EA006988B1 - Лекарственные средства пролонгированного действия в депо-форме, носители для таких лекарственных средств и способ их получения - Google Patents

Abstract

В изобретении описываются лекарственное средство пролонгированного действия в депо-форме с фармакологическим действующим веществом и носителем, предназначенное прежде всего для парентерального применения, а также носители для лекарственных средств подобного типа и способ получения таких носителей, при этом обеспечивается точно определенное высвобождение действующего вещества в течение предусмотренного промежутка времени и сохранение его фармакологической эффективности. Предлагаемый в изобретении носитель получают из материала, представляющего собой полимер, образованный из соответствующего полипептида и связанного с ним ковалентной связью, биологически разлагаемого сложного полиэфира.

Description

Настоящее изобретение относится к лекарственному средству пролонгированного действия в депоформе с фармакологическим действующим веществом и носителем, прежде всего к лекарственному средству в депо-форме для парентерального применения, а также к носителям для таких лекарственных средств и к способу получения этих носителей.

Лекарственные средства пролонгированного действия в депо-форме, прежде всего предназначенные для парентерального или также перорального применения, приобретают постоянно все возрастающее значение, поскольку они позволяют не только контролировать высвобождение заключенных в носитель действующих веществ в течение продолжительного промежутка времени и достигать тем самым равномерного распределения действующего вещества в плазме крови в организме, но и обеспечивать, кроме этого, возможность целенаправленного применения действующих веществ и защиту не обладающих требуемой устойчивостью действующих веществ.

В качестве носителей уже с давних пор применяется множество различных биологически разлагаемых полимеров, прежде всего сложных полиэфиров, таких, например, как полилактиды и полипептиды, однако всем этим системам присущи существенные недостатки.

Так, в частности, у Я. Мапк и др. в статье Рагеи1ега1е Осро1агхпс|Гогтсп аиГ бет Вакк νοη Ыокдксй аЬЬаиЬагеи Ро1утегеи, опубликованной в Р11агтах1е 46, 1991, сс. 9-18, описаны различные, в принципе приемлемые исходные материалы для получения носителей для лекарственных средств в депо-форме, а именно, сложные полиэфиры и полипептиды.

В последующие годы также появились различные публикации, в которых описывается применение сложных полиэфиров в качестве носителей для фармацевтических действующих веществ и в качестве примера которых можно назвать статью Ь. Меше1 и др. 81аЫ11хшд 1П5иНие-Нке дто^Ш ГасЮг-Ι ίη ро1у(Р,Ь-1ас11бе-со-д1усо11бе) тктокрйегек, опубликованную в 1оитиа1 оГ Сои1то11еб Яе1еа8е 70, 2001, сс. 193-202.

Подобной же проблематике посвящена статья У.8. Ыат и Т.6. Рагк Рго1еш 1оабеб ЬюбедтабаЫе т1сгохрйегех Ьакеб ои РБСА-ргоЮт ЫосопщдаЮУ в 1оиги. МюгоеисаркШабои 16, 1999, сс. 625-637, которые в своей работе применяют материалы на основе сополимеров Ό,Ε-лактида и гликолидов, при этом, в частности, речь идет о прототипе действующего вещества (лизоциме), соединяемом химической связью с полилактидом.

Со смесями желатина и ПЛГ работают 1.К. Ь1 и др. (см. 1оитпа1 оГ Р11агтасеиРса1 8аепсе5 86, 1997, сс. 891-895, А Nονе1 ВюбедгабаЫе 8у51ет Вакеб ои Се1а1ш Ыаиорагбскк аиб Ро1у(1асРб-со-д1усокс ааб) Мкгокрйегек Гог Рго1ет аиб Рерббе Эгид Оектегу. В другой публикации, а именно, в заявке XVО 94/15587, описывается применение ионных молекулярных конъюгатов биоразлагаемых сложных полиэфиров и биологически активных полипептидов.

В заключение можно назвать еще одну публикацию, а именно, статью А. Кокащй и др. СНагасЮпхаРоп аиб ш νίΙΐΌ ге1еа8е оГ те11ю1геха1е Ггот де1а1т/те11ю1геха1е сопщда1е5 Гогтеб иктд бИГегеп! ргерага11оп тапаЫек. опубликованную в 1п1егпа1юпа1 1оигпа1 оГ Рйаттасеибск 204, 2000, сс. 81-89, где описывается применение конъюгатов желатина и метотрексата для получения соответствующих лекарственных средств пролонгированного действия в депо-форме.

Полипептиды в принципе являются материалом, пригодным для применения в качестве биоразлагаемых носителей, однако скорость их растворения, как правило, настолько высока, что после парентерального введения они не обеспечивают достаточной защиты от разложения протеолитическими ферментами, а при пероральном введении происходит почти сразу же высвобождение действующего вещества. Прежде всего пептидные действующие вещества, в качестве носителей для которых используются полипептиды, не могут надежно проходить через желудочно-кишечный тракт, поскольку кислая среда в желудке обусловливает быстрое гидролитическое разложение как носителей, так и действующего вещества. По этой причине, как указывается в литературе, предпочтение отдается нерастворимым полимерам, например полилактидам, в качестве сложных полиэфиров, разлагающихся в водной среде значительно медленнее. Вместе с тем следует отметить, что при биологическом разложении полилактидов образуются протоны в водном растворе, которые могут отрицательно воздействовать на устойчивость фармакологических действующих веществ и прежде всего могут привести к их разложению или к их денатурации.

Для чистых полилактидных частиц характерно ускоренное разложение полимерного материала, которое происходит сначала главным образом внутри частиц (гетерогенное разложение основной массы), поскольку там образуется кислая среда, между которой и окружением отсутствует обмен, вследствие чего возникающая затем внутри частиц более высокая концентрация ионов водорода сщам автокаталитически приводит к дальнейшему ускоренному разложению содержимого полилактидных частиц. Внутри частиц, однако, как правило, находится большая часть действующего вещества, и в результате во время обмена, происходящего между жидкой фазой внутри частицы и окружающей средой, основная часть содержащегося в частице биологически активного вещества под действием присутствующих в высокой концентрации ионов водорода модифицируется или уже до этого момента претерпевает денатурацию.

Данный фактор обусловливает нерегулярное, непрограммируемое высвобождение действующего вещества.

- 1 006988

Исходя из вышеизложенного, в основу настоящего изобретения была положена задача предложить лекарственное средство пролонгированного действия в депо-форме описанного выше типа, которое обеспечивало бы высвобождение действующего вещества в течение определенного, предусматриваемого промежутка времени и которое позволяло бы при этом сохранить фармакологическую эффективность действующего вещества.

Указанную задачу удается решить с помощью описанного выше лекарственного средства пролонгированного действия в депо-форме благодаря тому, что используемый в нем носитель получают из материала, представляющего собой полимер, образованный из полипептида и связанного с ним ковалентной связью, биологически разлагаемого сложного полиэфира.

Согласно изобретению неожиданно было установлено, что применение подобного полимераносителя позволяет, во-первых, добиться высвобождения действующего вещества в течение определенного, точно рассчитанного промежутка времени, заметно превосходящего по своей продолжительности время высвобождения действующих веществ, заключенных в полипептиды, и, во-вторых, практически полностью избежать денатурации самого действующего вещества.

Набухание, разложение и растворение предлагаемого в изобретении полимера-носителя происходит гомогенно. С одной стороны, это создает возможность для непрерывного диффудирования действующего вещества из полимерных частиц, а с другой стороны, это означает, что внутри частицы не может образовываться кислая среда, поскольку эта внутренняя полость частицы непосредственно связана с внешней водной средой и полипептид выполняет одновременно роль буфера.

Полимер-носитель может служить для включения в него фазы действующего вещества, благодаря чему действующее вещество может применяться как бы в инкапсулированном виде или находясь в матрице. Реален и иной подход: полимер-носитель адсорбирует фармакологическое действующее вещество и/или содержит его наподобие хранилища в имеющихся порах.

На долю химически связанного полиэфира в полимере-носителе предпочтительно приходится 1 мол.% или более. Это означает, что в результате взаимодействия полиэфира с полипептидом по меньшей мере 1 мол.% применяемого полиэфира связан химической связью с полипептидом. Не связанные доли полиэфира и/или полипептида могут оставаться в смеси либо в случае каких-то особых требований их можно отделять путем соответствующей переработки. Благодаря содержащемуся в полимере-носителе определенному количеству полиэфира имеется возможность влиять на эффективность депо-формы лекарственного средства, соответственно регулировать промежуток времени, предусматриваемый для высвобождения действующего вещества.

Соотношение по массе между полиэфиром и полипептидом в полимере-носителе варьируется предпочтительно в пределах от 1:99 до 99:1, преимущественно от 30:70 до 99:1. Благодаря варьированию указанного соотношения можно в свою очередь варьировать в широких пределах также скорость разложения полимера-носителя и в соответствии с этим высвобождение действующего вещества.

При каждом из вышеприведенных предельных значений наблюдаются заметные изменения в разложении полимера-носителя по сравнению с соответствующими исходными полимерами. Подобные изменения проявляются, в частности, уже при наличии 1 мас.% полипептида с его буферным действием в процессе разложения полимера-носителя.

Согласно изобретению для обеспечения оптимальной эффективности высвобождения, равно как и защиты фармакологического действующего вещества носителем при использовании в этом качестве полимеров для лекарственных средств в депо-форме уже достаточно, чтобы на долю полипептида приходилось 2 мас.%, прежде всего 3 мас.%. Наиболее предпочтительны полимеры-носители, содержащие полипептид в количестве 10 мас.% и выше.

В качестве сложных полиэфиров рекомендуется использовать прежде всего полигликолиды, сополимеры ΌΈ-лактида и гликолидов, блоксополимеры полиалкиленгликоля и полилактида, блоксополимеры полиалкиленгликоля и ПЛГ, блоксополимеры ПЭО, НПО и ПЛА, блоксополимеры ПЭО и ПЛГ, полиε-капролактамы, стереоизомерные олигомеры лактида, олиголактиды (п>3) или полилактиды.

Полипептид для полимера-носителя предпочтительно выбирать из группы, включающей коллаген, желатин, глобулярные белки и альбумины или другие образующие гидрогели белки, ферменты и продукты разложения белков.

В качестве основы для полипептидов могут применяться коллагеновые материалы, содержащиеся у млекопитающих, и продукты их разложения, прежде всего желатин, такой, например, как желатин крупного рогатого скота, свиной желатин, овечий желатин, а также желатин птицы и рыбный желатин. Вполне очевидной является и пригодность для указанных целей белковых материалов, полученных методами генной инженерии, таких как желатин, коллаген или коллагеновые фрагменты, в том числе и прежде всего таковые, которые получены на растительной основе и возможность применения которых в будущем широко обсуждается в связи с проблемой губкообразной энцефалопатии крупного рогатого скота. В равной мере приемлемы и полипептиды, модифицированные химическим и/или ферментативным путем.

Желатин может иметь число Блума в пределах от 30 до 320 или может быть гидролизован и получен кислотным способом (тип А) либо щелочным способом (тип Б) или под действием соответствующих давления и температуры или же ферментативным путем.

- 2 006988

В качестве дополнительного компонента полимеров-носителей пригодны обычные пластификаторы, буферные вещества, поверхностно-активные вещества, липиды и порообразователи.

К особенно предпочтительным относятся полимеры-носители, где соединение полипептида и полиэфира осуществляется через свободную гидроксильную функциональную группу полиэфира с реакционноспособной группой полипептида.

В качестве альтернативы или же в дополнение к вышеописанному варианту полипептид и полиэфир можно соединять через свободную карбоксильную функциональную группу полиэфира либо после окисления гидроксильной функциональной группы до карбонильной группы через эту последнюю с реакционноспособной группой полипептида. Предпочтительной реакционноспособной группой полипептида является функциональная аминогруппа.

С учетом предпочтительного подхода к соединению полипептида и полиэфира преимущество следует отдать лизинсодержащим полипептидам, при этом исключительно высоких результатов достигают в тех случаях, когда содержание лизиновых групп, необязательно в том числе и модифицированных лизиновых групп, составляет, например, 3%.

Изобретение относится далее к способу получения носителя для лекарственных средств пролонгированного действия в депо-форме, который отличается тем, что на первой стадии получают соответствующий сложный полиэфир с активированными гидроксильными группами, а на второй стадии добавляют соответствующий полипептид и осуществляют взаимодействие между его реакционноспособными группами и активированными гидроксильными группами полиэфира с образованием ковалентной связи. При этом образуется новый блоксополимер, который эффективно и без проблем может применяться в качестве носителя для лекарственных средств пролонгированного действия в депо-форме.

Активацию гидроксильной группы полиэфира проводят таким образом, чтобы затем перевести ее в беспроблемную уходящую группу.

В качестве полиэфира пригоден широкий спектр соединений с различной молекулярной массой (например, от 2000 до 300000), в том числе и прежде всего самые разные поли(И,Ь-лактиды) или сополимеры И,Ь-лактида и гликолидов.

Для названных последними полиэфиров характерна возможность использовать гликолевую кислоту, а также И- или Ь-молочную кислоту в самых разных их соотношениях. В равной мере пригодны для использования в качестве исходного материала полиэфиры с модифицированными сложноэфирными концевыми группами, полиалкиленгликоли, блоксополимеры полипропиленоксида, полиэтиленоксида, полилактида и согликолида (ППО-ПЭО-ПЛГ-сополимеры), а также различные комбинации этих полимеров.

Среди реагентов, пригодных для активации гидроксильной группы полиэфира, можно назвать, например, η-толуолсульфонилхлорид, метансульфонилхлорид, η-бромбензолсульфонилхлорид, пнитробензолсульфонилхлорид, трифторметансульфонилхлорид и другие хорошо известные специалистам реагенты, используемые для образования беспроблемных уходящих групп, но при этом следует учитывать, что поскольку большинство подобных реагентов склонно вступать во взаимодействие с водой, реакцию необходимо проводить в сухом (обезвоженном) органическом растворителе и при этом наиболее целесообразно в атмосфере азота. В качестве растворителя приемлемы тетрагидрофуран, дихлорметан, хлороформ и другие.

Для улавливания высвобождающихся во время реакции ионов водорода к реакционной смеси можно добавлять различные основания, такие, например, как диэтиламин, триэтиламин, основание Хюнига, пиридин, 2,6-ди(трет-бутил)-4-метилпиридин и другие. Образующийся в результате продукт выделяют обычным образом. В рассматриваемом случае рекомендуется применять полипептиды из числа вышеназванных и прежде всего те из них, которые способствуют образованию гидрогелей, таких, например, как желатин.

Для более надежного регулирования реакционной способности активированного полиэфира активированную группу можно трансформировать в соответствующее галогенидное соединение. В этих целях рекомендуется модифицированная реакция Финкельштайна с возможностью получения при этом соответствующих иодидных или бромидных соединений. Галогенидные соединения могут быть получены, кроме того, непосредственно из гидроксильной группы с использованием, например, тионилхлорида, более чувствительного трифенилфосфиндибромида или трифенилфосфина в СС1₄.

Активированный полиэфир может теперь вступить в реакцию с любой нуклеофильной группой полипептида, например с аминогруппами или гидроксильными группами. Данную реакцию проводят в соответствующем полярном растворителе (например ДМФ или ДМСО) либо в смесях растворителей, таких, например, как этилацетат/вода, ацетон/вода, ТГФ/вода, СНС1₃/вода и СН₂С1₂/вода.

Температура реакции и продолжительность реакции могут варьироваться в зависимости от реакционной способности используемых реагентов. По завершении реакции растворитель выпаривают и продукт подвергают дальнейшей сушке с получением в результате белого или слегка окрашенного в желтоватый цвет порошка.

Наличие нового соединения выявляли с помощью ИК-спектроскопии и спектроскопии в ближней ИК-области и дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), при этом можно установить, что

- 3 006988 продукт имеет новую температуру стеклования. Кроме того, растворимость продукта полностью отличается от этого показателя исходных материалов.

Нижеуказанные, а также другие преимущества изобретения более подробно поясняются на примерах.

Примеры

Пример 1. Активация гидроксильных групп полиэфирного компонента

В сухой реакционной колбе вместимостью 50 мл в атмосфере азота растворяют 3,4 г продукта Яе8отет ЯС503Н (сополимер Ό,Γ-лактида и гликолида с молекулярной массой 34000, температура стеклования 49,9°С, фирма Воейпидет 1иде1йе1т) в 10 мл сухого дихлорметана, вместо которого с тем же примерно успехом можно использовать и другие растворители, такие как ТГФ, СНС1₃ и этилацетат. Затем к раствору добавляют 104 мг триэтиламина (после сушки над КОН). Полученную смесь в течение 15 мин охлаждают до 0°С и затем с помощью шприца к ней добавляют 114 мг метансульфонилхлорида. Далее реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре и для последующего гидролиза сливают ее в смесь льда с водой. Водную фазу трижды экстрагируют дихлорметаном, а объединенные органические фазы промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия. После экстракции органическую фазу сушат над сульфатом магния. Растворитель выпаривают, а при возможном наличии остатков растворителя их удаляют в высоком вакууме.

Реакция сочетания полиэфирного компонента с полипептидом

Свежеприготовленный активированный полиэфирный компонент растворяют в 20 мл хлороформа и добавляют к 20 мл водного раствора 3,7 г желатина, полученного из свиной кожи (с высоким числом Блума, тип А, температура стеклования 67,9°С). Эту смесь перемешивают сначала в течение 6 ч при температуре 55 °С (температура масляной бани), а затем в течение ночи при комнатной температуре. При возможности использовать роторный испаритель с его помощью выпаривают растворитель. Остаток воды удаляют в эксикаторе, содержащем сушильный агент.

Непрореагировавший ПЛГ удаляют путем экстракции метиленхлоридом. Нерастворимый остаток сушат в вакууме, после чего растворяют в ДМСО. Предлагаемый в изобретении продукт при этом растворяется. Затем содержащий этот продукт ДМСО-раствор подвергают распылительной сушке. В зависимости от особенностей такой сушки получают сферические частицы диаметром от 1 до 10 мкм.

Соотношение полиэфира и полипептида в предлагаемом в изобретении продукте составляет 99:10, а температура стеклования продукта равна 55,9°С.

Для определения температуры стеклования все исследуемые материалы предварительно выдерживали при 25°С и 25% относительной влажности.

Характеристики предлагаемого в изобретении продукта согласно данным ИК-спектроскопии и спектроскопии в ближней ИК-области заметно отличаются от соответствующих показателей как исходных соединений, так и от наложенных друг на друга спектров исходных веществ.

В отличие от исходного желатина предлагаемый в изобретении продукт обладает 100%-ной растворимостью в ДМСО. В остальных же обычных растворителях, таких как спирты, ацетон (кетоны), простые эфиры и вода, продукт нерастворим.

Благодаря выбору типа полиэфира, длины его цепи и соотношения между желатином и долей полиэфира в предлагаемом в изобретении продукте, равно как и типа концевых групп полиэфира кинетика разложения может варьироваться в широких пределах. В определенной степени на кинетику разложения предлагаемого в изобретении продукта можно воздействовать также соответствующим выбором желатина.

Пример 2.

Аналогичным примеру 1 путем подвергают обменной реакции различные полиэфирные компоненты, а именно: ПЛГ, ПЛА и сополимеры ППО, ПЭО и ПЛГ с различными соотношениями двух полимерных групп. Реакция во всех случаях завершалась успешно, независимо от изготовителя соответствующего полиэфирного компонента (в экспериментах использовались соединения фирм Воейпидет 1иде1йе1т, МебЕотр и Уако).

Результаты касательно выхода предлагаемого в изобретении продукта сравнимы с таковыми, полученными в примере 1.

Пример 3.

Для активации гидроксильной функции полиэфирного компонента использовали итолуолсульфонилхлорид, при этом в сравнении с примером 1 работают по упрощенной технологии:

В реакционном сосуде вместимостью 50 мл растворяют 3,4 г продукта Яекотет ЯС503Н в 10 мл дистиллированного дихлорметана. К этому раствору добавляют 104 мг триэтиламина (аналитической степени чистоты). Затем полученную смесь в течение 15 мин охлаждают до 0°С и добавляют к ней 190 мг и-толуолсульфонилхлорида. Далее реакционную смесь в течение 1 ч перемешивают при комнатной температуре и для последующего гидролиза сливают в смесь льда с водой. Водную фазу трижды экстрагируют дихлорметаном, а объединенные после экстракции органические фазы промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. После промывки раствором бикарбоната натрия органическую

- 4 006988 фазу сушат над сульфатом магния, растворитель выпаривают, а остатки растворителя удаляют в высоком вакууме.

Преимущество этой технологии заключается в том, что при работе нет необходимости исключать доступ воды.

Свежеприготовленный активированный полиэфирный компонент растворяют в 20 мл хлороформа и к раствору добавляют 20 мл водного раствора 3,7 г желатина, полученного из свиной кожи (тип А). Эту смесь перемешивают сначала в течение 6 ч при температуре 55°С (температура масляной бани), а затем в течение ночи при комнатной температуре. При возможности использовать роторный испаритель с его помощью выпаривают растворитель. Остаток воды удаляют в эксикаторе, содержащем сушильный агент. Свойства полученного продукта аналогичны его свойствам в примере 1.

Пример 4.

В сухой колбе вместимостью 50 мл в атмосфере азота растворяют 3,4 г продукта Кекотег К.О503Н в 10 мл сухого дихлорметана. К этому раствору добавляют 104 мг триэтиламина (после сушки над КОН). Полученную смесь в течение 15 мин охлаждают до 0°С и затем с помощью шприца добавляют к ней 114 мг метансульфонилхлорида. Далее реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре и для последующего гидролиза сливают ее в смесь льда с водой. Водную фазу трижды экстрагируют дихлорметаном, а объединенные органические фазы промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия. После промывки органической фазы ее сушат над сульфатом магния. Растворитель выпаривают, а остатки растворителя удаляют в высоком вакууме.

В отличие от технологии, описанной в примере 1, в рассматриваемом варианте по модифицированной реакции Финкельштайна полиэфирный компонент с активированными гидроксильными группами (в данном случае трансформированными в сульфонатные группы) превращают в иодид или бромид за счет того, что соединение просто перемешивают с избытком иодида натрия, соответственно бромида лития в сухом ацетоне в качестве растворителя. После однодневного перемешивания смеси (при комнатной температуре) ее отфильтровывают, а ацетон из полученного продукта удаляют.

Такая реакция Финкельштайна позволяет влиять на реакционную способность компонентов и тем самым на степень их превращения при реакции сочетания.

Реакция сочетания полиэфирного компонента с полипептидным компонентом

Свежеприготовленный полиэфирные компонент (см. выше) растворяют в 20 мл хлороформа и к этому раствору добавляют 20 мл водного раствора 3,7 г желатина, полученного из свиной кожи (тип А). Альтернативными растворителями в данном случае могут служить, например, вода/дихлорметан (в соотношении 1:1), вода/этилацетат (в соотношении 1:1), ДМФ и ДМСО. Полученную смесь перемешивают сначала в течение 6 ч при 55°С (температура масляной бани), а затем в течение ночи при комнатной температуре. При возможности использовать роторный испаритель с его помощью выпаривают растворитель. Остатки воды удаляют в эксикаторе, содержащем сушильный агент.

Пример 5.

В рассматриваемом варианте работают по технологии, аналогичной примеру 1, с тем, однако, отличием, что вместо желатина из свиной кожи типа А используют желатин типа Б, полученный из костей или кожи крупного рогатого скота. Реакцию сочетания полипептидного компонента и полиэфирного компонента проводят по той же методике, что и описанную выше.

Пример 6.

В рассматриваемом варианте применяют тот же метод получения продукта, что и в примере 1, с тем, однако, отличием, что в реакции сочетания полипептидного компонента с активированным полиэфирным компонентом используют гидролизованный ферментативным путем желатин (Ое1йа-Со11аде1® А).

Пример 7.

В рассматриваемом варианте применяют тот же метод получения продукта, что и в примере 1, с тем, однако, отличием, что в реакции сочетания полипептидного компонента с активированным полиэфиром используют гидролизат желатина (гидролизованный ферментативным путем желатин, такой, например, как Ое1йа-8о1® Э/8о1 ΌΑ и другие).

Пример 8.

В рассматриваемом варианте применяют тот же метод получения продукта, что и в примере 1, с тем, однако, отличием, что в качестве полипептидного компонента для реакции сочетания с активированным полиэфиром используют овальбумин (яичный белок).

Пример 9.

В рассматриваемом варианте применяют тот же метод получения продукта, что и в примере 1, с тем, однако, отличием, что реакцию сочетания активированного полиэфирного компонента с полипептидом проводят в основном растворе. Основность реакционной среды способствует повышению активности компонентов и сокращает тем самым продолжительность реакции.

В другом варианте можно также применять метод получения продукта, аналогичный примеру 1, с тем, однако, отличием, что реакцию сочетания активированного полиэфирного компонента с полипептидным компонентом проводят в кислом растворе. Благодаря кислой среде, в которой протекает реакция, ее продолжительность снижается.

- 5 006988

Пример 10.

В рассматриваемом варианте применяют тот же метод получения продукта, что и в примере 1, с тем, однако, отличием, что реакцию сочетания активированного полиэфирного компонента с полипептидным компонентом проводят при комнатной температуре при более длительной по сравнению с примером 4 продолжительности реакции.

В другом варианте можно также применять метод получения продукта, аналогичный примеру 1, с тем, однако, отличием, что реакцию сочетания активированного полиэфирного компонента с полипептидным компонентом проводят при температуре перегонки реакционной смеси при соответственно сниженной продолжительности реакции.

Пример 11.

В данном примере описывается введение действующего вещества в носитель, что иллюстрирует тем самым получение лекарственного средства пролонгированного действия в депо-форме, при этом в качестве действующего вещества-модели используют фермент лизоцим и определяют как кинетику высвобождения, так и активность высвобождаемого действующего вещества.

Действующее вещество-модель лизоцим в количестве 10 мас.%, в пересчете на общее содержание твердого вещества в используемом при переработке реакционного продукта в реакции сочетания в примере 1 ДМСОрастворе, вводят в этот раствор, после чего раствор аналогично тому, как это описано в примере 1, подвергают распылительной сушке. Полученные таким путем частицы содержат лизоцим соответственно в количестве 10 мас.%.

Разложение предлагаемого в изобретении полимера-носителя и тем самым также высвобождение действующего вещества лизоцима определяли в изотоническом РВ8-растворе (физиологическом растворе с фосфатным буфером) с гидролазами сыворотки при температуре 37°С и значении рН 7,4.

На чертеже показаны три кривые высвобождения действующего вещества-модели лизоцима из микрочастиц, состоящих из полипептида () (желатин типа А с высоким числом Блума, температура стеклования 67,9°С), полиэфира (▲) (продукт Рсютсг КС503Н) и предлагаемого в изобретении полимера-носителя ♦), которое отслеживали в течение 28 дней. К трем типам полимеров добавляли, как указано выше, 10 мас.% лизоцима в качестве действующего вещества-модели.

Полипептид (желатин) характеризуется практически немедленным 100%-ным высвобождением действующего вещества лизоцима в представленном масштабе времени.

Высвобождение же лизоцима из полиэфира еще не завершено полностью даже по истечении 28 дней. С увеличением продолжительности инкубации наблюдается прогрессирующая инактивация действующего вещества и постепенная стагнация высвобождения.

Высвобождение действующего вещества из предлагаемого в изобретении полимера-носителя, описанного в примере 1, происходит исключительно равномерно в течение 5 дней без какого-либо отрицательного воздействия на действующее вещество. Сравнимые показатели высвобождения получают также при использовании предлагаемых в изобретении носителей, полученных в примерах 2-10.

Claims (20)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Лекарственное средство пролонгированного действия в депо-форме с фармакологическим действующим веществом и носителем, предназначенное прежде всего для парентерального применения, отличающееся тем, что носитель получен из материала, представляющего собой полимер, образованный из полипептида и связанного с ним ковалентной связью, биологически разлагаемого сложного полиэфира.
2. 2. Лекарственное средство по п.1, отличающееся тем, что соотношение по массе между полиэфирным компонентом и полипептидным компонентом составляет от 1:99 до 99:1.
3. 3. Лекарственное средство по п.1 или 2, отличающееся тем, что соотношение по массе между полиэфирным компонентом и полипептидным компонентом составляет от 30:70 до 99:1.
4. 4. Лекарственное средство по одному из пп.1-3, отличающееся тем, что полиэфир выбран из группы, включающей полигликолиды, сополимеры Ό,Ε-лактида и гликолидов, блоксополимеры полиалкиленгликоля и полилактида, блоксополимеры полиалкиленгликоля и ПЛГ, блоксополимеры НПО, ПЭО и ПЛА, блоксополимеры НПО и ПЛА, блоксополимеры НПО и ПЛГ, блоксополимеры ПЭО и ПЛГ, полиε-капролактамы, стереоизомерные олигомеры лактида, олиголактиды (п>3) и полилактиды.
5. 5. Лекарственное средство по одному из пп.1-4, отличающееся тем, что полипептид выбран из группы, включающей коллаген, желатин, глобулярные белки, а также другие образующие гидрогели белки, ферменты и продукты разложения белков, которые могут быть модифицированы химическим и/или ферментативным путем.
6. 6. Лекарственное средство по одному из пп.1-5, отличающееся тем, что полипептид и полиэфир соединены между собой через свободную функциональную гидроксигруппу полиэфира и реакционноспособную группу полипептида.
7. 7. Лекарственное средство по одному из пп.1-6, отличающееся тем, что полипептид и полиэфир соединены между собой через свободную функциональную карбоксильную группу полиэфира или через

   - 6 006988 полученную окислением гидроксильной функции функциональную карбонильную группу и реакционноспособную группу полипептида.
8. 8. Лекарственное средство по п.6 или 7, отличающееся тем, что реакционноспособной группой полипептида является функциональная аминогруппа.
9. 9. Способ получения носителя для лекарственных средств пролонгированного действия в депоформе, отличающийся тем, что полиэфирный компонент подвергают взаимодействию с активирующим агентом для перевода гидроксильных групп этого полиэфирного компонента в активированную форму, добавляют полипептидный компонент и реакционноспособным группам полипептида дают прореагировать с активированными гидроксильными группами полиэфира с образованием ковалентных связей.
10. 10. Способ по п.9, отличающийся тем, что гидроксильные группы с помощью активирующего агента превращают в оптимальные уходящие группы.
11. 11. Способ по п.9 или 10, отличающийся тем, что полиэфирный компонент выбирают из группы, включающей полигликолиды, сополимеры Э,Ь-лактида и гликолидов, блоксополимеры полиалкиленгликоля и полилактида, блоксополимеры полиалкиленгликоля и ПЛГ, блоксополимеры ППО, ПЭО и ПЛА, блоксополимеры ППО и ПЛА, блоксополимеры ППО и ПЛГ, блоксополимеры ПОЭ и ПЛГ, поли-εкапролактамы, стереоизомерные олигомеры лактида, олиголактиды (п>3) и полилактиды.
12. 12. Способ по одному из пп.9-11, отличающийся тем, что полипептидный компонент выбирают из группы, включающей коллаген, желатин, глобулярные белки, а также другие образующие гидрогели белки, ферменты и продукты разложения белков.
13. 13. Способ по одному из пп.9-12, отличающийся тем, что активирующий агент выбирают из группы, включающей η-толуолсульфонилхлорид, метансульфонилхлорид, η-бромбензолсульфонилхлорид, пнитробензолсульфонилхлорид и трифторметансульфонилхлорид.
14. 14. Способ по одному из пп.9-13, отличающийся тем, что стадию по активации гидроксильных групп полиэфирного компонента проводят в растворителе, выбранном из группы, включающей тетрагидрофуран, дихлорметан, хлороформ и любые смеси названных растворителей.
15. 15. Способ по п.14, отличающийся тем, что растворители используют после их обезвоживания, а стадию по активации гидроксильных групп проводят в атмосфере защитного газа, прежде всего в атмосфере азота.
16. 16. Способ по п.15, отличающийся тем, что на стадии по активации гидроксильных групп к реакционной смеси добавляют основный агент для улавливания высвобождающихся ионов водорода.
17. 17. Способ по п.16, отличающийся тем, что основный агент выбирают из группы, включающей диэтиламин, триэтиламин и основание Хюнига.
18. 18. Способ по одному из пп.9-17, отличающийся тем, что до осуществления взаимодействия между полиэфирным компонентом и полипептидным компонентом полиэфирный компонент с его активированными гидроксильными группами подвергают модифицированной реакции Финкельштайна с целью перевода активированных гидроксильных групп в галогенидные группы.
19. 19. Способ по одному из пп.9-18, отличающийся тем, что взаимодействие между полиэфирным компонентом и полипептидным компонентом проводят в полярном растворителе, выбранном из группы, включающей ДМФ, ДМСО и смеси растворителей, таких, например, как этилацетат/вода, ацетон/вода, ТГФ/вода, СНС1₃/вода и СН₂С1₂/вода.
20. 20. Блоксополимер сложного полиэфира и полипептида, получаемый способом по одному из предыдущих пунктов.