EA039966B1

EA039966B1 - APPLICATION OF LIQUID PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING CHONDROITIN SULPHATE AND HYALURONIC ACID

Info

Publication number: EA039966B1
Application number: EA201792023
Authority: EA
Inventors: Анна Мария Занеллато; Винченца Корса; Джанкарло Карпанезе; Моника КАМПИЗИ
Original assignee: Фидиа Фармачеутичи С.П.А.
Priority date: 2012-03-30
Filing date: 2013-03-27
Publication date: 2022-04-04

Abstract

Изобретение относится к применению жидкой фармацевтической композиции, содержащей комбинацию заданных производных гиалуроновой кислоты с высокой молекулярной массой и хондроитинсульфата для лечения интерстициального цистита.The invention relates to the use of a liquid pharmaceutical composition containing a combination of specified high molecular weight hyaluronic acid derivatives and chondroitin sulfate for the treatment of interstitial cystitis.

Description

Область техники, к которой относится изобретениеThe field of technology to which the invention belongs

Настоящее изобретение относится к применению фармацевтической композиции для лечения интерстициального циститаThe present invention relates to the use of a pharmaceutical composition for the treatment of interstitial cystitis

Предшествующий уровень техникиPrior Art

Хрящевая основа содержит трехмерную структуру из молекул коллагена и сложных протеогликановых комплексов, которые, в свою очередь, состоят из опорной структуры на основе гиалуроновой кислоты (ГК), взаимодействующей с молекулами гликозаминогликанов (ГАГ), образующих нековалентную связь с полипептидными цепями, тем самым придавая хрящу биомеханические и вязкоупругие свойства.The cartilage matrix contains a three-dimensional structure of collagen molecules and complex proteoglycan complexes, which, in turn, consist of a support structure based on hyaluronic acid (HA), interacting with glycosaminoglycan (GAG) molecules, forming a non-covalent bond with polypeptide chains, thereby giving cartilage biomechanical and viscoelastic properties.

Фактически ГК - это молекула, которая проявляет специфические вязкоупругие свойства, преимущественно синтезируется и секретируется синовиоцитами в суставной полости (Asari A. et al, Arch Histol Cytol, 1995, 58(l):65-76) и по вышеуказанным причинам является одним из основных компонентов синовиальной жидкости, характеризующейся как вязкими, так и упругими свойствами в зависимости от количества и молекулярной массы (ММ) молекул ГК, содержащихся в ней.In fact, HA is a molecule that exhibits specific viscoelastic properties, is predominantly synthesized and secreted by synoviocytes in the articular cavity (Asari A. et al, Arch Histol Cytol, 1995, 58(l):65-76) and, for the above reasons, is one of the main components of the synovial fluid, characterized by both viscous and elastic properties, depending on the amount and molecular weight (MW) of the HA molecules contained in it.

Таким образом, вязкоупругие свойства синовиальной жидкости связаны с содержанием ГК в суставной полости, а концентрация ГК варьируется с возрастом: у людей старше 25 лет она уже начинает снижаться. Вязкоупругие свойства синовиальной жидкости можно определить количественно путем измерения модулей: первый модуль называется G' или модуль упругости, поскольку он представляет собой запас энергии, запасенной в ходе деформационной нагрузки на полисахарид, второй модуль определяется как G или модуль вязкости, он представляет собой рассеянную энергию, когда молекула находится под воздействием нагрузки. Вкратце: G' придает упругость синовиальной жидкости, в то время как G это коэффициент сопротивления трению между двумя поверхностями в суставе, т.е. сопротивления механическому воздействию, которое способно приводить к деформации суставных хрящей. Во время медленного движения ГК действует как вязкая смазка (свойство, придаваемое ей модулем G), а во время быстрого движения благодаря упругим свойствам она предотвращает травмы или микротравмы, которым может подвергаться сустав.Thus, the viscoelastic properties of the synovial fluid are associated with the content of HA in the joint cavity, and the concentration of HA varies with age: in people over 25 years old, it already begins to decrease. The viscoelastic properties of the synovial fluid can be quantified by measuring the moduli: the first modulus is called G' or modulus of elasticity, since it represents the stored energy during the deformation load on the polysaccharide, the second modulus is defined as G or the modulus of viscosity, it represents the dissipated energy, when the molecule is under load. Briefly: G' gives the elasticity of the synovial fluid, while G is the frictional resistance coefficient between two surfaces in the joint, i.e. resistance to mechanical stress, which can lead to deformation of the articular cartilage. During slow movement, HA acts as a viscous lubricant (a property given to it by the G module), and during fast movement, due to its elastic properties, it prevents injury or microtrauma that the joint may be exposed to.

Остеоартроз/остеоартрит (ОА) - в высокой степени инвалидизирующее заболевание, характеризующееся прогрессивной эрозией суставных хрящей из-за разрушения хрящевой основы и поражения клеточных компонентов.Osteoarthritis/osteoarthritis (OA) is a highly disabling disease characterized by progressive erosion of articular cartilage due to destruction of the cartilage base and damage to cellular components.

Хорошо известно, что первоначальной причиной возникновения вышеуказанного заболевания может быть механический дисбаланс, которому подвержен сустав в целом.It is well known that the initial cause of the aforementioned disease may be a mechanical imbalance to which the joint as a whole is subject.

Нестабильность сустава может быть, по существу, вызвана разными факторами (такими как травма, воспаление суставной системы, эрозия хряща, неправильная походка или осанка) и может приводить к изменению хрупкого равновесия между синтезом и разрушением внеклеточного матрикса, синтезируемого хондроцитами и синовиоцитами.Joint instability can be essentially caused by various factors (such as trauma, inflammation of the joint system, cartilage erosion, incorrect gait or posture) and can lead to a change in the delicate balance between the synthesis and destruction of the extracellular matrix synthesized by chondrocytes and synoviocytes.

Когда такая ситуация идеального, но хрупкого гомеостаза нарушается, разрушение матрикса происходит интенсивнее, чем его синтез, в результате запускается медленный, но прогрессирующий процесс разрушения, который недостаточно компенсируется процессом синтеза, что приводит к потере хондроцитов.When this situation of ideal but fragile homeostasis is disrupted, matrix destruction occurs more intensely than its synthesis, resulting in a slow but progressive destruction process that is not sufficiently compensated by the synthesis process, which leads to the loss of chondrocytes.

Фактически чрезмерная и/или неправильная нагрузка на суставы может вызывать реакцию хондроцитов, выражающуюся в синтезе тех ферментов, которые отвечают за разрушение самого хряща (называемых металлопротеазой (матричной металлопротеазой -ММП)) и синтезируются хондроцитами при стимуляции последних воспалительными цитокинами, такими как IL-1 и TNF-α, которые генерируются и секретируются в суставную полость, особенно во время возникновения воспалительного заболевания, например, ОА. IL-1 стимулирует синтез большого количества оксида азота и подавляет синтез протеогликанов со стороны самих хондроцитов (Dozin В. et al., Matrix Biology, 2002, 21 :449-459). Воспаленный хрящ далее вырабатывает значительное количество СОХ-2, что, в свою очередь, обусловливает сверхсинтез и секрецию PGE 2 в суставной полости, что способствует обострению воспаления и, таким образом, приводит к повреждению хряща (Amin A. et al., J Clin Invest, 1997,99:1231).In fact, excessive and/or improper stress on the joints can cause a reaction in chondrocytes, expressed in the synthesis of those enzymes that are responsible for the destruction of the cartilage itself (called metalloprotease (matrix metalloprotease -MMP)) and are synthesized by chondrocytes when stimulated by inflammatory cytokines, such as IL-1 and TNF-α, which are generated and secreted into the joint cavity, especially during the onset of an inflammatory disease such as OA. IL-1 stimulates the synthesis of large amounts of nitric oxide and inhibits the synthesis of proteoglycans by the chondrocytes themselves (Dozin B. et al., Matrix Biology, 2002, 21:449-459). The inflamed cartilage then produces a significant amount of COX-2, which in turn causes oversynthesis and secretion of PGE 2 in the joint cavity, which exacerbates inflammation and thus leads to cartilage damage (Amin A. et al., J Clin Invest , 1997.99:1231).

При остром и хроническом воспалении и обширных дегенеративных процессах в суставах (ОА) концентрация и молекулярная масса (ММ) ГК в суставной синовиальной жидкости значительно уменьшаются, тем самым снижая смазывающую способность жидкости. Хорошо известно, что функциональные характеристики синовиальной жидкости зависят от концентрации и степени полимеризации ГК, изменение этих параметров может привести к повреждению тканей сустава, характерному для ОА.In acute and chronic inflammation and extensive degenerative processes in the joints (OA), the concentration and molecular weight (MW) of HA in the articular synovial fluid are significantly reduced, thereby reducing the lubricity of the fluid. It is well known that the functional characteristics of the synovial fluid depend on the concentration and degree of polymerization of HA, a change in these parameters can lead to damage to the tissues of the joint, characteristic of OA.

Синовиальная жидкость в суставах, пораженных ОА, не может эффективно защищать синовиальную ткань и суставный хрящ от неблагоприятных механических воздействий, которым ежедневно подвергается сустав: в синовиальной жидкости без патологий уровень двух модулей обычно увеличивается с повышением частоты нагрузки - при низкой частоте преобладает вязкий компонент, при высокой частоте значение модуля упругости превышает значение модуля вязкости; в синовиальной жидкости суставов, пораженных ОА, наоборот, наблюдаются значительно более низкие значения G' и G по сравнению с нормальными.The synovial fluid in joints affected by OA cannot effectively protect the synovial tissue and articular cartilage from the adverse mechanical effects that the joint is exposed to on a daily basis: in synovial fluid without pathologies, the level of two modules usually increases with increasing frequency of exercise - at a low frequency, the viscous component predominates, at at high frequency, the value of the modulus of elasticity exceeds the value of the modulus of viscosity; in the synovial fluid of joints affected by OA, on the contrary, significantly lower values of G' and G are observed compared to normal ones.

Обменные процессы ГК внутри синовиальной жидкости без патологий в целом проходят очень быстро, в то время как в жидкости сустава с АО наблюдается снижение концентрации ГК (связанное соThe metabolic processes of HA inside the synovial fluid without pathologies are generally very fast, while in the joint fluid with AO, a decrease in the concentration of HA is observed (associated with

- 1 039966 снижением уровня GAG), а также уменьшение ее ММ и резкое сокращение интенсивности обменного потока (Balazs EA. et al, J Rheumatol Suppl, 1993, 12:75-82; Belcher C. et al, Annals of the Rheumathic Disease, 1997, 56:299-307).- 1 039966 by a decrease in the level of GAG), as well as a decrease in its MM and a sharp decrease in the intensity of the metabolic flow (Balazs EA. et al, J Rheumatol Suppl, 1993, 12:75-82; Belcher C. et al, Annals of the Rheumatic Disease, 1997, 56:299-307).

По этим причинам Балаж (Balazs) первым предположил возможность изменения хода развития остеоартроза путем введения экзогенной ГК непосредственно внутрь суставной полости.For these reasons, Balazs was the first to suggest the possibility of changing the course of development of osteoarthritis by introducing exogenous HA directly into the joint cavity.

На фармацевтическом рынке в настоящее время доступны различные препараты для внутрисуставного введения ГК в пораженные ОА суставы, среди них: Hyalgan® - очищенная ГК на основе целозии гребенчатой с ММ 5-7,3x105 Да (US5925626), Synvisc® (Hylan G-F 20) - ГК с поперечной межмолекулярной связью с формальдегидом и дивинилсульфоном с ММ 6-7x106 Да (US 4713448), Artz® - ГК с ММ 6,2-1,2x105 Да.Various preparations are currently available on the pharmaceutical market for the intra-articular administration of HA into joints affected by OA, among them: Hyalgan® - purified HA based on comb celosia with MM 5-7.3x105 Da (US5925626), Synvisc® (Hylan G-F 20) - HA with a cross-linked intermolecular bond with formaldehyde and divinyl sulfone with MM 6-7x106 Da (US 4713448), Artz® - HA with MM 6.2-1.2x105 Da.

Консолидированные клинические данные показали, что вводимая внутрисуставно ГК в значительной степени выполняет функцию восстановления вязкости суставной жидкости, что улучшает функциональные способности конечности, пораженной ОА, с последующим уменьшением суставной боли.Consolidated clinical data have shown that intra-articular HA largely performs the function of restoring the viscosity of the joint fluid, which improves the functional abilities of the limb affected by OA, with a subsequent decrease in joint pain.

ГК - это гетерополисахарид, состоящий из чередующихся остатков D-глюкуроновой кислоты и Иацетил-О-глюкозамина. Это линейный цепной полимер с ММ, варьирующейся от 50000 до 13x106 Да в зависимости от источника, из которого она получена, и используемых способов изготовления. В природе она содержится в околоклеточной жидкости, в основном веществе соединительной ткани позвоночных организмов (в котором она является одним из главных компонентов), в синовиальной жидкости суставов, в стекловидном теле и пупочном канатике. Хорошо известно, что ГК посредством своего мембранного рецептора CD44 является модулятором многих разнообразных процессов, относящихся к клеточной физиологии и биологии, например, клеточной пролиферации, миграции, дифференциации и ангиогенеза, а также выполняет другие функции, такие как увлажнение тканей и смазывание суставов.HA is a heteropolysaccharide consisting of alternating residues of D-glucuronic acid and Iacetyl-O-glucosamine. It is a linear chain polymer with MW varying from 50,000 to 13x106 Da depending on the source from which it is derived and the manufacturing methods used. In nature, it is found in the pericellular fluid, in the main substance of the connective tissue of vertebrate organisms (in which it is one of the main components), in the synovial fluid of the joints, in the vitreous body and the umbilical cord. It is well known that HA, through its membrane receptor CD44, modulates many diverse processes related to cell physiology and biology, such as cell proliferation, migration, differentiation, and angiogenesis, as well as other functions such as tissue hydration and joint lubrication.

Недавно был проведен успешный эксперимент с внутрисуставным введением хондроитинсульфата (ХС) в качестве противовоспалительного вещества: это компонент матричных протеогликанов, в условиях отсутствия патологий он обеспечивает увлажнение хрящевой ткани и влияет на устойчивость при механическом сжатии; также была выявлена его способность снижать экспрессию ММП в хондроцитах суставов, пораженных ОА, и вызывать синтез ГК с высокой ММ в синовиальных фибробластах при ОА (David-Raoudi M et al, Glycobiology, 2009,19:813-815).Recently, a successful experiment was carried out with the intra-articular administration of chondroitin sulfate (CS) as an anti-inflammatory substance: it is a component of matrix proteoglycans, in the absence of pathologies, it provides hydration of the cartilage tissue and affects the resistance to mechanical compression; its ability to reduce the expression of MMP in chondrocytes of joints affected by OA and to induce the synthesis of high MW HA in synovial fibroblasts in OA was also revealed (David-Raoudi M et al, Glycobiology, 2009,19:813-815).

Он представляет собой сульфатированный гликозамингликан, состоящий из дисахаридных цепей, которые, в свою очередь, состоят из N-ацетил-галактозамина и D-глюкуроновой кислоты, где большинство остатков галактозамина сульфированы в положениях 4 или 6 путем придания высокой анионной активности полисахаридам.It is a sulfated glycosaminoglycan composed of disaccharide chains, which in turn are composed of N-acetyl-galactosamine and D-glucuronic acid, where most of the galactosamine residues are sulfated at positions 4 or 6 by conferring high anionic activity on the polysaccharides.

Также было доказано, что ХС способен снижать активность остеокластов, таким образом сокращая резорбцию костной ткани в целом и субхондральную резорбцию в частности - процесс, происходящий как на начальной, так и на окончательной стадии развития ОА; активирование остеокластов также имеет критическое значение при транзиторном регионарном остеопорозе - потенциально инвалидизирующем заболевании, обусловливающем очаговую остеопению и воспаление (Massara A. et al., Reumatismo, 2005, 57:5-15). Более того, при испытаниях ХС показал хорошие результаты в лечении таких воспалительных заболеваний, как синовит и тендинит (Wildi LM. et al., Ann Rheum Dis, 2011, 70:982- 989).It has also been proven that cholesterol is able to reduce the activity of osteoclasts, thus reducing bone resorption in general and subchondral resorption in particular - a process that occurs both at the initial and final stages of OA development; osteoclast activation is also critical in transient regional osteoporosis, a potentially disabling disease causing focal osteopenia and inflammation (Massara A. et al., Reumatismo, 2005, 57:5-15). Moreover, when tested, cholesterol showed good results in the treatment of inflammatory diseases such as synovitis and tendinitis (Wildi LM. et al., Ann Rheum Dis, 2011, 70:982-989).

В отношении вышеупомянутых противовоспалительных свойств ХС был первоначально исследован в офтальмологической хирургии в сочетании с ГК с заданной ММ в составе водных буферных растворов с заданным массовым соотношением (US6051560).With respect to the aforementioned anti-inflammatory properties, CS was initially investigated in ophthalmic surgery in combination with HA at a given MW in aqueous buffer solutions at a given mass ratio (US6051560).

Исследования с применением ХС в сочетании с ГК с ММ в диапазоне от 500 до 700 кДа показали значительные успехи также во внутрисуставной терапии ОА I и II стадии, при этом массовая доля ГК составляла 4:3, в исследованиях использовался буферный раствор с фосфатом и хлористым натрием, общая окончательная вязкость составила от 68 до 115 сП (измерена при градиенте скорости 1 сек^-1 при 25°С). В целом курс терапии составил 2-6 инъекций в течение периода терапевтической эффективности от 1 до 3 месяцев (ЕР 1443945).Studies using cholesterol in combination with HA with MM in the range from 500 to 700 kDa showed significant success also in the intra-articular therapy of stage I and II OA, while the mass fraction of HA was 4:3, a buffer solution with phosphate and sodium chloride was used in the studies , the total final viscosity ranged from 68 to 115 cps (measured at a velocity gradient of 1 sec ^-1 at 25°C). In general, the course of therapy was 2-6 injections during the period of therapeutic efficacy from 1 to 3 months (EP 1443945).

В конечном итоге, изменения вязкости вязкоупругих жидкостей, состоящих из комбинации ХС и ГК, хорошо известны специалистам: результаты экспериментов показывают, насколько ХС повышает вязкость растворов ГК с низкой ММ (по сравнению с составами, содержащими только ГК в той же концентрации), несмотря на то, что сам ХС обладает очень низкой вязкостью, несущественной по сравнению с вязкостью ГК; однако модули G' и G растворов ГК после добавления ХС не изменяются (Nishimura M. et al., Biochimica et Biophysica Acta, 1998, 1380:1-9).Ultimately, changes in the viscosity of viscoelastic fluids consisting of a combination of CS and HA are well known to specialists: the results of experiments show how CS increases the viscosity of HA solutions with a low MW (compared to formulations containing only HA at the same concentration), despite the fact that CS itself has a very low viscosity, insignificant compared to the viscosity of HA; however, the G' and G moduli of HA solutions do not change after the addition of cholesterol (Nishimura M. et al., Biochimica et Biophysica Acta, 1998, 1380:1-9).

Интерстициальный цистит - заболевание мочевого пузыря, проявляющее себя в болезненных или некомфортных ощущениях, частом мочеиспускании, боли в надлобковой области и хронической боли в тазовой области.Interstitial cystitis is a bladder disease characterized by painful or uncomfortable sensations, frequent urination, suprapubic pain, and chronic pelvic pain.

Несмотря на свое название, интерстициальный цистит значительно отличается от обычного цистита (вызываемого специфическими бактериями), симптомы этих заболеваний сходны, но в первом случае бактериальные инфекции отсутствуют и антибиотическая терапия оказывается неэффективной в его лечении.Despite its name, interstitial cystitis is significantly different from ordinary cystitis (caused by specific bacteria), the symptoms of these diseases are similar, but in the first case there are no bacterial infections and antibiotic therapy is ineffective in its treatment.

- 2 039966- 2 039966

Этиология интерстициального цистита неизвестна, полагают, что он вызван отсутствием гликозаминогликанов в слизистом слое, выстилающем мочевой пузырь. Изменение строения стенок мочевого пузыря на клеточном уровне подтверждается повреждением внутреннего эпителия, что вследствие контакта с кислотами в моче вызывает повышенную местную чувствительность нервной системы, регулирующую болевые ощущения, и увеличивает восприимчивость к позыву к мочеиспусканию.The etiology of interstitial cystitis is unknown, but it is believed to be caused by a lack of glycosaminoglycans in the mucosal layer that lines the bladder. The change in the structure of the walls of the bladder at the cellular level is confirmed by damage to the inner epithelium, which, due to contact with acids in the urine, causes an increased local sensitivity of the nervous system that regulates pain, and increases susceptibility to the urge to urinate.

На основании этой гипотезы был проведен курс клинического лечения, заключающийся во введении полисульфата пентозана, гепарина и гиалуроновой кислоты (Цистистат) в полость мочевого пузыря для восстановления и защиты внутреннего эпителия.Based on this hypothesis, a course of clinical treatment was carried out, consisting in the introduction of pentosan polysulphate, heparin and hyaluronic acid (Cystistat) into the bladder cavity to restore and protect the internal epithelium.

Сущность изобретенияThe essence of the invention

Заявитель пришел к выводу о том, что теперь возможно преодолеть вышеупомянутые недостатки известных фармацевтических составов, благодаря применению композиции, содержащей комбинацию производных высокомолекулярной гиалуроновой кислоты и хондроитинсульфата, наилучшим образом охарактеризованные в пунктах приложенной формулы настоящего изобретения, а также более детально описанные в подробном описании изобретения.The Applicant has concluded that it is now possible to overcome the aforementioned disadvantages of known pharmaceutical formulations by using a composition containing a combination of high molecular weight hyaluronic acid and chondroitin sulfate derivatives best described in the appended claims of the present invention and also described in more detail in the Detailed Description of the Invention.

Краткое описание фигурBrief description of the figures

На чертеже показаны значения модулей G¹ и G в Па в зависимости от ω в рад/с, испытания проводились с использованием веществ, указанных в примере 1.The drawing shows the values of the modules G ¹ and G in Pa depending on ω in rad / s, the tests were carried out using the substances indicated in example 1.

Подробное описание изобретенияDetailed description of the invention

Объектом настоящего изобретения являются применение жидкой фармацевтической композиции, содержащей хондроитина сульфат (обозначаемого CS или ХС) в сочетании с производными гиалуроновой кислоты (обозначаемой НА или ГК). Данное производное представляет собой соль гиалуроновой кислоты (НА) и щелочных или щелочноземельных металлов, со средней ММ от 2500 до 3000 кДа (ГКВММ (гиалуроновая кислота с высокой молекулярной массой); измерено перед процессом стерилизации, который может проводиться в соответствии со способами, известными в данной области)).An object of the present invention is the use of a liquid pharmaceutical composition containing chondroitin sulfate (denoted CS or XC) in combination with hyaluronic acid derivatives (denoted HA or HA). This derivative is a salt of hyaluronic acid (HA) and alkali or alkaline earth metals, with an average MW of 2500 to 3000 kDa (HHMWM (high molecular weight hyaluronic acid); measured before the sterilization process, which can be carried out in accordance with methods known in this area).

Данная новая фармацевтическая композиция проявляет реологические свойства, в корне отличающиеся от свойств начальных производных ГК, а также от свойств смесей ГК и ХС, описанных ранее и, следовательно, известных из уровня техники. Фактически, данная новая композиция демонстрирует важные изменения реологических свойств для модулей G' и G по сравнению с исходными производными при одинаковой концентрации и тех же условиях анализа,This new pharmaceutical composition exhibits rheological properties that are fundamentally different from those of the initial HA derivatives, as well as from the properties of mixtures of HA and CS, described previously and, therefore, known from the prior art. In fact, this new composition shows important changes in rheological properties for the modules G' and G compared to the original derivatives at the same concentration and the same conditions of analysis,

Такой результат оказался совершенно неожиданным, поскольку, с другой стороны, данные (указанные выше), известные специалистам в данной области, свидетельствовали прямо и однозначно о том, что модули вязкости и упругости ГК при добавлении ХС остаются неизменными (Nishimura M. et al, Biochimica et Biophysica Acta, 1998, 1380: 1-9).This result turned out to be completely unexpected, since, on the other hand, the data (mentioned above), known to specialists in this field, testified directly and unequivocally that the viscosity and elasticity moduli of HA remained unchanged when CS was added (Nishimura M. et al, Biochimica et Biophysica Acta, 1998, 1380: 1-9).

Результаты, полученные заявителем, напротив, показали, что комбинирование высокомолекулярных производных ГК с ХС (состав ГК-ВММ/ХС) приводило к значительному снижению значения модуля упругости G', при этом модуль вязкости G оставался неизменным: следовательно, новые фармацевтические составы проявляют реологические свойства, характерные для веществ, повышающих вязкость синовиальной жидкости, при этом элемент вязкости увеличивается пропорционально относительно начального производного; такой новый состав, соответственно, будет обладать большей устойчивостью к трению и более интенсивными способностями к смазыванию, а также одновременно проявлять как известные противовоспалительные свойства ХС, так и противовоспалительные свойства, присущие производным ГК. По этим причинам новые комбинации с производными ГК и ХС могут быть использованы как вязкое или местно- регионарное смазочное вещество для лечения и/или терапии интерстициального цистита путем капельного введения в мочевой пузырь выбранной композиции, поскольку (на основании вышеописанных новых вязких свойств) новая композиция проявляет более высокую способность сцепления со стенками мочевого пузыря по сравнению с исходными составами, тем самым обеспечивая защиту эпителия на длительный период времени и достижение лучших клинических результатов.The results obtained by the applicant, on the contrary, showed that the combination of high molecular weight HA derivatives with CS (composition HA-HMM/CS) led to a significant decrease in the value of the modulus of elasticity G', while the viscosity modulus G remained unchanged: therefore, new pharmaceutical compositions exhibit rheological properties , characteristic of substances that increase the viscosity of the synovial fluid, while the viscosity element increases in proportion to the initial derivative; such a new formulation would therefore have greater friction resistance and more intense lubricity, and simultaneously exhibit both the known anti-inflammatory properties of cholesterol and the anti-inflammatory properties inherent in HA derivatives. For these reasons, new combinations with HA and CS derivatives can be used as a viscous or local-regional lubricant for the treatment and/or therapy of interstitial cystitis by drip injection into the bladder of the selected composition, since (based on the new viscous properties described above) the new composition exhibits higher adhesion to the bladder walls compared to the original compositions, thereby providing protection of the epithelium for a long period of time and achieving better clinical results.

В заключение, заявитель приводит описание и испрашивает охрану для новых вязких фармацевтических композиция, содержащих ХС в сочетании с вышеуказанными производными ГК для использования в лечении интерстициального цистита путем введения препаратов внутрь мочевого пузыря.Finally, the Applicant describes and seeks protection for new viscous pharmaceutical compositions containing cholesterol in combination with the above HA derivatives for use in the treatment of interstitial cystitis by injecting drugs into the bladder.

ГК, используемая для получения заявленных производных, может происходить из разных источников, например, добываться путем экстракции из целозии гребенчатой (ЕР 138572), ферментации (например, из стрептококка, ЕР0716688) или биосинтеза (из палочковидных бактерий), т.е. известными для специалистов в этой области способами, и иметь среднюю ММ в диапазоне от 2500 до 3000 кДа для солей ГК и щелочных или щелочноземельных металлов (ГК-ВММ).The HA used to prepare the claimed derivatives may come from various sources, for example, obtained by extraction from celosia comb (EP 138572), fermentation (for example, from streptococcus, EP0716688) or biosynthesis (from rod-shaped bacteria), i.e. known to those skilled in the art, and have an average MW in the range of 2500 to 3000 kDa for HA and alkali or alkaline earth metal (HA-HMW) salts.

Хондроитинсульфат, используемый в настоящем изобретении, имеет среднюю ММ от 10 до 80 кДа и в настоящее время производится способом экстракции из хрящей животных или рыб (акул и китов) (например, ХС, используемый в описанных далее экспериментах, был произведен компанией Seikagaku Kogyo, Токио) и содержит как хондроитин 4-сульфат, так и 6-сульфат в соотношении, которое может изменяться в зависимости от характеристик исходного хряща, использованного для экстракции.The chondroitin sulfate used in the present invention has an average MW of 10 to 80 kDa and is currently produced by an extraction method from animal or fish cartilage (sharks and whales) (for example, the cholesterol used in the experiments described below was produced by Seikagaku Kogyo, Tokyo ) and contains both chondroitin 4-sulfate and 6-sulfate in a ratio that may vary depending on the characteristics of the original cartilage used for extraction.

ХС добавляется к производному ГК и перемешивается в соотношении по массе производное ГК:ХС от 1:0,1 до 1:6, в частности, предпочтение отдается следующим соотношениям: производное ГКCS is added to the HA derivative and mixed in a ratio by weight of HA derivative: CS from 1:0.1 to 1:6, in particular, preference is given to the following ratios: HA derivative

- 3 039966- 3 039966

ВММ:ХС - предпочтительно 1:0,5-1:2, наиболее предпочтительно 1:1.WMM:CS - preferably 1:0.5-1:2, most preferably 1:1.

Новый фармацевтический состав получен путем соединения ХС в порошке или предварительно подготовленном растворе с выбранным производным ГК, последний представлен также в порошковой форме или предварительно разведенным, то есть, в форме геля и/или раствора. В целом, концентрация указанных активных ингредиентов, т.е. производного ГК и ХС, в окончательном составе для производного ГК обычно находится в диапазоне от 10 до 30 мг/мл, предпочтительно от 15 до 20 мг/мл, а для ХС в диапазоне от 10 до 40 мг/мл, предпочтительно от 20 до 30 мг/мл при общем содержании (в мл) производного ГК от 1 до 3 мл в сочетании с ХС в общем объеме также от 1 до 3 мл.A new pharmaceutical composition is obtained by combining cholesterol in powder or pre-prepared solution with the selected HA derivative, the latter is also presented in powder form or pre-diluted, that is, in the form of a gel and / or solution. In general, the concentration of said active ingredients, i. derivative of HA and cholesterol, in the final composition for the derivative of HA is usually in the range from 10 to 30 mg/ml, preferably from 15 to 20 mg/ml, and for cholesterol in the range from 10 to 40 mg/ml, preferably from 20 to 30 mg / ml with a total content (in ml) of the HA derivative from 1 to 3 ml in combination with cholesterol in the total volume also from 1 to 3 ml.

Два указанных компонента необходимо смешивать в течение такого времени, чтобы образовалась равномерная и однородная смесь, поэтому ее необходимо подвергнуть механическому перемешиванию при температуре от 25 до 80°С (в соответствии с выбранным соотношением и типом подготовленного производного) в течение периода времени от 1 до 24 ч; обычно максимум 8-10 ч для перемешивания достаточно.These two components must be mixed for such a time that a uniform and homogeneous mixture is formed, therefore it must be subjected to mechanical mixing at a temperature of from 25 to 80 ° C (according to the selected ratio and type of prepared derivative) for a period of time from 1 to 24 h; usually a maximum of 8-10 hours for mixing is sufficient.

В качестве альтернативного варианта заявитель приводит описание и испрашивает охрану для возможного сочетания двух компонентов (производного ГК и ХС) во время их использования, то есть непосредственно перед введением внутрь мочевого пузыря. Такой тип введения возможен при помощи специальных медицинских/хирургических приборов, которые дают возможность одновременного, но раздельного введения двух компонентов посредством одного устройства. Подготовка производных ГК и ХС выполняется отдельно, поскольку оба компонента смешиваются только непосредственно в месте применения.As an alternative, the Applicant provides a description and seeks protection for a possible combination of the two components (a HA derivative and a cholesterol) during their use, i.e. just before being injected into the bladder. This type of administration is possible with special medical/surgical devices that allow the simultaneous but separate administration of the two components through a single device. The preparation of HA and CS derivatives is carried out separately, since both components are mixed only directly at the site of application.

Для вышеуказанных препаратов предпочтительно использовать буферные растворы, выбранные из следующих: двухосновный фосфорнокислый натрий и одноосновный фосфорнокислый натрий, разведенные в воде с хлоридом натрия, либо обычный хлорид натрия, предпочтительно в концентрации физиологического раствора, при этом рН фармацевтического состава должен быть в пределах от 6,5 до 7,4, а осмотическая концентрация - в диапазоне от 100 до 350 мОс/л. После этого новые препараты с производными ГК/СХ подвергаются стерилизации в соответствии с известными в этой области способами.For the above preparations, it is preferable to use buffer solutions selected from the following: dibasic sodium phosphate and monobasic sodium phosphate, diluted in water with sodium chloride, or ordinary sodium chloride, preferably in saline concentration, while the pH of the pharmaceutical composition should be in the range of 6, 5 to 7.4, and the osmotic concentration is in the range from 100 to 350 mOs / l. After that, new preparations with HA/SC derivatives are subjected to sterilization in accordance with methods known in this field.

Далее приводится неограничивающее описание некоторых примеров приготовления новых фармацевтических составов в соответствии с настоящим изобретением.The following is a non-limiting description of some examples of the preparation of new pharmaceutical compositions in accordance with the present invention.

Пример 1. Состав ГК-ВММ/ХС -1:1.Example 1. Composition GK-VMM/XC -1:1.

Для данного эксперимента использовали натриевую соль производного ГК-ВММ со средней ММ от 2500 до 3000 кДа, полученного согласно ЕР0716688.For this experiment, the sodium salt of the HA-HMW derivative with an average MW of 2500 to 3000 kDa prepared according to EP0716688 was used.

ГК-ВММ в количестве 20 г растворили в 1 л водного буфера с рН 7,4, содержащего одноосновный фосфорнокислый натрий (0,05 г), двухосновный фосфорнокислый натрий (0,6 г) и хлорид натрия (8,5 г). К раствору добавили 20 г ХС (производства Seikagaku Kogyo, Токио) с ММ от 50 до 60 кДа, смесь подвергли механическому перемешиванию при температуре 40°С в течение 8 ч до полного и однородного растворения обоих компонентов.GK-VMM in the amount of 20 g was dissolved in 1 l of an aqueous buffer with a pH of 7.4 containing monobasic sodium phosphate (0.05 g), dibasic sodium phosphate (0.6 g) and sodium chloride (8.5 g). To the solution was added 20 g of CS (manufactured by Seikagaku Kogyo, Tokyo) with MM from 50 to 60 kDa, the mixture was subjected to mechanical stirring at 40°C for 8 hours until both components were completely and homogeneously dissolved.

Смесь охладили до комнатной температуры, после этого при температуре 20°С посредством реометра Thermo Haake Mars II определили модули смеси.The mixture was cooled to room temperature, after which, at a temperature of 20°C, the moduli of the mixture were determined using a Thermo Haake Mars II rheometer.

Значения измерялись в Па при частоте от 0,01 до 100 рад/с и фиксированном уровне нагрузки 10%. Все образцы обрабатывали при помощи программного обеспечения Haake Rheowin Job Manager 4.0.The values were measured in Pa at a frequency of 0.01 to 100 rad/s and a fixed load level of 10%. All samples were processed using Haake Rheowin Job Manager 4.0 software.

Результаты: на фиг. 4 видно, что модуль упругости G' нового состава значительно снижается, в то время как модуль вязкости G остается неизменным.Results: in Fig. 4 shows that the elastic modulus G' of the new composition is significantly reduced, while the viscous modulus G remains unchanged.

Заключение: как указано выше, экспериментальные данные подтверждают, что комбинация ХС с вышеперечисленными испытанными производными ГК приводит к неожиданному снижению модуля упругости в новых составах по сравнению с соответствующими значениями модуля в исходных производных, также подвергнутых анализу, при этом сохранение упомянутого модуля G в целом на том же уровне по сравнению с модулем вязкости исходных производных ГК. Таким образом, был а получена фармацевтическая композиция с реологическими свойствами, характерными для веществ, повышающих вязкость синовиальной жидкости, при этом вязкий компонент увеличивается пропорционально относительно исходного производного. Соответственно, такая комбинация способна обеспечить большую устойчивость к трению, а также большую смазывающую способность для сустава, поэтому ее можно использовать как вязкую смазку, сочетающую в себе высокие противовоспалительные характеристики ХС и противовоспалительные свойства производных ГК, как описано ранее. По этим причинам новые составы можно применять для лечения и/или терапии интерстициального цистита.Conclusion: as stated above, experimental data confirm that the combination of CS with the above tested HA derivatives leads to an unexpected decrease in the elastic modulus in the new formulations compared to the corresponding values of the modulus in the original derivatives also subjected to analysis, while maintaining the said modulus G in general by the same level as compared with the viscosity modulus of the initial HA derivatives. Thus, a pharmaceutical composition was obtained with rheological properties characteristic of substances that increase the viscosity of the synovial fluid, while the viscous component increases in proportion to the original derivative. Accordingly, such a combination is able to provide greater resistance to friction as well as greater lubricity for the joint, so it can be used as a viscous lubricant combining the high anti-inflammatory properties of cholesterol and the anti-inflammatory properties of HA derivatives, as described previously. For these reasons, the novel formulations can be used to treat and/or treat interstitial cystitis.

Claims

CLAIM

1. The use of a viscous pharmaceutical composition containing chondroitin sulfate (CS) in combination with a salt of hyaluronic acid (HA) and alkali or alkaline earth metals with an average molecular weight of 2500 to 3000 kDa in the treatment of interstitial cystitis by intra-bladder administration.

2. The use of a viscous pharmaceutical composition according to claim 1 containing a buffer solution, you

- 4 039966 dibasic sodium phosphate and monobasic sodium phosphate, diluted in an aqueous solution of sodium chloride at a concentration corresponding to the concentration of saline, with a pH of 6.5 to 7.4 and an osmolarity of 100 to 350 mOs/l, and sodium chloride in a saline concentration with a pH of 6.5 to 7.4 and an osmolarity of 100 to 350 mOs/l.