EA030138B1

EA030138B1 - Фармацевтические композиции, включающие антикоагулянт n-(5-хлорпиридин-2-ил)-2-({4-[этанимидоил(метил)амино]бензоил}амино)-5-метилбензамид

Info

Publication number: EA030138B1
Application number: EA201600486A
Authority: EA
Inventors: Дмитрий Геннадьевич ТОВБИН; Дмитрий Николаевич ТАРАСОВ; Дмитрий Викторович МАЛАХОВ
Original assignee: Общество С Ограниченной Ответственностью "Фармадиол"
Priority date: 2016-06-15
Filing date: 2016-06-15
Publication date: 2018-06-29
Also published as: EA201600486A1; WO2017217895A1

Abstract

Изобретение относится к области медицины, в частности к фармакологии, а именно к новым фармацевтическим композициям для перорального применения при лечении заболеваний, связанных с повышенным тромбообразованием. Композиции содержат антикоагулянт N-(5-хлорпиридин-2-ил)-2-({4-[этанимидоил(метил)амино]бензоил}амино)-5-метилбензамид или его фармацевтически приемлемую соль, являющийся ингибитором фактора Ха, и полипренол, и защищены кишечно-растворимой оболочкой или капсулой от разрушения желудочным соком. Композиции обладают высокой эффективностью и биодоступностью и могут быть использованы для лечения и профилактики состояний, характеризующихся нежелательным тромбозом.

Description

Изобретение относится к области медицины, в частности к фармакологии, а именно к новым фармацевтическим композициям для перорального применения при лечении заболеваний, связанных с повышенным тромбообразованием. Композиции содержат антикоагулянт N-(5хлорпиридин-2-ил)-2-({4-[этанимидоил(метил)амино]бензоил}амино)-5-метилбензамид или его фармацевтически приемлемую соль, являющийся ингибитором фактора Ха, и полипренол, и защищены кишечно-растворимой оболочкой или капсулой от разрушения желудочным соком. Композиции обладают высокой эффективностью и биодоступностью и могут быть использованы для лечения и профилактики состояний, характеризующихся нежелательным тромбозом.

030138 Β1

Область техники

Изобретение относится к области медицины, в частности к фармакологии, и касается профилактики и печения заболеваний, связанных с повышенным тромбообразованием у человека или других млекопитающих с помощью перорального лекарственного средства, обладающего высокой эффективностью и биодоступностью.

Уровень техники

Тромбоэмболические заболевания являются одной из основных причин смерти в развитых странах. Под тромбозом понимают образование тромба (сгустка) в просвете кровеносного сосуда. Тромб может формироваться как в венах, так и в артериях; чаще всего тромбы локализуются в венах, особенно в венах нижних конечностей. Следствием тромбоза коронарных артерий является недостаточность кровоснабжения одного из сегментов сердца, которая может стать причиной развития острого инфаркта миокарда. В части случаев тромб отрывается и свободно перемещается по кровеносному руслу, что может привести к острой закупорке кровеносного сосуда тромбом (тромбоэмболии) с последующим нарушением местного кровоснабжения. Особенно опасна тромбоэмболия крупных ветвей легочной артерии - распространенная причина внезапной смерти. Закупорка сосудов головного мозга является причиной ишемических инсультов. Согласно статистике всемирной организации здравоохранения, ежегодно от заболеваний сердечно-сосудистый системы умирает 17 миллионов человек.

Антикоагулянты - это лекарственные средства, используемые для лечения и профилактики тромбоэмболических заболеваний, в частности при инфарктах миокарда и лёгких, тромботических и эмболических инсультах, тромбофлебитах. Профилактически антикоагулянты применяют при атеросклерозе коронарных артерий, сосудов мозга, ревматических митральных пороках сердца. В хирургии антикоагулянты применяют для предупреждения образования тромбов во время операций, в послеоперационном периоде.

По механизму действия различают несколько групп антикоагулянтов: антагонисты витамина К, гепарины, прямые ингибиторы тромбина и прямые ингибиторы фактора Ха [1].

Антагонисты витамина К, среди которых наиболее известен варфарин, более удобны в использовании, поскольку их применяют перорально (в виде таблеток), по сравнению с гепаринами, которые используют в виде инъекций. Однако антагонисты витамина К обладают очень узким спектром дозирования, взаимодействуют с многими лекарственными субстанциями и пищевыми продуктами и требуют постоянного контроля свертываемости крови, что накладывает ряд ограничений при их применении.

Современные антикоагулянты должны отвечать требованиям высокой эффективности по предотвращению свертываемости крови, низкой токсичности и низкому уровню возникновения побочных эффектов, в основном низкому риску спонтанных кровотечений.

Последнее требование представляет серьезное препятствие, поскольку обратной стороной предотвращения свертываемости является увеличение риска кровотечений. Данная проблема может быть решена:

а) применением молекул, обладающих высоким сродством и избирательностью к белкам, участвующим в каскаде свертывания крови, что, в свою очередь, позволило бы снизить используемую концентрацию активного вещества и, соответственно, риск кровотечений;

б) созданием лекарственной формы, которая обладает свойствами поддержания одной концентрации активного вещества на протяжении как можно более длительного периода времени.

Применение в терапии прямых ингибиторов фактора свертывания крови Ха обладает рядом преимуществ, связанных с тем, что фактор Ха вовлечен только в процесс свертывания крови, и его ингибирование вызывает наименьшее количество побочных эффектов, что позволяет их отнести к перспективным современным антикоагулянтам.

Большинство лекарственных средств доходит до потребителя в готовом к употреблению виде или в виде так называемого лекарственного препарата. Под готовым лекарственным средством подразумевается комплекс, состоящий из самого лекарственного средства и вспомогательных веществ в виде определенной формы или агрегатного состояния. Очень часто лекарственная форма определяет не только удобство применения лекарственного средства, но также и другие характеристики эффективности лекарственного средства, такие как биодоступность, время действия и т.д.

В патенте ЕА015918 описан новый класс соединений антикоагулянтов, в том числе соединение N (5-хлорпиридин-2-ил)-2-({4-[этанимидоил(метил)амино]бензоил}амино)-5-метилбензамид, проявившее себя как эффективный ингибитор фактора свёртывания крови Ха. Однако соединение Ы-(5-хлорпиридин2-ил)-2-({4-[этанимидоил(метил)амино]бензоил}амино)-5-метилбензамид обладает низкой биодоступностью, что не позволяет применять его в клинической практике для лечения заболеваний, связанных с повышенным тромбообразованием у человека и других млекопитающих. В связи с этим была поставлена задача разработать лекарственную форму данного соединения, пригодную для перорального введения и обеспечивающую высокую биодоступность и эффективную для применения в клинической практике.

Раскрытие изобретения

Задачей данного изобретения является разработка фармацевтической композиции, содержащей антикоагулянт в качестве активного соединения, для применения такой композиции перорально для про- 1 030138 филактики и/или лечения состояний, связанных с нарушением свертываемости крови у человека и других млекопитающих.

Техническим результатом данного изобретения является разработка и получение фармацевтической композиции, содержащей антикоагулянт в качестве активного соединения и обладающей высокой эффективностью и биодоступностью, для применения такой композиции перорально для профилактики и/или лечения состояний, связанных с нарушением свертываемости крови у человека и других млекопитающих, в частности, для профилактики и/или лечения состояний человека или другого млекопитающего, характеризующегося нежелательным тромбозом.

Указанный технический результат достигается посредством разработки и получения фармацевтических композиций в форме, пригодной для перорального введения, включающих эффективное количество Ы-(5-хлорпиридин-2-ил)-2-({4-[этанимидоил(метил)амино]бензоил}амино)-5-метилбензамида или его фармацевтически приемлемой соли и полипренол.

В некоторых вариантах воплощения изобретения фармацевтически приемлемая соль соединения Ν(5-хлорпиридин-2-ил)-2-({4-[этанимидоил(метил)амино]бензоил}амино)-5-метилбензамида представляет собой гидрохлорид.

В некоторых вариантах воплощения изобретения фармацевтические композиции выполнены в виде твердой лекарственной формы, покрытой кишечно-растворимой оболочкой или кишечно-растворимой капсулой.

Еще в одних вариантах изобретения фармацевтические композиции выполнены в виде таблеток, покрытых кишечно-растворимой оболочкой. В части вариантов воплощения изобретения кишечнорастворимой оболочкой является пленочное покрытие для таблеток. В наиболее предпочтительных вариантах воплощения изобретения пленочное покрытие для таблеток представляет собой пленочное покрытие на основе сополимера метакриловой кислоты. В частных вариантах воплощения изобретения пленочное покрытие представляет собой пленочное покрытие для таблеток на основе сополимера метакриловой кислоты Ациапиз™ Соп1го1 ΕΝΑ.

В некоторых вариантах воплощения изобретения полипренол содержит от 4 до 40 изопреновых единиц.

В части вариантов воплощения изобретения фармацевтические композиции содержат, по меньшей мере, одно дополнительное фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

В некоторых вариантах воплощения изобретения фармацевтические композиции характеризуются тем, что содержат в качестве вспомогательных веществ Ρτοδοίν® 8МСС 90 и/или магния стеарат.

Кроме того, изобретением предусматриваются фармацевтические композиции со следующим составом и соотношением компонентов, мас.%:

Ы-(5-хлорпиридин-2-ил)-2-({4[этанимидоил(метил)амино]бензоил}амино)5-метилбензамида гидрохлорид	1-80,
полипренол	1-80,
кишечнорастворимая оболочка	1-50,
ΡΓΟδοΙν® 5МСС 90	0- 90,
магния стеарат	0-50.

Кроме того, изобретение предусматривает применение фармацевтических композиций по изобретению для профилактики и/или лечения состояния млекопитающего, характеризующегося нежелательным тромбозом.

В некоторых частных вариантах воплощения изобретения фармацевтические композиции по изобретению предназначены для профилактики и/или лечения острого коронарного синдрома, инфаркта миокарда, нестабильной стенокардии, рефрактерной стенокардии, тромбоза, вызванного посттромболитической терапией или коронарной ангиопластикой, острого ишемического цереброваскулярного синдрома, эмболического инсульта, тромботического инсульта, преходящих ишемических приступов, венозного тромбоза, глубокого венозного тромбоза, легочный эмболии, коагулопатии, диссеминированного внутрисосудистого свёртывания, тромбоцитопенического акроангиотромбоза, облитерирующего тромбангиита, тромбозных заболеваний, связанных с гепариноиндуцированной тромбоцитопенией, тромбических осложнений, связанных с искусственным кровообращением, тромбических осложнений, связанных с протезными устройствами.

В наиболее предпочтительных вариантах воплощения изобретения фармацевтические композиции по изобретению применяются для предотвращения и/или лечения состояния человека.

Изобретение также относится к способу лечения и/или профилактики состояния млекопитающего, характеризующегося нежелательным тромбозом, включающему введение фармацевтической композиции, являющейся предметом изобретения.

Изобретение также включает получение фармацевтических композиций по изобретению.

- 2 030138

Подробное описание изобретения

Соединение Ы-(5-хлорпиридин-2-ил)-2-({4-[этанимидоил(метил)амино]бензоил}амино)-5-метилбензамид является эффективным ингибитором фактора Ха (патент ЕА015918). В то же время, в результате проведенных экспериментов на животных (эксперименты проводились на крысах) было установлено, что соединение Х-(5-хлорпиридин-2-ил)-2-({4-[этанимидоил(метил)амино]бензоил}амино)-5-метилбензамид обладает низкой биологической доступностью («15%), что не позволяет его применять в качестве перорального лекарственного средства в клинической практике для профилактики и лечения заболеваний, связанных с нарушением свертываемости крови у человека и других млекопитающих.

Для устранения вышеизложенной проблемы, как это описано в настоящем изобретении, разработаны фармацевтические композиции для перорального применения, содержащие соединение N-(5хлорпиридин-2-ил)-2-({4-[этанимидоил(метил)амино]бензоил}амино)-5-метилбензамид или его фармацевтически приемлемую соль и полипренол, защищенные кишечно-растворимой оболочкой или капсулой от разрушения желудочным соком.

В ходе исследований было неожиданно обнаружено, что фармацевтические композиции по изобретению, содержащие ^(5-хлорпиридин-2-ил)-2-({4-[этанимидоил(метил)амино]бензоил}амино)-5-метилбензамид или его фармацевтически приемлемую соль и полипренол, защищенные (покрытые) кишечнорастворимой оболочкой или капсулой от разрушения желудочным соком, эффективнее проявляют антикоагулянтные свойства, чем соединение ^(5-хлорпиридин-2-ил)-2-({4-[этанимидоил(метил)амино]бензоил}амино)-5-метилбензамид или его фармацевтически приемлемая соль само по себе.

Таким образом, применение фармацевтической композиции по изобретению позволит существенно повысить эффективность антикоагулянта ^(5-хлорпиридин-2-ил)-2-({4-[этанимидоил(метил)амино] бензоил}амино)-5-метилбензамида при его пероральном применении, а также позволит снизить дозу указанного соединения, что, в свою очередь, сможет привести к снижению частоты возникновения побочных эффектов и экономии ресурсов.

Описание рисунков

На чертеже показано влияние соединения №1, ГЛФ №1 и ГЛФ №2 при интрагастральном введении крысам на показания ПВ, МНО. Количество животных для каждой точки п=8-16.

Термины и определения

Как используется в настоящем документе, термин соединение №1 относится к ^(5-хлорпиридин2-ил)-2-({4-[этанимидоил(метил)амино]бензоил}амино)-5-метилбензамида гидрохлориду.

Под полипренолом в данном изобретении понимается - класс химических соединений - полиненасыщенные алифатические разветвленные спирты регулярного строения, содержащиеся в природном сырье растительного происхождения, в частности в хвое лиственницы, обычно в виде смеси изопренолов брутто-формулы Н(С₅Н₈)_пОН, где п, чаще всего, составляет от 4 до 40. Структурная формула полипренолов:

где п означает количество изопреновых единиц. Полипренолы и их 2,3-дигидропроизводные - долихолы обнаружены в различных органах растительных и животных организмов [4].

Вспомогательное вещество Ρτοδοίν® 8МСС 90 -силицилированная микрокристаллическая целлюлоза.

Термин пациент охватывает все виды млекопитающих, предпочтительно человека.

Термины лечение, терапия охватывают лечение патологических состояний у млекопитающих, предпочтительно у человека, и включают: а) блокирование (приостановку) течения заболевания, б) облегчение тяжести заболевания, т.е. индукцию регрессии заболевания.

Термин профилактика, предотвращение охватывает устранение факторов риска, а также профилактическое лечение субклинических стадий заболевания у млекопитающих, предпочтительно у человека, направленное на уменьшение вероятности возникновения клинических стадий заболевания. Пациенты для профилактической терапии отбираются на основе факторов, которые, на основании известных данных, влекут увеличение риска возникновения клинических стадий заболевания по сравнению с общим населением. К профилактической терапии относится а) первичная профилактика и б) вторичная профилактика. Первичная профилактика определяется как профилактическое лечение у пациентов, клиническая стадия заболевания у которых ещё не наступила. Вторичная профилактика - это предотвращение повторного наступления того же или близкого клинического состояния заболевания.

Термин терапевтически эффективное количество подразумевает такое количество соединения, которое является необходимым для введения пациенту для предотвращения и/или лечения состояния, связанного с повышенным тромбообразованием. Точное требуемое количество может меняться от субъекта к субъекту в зависимости от вида млекопитающего, возраста и общего состояния пациента, тяжести заболевания, методики введения препарата, комбинированного лечения с другими препаратами и т.п. Терапевтически эффективное количество соединения, являющегося активным компонентом фармацев- 3 030138 тических композиций по изобретению, вводимое разово или в виде нескольких отдельных доз, как правило, лежит в диапазоне от 0,01 до 500 мг/кг, предпочтительно от 0,1 до 125 мг/кг, еще более предпочтительно, от 1 до 100 мг/кг, но не ограничивается ими. Обычно соединение вводится пациенту, нуждающемуся в таком лечении, в дневной дозировке ориентировочно от 50 до 2000 мг на пациента. Введение может осуществляться как разово, так и несколько раз в день, неделю (или любой другой временной интервал), или время от времени. Кроме того, соединение может вводиться в организм пациента ежедневно в течение определенного периода дней (например, 2-10 дней), а затем следует период без приема вещества (например, 1-30 дней) или ежедневно до конца жизни пациента.

В том случае, когда композиции данного изобретения используются как часть режима комбинированной терапии, доза каждого из компонентов комбинированной терапии вводится в течение требуемого периода лечения. Соединения, составляющие комбинированную терапию, могут вводиться в организм пациента как единовременно, в виде дозировки, содержащей все компоненты, так и в виде индивидуальных дозировок компонентов.

Под лекарственной формой в данном документе понимается состояние лекарственного препарата, соответствующее способам его введения и применения и обеспечивающее достижение необходимого лечебного эффекта.

Термин тромбоз означает формирование или наличие тромба; внутрисосудистое свертывание, которое может вызвать ишемию или инфаркт тканей, снабжаемых сосудом.

Термин эмболия означает внезапное блокирование кровеносного или лимфатического сосуда сгустком или другой инородной частицей, которая была принесена к месту блокировки кровотоком (лимфой). Термин тромбоэмболия означает закупорку кровеносного сосуда тромботическим материалом, принесенным из места происхождения в другой кровеносный сосуд.

Под состоянием млекопитающего, характеризующимся нежелательным тромбозом, в данном документе подразумеваются заболевания, этиология или патогенез которых связаны с тромбообразованием, такие как, например, тромбоз и тромбоэмболия.

Получение соединения Х-(5-хлорпиридин-2-ил)-2-({4-[этанимидоил(метил)амино]бензоил}амино)5-метилбензамид

Реакция 1. Получение Ы-(5-хлорпиридин-2-ил)-5-метил-2-нитробензамида.

0,8 г 5-метил-2-нитробензойной кислоты кипятится в 20 мл ЗОС1₂ с обратным холодильником с хлоркальциевой трубкой в течение 4 ч, после чего полученный раствор охлаждается, упаривается на роторном испарителе, дважды переупаривается с безводным ТГФ, остаток растворяется в 10 мл ТГФ, полученный раствор в течение 30 мин по каплям прибавляется к перемешиваемому раствору 1.5 г 2-амино5-хлорпиридина в 20 мл ТГФ. Через 5 ч реакционная смесь упаривается, остаток растворяется в 30 мл хлороформа, промывается насыщенным водным раствором ЫаНСОз, хлороформенный экстракт упаривается, остаток наносится на колонку 40x150 мм, наполненную 30-50 мкм силикагелем. Продукт элюируется хлороформом. Детектирование осуществляется с помощью УФ-ячейки, на длине волны 280 нм. Поглощающие УФ излучение фракции собираются, чистота продукта контролируется методом тонкослойной хроматографии в хлороформе. Выход составляет 650 мг Ы-(5-хлорпиридин-2-ил)-5-метил-2нитробензамида. КГ продукта составляет 0.45, КГ исходного 2-амино-5-хлорпиридина составляет 0.7. Масс-спектр (МАЛДИ-ВП): М+Н 292, Μ+Να 314.

Реакция 2. Получение 2-амино-^(5-хлорпиридин-2-ил)-5-метилбензамида.

0,6 г ^(5-хлорпиридин-2-ил)-5-метил-2-нитробензамида растворяют в 20 мл этилацетата и смешивают с раствором 4 г ЗпС1₂ в 20 мл воды, подкисленной 0.3 мл концентрированной НС1. Реакционную смесь интенсивно перемешивают в течение 1 ч, после чего нагревают до кипения и кипятят еще 3 ч. Далее реакционную смесь фильтруют, водную фракцию экстрагируют СНС1₃, после чего к водной фракции добавляют при перемешивании 30 мл 10% водного раствора аммиака и оставляют на ночь для формирования осадка. На следующий день осадок отфильтровывают, промывают водой, хлороформом. Водную фракцию экстрагируют хлороформом, экстракты объединяют и упаривают. Остаток наносят на колонку 30x150, наполненную силикагелем 40-60 мкм. Продукт элюируется хлороформом, детектирование - УФ ячейка 280 нм, контроль чистоты продукта - ТСХ в хлороформе. КГ 0.45. Выход 2-амино-^(5хлорпиридин-2-ил)-5-метилбензамида 350 мг. Масс-спектр (МАЛДИ-ВП): М+Н 262, Μ+Να 284.

Реакция 3. Получение трифторацетата 4-метиламинобензойной кислоты.

г 4-Метиламинобензойной кислоты при охлаждении смешивается с 3 мл трифторуксусного ангидрида. Через 2 ч реакционная смесь упаривается и переупаривается с хлороформом. Остаток растворяется в хлороформе и наносится на колонку 35x150, заполненную силикагелем 40-60 мкм. Побочные продукты элюируются хлороформом, а целевой продукт элюируется смесью хлороформ/изопропанол 9:1 с добавлением 1% уксусной кислоты. Выход трифторацетата 4-метиламинобензойной кислоты 700 мг. КГ 0.2-0.4. Масс спектр (МАЛДИ-ВП) в отрицательных ионах: М^-1 246.

Реакция 4. Получение ^(5-хлорпиридин-2-ил)-2-[(4-метил(трифторацетил)аминофенилкарбонил) амино] -5 -метилбензамида.

300 мг 2-амино^-(5-хлорпиридин-2-ил)-5-метилбензамида, 250 мг трифторацетата 4-метиламино- 4 030138 бензойной кислоты и 250 мг ЕЭС1 (1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид) смешивают в 1 мл ТГФ и перемешивают в течение 3 суток. После этого раствор упаривают и наносят на колонку 25x150, заполненную силикагелем 40-60 мкм. Продукт элюируется хлороформом. КТ=0.55. Выход N-(5хлорпиридин-2-ил)-2-[(4-метил(трифторацетил)аминофенилкарбонил)амино]-5-метилбензамида 430 мг. Масс-спектр (МАЛДИ-ВП) в положительно заряженных ионах М+Н 491.

Реакция 5. Получение №(5-хлорпиридин-2-ил)-2-[(4-метиламинофенилкарбонил)амино]-5метилбензамида

400 мг №(5-хлорпиридин-2-ил)-2-[(4-метил(трифторацетил)аминофенилкарбонил)амино]5-метилбензамида растворяют в 5 мл изопропанола и добавляют 2 мл 10% ΝαΟΗ. Реакционную смесь перемешивают 3 ч, после чего избыток щелочи нейтрализуют 5% водным раствором НС1, реакционную смесь упаривают и наносят на колонку 25x150, заполненную силикагелем 40-60 мкм. Продукт элюируется хлороформом КГ=0.4 Выход №(5-хлорпиридин-2-ил)-2-[(4-метиламинофенил-карбонил)амино]-5метилбензамида 300 мг. КГ=0.5 (хлороформ). Масс-спектр (МАЛДИ-ВП): М+Н 395, Μ·Να 417.

Реакция 6. Получение №(5-хлорпиридин-2-ил)-2-[(4-этанимидоилметиламинофенилкарбонил) амино]-5-метилбензамида.

250 мг №(5-хлорпиридин-2-ил)-2-[(4-метиламинофенилкарбонил)амино]-5-метилбензамида при нагревании растворяют в 5 мл ацетонитрила. Полученный раствор охлаждают льдом, после чего через него пропускают сухой газообразный НС1. Через 30 мин раствор помещают в холодильник и выдерживают при 5°С в течение 48 ч. Далее к реакционной смеси добавляют ΝαΙ 1СО₃ при тщательном перемешивании. Новые порции №НСО₃ добавляют до тех пор, пока не прекратится выделение газов. Обычно требуется около 0.5 г ΝαΙ 1СО₃. Полученный после нейтрализации избытка НС1 раствор разбавляют 5 мл воды и трижды экстрагируют хлороформом. Хлороформенные экстракты объединяют и упаривают. Остаток растворяют в воде и наносят на колонку 20x250, заполненную обращенной фазой С2 (КР2). Колонку промывают 100 мл воды, после чего элюирование проводится градиентом этилового спирта от 0 до 50% на фоне 1 % водной уксусной кислоты. Продукт выходит примерно на 30% этилового спирта. Контроль за чистотой продукта осуществляется с помощью ТСХ в системе диоксан/водный аммиак 9:1. Κί=0.2. Выход 130 мг ^(5-хлорпиридин-2-ил)-2-[(4-этанимидоилметил-аминофенилкарбонил)амино]-5метилбензамида. К£=0.2. Масс-спектр (МАЛДИ-ВП): в М+Н 436, Μ·Να 458.

Фармацевтические композиции, подходящие для перорального введения млекопитающим, предпочтительно человеку, согласно изобретению, могут быть изготовлены следующим способом:

а) формирование ядра - смешивание активных ингредиентов (№(5-хлорпиридин-2-ил)-2-({4-[этанимидоил(метил)амино]бензоил}амино)-5-метилбензамид или его фармацевтически приемлемая соль и полипренол) с фармацевтически приемлемыми наполнителями (например, микрокристаллическая целлюлоза и/или лактоза и/или другие);

б) таблетирование ядра таблетки и его покрытие кишечно-растворимой оболочкой (например, Адиапиз™ Соп!го1 ΕΕΝΑ компании АзЫапб) или помещение смешанных на предыдущем этапе ингредиентов в кишечно-растворимые капсулы (например, состоящие из желатина с добавлением титана диоксида);

в) упаковывание (например, во флаконы или в блистеры).

Эксперименты по сравнению ίη νίνθ субстанции и таблетированных лекарственных форм, содержащих соединение №1, при однократном пероральном введении крысам

Исследуемое соединение № 1.

Химическое название: ^(5-хлорпиридин-2-ил)-2-({4-[этанимидоил(метил)амино]бензоил}амино)5-метилбензамида гидрохлорид.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: С₂₃Н₂₂СШ₅О₂-НС1.

Молекулярная масса: 472,37 г/моль.

Описание: Белый или почти белый кристаллический порошок.

Посторонние примеси: содержание единичной неидентифицированной примеси не более 0,5%, сумма примесей - не более 1,0%.

Вода: не более 1,0%.

Количественное определение: от 99,0 до 101,0% (в пересчете на безводное вещество). Микробиологическая чистота: категория 1.2.Б.

Условия хранения: 2-8°С, в защищенном от света месте.

Готовая лекарственная форма (ГЛФ №1), содержащая соединение №1:

- 5 030138

Состав на одну таблетку:

Состав ядра:

Активное соединение:

Соединение №1 (ФГУП НПЦ «Фармзащита» ФМБА России), в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество Вспомогательные соединения:

ΡΓΟδοΙν® 5МСС 90

Магния стеарат Состав оболочки:

Аяиапив ™ Соп1го1 ΕΝΑ \Л/пДе Масса таблетки:

мас.%

79,5 мас.% 0,5 мас.% мас.% 10 мг

Способ приготовления: указанные для ядра ингредиенты смешивали, таблетировали прямым прессованием с целью получения ядра таблетки, а затем ядро таблетки покрывали оболочкой в устройстве нанесения покрытия барабанного типа.

Готовая лекарственная форма (ГЛФ №2), содержащая соединение №1:

Состав на одну таблетку:

Состав ядра:

Активное соединение:

соединение №1 (ФГУП НПЦ «Фармзащита» ФМБА 10 мас.%

России), в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество Вспомогательные соединения:

Полипренол (чистота - 98%), получен из хвои лиственницы (Представительство компании 8о1адгап Ыб в России)

ΡΓΟδοΙν® ЗМСС 90

Магния стеарат

Состав оболочки:

Ациапив™ \Л/Ы1е мас.%

69,5 мас.% 0,5 мас.% мас.%

Масса таблетки: 10 мг

Крысы являются стандартным объектам для доклинических исследований специфической фармакологической активности потенциальных лекарственных средств - антикоагулянтов. Эксперименты на животных проводили с соблюдением правовых и этических норм обращения с животными в соответствии с правилами, принятыми Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей [2].

Тестируемую субстанцию - соединение №1 в виде таблетки (ГЛФ №1), в виде таблетки с полипренолом (ГЛФ №2) или просто субстанцию соединения №1 - вводили внутрижелудочно (интрагастрально). Индивидуальный объем вводимой дозы для каждого животного рассчитывали, исходя из значения массы тела, и корректировали после каждого взвешивания. Введение соединений - однократное.

Применяли интрагастральное введение, так как этот способ аналогичен планируемому способу введения лекарственного препарата в клинической практике.

В экспериментах использовали конвенциональных животных, общее количество которых составило 48 крыс линии А1§1аг.

Поставщики животных: крысы - филиал Андреевка, НТЦБМТ РАМН. Животные разведены специально и ранее не участвовали в исследованиях. Производитель предоставил данные последнего контроля здоровья животных (ветеринарные свидетельства).

Вес животных: в исследовании использовали животных по возможности одинаковой массы тела. Масса крыс - 280-320 г.

Клетки для содержания животных: животных содержали в полипропиленовых клетках размером 460x300x160 мм, по 4 крысы в каждой. В качестве подстила использовали древесную стружку для лабораторных животных.

Корм: крысам давали стандартный комбикорм гранулированный полнорационный (экструдированный) ПК-120, согласно ГОСТ Р 51849-2001 Р.5. Корм давали аб НЪйиш в кормовое углубление клетки или в кормушку.

Вода: водопроводную воду давали аб НЪйиш в стеклянных поилках объемом 500 мл.

Параметры окружающей среды: животных содержали в контролируемых условиях окружающей

- 6 030138 среды: температура воздуха 18-22°С и относительная влажность 50-70%.

Температуру и влажность контролировали в каждой экспериментальной комнате ежедневно и документировали вручную. Освещение в комнатах - естественно-искусственное (12 ч - день, 12 ч - ночь).

Карантин/Акклиматизация: Филиал Андреевка ФГБУН НЦБМТ ФМБА России является благополучным по особо опасным и карантинным болезням. Животные перед отправкой карантинировались в течение 30 дней. Нарушений транспортировки отмечено не было. Карантин на лабораторной базе был сокращен до 4 дней для адаптации животных. В течение этого периода крысы были здоровы и не имели отклонений в поведении.

Идентификация животных: каждому животному в клетке был присвоен индивидуальный номер, помечаемый на шерсти. Клетки снабжались этикетками с указанием исследования, вида, пола и группы животных, сроков эксперимента.

Распределение по группам: перед началом исследования необходимое количество животных, отвечающих критериям включения в исследование, распределялись на группы методом рандомизации по массе тела.

Схема проведения эксперимента

Таблица 1. Схема введения крысам субстанции и таблетированных лекарственных форм, содержащих соединение №1

Номер группы	Исследуемая субстанция/доза/способ введения	Количество животных в группе
1	Водный раствор соединение №1, доза активного соединения - 15 мг/кг, интрагастрально	16 крыс
2	ГЛФ №1 (таблетка), доза активного соединения --15 мг/кг, интрагастрально	16 крыс
3	ГЛФ №2 (таблетка), доза активного соединения --15 мг/кг, интрагастрально	16 крыс

Для модели было использовано 48 крыс.

За 12 ч перед экспериментами крыс переставали кормить и в течение всего эксперимента не давали им корма. Воду до эксперимента и в течение эксперимента крысам давали аб ИЪйиш.

Порядок проведения эксперимента:

Взвешивали крыс. Распределяли на группы методом рандомизации по массе тела.

1- ой опытной группе из 16 крыс вводили интрагастрально водный раствор, содержащий соединение №1, объемом 2 мл в расчете активного соединения №1 - 15 мг на 1 кг живого веса;

2- ой опытной группе из 16 крыс вводили с помощью металлического зонда таблетку с ГЛФ №1, в расчете активного соединения №1 -15 мг на 1 кг живого веса;

3- ей опытной группе из 16 крыс вводили с помощью металлического зонда таблетку с ГЛФ №2, в расчете активного соединения №1 -15 мг на 1 кг живого веса;

Отбор крови осуществляли без наркоза из хвостовой вены, предварительно нагрев хвост крысы в течение 10 мин в водяной бане с температурой 44°С.

Для отбора крови каждую группу животных разделяли ещё на две одинаковые подгруппы (то есть на две подгруппы по 8 животных), при этом отбор крови осуществляли перед началом эксперимента у всех животных и через 0,25, 0,5, 1, 2, 3 ч у восьми животных из первой подгруппы, а также через 4, 6, 8, 10 и 24 ч после введения субстанции у оставшихся восьми животных из второй подгруппы.

Кровь отбирали иглой-бабочкой размером 230 в пластиковые микропробирки (типа эппендорф), содержащие 50 мкл 0,11 М раствора цитрата натрия до объема 0,5 мл, таким образом, чтобы отношение раствора цитрата натрия к крови составляло 1:9.

В течение 30 мин после взятия для получения бедной тромбоцитами плазмы кровь центрифугировали 7 мин при 1000 об/мин (240д), плазму переносили в другую пробирку и повторно центрифугировали 15 мин при 3000 об/мин при 1200д при 20°С.

Полученную плазму разливали в пластиковые пробирки (типа эппендорф) и замораживали при 70°С. Не позднее, чем через 1 неделю, в размороженных в течение 1 ч при 37°С образцах плазмы оценивали антикоагулянтную активность плазмы, измеряя протромбиновое время (ПВ).

Определение протромбинового времени (ПВ).

Определение протромбинового времени осуществляли по методу, описанному в инструкции к набору реагентов Ренампластин, НПО РЕНАМ [3].

Протромбиновое время - это высокочувствительный и простой скрининговый тест, по которому можно оценить нарушения в работе внешнего пути свертывания крови (чувствителен к изменению концентрации факторов II, V, VII и X).

Принцип метода: при добавлении к цитратной плазме избытка тканевого тромбопластина и ионов кальция время образования сгустка фибрина зависит только от активности факторов внешнего и общего

- 7 030138 пути свертывания: факторы I, II, V, VII, X. Измеряют время от момента добавления к плазме тромбопластина с кальцием до момента образования фибринового сгустка.

Проведение анализа: вносили в кювету анализатора цитратную плазму объемом 50 мкл, инкубировали при 37°С точно 1-2 мин. Затем вносили ренампластин 100 мкл и фиксировали время свертывания в секундах на коагулологическом анализаторе.

Полученные результаты выражали в Международном Нормализованном Отношении (МНО).

МНО= ПО^МИЧ, где МИЧ - Международный Индекс Чувствительности Ренампластина, который указывается в прилагаемом паспорте тест-системы. ПО - протромбиновое отношение.

ПО =ПВб/ ПВюо%, где ПВ_Б - протромбиновое время исследуемой плазмы крысы (в секундах), ПВ₁₀₀% - протромбиновое время плазмы того же животного, взятой перед началом эксперимента (в секундах).

Для того чтобы оценить эффективность ГЛФ №1 и ГЛФ №2 при интрагастральном введении крысам, было исследовано влияние введения соединения №1, ГЛФ №1 и ГЛФ №2 на показатели ПВ (МНО).

Зависимость МНО и ПВ от времени после введения соединения №1 и введения ГЛФ №1 и ГЛФ №2 в плазме крыс представлены в табл. 2 и на фиг. 1.

Таблица 2. Значения показателя ПВ при интрагастральном введении крысам соединения №1,

ГЛФ №1 и ГЛФ №2

Доза15 мг/кг Доза15 мг/кг	Соединение №1
Время после введения, ч.
р 0,25 \| 0У] Г р 3”
ПВ, сек
20,10	15,50	23,40	26,60	28,30	29,20
29,40	22,20	28,80	27,50	27,40	28,10
22,20	24,30	21,80	23,30	21,60	32,40
19.70 22.70 23.70 21.70 16.70 0	23.10 20.70 26.10 27.70 20,40 В ⁴	26,00 26,30 21,10 23,80 21,40 Соедине ремя после θ ПВ,	25,80 27.20 30.30 22.30 19.20 ние №1 введения, ч. ⁸ зек	29,90 33.10 30,20 28.10 20,00 10	27,40 27,80 29.70 33.70 31.70 24
19,60	30,8	38,30	37,30	19,5	18,60
20,10	33,8	33,50	28,00	23,8	21,80
17,50	18,90	28,20	29,70	19,80	20,90
24,60	24,60	29,80	33,70	23,20	23,80
28,80	41,10	31,50	29,40	27,60	24,20
30,30	32,10	29,50	36,60	25,10	25,00
22,30	25,20	32,70	26,60	25,60	26,70
19,20	27,30	29,70	25,70	15,50	21,50

Доза15 мг/кг	ГЛФ №1
Время после введения, ч.
(Гр 0,25 \| Др Ϊ] 2~] з”
ПВ, сек
23,30	17,90	20,30	23,60	33,20	31,80
21,20	18,90	22,00	21,20	38,60	39,70
17,40	23,00	20,20	19,10	30,50	32,10
19,90	17,80	22,80	20,90	41,30	41,70
18,20	21,30	18,90	29,60	31,40	41,60
21,10	18,50	20,80	26,40	29,60	32,50
18,00	21,40	19,30	25,00	29,60	31,10
20,00	22,20	21,00	19,20	38,60	32,60
Доза15 мг/кг	ГЛФ №1
Время после введения, ч.
οη ρ р р ϊόη 24
ПВ, сек
15,50	26,30	30,60	41,30	31,60	17,80
17,80	42,70	37,60	42,40	34,80	21,20
22,20	26,10	31,10	51,10	44,30	15,90
22,10	45,00	41,90	28,20	33,90	20,60
24,10	33,80	38,10	40,30	23,20	21,10
21,70	44,00	35,90	32,20	35,60	17,90
18,90	28,40	37,40	37,10	34,00	17,20
20,40	38,20	47,20	45,60	37,80	22,10

Доза15 мг/кг	ГЛФ №2
Время после введения, ч.
р 0,25 \| Др Г Г\| Г
ПВ, сек
20,1	21,3	26,1	24,9	39,8	41,4
21,8	20,3	25,4	23,4	48,4	48,2
19,9	21,6	19,7	21,6	39,0	47,0
18,0	20,5	20,7	23,7	45,2	57,3
22,2	21,0	18,9	30,6	42,3	54,4
18,6	22,8	26,1	33,2	39,8	45,1
19,8	21,3	22,8	28,1	32,3	29,7

- 8 030138

	18,6	\| 22,0	I 19,8	\| 19,9	I 43,2	\| 39,8
	ГЛФ №2
	Время после введения, ч
	°!	I Е	I А	I__Е	I	I_²±
	ПВ, сек
	18,4	42,5	39,0	52,2	38,5	18,4
Доза-	17,9	55,4	53,9	56,3	39,9	23,3
15 мг/кг	17,5	45,6	46,8	79,5	56,0	19,7
	20,2	56,6	79,2	36,6	34,9	24,1
	22,4	38,8	49,0	48,1	40,3	18,5
	22,6	71,0	52,2	47,0	48,9	23,7
	23,2	58,6	63,8	50,1	34,4	16,2
	20,5	64,3	69,1	64,7	47,2	27,7

Из данных экспериментов видно, что соединение №1 при интрагастральном введении крысам увеличивает МНО, а затем через 4-10 часов после введения и до 24 ч МНО снова уменьшается до исходного значения Эффективность ГЛФ №1 при одной и той же дозировке в 2-2,5 раза выше, чем у чистого соединения №1, что, по всей видимости, связано с тем, что соединение №1, попадая в желудок, частично разрушается там желудочным соком, а в ГЛФ №1 защищено от разрушения оболочкой. Эффективность же ГЛФ №2 при одной и той же дозировке в 5-7 раз выше, чем у чистого соединения №1, что, очевидно, обусловлено наличием в этой лекарственной форме полипренола. Полученные данные свидетельствуют о том, что применение ГЛФ №2 позволит снизить дозу активного вещества, а это, в свою очередь, сможет привести к снижению частоты возникновения побочных эффектов.

Таким образом, фармацевтические композиции по изобретению и, в частности, фармацевтические композиции содержащие соединение №1 и полипренол, защищенные кишечно-растворимой оболочкой или капсулой от разрушения желудочным соком, являются более эффективными в качестве антикоагулянта, чем соединение №(5-хлорпиридин-2-ил)-2-({4-[этанимидоил(метил)амино]бензоил}амино)-5метилбензамида или фармацевтически приемлемая соль, в частности соединение №1, само по себе, а также являются перспективными для терапии заболеваний, связанных с нарушением свертываемости крови.

Несмотря на то, что изобретение описано со ссылкой на раскрываемые варианты воплощения, для специалистов в данной области должно быть очевидно, что конкретные подробно описанные эксперименты приведены лишь в целях иллюстрирования настоящего изобретения, и их не следует рассматривать как каким-либо образом ограничивающие объем изобретения. Должно быть понятно, что возможно осуществление различных модификаций без отступления от сути настоящего изобретения.

Список литературы:

НеНегис б СагсОок Рагеп1ега1 Апйсоади1ап1з ϊη Аси1е Согопагу Зупдготез ап0 1п1еп/епйопа1 Сагсйо1оду// А Сопзепзиз ОоситепТ - 2015. - Зер-Ос1 - \/56(5). - Р.379393.

Еигореап Οοηνβηίίοη Тог Тпе РгоТесйоп οί \/ег1еЬга1е Ап1та1з изес! Тог ЕхрептепТа! апд оТМег δοϊβηΐίΤίο Ригрозез (ЕТЗ 123). - 31газЬоигд. - 1986.

пНр:/Лллллл/.гепат.ги

5\ллеге\л/зка Е., Зазак νν., Мапко\л/зк| Т., бапко\л/зк( νν., 7одТтап Т., Кга]е\л/зка I., НегТе! б.,

5косгу1аз Е., СКо^аск! Т. ТНе зеагсИ Тог р1ап1 ро1ургепо1з //АсТа ВюсЫт. ΡοΙοη. 1994. V.

41. Ρ. 221-26.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Фармацевтическая композиция для перорального введения, обладающая антикоагулянтной активностью, включающая эффективное количество №(5-хлорпиридин-2-ил)-2-({4-[этанимидоил (метил)амино]бензоил}амино)-5-метилбензамида или его фармацевтически приемлемой соли и полипренол со структурной формулой:

где η составляет от 4 до 40.
2. Фармацевтическая композиция по п.1, характеризующаяся тем, что фармацевтически приемлемая соль соединения №(5-хлорпиридин-2-ил)-2-({4-[этанимидоил(метил)амино]бензоил}амино)-5-метилбензамида представляет собой гидрохлорид.
3. Фармацевтическая композиция по п.1, характеризующаяся тем, что дополнительно содержит по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
4. Фармацевтическая композиция по п.3, характеризующаяся тем, что в качестве вспомогательных

- 9 030138 веществ содержит Ρίοδοίν® 8МСС 90 и/или магния стеарат.
5. Фармацевтическая композиция по п.4, характеризующаяся следующим составом и соотношением компонентов, мас.%:

Х-(5-хлорпиридин-2-ил)-2-({4-[этанимидоил(метил)амино]бензоил}амино)-5-метилбензамида гидрохлорид - 1-80, полипренол - 1-80, кишечно-растворимая оболочка - 1-50,

Ρίοδοίν® 8МСС 90 - 0-90, магния стеарат - 0-50.
6. Твердая лекарственная форма, включающая композицию по п.1, покрытую кишечнорастворимой оболочкой или кишечно-растворимой капсулой.
7. Твердая лекарственная форма по п.6, характеризующаяся тем, что кишечно-растворимой оболочкой является пленочное покрытие для таблеток.
8. Твердая лекарственная форма по п.7, характеризующаяся тем, что кишечно-растворимой оболочкой является пленочное покрытие для таблеток на основе сополимера метакриловой кислоты.
9. Твердая лекарственная форма по п.8, характеризующаяся тем, что оболочкой является пленочное покрытие для таблеток на основе сополимера метакриловой кислоты Ациапиз™ ^ηΐτοί ΕΝΑ.
10. Применение фармацевтической композиции по п.1 для профилактики и/или лечения состояния млекопитающего, характеризующегося тромбозом.
11. Применение по п.10, в котором состояние представляет собой острый коронарный синдром, инфаркт миокарда, нестабильную стенокардию, рефрактерную стенокардию, тромбоз, вызванный посттромболитической терапией или коронарной ангиопластикой, острый ишемический цереброваскулярный синдром, эмболический инсульт, тромботический инсульт, преходящие ишемические приступы, венозный тромбоз, глубокий венозный тромбоз, легочную эмболию, коагулопатию, диссеминированное внутрисосудистое свёртывание, тромбоцитопенический акроангиотромбоз, облитерирующий тромбангиит, тромбозные заболевания, связанные с гепариноиндуцированной тромбоцитопенией, тромбические осложнения, связанные с искусственным кровообращением, тромбические осложнения, связанные с протезными устройствами.
12. Применение по п.10, характеризующееся тем, что млекопитающее представляет собой человека.