DK172934B1 - Glykkopeptid-antibiotikum betegnet deacyl A 40926 antibiotikum og farmaceutisk acceptable additionssalte deraf, - Google Patents
Glykkopeptid-antibiotikum betegnet deacyl A 40926 antibiotikum og farmaceutisk acceptable additionssalte deraf, Download PDFInfo
- Publication number
- DK172934B1 DK172934B1 DK198803126A DK312688A DK172934B1 DK 172934 B1 DK172934 B1 DK 172934B1 DK 198803126 A DK198803126 A DK 198803126A DK 312688 A DK312688 A DK 312688A DK 172934 B1 DK172934 B1 DK 172934B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- antibiotic
- deacyl
- factor
- aglycone
- actinoplanes
- Prior art date
Links
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title claims description 56
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 title claims description 28
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 title description 3
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 title description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 7
- BEVDFPMXVNOQBI-AXNWEOKVSA-N (19R,22R,34S,37R,40R,52S)-64-[(2S,3R,4R,5S,6S)-3-amino-6-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-2-yl]oxy-5,32-dichloro-2,26,31,49-tetrahydroxy-22-(methylamino)-21,35,38,54,56,59-hexaoxo-47-[(2R,3S,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-7,13,28-trioxa-20,36,39,53,55,58-hexazaundecacyclo[38.14.2.23,6.214,17.219,34.18,12.123,27.129,33.141,45.010,37.046,51]hexahexaconta-3,5,8,10,12(64),14(63),15,17(62),23(61),24,26,29(60),30,32,41,43,45(57),46(51),47,49,65-henicosaene-52-carboxylic acid Chemical compound CN[C@@H]1c2ccc(O)c(Oc3cc(O)c(Cl)c(c3)[C@@H]3NC(=O)[C@@H](Cc4ccc(Oc5cc6cc(Oc7ccc(cc7Cl)C(O)C7NC(=O)[C@H](NC(=O)[C@@H]6NC3=O)c3cccc(c3)-c3c(O[C@H]6O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]6O)cc(O)cc3[C@H](NC7=O)C(O)=O)c5O[C@@H]3O[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H]3N)C(O)=O)cc4)NC1=O)c2 BEVDFPMXVNOQBI-AXNWEOKVSA-N 0.000 claims description 139
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 43
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 34
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 241000187843 Actinoplanes missouriensis Species 0.000 claims description 27
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 24
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 20
- 241000187844 Actinoplanes Species 0.000 claims description 17
- -1 α-D-mannopyranosyl Chemical group 0.000 claims description 14
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 13
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 12
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims description 11
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 9
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 8
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 8
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 7
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 7
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 6
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 241000187842 Actinoplanes teichomyceticus Species 0.000 claims description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 claims description 5
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 claims description 5
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 claims description 5
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 claims description 5
- LXMSZDCAJNLERA-ZHYRCANASA-N spironolactone Chemical compound C([C@@H]1[C@]2(C)CC[C@@H]3[C@@]4(C)CCC(=O)C=C4C[C@H]([C@@H]13)SC(=O)C)C[C@@]21CCC(=O)O1 LXMSZDCAJNLERA-ZHYRCANASA-N 0.000 claims description 5
- OZRCMOFRVFRZQV-QDQPNEQZSA-N (2s,3s,4s,5r)-6-amino-2,3,4,5-tetrahydroxy-6-oxohexanoic acid Chemical compound NC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O OZRCMOFRVFRZQV-QDQPNEQZSA-N 0.000 claims description 4
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 claims description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 claims description 4
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- 230000020176 deacylation Effects 0.000 claims description 2
- 238000005947 deacylation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 claims description 2
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 claims description 2
- 230000001175 peptic effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 claims description 2
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-O vancomycin(1+) Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C([O-])=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)[NH2+]C)[C@H]1C[C@](C)([NH3+])[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-O 0.000 claims 2
- 125000000088 alpha-mannosyl group Chemical group C1([C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 claims 1
- 230000013707 sensory perception of sound Effects 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 12
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 abstract description 9
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 abstract description 7
- DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N teicoplanin aglycone Chemical compound N([C@H](C(N[C@@H](C1=CC(O)=CC(O)=C1C=1C(O)=CC=C2C=1)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)OC=1C=C3C=C(C=1O)OC1=CC=C(C=C1Cl)C[C@H](C(=O)N1)NC([C@H](N)C=4C=C(O5)C(O)=CC=4)=O)C(=O)[C@@H]2NC(=O)[C@@H]3NC(=O)[C@@H]1C1=CC5=CC(O)=C1 DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N 0.000 abstract description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 abstract 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Inorganic materials [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 19
- 239000002585 base Substances 0.000 description 17
- 102000003712 Complement factor B Human genes 0.000 description 15
- 108090000056 Complement factor B Proteins 0.000 description 15
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 15
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 13
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 9
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 9
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 9
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 9
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 9
- LCTCUBQFWLTHNS-MDZDMXLPSA-N 61036-64-4 Chemical compound CCCCC\C=C\CCC(=O)NC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC(C(=C1)OC=2C(=CC(=CC=2)C(OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)NC(C)=O)C2C(NC(C3=CC(O)=CC(OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)=C3C=3C(O)=CC=C(C=3)C(NC3=O)C(=O)N2)C(=O)OC)=O)Cl)=C(OC=2C(=CC(=CC=2)C(O)C(C(N2)=O)NC(=O)C(N)C=4C=C(O5)C(O)=CC=4)Cl)C=C1C3NC(=O)C2C1=CC(O)=C(C)C5=C1 LCTCUBQFWLTHNS-MDZDMXLPSA-N 0.000 description 7
- 108700025264 A 40926 aglycone Proteins 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 7
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 7
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- 108700001961 teicoplanin A2 Proteins 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 6
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 6
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 6
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 6
- 241000828260 Actinoplanes teichomyceticus ATCC 31121 Species 0.000 description 5
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- DEFJQIDDEAULHB-QWWZWVQMSA-N D-alanyl-D-alanine Chemical compound C[C@@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C)C([O-])=O DEFJQIDDEAULHB-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 5
- DEFJQIDDEAULHB-UHFFFAOYSA-N N-D-alanyl-D-alanine Natural products CC(N)C(=O)NC(C)C(O)=O DEFJQIDDEAULHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010056243 alanylalanine Proteins 0.000 description 5
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 5
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 5
- 125000000311 mannosyl group Chemical group C1([C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 5
- YRMCBQLZVBXOSJ-PCFSSPOYSA-N (e)-3-[(6r,6as)-4-hydroxy-6-methoxy-3-methyl-11-oxo-5,6,6a,7-tetrahydropyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-yl]prop-2-enamide Chemical compound CO[C@H]1NC2=C(O)C(C)=CC=C2C(=O)N2C=C(\C=C\C(N)=O)C[C@@H]12 YRMCBQLZVBXOSJ-PCFSSPOYSA-N 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 4
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 4
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 4
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 4
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000187361 Actinomadura sp. Species 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 3
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 3
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 3
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 3
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N Dimethylamine Chemical compound CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000610640 Homo sapiens U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Proteins 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101001110823 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-A Proteins 0.000 description 2
- 101000712176 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-B Proteins 0.000 description 2
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 2
- 102100040374 U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Human genes 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000202921 Ureaplasma urealyticum Species 0.000 description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 description 2
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004460 liquid liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000006877 oatmeal agar Substances 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 2
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-N phthalic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C(O)=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- AXVIQHWRLSFEAC-IWBQZKFYSA-N (2s,3s,4s,5s)-2,3,4,5,6-pentahydroxy-7-oxooctanal Chemical group CC(=O)C(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O AXVIQHWRLSFEAC-IWBQZKFYSA-N 0.000 description 1
- DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 1-butoxybutane Chemical compound CCCCOCCCC DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RTBFRGCFXZNCOE-UHFFFAOYSA-N 1-methylsulfonylpiperidin-4-one Chemical compound CS(=O)(=O)N1CCC(=O)CC1 RTBFRGCFXZNCOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OAWAZQITIZDJRB-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-2,2-difluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)Cl OAWAZQITIZDJRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BSKHPKMHTQYZBB-UHFFFAOYSA-N 2-methylpyridine Chemical compound CC1=CC=CC=N1 BSKHPKMHTQYZBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004925 Acrylic resin Substances 0.000 description 1
- 229920000178 Acrylic resin Polymers 0.000 description 1
- 241000187362 Actinomadura Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LSPHULWDVZXLIL-UHFFFAOYSA-N Camphoric acid Natural products CC1(C)C(C(O)=O)CCC1(C)C(O)=O LSPHULWDVZXLIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- 206010009657 Clostridium difficile colitis Diseases 0.000 description 1
- 241000193468 Clostridium perfringens Species 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- DSLZVSRJTYRBFB-UHFFFAOYSA-N Galactaric acid Natural products OC(=O)C(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O DSLZVSRJTYRBFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910003556 H2 SO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SUAKHGWARZSWIH-UHFFFAOYSA-N N,N‐diethylformamide Chemical compound CCN(CC)C=O SUAKHGWARZSWIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 208000003100 Pseudomembranous Enterocolitis Diseases 0.000 description 1
- 206010037128 Pseudomembranous colitis Diseases 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- TUCNEACPLKLKNU-UHFFFAOYSA-N acetyl Chemical compound C[C]=O TUCNEACPLKLKNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 125000002723 alicyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910000272 alkali metal oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910001860 alkaline earth metal hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000005215 alkyl ethers Chemical class 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005360 alkyl sulfoxide group Chemical group 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N anhydrous glutaric acid Natural products OC(=O)CCCC(O)=O JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019728 animal nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- 238000010533 azeotropic distillation Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- RQPZNWPYLFFXCP-UHFFFAOYSA-L barium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ba+2] RQPZNWPYLFFXCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910001863 barium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N benzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- LSPHULWDVZXLIL-QUBYGPBYSA-N camphoric acid Chemical compound CC1(C)[C@H](C(O)=O)CC[C@]1(C)C(O)=O LSPHULWDVZXLIL-QUBYGPBYSA-N 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical compound OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 description 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- CCAFPWNGIUBUSD-UHFFFAOYSA-N diethyl sulfoxide Chemical compound CCS(=O)CC CCAFPWNGIUBUSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- POLCUAVZOMRGSN-UHFFFAOYSA-N dipropyl ether Chemical compound CCCOCCC POLCUAVZOMRGSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000006052 feed supplement Substances 0.000 description 1
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 1
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- DSLZVSRJTYRBFB-DUHBMQHGSA-N galactaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(O)=O DSLZVSRJTYRBFB-DUHBMQHGSA-N 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229940047650 haemophilus influenzae Drugs 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N hydrogen bromide Substances Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000042 hydrogen bromide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000043 hydrogen iodide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-M iodide Chemical compound [I-] XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910001862 magnesium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WLJNZVDCPSBLRP-UHFFFAOYSA-N pamoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC=3C4=CC=CC=C4C=C(C=3O)C(=O)O)=C(O)C(C(O)=O)=CC2=C1 WLJNZVDCPSBLRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 150000003016 phosphoric acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000003880 polar aprotic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003586 protic polar solvent Substances 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 208000013223 septicemia Diseases 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- ILJSQTXMGCGYMG-UHFFFAOYSA-N triacetic acid Chemical compound CC(=O)CC(=O)CC(O)=O ILJSQTXMGCGYMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K9/006—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence being part of a ring structure
- C07K9/008—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence being part of a ring structure directly attached to a hetero atom of the saccharide radical, e.g. actaplanin, avoparcin, ristomycin, vancomycin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
DK 172934 Bi i
Antibiotikum A 40926 er et glykopeptidisk anti-' biotikum som er blevet isoleret fra en kultur af Acti- nomadura, betegnet Actinomadura sp. ATCC 39727. Det er et kompleks hvis faktorer er blevet benævnt faktor A, 5 faktor B, faktor Bq, faktor PA og faktor PB. Det er beskrevet i EP-publikation A-177.882.
Antibiotikum A 40926 kan omdannes til de tilsvarende N-acylaminoglukuronyl-aglykonderivater ved sur hydrolyse under kontrollerede betingelser som beskrevet 10 i EP 86.117.452.
Antibiotikum A 40926 kompleks, faktorerne deraf, det tilsvarende N-acylaminoglukuronyl-aglykonkompleks og faktorer deraf er virksomme i hovedsagen mod grampositive bakterier og arter af Neisseria.
15 Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte aeacyl-derivater af de ovennævnte forbindelser, der tilfælles har det træk at de indeholder en stor N-acylaminoglukuronylgruppe bundet til en peptidisk mole-kyldel via en O-glykosidisk binding. De betegnes deacyl-20 antibiotikum A 40926, deacylantibiotikum A 40926 P og antibiotikum A 4 0926 aminoglukuronyl-aglykon, og er kendetegnet ved at have nedenstående formel I (hvor nummeringen er analog med den der er foreslået af J. Williams et al. i J. Am. Chem. Soc., 106, 4895-4908 (1984) for andre gly-25 kopeptidiske antibiotika);
Cl OA
z6 brΑ^°γ^γ0ν^ z2
HO H JL 6 J 4 i 1 2 j H
H0 fUb z2 n ox5 H i ? H ^v-h 9 30 o /f\ ah/n\ Å ΑΐΑΝ\ X A /nhch3 hn "CC όχ4” 1 °ν^/γ C1
35 ^ &o°H H0 0H
/ ' B
HO 1 > 2 DK 172934 B1 * hvor A betegner 2-amino-2-deoxy-0-D-glukopyranosiduron- syregruppe og B betegner hydrogen, a-D-mannopyranosyl eller 6- '5 acetyl-a-D-mannopyranosyl; opfindelsen omfatter tillige farmaceutisk acceptable additionssalte af disse forbindelser.
Det omhandlede deacylantibiotikum A 40926 er yder-r ligere kendetegnet ved at have de i krav 2 anførte egen-10 skaber.
Specielle forbindelser er angivet i krav 3-5.
Disse deacylerede derivater vil under et blive omtalt som "deacyl A 40926 antibiotika", og generisk vil de hver for sig blive omtalt som et "deacyl A 40926 an-,5 tibiotikum".
De ovennævnte udgangsmaterialer, dvs. antibiotikum A 40926 kompleks og faktorerne deraf, det tilsvarende N-acylaminoglukuronyl-aglykonkompleks og faktorerne deraf kan gengives ved foranstående formel hvor A
20 betegner en 2-deoxy-2-Cj ^^acylamino-Ø-D-glukuronyl-gruppe og B betegner hydrogen, en a-D-mannopyranosylgrup-pe eller 6-acetyl-α-D-mannopyranosylgruppe, eller udgøres af additionssalte deraf.
Nærmere betegner er antibiotika A 40926 faktor A 2 S
den forbindelse med foranstående formel I hvor A betegner 2-deoxy-2-undekanoylamino-0-D-glukopyranosiduronyl og B betegner mannopyranosyl; antibiotikum A 40926 faktor Bq er den forbindelse med foranstående formel hvor A betegner 2-deoxy-2 - isododekanoylamino-j3-D-glukuronyl og B ^ betegner α-D-mannopyranosyl; antibiotikum A 40926 faktor B1 af denne forbindelse med ovenstående formel hvor A betegner 2-deoxy-2-dodekanoylamino-/3-D-glukuronyl og B betegner a-D-mannopyranosyl.
Antibiotikum A 40926 faktorerne af "P”-serien, 15 fx faktor PA og faktor PBq, afviger fra de tilsvarende faktorer (henholdsvis faktor A og Bq ) ved at mannose-enheden er erstattet med en 6-acetylmannoseenhed.
3 DK 172934 B1
Antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl-agly-koner repræsenteres ved formel I, hvor A er som defineret ovenfor og B betegner hydrogen. Deres acylkæder på aminoglykuronylgruppen svarer til dem i de enkelte fak-5 torer af antibiotikum A 40926.
På basis af tilgængelige data og under betragtning af kendte stoffer kan man tilskrive deacylantibio-tikum A 40926 foranstående formel I hvor A betegner 2-amino-2-deoxy-Ø-D-glukuronyl og B betegner a-D-mannopyra-10 nosyl; deacylantibiotikum A 40926 P kan beskrives ved foranstående formel I hvor A betegner 2-amino-2-deoxy-/3-D-glukuronyl og B betegner 6-acetyl-a-D-mannopyranosyl; og man kan tilskrive antibiotikum A 40926 aminoglukuro-nyl-aglykon foranstående formel I hvor A betegner 2-15 amino-2-deoxy-/?-D-glukuronyl og B betegner hydrogen.
Antibiotikum A 40926 faktorer PA og PB, er i det mindste under visse gæringsbetingelser, de vigtigste antibiotikum-produkter af den A 40926-producerende mikroorganisme.
20 Antibiotikum A 40926 faktorer A og B er i hoved sagen omdannelsesprodukter af antibiotikum A 40926, henholdsvis faktor PA og faktor PB, og de er ofte til stede allerede i gæringssuppen.
Det har vist sig at antibiotikum A 40926 faktor 25 PA kan omdannes til antibiotikum A 40926 faktor A og at antibiotikum A 40926 faktor PB kan omdannes til antibiotikum A 40926 faktor B under basiske betingelser som fører til fjernelse af acetylgruppen i mannoseenheden uden at fjerne acylgruppen på aminoglukuronylenheden.
30 Når gæringssuppen eller en antibiotikum A 40926 indeholdende ekstrakt eller et koncentrat deraf henstår i en vis periode under basiske betingelser, fx en vandig opløsning af en nukleofilbase, ved en pH-værdi > 9 natten over, vil der som følge heraf dannes et antibioti-35 kum A 40926 kompleks som er beriget med hensyn til an- 4 DK 172934 B1 tibiotikum A 40926 faktor A og faktor B (se EP-A-177.882).
Den samme type basiske omdannelse kan anvendes til omdannelse af deacyl-antibiotikum A 40926 P til de-5 acyl-antibiotikum A 40926.
Deacyl-antibiotikum A 40926 har følgende fysiskkemiske egenskaber: A) Et ultraviolet spektrum, som er vist i tegningens 10 fig· 1» som udviser følgende absorptionsmaksima: , nm max a) 0,1 M HC1 282 b) fosfatpuffer pH 6,0 281 15 c) fosfatpuffer pH 7,4 282, 300 (skulder) d) 0,1 Μ KOH 300 B) Et infrarødt spektrum som er vist i tegningens fig. 2 og udviser følgende absorptionsmaksima i nujol 20 (v, cm'1): 3700-3100, 3000-2800 (nujol); 1650, 1590, 1505, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1230, 1210, 1150, 1060, 1030, 970, 810, 720 (nujol).
C) ^-NMR-spektrum som er vist i tegningens fig. 3 25 og som udviser følgende grupper signaler (i ppm) ved 270 MHz, opnoteret i DMSO-dg (hexadeuterodimetylsul-foxid) (6, ppm; m; (henførsler)): 2,30, s (N-CH-j), 2,49, s (DMS0-d5), 2,7-3,8 m (sukker CH'er), 2,79 m (22), 4,08 m (X6), 4,33 s (X1), 4,37 d (X5), 4,37 d (X7), 4,86 30 m (X2), 5,08 s (4f), 5,08 s (Z6), 5,27 s (anomerisk proton af mannose), 5,35 d (anomerisk proton af aminogluku-ronsyre), 5,61 d (X4), 5,86 s (4b), 6,05 d (X3), 7,73 s (6b), 6,45-8,49 (aromatiske protoner og peptiske NH'er), s = singlet, d = doublet, m = multiplet.
i 5 DK 172934 B1 ; D) En retentionstid (Rt) på 0,34 i forhold til van comycin (Eli Lilly);
Kolonne: Silaniseret silicagel "Ultraspheres" ODS (5 pm) 4,6 mm x 25 cm "Altex"® (Beckman) 5 Isokratisk eluering med 18 mM natriumfosfatpuffer/CH^CN 92:8 (rumfang)
Strømningshastighed: 1,8 ml/minut Detektering: UV 254 nm 10 Intern standard: vancomycin (Eli Lilly), Rt 8,4 minutter.
E) En molekylvægt på 1548, bestemt ved FAB-MS spek troskop! .
15 Ved sammenligning med udgangsmaterialernes fysisk kemiske data, specielt med hensyn til NMR-spektret, vil man bemærke at de toppe som svarer til alifatiske protoner i området 0,8-2,0 ppm ikke længere er til stede i det nye molekyle.
20 Og også i tilfælde af deacyl-antibiotikum A 40926 P og antibiotikum A 40926 aminoglukuronyl-aglykon består hovedforskellen mellem disse forbindelsers NMR-spektre og de tilsvarende "acylerede" forbindelsers spektre i fravær af signaler fra alifatiske protoner i området 0,8-25 2,0 ppm.
Nærmere betegnet indeholder 'H-NMR-spekret for de-acylantibiotikummet A 40926 P følgende grupper signaler (ppm) ved 270 MHz, opnoteret i DMSO-dg (6 ppm, m (hen-førsler)): 2,0, s (CH3CO), 2,3, s <NCH3), 2,5, s (DMSO-30 d5), 2,7-3,8, m (sukker CH'er), 2,8, m (Z2), 4,1, m (X6), 4,1, m (CH20, sukker), 4,4 s (X1), 4,4 d (X5), 4,4 d (X7), 4,9, m (X2), 5,1, s (4f), 5,1, s (Z6), 5,3, s (ano-merisk protonmannose), 5,4, d (anomerisk proton-amino-glukuronsyre), 5,6, d (X4), 5,8, s (4b), 6,1 d (X3), 7,7, 35 s (6b), 6,5-8,6 (aromatiske og peptidiske NH'er).
6 DK 172934 B1 ^H-NMR-spektre for antibiotikum A 40926 amino-glukuronyl-aglykon indeholder følgende grupper signaler (ppm) ved 270 MHz, opnoteret i DMSO-dg (6 ppm, m (hen-førsel)): 2,3, s (NCH-j), 2,5, s (DMSO-dg), 2,7-3,8 m 5 (sukker CH'er), 2,8, m (22), 4,1, m (X6), 4,4, s (XI), 4,4, d (X5), 4,4 d (X7), 4,9, m (X2), 5,1, s (4f) 5,1, s (26), 5,4 d (anomerisk proton aminoglukuronsyre), 5,5 d (X4), 5,7, s (4b), 6,1, d (X3), 7,7, s (6b), 6,2-8,5 (aromatiske og peptidiske NH'er).
10 Den antibakterielle aktivitet af forbindelserne ifølge opfindelsen kan påvises in vitro ved hjælp af standardfortyndingsprøver på forskellige mikroorganismekulturer.
Dyrkningsmedier og vækstbetingelser til bestem-melse af MIC (mindste inhiberende koncentration) var som følger: Isosensitestsuppe (Oxoid) 24 timer for Stafylokokker, Streptococcus faecalis og gramnegative bakterier (Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae); Todd-Hewitt-supper (Difco), 24 timer for andre . streotokok-20 arter; GC-basesuppe (Difco) + 1% "Isovitalex" (BBL), 48 timer, CC^-beriget atmosfære for Neissseria gonorrhoeae; hjerne-hjertesuppe (Difco) + 1% supplement C (Difco), 48 timer for Haemophilus influenzae; AC-suppe (Difco), 24 timer, anaerob atmosfære for Clostridium perfringens; 25 PPLO-suppe med supplementer som i R.T. Evans og D. Tay-lor-Robinson (J. Antimicrob. Chemother. _4, 57), 24 timer, for Ureaplasma urealyticum. Inkuberingen skete ved o 4 37 C. Podematerialer var som følger: ca. 10 farveæn- drende enheder/ml for U. urealyticum; omkring 10^-10^ 30 kolonidannende enheder/ml for andre MlC-værdier ved suppefortynding.
De mindst inhiberende koncentrationer (MIC, pg/ I ml) for nogle mikroorganismer fremgår af nedenstående i tabel I.
7 DK 172934 B1 « «G^^waaznwwcnwwwtnwcn cn i—cn M cn&> <t> f—·Γ+Γ+Γ+Π·Γ+Γ+Γ+Γ+Γ+· rt ' ro ro ro o ro ro p- OHiMHHrororororo ro cr(MCrta*3wwrororort)>OOO,d,o i w'daroroowr+OOOOsryD'D'iJ' 3 H-t-,OCi^>oroiif+r+rf’rt,<1<l<><t< ro ro ro 3 tø p· 3” h( p* o O O O i—1 i—1 i— i—1 h—* MWO Ok-p-OjOOOOOOOOO I-j33<D'i-,[Dh. oooooooon ro » ro c p- c crorororoooooo uinrooikagrororororoororon
Ό C kQ O CCCCOOOOO
3HB>PiOM-3>gu>wcn[nccccc rororoi-torooro wtftwmw C W Μ P· H Hi h M g Hl fl gp-CuiP-MMi-hp. ros^D^rorororo o^vo CD^Hir+rorooPiticcc 3(i-p'-ft-,root--^-oc:'QroH-nH(M η·η·3ΛΛ·3Φ3[Λ(1)3Φ3<1ΦΛΛ QinOv^'JNlli'iJ P· O 3 O <b c c c roctfl Ρι(5(5Ρη·3ΛΗΡ|ΙΙΙΙ(1[Ι1 3 ro x w ro s-jWH-w^g f - ά t-" w ^ ro (t η· « « t1 -. fl f vo t ft VO (Tlt^rot-1·— OjW-*-· o « i ιΰ ίο p —* O p· o o on
Μ .b Λ W
Ό > > M O lO y ID Λ W
kD f-3 >3 - MOM b. O f O O
oo^rtco ρ· > m p ^ hi ^ n O o SH3 i-3 G O σ\ b cn C
7Γ v <r\coH-nnuJo-j(i>\ h3 p· -* od ro oo co w o ^ nj cn g ro H-ooo \ χ — > ro p· er 3 —* — er -* UI -o — i-3 h< — ro
P- b tO O P· O X O C M
01 Ul >0100100 H O 3
X 1-3 b 0 o P· — M
n w t-> 3 — p· n ro ρ· μ
0) ft 01 W
0 — ^ X ro p1 kD 00 ro b p· ft -· 0) " — 00 0 3 i— ro ro pQ rt ro --- rt p· <
X
O
ro
kQ
C
p* ro
Cfl ro Ό ro ro o H* ro s
V V V V V 3 H
—* —* —1 —1 —* —* r+ Π Μ Μ N Μ Μ M 01 Ui P· > DOCOOOOOOOOObOONDOONJtOtOfO-· er - p. t:
—* en to kj O kQ
w ui ui (t \ P· 3 X P> ro > b o
kO
to
ON
8 DK 172934 B1 *
Antibiotikum A 40926 aminoglukuronyl-aglykon og deacyl antibiotikum A 40926 P udviser i det væsentlige samme niveau for antimikrobiel aktivitet som det der er vist ovenfor for deacylantibiotikum A 40926.
5 Den antimikrobielle aktivitet af forbindelsen i- følge opfindelsen er endvidere bekræftet ved eksperimentelt fremkaldt septicemi hos mus.
Kontrolgrupper og behandlingsgruppen kan omfatte ti CD-I mus (Charles River) med en vægt på 18-22 g. De 10 inficeres intraperitonealt med 0,5 ml bakteriesuspension tilberedt ved fortynding af en natgammel kultur af Streptococcus pyogenes C 203 (L 49) med steril peptoni-seret fysiologisk saltopløsning. Mængden af podematerialet reguleres på en sådan måde at ubehandlede dyr dør 15 af sepsis i løbet af 48 timer. De til afprøvning værende forbindelser indgives subkutant umiddelbart efter inficeringen. På den 7. dag beregnes ED50, udtrykt i mg/kg, ved den af Spearman og Kårber angivne metode (D.J. Finney "Statistical Methods in Biological Assay", Griffin, 20 side 524, 1952) ud fra procentdelen af overlevende dyr ved hver dosis.
Under disse betingelser er ED,.q for fx deacyl antibiotikum A 40926 2,33 mg/kg subkutant.
De anførte deacyl A 40926 antibiotika har sure 25 og basiske funktioner og kan danne salte med organiske og uorganiske salte modioner ved konventionelle fremgangsmåder.
Repræsentative og hensigtmæssige syreadditionssalte af forbindelserne ifølge opfindelsen er de salte 30 der dannes ved standardreaktioner med organiske og uorganiske syrer som fx saltsyre, brombrintesyre, svovlsyre, fosforsyre, eddikesyre, trifluoreddikesyre, tri-kloreddikesyre, ravsyre, citronsyre, ascorbinsyre, mælkesyre, maleinsyre, fumarsyre, palmitinsyre, kolsyre, 35 pamoesyre, mucinsyre, glutaminsyre, kamfersyre, glutar-syre, glykolsyre, ftalsyre, vinsyre, laurinsyre, stearinsyre, salicylsyre, metansul fonsyre, benzensul fonsyre, sor- i i 9 DK 172934 B1 binsyre, picrinsyre, benzoesyre, kanelsyre og lignende syrer.
Repræsentative eksempler på baserne er blandt andet alkalimetal- eller jordalkalimetalhydroxid såsom 5 natrium-, kalium-, kalicum-, magnesium- og bariumhydroxid; ammoniak og alifatiske, alicykliske og aromatiske organiske aminer såsom metylamin, dimetylamin, tritne-tylamin og picolin.
Omdannelse af "ikke-salt"-forbindelserne ifølge 10 opfindelsen til de tilsvarende additionssalte og omvendt, dvs. omdannelse af et additionssalt af en forbindelse ifølge opfindelsen til ikke-saltformen ligger inden for almindeligt teknisk viden og omfattes af opfindelsen .
15 Fx kan deacyl-antibiotikum A 40926, antibitikum A 40926 aminoglukuronyl-aglycon eller deacyl-antibiotikum A 40926 P omdannes til de tilsvarende syre- eller baseadditionssalte ved at man opløser ikke-saltformen i et vandigt opløsningsmiddel og tilsætter svagt molært 20 overskud af den valgte syre eller base. Den resulterende opløsning eller suspension frysetørres derefter til udvinding af det ønskede salt.
I tilfælde af at det sluttelige salt er uopløseligt i et opløsningsmiddel i hvilket ikke-saltformen er 25 opløselig, udvindes saltet ved filtrering fra den organiske opløsning af ikke-saltformen efter tilsætning af den støkiometriske mængde eller et svagt molært overskud af den valgte syre eller base.
Ikke-saltformen kan fremstilles ud fra et tilsva-30 rende syre- eller basesalt opløst i et vandigt opløsningsmiddel, der derefter neutraliseres til frigørelse af ikke-saltformen.
Når det efter dette trin er nødvendigt at eliminere et overskud af syre eller base, kan der anvendes 35 en sædvanlig udsaltningsprocedure.
Fx kan man hensigtsmæssigt bruge søjlekromatogra-fering på silaniseret silicagel, ikke-funktionaliseret DK 172934 B1 ίο polystyren, akryl-harpikser eller polydextranharpikser med kontrolleret porestørrelse (fx "Sephadex" LH 20) eller aktiveret kulstof. Efter eluering af de uønskede salte med en vandig opløsning, elueres det ønskede pro-5 dukt ved hjælp af en lineær gradient eller trinvis gradient af en blanding af vand og et polært eller upolært organisk opløsningsmiddel, fx acetonitril/vand fra 50:50 til ca. 100% acetonitril.
Som det er kendt i teknikken kan man bruge salt-10 dannelse, enten med farmaceutisk acceptable syrer (eller baser) eller farmaceutisk ikke-acceptable syre (eller baser) som led i en hensigtsmæssig rensningsteknik.
Efter dannelse og isolering kan saltformen af et A 40926 antibiotikum omdannes til den tilsvarende ikke-saltform 15 eller til en farmaceutisk acceptabel saltform.
I nogle tilfælde er et baseadditionssalt af et deacyl A 40926 antibiotikum mere opløseligt i vand og i hydrofile opløsningsmidler.
Opfindelsen angår også en fremgangsmåde til frem-20 stilling af det omhandlede deacyl A 40926 antibiotikum med formlen I eller et farmaceutisk acceptabelt additionssalt deraf, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved det i krav 6 anførte. Hensigtsmæssige udførelsesformer for denne fremgangsmåde er anført i krav 7-11.
25 Deacylantibiotikum A 40926, deacylantibiotikum A 40926 P og antibiotium A 40926 aminoglukuronyl-aglykon fremstilles fra henholdsvis antibiotikum A 40926 kompleks eller en faktor deraf, antibiotikum A 40926 faktor PA og eller faktor PB eller en blanding deraf, og anti-30 biotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl-aglykon kompleks eller en faktor deraf, ved en mikrobiologisk omdannelse med egnede stammer af Actinoplanes, fx Actinoplanes tei-chomyceticus ATCC 31121, Actinoplanes missouriensis ATCC 23342, Actinoplanes missouriensis NRRL 15647 eller NRRL 35 15656 og Actinoplanes NRRL 3884. Actinoplanes teichomy- ceticus ATCC 31121 er beskrevet i US patentskrift nr.
3 i i DK 172934 Bl 11 4.239.751, Actinoplanes missouriensis ATCC 23342 i US-patentskrift nr. 3.952.095, Actinoplanes missouriensis NRRL 15647 og NRRL 15646 er beskrevet i US patentskrift nr. 4.587.218 og Actinoplanes NRRL 3884 i US patent-5 skrift nr. 3.780.174. Alle disse stammer kan erhverves fra de respektive kultursamlinger.
Nærmere betegnet bringes det valgte udgangsmateriale, enten i ren form eller i form af et hvilket som helst råpræparat deraf, herunder indhøstet gæringssuppe 10 for Actinomadura sp. ATCC 39727 eller en producerende mutant eller varietet deraf, i kontakt med en kultur af en Actinoplanes-stamme såsom Actinoplanes teichomyceti-cus ATCC 31121, Actinoplanes missouriensis ATCC 23342, Actinoplanes missouriensis NRRL 15646, Actinoplanes mis-15 souriensis NRRL 15647 eller Actinoplanes NRRL 3884, fortrinvis under gæring.
En stamme af Actinoplanes, såsom fortrinsvis Actinoplanes teichomyceticus ATCC 31121, Actinoplanes missouriensis ATCC 23342, Actinoplanes missouriensis NRRL 20 15646, Actinoplanes missouriensis NRRL 15647 eller Ac tinoplanes NRRL 3884, dyrkes under sædvanlige submerge aerobe betingelser i et medium indeholdende assimiler-bare kilder til kulstof, nitrogen og uorganiske salte.
Eksempler på sådanne medier er dem der er rapporteret i 25 de ovennævnte US patentskrifter og dem der kendes alment i teknikken.
Generelt kan det ovennævnte udgangsmateriale sættes til en kultur af en Actinoplanes-stamme såsom fortrinsvis Actinoplanes teichomyceticus ATCC 31121, Actinopla-30 nes missouriensis ATCC 23342, Actinoplanes missouriensis NRRL 15646, Actinoplanes missouriensis NRRL 15647 eller Actinoplanes NRRL 3884, på et tidspunkt som varierer fra tiden nul til det tidspunkt hvor kulturen har nået sin maksimale vækst. Tilsætningen efter 36-72 timers vækst 35 foretrækkes, i det mindste i nogle tilfælde.
12 DK 172934 B1
Reaktionstemperaturen er i almindelighed mellem 20°C og 40°C og fortrinsvis mellem 24°C og 35°C, navnlig mellem 25°C og 32°C.
Reaktionstiden, dvs. det tidsrum hvor udgangsma-5 terialet er udsat for det mikrobielle dyrkningsmiljø før slutproduktet udvindes, kan variere mellem 100 og 300 timer i afhængighed af de særligt anvendte betingelser.
Da reaktionen kan overvåges på en i teknikken kendt måde, fx ved at man følger nedgangen af en mængde udgangsma-10 teriale og/eller stigningen i mængde af slutprodukt ved HPLC, kan den sagkyndige i alle tilfælde let bestemme når reaktionen anses som fuldført og udvindingsprocessen begynder.
I stedet for at bruge en kultur af en Actinopla-nes-stamme såsom Actinoplanes teichomyceticus ATCC 31121, Actinoplanes missouriensis ATCC 23342, Actinoplanes mis-souriensis NRRL 15646, Actinoplanes missouriensis NRRL 15647 eller Actinoplanes NRRL 3884 kan man bruge en kultur af en hvilken som helst mutant deraf, 20 som stadig er i stand til at deacylere de ovennævnte udgangsmaterialer til dannelse af de deacylerede forbindelser ifølge opfindelsen. En hvilken som helst proces ifølge den foreliggende opfindelse, der anvender en hvilken som helst sådan mutant anses for 2^ at være opfattet af den foreliggende opfindelses rammer.
Faktisk er Actinoplanes missouriensis NRRL 15646 og NRRL 15647 vundet ved kemisk mutagenese af Actinoplanes missouriensis ATCC 31683, der for sit vedkommende er et mutationsprodukt af Actinoplanes missouriensis ATCC 23342.
30 Actinoplanes missouriensis ATCC 31683 er beskrevet i US patentskrifter nr. 4.322.406 og 4.375.513 sammen med Actinoplanes missouriensis ATCC 31683 og ATCC 32680 og er tilgængelig fra kultursamlingen som de andre nævnte stammer af Actinoplanes.
35 En mutant stamme af Actinoplanes teichomyceticus i 13 DK 172934 B1 7 ATCC 31121 var deponeret den 21. juli 1987 hos ATCC, hvor den blev tildelt accessionsnummeret 53649. Denne stamme blev deponeret under Budapest-traktatens bestemmelser .
5 I stedet for at bruge enkelte rene kulturer af de ovennævnte deacylerende mikroorganismer, kan man bruge blandinger deraf i et hvilket som helst mængdeforhold.
Forbindelserne ifølge opfindelsen kan ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen også fremstilles under anven-10 delse af det vaskede mycelium af en eller flere af de ovenfor identificerede deacylerende mikroorganiskekultu-rer, hensigtsmæssigt gensuspenderet i fysiologisk acceptabelt medium, et cellefrit præparat vundet ved brydning af cellerne, fx ved ultralyd-behandling og opsamling af 15 cellestumperne ved centrifugering, eller en cellefri vandopløslig ekstrakt eller et sådant koncentrat vundet fra et præparat af brudte celler. Reaktionstiden og temperaturen kan behøve en hvis tilpasning i dette tilfælde, men afspejler i det væsentlige dem der er angivet 20 ovenfor for hele mikroorganismekulturen, selv om temperaturen i hvert fald i nogle tilfælde kan forøges til 50-60°C og fortrinsvis er imellem 25°C og 50°C.
Udvindingen af de antibiotiske stoffer fra reaktionsmediet gennemføres derefter ved i og for sig kendte 25 teknikker som indbefatter ekstraktion med opløsningsmidler, fældning ved tilsætning af ikke-opløsningsmidler eller ved ændring af opløsningens pH-værdi, fordelings-kromatografering, revers-fase-fordelingskromatografe-ring, ionbytterkromatografering, affinitetskromatogra-30 fering og lignende metoder.
En foretrukken fremgangsmåde indbefatter affini-tetskromatografering på immobiliseret D-alanyl-D-alanin, efterfulgt af separation ved en anderledes pH-værdi.
Immobiliseret D-alanyl-D-alanin-matrixer som eg-35 ner sig til denne udvindingsprocedure er angivet i eu- 14 DK 172934 B1 ropæisk patentansøgningspublikation nr. 122.969. Den foretrukne matrix ved denne udvindingsproces er D-alanyl-D-alanin koblet til et tværbundet polydextran med kontrolleret porestørrelse, også beskrevet i nævnte skrift.
5 Reaktionsmediet kan underkastes affinitetskroma- tograferingen direkte efter filtrering eller efter en foreløbig rensningsproces. Sidstnævnte proces omfatter at man gør hele mediet basisk, fortrinsvis til pH mellem 8,5 og 10,5, og derefter filtrerer, eventuelt i nærvæ-10 relse af et filterhjælpemiddel. Hvis reaktionsmediet holdes i en vis tid ved basisk pH-værdi, omdannes deacyl-antibiotikum A 40926 P til deacylantibiotikum A 40926 analogt med omdannelsen, under samme betingelser, af de respektive udgangsmaterialer (denne omdannelse kan over-våges ved HPLC som sædvanligt).
Det klare filtrat reguleres derefter til en pH-værdi mellem 7 og 8 og underkastes derefter affinitets-kromatografering på immobiliseret D-alanyl-D-alanin, enten i kolonne eller portionsvis.
20 Mens bindingen af stoffet til affinitetsmatrixen fortrinsvis sker ved en pH-værdi på omkring 7,0-8,0, udføres elueringen ved mere basiske pH-værdier (fortrinsvis mellem 9,0 og 10,5) ved hjælp af en vandig base.
Denne vandige base kan være ammoniak, en flygtig amin, 25 et alkali eller alkalimetalhydroxid eller en basisk pufret opløsning, eventuelt i nærværelse af et polært organisk opløsningsmiddel såsom et polært vandblandbart opløsningsmiddel.
Repræsentative eksempler på polære vandblandbare opløsningsmidler er: vandopløselige alkoholer (fx metanol, ætanol, isopropanol eller n-butanol), acetone, ace-tonitril, lavere alkylalkanoater (fx ætylacetat), tetra-hydrofuran, dioxan, dimetylformamid og blandinger deraf; det foretrukne polære vandblandbare opløsningsmidler 35 er acetonitril.
15 DK 172934 B1 : Efter fjernelse af urenheder ved skylning af ko lonnen med vandig puffer pH 4-9, eventuelt indeholdende salte, urinstof og/eller vandblandbare opløsningsmidler, elueres det deacyl A 40926 antibiotiske stof med oven-5 nævnte elueringsblanding.
Dette eluat reguleres til pH 2,5-4,0 med en organisk eller mineralsk syre for at fjerne de materialer som er uopløselige ved denne pH-værdi.
Bundfaldet fjernes ved filtrering eller centri-10 fugering og den ovenstående væske indeholdende deacyl A 40926 antibiotiket afsaltes derefter hensigtsmæssigt.
En hensigtmæssigt afsaltningsprocedure omfatter at man overføre den antibiotikum-holdige vandige opløsning til en silaniseret silicagelkolonne, vasker med de-15 stilleret vand og eluerer med en blanding af et polært vandblandbart opløsningsmiddel som defineret ovenfor og vand.
Afsaltningen kan også udføres ved at man overfører den antibiotikumholdige opløsning til den foran be-20 skrevne affinitetskolonne, vasker med destilleret vand og eluerer med en flygtig vandig base som beskrevet ovenfor til eluering ved affinitetskromatografering.
Det vundne produkt, nemlig deacyl A 40926 antibiotikum, antibiotikum A 40926 aminoglukuronyl-aglykon 25 eller deacylantibiotikum A 40926 P, vindes i i det væsentlige ren tilstand ved koncentrering af de eluerede fraktioner hvori det er til stede (HPLC-analyse), efterfulgt af udfældning ved tilsætning af et ikke-opløs-ningsmiddel eller frysetørring.
30 Eksempler på ikke-opløsningsmidler er vandbland bare ketoner såsom acetone og metylætylketon, og vandblandbare alkoholer såsom metanol, ætanol, propanol og lignende såvel som blandinger deraf med vandblandbare organiske midler såsom petroleumsæter og lavere alkyl-35 ætere såsom ætylæter, propylæter og butylæter.
16 DK 172934 B1
Deacyl-antibiotikum A 40926, deacyl-antibiotikum A 40926 P og antibiotikum A 40926 aminoglukuronyl-agly-kon er aktive mod grampositive bakterier som er ansvarlige for mange, vidt udbredte infektioner. På grund af 5 disse patogenere stigende resistens mod de sædvanlige terapeutiske behandlinger er behovet for nye antibiotiske stoffer stadig stort.
Opfindelsen angår desuden de omhandlede forbindelser til anvendelse som lægemiddel.
10 Opfindelsen angår endvidere anvendelse af en for bindelse ifølge opfindelsen til fremstilling af et lægemiddel til antimikrobiel behandling
Opfindelsen angår ydermere et farmaceutisk præparat, der er ejendommeligt ved, at det indeholder en forbindelse 15 ifølge opfindelsen i blanding med en farmaceutisk acceptabel bærer.
I almindelighed kan man til antibakteriel behandling indgive deacylantibiotikum A 40926, deacylantibio-tikum A 40926 P og antibiotikum A 40926 aminoglukuronyl- 20 aglykon såvel som de ugiftige, farmaceutisk acceptable salte deraf eller blandinger deraf, ad forskellige indgiftsveje såsom topisk (lokal) eller parenteral. Den parenterale indgift er som regel den foretrukne indgiftsvej .
25
Injektionspræparater kan have sådanne former som 17 DK 172934 B1 suspensioner, opløsninger eller emulsioner i olieagtige eller vandige bærevæsker og de kan indeholde hjælpestoffer såsom suspenderings-, stabiliserings- og/eller di-spergeringsmidler.
5 Det virksomme stof kan også være i pulverform til rekonstitution på indgiftstidspunktet ved tilsætning af en passende bærevæske, fx sterilt vand, dertil.
I afhængighed af indgiftsvejen kan disse forbindelser oparbejdes til forskellige dosisformer.
10 I nogle tilfælde kan det være muligt at oparbejde forbindelserne i såkaldt tarmovertrukne dosisformer til oral indgift; de kan fremstilles som kendt i teknikken (se fx Remingstons Pharmaceutical Sciences, 15. udgave,
Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, USA, si-15 de 1614).
Det kan specielt være tilfældet når absorptionen af det antimikrobielle stof i tarmkanalen er særlig ønsket, mens stoffet skal passere uændret gennem maven.
Den mængde virksom stof der skal indgives afhæn-20 ger af forskellige faktorer såsom størrelsen og tilstanden af det individ der skal behandles, indgiftsvejen og indgiftshyppigheden samt det der har fremkaldt tilstanden.
De antibiotiske stoffer ifølge opfindelsen, nem-
25 lig deacylantibiotikum A 40926, deacylantibiotikum A
40926 P og antibiotikum A 40926 aminoglukuronyl-agly-kon og de fysiologisk acceptable salte deraf er generelt effektive ved en dagsdosis på mellem 0,5 og 50 mg virksom bestanddel pr. kg af patientens legemsvægt, 30 eventuelt opdelt i 1-4 portioner om dagen.
Særligt ønskelige kompositioner er dem der tilberedes i dosisenheder indeholdende fra ca. 100 til ca. 5.000 mg pr. enhed.
Præparater med langvarig virkning kan fremstilles 35 ved forskellige mekanismer og metoder som kendt i teknikken .
En foretrukken fremgangsmåde til fremstilling 18 DK 172934 B1 af et præparat med langvarig virkning og indeholdende deacylantibiotikum A 40926, deacylantibiotikum A 40926 P eller antibiotikum A 40926 aminoglukuronyl-aglykon indebærer anvendelse af en vanduopløselig form af antibioti-5 ket, suspenderet i et vandigt eller olieagtigt medium.
Fortrinsvis er de farmaceutiske præparater ifølge opfindelsen oparbejdet til behandling, herunder terapeutisk, præventiv og helbredelse af mennesker, men i almindelighed kan primater og pattedyr i almindelighed 10 såvel som kæledyr også behandles med forbindelserne og præparaterne ifølge opfindelsen.
Fremstilling af farmaceutiske præparater
En enhedsdosisform til intramuskulær injektion 15 fremstilles med 5 ml steril suspension USP indeholdende 8% propylenglykol og 500 mg fysiologisk acceptabel baseadditionssalt af deacylantibiotikum A 40926.
En enhedsdosisform til intramuskulær injektion fremstilles med 5 ml steril suspension USP indeholdende 20 8% propylenglykol og 500 mg fysiologisk acceptabelt ba seadditionssalt af antibiotikum A 40926 aminoglukuronyl-aglykon .
En enhedsdosisform til intramuskulær injektion fremstilles med 5 ml steril suspension USP indeholdende 25 8% propylenglykol og 250 mg fysiologisk acceptabelt ba seadditionssalt af antibiotikum A 40926 aminoglukuronyl-aglykon.
En enhedsdosisform til intramuskulær injektion fremstilles med 1.000 mg antibiotikum A 40926 aminoglu-30 kuronyl-aglykon i vanduopløselig form, suspenderet i 5 ml sterilt vand til injektion.
De antibiotiske stoffer ifølge opfindelsen kan også være nyttige til undertrykning af vælcst af Clostridium 35 difficile, der fremkalder pseudomembranes colitis i tarmen. Disse antibiotika kan bruges ved behandling af pseu-domembranøs colitis ved oral indgift af en effektiv do- i i 19 DK 172934 B1 sis af vedkommende antibitikum eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf, tilberedt i en farmaceutisk acceptabelt dosisform. Til en sådan anvendelse kan anti-biotiket indgives i gelatinekapsler eller i suspension 5 i en væske.
Foruden deres aktivitet som medikamenter kan de-acylantibiotikum A 40926, deacylantibiotikum A 40926 P og antibiotikum A 40926 aminoglukuronyl-aglykon og de 10 farmaceutisk acceptable salte deraf bruges til fremme af dyrs vækst.
Med ordet dyr menes i denne sammenhæng varmblodede dyr, navnlig dem der holdes som kildemateriale til ernæring for mennesker samt kæledyr.
15 Til dette formål kan forbindelsen ifølge opfin delsen indgives oralt i et passende foder. Den præcise koncentration der anvendes er den som behøves til at sikre at det virksomme stof indtages i en til vækstfremme effektiv mængde når dyret indtager normale fodermæng-20 der.
Tilsætning af den virksomme forbindelse ifølge opfindelsen til dyrefoder foretages fortrinsvis ved at man fremstiller en passende foder-forblanding indeholdende den virksomme forbindelse i en effektiv mængde og inkor-25 porerer for-blandingen i det fuldstændige foder.
Man kan også fremstille et mellemprodukt i form af et koncentrat eller et fodersupplement som indeholder det virksomme stof, og som derefter kan indblandes i foderet.
30 Den måde på hvilken sådanne foder-forblandinger og fuldstændige rationer kan fremstilles og indgives er beskrevet i referencebøger som fx "Applied Animal Nutrition", W.H. Freedman and Co., San Francisco, USA, 1969 eller "Livestock Feeds and Feeding" 0 and B books, 35 Corvallis, Oregon, USA, 1977. Der henvises til disse som reference.
20 DK 172934 B1
Fremstilling af antibiotikum A 40926 kompleks og de enkelte faktorer deraf ud fra Actinomadura sp. ATCC 39727 eller en producerende mutant eller varietet deraf er beskrevet i EP-A-177.882.
5
Fremstilling af antibiotikum A 40926 N-acylaminogluku-ronyl-aglykoner_
Antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukoronyl-agly-kon kompleks AB, N-acylaminoglukuronyl-aglykon faktor A,
10 N-acylaminoglukuronyl-aglykon faktor B, antibiotikum A
40926 N-acylaminoglukuronyl-aglykon faktor Bq, antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl-aglykon faktor B1 og antibiotikum A 40926 aglykon fremstilles ud fra antibiotikum 4926 kompleks eller en enkelt faktor deraf eller en 15 blanding af sådanne faktorer i et hvilket som helst mængdeforhold, dvs. A 40926 faktor A, A 40926 faktor Β, A 40926 faktor PA, A 40926 faktor PB, A 40926 faktor Bq og A 40926 faktor B1, ved kontrolleret sur hydrolyse.
Generelt gennemføres denne hydrolyse i nærværelse 20 af en stærk syre i et passende organisk opløsningsmiddel. Reaktionstemperaturen kan variere inden for vide grænser; fortrinsvis er den mellem 4°C og 100°C og navnlig mellem 25°C og 80°C.
Reaktionstiden varierer i afhængighed af de særlige 25 reaktionsbetingelser.
I almindelighed er reaktionstiden mellem 30 minutter og 120 timer.
Da imidlertid reaktionens forløb kan overvåges ved TLC eller HPLC, vil den sagkyndige kunne bestemme når hy-30 drolysen af udgangsmaterialet kan anses som fuldført, hvorefter udvindingsprocessen kan sættes igang.
Repræsentative eksempler på stærke syrer er mineralske eller organiske stærke syrer såsom hydrogenhalo-genider, fx hydrogenklorid, -bromid og jodid, fosforsyrer, 35 svovlsyre, halogeneddikesyrer, fx trikloreddikesyre, tri-fluoreddikesyre, klordifluoreddikesyre og lignende syrer.
21 DK 172934 B1
Egnede organiske opløsningsmidler er sådanne at: a) de kan i det mindste delvis opløseliggøre udgangsmaterialerne; b) når produkterne først er dannet, enten udskiller 5 de sig eller kan de fraskilles fra opløsningsmidlet ved sædvanlige teknikker; og c) i alle tilfælde indgriber de ikke på ugunstig måde i reaktionens forløb.
Eksempler på sådanne organiske opløsningsmidler er 10 protiske og aprotiske opløsningsmidler såsom C1_4alkylsul-foxider, fx dimetylsulfoxid og diætylsulfoxid, C^^alkyl-formamider, fx dimetyl formamid og diætyl formamid, dioxan, tetrahydrofuran og lignende opløsningsmidler som naturligvis må være forenelige med den valgte syre.
15 I almindelighed gennemføres hydrolysen i nærværelse af en begrænset mængde vand, fx fra 0,1 til 10 vægt% af reaktionsblandingen. Denne vandmængde kan selvsagt være til stede allerede i udgangsmaterialerne, opløsningsmidlerne og/eller reagenserne, eller de kan om nødvendigt til-20 sættes ad hoc.
En foretrukken udførelsesform for denne fremgangsmåde repræsenteres ved anvendelse af en blanding af dimetylsulfoxid og koncentreret saltsyre ved en temperatur mellem 40°C og 80°C. Typisk er mængdeforholdet i blandingen 25 dimetylsulfoxid/koncentreret saltsyre i området 8:2 til 9,5:0,5. Den foretrukne koncentrerede saltsyre er 37 vægt%s saltsyre. ' I almindelighed er reaktionsprdouktet en blanding af N-acylaminoglukuronyl-aglykoner og aglykonen. Ved kon-30 trol med temperaturen og i nogle tilfælde også med syrens koncentration og styrke, er det muligt at styre processen, i det mindste i et vist omfang, til produktion af det ene af de to hovedprodukter, dvs. antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl-aglykoner og antibiotikum A 40926 35 aglykon. Nærmere betegnet forøges udbytterne af N-acyl-amihoglukuronyl-aglykoner ved at man holder en forholdsvis lav temperatur, eventuelt nedsætter syreblandingens 22 DK 172934 B1 styrke og på passende måde kontrollerer reaktionstiden, mens der ved forholdsvis højere temperaturer og længere reaktionstider vindes aglykonen alene.
Også i dette tilfælde overvåges reaktionens forløb 5 ved TLC eller fortrinsvis HPLC, og reaktionen kan standses når det ønskede stof er vundet i optimal produktion med henblik på at maksimere udbytterne ved den følgende udvindingsproces.
Når der vindes et produkt som er en blanding af an-10 tibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl-aglykoner og antibiotikum A 40926 aglykon, kan det opsplittes ved kromato-grafering såsom væske/væske-kromatografering, flash-kromato-grafering, højtryks-væskekromatografering (HPLC) og affinitet skr oma tograf er i ng.
15 Når der bruges affinitetskromatografering er en fo- retrukken adsorbent et immobiliseret D-alanyl-D-alanin-produkt som beskrevet i EP-A-122969. Særlig foretrækkes agarose-t-aminokaproyl-D-alanyl-D-alanin. Elueringsblan-dingen er en blanding af en vandig puffer og en saltopløs-20 ning. Ved regulering af pH-værdien og saltkoncentrationen skilles antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl-aglyko-ner fra antibiotikum A 40926 aglykon.
En foretrukken fremgangsmåde til fortrinsvis at fremstille antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl-agly-25 kon kompleks AB eller en faktor deraf er en fremgangsmåde som består i at man underkaster antibiotikum A 40926 kompleks eller en enkelt faktor deraf, antibiotikum A 40926 kompleks AB, antibiotikum A 40926 faktor A, antibiotikum A 40926 faktor B, antibiotikum A 40926 faktor Bq, antibio-30 tikum A 40926 faktor B^, antibiotikum A 40926 faktor PA
og antibiotikum A 40926 faktor PB kontrolleret sur hydrolyse med en blanding af et polært aprotisk opløsningsmiddel og en stærk uorganisk eller organisk syre i nærværelse af en begrænset (0,1-10 vægt%) mængde vand ved en tem-35 peratur mellem stuetemperatur og 100°C og fortrinsvis mellem' 40°C og 65°C i en periode på fra 3 timer til 120 timer.
23 DK 172934 B1 I særlig grad foretrækkes det at hydrolyseringsblandingen er en blanding af dimetylsulfoxid og 37%s saltsyre i forholdet fra 9:1 til 9,5:0,5, at temperaturen er 65°C og at reaktionstiden er 5 timer.
5 Når udgangsmaterialet til fremstilling af N-acylami- noglukuronyl-aglykon er antibiotikum A 40926 kompleks, vindes der et slutprodukt som stadig er en blanding af faktorer som i det væsentlige svarer til dem i det oprindelige kompleks, mens man, når der bruges en enkelt faktor 10 såsom antibiotikum A 40926 faktor A eller faktor B, vinder en enkelt N-acylaminoglukuronyl-aglykonfaktor som er henholdsvis antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl-aglykon faktor A og antibiotikum A 40926 N-acylaminogluku-ronyl-aglykon faktor B (der derefter kan adskilles i fakto-15 rerne BQ og B]).
Når der vindes et antibiotikum A 40926 N-acylamino-glukuronyl-aglykon kompleks AB, kan det adskilles i de enkelte faktorer ved i og for sig kendte teknikker såsom væske/væ-ske-kromatografering eller fortrinsvis præparativ HPLC.
20 En foretrukken fremgangsmåde indbefatter reversfase- væskekromatografering, fortrinsvis i rustfaste stålkolonner undermoderat tryk (5-50 bar) eller ved højt tryk (100— 200 bar). Den faste fase kan være en silaniseret silikagel med en kulbrintefase med 2-18 kulstofatomer, fortrinsvis 25 C 18 eller en fenylgruppe, og elueringsmidlet er en blanding af et polært, vandblandbart opløsningsmiddel som defineret ovenfor og en vandig puffer med en pH-værdi som er forenelig med harpiksen, fortrinsvis pH 4-8.
Særlig foretrækkes en lineær gradient-elueringsblan-30 ding af et polært vandopløseligt aprotisk opløsningsmiddel, navnlig acetonitril, og en vandig pufferopløsning med pH mellem 4 og 8, fortrinsvis på ca. 6, såsom en lineær gradient fra 5% til 45% af en blanding acetonitril/fosfat-puffer pH 6, 70:30, og en blanding acetonitril/fosfatpuf-35 fer pH 6, 10:90.
Antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl-aglykon kompleks AB (i ikke-additionssaltform) har følgende egenskaber: 24 DK 172934 B1 A) Et ultraviolet absorptionsspektrum som udviser følgende absorptionsmaksima: W nm a) 0,1 N HC1 282 5 b) fosfatpuffer pH 7,4 282 310 (skulder) C) 0,1 N KOH 302 B) Et infrarødt absorptionsspektrum som udviser føl-10 gende absorptionsmaksima (cm-1): 3700-3100; 3000-2800 (nujol); 1650; 1620-1550; 1500; 1460 (nujol); 1375 (nujol); 1300; 1250-1180;; 1150; 1060; 1010; 970; 930; 840; 820.
C) Et 1H-NMR-spektrum som udviser følgende grupper 15 signaler (i ppm) ved 270 MHz, optaget i DMSO-dg (hexadeu-terodimetylsulfoxid) plus CF^COOH under anvendelse af TMS som intern standard (0,00 ppm), (6 = ppm): 0,84, d og t {isopropyliske CHj'er og terminal CH^); 1,14, m ((CH2)n); 1,44, m (-CH2-C-C0 og isopropylisk CH); 2,00, t 20 (-CH2-(CO)); 2,5 s (DMSO-d5); 2,5 s (N-CHj); 2,93, m (CH, (Z2 )); 3,33, m (CH, (Z'2 )); 3,20-3,80, m (sukker CH’er); 5,34, d (anomerisk proton af acylaminoglukuronsyre); 4,10 m (X6); 4,33 d, (X5); 4,43 d (X7); 4,9 m (X2); 5,1 (4f og Z6); 5,4 s (XI); 5,58 d (X4); 5,7 s (4d), 6,06 b (X3); 7,73 25 s (6b); 6,26-8,42 s og m (aromatiske CH’er og peptidiske NH’er); 8,70-10,5, br s (fenoliske OH’er og NH2+).
br = bred, d = dublet, m = multiplet, s = singlet, | t = triplet.
30 D) Retentionstider (Rfc) på 1,20 og 1,30 i forhold til teicoplanin A2 komponent 2 (Rfc * 20,3 minutter) ved analyse ved reversfase-HPLC under følgende betingelser:
Kolonne: "Ultrasphere" ODS (5 pm) "Altex"® (Beckman) 4,6 mm (i.d.) x 250 mm 35 For-kolonne: Bronwlee Labs RP 18 (5 pm) i i 25 DK 172934 B1
Elueringsmiddel A: CH^CN 10%") reguleret (2,5 g/1) NaH2P04,H20 90% J til pH 6,0
Elueringsmiddel B: CH^CN 70%7 reguleret (2,5 g/1) NaH2P04,H20 30%J til pH 6,0 5 Eluering: lineær gradient fra 5% til 60% elueringsmiddel B i elueringsmiddel A, i 40 minutter. Strømningshastighed: 1,8 ml/min.
UV-detektor: 254 nm
Intern standard: Teicoplanin A2 komponent 2 (Gruppo 10 Lepetit S.p.A.) E) Syrefunktioner med evne til at danne salte.
F) En aminofunktion med evne til at danne salte.
15 G) Ingen mannoseenhed bundet til kernedelen.
Antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl-aglykon faktor A (i ikke-additionssaltform) har følgende egenska-20 ber: A) Et ultraviolet absorptionsspektrum som udviser føl gende absorptionsmaksima: W nm 25 a) 0,1 N HC1 282 b) fosfatpuffer pH 7,4 282 310 (skulder) c) 0,1 N KOH 302 30 B) Et infrarødt absorptionsspektrum som udviser føl gende absorptionsmaksima (cm-1): 3700-3000; 3000-2800; 1650; 1585; 1505; 1460 (nujol); 1375 (nujol); 1295; 1230; 1210; 1150; 1070; 1060; 1010; 845; 820; 720 (nujol).
35 C) Et1H-NMR-spektrum som udviser følgende grupper sig naler (i ppm) ved 270 MHz, optaget i DMSO-dg (hexadeutero-dimetylsulfoxid) under anvendelse af TMS som intern stan- 26 DK 172934 B1 dard (0,00 ppm), (6 = ppm): 0,85 t (terminalt CH3); 1,ΟΙ,3 (alifatiske CH2'er); 1,42 m (OC-C)CH2); 2,00 t ((co)ch2) ; 2,35 s (NCH3); 2,49 s (DMSO-d5); 2,82 m (22); 5 2,8-3,8 (sukkerprotoner og 2'2); 4,12 m (X6); 4,56 s (XI); 4,34 d (X5); 4,41 d (X7); 4,96 m (X2); 5,08-5,12 (4f og Z6); 5,40 d (anomerisk proton af acylaminoglukuronsyre); 5,58 d (X4); 5,74 s (4b); 6,05 d (X3); 7,75 s (6b); 6,25-8,40 s, d og m (aromatiske CH'er og peptidiske NH’er).
10 D) En retentionstid (Rfc) på 1,20 i forhold til teico-planin A2 komponent 2 (Rt = 20,3 minutter) ved analyse ved reversfase-HPLC under følgende betingelser:
Kolonne: "Ultrasphere" ODS (5 pm) "Altex"® (Beckman) 4,6 15 mm (i.d.) x 250 mm
For-kolonne: Brownlee Labs RP 18 (5 pm).
Elueringsmiddel A: CH^CN 10% ( reguleret (2,5 g/l) NaH2P04,H20 90%Jtil pH 6,0 Elueringsmiddel B: CHjCN 70%o reguleret 20 (2,5 g/l) NaH2P04,H20 30%J til pH 6,0
Eluering: lineær gradient fra 5% til 60% af elueringsmiddel B i elueringsmiddel A, i 40 minutter. Strømningshastighed: 1,8 ml/min.
UV-detektor: 254 nm.
25 Intern standard: Teicoplanin A2 komponent 2 (Gruppo
Lepetit S.p.A.).
E) En molekylvægt på ca. 1554 som bestemt ved FAB-MS spektroskopi.
30 F) Syrefunktioner med evne til at danne salte.
G) En aminofunktion med evne til at danne salte.
35 H) Ingen mannoseenhed bundet til kernedelen.
27 DK 172934 B1
Antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl-aglykon faktor Bq (i ikke-additionssaltform) har følgende egenskaber: A) Et ultraviolet absorptionsspektrum som udviser føl-5 gende absorptionsmaksima: W nm a) 0,IN HC1 282 b) fosfatpuffer pH 7,4 282 310 (skulder) 10 c) 0,IN KOH 302 B) Et infrarødt absorptionsspektrum som udviser følgende absorptionsmaksima (cm”'): 3700-3100; 3000-2800 (nujol); 1650; 1585; 1505; 1460 (nujol); 1375 (nujol); 1295; 15 1230; 1210; 1150; 1060; 1010; 980; 840; 820; 720 (nujol).
C) Et 'H-NMR-spektrum som udviser følgende grupper signaler (i ppm) ved 270 MHz, optaget i DMSO-dg (hexadeute-rodimetylsulfoxid) under anvendelse af TMS som intern stan- 20 dard (0,00 ppm), (6 * ppm): 0,84, d (isopropyliske CH^'er); 1,0-1,3 (alifatiske CH2'er); 1,3-1,6 ((OC-O-CH2 og isopro-pyliske -CH); 2,00 t ((0C)CH2); 2,32 s (NCH3); 2,40 s (DMSO-d5); 2,82 m (Z2); 2,9-3,8 (sukkerprotoner); 4,12 m (X6); 4,44 s (XI); 4,33 d (X5); 4,37 d (X7); 4,95 m (X2); 25 5,06-5,10 (4f og Z6); 5,38 d (anomerisk proton af acyl- aminoglukuronsyre); 5,59 d (X4); 5,72 s (4b); 6,05 d (X3); 7,74 s (6b); 6,27-8,5 (aromatiske og peptidiske NH'er).
D) En retentionstid (Rt) på 1,30 i forhold til teico-30 planin A2 komponent 2 (Rt = 20,3 minutter) ved analyse ved reversfase-HPLC under følgende betingelser:
Kolonne: "Ultrasphere" ODS (5 pm) "Altex’® (Beckman) 4,6 mm (i.d.) x 250 mm.
For-kolonne: Brownlee Labs RP 18 (5 pm).
35 Elueringsmiddel A: CH3CN 10% 1 reguleret (2,5 g/1) NaH2P04,H20 90%J til pH 6,0 28 DK 172934 B1
Elueringsmiddel B: CH^CN 70%7 reguleret (2,5 g/1) NaH2P04,H20 30%-J til pH 6,0
Eluering: lineær gradient fra 5% til 60% elueringsmiddel B i elueringsmiddel A, i 40 minutter.
5 Strømningshastighed: 1,8 ml/min.
UV-detektor: 254 nm
Intern standard: Teicoplanin A2 komponent 2 (Gruppo Lepetit S.p.A.) 10 E) En molekylvægt på ca. 1568 som bestemt ved FAB- MS-spektroskopi.
F) Syrefunktioner med evne til at danne salte.
15 G) En aminofunktion med evne til at danne salte.
H) Ingen Mannoseenhed bundet til kernedelen.
Antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl-aglykon 20 faktor (i ikke-additionssaltform) har følgende egenskaber :
En molekylvagt på ca. 1568, bestemt ved FAB-MS, og i det væsentlige de samme fysisk-kemiske egenskaber som anført ovenfor for antibiotikum A 40926 N-25 acylaminoglukuronyl-aglykon faktor BQ, dog med den forskel at det har en triplet ved 0,84 6 ppm, der kan tilskrives metylgruppe i en n-propylfunktion i det ovenfor opnoterede NMR-system, og en retentionstid i forhold til teicoplanin A2 komponent 2 30 på 1,32 i samme system som anført ovenfor.
De følgende "præparationer" er eksempler på den måde på hvilken antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl-aglykon kompleks og faktorerne deraf kan fremstilles.
35 29 DK 172934 B1
Præparation 1
Fremstilling af antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl- aqlykon kompleks AB____ ^ a) 750 mg antibiotikum A 40926 kompleks AB (fremstil let i det væsentlige ved at følge den fremgangsmåde scm er beskrevet i eksempel 3 i EP-A 177882, opløses i 150 ml af en blanding dimetylsulfoxid (DMSO)/37 vægt%s saltsyre (HC1) 9:1 (rumfang), og reaktionsblandingen opvarmes til ca. 65°C. jq Reaktionens forløb overvåges ved HPLC, og når ud gangsmaterialerne er fuldstændigt omsat (efter ca. 5 timer) standses reaktionen med 600 ml koldt vand og den resulterende blandings pH-værdi reguleres til ca. 7,5.
Denne blanding indeholder en blanding af de i over-^ skriften angivne forbindelser, og den adskilles i sine to hovedkomponenter ved affinitetskromatografering i henhold til følgende procedure.- b) 750 ml af den på den ovenfor beskrevne måde vundne 2Q vandige blanding overføres til en sepharose-D-alanyl-D-alanin-kromatograferingskolonne tilberedt som beskrevet i EP-A 177882 og EP-A 122969, eksempel 1.A), idet kolonnen bestod af 100 ml opsvulmet harpiks i 10 mM TRIS-HC1 puffer pH 7,5, kolonnehøjde 10 cm.
25 Der føres 200 ml 0,05M NH^OH.HCl pH 7,5 indeholdende 2M NaCl (puffer B) gennem kolonnen; derefter fjernes A 40926 aglykon selektivt fra kolonnen ved eluering emd 1500 ml 0,05M NH^OH.HCl pH 9,5 indeholdende 2M NaCl (puffer C).
Derpå elueres N-acylaminoglukuronyl-aglykon kompleks AB 2Q med 0,1M ammoniakvand (puffer D). De eluerede fraktioner forenes derefter i overensstemmelse med deres antibiotikumindhold og reguleres til ca. pH 7,5, hvorpå hver antibio-tikumholdig opløsning kromatograferes på en sepharose-D-alanyl-D-alanin-kolonne bestående af 100 ml kvældet har-35 piks i 10 mM TRIS.HC1 pH 7,5 puffer og med en lejehøjde på 10 cm. Der føres destilleret vand gennem kolonnen indtil de uorganiske salte er udvasket. De antibiotiske stof- 30 DK 172934 B1 fer elueres derefter med 0,1N ammoniakvand. Disse eluere-de fraktioner, forenet i overensstemmelse med deres antibiotikumindhold, koncentreres til et lille rumfang under nedsat tryk ved azeotrop destillation med n-butanol og 5 frysetørres; der vindes 201 mg N-acylaminoglukuronyl-agly-kon kompleks AB og 236 mg A 40926 aglykon.
Ved gentagelse af samme forsøg som beskrevet ovenfor, men under anvendelse af en blanding DMSO/37%s HC1 95:5 ved ca. 40°C i ca. 5 dage, stiger udbyttet af N-10 acylaminoglukuronyl-aglykon kompleks AB med ca. 15%, mens udbyttet af A 40926 aglykon nedsættes tilsvarende.
Ved at gentage disse forsøg, men gående ud fra antibiotikum A 40926 kompleks, antibiotikum A 40926 faktor A, antibiotikum A 40926 faktor B, antibiotikum A 40926 faktor 15 Bq, antibiotikum A 40926 faktor antibiotikum A 40926 faktor PA og antibiotikum A 40926 faktor PB opnås der i det væsentlige de samme resultater (dvs. at udbytterne varierer inden for området +5%). Specielt gælder det at hvis man går ud fra antibiotikum A 40926 faktor A eller 20 faktor PA, så bliver det vundne produkt antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl-aglykon faktor A, går man ud fra antibiotikum A 40926 faktor PBq eller faktor Bq så vinder man som produkt antibiotikum A 40926 N-acylamino-glukuronyl-aglykon faktor BQ; går man ud fra antibiotikum 25 A 40926 faktor B eller PB, så vinder man som produkt antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl-aglykon faktor B, der derefter kan opsplittes i faktor Bq og B^; og går man ud fra antibiotikum A 40926 faktor B^, så vinder man antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl-aglykon faktor B^.
30
Præparation 2
Adskillelse af antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl- aglykon, faktorerne A, Bq og B^_ 25 20 mg antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl- aglykon kompleks AB opløses i 1 ml 18 mM natriumfosfatpuf-fer pH 6,0, indeholdende 10% acetonitril. Opløsningen ind- 31 DK 172934 B1 sprøjtedes i en HPLC-præparativ kolonne (indvendig diame- (Jft ter 7 mm, og højde 250 mm) af "Lichrosorb"^ RP18 silanise-ret silikagel (Merck Co.) med en partikelstørrelse på 7 pm.
5 Kolonnen elueres med en strømningshastighed på 5 ml/min af fase A og fase B med en lineær gradient fra 10% til 55% fase A i 55 minutter.
Fase A: 18 mM natriumfosfat/CH^CN 30:70, bragt til pH 6,0 med NaOH.
10 Fase B: 18 mM natriumfosfat/CH^CN 90:10, bragt til pH 6,0 med NaOH.
UV-absorptionen ved 254 nm af eluaterne fra kolonnen opnoteres og de eluerede fraktioner med homogent indhold opsamlet, idet der adskilles tre grupper eluater in-15 deholdende antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl-aglykon, henholdsvis faktorerne A, Bq og B1.
De eluater som indeholder de rensede antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl-aglykon faktorer fra 11 på hinanden følgende kromatografiforløb forenes og afsaltes 20 på sædvanlig måde ved at de overføres til en kolonne af 5 ml kvældet sepharose-D-Ala-D-Ala (se foran). Efter fjernelse af saltene med 10 ml 1 mM HCl efterfulgt af 5 x 10 ml destilleret vand, elueres det antibiotiske stof med 5 x 10 ml Hs ammoniakvand. Ammoniakeluaterne opsamles 25 hver for sig og frysetørres, hvorved der vindes 15 mg antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl-aglykon faktor A, 51 mg antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl-aglykon faktor Bq og 3 mg antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl-aglykon faktor Bjf hvis fysisk-kemiske data og ke-30 miske formel er anført tidligere i nærværende beskrivelse.
De følgende eksempler tjener til videre belysning af opfindelsen.
Eksempel 1 32 DK 172934 B1 Gåring af Actinoplanes teichomyceticus
En prøve af en frossen stammekultur af Actinopla-5 nes teichomyceticus ATCC 31121 bruges til podning af 100 ml vegetativt medium med følgende sammensætning:
Glukose 10 g
Pepton 4 g
Gaerekstrakt 4 g 10 m9S04 0,5 g KH2P04 2 g K2HP04 4 g
Deioniseret vand 1000 ml 100 ml af det podede medium inkuberes i 48 timer j5 i en 500 ml stor Erlenmeyer-kolbe ved 28°C på en roterende ryster. 200 ml af denne kultur bruges til podning af 4 liters gæringsmedium med følgende sammensætning:
Pepton 4 g Gærekstrakt 1 g 20 Sojamel 10 g
Maltekstrakt 4 g
Glukose 5 g
NaCl 2,5 g
CaCOj 5 g 25 Deioniseret vand 1000 ml
Det podede medium gæres ved ca. 28°C under en steril luftstrøm på 0,5 rumfang/rumfang/minut og ved ca. 900 opm i ca. 48 timer.
Actinoplanes teichomyceticus ATCC 53649 kan bruges 2Q i stedet for Actinoplanes teichomyceticus ATCC 31121.
Eksempel 2 Gæring af Actinoplanes missouriensis ATCC 23342
Et frysetørret rør indeholdende Actinoplanes mis-^ souriensis stamme ATCC 23342 overføres åbent og aseptisk til en skråflade af havremelsagar. Efter 12 dages inkube- i ;i i i 33 DK 172934 B1 ring ved 28°C suspenderes kulturen i destilleret vand og podes i 10 Erlenmeyer-kolber hver indeholdende 100 ml medium med følgende sammensætning: Gærekstrakt 2 g 5 Sojamel 8 g
Glukose 20 g
NaCl 1 g
CaCOj 4 g H20 1000 ml
10 Det podede medium inkuberes i 48 time ved 30°C
på en roterende ryster ved 200 opm.
Actinoplanes missouriensis NRRL 15646, NRRL 15647, ATCC 31683, ATCC 31683, ATCC 32680 eller blandinger deraf i et hvilket som helst mængdeforhold kan bruges i stedet 15 for Actinoplanes missouriensis ATCC 23342.
Eksempel 3 Gæring af Actinoplanes NRRL 3884 2Q Et frysetørret rør indeholdende Actinoplanes- stamme NRRL 3884 overføres åbent og aseptisk til en skråflade af havremelsagar. Efter 12 dages inkubering ved 28°C suspenderes kulturen i destilleret vand og podes i 10 Erlenmeyer-kolber hver indeholdende 100 ml me-25 dium med følgende sammensætning: Gærekstrakt 2 g
Sojamel 8 g
Glukose 20 g
NcCl 1 g 30 CaC03 4 9 H20 1000 ml
Det podede medium inkuberes i 48 timer ved 30°C
på en roterende ryster ved 200 opm.
35
Eksempel 4 34 DK 172934 B1
Fremstilling af deacylantibiotikum A 40926 a2_____Bioomdannelse_af _anti biot ikum__A_4 0 9 2 6_komgleks__ AB
Antibiotikum A 40926 kompleks AB (i det væsent-5 lige fremstillet som beskrevet i EP-A-177.882) sættes aseptisk til en gæringskultur fremstillet i det væsentlige som beskrevet i eksempel 1, 2 eller 3, 48 timer efter inokulet. Bioomdannelsesprocessen overvåges ved HPLC-analyse af gærin^ssuppen. Glykopeptid-antibiotika 10 renses på sepharose-D-alanyl-D-alanin (se EP-A-122.969) og analyseres ved følgende HPLC-metode:
Kolonne: "Ultraspheres" ODS (5 pm) 4,6 mm x 25 cm "Altex1^ (Beckman)
For-kolonne, Brownlee labs RP18 (5 pm) 15 Fase A: 18 mM natriumfosfatpuffer/CH^CNgg:2 (rumfang) bragt til pH 6,0 med NaOH.
Fase B: 18 mH natriumfosfatpuffer/CH^CN 30:70 (rumfang) bragt til pH 6,0 med NaOH.
Eluering: lineær gradient fra 5% til 65% af elueringsmid-20 del B i 43 minutter.
Strømningshastighed: 1,8 ml/minut.
Detektering: UV 254 nm.
Retentionstiden for deacylantibiotikum A 40926 ligger i området 8,3 og 9.
25 Indhøstningstiden ansættes til ca. 196 timer ef ter tilsætningen af antibiotikum A 40926 kompleks AB til mediet for Actinoplanes NRRL 3884, ca. 168 timer for Ac-tinoplanes missouriensis ATCC 23342, ATCC 31683, ATCC 31682, ATCC 32680, NRRL 15646 og NRRL 15647 og ca. 192 30 timer for Actinoplanes teichomyceticus ATCC 31121 og ATCC 53649. Effektiviteten af deacyleringen er i det væsentlige ens med alle de ovennævnte kulturer.
35 35 DK 172934 B1 b|_____Udvinding_og_rensning
Det indhøstede medium forenet fra de forskellige Erlenmeyer-kolber bringes til pH 9,5 med NaOH og filtre- g) res med "Hyf lo’^-FloMa filterhjælp. Filterkagen kasse-5 res mens det klare filtrat reguleres til pH 7,5 med HC1.
10 ml kvældet sepharose-D-alanyl-D-alanin (se ovenfor) tilsættes og denne blanding omrøres natten over ved stuetemperatur. Derefter genvindes harpiksen ved filtrering og vaskes i rækkefølge på filteret med 4 x 40 ml 10 40 mM Tris.HCl-puffer pH 6,5 (2-amino-2-hydroxymetyl- 1,3-propandiol) og 6 x 40 ml destilleret vand. Derefter elueres der en blanding fra harpiksen med 3 x 40 ml l%s ammoniakvand. Denne opløsning afkøles til ca. 4°C og bringes til pH ca. 3,5 med H2S04< Bundfaldet fjernes ved 15 centrifugering mens den ovenstående væske, 150 ml, som indeholder det bioomdannede antibiotikum A 40926 i opløsning bringes til pH ca. 7,0 med NaOH og overføres til en kolonne med en diameter på 1 cm og indeholdende 25 ml sepharose-D-alany-D-alanin kvældet i destilleret vand.
20 Kolonnen elueres i rækkefølge med 50 ml destilleret vand og 200 ml ætanol/vand 1:9 (rumfang). Det i overskriften angivne antibiotiske stof elueres derefter med 35 ml 1%s ammoniakvand. Denne opløsning koncentreres under vakuum og frysetørres derefter; der vindes 41-45 mg deacyl-an-25 tibiotikum A 40926. De fysisk-kemiske egenskaber er vist tidligere i nærværende beskrivelse.
Ved at gentage samme procedure, men gående ud fra antibiotikum A 40926 faktor A eller antibiotikum A 40926 faktor B eller Bq, vindes samme forbindelse i lignende 30 udbytter.
Eksempel 5 36 DK 172934 B1
Fremstilling af antibiotikum A 40926 aminoglukuronyl- aglykon__
Hvis den i eksempel 4 beskrevne fremgangsmåde 5 gentages med udgangspunkt i antibiotikum A 40926 N-acyl-aminoglukuronyl-aglykon kompleks AB, antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl-aglykon faktor A, faktor B, faktor Bq eller B1 (fremstilles som beskrevet foran), vinder man antibiotikum A 40926 aminoglukuronyl-aglykon 10 med de egenskaber som er beskrevet tidligere i nærværende beskrivelse.
Eksempel 6
j Fremstilling af deacylantibiotikum A 40926 P
Ved at gentage de i eksempel 4 beskrevne fremgangsmåde, men ud fra antibiotikum A 40926 faktor PA eller faktor PB, eller en blanding deraf i et hvilket som helst mængdeforhold, og nedsætte opholdstiden af reak-2ø tionsmassen til et minimum ved basiske pH-værdier, vinder man deacylantibiotikum A 40926 P med de foran angivne egenskaber.
Claims (13)
1. Deacyl A 40926 antibiotikum med formlen Cl OA c z6 ^ ^ V'v(<ø5irv\ ho H L6J l4 i i2:] ? rV5«£ Vb ? SAu2 ? V*Vr VKn/y Vt^n^V \ hI H A I"«" AoN/A ,o °A/v C1 _\lXox'H-^ ^ y)v°H »</ 0H /-/ B HO 15 hvor A betegner en 2-amino-2-deoxy-B-D-glukopyranosidu-ronsyregruppe og B betegner hydrogen/ a-D-mannopyrano-syl eller 6-acetyl-a-D-mannopyranosyl, og farmaceutisk acceptable additionssalte deraf.
2. Deacylantibiotikum A 40926 eller et farmaceutisk accep-20 tabelt salt deraf ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det har følgende egenskaber i ikke-additionssaltformen: A) Et ultraviolet spektrum, som er vist i tegningens fig. 1, som udviser følgende absorptionsmaksima:
25 Xmax' nm a) 0,1 M HC1 282 b) fosfatpuffer pH 6,0 281 c) fosfatpuffer pH 7,4 282, 300 (skulder) d) 0,1 Μ KOH 300 30 B) Et infrarødt spektrum som er vist i tegningens fig. 2 og udviser følgende absorptionsmaksima i nujol (v, cm-1): 3700-3100, 3000-2800 (nujol); 1650, 1590, 1505, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1230, 1210, 35 1150, 1060, 1030, 970, 810, 720 {nujol). 38 DK 172934 B1 C) ^-NMR-spektrum som er vist i tegningens fig.
3 og som udviser følgende grupper signaler (i ppm) ved 270 MHz, opnoteret i DMSO-dg (hexadeuterodimetylsul-foxid) (6, ppm; m; (hehførsler)): 2,30, s (N-CHj), 2,49, 5 s (DMSO-djJ, 2,7-3,8 m (sukker CH'er), 2,79 m (22), 4,08 m (X6), 4,33 s (XI), 4,37 d (X5), 4,37 d (X7), 4,86 m (X2), 5,08 s (4f), 5,08 s (26), 5,27 s (anomerisk proton af mannose), 5,35 d (anomerisk proton af aminogluku-ronsyre), 5,61 d (X4), 5,86 s (4b), 6,05 d (X3), 7,73 s 10 (6b), 6,45-8,49 (aromatiske protoner og peptiske NH'er). s - singlet, d = dublet, m = multiplet. D) En retentionstid (Rfc) på 0,34 i forhold til vancomycin (Eli Lilly);
15 Kolonne: Silaniseret silicagel "Ultraspheres" ODS (5 μιη) 4,6 mm x 25 cm "Altex"® (Beckman) Isokratisk eluering med 18 mM natriumfosfatpuffer/CH^CN 92:8 (rumfang) Strømningshastighed: 1,8 ml/minut 20 Detektering: UV 254 nm Intern standard: vancomycin (Eli Lilly), Rt = 8,4 min. E) En molekylvægt på 1548, bestemt ved FAB-MS spektroskop! . 1'.- Antibiotikum A 40926 aminoglukuronyl-aglykon, der 25 er en forbindelse ifølge krav 1 hvor A har den der an-I givne betydning og B betegner hydrogen, eller et addi tionssalt deraf.
4. Deacylantibiotikum A 40926 P som er en forbindelse ifølge krav 1 hvor A har den der angivne betydning 30 og B betegner 6-acetyl-of-D-mannopyranosyl, eller et additionssalt deraf.
5. Deacylantibiotikum A 40926, der er en forbindelse ifølge krav 1 hvor A har den der angivne betydning og B betegner a-D-mannopyranosyl, eller et additionssalt deraf.
6. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved at man behandler en forbindelse med formlen i 39 DK 172934 B1 Cl OA z6 ° ° 22 H 6 | 4 1 I 2 H H0 f b o z 2 Ω 5 Υ^νΟγ^ν""* • x6 H J T H H \ L· Bi --dX0xHl/ io y}"ooh ho/ /- B HO hvor A betegner en 2-deoxy- (C^_ 1 2) -acylamino-Ø-D-gluko-pyranosiduronsyregruppe og B betegner hydrogen, a-D-man-15 nosyl eller 6-acetyl-a-D-mannosyl, et additionssalt deraf og/eller en blanding deraf i hvilket som helst mængdeforhold, med en i vækst værende kultur af en stamme af slægten Actinoplanes valgt blandt Actinoplanes teichomyceticus ATGC 31121, Actinoplanes teichomyceticus ATCC 53649, Actino-20 planes NRRL 3884, Actinoplanes missouriensis ATCC 23342, Actinoplanes missouriensis NRRL 15646, Actinoplanes missouriensis NRRL 15647, Actinoplanes missouriensis ATCC 31683, Actinoplanes missouriensis ATCC 31682, Actinoplanes missouriensis ATCC 32680, eller en mutant deraf som 25 har bevaret moderstammens deacyleringsevne.
7. Fremgangsmåde ifølge krav 6, kendeteg net ved at et vasket mycelium, en cellefri ekstrakt eller et cellefrit koncentrat bruges i stedet for den voksende kultur af den deacylerende mikroorganisme.
8. Fremgangsmåde ifølge krav 6 eller 7, k e n d e - tegnet ved at reaktionstemperaturen er mellem 20 og 40°C. 40 DK 172934 B1
9. Fremgangsmåde ifølge krav 7, kendetegnet ved at reaktionstemperaturen er mellem 25 og 50°C.
10. Fremgangsmåde ifølge krav 6 til fremstilling af deacylantibiotikum A 40926 ud fra antibiotikum A 40926 5 kompleks, faktor A, B eller Bq.
11. Fremgangsmåde ifølge krav 6 til fremstilling af antibiotikum A 40926 aminoglukuronyl-aglykon ud fra antibiotikum A 40926 N-acylaminoglukuronyl-aglykonkompleks, faktor A, B eller Bq.
12. Forbindelse ifølge krav 1, 2, 3, 4 eller 5 til anvendelse som lægemiddel.
13. Anvendelse af en forbindelse ifølge krav 1, 2, 3, 4 eller 5 til fremstilling af et lægemiddel til antimi-krobiel behandling. 1514. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved at det indeholder en forbindelse ifølge krav 1, 2, 3, 4 eller 5 i blanding med en farmaceutisk acceptabel bærer. ΐ J
Applications Claiming Priority (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB868624400A GB8624400D0 (en) | 1986-10-10 | 1986-10-10 | Antibiotics |
| GB8624400 | 1986-10-10 | ||
| GB868626324A GB8626324D0 (en) | 1986-11-04 | 1986-11-04 | Antibiotics |
| GB8626324 | 1986-11-04 | ||
| PCT/EP1987/000588 WO1988002755A1 (en) | 1986-10-10 | 1987-10-08 | Glycopeptide antibiotics |
| EP8700588 | 1987-10-08 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK312688A DK312688A (da) | 1988-06-09 |
| DK312688D0 DK312688D0 (da) | 1988-06-09 |
| DK172934B1 true DK172934B1 (da) | 1999-10-11 |
Family
ID=26291408
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK198803126A DK172934B1 (da) | 1986-10-10 | 1988-06-09 | Glykkopeptid-antibiotikum betegnet deacyl A 40926 antibiotikum og farmaceutisk acceptable additionssalte deraf, |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5567676A (da) |
| EP (1) | EP0327548B1 (da) |
| JP (1) | JP2554350B2 (da) |
| KR (1) | KR960013074B1 (da) |
| CN (1) | CN87106876A (da) |
| AT (1) | ATE78490T1 (da) |
| AU (1) | AU8078187A (da) |
| CA (1) | CA1337861C (da) |
| DE (1) | DE3780644T2 (da) |
| DK (1) | DK172934B1 (da) |
| ES (1) | ES2010729A6 (da) |
| GR (1) | GR871488B (da) |
| IE (1) | IE60281B1 (da) |
| IL (1) | IL84092A0 (da) |
| PT (1) | PT85885B (da) |
| WO (1) | WO1988002755A1 (da) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8621912D0 (en) * | 1986-09-11 | 1986-10-15 | Lepetit Spa | Increasing ratio of components of anti-biotic complex |
| HUT63860A (en) * | 1990-12-05 | 1993-10-28 | Lepetit Spa | Process for producing 39-decarboxy-38-(hydroxymethyl) derivatives of teikoplanin antibiotics |
| US5606036A (en) * | 1991-03-27 | 1997-02-25 | Gruppo Lepetit Spa | Antibiotic A 40926 ester derivatives |
| US5750509A (en) * | 1991-07-29 | 1998-05-12 | Gruppo Lepetit S.P.A. | Amide derivatives of antibiotic A 40926 |
| EP0836619B1 (en) * | 1995-07-05 | 2004-08-25 | AVENTIS BULK S.p.A. | Purification of dalbaheptide antibiotics by isoelectric focusing |
| US6218505B1 (en) | 1996-04-23 | 2001-04-17 | Biosearch Italia S.P.A. | Chemical process for preparing amide derivatives of antibiotic A 40926 |
| US5936074A (en) * | 1997-04-17 | 1999-08-10 | Eli Lilly And Company | Teicoplanin deacylation process and product |
| WO2000025109A1 (en) * | 1998-10-28 | 2000-05-04 | Scofield Dillon F | Electrodynamic particle size analyzer |
| US6586393B2 (en) * | 2000-12-04 | 2003-07-01 | Biosearch Italia S.P.A. | Antibiotics GE 23077, pharmaceutically acceptable salts and compositions, and use thereof |
| US20060074014A1 (en) | 2002-11-18 | 2006-04-06 | Vicuron Pharmaceuticals Inc. | Dalbavancin compositions for treatment of bacterial infections |
| AU2003299561A1 (en) | 2002-11-18 | 2004-06-15 | Vicuron Pharmaceuticals Inc. | Compositions and methods for treating bacterial infections with protein-dalbavancin complexes |
| US7119061B2 (en) | 2002-11-18 | 2006-10-10 | Vicuron Pharmaceuticals, Inc. | Dalbavancin compositions for treatment of bacterial infections |
| US20080064581A1 (en) * | 2004-07-21 | 2008-03-13 | Karin Lochte | Tampon Having Apertured Film Cover Thermobonded to Fibrous Absorbent Structure |
| CN102417919B (zh) * | 2011-09-02 | 2017-05-24 | 山东鲁抗医药股份有限公司 | 一种发酵法生产高纯度替考拉宁的方法 |
| CN106520871B (zh) * | 2017-01-10 | 2021-02-26 | 鲁南制药集团股份有限公司 | 一种发酵法生产a40926的方法 |
| CN107226845B (zh) * | 2017-05-31 | 2020-10-09 | 成都雅途生物技术有限公司 | 一种抗多重耐药菌的化合物yt-011及其制备方法 |
| CN109946398B (zh) * | 2019-03-28 | 2022-05-24 | 丽珠集团新北江制药股份有限公司 | 一种检测达巴万星及其杂质的方法 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BE790627A (fr) * | 1971-10-27 | 1973-04-27 | Lilly Co Eli | L'antibiotique a477 et son procede de preparation |
| GB1496386A (en) * | 1975-03-05 | 1977-12-30 | Lepetit Spa | Antibiotics |
| US4115552A (en) * | 1976-04-19 | 1978-09-19 | Eli Lilly And Company | Factor A and B of antibiotic A-4696 |
| US4375513A (en) * | 1980-12-18 | 1983-03-01 | Eli Lilly And Company | Biologically pure culture of Actinoplanes missouriensis |
| NZ199196A (en) * | 1980-12-18 | 1985-01-31 | Lilly Co Eli | Antibiotic a-4696 factor g and growth-promoting compositions;actinoplanes missouriensis atcc 31681 |
| GB8425685D0 (en) * | 1984-10-11 | 1984-11-14 | Lepetit Spa | Antibiotic a 40926 complex |
| GB8531846D0 (en) * | 1985-12-30 | 1986-02-05 | Lepetit Spa | Antibiotic a 40926 mannosyl aglycon |
-
1987
- 1987-09-25 GR GR871488A patent/GR871488B/el unknown
- 1987-10-05 IL IL84092A patent/IL84092A0/xx unknown
- 1987-10-08 JP JP62506057A patent/JP2554350B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1987-10-08 AT AT87906741T patent/ATE78490T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-10-08 DE DE8787906741T patent/DE3780644T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-10-08 EP EP87906741A patent/EP0327548B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-10-08 PT PT85885A patent/PT85885B/pt unknown
- 1987-10-08 KR KR1019880700650A patent/KR960013074B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1987-10-08 AU AU80781/87A patent/AU8078187A/en not_active Abandoned
- 1987-10-08 WO PCT/EP1987/000588 patent/WO1988002755A1/en not_active Ceased
- 1987-10-09 IE IE270987A patent/IE60281B1/en not_active IP Right Cessation
- 1987-10-09 ES ES8702884A patent/ES2010729A6/es not_active Expired
- 1987-10-09 CA CA000549061A patent/CA1337861C/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-10-10 CN CN198787106876A patent/CN87106876A/zh active Pending
-
1988
- 1988-06-09 DK DK198803126A patent/DK172934B1/da not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-06-01 US US08/457,365 patent/US5567676A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2010729A6 (es) | 1989-12-01 |
| IE872709L (en) | 1988-04-10 |
| KR880701734A (ko) | 1988-11-04 |
| WO1988002755A1 (en) | 1988-04-21 |
| DE3780644T2 (de) | 1992-12-10 |
| AU8078187A (en) | 1988-05-06 |
| DE3780644D1 (de) | 1992-08-27 |
| CA1337861C (en) | 1996-01-02 |
| IL84092A0 (en) | 1988-03-31 |
| DK312688A (da) | 1988-06-09 |
| IE60281B1 (en) | 1994-06-29 |
| EP0327548B1 (en) | 1992-07-22 |
| ATE78490T1 (de) | 1992-08-15 |
| DK312688D0 (da) | 1988-06-09 |
| JPH02500742A (ja) | 1990-03-15 |
| PT85885A (en) | 1987-11-01 |
| PT85885B (en) | 1990-01-15 |
| US5567676A (en) | 1996-10-22 |
| JP2554350B2 (ja) | 1996-11-13 |
| KR960013074B1 (ko) | 1996-09-30 |
| CN87106876A (zh) | 1988-04-20 |
| EP0327548A1 (en) | 1989-08-16 |
| GR871488B (en) | 1987-11-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK172934B1 (da) | Glykkopeptid-antibiotikum betegnet deacyl A 40926 antibiotikum og farmaceutisk acceptable additionssalte deraf, | |
| CA1334655C (en) | De-mannosyl teicoplanin derivatives | |
| US4935238A (en) | Antibiotic A 40926 complex and its pure factors PA, PB, A, B and B0 | |
| CS228909B2 (en) | Method of preparing antibioticum a-4696 in complex form, or in the form of factor b1,b2,b3,c1a,c3 and e1 | |
| DK167770B1 (da) | Antibiotikum a 40926 n-acylaminoglucuronyl-aglyconer og antibiotikum a 40926 aglycon og farmaceutisk acceptable additionssalte deraf, fremgangsmaade til fremstilling af saadanne forbindelser, farmaceutisk praeparat indeholdende forbindelserne samt anvendelse af saadanne forbindelser til fremstilling af et medikament | |
| EP0306645B1 (en) | Teicoplanin-like derivatives | |
| US8007789B2 (en) | Antibiotics GE 81112 factors A, B, B1, pharmaceutically acceptable salts and compositions, and use thereof | |
| CA2038667C (en) | Process for the preparation of mannosyl teicoplanin derivatives and mannosyl teicoplanin aglycone | |
| JPH07114704B2 (ja) | 抗生物質ａ４２８６７およびその付加塩 | |
| US5459141A (en) | Compounds 31668P and 31668U, a process for their production and their use | |
| US5135857A (en) | Process for the preparation of de-mannosyl teicoplanin derivatives |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| B1 | Patent granted (law 1993) | ||
| PBP | Patent lapsed |
Country of ref document: DK |