а также их соли, которые могут быть образованы из соединения группы А. Примерами таких форм присоединения растворителя являются, например, гидраты, алкоголяты и т. п.

В рамках данной заявки элемент, в частности при упоминании в отношении соединения группы А, включает все изотопы и смеси изотопов этого элемента, либо встречающиеся в природе, либо полученные синтетическим путем, либо с природным изотопным составом, либо в изотопно-обогащенной форме. Меченные радиоактивным изотопом соединения группы А могут содержать радиоактивный изотоп, выбранный из группы ²Н (D), ³H, ¹¹C, ¹⁸F, ¹²²I, ¹²³I, ¹²⁵I, ¹³¹I, ⁷⁵Br, ⁷⁶Br, ⁷⁷Br и ⁸²Br. Предпочтительно радиоактивный изотоп выбран из группы, состоящей из ²Н, ³H, C и ¹⁸F. Более предпочтительно радиоактивный изотоп представляет собой 2Н. В частности, дейтерированные соединения предназначены для включения в объем настоящего изобретения.

В варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям 1-33, их таутомерам и стереоизомерным формам, а также их фармацевтически приемлемым солям присоединения и сольватам.

В варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям 1-33.

Фармакология

Было обнаружено, что соединения по настоящему изобретению ингибируют NF-KB-индуцирующую киназу (NIK, также известную как MAP3K14). Соединения в соответствии с настоящим изобретением и фармацевтические композиции, содержащие такие соединения, могут быть применимыми для лечения или предупреждения заболеваний, таких как рак, воспалительные нарушения, нарушения метаболизма, в том числе ожирение и диабет, а также аутоиммунные нарушения. В частности, соединения в

- 6 030908 соответствии с настоящим изобретением и их фармацевтические композиции могут быть применимыми в лечении гемобластоза или солидной опухоли. В конкретном варианте осуществления указанный гемобластоз выбран из группы, состоящей из множественной миеломы, лимфомы Ходжкина, Т-клеточного лейкоза, лимфомы лимфоидной ткани слизистых оболочек, диффузной В-крупноклеточной лимфомы и лимфомы из клеток мантийной зоны, в конкретном варианте осуществления лимфомы из клеток мантийной зоны. В другом конкретном варианте осуществления настоящего изобретения солидная опухоль выбрана из группы, состоящей из рака поджелудочной железы, рака молочной железы, меланомы и немелкоклеточного рака легкого.

Примеры видов рака, которые можно лечить (или подавлять) включают без ограничения карциному, например карциному мочевого пузыря, рак молочной железы, рак толстой кишки (например, колоректальные карциномы, такие как аденокарцинома толстой кишки и аденома толстой кишки), рак почек, рак уротелия, рак матки, рак эпидермиса, рак печени, рак легкого (например, аденокарциному, мелкоклеточный рак легкого и немелкоклеточные карциномы легкого, плоскоклеточный рак легкого), рак пищевода, рак головы и шеи, рак желчного пузыря, рак яичника, рак поджелудочной железы (например, экзокринную карциному поджелудочной железы), рак желудка, рак желудочно-кишечного тракта (также известный как гастральный рак) (например, гастроинтестинальные стромальные опухоли), рак шейки матки, рак эндометрия, рак щитовидной железы, рак предстательной железы или рак кожи (например, плоскоклеточную карциному или выбухающую дерматофибросаркому); рак гипофиза, опухоль кроветворной ткани лимфоидного происхождения, например, лейкоз, острый лимфоцитарный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, В-клеточную лимфому (например, диффузную В-крупноклеточную лимфому, лимфому из клеток мантийной зоны), Т-клеточный лейкоз/лимфому, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому, волосатоклеточную лимфому или лимфому Беркетта; опухоль кроветворной ткани миелоидного происхождения, например, лейкозы, острые и хронические миелогенные лейкозы, хронический миеломоноцитарный лейкоз (CMML), миелопролиферативное нарушение, миелопролиферативный синдром, миелодиспластический синдром или промиелоцитарный лейкоз; множественную миелому; фолликулярный рак щитовидной железы; гепатоцеллюлярный рак, опухоль мезенхимального происхождения (например, саркому Юинга), например, фибросаркому или рабдомиосаркому; опухоль центральной или периферической нервной системы, например, астроцитому, нейробластому, глиому (такую как мультиформную глиобластому) или шванному; меланому; семиному; тератокарциному; остеосаркому; пигментную ксеродерму; кератоакантому; фолликулярный рак щитовидной железы или саркому Капоши.

Следовательно, настоящее изобретение относится к соединениям группы А для применения в качестве лекарственного препарата.

Настоящее изобретение относится также к применению соединения группы А или фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением для получения лекарственного препарата.

Настоящее изобретение относится также к соединению группы А или к фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением для применения в лечении, предупреждении, уменьшении интенсивности, контроле или снижении риска развития нарушений, ассоциированных с дисфункцией NF-кБ-индуцирующей киназы у млекопитающего, в том числе у человека, лечение или предупреждение которых зависят от ингибирования NF-кБ-индуцирующей киназы или облегчается им.

Настоящее изобретение относится также к применению соединения группы А или фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением для производства лекарственного препарата для лечения, предупреждения, уменьшения интенсивности, контроля или снижения риска развития нарушений, ассоциированных с дисфункцией NF-кБ-индуцирующей киназы у млекопитающего, в том числе у человека, лечение или предупреждение которых зависят от ингибирования NF-кБ-индуцирующей киназы или облегчается им.

Настоящее изобретение относится также к соединению группы А для применения в лечении или предупреждении любого из заболеваний, упомянутых в данном документе выше.

Настоящее изобретение относится также к применению соединения группы А для изготовления лекарственного препарата для лечения или предупреждения любого из болезненных состояний, упомянутых в данном документе выше.

Соединения по настоящему изобретению можно вводить млекопитающим, предпочтительно людям, для лечения или предупреждения каких-либо заболеваний, упомянутых в данном документе выше.

Ввиду применимости соединений группы А представлен способ лечения теплокровных животных, в том числе людей, страдающих любым из заболеваний, упомянутых в данном документе выше.

Указанный способ предусматривает введение, т.е. системное или местное введение, предпочтительно пероральное введение, терапевтически эффективного количества соединения группы А теплокровным животным, в том числе людям.

Вследствие этого, настоящее изобретение относится также к способу лечения какого-либо из забо

- 7 030908 леваний, упомянутых в данном документе выше, включающему введение терапевтически эффективного количества соединения в соответствии с настоящим изобретением пациенту, нуждающемуся в этом.

Специалисту в данной области будет понятно, что терапевтически эффективным количеством соединений по настоящему изобретению является количество, достаточное для наличия терапевтической активности, и что данное количество варьирует, inter alias, в зависимости от типа заболевания, концентрации соединения в терапевтическом составе и состояния пациента. Как правило, количество соединения по настоящему изобретению, подлежащее введению в качестве терапевтического средства для лечения нарушений, указанных в данном документе, будет определяться в каждом конкретном случае лечащим врачом.

Специалисты в области лечения таких заболеваний смогут определить эффективное суточное терапевтическое количество из результатов испытаний, представленных в данном документе ниже. Эффективное суточное терапевтическое количество будет составлять от приблизительно 0,005 мг/кг до 50 мг/кг, в частности от 0,01 мг/кг до 50 мг/кг веса тела, более конкретно от 0,01 мг/кг до 25 мг/кг веса тела, предпочтительно от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 15 мг/кг, более предпочтительно от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, еще более предпочтительно от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 1 мг/кг, наиболее предпочтительно от приблизительно 0,05 мг/кг до приблизительно 1 мг/кг веса тела. Количество соединения в соответствии с настоящим изобретением, также называемого в данном документе как активный ингредиент, которое требуется для достижения терапевтического эффекта, может варьироваться в каждом конкретном случае, например, для определенного соединения, пути введения, возраста и состояния реципиента, а также определенного нарушения или заболевания, лечение которого осуществляется. Способ лечения может включать также введение активного ингредиента в режиме от одного до четырех раз в сутки. В таких способах лечения соединения в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно составлены до введения. Как описано в данном документе ниже, подходящие фармацевтические составы получают с помощью известных процедур с применением широко известных и общедоступных ингредиентов.

В настоящем изобретении предусматриваются также композиции для предупреждения или лечения нарушений, указанных в данном документе. Указанные композиции содержат терапевтически эффективное количество соединения группы А и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

Хотя активный ингредиент можно вводить отдельно, предпочтительно, чтобы он был представлен в виде фармацевтической композиции. Следовательно, настоящее изобретение дополнительно предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую соединение в соответствии с настоящим изобретением вместе с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Носитель или разбавитель должны быть приемлемыми в том смысле, что они должны быть совместимы с другими ингредиентами композиции и не быть вредными для получающих их пациентов.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно получать любыми способами, хорошо известными в области фармации, например с помощью таких способов, как описаны в Gennaro et al. Remington's Pharmaceutical Sciences (18^th ed., Mack Publishing Company, 1990, см. в особенности Part 8: Pharmaceutical preparations and their Manufacture). Терапевтически эффективное количество конкретного соединения, в форме основания или в форме соли присоединения, в качестве активного ингредиента комбинируется в однородной смеси с фармацевтически приемлемым носителем, который может иметь разнообразные формы в зависимости от формы препарата, который требуется ввести. Желательно, чтобы эти фармацевтические композиции находились в стандартной лекарственной форме, предпочтительно подходящей для системного введения, такого как пероральное, чрескожное или парентеральное введение; или для местного введения, как например, с помощью ингаляции, назального спрея, глазных капель или с помощью крема, геля, шампуня и т.п. Например, при получении композиций в пероральной лекарственной форме можно использовать любые общепринятые фармацевтические среды, такие как, например, вода, гликоли, масла, спирты и т.п., в случае пероральных жидких препаратов, таких как суспензии, сиропы, настои и растворы; или твердые носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, скользящие вещества, связующие вещества, разрыхлители и т.п., в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток. Благодаря своей простоте введения таблетки и капсулы представляют наиболее предпочтительные стандартные лекарственные формы для перорального введения, в случае которых, несомненно, используют твердые фармацевтические носители. В случае композиций для парентерального применения носитель будет, как правило, по меньшей мере в значительной степени включать стерильную воду, хотя может включать и другие ингредиенты, например для улучшения растворимости. Например, можно получать растворы для инъекций, в которых носитель содержит физиологический раствор, раствор глюкозы или смесь физиологического раствора и раствора глюкозы. Также можно получать суспензии для инъекций, в случае которых можно использовать подходящие жидкие носители, суспендирующие средства и т.п. В композициях, подходящих для чрескожного введения, носитель необязательно содержит средство, улучшающее проникновение, и/или подходящее смачиваемое средство, необязательно в комбинации с подходящими добавками любой природы в минимальных пропорциях, при этом добавки не оказывают никаких существенных вредных воздействий на кожу. Указанные добавки могут облегчать введение через кожу и/или могут быть полезными при получении требуемых композиций. Данные композиции мож

- 8 030908 но наносить различными путями, например, в виде трансдермального пластыря, путем точечной обработки или в виде мази.

Особенно предпочтительно для простоты введения и однородности дозирования составлять вышеупомянутые фармацевтические композиции в стандартные лекарственные формы. Стандартные лекарственные формы, как применяется в описании и формуле изобретения в данном документе, относятся к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единиц дозирования, при этом каждая единица содержит заранее определенное количество активного ингредиента, рассчитанное для получения требуемого терапевтического эффекта, совместно с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами таких стандартных лекарственных форм являются таблетки (в том числе делимые таблетки или таблетки, покрытые оболочкой), капсулы, пилюли, пакеты с порошкообразным продуктом, облатки, растворы или суспензии для инъекций, чайные ложки с верхом, столовые ложки с верхом и т. п., а также их отдельные кратные количества.

Соединения по настоящему изобретению можно применять для системного введения, такого как пероральное, чрескожное или парентеральное введение; или для местного введения, такого как с помощью ингаляции, назального спрея, глазных капель или с помощью крема, геля, шампуня или т.п. Соединения предпочтительно вводятся перорально. Точная дозировка и частота введения зависят от конкретного применяемого соединения группы А, конкретного состояния, подвергаемого лечению, тяжести состояния, подвергаемого лечению, возраста, веса, пола, степени расстройства и общего физического состояния конкретного пациента, а также от другого медикаментозного лечения, которое индивидуум может получать, что хорошо известно специалистам в данной области техники. Более того, очевидно, что указанное эффективное суточное количество можно уменьшать или увеличивать в зависимости от реакции субъекта, подвергаемого лечению, и/или в зависимости от оценки врача, назначающего соединения по настоящему изобретению.

Соединения в соответствии с настоящим изобретением можно вводить отдельно или в комбинации с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами. Комбинированная терапия включает введение единого дозированного фармацевтического состава, который содержит соединение в соответствии с настоящим изобретением и одно или несколько дополнительных терапевтических средств, а также введение соединения в соответствии с настоящим изобретением и каждого дополнительного терапевтического средства в своем собственном отдельном дозированном фармацевтическом составе. Например, соединение в соответствии с настоящим изобретением и терапевтическое средство можно вводить пациенту вместе в единой пероральной дозированной композицией, такой как таблетка или капсула, или каждое средство можно вводить по отдельности в пероральных дозированных составах.

Для лечения вышеуказанных состояний соединения по настоящему изобретению можно преимущественно применять в комбинации с одним или несколькими другими медицинскими средствами, более конкретно, с другими противораковыми средствами или вспомогательными средствами при терапии рака. Примеры противораковых средств или вспомогательных средств (поддерживающих средств при терапии) включают без ограничения координационные соединения платины, например, цисплатин, необязательно комбинированный с амифостином, карбоплатином или оксалиплатином;

таксановые соединения, например, паклитаксел, связанные с белком частицы паклитаксела (AbraxaneTM) или доцетаксел;

ингибиторы топоизомеразы I, такие как камптотециновые соединения, например, иринотекан, SN38, топотекан, топотекан hcl;

ингибиторы топоизомеразы II, такие как противоопухолевые эпидофиллотоксины или подофиллотоксиновые производные, например, этопозид, этопозид фосфат или тенипозид;

противоопухолевые алкалоиды барвинка, например, винбластин, винкристин или винорелбин;

противоопухолевые нуклеозидные производные, например, 5-фторурацил, лейковорин, гемцитабин, гемцитабин hcl, капецитабин, кладрибин, флударабин, неларабин;

алкилирующие средства, такие как азотистый иприт или нитрозомочевина, например, циклофосфамид, хлорамбуцил, кармустин, тиотепа, мефалан (мелфалан), ломустин, алтретамин, бусульфан, дакарбазин, эстрамустин, ифосфамид необязательно в комбинации с месна, пипоброман, прокарбазин, стрептозоцин, темозоломид, урацил;

противоопухолевые антрациклиновые производные, например, даунорубицин, доксорубицин необязательно в комбинации с дексразоксаном, доксил, идарубицин, митоксантрон, эпирубицин, эпирубицин hcl, валрубицин;

молекулы, которые целенаправленно воздействуют на IGF-1-рецептор, например пикроподофилин; тетракарциновые производные, например тетрокарцин А;

глюкокортикоиды, например преднизон;

антитела, например, трастузумаб (антитело HER2), ритуксимаб (антитело CD20), гемтузумаб, гемтузумаб озогамицин, цетуксимаб, пертузумаб, бевацизумаб, алемтузумаб, экулизумаб, ибритумомаб тиуксетан, нофетумомаб, панитумумаб, тозитумомаб, CNTO 328;

антагонисты рецептора эстрогена, или селективные модуляторы рецептора эстрогена, или ингиби

- 9 030908 торы синтеза эстрогена, например, тамоксифен, фулвестрант, торемифен, дролоксифен, фаслодекс, ралоксифен или летрозол;

ингибиторы ароматазы, такие как эксеместан, анастрозол, летразол, тестолактон и ворозол;

дифференцирующие средства, такие как ретиноиды, витамин D или ретиноевая кислота и средства, блокирующие метаболизм ретиноевой кислоты, (RAMBA), например аккутан;

ингибиторы ДНК-метилтрансферазы, например азацитидин или децитабин;

антифолаты, например преметрексед динатрия;

антибиотики, например, антиномицин D, блеомицин, митомицин С, дактиномицин, карминомицин, дауномицин, левамизол, пликамицин, митрамицин;

антиметаболиты, например, клофарабин, аминоптерин, цитозин арабинозид или метотрексат, азацитидин, цитарабин, флоксуридин, пентостатин, тиогуанин;

средства, индуцирующие апоптоз, и антиангиогенные средства, такие как ингибиторы Bcl-2, например, YC 137, ВН 312, АВТ 737, госсипол, НА 14-1, TW 37 или декановая кислота;

тубулин-связывающие средства, например, комбрестатин, колхицин или нокодазол;

ингибиторы киназ (например, ингибиторы EGFR (рецептора эпидермального фактора роста), MTKI (многоцелевые ингибиторы киназ), mTOR-ингибиторы), например, флавоперидол, иматиниб мезилат, эрлотиниб, гефитиниб, дазатиниб, лапатиниб, лапатиниб дитозилат, сорафениб, сунитиниб, сунитиниб малеат, темсиролимус;

ингибиторы фарнезилтрансферазы, например типифарниб;

ингибиторы гистондеацетилазы (HDAC), например, бутират натрия, субероиланилидгидроксамовая кислота (SAHA), депсипептид (FR 901228), NVP-LAQ824, R306465, хисиностат, трихостатин А, вориностат;

ингибиторы убиквитин-протеасомного пути, например, PS-341, MLN.41 или бортезомиб;

ионделис;

ингибиторы теломеразы, например теломестатин;

ингибиторы матриксной металлопротеиназы, например, батимастат, маримастат, приностат или метастат;

рекомбинантные интерлейкины, например, альдеслейкин, денилейкин-дифтитокс, интерферональфа 2а, интерферон-альфа 2b, пегинтерферон-альфа 2b;

МАРК-ингибиторы;

ретиноиды, например, алитретиноин, бексаротен, третиноин;

триоксид мышьяка;

аспарагиназа;

стероиды, например, дромостанолона пропионат, мегестрола ацетат, нандролон (деканоат, фенпропионат), дексаметазон;

агонисты или антагонисты гонадотропин-высвобождающего гормона, например, абареликс, гозерелина ацетат, гистрелина ацетат, лейпролида ацетат;

талидомид, леналидомид;

меркаптопурин, митотан, памидронат, пегадемаза, пегаспаргаза, расбуриказа;

миметики BH3, например, АВТ-737;

MEK-ингибиторы, например, PD98059, AZD6244, CI-1040;

аналоги колониестимулирующего фактора, например, филграстим, пегфилграстим, сарграмостим; эритропоэтин или его аналоги (например, дарбепоэтин-альфа); интерлейкин-11; опрелвекин; золедронат, золедроновая кислота; фентанил; бисфосфонат; палифермин;

стероидный ингибитор цитохрома Р450, 17-альфа-гидроксилазы/17,20-лиазы (CYP17), например, абиратерон, абиратерона ацетат.

Следовательно, вариант осуществления настоящего изобретения относится к продукту, содержащему в качестве первого активного ингредиента соединение в соответствии с настоящим изобретением, и в качестве дополнительного активного ингредиента - одно или несколько противораковых средств, в качестве комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения в лечении пациентов, страдающих раком.

Одно или несколько других медицинских средств и соединение в соответствии с настоящим изобретением можно вводить одновременно (например, в отдельных или объединенных композициях) или последовательно в любом порядке. В последнем случае, два или более соединений будут введены в течение периода, а также в количестве и способом, которые являются достаточными для гарантирования того, что преимущественный или синергический эффект достигнут. Следует иметь в виду, что предпочтительный способ и порядок введения, а также соответствующие величины доз и режимы для каждого компонента комбинации будут зависеть от конкретного другого медицинского средства и соединения по настоящему изобретению, подлежащих введению, их пути введения, конкретной опухоли, подвергаемой лечению, и конкретного хозяина, подвергаемого лечению. Оптимальный способ и порядок введения, а также величины доз и режим могут быть легко определены специалистами в данной области с применением традиционных способов и с учетом информации, изложенной в данном документе.

- 10 030908

Весовое соотношение соединения в соответствии с настоящим изобретением и одного противоракового средства или нескольких других противораковых средств, вводимых в виде комбинации, может быть определено специалистом в данной области. Указанное соотношение и точная дозировка, а также частота введения зависят от конкретного применяемого соединения в соответствии с настоящим изобретением и другого противоракового(-вых) средства(-ств), конкретного состояния, лечение которого осуществляют, тяжести состояния, лечение которого осуществляют, возраста, веса, пола, рациона, времени введения и общего физического состояния конкретного пациента, способа введения, а также других лекарств, которые индивидуум может принимать, как хорошо известно специалистам в данной области. Более того, очевидно, что эффективное суточное количество может быть снижено или увеличено в зависимости от реакции субъекта, подвергаемого лечению, и/или в зависимости от оценки лечащего врача, назначающего соединения по настоящему изобретению. Конкретное весовое соотношение для соединения группы А по настоящему изобретению и другого противоракового средства может находиться в диапазоне от 1/10 до 10/1, более конкретно от 1/5 до 5/1, еще более конкретно от 1/3 до 3/1.

Координационное соединение платины преимущественно вводят в дозе 1-500 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, например, от 50 до 400 мг/м², в частности, для цисплатина - в дозе приблизительно 75 мг/м² и для карбоплатина - в дозе приблизительно 300 мг/м² на курс лечения.

Таксановое соединение преимущественно вводят в дозе 50-400 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, например, 75-250 мг/м², в частности, для паклитаксела - в дозе от приблизительно 175 до 250 мг/м² и для доцетаксела - в дозе от приблизительно 75 до 150 мг/м² на курс лечения.

Камптотециновое соединение преимущественно вводят в дозе от 0,1 до 400 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, например 1-300 мг/м², в частности, для иринотекана - в дозе от приблизительно 100 до 350 мг/м² и для топотекана - в дозе от приблизительно 1 до 2 мг/м² на курс лечения.

Противоопухолевое подофиллотоксиновое производное преимущественно вводят в дозе 30-300 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, например 50-250 мг/м², в частности, для этопозида - в дозе от приблизительно 35 до 100 мг/м² и для тенипозида - в дозе от приблизительно 50 до 250 мг/м² на курс лечения.

Противоопухолевый алкалоид барвинка преимущественно вводят в дозе от 2 до мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, в частности, для винбластина - в дозе от приблизительно 3 до 12 мг/м², для винкристина - в дозе от приблизительно 1 до 2 мг/м² и для винорелбина - в дозе от приблизительно 10 до 30 мг/м² на курс лечения.

Противоопухолевое нуклеозидное производное преимущественно вводят в дозе 200-2500 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, например от 700 до 1500 мг/м², в частности, для 5FU - в дозе 200-500 мг/м², для гемцитабина - в дозе от приблизительно 800 до 1200 мг/м² и для капецитабина - в дозе от приблизительно 1000 до 2500 мг/м² на курс лечения.

Алкилирующие средства, такие как азотистый иприт или нитрозомочевина, преимущественно вводят в дозе 100-500 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, например 120-200 мг/м², в частности, для циклофосфамида - в дозе от приблизительно 100 до 500 мг/м², для хлорамбуцила - в дозе от приблизительно 0,1 до 0,2 мг/кг, для кармустина - в дозе от приблизительно 150 до 200 мг/м² и для ломустина -в дозе от приблизительно 100 до 150 мг/м² на курс лечения.

Противоопухолевое антрациклиновое производное преимущественно вводят в дозе 10-75 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, например от 15 до 60 мг/м², в частности, для доксорубицина - в дозе от приблизительно 40 до 75 мг/м², для даунорубицина - в дозе от приблизительно 25 до 45 мг/м² и для идарубицина - в дозе от приблизительно 10 до 15 мг/м² на курс лечения.

Антиэстрогенное средство преимущественно вводят в дозе от приблизительно 1 до 100 мг ежесуточно, в зависимости от конкретного средства и состояния, лечение которого осуществляют. Тамоксифен преимущественно вводят перорально в дозе 5-50 мг, предпочтительно 10-20 мг два раза в сутки, продолжая терапию в течение достаточного времени для достижения и поддержания терапевтического эффекта. Торемифен преимущественно вводят перорально в дозе от приблизительно 60 мг один раз в сутки, продолжая терапию в течение достаточного времени для достижения и поддержания терапевтического эффекта. Анастрозол преимущественно вводят перорально в дозе приблизительно 1 мг один раз в сутки. Дролоксифен преимущественно вводят перорально в дозе приблизительно 20-100 мг один раз в сутки. Ралоксифен преимущественно вводят перорально в дозе приблизительно 60 мг один раз в сутки. Эксеместан преимущественно вводят перорально в дозе приблизительно 25 мг один раз в сутки.

Антитела преимущественно вводят в дозе от приблизительно 1 до 5 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела или, как известно из уровня техники, в другой дозе. Трастузумаб преимущественно вводят в дозе 1-5 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, в частности 2-4 мг/м² на курс лечения.

Данные дозы можно вводить, например, один раз, два раза или больше на курс лечения, который можно повторять, например, каждые 7, 14, 21 или 28 дней.

Следующие примеры дополнительно иллюстрируют настоящее изобретение. Примеры

Некоторые способы получения соединений по настоящему изобретению иллюстрируются в следующих примерах. Если не указано иное, то все исходные материалы получали от частных поставщиков

- 11 030908 и применяли без дополнительной очистки.

В данном документе термин DCM означает дихлорметан, BEH означает мостиковый гибрид этилсилоксана/диоксида кремния, DIPEA означает диизопропилэтиламин, DMF означает N, Nдиметилформамид, DMSO означает диметилсульфоксид, UPLC означает сверхэффективную жидкостную хроматографию, LC означает жидкостную хроматографию, EtOAc означает этилацетат, HPLC означает высокоэффективную жидкостную хроматографию, LCMS означает жидкостную хроматографию/масс-спектрометрию, MeCN означает ацетонитрил, МеОН означает метанол, Et₂O означает диэтиловый эфир, R_t означает время удерживания, ISOLUTE® SCX-2 SPE означает сильную катионообменную колонку на диоксиде кремния с пропилсульфоновой кислотой ISOLUTE®, TBAF означает фторид тетрабутиламмония, TFA означает трифторуксусную кислоту, SFC означает хроматографию со сверхкритической подвижной фазой и THF означает тетрагидрофуран.

В структурах промежуточных соединений и соединений по настоящему изобретению дейтерий (²Н) представлен химическим символом D.

Соединения группы А можно синтезировать в виде рацемических смесей энантиомеров, которые можно отделять друг от друга согласно известным в данной области процедурам разделения. Рацемические соединения группы А можно превращать в соответствующие формы диастереомерных солей посредством осуществления реакции с подходящей хиральной кислотой. Указанные формы диастереомерных солей затем разделяют, например, с помощью селективной или фракционной кристаллизации, а энантиомеры выделяют оттуда с помощью щелочи. Альтернативный способ разделения энантиомерных форм соединений группы А включает жидкостную хроматографию с применением хиральной неподвижной фазы. Указанные чистые стереохимически изомерные формы также можно получить из соответствующих чистых стереохимически изомерных форм соответствующих исходных материалов при условии, что реакция протекает стереоспецифично.

Получение промежуточных соединений

Пример А1

а) Получение промежуточного соединения 1

Перемешанный раствор 5-бром-1Н-пирроло[2,3-с]пиридина (2,0 г, 10,2 ммоль) в безводном DMF (80 мл) в атмосфере азота при температуре окружающей среды обрабатывали порциями гидрида натрия (0,49 г, 12,2 ммоль, 60% в минеральном масле). После перемешивания в течение 20 мин по каплям добавляли 2-йодпропан (1,1 мл, 11,2 ммоль) и полученную в результате смесь перемешивали в течение 18 ч. Смесь концентрировали in vacuo и остаток разделяли между водой и EtOAc. Органическую фазу промывали солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали in vacuo. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, с элюированием смесью EtOAc и пентана (1:9-1:1 по объему), с получением требуемого продукта в виде коричневого масла (1,87 г, 77%).

LCMS (Способ С): R_t= 3,19 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 239/241.

b) Получение промежуточного соединения 2

Перемешанную смесь промежуточного соединения 1 (1,87 г, 7,81 ммоль), хлорида алюминия (2,08 г, 15,6 ммоль) и безводного DCM (40 мл) при температуре окружающей среды обрабатывали ацетилхлоридом по каплям (1,1 мл, 15,6 ммоль) и полученную в результате смесь перемешивали в течение 4 ч. Смесь обрабатывали последовательно с помощью МеОН (2,0 мл), 15 М водного раствора гидроксида аммония (10 мл) и воды. Отделенную водную фазу экстрагировали с помощью DCM, а объединенные органические фазы сушили над Na2SO4 и концентрировали in vacuo. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, с элюированием смесью EtOAc и пентана (1:9-1:0 по объему), с получением требуемого продукта в виде бледно-желтого твердого вещества (1,67 г, 76%).

LCMS (Способ В): R_t = 2,88 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 281/283.

с) Получение промежуточного соединения 3

Смесь промежуточного соединения 2 (1,66 г, 5,92 ммоль) и трет-бутокси-бис(диметиламино)метана (2,44 мл, 11,8 ммоль) перемешивали при 100°С в течение 30 мин. Смесь охлаждали до температуры окружающей среды и концентрировали in vacuo с получением требуемого продукта в виде бледно-желтого твердого вещества (1,99 г, 100%).

LCMS (Способ С): R_t = 2,80 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 336/338.

d) Получение промежуточного соединения 4

Перемешанную смесь гуанидингидрохлорида (5,65 г, 59,2 ммоль) и 1-бутанола (40 мл) в атмосфере азота при 0°С обрабатывали порциями метоксидом натрия (3,20 г, 59,2 ммоль). После перемешивания в течение 30 мин добавляли промежуточное соединение 3 (1,99 г, 5,92 ммоль) и полученную в результате смесь нагревали при 100°С в течение 18 ч. Смесь охлаждали до температуры окружающей среды и концентрировали in vacuo. Остаток разделяли между водой и EtOAc. Органическую фазу промывали солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали in vacuo. Остаток растирали с Et₂O с получением требуемого продукта в виде белого твердого вещества (1,77 г, 90%).

LCMS (Способ С): R_t = 2,04 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 332/334.

е) Получение промежуточного соединения 5

Смесь промежуточного соединения 4 (1,62 г, 4,88 ммоль), N-йодсукцинимида (1,65 г, 7,32 ммоль) и DMF (35 мл) перемешивали при 55°С в течение 2,5 ч. Смесь охлаждали до температуры окружающей среды и разделяли между водой и EtOAc. Органическую фазу промывали солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали in vacuo. Остаток растирали с DCM с получением требуемого продукта в виде желтого твердого вещества (1,18 г, 53%). Фильтрат концентрировали in vacuo и очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, с элюированием смесью EtOAc в пентане (0:1-1:0 по объему), с получением второй партии требуемого продукта (0,36 г, 16%).

LCMS (Способ С): R_t = 3,24 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 458/460.

Пример А2

а) Получение промежуточного соединения 6

Перемешанную суспензию 5,7-дибром-1Н-пирроло[2,3-с]пиридина (2,24 г, 8,12 ммоль) в DCM (34 мл) при 0°С обрабатывали последовательно 4-диметиламинопиридином (0,06 г, 0,49 ммоль), триэтиламином (2,26 мл, 12,2 ммоль) и ди-трет-бутилдикарбонатом (2,13 г, 9,74 ммоль). Полученную в результате смесь нагревали до температуры окружающей среды и перемешивали в течение 1 ч. Смесь разделяли между DCM и водой. Органическую фазу высушивали над Na2SO4 и концентрировали in vacuo. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, с элюированием смесью DCM и пентана (0:1-4:2 по объему), с получением требуемого продукта в виде белого твердого вещества (2,66 г, 87%).

LCMS (Способ С): R_t = 4,05 мин, масса/заряд [МДШ^+НГ = 319/321/323.

b) Получение промежуточного соединения 7

Перемешанную суспензию промежуточного соединения 6 (5,29 г, 14,07 ммоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладия (0,81 г, 0,703 ммоль) в безводном THF (54 мл) в атмосфере азота при температуре окружающей среды обрабатывали 0,5 М раствором бромида циклопропилцинка в THF (42,2 мл, 21,10 ммоль) и полученную в результате смесь перемешивали в течение 4 ч. Смесь разделяли между EtOAc и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу высушивали над Na2SO4 и концентрировали in vacuo. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, с

- 13 030908 элюированием смесью DCM и пентана (0:1-7:3 по объему), с получением требуемого продукта в виде белого твердого вещества (4,0 г, 84%).

LCMS (Способ С): R_t = 4,61 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 337/339.

с) Получение промежуточного соединения 8

Дегазированную смесь промежуточного соединения 7 (4,0 г, 11,9 ммоль), 4,4,-ди-трет-бутил-2,2дипиридила (0,32 г, 1,19 ммоль) и циклогексана (53 мл) в атмосфере аргона при температуре окружающей среды последовательно обрабатывали ди-ц-метоксобис(1,5-циклооктадиен)дииридием (0,39 г, 0,59 ммоль) и 4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксабороланом (8,6 мл, 59,3 ммоль). Полученную в результате смесь перемешивали при 60°С в течение 45 мин. Смесь охлаждали до температуры окружающей среды, фильтровали и полученный в результате фильтрат концентрировали in vacuo. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, с элюированием смесью DCM и пентана (0:1-7:3 по объему), с получением требуемого продукта в виде белого твердого вещества (4,74 г, 86%). LCMS (Способ D): R_t = 4,62 мин, масса/заряд [М-(трет-бутил)+Н]⁺ = 407/409.

d)

Получение промежуточного соединения 9

Смесь промежуточного соединения 8 (4,74 г, 10,2 ммоль), 4-хлор-5-фторпиримидин-2-амина (3,78 г, 25,6 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия (1,18 г, 1,02 ммоль), 2,0 М водного раствора карбоната натрия (20,5 мл, 40,9 ммоль), толуола (126 мл) и МеОН (17 мл) перемешивали в атмосфере аргона при 85°С в течение 3 ч. Смесь охлаждали до температуры окружающей среды и разделяли между водой и EtOAc. Органическую фазу промывали солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали in vacuo. Остаток очищали путем растирания с DCM с последующей колоночной хроматографией на силикагеле, с элюированием смесью EtOAc и пентана (0:1-1:1 по объему), с получением требуемого продукта в виде белого твердого вещества (2,30 г, 50%).

LCMS (Способ D): R_t = 3,81 мин, масса/заряд [М-(трет-бутил)+Н]⁺= 392/394.

е) Получение промежуточного соединения 10

Перемешанный раствор промежуточного соединения 9 (0,98 г, 2,19 ммоль) в DCM (25 мл) в атмосфере азота при температуре окружающей среды обрабатывали TFA (12 мл, 157 ммоль) и полученную в результате смесь перемешивали в течение 6 ч. Смесь концентрировали in vacuo (2 х с использованием толуола для удаления TFA посредством азеотропной перегонки) и остаток растирали с МеОН с получением требуемого продукта в виде бледно-желтого твердого вещества (0,62 г, 80%).

LCMS (Способ В): R_t = 2,91 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 348/350.

Промежуточные соединения 11 и 12 получали с помощью протокола реакции, аналогичного применяемому для промежуточного соединения 6, с использованием соответствующих исходных материалов (табл. 1).

- 14 030908

Таблица 1

Промежуточное соединение	Структура	Исходные материалы	Данные LCMS
11	лА-	a) 5-бром-7-метил-1Нпирроло [2,3 -с] пиридин; b) дя-третбутилдикарбонат	R_t = 4,13 минуты, масса/заряд [М(/и/л7и-бутил)+Н \| = 255/257 (Способ С)
12		a) промежуточное соединение 5; b) дя-третбутилдикарбонат	R_t = 4,64 минуты, масса/заряд [М+Н]⁺ = 658/660 (Способ С)

Промежуточные соединения 13 и 14 получали с помощью протокола реакции, аналогичного применяемому для промежуточного соединения 8, с использованием соответствующих исходных материалов (табл. 2).

Таблица 2

Промежуточное соединение	Структура	Исходные материалы	Данные LCMS
13	«4 А, в'-Сн-то о АА	a) промежуточное соединение 11; b) 4,4,5,5-тетраметил- 1,3,2-диоксаборолан	R_t = 5,03 минуты, масса/заряд [М(/7?/?с77?-бутил)+Н \| = 381/383 (Способ С)
14	_ у_о „В, А	a) сложный третбутиловый эфир 5-бромпирро ло [2,3 -с] пиридин-1 карбоновой кислоты; b) 4,4,5,5-тетраметил1,3,2-диоксаборолан	R_t = 4,88 минуты, масса/заряд [М+Н]⁺= 423/425 (Способ В)

Промежуточные соединения 15 и 16 получали с помощью протокола реакции, аналогичного применяемому для промежуточного соединения 9, с использованием соответствующих исходных материалов (табл. 3).

Таблица 3

Промежуточное соединение	Структура	Исходные материалы	Данные LCMS
		а) промежуточное соединение 13;	R_t = 4,02 минуты, масса/заряд [М-
15	XJ H₂N^N	Ь) 4-хлор-5фторпиримидин-2-амин	/77/?6777-буТИЛ I ¹ = 366/368 (Способ С)
	_N _ва / ^N\	а) промежуточное	R_t = 3,87 минуты,
16		соединение 14;	масса/заряд [М+Н]⁺
у А	Ь) 4-хлор-5-	= 408/410
	У γ A J	фторпиримидин-2-амин	(Способ С)
	η₂ν^Ά

Промежуточные соединения 17-23 получали с помощью протокола реакции, аналогичного применяемому для промежуточного соединения 10, с использованием соответствующего исходного материала (табл. 4).

- 15 030908

Таблица 4

Промежуточное соединение	Структура	Исходный материал	Данные LCMS

			R_t = 2,21 минуты,
17	XJ h₂n n	промежуточное соединение 16	масса/заряд [М+Н]⁺ = 308/310 (Способ С)
			R_t= 1,71 минуты,
18	—	промежуточное	масса/заряд [М+Н]⁺ =
jT	соединение 25	377/379
	_hnaJ		(Способ С)
	η₂ν ν
	rf w/		R_t = 1,63 минуты,
19	^вг'\₌₌/ з	промежуточное	масса/заряд [М+Н]⁺ =
h₂n n^	соединение 27	363/365 (Способ С)

	N-Чк Η // γ—Ν		R_t = 2,07 минуты,
20	^Br	промежуточное	масса/заряд [М+Н]⁺ =
	соединение 15	322/324
	aT		(Способ D)
	H₂N N
	nV A		R_t = 0,29/1,84 минуты,
21	^Br—\=Z \	промежуточное	масса/заряд [М+Н]⁺ =
1	соединение 28	391/393
	ХУ		(Способ С)
	H₂N N
			R_t = 0,30/1,82 минуты,
22	^вг'\аа	промежуточное	масса/заряд [М+Н]⁺ =
i A У A h₂n n	соединение 24	461/463 (Способ С)

	O^h
	N-N /		R_t = 0,29/1,88 минуты,
23	в A /^-N	промежуточное	масса/заряд [М+Н]⁺ =
1	соединение 37	391/393
			(Способ С)

	H₂N ν

Пример A3

а) Получение промежуточного соединения 24

Смесь промежуточного соединения 12 (0,50 г, 0,76 ммоль), 4-(2-гидроксиэтил)морфолина (10 мл, 82,6 ммоль), 1,10-фенантролина (0,11 г, 0,61 ммоль), йодида меди(р (0,058 г, 0,30 ммоль) и CS₂CO₃ (0,50 ммоль, 1,52 ммоль) нагревали с помощью микроволнового излучения при 110°С в течение 0,5 ч. Смесь охлаждали до температуры окружающей среды и разделяли между водой и EtOAc. Органическую фазу промывали солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали in vacuo. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, с элюированием смесью EtOAc и пентана (0:1-1:0 по объему), а затем смесью 2,0 М раствора аммиака в МеОН и DCM (0:1-1:9 по объему), с получением требуемого продукта в виде желтого масла (0,50 г, 100%).

LCMS (Способ С): R_t = 2,51 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 561/563.

Пример А4

а) Получение промежуточного соединения 25

- 16 030908

Перемешанную смесь промежуточного соединения 17 (3,00 г, 9,74 ммоль), CS₂CO₃ (9,5 г, 29,2 ммоль) и DMF (45 мл) при температуре окружающей среды обрабатывали сложным трет-бутиловым эфиром 3-метансульфонилоксипирролидин-1-карбоновой кислоты (3,87 г, 14,6 ммоль) и полученную в результате смесь нагревали при 80°С в течение 20 ч. Смесь охлаждали до температуры окружающей среды и разделяли между водой и 2-метилтетрагидрофураном. Органическую фазу промывали солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали in vacuo. Остаток растирали с Et₂O с получением требуемого продукта в виде коричневого твердого вещества (3,60 г, 77%).

Промежуточные соединения 26-28 получали с помощью протокола реакции, аналогичного применяемому для промежуточного соединения 25, с использованием соответствующих исходных материалов (табл. 5).

Таблица 5

Промежуточное соединение	Структура	Исходные материалы	Данные LCMS
26	A^f r—N _/ΓνΡ вг-ЧДл	a) промежуточное соединение 19; b) 1-бром-3,3,3трифторпропан	R_t= 1,95/2,07/2,97 минуты, масса/заряд [М+Н]+ = 459/461 (Способ С)
27	r-N _/rvP H₂N N	a) промежуточное соединение 17; b) сложный третбутиловый эфир 3йодазетидин-1карбоновой кислоты	R_t = 3,28 минуты, масса/заряд [М+Н]⁺= 463/465 (Способ В)
28	у pAy r. _7/ 7—N Br-—/ \ ХУ h₂n n^z	a) промежуточное соединение 20; b) сложный третбутиловый эфир 3метансульфонилоксипи рролидин-1карбоновой кислоты	Rt = 3,23 минуты, масса/заряд [М+Н]⁺= 491/493 (Способ D)

Пример А5

а) Получение промежуточного соединения 29

Перемешанный раствор промежуточного соединения 18 (0,20 г, 0,53 ммоль) в смеси МеОН (11мл) и 1,2-дихлорэтана (6,2 мл) в атмосфере азота при температуре окружающей среды обрабатывали последовательно ацетатом натрия (0,06 г, 0,69 ммоль), ацетоном (0,077 мл, 1,06 ммоль) и триацетоксиборгидридом натрия (0,225 г, 1,06 ммоль) и полученную в результате смесь перемешивали в течение 2 ч. Смесь очищали с помощью колонки ISOLUTE® SCX-2 SPE, с элюированием смесью МеОН и 2,0 М раствора аммиака в МеОН (1:0-0:1 по объему), с получением требуемого продукта в виде желтого твердого вещества (0,22 г, 99%).

LCMS (Способ A): R_t = 2,03 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 419/421.

Промежуточные соединения 30-33 получали с помощью протокола реакции, аналогичного применяемому для промежуточного соединения 29, с использованием соответствующих исходных материалов (табл. 6).

- 17 030908

Таблица 6

Промежуточн ое соединение	Структура	Исходные материалы	Данные LCMS
30	Вг—\^_/ \ H₂N N	a) промежуточное соединение 18; b) пропиональдегид	R_t= 0,26/1,87 минуты, масса/заряд [М+Н]⁺= 419/421 (Способ В)
31	/ H₂N \|<	a) промежуточное соединение 21; b) уксусный альдегид	R_t= 0,29/1,89 минуты, масса/заряд [М+Н]⁺= 419/421 (Способ С)
32	вг—47 \ * н₂гг^гГ	a) промежуточное соединение 18; b) бутиральдегид	R_t = 2,14 минуты, масса/заряд [М+Н]⁺= 433/435 (Способ А)
33	Л η— N xr^F Η₂Ν Ν	a) промежуточное соединение 23; b) пропиональдегид	R_t= 0,34/1,98 минуты, масса/заряд [М+Н]+= 433/435 (Способ С)

Пример А6

а) Получение промежуточного соединения 34

Перемешанную смесь промежуточного соединения 18 (0,30 г, 0,79 ммоль), DIPEA (0,70 мл, 1,59 ммоль), THF (8,0 мл) и DMF (4 мл) при температуре окружающей среды обрабатывали 1-бром-3метокси-пропаном (0,18 мл, 1,59 ммоль) и полученную в результате смесь нагревали при 70°С в течение 18 ч. Смесь охлаждали до температуры окружающей среды и концентрировали in vacuo. Остаток разделяли между водой и DCM. Органическую фазу промывали солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄и концентрировали in vacuo. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, с элюированием смесью МеОН и DCM (0:1-2:23 по объему), с получением требуемого продукта в виде белого твердого вещества (0,15 г, 51%).

LCMS (Способ С): Rt= 0,34/1,65/1,82 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 449/451.

Промежуточное соединение 35 получали с помощью протокола реакции, аналогичного применяемому для промежуточного соединения 34, с использованием соответствующих исходных материалов (табл. 7).

Таблица 7

Промежуточное соединение	Структура	Исходные материалы	Данные LCMS
35	^BrX==Q	а) промежуточное соединение 18;	R_t= 0,34/1,77 минуты, масса/заряд
N-XP Л J h₂n n	b) 1-бром-2 метоксиэтан	[М+Н]⁺= 435/437 (Способ С)

Пример А7

а) Получение промежуточного соединения 36

- 18 030908

Перемешанный раствор промежуточного соединения 19 (3,2 г, 6,71 ммоль) в смеси МеОН (63 мл) и уксусной кислоты (32 мл) в атмосфере азота при температуре окружающей среды обрабатывали (1этоксициклопропокси)триметилсиланом (6,74 мл, 33,5 ммоль). После перемешивания в течение 10 мин смесь обрабатывали цианоборгидридом натрия (2,53 г, 40,2 ммоль) и полученную в результате смесь перемешивали при 55°С в течение 2 ч. Смесь охлаждали до температуры окружающей среды и разделяли между DCM и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали in vacuo. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с элюированием смесью DCM и МеОН (1:0-19:1 по объему). С помощью дополнительной очистки посредством колоночной хроматографии на силикагеле с элюированием смесью 2,0 М раствора аммиака в МеОН и DCM (0:1-1:9 по объему) получали требуемый продукт в виде белого твердого вещества (0,85 г, 31%).

LCMS (Способ С): R_t= 1,86 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 403/405.

Пример А8

а) Получение промежуточного соединения 37

Перемешанную смесь промежуточного соединения 17 (1,00 г, 3,25 ммоль), порошкообразного гидроксида калия (0,55 г, 9,74 ммоль), толуола (20 мл) и DMF (2,0 мл) в атмосфере азота при температуре окружающей среды обрабатывали сложным трет-бутиловым эфиром 3-метансульфонилоксипиперидин1-карбоновой кислоты (1,37 г, 4,90 ммоль) и полученную в результате смесь нагревали при 90°С в течение 18 ч. Смесь охлаждали до температуры окружающей среды и разделяли между EtOAc и водой. Органическую фазу высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали in vacuo. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с элюированием смесью 2,0 М раствора аммиака в МеОН и DCM (0:1-1:19 по объему). С помощью дополнительной очистки посредством колоночной хроматографии на силикагеле с элюированием смесью EtOAc и пентана (0:1-1:0 по объему) получали требуемый продукт в виде бледно-желтого твердого вещества (0,17 г, 10%).

LCMS (Способ С): R_t= 3,53 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 491/493.

Пример А9

а) Получение промежуточного соединения 38

Перемешанный раствор (метилдифенилсилил)ацетилена (80,0 г, 359,8 ммоль) в безводном THF (1200 мл) в атмосфере аргона при -78°С обрабатывали н-бутиллитием (23,5 г, 367,0 ммоль), поддерживая температуру ниже -70°С. После перемешивания в течение 1 ч смесь обрабатывали 1-циклопропилэтаноном (36,3 г, 432,0 ммоль) и полученную в результате смесь перемешивали при 0°С в течение 1,5 ч. Смесь гасили путем добавления воды и разделяли между водой и EtOAc. Органическую фазу промывали солевым раствором, высушивали над Na2SO4 и концентрировали in vacuo. Остаток очищали путем хиральной препаративной SFC со следующими условиями: колонка, ChiralPak IC, 300 х 50 мм, 10 мкм; подвижная фаза, СО₂ (90%) и смесь гептана и изопропанола (1:1 по объему) (10%); скорость потока 200 мл/мин., встречное давление 100 бар; детектор, UV 220 нм; температура колонки 38°С. Первый элюируемый энантиомер выделяли в виде твердого вещества грязно-белого цвета (20,2 г, 47,5%). Второй элюируемый энантиомер (промежуточное соединение 38; R- или S-энантиомер) выделяли в виде твердого вещества грязно-белого цвета (20,2 г, 47,5%).

Пример А10

а) Получение промежуточного соединения 39

Перемешанный раствор (метилдифенилсилил)ацетилена (4,95 мл, 22,5 ммоль) в безводном THF (80 мл) в атмосфере аргона при -78°С обрабатывали 1,6 М раствором н-бутиллития в гексанах (15,5 мл, 24,8

- 19 030908 ммоль), поддерживая температуру ниже -70°С. Через 1 ч смесь обрабатывали ацетон-dg (1,95 мл, 27,0 ммоль) и полученную в результате смесь перемешивали при 0°С в течение 1,5 ч. Смесь гасили путем добавления воды и разделяли между водой и EtOAc. Органическую фазу промывали солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали in vacuo. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, с элюированием смесью EtOAc и циклогексана (0:1-2:3 по объему), с получением требуемого продукта в виде бесцветного масла (6,31 г, 98%).

Получение соединений

Значения содержания кислоты (например, муравьиной кислоты или уксусной кислоты) в соединениях, предусматриваемых в данном документе, являются значениями, которые получены экспериментальным путем и могут варьироваться при применении различных аналитических способов. Содержание муравьиной кислоты или уксусной кислоты, описанное в данном документе, определяли с помощью интеграции 1Н ЯМР и описывали вместе с результатами 'H ЯМР. Соединения с содержанием кислоты ниже 0,5 эквивалента могут считаться свободными основаниями.

Пример В1

а) Получение соединения 1

Смесь промежуточного соединения 10 (0,20 г, 0,57 ммоль), 2-циклопропилбут-3-ин-2-ола (0,13 г, 1,15 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия (0,13 г, 0,11 ммоль), йодида медиЦ) (0,01 г, 0,05 ммоль), триэтиламина (0,53 мл, 3,78 ммоль) и MeCN (12 мл) нагревали с помощью микроволнового излучения при 100°С в течение 1 ч. Смесь охлаждали до температуры окружающей среды и концентрировали in vacuo. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с элюированием смесью 2,0 М раствора аммиака в МеОН и DCM (0:1-3:97 по объему). С помощью дополнительной очистки посредством препаративной HPLC с обращенной фазой с элюированием смесью MeCN и воды, содержащей 0,1% гидроксида аммония (1:19-3:2 по объему в течение 20 мин) получали требуемый продукт в виде бледно-желтого твердого вещества (0,072 г, 33%).

'11 ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 12,64 (br. s, 1H), 8,35 (s, 1H), 8,25-8,24 (m, 2H), 6,58 (s, 2H),

5,30 (s, 1H), 2,68-2,58 (m, 1H), 1,53 (s, 3H), 1,21-1,12 (m, 1H), 1,12-1,07 (m, 2H), 1,06-1,01 (m, 2H), 0,590,48 (m, 2H), 0,46-0,35 (m, 2H).

LCMS (Способ Е): R_t = 2,73 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 378.

Пример В2

а) Получение соединения 2

Дегазированную смесь промежуточного соединения 20 (0,20 г, 0,62 ммоль), промежуточного соединения 38 (0,29 г, 0,93 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия (0,14 г, 0,12 ммоль), йодида меди(3) (0,012 г, 0,06 ммоль), триэтиламина (0,61мл, 4,35 ммоль) и MeCN (7,5 мл) обрабатывали 1,0 М раствором TBAF в THF (0,31мл, 0,31 ммоль). Полученную в результате смесь нагревали при 100°С в течение 30 мин. Смесь охлаждали до температуры окружающей среды и концентрировали in vacuo. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с элюированием смесью 2,0 М раствора аммиака в МеОН и DCM (0:1-1:9 по объему). Остаток очищали с помощью колонки ISOLUTE® SCX-2 SPE с элюированием смесью МеОН и 2,0 М раствора аммиака в МеОН (1:0-0:1 по объему). С помощью дополнительной очистки посредством препаративной HPLC с обращенной фазой с элюированием смесью MeCN и воды, содержащей 0,1% гидроксида аммония (1:9-7:3 по объему в течение 20 мин) получали требуемый продукт в виде белого твердого вещества (0,11 г, 49%).

'11 ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 12,43 (br. s, 1H), 8,42 (s, 1H), 8,24 (d, J = 3,8 Гц, 1H), 8,21 (d, J = 2,9 Гц, 1H), 6,59 (s, 2H), 5,30 (s, 1H), 2,68 (s, 3H), 1,54 (s, 3H), 1,21-1,13 (m, 1H), 0,59-0,50 (m, 2H), 0,450,38 (m, 2H).

LCMS (Способ E): R_t = 2,44 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 352.

Соединения 3-23 получали с помощью протокола реакции, аналогичного применяемому для примера В1 или В2, с использованием соответствующих исходных материалов (табл. 8).

- 20 030908

Таблица 8

Соединение	Структура	Исходные материалы	Способ
3	Р / ОН N η₂ν^ν	a) промежуточное соединение 29; b) 2-циклопропилбутЗ-ин-2-ол	В1
4	ΧΧΖΡ H₂n X	a) промежуточное соединение 22; b) 2-циклопропилбутЗ-ин-2-ол	В1
5	P OH__// y— N или S J) JZ	a) промежуточное соединение 26; b) промежуточное соединение 38	В2
6	OH ^// \—N ^R или S _F _HNXJ	a) промежуточное соединение 30; b) промежуточное соединение 38	В2
7	N-_VP'^X'°^X OH__// A—N ^уИили S jT η₂ν^ν^	a) промежуточное соединение 35; b) промежуточное соединение 38	В2
8	p^N^^oили S H₂nA^	a) промежуточное соединение 34; b) промежуточное соединение 38	В2
9	A rv^ ^ноу-^АдЗ	a) промежуточное соединение 36; b) бут-3-ин-2-ол	В1
10	/ p ^νΆ / ОН__// у— N ИЖили S^Z XT Ηχ Ν	a) промежуточное соединение 31; b) промежуточное соединение 38	В2
11	ОН__// А—N ₅^у^/Кили S HjN^N	a) промежуточное соединение 32; b) промежуточное соединение 38	В2
12		a) промежуточное соединение 33; b) промежуточное соединение 39	В2
13	ОН ___// у— N УЯили S XZ н	a) промежуточное соединение 10; b) промежуточное соединение 38	В2
14	А ΓλΖ ОН__// γ—N Ci	a) промежуточное соединение 36; b) 2-тиазол-2-ил-бут-3ин-2-ол	В1
15	А ν-λΡ ОН__// N Н₂м^4г	a) промежуточное соединение 36; b) 2-(5-метил- [ 1,2,4]оксадиазол-3 ил)бут-З-ин-2-ол	В1
16	А он гу^ HjN^N	a) промежуточное соединение 36; b) 2-(5- метилизоксазол-3 -ил)бут-З-ин-2-ол	В1

- 21 030908

17	у ^N\ С Эу η,νΆγ	a) промежуточное соединение 36; b) 2-пиримидин-2-илбут-З-ин-2-ол	В1
18	ОН ^// 'b—N о^F н₃ ^А/	a) промежуточное соединение 17; b) 2-(5- метилизоксазол-3 -ил)бут-З-ин-2-ол	В1
19	он ___//у^- N	a) промежуточное соединение 17; b) 2-тиазол-2-ил-бут-3ин-2-ол	В1
20		a) промежуточное соединение 17; b) 1- этинилциклопентанол	В1
21	А d ОН ^// γ—N н,аУ	a) промежуточное соединение 36; b) 1- этинилциклопентанол	В1
22	νΆ н ОН^Х^Д--Ν HjN^N	a) промежуточное соединение 10; b) 1- этинилциклопентанол	В1
23	^Он 'А о H.N 1'1	a) промежуточное соединение 10; b) 2-(5- метилизоксазол-3 -ил)бут-З-ин-2-ол	В1

Пример С1

а) Получение соединений 24 и 25

Соединение 12 (0,12 г, 0,27 ммоль) очищали с помощью хиральной SFC со следующими условиями: колонка, YMC Cellulose-C; подвижная фаза, СО₂ (75%), IPA с 1% диэтиламина (25%); детектор, UV 240 нм. Таким образом получали соединение 24 (первый элюируемый энантиомер) в виде белого твердого вещества (0,050 г, 40%) и соединение 25 (второй элюируемый энантиомер) в виде белого твердого вещества (0,023 г, 19%).

Пример С2

а) Получение соединений 26 и 27

Соединение 11 (0,06 г, 0,13 ммоль) очищали с помощью хиральной SFC со следующими условиями: колонка, YMC Cellulose-C; подвижная фаза, СО₂ (70%), IPA с 1% диэтиламина (30%); детектор, UV 240 нм. Таким образом получали соединение 26 (первый элюируемый диастереоизомер) в виде белого твердого вещества (0,018 г, 29%) и соединение 27 (второй элюируемый диастереоизомер) в виде белого твердого вещества (0,016 г, 26%).

Пример C3

а) Получение соединений 28 и 29

Соединение 14 (0,04 г, 0,09 ммоль) очищали с помощью хиральной SFC со следующими условиями: колонка, YMC Cellulose-C; подвижная фаза, СО₂ (70%), IPA с 1% диэтиламина (30%); детектор, UV 240 нм. Таким образом получали соединение 28 (первый элюируемый энантиомер) в виде бледно-желтого твердого вещества (0,018 г, 45%) и соединение 29 (второй элюируемый энантиомер) в виде бледножелтого твердого вещества (0,016 г, 39%).

Пример С4

Получение соединений 30 и 31

Соединение 19 (0,06 г, 0,17 ммоль) очищали с помощью хиральной SFC со следующими условиями: колонка, YMC Amylose-C; подвижная фаза, СО₂ (75%), IPA с 1% диэтиламина (25%); детектор, UV 240 нм. Таким образом получали соединение 30 (первый элюируемый энантиомер) в виде желтого твердого вещества (0,022 г, 35%) и соединение 31 (второй элюируемый энантиомер) в виде желтого твердого вещества (0,017 г, 27%).

Пример С5

Получение соединений 32 и 33

Соединение 18 (0,06 г, 0,16 ммоль) очищали с помощью хиральной SFC со следующими условиями: колонка, LUX Cellulose-4; подвижная фаза, СО₂ (50%), IPA с 1% диэтиламина (50%); детектор, UV 240 нм. Таким образом получали соединение 32 (первый элюируемый энантиомер) в виде твердого вещества

- 22 030908 грязно-белого цвета (0,017 г, 28%) и соединение 33 (второй элюируемый энантиомер) в виде твердого вещества грязно-белого цвета (0,014 г, 23%).

Аналитическая часть

LCMS

Масс-спектрометрические (LCMS) эксперименты для определения значений времени удерживания и связанных с массой ионов осуществляли с применением следующих способов.

Способ А. Эксперименты осуществляли на квадрупольном масс-спектрометре Waters ZMD, связанном с LC-системой Waters 1525 с детектором на диодной матрице. Спектрометр характеризуется источником электрораспыления, действующим в режиме положительной и отрицательной ионизации. Дополнительную детекцию обеспечивали применением испарительного детектора светорассеяния Sedex 85. LC осуществляли с применением колонки Luna, 3 микрона, 30x4,6 мм, С18, и при скорости потока 2 мл/мин. Исходная система растворителя представляла собой 95% воды, содержащей 0,1% муравьиной кислоты (растворитель А), и 5% MeCN, содержащего 0,1% муравьиной кислоты (растворитель В), в течение первой 0,5 мин с последующим градиентом до 5% растворителя А и 95% растворителя В на протяжении следующих 4 мин. Конечная система растворителя оставалась неизменной в течение еще 1 мин.

Способ В. Эксперименты осуществляли на квадрупольном спектрометре Waters VG Platform II, связанном с LC-системой Hewlett Packard 1050 с детектором на диодной матрице. Спектрометр характеризуется источником электрораспыления, действующим в режиме положительной и отрицательной ионизации. Дополнительную детекцию обеспечивали применением испарительного детектора светорассеяния Sedex 85. LC осуществляли с применением колонки Luna, 3 микрона, 30 x 4,6 мм, С18, и при скорости потока 2 мл/мин. Исходная система растворителя представляла собой 95% воды, содержащей 0,1% муравьиной кислоты (растворитель А), и 5% MeCN, содержащего 0,1% муравьиной кислоты (растворитель В), в течение первой 0,3 мин с последующим градиентом до 5% растворителя А и 95% растворителя В на протяжении следующих 4 мин. Конечная система растворителя оставалась неизменной в течение еще 1 мин.

Способ С. Эксперименты осуществляли на квадрупольном масс-спектрометре Waters Platform LC, связанном с LC-системой Hewlett Packard HP 1100 с детектором на диодной матрице. Спектрометр характеризуется источником электрораспыления, действующим в режиме положительной и отрицательной ионизации. Дополнительную детекцию обеспечивали применением испарительного детектора светорассеяния Sedex 85. LC осуществляли с применением колонки Phenomenex Luna, 3 микрона, 30 x 4,6 мм, С18, и при скорости потока 2 мл/мин. Исходная система растворителя представляла собой 95% воды, содержащей 0,1% муравьиной кислоты (растворитель А), и 5% MeCN, содержащего 0,1% муравьиной кислоты (растворитель В), в течение первой 0,5 мин с последующим градиентом до 5% растворителя А и 95% растворителя В на протяжении следующих 4 мин. Конечная система растворителя оставалась неизменной в течение еще 1 мин.

Способ D. Эксперименты осуществляли на квадрупольном масс-спектрометре Waters ZQ, связанном с LC-системой Hewlett Packard HP 1100 с насосом для четырехкомпонентных смесей и PDAдетектором. Спектрометр характеризуется источником электрораспыления, действующим в режиме положительной и отрицательной ионизации. Дополнительную детекцию обеспечивали применением испарительного детектора светорассеяния Sedex 65. LC осуществляли с применением колонки Phenomenex Luna, 3 микрона, 30 x 4,6 мм, С18, и при скорости потока 2 мл/мин. Исходная система растворителя представляла собой 95% воды, содержащей 0,1% муравьиной кислоты (растворитель А), и 5% MeCN, содержащего 0,1% муравьиной кислоты (растворитель В), в течение первой 0,3 мин с последующим градиентом до 5% растворителя А и 95% растворителя В на протяжении следующих 4 мин. Конечная система растворителя оставалась неизменной в течение еще 1 мин.

Способ Е. Эксперименты осуществляли на квадрупольном масс-спектрометре Waters Micromass ZQ2000, связанном с UPLC-системой Waters Acquity с PDЛ-UV-детектором. Спектрометр характеризуется источником электрораспыления, действующим в режиме положительной и отрицательной ионизации. LC осуществляли с применением колонки Acquity БЕ^ 1,7 микрона, С18, колонки Acquity BEH Shield 1,7 микрона, RP18 или колонки Acquity HST, 1,8 микрона. Каждая колонка характеризовалась размерами 100 x 2,1 мм и эксплуатировалась при 40^оС со скоростью потока 0,4 мл/мин. Исходная система растворителя представляла собой 95% воды, содержащей 0,1% муравьиной кислоты (растворитель А), и 5% MeCN, содержащего 0,1% муравьиной кислоты (растворитель В), в течение первой 0,4 мин с последующим градиентом до 5% растворителя А и 95% растворителя В на протяжении следующих 5,2 мин. Конечная система растворителя оставалась неизменной в течение еще 0,8 мин.

Данные ЯМР

ЯМР-эксперименты в соответствии с данным документом осуществляли с использованием спектрометра Varian Unity Inova со стандартными последовательностями импульсов, действующего при 400 МГц при температуре окружающей среды. Химические сдвиги (δ) указаны в частях на миллион (ppm) для слабопольного сдвига от тетраметилсилана (TMS), который применяли в качестве внутреннего стандарта. В качестве растворителя использовали CDCl₃ (дейтерированный хлороформ) или DMSO-d₆ (дейте

- 23 030908 рированный DMSO, диметил^₆-сульфоксид).

Значения содержания кислоты (например, муравьиной кислоты или уксусной кислоты) в соединениях, предусматриваемых в данном документе, являются значениями, которые получены экспериментальным путем и могут варьироваться при применении различных аналитических способов. Содержание муравьиной кислоты или уксусной кислоты, описанное в данном документе, определяли с помощью интеграции 'H ЯМР. Соединения с содержанием кислоты ниже 0,5 эквивалента могут считаться свободными основаниями.

Соединение 3 '11 ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 9,14 (d, J = 1,0 Гц, 1H), 8,58 (d, J = 0,9 Гц, 1H), 8,50 (d, J = 2,5 Гц, 1H), 8,26 (d, J = 3,8 Гц, 1H), 6,63 (s, 2H), 5,38-5,30 (m, 2H), 3,19-3,12 (m, 2Н), 2,75 (dd, J = 7,1, 10,6 Гц, 1H), 2,56-2,45 (m, 2H), 2,42-2,34 (m, 1H), 2,00-1,89 (m, 1H), 1,55 (s, 3H), 1,22-1,14 (m, 1H), 1,12 (d, J = 6,4 Гц, 3H), 1,09 (d, J = 6,3 Гц, 3H), 0,62-0,49 (m, 2H), 0,48-0,39 (m, 2H).

LCMS (Способ Е): R_t = 2,26 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 449.

Соединение 4 '11 ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm 8,96 (d, J = 1,0 Гц, 1H), 8,69 (d, J = 1,0 Гц, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 6,16 (s, 2Н), 5,32 (s, 1H), 5,05-4,96 (m, 1H), 4,19 (t, J = 5,4 Гц, 2Н), 3,59 (t, J = 4,6 Гц, 4Н), 2,79 (t, J= 5,4 Гц, 2Н), 2,49-2,44 (m, 4H), 1,59-1,54 (m, 9H), 1,22-1,14 (m, 1H), 0,62-0,49 (m, 2H), 0,48-0,36 (m, 2H).

LCMS (Способ Е): R_t = 2,05 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 491.

Соединение 5 '11 ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 9,05 (d, J = 1,0 Гц, 1H), 8,58 (d, J = 1,0 Гц, 1H), 8,50 (d, J = 2,2 Гц, 1H), 8,29 (d, J = 3,7 Гц, 1H), 6,66 (s, 2H), 5,41-5,32 (m, 2H), 3,82 (t, J = 7,7 Гц, 2Н), 3,56-3,51 (m, 2H), 2,79 (t, J = 7,2 Гц, 2Н), 2,45-2,31 (m, 2H), 1,55 (s, 3H), 1,22-1,14 (m, 1H), 0,60-0,50 (m, 2H), 0,45-0,38 (m, 2H).

LCMS (Способ Е): R_t = 2,61 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 489.

Соединение 6 '11 ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 9,13 (d, J = 0,9 Гц, 1H), 8,59 (d, J = 0,9 Гц, 1H), 8,48 (d, J = 2,5 Гц, 1H), 8,25 (d, J = 3,8 Гц, 1H), 6,63 (s, 2H), 5,41-5,35 (m, 1H), 5,34 (s, 1H), 3,20-3,10 (m, 2H), 2,64-2,52 (m, 2H), 2,48-2,39 (m, 2H), 2,25 (q, J = 8,7 Гц, 1H), 2,00-1,89 (m, 1H), 1,55 (s, 3H), 1,54-1,48 (m, 2H), 1,25-1,14 (m, 1H), 0,95 (t, J = 7,4 Гц, 3H), 0,60-0,50 (m, 2Н), 0,46-0,38 (m, 2H).

LCMS (Способ Е): R_t = 2,30 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 449.

Соединение 7 '11 ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 9,11 (d, J = 1,0 Гц, 1H), 8,58 (d, J = 1,0 Гц, 1H), 8,45 (d, J = 2,4 Гц, 1H), 8,26 (d, J = 3,8 Гц, 1H), 6,63 (s, 2H), 5,40-5,32 (m, 2H), 3,51 (t, J = 5,8 Гц, 2Н), 3,28 (s, 3H), 3,223,14 (m, 2H), 2,79-2,60 (m, 3H), 2,56-2,52 (m, 1H), 2,37 (q, J = 8,5 Гц, 1H), 1,99-1,88 (m, 1H), 1,55 (s, 3H), 1,22-1,14 (m, 1H), 0,60-0,50 (m, 2H), 0,46-0,39 (m, 2Н).

LCMS (Способ Е): R_t = 2,26 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 465.

Соединение 8 '11 ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 9,11 (d, J = 0,9 Гц, 1H), 8,59 (d, J = 1,0 Гц, 1H), 8.45 (d, J = 2,5 Гц, 1H), 8,26 (d, J = 3,8 Гц, 1H), 6,64 (s, 2H), 5,42-5,36 (m, 1H), 5,34 (s, 1H), 3,45-3,40 (m, 2H), 3,24 (s, 3H), 3,20-3,10 (m, 2H), 2,65-2,53 (m, 4H), 2,26 (q, J = 8,7 Гц, 1H), 2,01-1,89 (m, 1H), 1,79-1,67 (m, 2H), 1,55 (s, 3H), 1,22-1,14 (m, 1H), 0,60-0,50 (m, 2H), 0,46-0,39 (m, 2H).

LCMS (Способ Е): R_t = 2,32 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 479.

Соединение 9 '11 ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 9,02 (d, J = 1,1 Гц, 1H), 8,64 (d, J = 1,1 Гц, 1H), 8.46 (d, J = 2,3 Гц, 1H), 8,28 (d, J = 3,7 Гц, 1H), 6,68 (s, 2H), 5,50 (d, J = 4,4 Гц, 1H), 5,37-5,29 (m, 1H), 4,68-4,60 (m, 1H), 3,87 (t, J = 7,7 Гц, 2H), 3,63-3,57 (m, 2H), 2,13-2,07 (m, 1H), 1,44 (d, J = 6,6 Гц, 3H), 0,44-0,38 (m, 2H), 0,340,29 (m, 2H).

LCMS (Способ Е): R_t = 1,87 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 393.

Соединение 10 '11 ЯМР (400 МГц, DMSC-d₆) δ ppm: 8,57 (d, J = 2,4 Гц, 1H), 8,51 (s, 1H), 8,24 (d, J = 4,0 Гц, 1H), 6,61 (s, 2H), 5,52-5,48 (m, 1H), 5,31 (s, 1H), 3,25 (d, J = 10,9 Гц, 1H), 3,15 (dt, J = 2,8, 8,8 Гц, 1H), 2,89 (s, 3H), 2,65-2,53 (m, 3H), 2,48-2,44 (m, 1H), 2,25 (q, J = 8,7 Гц, 1H), 1,93-1,83 (m, 1H), 1,54 (s, 3H), 1,21-1,11 (m, 4H), 0,60-0,49 (m, 2H), 0,45-0,38 (m, 2H).

LCMS (Способ Е): R_t = 2,06 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 449.

Соединение 11 (муравьиная кислота, 0,8 эквивалента) '11 ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 9,12 (d, J = 1,0 Гц, 1H), 8,59 (d, J = 1,0 Гц, 1H), 8,46 (d, J = 2,5 Гц, 1H), 8,26 (d, J = 3,8 Гц, 1H), 8,16 (s, 0,8H), 6,63 (s, 2H), 5,40-5,32 (m, 2H), 3,19-3,10 (m, 2H), 2,65-2,52 (m, 3H), 2,48-2,41 (m, 1H), 2,25 (q, J = 8,7 Гц, 1H), 1,99-1,89 (m, 1H), 1,55 (s, 3H), 1,53-1,35 (m, 4H), 1,221,14 (m, 1H), 0,92 (t, J = 7,3 Гц, 3H), 0,60-0,50 (m, 2Н), 0,46-0,38 (m, 2H).

LCMS (Способ Е): R_t = 2,48 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 463.

- 24 030908

Соединение 12 'll ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ ppm: 8,81 (s, 1H), 8,69 (d, J = 0,9 Гц, 1H), 8,45 (s, 1H), 8,15 (d, J = 3,7 Гц, 1H), 5,02 (s, 2H), 4,71-4,62 (m, 1H), 3,12-3,07 (m, 1H), 2,78-2,71 (m, 1H), 2,56 (t, J = 9,4 Гц, 1H), 2,42-2,33 (m, 4H), 2,19-2,12 (m, 1H), 1,97-1,76 (m, 3H), 1,59-1,52 (m, 2Н), 0,93 (t, J = 7,4 Гц, 3H).

LCMS (Способ Е): R_t = 2,14 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 443.

Соединение 13 'll ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 12,62 (br. s, 1H), 8,35 (s, 1H), 8,26-8,24 (m, 2H), 6,59 (s, 2H),

5.31 (s, 1H), 2,66-2,58 (m, 1H), 1,53 (s, 3H), 1,21-1,13 (m, 1H), 1,13-1,00 (m, 4H), 0,60- 0,50 (m, 2H), 0,480,37 (m, 2H).

LCMS (Способ E): R_t = 2,71 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 378.

Соединение 14 'll ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 9,03 (d, J = 1,0 Гц, 1H), 8,62 (d, J = 1,0 Гц, 1H), 8.47 (d, J = 2,2 Гц, 1H), 8,29 (d, J = 3,6 Гц, 1H), 7,78 (d, J = 3,2 Гц, 1H), 7,69 (d, J = 3,3 Гц, 1H), 7,07 (br. s, 1H), 6,67 (s, 2H),

5,38-5,30 (m, 1H), 3,87 (t, J = 7,7 Гц, 2H), 3,62-3,57 (m, 2H), 2,13-2,07 (m, 1H), 1,94 (s, 3H), 0,44-0,38 (m, 2H), 0,34-0,28 (m, 2H).

LCMS (Способ E): R_t = 2,20 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 476.

Соединение 15 'll ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 9,04 (d, J = 1,0 Гц, 1H), 8,64 (d, J = 1,0 Гц, 1H), 8,47 (d, J = 2,2 Гц, 1H), 8,29 (d, J = 3,7 Гц, 1H), 6,74 (s, 1H), 6,67 (s, 2H), 5,39-5,31 (m, 1H), 3,88 (t, J = 7,6 Гц, 2Н), 3,633,58 (m, 2H), 2,63 (s, 3H), 2,13-2,07 (m, 1H), 1,89 (s, 3H), 0,45-0,38 (m, 2H), 0,34-0,29 (m, 2H).

LCMS (Способ Е): R_t = 2,13 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 475.

Соединение 16 'll ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 9,03 (d, J = 1,0 Гц, 1H), 8,63 (d, J = 1,0 Гц, 1H), 8,47 (d, J = 2,2 Гц, 1H), 8,29 (d, J = 3,7 Гц, 1H), 6,68 (s, 2H), 6,54 (br. s, 1H), 6,39 (d, J = 0,9 Гц, 1H), 5,38-5,30 (m, 1H), 3,903,85 (m, 2H), 3,63-3,57 (m, 2H), 2,42 (d, J = 0,8 Гц, 3H), 2,13-2,07 (m, 1H), 1,85 (s, 3H), 0,44-0,38 (m, 2H), 0,34-0,30 (m, 2H).

LCMS (Способ Е): R_t = 2,28 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 474.

Соединение 17 'll ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 9,00 (d, J = 0,9 Гц, 1H), 8,90 (d, J = 4,8 Гц, 2Н), 8,59 (d, J = 1,0 Гц, 1H), 8,45 (d, J = 2,2 Гц, 1H), 8,28 (d, J = 3,7 Гц, 1H), 7,51 (t, J = 4,8 Гц, 1H), 6,66 (s, 2H), 6,17 (s, 1H), 5,37-5,29 (m, 1H), 3,87 (t, J = 7,7 Гц, 2Н), 3,62-3,57 (m, 2H), 2,13-2,06 (m, 1H), 1,92 (s, 3H), 0,44-0,37 (m, 2H), 0,34-0,28 (m, 2H).

LCMS (Способ Е): R_t = 1,96 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 471.

Соединение 18 'll ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 12,48 (br. s, 1H), 8,80 (d, J = 1,1 Гц, 1H), 8,63 (d, J = 1,1 Гц, 1H),

8.31 (d, J = 2,7 Гц, 1H), 8,25 (d, J = 3,8 Гц, 1H), 6,63 (s, 2H), 6,52 (s, 1H), 6,39 (d, J = 0,9 Гц, 1H), 2,42 (d, J = 0,8 Гц, 3H), 1,85 (s, 3H).

LCMS (Способ Е): R_t = 2,42 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 379.

Соединение 19 'll ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 12,45 (br. s, 1H), 8,79 (d, J = 1,1 Гц, 1H), 8,62 (d, J = 1,0 Гц, 1H),

8,31 (d, J = 2,9 Гц, 1H), 8,25 (d, J = 3,8 Гц, 1H), 7,78 (d, J = 3,3 Гц, 1H), 7,69 (d, J = 3,3 Гц, 1H), 7,05 (s, 1H), 6,62 (s, 2H), 1,94 (s, 3H).

LCMS (Способ Е): R_t = 2,32 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 381.

Соединение 20 'll ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 12,41 (br. s, 1H), 8,78 (d, J = 1,1 Гц, 1H), 8,59 (d, J = 1,1 Гц, 1H), 8,30 (d, J = 2,8 Гц, 1H), 8,24 (d, J = 3,9 Гц, 1H), 6,62 (s, 2H), 5,32 (s, 1H), 1,99-1,92 (m, 4H), 1,81-1,68 (m, 4H).

LCMS (Способ E): R_t = 2,40 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 338.

Соединение 21 'll ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 9,01 (d, J = 0,9 Гц, 1H), 8,60 (d, J = 0,8 Гц, 1H), 8,45 (d, J = 2,2 Гц, 1H), 8,28 (d, J = 3,7 Гц, 1H), 6,67 (s, 2H), 5,36-5,30 (m, 2H), 3,87 (t, J = 7,6 Гц, 2Н), 3,63-3,57 (m, 2H), 2,14-2,06 (m, 1H), 1,99-1,94 (m, 4H), 1,79-1,68 (m, 4H), 0,45-0,38 (m, 2H), 0,34-0,30 (m, 2H).

LCMS (Способ Е): R_t = 2,26 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 433.

Соединение 22 'll ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 12,63 (br. s, 1H), 8,39 (s, 1H), 8,24 (d, J = 2,7 Гц, 2H), 6,60 (s, 2H), 5,30 (s, 1H), 2,66-2,59 (m, 1H), 1,97-1,91 (m, 4H), 1,79-1,67 (m, 4H), 1,13-1,08 (m, 2H), 1,07-1,00 (m, 2H).

LCMS (Способ Е): R_t = 2,72 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 378.

Соединение 23 'll ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 12,67 (br. s, 1H), 8,41 (s, 1H), 8,27-8,23 (m, 2H), 6,59 (s, 2H), 6,49 (s, 1H), 6,38 (d, J = 0,9 Гц, 1H), 2,67-2,59 (m, 1H), 2,41 (s, 3H), 1,84 (s, 3H), 1,13-1,07 (m, 2H), 1,07-1,00

- 25 030908 (m, 2H).

LCMS (Способ Е): R_t = 2,75 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 419.

Соединение 24 ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ ppm: 8,82 (d, J = 0,9 Гц, 1H), 8,69 (d, J = 0,9 Гц, 1H), 8,45 (s, 1H), 8,15 (d, J = 3,6 Гц, 1H), 5,04 (s, 2H), 4,71-4,62 (m, 1H), 3,14-3,07 (m, 1H), 2,77-2,71 (m, 1H), 2,58-2,53 (m, 1H), 2,47 (s, 1H), 2,42-2,33 (m, 3H), 2,19-2,10 (m, 1H), 1,97-1,74 (m, 3H), 1,59-1,51 (m, 2H), 0,94 (t, J = 7,4 Гц, 3H).

Соединение 25

Ή ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ ppm: 8,81 (d, J = 0,7 Гц, 1H), 8,69 (d, J = 1,0 Гц, 1H),

8.45 (s, 1H), 8,15 (d, J = 3,7 Гц, 1H), 5,02 (s, 2H), 4,71-4,62 (m, 1H), 3,12-3,09 (m, 1H), 2,77-2,71 (m, 1H), 2,60-2,54 (m, 1H), 2,42-2,33 (m, 4H), 2,19-2,10 (m, 1H), 1,97-1,76 (m, 3H), 1,56-1,50 (m, 2H), 0,94 (t, J = 7,4 Гц, 3H).

LCMS (Способ Е): R_t = 2,15 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 443.

Соединение 26

Ή ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 9,13 (d, J = 1,0 Гц, 1H), 8,59 (d, J = 1,0 Гц, 1H), 8,46 (d, J = 2,5 Гц, 1H), 8,26 (d, J = 3,8 Гц, 1H), 6,63 (s, 2H), 5,41-5,36 (m, 1H), 5,35 (s, 1H), 3,19-3,10 (m, 2H), 2,64-2,53 (m, 2H), 2,48-2,41 (m, 2H), 2,25 (q, J = 8,7 Гц, 1H), 1,99-1,89 (m, 1H), 1,55 (s, 3H), 1,53-1,36 (m, 4H), 1,22-1,14 (m, 1H), 0,92 (t, J = 7,3 Гц, 3H), 0,60-0,50 (m, 2Н), 0,46-0,38 (m, 2H).

LCMS (Способ Е): R_t = 2,46 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 463.

Соединение 27

Ή ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 9,12 (d, J = 0,9 Гц, 1H), 8,59 (d, J = 0,9 Гц, 1H), 8,46 (d, J = 2,5 Гц, 1H), 8,26 (d, J = 3,8 Гц, 1H), 6,63 (s, 2H), 5,39-5,36 (m, 1H), 5,34 (s, 1H), 3,20-3,10 (m, 2H), 2,64-2,53 (m, 2H), 2,48-2,41 (m, 2H), 2,25 (q, J = 8,8 Гц, 1H), 2,00-1,89 (m, 1H), 1,55 (s, 3H), 1,53-1,36 (m, 4H), 1,22-1,14 (m, 1H), 0,92 (t, J = 7,3 Гц, 3H), 0,60-0,50 (m, 2Н), 0,46-0,38 (m, 2H).

Соединение 28

Ή ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 9,03 (d, J = 1,1 Гц, 1H), 8,62 (d, J = 1,1 Гц, 1H), 8,47 (d, J = 2,2 Гц, 1H), 8,29 (d, J = 3,7 Гц, 1H), 7,78 (d, J = 3,2 Гц, 1H), 7,69 (d, J = 3,3 Гц, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,67 (s, 2H),

5,38-5,30 (m, 1H), 3,90-3,84 (m, 2H), 3,62-3,57 (m, 2H), 2,13-2,06 (m, 1H), 1,94 (s, 3H), 0,44-0,38 (m, 2H), 0,33-0,30 (m, 2H).

LCMS (Способ Е): R_t = 2,19 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 476.

Соединение 29

Ή ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 9,03 (d, J = 1,0 Гц, 1H), 8,62 (d, J = 1,0 Гц, 1H), 8,47 (d, J = 2,3 Гц, 1H), 8,28 (d, J = 3,7 Гц, 1H), 7,78 (d, J = 3,2 Гц, 1H), 7,69 (d, J = 3,3 Гц, 1H), 7,06 (s, 1H), 6,67 (s, 2H),

5,38-5,30 (m, 1H), 3,87 (t, J = 7,6 Гц, 2Н), 3,62-3,57 (m, 2H), 2,13-2,07 (m, 1H), 1,94 (s, 3H), 0,44-0,38 (m, 2H), 0,33-0,29 (m, 2H).

Соединение 30

Ή ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 12,42 (br. s, 1H), 8,79 (d, J = 1,1 Гц, 1H), 8,61 (d, J = 1,1 Гц, 1H),

8,31 (d, J = 2,7 Гц, 1H), 8,24 (d, J = 3,8 Гц, 1H), 7,78 (d, J = 3,2 Гц, 1H), 7,69 (d, J = 3,3 Гц, 1H), 7,04 (s, 1H), 6,61 (s, 2H), 1,94 (s, 3H).

Соединение 31

Ή ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 12,45 (br. s, 1H), 8,78 (d, J = 1,1 Гц, 1H), 8,61 (d, J = 1,0 Гц, 1H),

8,31 (d, J = 2,9 Гц, 1H), 8,23 (d, J = 3,8 Гц, 1H), 7,78 (d, J = 3,2 Гц, 1H), 7,69 (d, J = 3,2 Гц, 1H), 7,04 (s, 1H), 6,59 (s, 2H), 1,94 (s, 3H).

Соединение 32

Ή ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 12,43 (br. s, 1H), 8,79 (d, J = 1,1 Гц, 1H), 8,63 (d, J = 1,1 Гц, 1H),

8,31 (d, J = 2,7 Гц, 1H), 8,25 (d, J = 3,8 Гц, 1H), 6,62 (s, 2H), 6,51 (s, 1H), 6,39 (d, J = 0,9 Гц, 1H), 2,42 (d, J = 0,8 Гц, 3H), 1,85 (s, 3H).

Соединение 33

Ή ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ ppm: 12,33 (br. s, 1H), 8,80 (d, J = 1,1 Гц, 1H), 8,63 (d, J = 1,1 Гц, 1H),

8,31 (d, J = 2,7 Гц, 1H), 8,25 (d, J = 3,8 Гц, 1H), 6,62 (s, 2H), 6,51 (s, 1H), 6,39 (d, J = 0,9 Гц, 1H), 2,42 (d, J = 0,7 Гц, 3H), 1,85 (s, 3H).

LCMS (Способ Е): R_t = 2,41 мин, масса/заряд [М+Н]⁺ = 379.

Фармакологическая часть

Биологический анализ А

Ингибирование аутофосфорилирования, влияющего на активность рекомбинантной NF-кВиндуцирующей киназы человека (NIK/MAP3K14) (AlphaScreen®)

- 26 030908

Активность аутофосфорилирования NIK/MAP3K14 измеряли с использованием формата AlphaScreen® (аскрин) (Perkin Elmer). Все тестируемые соединения растворяли в диметилсульфоксиде (DMSO) и дополнительные разбавления выполняли в аналитическом буфере. Конечная концентрация DMSO в анализах составляла 1% (об./об.). Аналитический буфер представлял собой 50 мМ Tris с рН 7,5, содержащий 1 мМ EGTA (этиленгликольтетрауксусная кислота), 1 мМ DTT (дитиотреитол), 0,1 мМ Na₃VO₄, 5 мМ MgCl₂, 0,01% Tween® 20. Анализы осуществляли в 384-луночных Alphaplates (Perkin Elmer). Инкубирования состояли из соединения, 25 мкМ аденозин-5'-трифосфата (АТР) и 0,2 нМ NIK/MAP3K14. Инкубирования инициировали посредством добавления GST-меченного фермента NIK/MAP3K14, осуществляли в течение 1 ч. при 25°С и завершали посредством добавления стоп-буфера, содержащего антитело к фосфо-IKK Ser176/180. Гранулы с акцептором белка А и донором глутатиона добавляли перед считыванием с применением мультиметочного ридера для планшетов EnVision® (Perkin Elmer). Сигнал, полученный в лунках, содержащих холостые образцы, вычитали из всех других лунок и IC50 определяли с помощью аппроксимации сигмоидальной кривой к % ингибирования контроля в зависимости от Log10 концентрации соединения.

Биологический анализ В

Влияние соединений на уровни Р-IKKa в L363-клетках

Все тестируемые соединения растворяли в DMSO и дополнительные разбавления выполняли в культуральной среде. Конечная концентрация DMSO в клеточных анализах составляла 1% (об./об.). Клетки человека L363 (АТСС) культивировали в среде RPMI 1640, дополненной GlutaMax и 10% фетальной телячьей сывороткой (РАА). Клетки по стандартной методике выдерживали при плотностях 0,2x106 клеток на мл - 1x106 клеток на мл при 37°С в увлажненной атмосфере 5% СО₂. Клетки пассировали два раза в неделю с разделением для получения низкой плотности. Клетки высеивали в 96-луночные планшеты (Nunc 167008) при плотности 2x106 на мл среды в объеме 75 мкл на лунку с добавлением 25 мкл 1 мкг/мл рекомбинантного фактора активации В-клеток (БAFF/БLyS/TNFSF13Б) человека. Посеянные клетки инкубировали при 37°С в увлажненной атмосфере 5% СО₂ в течение 24 ч. Добавляли лекарственные средства и/или растворители (20 мкл) до конечного объема 120 мкл. В дальнейшем после 2 ч обработки планшеты извлекали из инкубатора и обеспечивали лизис клеток посредством добавления 30 мкл 5x буфера для лизиса с последующим встряхиванием на планшетном шейкере при 4°С в течение 10 мин. В конце данного инкубирования лизированные клетки центрифугировали при 800 x g в течение 20 мин. при 4°С и оценивали уровни Р-IKKa в лизате с помощью иммуноанализа сэндвич-типа, осуществляемого в планшетах Mesoscale, покрытых кроличьим антителом. В рамках эксперимента результаты каждой обработки были средним 2-х дублирующих лунок. Для исходных целей скрининга соединения тестировали с использованием 8-точечной кривой разбавления (серийные разбавления 1:3). Для каждого эксперимента контроли (включающие MG132 и БAFF, но не содержащие тестируемое лекарственное средство) и холостое инкубирование (включающее MG132 и БΛFF и 10 мкМ ADS125117, тестируемая концентрация, которая, как известно, обеспечивает полное ингибирование) проводили параллельно. Значение холостого инкубирования вычитали из всех значений контролей и образцов. Для определения IC50 аппроксимировали сигмоидальную кривую на графике зависимости % ингибирования уровней Р-IKKa контроля от Log10 концентрации соединения.

Биологический анализ С

Определение антипролиферативной активности клеток LP-1, L-363 и JJN-3

Все тестируемые соединения растворяли в DMSO и дополнительные разбавления выполняли в культуральной среде. Конечная концентрация DMSO при анализе пролиферации клеток составляла 0,3% (об./об.). Жизнеспособность оценивали с использованием набора для анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Glo (Promega). Клетки человека LP-1, L-363 и JJN-3 (DSMZ) культивировали в среде RPMI 1640, дополненной 2 мМ L-глутамина и 10% фетальной телячьей сывороткой (РАА). Клетки по стандартной методике сохраняли в виде суспензии клеток при 37°С в увлажненной атмосфере 5% СО₂. Клетки пассировали при плотности посева 0,2x10⁶/^ два раза в неделю. Клетки высеивали в обработанных тканевой культурой черных 96-луночных планшетах (Perkin Elmer). Плотности, применяемые для посева, находились в диапазоне от 2000 до 6000 клеток на лунку в общем объеме среды 75 мкл. Через двадцать четыре часа добавляли лекарственные средства и/или растворители (25 мкл) до конечного объема 100 мкл. В дальнейшем после 72 ч обработки планшеты извлекали из инкубатора и обеспечивали установление комнатной температуры в течение примерно 10 мин. Добавляли 100 мкл реагента CellTiter-Glo в каждую лунку, которую затем закрывали (Perkin Elmer Topseal) и встряхивали на планшетном шейкере в течение 10 мин. Люминесценцию измеряли на HTS Topcount (Perkin Elmer). В рамках эксперимента результаты каждой обработки были средним 2-х дублирующих лунок. Для исходных целей скрининга соединения тестировали с использованием 9-точечной кривой разбавления (серийные разбавления 1:3). Для каждого эксперимента контроли (не включающие лекарственное средство) и холостое инкубирование (включающее клетки считывали во время добавления соединения) проводили параллельно. Холостое значение вычитали из всех значений контролей и образцов. Для каждого образца среднее значение роста клеток (в относительных световых единицах) выражали как процент среднего значения роста клеток

- 27 030908 контроля.

Данные для соединений по настоящему изобретению в вышеупомянутых анализах приведены в табл. 9 (значения в табл. 9 представляют собой средние значения в течение всех измерений для всех партий соединения).

Соединение	Alpha-Screen IC50 (нМ)	ΙΚΚα клеточная 1С₅₀ (нМ)	JJN-3 ЕС₅о (нМ)	L-363 ЕС₅₀ (нМ)	LP-1 ЕС₅₀ (нМ)
1	95	п.с.	8	4	19
2	7	п.с.	7	5	39
3	155	п.с.	133	56	147
4	150	п.с.	208	152	1188
5	74	п.с.	227	175	377
6	29	п.с.	62	31	69
7	26	п.с.	222	144	320
8	30	п.с.	119	80	158
9	69	п.с.	55	37	131
10	58	п.с.	22	10	20
11	21	п.с.	62	40	52
12	56	п.с.	38	42	76
13	29	п.с.	7	4	15
14	16	п.с.	631	1223	3975
15	144	п.с.	3220	2722	14431
16	34	п.с.	951	811	1797
17	189	п.с.	6724	8256	29005
18	10	п.с.	1192	1087	5026
19	3	п.с.	1014	1271	7620
20	2	п.с.	152	126	1124
21	95	п.с.	464	408	1004
22	37	п.с.	37	24	110
23	67	п.с.	442	368	1284
24	90	п.с.	135	118	219
25	82	п.с.	102	66	163
26	18	п.с.	101	63	114
27	26	п.с.	92	53	100
28	16	п.с.	408	402	4263
29	735	п.с.	1930	3082	3533
30	20	п.с.	2077	4760	11593
31	2	п.с.	634	1214	5739
32	379	п.с.	4345	5502	19632
33	3	п.с.	593	472	4118

Таблица 9

Примеры возможных композиций

Применяемый во всех данных примерах активный ингредиент (а. и.) относится к соединению группы А, в том числе любой его таутомерной или стереоизомерной форме, или его фармацевтически приемлемой соли присоединения или сольвату; в частности, к любому из приведенных в качестве примера соединений.

Типичными примерами рецептов для состава по настоящему изобретению являются следующие.

- 28 030908

1. Таблетки

Активный ингредиент	5-50 мг
Фосфат дикальция	20 мг
Лактоза	30 мг
Тальк	10 мг
Стеарат магния	5 мг
Картофельный крахмал	до 200 мг

2. Суспензия

Водную суспензию получают для перорального введения таким образом, чтобы каждый миллилитр содержал от 1 до 5 мг активного ингредиента, 50 мг карбоксиметилцеллюлозы натрия, 1 мг бензоата натрия, 500 мг сорбита и воды до 1 мл.

3. Форма для инъекций

Парентеральную композицию получают путем перемешивания 1,5% (вес./об.) активного ингредиента в 0,9% растворе NaCl или в 10 об.% растворе пропиленгликоля в воде.

4. Мазь

Активный ингредиент от 5 до 1000 мг

Стеариловый спирт 3 г

Ланолин 5 г

Белый вазелин 15 г

Вода до 100 г

В данном примере активный ингредиент можно заменить таким же количеством любого из соединений в соответствии с настоящим изобретением, в частности таким же количеством любых из приведенных в качестве примера соединений.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение, выбранное из

nV. Н ОН ___// у—N _oh rvP^X H₂nX H,A А A rvF .-. E ^0H /^-N\ E OH ^// у—N N-F _//Ίι^ f H₂nA H₂N^V Η₂νΑ^ А A Е ОН у—N d / OH__// y—N ОН _7/ у— N η₂νΑ C^N fj h₂nAe А Ν-\ Η ОН__// у—N ^0H _он rv-Ε Ср Ар CC nXp =\ г _NJCp η₂νΧγ γ A^f N-Х Н ОН П у—N OH^JX- N d N--\ / 'PE ОН__// у—N ____// ii 1 cr^N νΛ/ </R или S L ϋ Η₂Ν N H₂N N A j H₂N N ^Ν Η ОН _// у—N p^N-Ж / OH__// γ—N .-.Р^ ОН __7/ у^- N или SJ^_ рИили SjC f или _F H₂nA H₂3 _ΗΝχτ ОН —4 Ч OH__//4— N _ р^ N-^s. / ОН __// у— N yjRили SjC f -yjR или SjC f или sY _F χΥ h₂n^n h₂n^n η₂ν^^ν^χ

- 29 030908

Р^ ОН______Л Vn R^или S ςζ/ R или S R или S η,νΑ/ -yPv H₂nA »-vP^ SmhR R или S н_гА' ^RhjihS h₂n^n ^S™^R Н_г/М ΝΎ. Η ОН _7/ у— N /^S Н Rили S Т _с ^v о H₂N^N^ A OH __// y—N PAR или Sj² _PA^{s N} |Г Η,Ν^Ρ _OH N jAR]или S _F ° £T h₂n^A N—Н ОН ^// X— N /^S S или R | ν _Νγ^ρ A у/ S или R О H ^y/^X— N /Г~/ S или R T °'^N o^F ОН ^// у— N η₂ν'Ό^ OH // p— N \ R или S .Pl s^hr h₂YJ

а также его фармацевтически приемлемые соли присоединения.

2. Фармацевтическая композиция для ингибирования NF-KB-индуцирующей киназы (NIK), содержащая соединение по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

3. Применение соединения по п.1 в качестве лекарственного препарата для ингибирования NIK.

4. Применение соединения по п. 1 для предупреждения или лечения рака.

5. Применение фармацевтической композиции по п.2 для предупреждения или лечения рака.

6. Способ лечения или предупреждения заболевания, обусловленного пролиферацией клеток, у теплокровного животного, который включает введение указанному животному эффективного количества соединения по п.1.