DK169571B1 - Monoklont antistof, fremgangsmåde til dets fremstilling, hybridomcellelinie, der producerer antistoffet, fremgangsmåder til kvantitativ immunologisk bestemmelse af prokollagen-peptid (type III) med antistoffet, samt diagnostisk præparat indeholdende det monoklonale antistof - Google Patents
Monoklont antistof, fremgangsmåde til dets fremstilling, hybridomcellelinie, der producerer antistoffet, fremgangsmåder til kvantitativ immunologisk bestemmelse af prokollagen-peptid (type III) med antistoffet, samt diagnostisk præparat indeholdende det monoklonale antistof Download PDFInfo
- Publication number
- DK169571B1 DK169571B1 DK202189A DK202189A DK169571B1 DK 169571 B1 DK169571 B1 DK 169571B1 DK 202189 A DK202189 A DK 202189A DK 202189 A DK202189 A DK 202189A DK 169571 B1 DK169571 B1 DK 169571B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- type iii
- antibody
- procollagen
- peptide
- monoclonal antibody
- Prior art date
Links
- 108010050808 Procollagen Proteins 0.000 title claims abstract description 88
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 77
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 27
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 title claims description 10
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 title claims description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 25
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 claims description 13
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 12
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 12
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 11
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 11
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 11
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 10
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 8
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 5
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 4
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 4
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- DYWNLSQWJMTVGJ-UHFFFAOYSA-N (1-hydroxy-1-phenylpropan-2-yl)azanium;chloride Chemical group Cl.CC(N)C(O)C1=CC=CC=C1 DYWNLSQWJMTVGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 3
- 229960002668 sodium chloride Drugs 0.000 description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 108010034596 procollagen Type III-N-terminal peptide Proteins 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- KYHPMCZXXRPOKS-ZJWYQBPBSA-N 3,7-dihydropurin-6-one;2-hydrazinyl-1h-pteridin-4-one;1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2.C1=CN=C2C(=O)NC(NN)=NC2=N1.O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 KYHPMCZXXRPOKS-ZJWYQBPBSA-N 0.000 description 1
- XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-2-n,2-n-diethylpyrimidine-2,4-diamine Polymers CCN(CC)C1=NC(N)=CC(Cl)=N1 XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102100030152 Complement C1r subcomponent-like protein Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101100326463 Homo sapiens C1RL gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N chloramine T Chemical compound [Na+].CC1=CC=C(S(=O)(=O)[N-]Cl)C=C1 VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000006192 iodination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- LDTLADDKFLAYJA-UHFFFAOYSA-L sodium metabisulphite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)OS([O-])=O LDTLADDKFLAYJA-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000010262 sodium metabisulphite Nutrition 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6887—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids from muscle, cartilage or connective tissue
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6878—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids in epitope analysis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
i DK 169571 B1
Den foreliggende opfindelse angår et monoklont antistof, en fremgangsmåde til dets fremstilling, en hybridom-cellelinie, der producerer antistoffet, fremgangsmåder til kvantitativ immunologisk bestemmelse af prokollagen-peptid 5 (type III) med antistoffet, samt et diagnostisk præparat, der indeholder det monoklonale antistof.
Prokollagen-peptid (type III) (P III P) er det amino-terminale propeptid i kollagen (type III), der fraspaltes ekstracellulært efter afsondring af prokollagen (type III)-10 -molekylet. Prokollagen-peptid (type III) kan for sit vedkommende med kollagenase spaltes videre til brudstykker col I, col 2 og col 3, der kan isoleres ved hjælp af i og for sig kendte proteinkemiske metoder (Nowack, H. m.fl., Eur.
J. Biochem. 20/ 205-216 (1976), Bruckner, P. m.fl., Eur. J.
15 Biochem. 90, 595-603 (1978)).
Med en radioimmunologisk bestemmelsesmetode, som den er beskrevet i europæisk patentskrift nr. 4940, kan koncentrationen af dette prokollagen-peptid i legemsvæsker bestemmes. Kendskabet til serumkoncentrationen af peptidet 20 muliggør udsagn om aktiviteten af fibrotiske sygdomstilstande, f.eks. i leveren (Rohde, H. m.fl., Eur. J. Clin. Invest.
9, 451-459 (1979)).
En eksakt, selektiv bestemmelse af prokollagen-peptid (type III) og prokollagen (type III) i serum og andre legems-25 væsker er foreslået i europæisk patentansøgning nr. 289.930. Derved er en række centrifugeringstrin dog nødvendige, som vanskeliggør anvendelsen af denne undersøgelse i rutinelaboratoriet. En enklere håndtering muliggør forsøgsmetoden "Immunoradiometric Assay" (IRMA). Ved denne fremgangsmåde 30 anvendes to antistoffer, hvoraf ét er koblet til en fast bærer, hvorved der bortfalder et fældningstrin og dermed et centrifugerings- og nogle pipetteringstrin.
Overraskende er der nu opfundet et monoklont antistof, der har specifik virkning mod en epitop på intakt 35 prokollagen (type III), der hidtil ikke har kunnet erkendes som en særlig spids ved gelfiltreringschromatografi. I kom- 2 DK 169571 B1 bination med andre monoklone eller polyklone antistoffer med specificitet for prokollagen-peptid (type III) og/eller prokollagen (type III) muliggør dette antistof bestemmelsen af disse antigener ved hjælp af IRMA-teknik.
5 Opfindelsen angår 1. Et monoklont antistof, som har specifik virkning mod en epitop på intakt prokollagen (type III), pN-kollagen, intakt aminoterminalt prokollagen-peptid (type III) og nedbrydningsprodukter af det 10 aminoterminale prokollagen-peptid (type III), der med hensyn til molekylvægt ligger mellem det aminoterminale prokollagen-peptids (type III) og col l's, og udviser en svag reaktion mod col 1 og nedbrydningsprodukter af det aminoterminale prokol- 15 lagen-peptid (type III) med samme molvægt som col 1.
2. En hybridomcellelinie, der producerer et antistof ifølge opfindelsen, og som er dannet ved fusion af celler fra en myelom-cellelinie og fra lymfo- 20 cytter af et i forvejen med prokollagen-peptid (type III) immuniseret dyr.
3. En fremgangsmåde til fremstilling af et monoklont antistof ifølge opfindelsen, ved hvilken a) dyr med aminoterminalt prokollagen-peptid (type 25 III) immuniseres, b) lymfocytter udvindes og fusioneres med myelom cel ler, c) hybriderne udvælges med hensyn til forekomst af et antistof med de ovenfor angivne egenskaber og 30 klones, og d) antistoffet udvindes fra de nævnte kloner.
4. En fremgangsmåde til kvantitativ immunologisk bestemmelse af prokollagen-peptid (type III) med et antistof ifølge opfindelsen, ved hvilken 35 a) en flydende prøve, der indeholder aminoterminalt prokollagen-peptid (type III) eller prokollagen DK 169571 B1 3 (type III), bringes til reaktion med det monoklone antistof ifølge opfindelsen, og b) mængden af det aminoterminale prokollagen-peptid (type III) eller af prokollagenet (type III) be-5 stemmes over det dannede antigen-antistofkompleks.
5. En fremgangsmåde til kvantitativ immunologisk bestemmelse af procollagen-peptid (type III) med et antistof ifølge opfindelsen, ved hvilken a) det monoklone antistof ifølge opfindelsen kobles 10 til en fast matrix, b) en flydende prøve, der indeholder aminoterminalt prokollagen-peptid eller prokollagen, bringes til reaktion med det nævnte antistof, og c) det bundne antigen påvises med markerede monoklone 15 eller polyklone antistoffer med specificitet for prokollagen-peptid (type III) eller prokollagen (type III).
6. Et diagnostisk præparat til bestemmelse af prokollagen-peptid (type III)-mængden i legemsvæsker, 20 og præparater ifølge opfindelsen er ejendommeligt ved, at det indeholder en effektiv mængde af et monoklont antistof ifølge opfindelsen alene eller i kombination med andre antistoffer i blanding med en diagnostisk acceptabel bærer. Som andre 25 antistoffer anvendes især en effektiv mængde af det i DK patentansøgning nr. 2328/88 foreslåede monoklone antistof.
I det følgende beskrives opfindelsen i detaljer, især de foretrukne udførelsesformer, under henvisning til 3 0 tegningen, hvor fig. 1 viser kalibreringskurven for den i eksempel 6 foretagne immunradiometriske analyse, fig. 2 viser reaktionsmønsteret for det monoklone antistof P-III-P 226 og for et polyklont antistof, og 35 fig. 3 viser reaktionsmønsteret for det monoklone antistof P-III-P 296 og for et polyklont antistof.
4 DK 169571 B1
Til fremstilling af de monoklone antistoffer kan dyr, fortrinsvis gnavere, f.eks. mus, rotter, kaniner og marsvin, immuniseres med prokollagen-peptid (type III), der er isoleret ved fremgangsmåden ifølge europæisk patent nr.
5 4940, i nærværelse af adjuvans. Det foretrækkes især at anvende mus, især sådanne fra SJL-stammen. Med gentagne sekundærinjektioner, f.eks. med 4-8 ugers afstand forstærkes immunreaktionen. Resultatet af immuniseringen kontrolleres ved bestemmelse af koncentrationen af antistoffer i det 10 radiologiske bindingsforsøg (R. Timpl og L. Risteli, Im-munochemistry of the extracellular matrix, H. Forthmayr, udg. bd. 1, 199 (1982)). Nogle dage før fusionen af lymfocytterne med en myelom-cellelinie behandles dyrene med pro-kollagen-peptid (type III) uden adjuvans. Dyrenes lymfocytter 15 udvindes og fusioneres med en myelom-cellelinie, der ligeledes kan stamme fra en af de ovennævnte dyrearter, fortrinsvis fra mus, især med cellelinien P3X63AG8.653. Med fordel fusioneres lymfocytter med myelom-cellelinier af samme art. Fusionen og den videre dyrkning af celleklonerne 20 udføres på en for fagmanden kendt måde, idet koncentrationen af specifikke antistoffer i cellekulturernes overfase bestemmes ved hjælp af immunologiske bindingsforsøg, ud fra de cellekloner, der fremgår af dette forsøg, udsøges en klon til anvendelse i IRMA. Det foretrækkes især at arbejde 25 med en cellelinie, der fremstilles ved fusion af lymfocytter fra med prokollagen-peptid (type III) immuniserede mus af SJL-stammen med musemyelom-cellelinien P3X63AG8.653 og producerer et monoklont antistof med det i fig. 2 viste reaktionsmønster. Denne cellelinie er deponeret den 2. marts 30 1988 under Budapester-traktatens betingelser hos European
Collection of Animal Cell Cultures (ECACC), PHLS Centre for Applied Microbiology and Research, Porton Down, Salisbury, SP40JG, Storbritannien med nummeret 88030202.
De monoklone antistoffer ifølge opfindelsen hører 35 til klassen af IgG-, IgM- og IgA-proteiner. Antistoffer af klassen IgG, især af underklassen IgG2b, anvendes med særlig DK 169571 B1 s fordel. De monoklone antistoffers egenskaber tydeliggøres ved hjælp af det fra cellelinien i ECACC 88030202 udvundne monoklone antistof PIIIP 226, når de i serummet tilstedeværende antigener ved gelfiltreringschromatografi adskilles 5 efter deres molvægt, og de chromatografiske fraktioner anvendes ved radioimmunanalyse. I fig. 2 ses gelfiltrerings-chromatografiets elueringsprofil, som viser det monoklone antistof PIIIP 226 i sammenligning med den elueringsprofil, som de polyklone antistoffer udviser. Spids 1/la svarer til 10 intakt prokollagen (type III), henholdsvis pN-kollagen (type III). Spids 2/2a svarer til intakt aminoterminalt prokol-lagen-peptid (type III) og nedbrydningsprodukter heraf med lignende størrelse. Spids 3a omfatter nedbrydningsprodukter af prokollagen-peptid (type III), der giver en mindre spids 15 i chromatogrammet end prokollagen-peptid (type III), men dog klart størres end col 1. Nedbrydningsprodukternes molvægt ligger altså i hvert tilfælde mellem ca. 45.000 (prokollagen-peptid) og ca'. 10.000 (col 1). Spids 4/4a svarer til col 1 og nedbrydningsprodukter af det aminoterminale prokol-20 lagen-peptid (type III) med samme molvægt som col 1. Det viser sig, at den antigenfraktion, der medtages ved analysen med polyklone antistoffer, og som har molvægt som af nedbrydningsproduktet col 1, eller er col 1, medtages klart svagere af det monoklone antistof ifølge opfindelsen. Det monoklone 25 antistof ifølge opfindelsen har altså en specifik virkning mod en epitop på det aminoterminale prokollagen-peptid (type III), der ikke er til stede i col 1. Endvidere genkendes en del af de antigener, der medtages i spids 2 af polyklone antistoffer, ikke af antistof PIIIP 226, således at der i 30 stillingen af spids 2 erkendes to spidser (2a og 3a) med antistoffet PIIIP 226. Spids 3a findes ligeledes ikke med det i den tyske patentansøgning foreslåede antistof PIIIP 296.
Til fremstillingen af antistofferne ifølge opfindelsen 35 er det vigtigt, at der står en passende kilde til udvinding af antigenet til rådighed. Som allerede nævnt isoleres humant DK 169571 B1 g eller dyrisk, højtrenset prokollagen-peptid (type III) med fordel ved fremgangsmåden ifølge europæisk patent nr. 4940, idet væv eller patologiske legemsvæsker nedbrydes med kollagenase, og prokollagen-peptidet skilles fra reaktionsop-5 løsningen og renses ved kombination af chromatografiske metoder og/eller immunadsorption.
De monoklone antistoffer ifølge opfindelsen kan anvendes ved forskellige immunologiske fremgangsmåder, herunder alle former for radioimmunanalyse, f.eks. sekvensmæssig 10 mætningsanalyse eller ligevægtsanalyse samt i andre konkurrerende og ikke-konkurrerende bindingsanalyser, såsom fluorescens-, enzym-, kemiluminescens- eller andre immunanalyser.
Det er især egnet til anvendelse ved immunosorbentanalyser i sandwichmetoden. Det monoklone antistof kan således an-15 vendes i immunologiske fremgangsmåder til isolering og karakterisering samt til kvantitativ bestemmelse af prokol-lagenpeptid (type III) i væv og legemsvæsker. Man går ifølge fagmanden frem efter i og for sig kendte metoder, med fordel ved, at en flydende analyse, der indeholder prokollagen-pep-20 tid (type III), bringes til reaktion med det monoklone antistof ifølge opfindelsen, der er koblet til en fast matrix, der fortrinsvis består af kunststofmateriale, især små kunststofglas, og mængden af prokollagen-peptid (type III) bestemmes ved binding af polyklone eller et andet monoklont anti-25 stof, fortrinsvis det i europæisk patentansøgning nr. 289.930 foreslåde monoklone antistof, der er forsynet med en radioaktiv eller anden markering. Denne fremgangsmåde kan også udføres ved, at polyklone eller monoklone antistoffer, især det i DK patentansøgning nr. 2328/88 foreslåede monoklone 30 antistof, bindes til en fast matrix og bringes til reaktion med antigenet, hvorved dette antigen derpå bestemmes kvantitativt ved binding af det markerede antistof ifølge opfindelsen. Ved disse metoder spiller det ingen rolle, om prokollagen-peptidet (type III) endnu er bundet til aminoter-35 minalen i prokollagenet (type III) eller ikke. De hidtil ved den immunologiske bestemmelse ved hjælp af polyklone DK 169571 B1 7 antistoffer forstyrrende nedbrydningsprodukter af prokol-lagen-peptid (type III), især col l, medtages ikke af det beskrevne analysesystem.
Det i europæisk patentansøgning nr. 289.930 foreslåede 5 monoklone antistof udviser det i fig. 3 afbildede reaktionsmønster over for intakt prokollagen (type III) og pN-kollagen (prokollagen, der mangler det C-terminale propeptid, spids 4a) , intakt aminoterminalt prokollagen-peptid (type III) (spids 5a) samt col 1 og nedbrydningsprodukter af det amino-10 terminale prokollagen-peptid (type III) med samme molvægt som col 1 (spids 6a).
Til fremstilling af dette monoklone antistof går man i det væsentlige frem som beskrevet ovenfor. Det foretrækkes især at arbejde med en cellelinie, der fremstilles ved fusion 15 af lymfocytter fra mus af SJL-stammen, der er immuniseret med prokollagen-peptid (type III), med musemyelom-cellelinien P3X63AG8.653. Denne cellelinie er deponeret hos European Collection of Animal Cell Cultures (ECACC), PHLS Centre for Applied Microbiology and Research, Porton Down, Salisbury, 20 SP40JG, Storbritannien, under deponeringsnummeret 87042308.
I de følgende eksempler forklares opfindelsen nærmere. Procentangivelser angår vægten, med mindre andet er angivet.
Eksempel 1 25 Fremstilling af prokollagen-peptid (type III)
Prokollagen-peptid (type III) fremstilles ved indvirkning af kollagenase på prokollagen (type III) ved 37"C. Herved udsættes peptidet ikke for nogen denatureringsmidler. Til fremstilling af større mængder af peptidet anvendes 30 en modificeret fremgangsmåde. Alle fremgangsmådetrin udføres i kølerum indtil indvirkningen af kollagenasen. De forskellige natriumchloridopløsninger, der anvendes til opløselig-gørelse, indeholder 0,05 M tris*HCl, pH 7,4, 0,01 M EDTA, 200 mg/ml natriumazid samt 3 μg/ml phenylmethylsulfonylfluo-35 rid og 3 μg/ml p-chlormercuribenzoat som proteaseinhibitorer.
3 kg kalvefosterhud homogeniseres i 10 liter 1 M
δ
NaCl og ekstraheres i 2 dage. Opløst kollagen fældes fra ekstraktionsopløsningen ved tilsætning af fast natriumchlorid indtil en slutkoncentration på 2,5 M. Efter omrøring natten over samles bundfaldet ved centrifugering (1.800 x g, 20 5 minutter), vaskes to gange med 2,5 M NaCl og opløses igen, idet det omrøres natten over i 10 liter 0,5 M MaCl. Små mængder uopløseligt materiale fjernes ved centrifugering. Den således opnåede blanding af kollagen (type III) og pro-kollagen (type III) fældes med 1,6 M NaCl. Bundfaldet sus-10 penderes derpå i 2 liter 0,05 M tris*HCl (pH 8,0) og opvarmes efter tilsætning af 0,02 M CaCl2 i 20 minutter til 50°C og inkuberes derefter i 3 timer ved 37° C sammen med 1.500 U bakteriel kollagenase (CLSPA, Worthington, USA) pr. gram fugtigt bundfald. Efter indvirkning af kollagenasen skilles 15 det dannede bundfald fra ved centrifugering, og opløsningen dialyseres mod 0,005 M tris*HCl, pH 8,0, 6,8 M urinstof og påføres en DEAE-cellulosesøjle (5,0 x 30 cm), der er ækvi-libreret ved den samme puffer.
De på søjlen bundne proteiner udvaskes med en natrium-20 chloridopløsning, hvis koncentration stiger fra o til 0,3 M. Den samlede elueringsmængde udgør 2 liter. Den ud fra søjlen strømmende opløsning undersøges med hensyn til absorptionen ved 236 nm og antigenaktiviteten ved anvendelse af antistoffer, der er specifikke for det aminoterminale 25 segment af prokollagenet (type III). Normalt indeholder den sidste spids, der elueres fra søjlen, prokollagen-peptidet (type III). Peptidet afsaltes ved dialyse mod destilleret vand og lyofiliseres. Den videre rensning sker på en søjle med agarose A 1,5 M (2 x 120 cm) (Fa. Biorad), der er ækvi-30 libreret med 1 M CaCl2, 0,05 M tris^HCl, pH 7,5.
Eksempel 2
Hvbridomfremstilling
Mus af SJL-stammen immuniseres intramuskulært med 5 35 μg prokollagen-peptid (type III), der fås ifølge eksempel 1, i nærværelse af komplet Freund's adjuvans. Efter 4 uger DK 169571 B1 9 og efter 3 måneder forstærkes immunreaktionen ved en yderligere intramuskulær injektion af 5 μg prokollagen-peptid (type III) i nærværelse af ukomplet Freund's adjuvans. 3 dage før fusionen forstærkes immunreaktionen ved injektion 5 af yderligere 50 )ig prokollagen-peptid (type III).
Til fusionen dræbes dyrene, og miltcellerne isoleres.
I nærværelse af polyéthylenglycol fusioneres miltcellerne med myelom-cellelinien P3X63AG8.653. (Den fremkomne cellelinie er deponeret hos ECACC under nummeret 88030202.) 10 Ved dyrkning af fusionsblandingen i hypoxanthin-aminopterin--thymidin-medium over et tidsrum på 2 uger selekteres efter miltcelle x P3X63AG8.653-hybrider. Til opnåelse af en monoklon cellelinie subklones de opnåede cellekloner flere gange. Overfaserne fra de dannede cellekolonier undersøges med 15 hensyn til antistofproduktion ved radioimmunologisk bindingsforsøg. Således fås det bimonoklone antistof PIIIP 226.
Eksempel 2
Radioimroun-bindingsforsøq 20 300 μΐ cellekulturoverfase eller en anden prøve, f.eks. ascites efter dyrkning af hybridomceller i bughulen hos mus, inkuberes natten over 100 μΐ af en opløsning af 12^J-prokollagen-peptid (type III) (1 ng protein/100 μΐ, fremstillet som i europæisk patentskrift nr. 4940, eksempel 25 1). De dannede antigen-antistof-komplekser udfældes ved tilsætning af anti-rous-IgG-serum fra får eller en anden art. Efter centrifugering og dekantering af overfasen bestemmes mængden af udfældet radioaktivitet i τ-scintillations spektrometer.
30
Eksempel 4
Radioaktiv markering af antistofferne 0,2 ml opløsning med 0,2 mg af det ifølge tysk patentansøgning P 37 14 633.5, eksempel 2 udvundne monoklone an-35 tistof PIIIP 296 eller et andet antistof i 0,05 M phosphat-puffer, pH 4, anbringes i et lille polystyren-reagensglas 10 DK 169571 B1
(12 x 55 mm), og der tilsættes 100 MBq Na125J-opløsning, afpuf ret med 10 μΐ 0,5 M phosphatpuffer, pH 7,4. Efter tilsætning af 50 μΐ vandig opløsning af 20 /ig chloramin T blandes i 1 minut. Derefter afsluttes ioderingsreaktionen ved 5 tilsætning af 50 μΐ vandig opløsning af 20 μg natriumdisul-fit. Det ikke omsatte Na125J skilles derefter fra det 125J--markerede antistof ved chromatografi på en anionbytter. De chromatografiske fraktioner, der indeholder det oprensede 125J-markerede antistof, fortyndes med en opløsning af 20 g 10 Tween 20 og 14,6 g Na2EDTA i 1 liter 0,05 M tris*HCl, pH
8,0, således at koncentrationen af det markerede antistof udgør 200 μg/liter.
Eksempel 5 15 Belægning af reagensglas med antistoffer
Til fiksering af antistoffer på små polystyren-reagensglas (12 x 75 mm) anbringes der i hvert glas 3 oo μΐ opløsning af 4 mg/liter antistof, f.eks. PIIIP 226, i 0,01 M natriumphosphatpuffer, pH 6,4, og der inkuberes natten 20 over ved stuetemperatur. Derefter frasuges antistofopløsningen, og der tilsættes 500 μΐ 1%'s opløsning af okseserum-albumin i 0,05 M tris·citrat, pH 7,5 til hvert glas. Efter inkubering natten over ved stuetemperatur frasuges opløsningen. De antistof-belagte glas tørres over silicagel.
25
Eksempel 6
Immunradiometrisk analyse (Radioimmunometric Assav. IRMA) 0,1 ml af den prøve, der skal analyseres, eller af 30 prokollagen-peptid (type III)-standarden inkuberes i 2 timer ved stuetemperatur i polystyren-reagensglas, der ifølge eksempel 5 er belagt med monoklont antistof PIIIP 226 under tilsætning af 0,1 ml phosphatpufret saltvand (PBS). Derefter vaskes reagensglassene to gange med hver 1 ml PBS. Derefter 35 anbringes der 200 μΐ 125 J-markeret antistof PIIIP 296 (= 40 ng antistof) eller et andet antistof, og der inkuberes DK 169571 B1 11 i 2 timer ved stuetemperatur. Radioaktiviteten af de til glasvæggen bundne antistof-antigen--L2^J-antistof-komplekser bestemmes i -r-scintillationsspektrometer efter to ganges vask med hver 1 ml PBS og påfølgende dekantering.
5 Ved sammenligning af en kalibreringskurve, til hvis oprettelse der er anvendt standarder med forskellige mængder prokollagen-peptid (type III), kan koncentrationen af pro-kolagen-peptid (type III) i den ukendte prøveopløsning beregnes. Fig. 1 viser kalibreringskurven for den immunradio-10 metriske analyse (B/T betyder forholdet mellem bundet og samlet anvendt radioaktivitet).
Eksempel 7
Bestemmelse af molvæqtsfordelinqen af de med 15 PIIIP 226 reagerende antigener i humant serum 1 ml serum adskilles ved gelfiltreringschromatografi på en allyldextran, forgrenet med Ν,Ν'-methylenbisacrylamid [®Sephacryl S 300 søjle (1,6 x 130 cm)] ækvilibreret i PBS med 0,4% ikke-ionisk detergent, f.eks. et polyoxyethyleret 20 sorbitan-monolaurat (Tween 20). 0,2 ml af hver enkelt fraktion inkuberes natten over ved 4°C med en i forhold til mængden af markeret antigen begrænsende mængde af det antistof, der skal undersøges (i 0,1 ml puffer), og 0,1 ml 125J--markeret prokollagen-peptid (type III) (indeholder 1 ng 25 protein) . Derefter inkuberes i 1 time med en i forvejen afprøvet mængde anti-muse-lgG-serum fra får i nærværelse af 10% polyethylenglycol (PEG 6.000). De fældede antigen-anti-stof-komplekser fracentrifugeres (1.500 x g), og efter dekantering bestemmes radioaktiviteten i -τ-scintillationsspektro-30 meter. Ved sammenligning med en kalibreringskurve, til hvis oprettelse der er anvendt standarder med forskellige mængde prokollagen-peptid (type III), kan koncentrationen af de med det anvendte antistof reagerende antigener i chromato-grafifraktionerne bestemmes. Fig. 2 viser elueringsprofilet 35 for det ved hjælp af PIIIP 226 bestemte antigen i sammenligning med profilet af det ved hjælp af polyklone antistoffer bestemte antigen.
Claims (16)
1. Monoklont antistof, kendetegnet ved, at det har specifik virkning mod en epitop på intakt prokol- 5 lagen (type III), pN-kollagen, intakt aminoterminalt pro-kollagen-peptid (type III) og nedbrydningsprodukter af det aminoterminale prokollagen-peptid (type III) , der med hensyn til molekylvægt ligger mellem det aminoterminale prokollagen--peptids (type III) og col l's, og udviser en svag reaktion 10 mod col 1 og nedbrydningsprodukter af det aminoterminale prokollagen-peptid (type III) med samme molvægt som col 1.
2. Monoklont antistof ifølge krav 1 med specifik virkning mod en epitop på det aminoterminale prokollagen- 15 -peptid (type III), der ikke er til stede i col 1.
3. Monoklont antistof ifølge krav l eller 2, kendetegnet ved, at det tilhører klassen igG.
4. Monoklont antistof ifølge et eller flere af kravene 1-3, kendetegnet ved, at det dannes af et hybridom, der er opstået ved fusion af celler af en myelomlinie med lymfocytter fra et i forvejen med aminoterminalt prokollagen-peptid (type III) immuniseret dyr. 25
5 III) immuniseres, b) lymfocytter udvindes og fusioneres med myelom- celler, c) hybriderne udvælges med hensyn til forekomst af et antistof med de i et af kravene 1-3 angivne 10 egenskaber og klones, og d) antistoffet udvindes fra de nævnte kloner.
5. Monoklont antistof PIIIP 226 fra hybridomcellelinien ECACC 88030202.
6. Hybridomcellelinie, der producerer et antistof 30 ifølge krav 1-5, dannet ved fusion af celler fra en myelom- -cellelinie og fra lymfocytter af et i forvejen med prokollagen-peptid (type III) immuniseret dyr.
7. Hybridomcellelinien ECACC 88030202. 35 DK 169571 B1
8. Fremgangsmåde til fremstilling af et monoklont antistof ifølge et eller flere af kravene 1-5, kendetegnet ved, at a) dyr med aminoterminalt prokollagen-peptid (type
9. Fremgangsmåde ifølge krav 8, kendetegnet ved, at hybridomcellelinien ECACC 88030202 anvendes 15 til udførelse af trin d).
10. Fremgangsmåde til kvantitativ immunologisk bestemmelse af prokollagen-peptid (type III) med antistoffer, kendetegnet ved, at 20 a) en flydende prøve, der indeholder aminoterminalt prokollagen-peptid (type III) eller prokollagen (type III), bringes til reaktion med det monoklone antistof ifølge et eller flere af kravene 1-5, og b) mængden af det aminoterminale prokollagen-peptid 25 (type III) eller af prokollagenet (type III) be stemmes over det dannede antigen-antistof kompleks.
11. Fremgangsmåde til kvantitativ immunologisk bestemmelse af prokollagen-peptid (type III) med antistoffer, 30 kendetegnet ved, at a) det monoklone antistof ifølge et eller flere af kravene 1-4 kobles til en fast matrix, b) en flydende prøve, der indeholder aminoterminalt prokollagen-peptid eller prokollagen, bringes til 35 reaktion med det nævnte antistof, og c) det bundne antigen påvises med markerede monoklone DK 169571 B1 eller polyklone antistoffer med specificitet for proko1lagen-peptid (type III) eller prokollagen (type III).
12. Fremgangsmåde ifølge krav 11, kendeteg net ved, at der i trin a) anvendes polyklone eller monoklone antistoffer med specificitet for prokollagen-peptid (type III) og/eller prokollagen (type III) og i trin c) et monoklont antistof ifølge et eller flere af kravene 1-5, 10 idet antistoffet er markeret.
13. Fremgangsmåde ifølge krav 11, kendetegnet ved, at der i trin a) som monoklont antistof anvendes et antistof, der udviser specifik virkning mod en epitop 15 af intakt prokollagen (type III), pN-kollagen og intakt aminoterminalt prokollagen-peptid (type III) og en svag reaktion mod col 1 og nedbrydningsprodukter af det aminoter-minale prokollagen-peptid (type III) med samme molvægt som col l. 20
14. Fremgangsmåde ifølge krav 12, kendetegnet ved, at der i trin a) som monoklont antistof anvendes et antistof, der udviser specifik virkning mod en epitop af intakt prokollagen (type III), pN-kollagen (spids 4a) og 25 intakt aminoterminalt prokollagen-peptid (type III) (spids 5a) og en svag reaktion mod col 1 og nedbrydningsprodukter af det aminoterminale prokollagen-peptid (type III) med samme molvægt som col 1 (spids 6a).
15. Fremgangsmåde ifølge krav 13 eller 14, ken detegnet ved, at der som monoklont antistof anvendes PIIIP 296 fra hybridomcellelinien ECACC 87042308.
16. Diagnostisk præparat til bestemmelse af prokol- 35 lagen-peptid (type III)-mængden i legemsvæsker, kendetegnet ved en effektiv mængde af det monoklone anti DK 169571 B1 stof ifølge et eller flere af kravene 1-5 alene eller i kombination med andre antistoffer i blanding med en diagnostisk acceptabel bærer.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3814216 | 1988-04-27 | ||
| DE3814216 | 1988-04-27 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK202189D0 DK202189D0 (da) | 1989-04-26 |
| DK202189A DK202189A (da) | 1989-10-28 |
| DK169571B1 true DK169571B1 (da) | 1994-12-05 |
Family
ID=6353005
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK202189A DK169571B1 (da) | 1988-04-27 | 1989-04-26 | Monoklont antistof, fremgangsmåde til dets fremstilling, hybridomcellelinie, der producerer antistoffet, fremgangsmåder til kvantitativ immunologisk bestemmelse af prokollagen-peptid (type III) med antistoffet, samt diagnostisk præparat indeholdende det monoklonale antistof |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0339443B1 (da) |
| JP (1) | JPH07110880B2 (da) |
| AT (1) | ATE115963T1 (da) |
| CA (1) | CA1338324C (da) |
| DE (1) | DE58908787D1 (da) |
| DK (1) | DK169571B1 (da) |
| ES (1) | ES2065350T3 (da) |
| FI (1) | FI98705C (da) |
| GR (1) | GR3014957T3 (da) |
| IE (1) | IE66320B1 (da) |
| NO (1) | NO179107C (da) |
| PT (1) | PT90369B (da) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6010862A (en) * | 1987-11-06 | 2000-01-04 | Washington Research Foundation | Methods of detecting collagen type III degradation in vivo |
| DE4225038C2 (de) * | 1992-07-29 | 1995-11-30 | Boehringer Mannheim Gmbh | Herstellung und Verwendung von Antikörpern gegen Kollagen |
| FI960392L (fi) * | 1993-07-28 | 1996-01-29 | Boehringer Mannheim Gmbh | Immunomääritys kollageenin tai kollageenifragmenttien osoittamiseksi |
| GB9506050D0 (en) | 1995-03-24 | 1995-05-10 | Osteometer A S | Assaying collagen fragments in body fluids |
| ES2154739T3 (es) | 1994-10-17 | 2001-04-16 | Osteometer Biotech As | Estimacion del modelo de fragmentacion del colageno en fluidos corporales y el diagnostico de trastornos asociados con el metabolismo del colageno. |
| US6107047A (en) * | 1996-03-21 | 2000-08-22 | Osteometer Biotech A/S | Assaying protein fragments in body fluids |
| GB9617616D0 (en) | 1996-08-22 | 1996-10-02 | Osteometer Biotech As | Assaying protein fragments in body fluids |
| DE69705423T2 (de) | 1996-12-09 | 2002-05-16 | Osteometer Biotech As Herlev | Sandwichtest zum nachweis von kollagenfragmenten |
| US6117646A (en) * | 1997-09-22 | 2000-09-12 | Osteometer Biotech A/S | Assaying protein fragments in body fluids |
| DE69915059T2 (de) | 1998-05-28 | 2004-08-26 | Bayer Healthcare Ag | Monoklonaler antikörper und assay zur bestimmung von n-terminalem prokollagen-propeptid typ iii (piiinp) |
| US6602980B1 (en) | 1998-06-19 | 2003-08-05 | Washington Research Foundation | Collagen type III synthetic peptides for collagen resorption assays |
| US6916903B2 (en) | 1998-06-19 | 2005-07-12 | Washington Research Foundation | Collagen type III synthetic peptides for collagen resorption assays |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3209149A1 (de) * | 1982-03-13 | 1983-10-06 | Hoechst Ag | Verfahren zur gemeinsamen immunologischen bestimmung von prokollagen-peptid (typ iii) und prokollagen-peptid col 1 (typ iii) und verfahren zur herstellung von anti-prokollagen-peptid col 1 (typ iii)-serum |
-
1989
- 1989-04-19 EP EP89106970A patent/EP0339443B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-04-19 AT AT89106970T patent/ATE115963T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-04-19 ES ES89106970T patent/ES2065350T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-04-19 DE DE58908787T patent/DE58908787D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-04-25 FI FI891953A patent/FI98705C/fi not_active IP Right Cessation
- 1989-04-26 NO NO891732A patent/NO179107C/no not_active IP Right Cessation
- 1989-04-26 IE IE137289A patent/IE66320B1/en not_active IP Right Cessation
- 1989-04-26 PT PT90369A patent/PT90369B/pt not_active IP Right Cessation
- 1989-04-26 DK DK202189A patent/DK169571B1/da not_active IP Right Cessation
- 1989-04-26 JP JP1104804A patent/JPH07110880B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1989-04-26 CA CA000597887A patent/CA1338324C/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-02-03 GR GR950400025T patent/GR3014957T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0339443B1 (de) | 1994-12-21 |
| NO179107C (no) | 1996-08-07 |
| NO179107B (no) | 1996-04-29 |
| IE66320B1 (en) | 1995-12-27 |
| ATE115963T1 (de) | 1995-01-15 |
| NO891732L (no) | 1989-10-30 |
| PT90369A (pt) | 1989-11-10 |
| GR3014957T3 (en) | 1995-05-31 |
| PT90369B (pt) | 1994-08-31 |
| EP0339443A3 (en) | 1990-05-09 |
| FI891953L (fi) | 1989-10-28 |
| DE58908787D1 (de) | 1995-02-02 |
| FI891953A0 (fi) | 1989-04-25 |
| NO891732D0 (no) | 1989-04-26 |
| ES2065350T3 (es) | 1995-02-16 |
| IE891372L (en) | 1989-10-27 |
| DK202189D0 (da) | 1989-04-26 |
| FI98705B (fi) | 1997-04-30 |
| JPH0213396A (ja) | 1990-01-17 |
| FI98705C (fi) | 1997-08-11 |
| CA1338324C (en) | 1996-05-14 |
| DK202189A (da) | 1989-10-28 |
| JPH07110880B2 (ja) | 1995-11-29 |
| EP0339443A2 (de) | 1989-11-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4970144A (en) | Peptide fragments of human apolipoprotein, type-specific antibodies and methods of use | |
| Curtiss et al. | A novel method for generating region-specific monoclonal antibodies to modified proteins. Application to the identification of human glucosylated low density lipoproteins. | |
| EP0741144B1 (en) | Antiannexin-v monoclonal antibody, process for producing the same, and use therof | |
| DK169571B1 (da) | Monoklont antistof, fremgangsmåde til dets fremstilling, hybridomcellelinie, der producerer antistoffet, fremgangsmåder til kvantitativ immunologisk bestemmelse af prokollagen-peptid (type III) med antistoffet, samt diagnostisk præparat indeholdende det monoklonale antistof | |
| JPWO1996015152A1 (ja) | 抗アネキシンｖモノクローナル抗体並びにその製法及びその利用 | |
| WO1986004144A1 (en) | Peptide fragments of human apolipoprotein, type-specific antibodies and methods of use | |
| EP0605410B1 (en) | Immunodiagnostic assay for rheumatoid arthritis | |
| DK168872B1 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af antistoffer til immunologisk bestemmelse af aminoterminalt prokollagen peptid (type III) og/eller prokollagen (type III), antistoffer fremstillet ved fremgangsmåden, anvendelsen af antistofferne til immunologisk bestemmelse af aminoterminalt prokollagen peptid (type III) og/eller prokollagen (type III) og udgangsprodukt til brug ved fremgangsmåden | |
| JP3018110B2 (ja) | モノクローナル抗体 | |
| US5679583A (en) | Monoclonal antibodies for the selective immunological determination of intact procollagen peptide (type III) and procollagen (type III) in body fluids | |
| DK169583B1 (da) | Monoklont antistof, fremgangsmåde til dets fremstilling, hybridomcellelinie, der producerer antistoffet, fremgangsmåde til kvantitativ immunologisk bestemmelse af prokollagen-peptid (type III) med antistoffet, samt diagnostisk præparat indeholdende det monoklonale antistof | |
| CN119161475B (zh) | 一种检测igfbp2蛋白或igfbp2多肽的单克隆抗体对及其应用 | |
| CA2155793C (en) | Monoclonal antibiodies for selective immunological determination of high molecular weight, intact laminin forms in body fluids | |
| US5514599A (en) | Antibodies against highly conserved amino acid sequences of insulin a process for the preparation of these antibodies and the use thereof in immunoassays | |
| JPH11151085A (ja) | 抗ヒトメダラシンモノクローナル抗体、その製造方法及びそれを用いる免疫学的測定方法 | |
| Kuronen et al. | Production of monoclonal and polyclonal antibodies against human osteocalcin sequences and development of a two-site ELISA for intact human osteocalcin | |
| AU600261B2 (en) | Reagent for and procedure in the determination of C3a by immunochemical assay | |
| JPH04134097A (ja) | ラミニン フラグメント | |
| JPH02219596A (ja) | 心筋ミオシン重鎖に対する単一クローン抗体 | |
| JPH0342572A (ja) | ラミニン測定試薬 | |
| CA2016524A1 (en) | Methods and systems for determining the presence of a pneumocystis carinii antigen in blood | |
| JPH05244989A (ja) | 抗体および免疫化学的測定法 | |
| JPH06100599A (ja) | 扁平上皮癌関連抗原及びその免疫学的利用方法 | |
| JPH08127599A (ja) | モノクローナル抗体、その製造法、その抗体産生細胞及びクラミジア・ニューモニエの検出法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| B1 | Patent granted (law 1993) | ||
| PUP | Patent expired |