DK157890B - Fremgangsmaade til fremstilling af et antibiotikum, bmg162-af2, eller et pharmaceutisk acceptabelt salt deraf - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af et antibiotikum, bmg162-af2, eller et pharmaceutisk acceptabelt salt deraf Download PDFInfo
- Publication number
- DK157890B DK157890B DK394281A DK394281A DK157890B DK 157890 B DK157890 B DK 157890B DK 394281 A DK394281 A DK 394281A DK 394281 A DK394281 A DK 394281A DK 157890 B DK157890 B DK 157890B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- bmg162
- substrate
- culture
- agar
- days
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 20
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title claims description 11
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 title claims description 8
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 title claims description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 56
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 241000193417 Brevibacillus laterosporus Species 0.000 claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 4
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims description 4
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 3
- 239000011260 aqueous acid Substances 0.000 claims description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 2
- 239000012608 weak cation exchange resin Substances 0.000 claims description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 54
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 32
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 30
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 30
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 25
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 23
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 22
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 22
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 18
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 15
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 12
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 12
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 12
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 12
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 12
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 12
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 12
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 9
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 9
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 8
- RXKJFZQQPQGTFL-UHFFFAOYSA-N dihydroxyacetone Chemical compound OCC(=O)CO RXKJFZQQPQGTFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 8
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 8
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 7
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 7
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 6
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N N-benzoylglycine Chemical compound OC(=O)CNC(=O)C1=CC=CC=C1 QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 6
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- -1 pH being 7.2) Chemical compound 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 5
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 5
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 4
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 4
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 4
- 208000007093 Leukemia L1210 Diseases 0.000 description 4
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 4
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- 229940120503 dihydroxyacetone Drugs 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 4
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 4
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 4
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 4
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BTNMPGBKDVTSJY-UHFFFAOYSA-N keto-phenylpyruvic acid Chemical compound OC(=O)C(=O)CC1=CC=CC=C1 BTNMPGBKDVTSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 4
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000012449 sabouraud dextrose agar Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- DPEYHNFHDIXMNV-UHFFFAOYSA-N (9-amino-3-bicyclo[3.3.1]nonanyl)-(4-benzyl-5-methyl-1,4-diazepan-1-yl)methanone dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.CC1CCN(CCN1Cc1ccccc1)C(=O)C1CC2CCCC(C1)C2N DPEYHNFHDIXMNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 3
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 3
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 3
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 3
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 3
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 3
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 3
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 3
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 3
- 208000006268 Sarcoma 180 Diseases 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 3
- 239000002585 base Substances 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 3
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 3
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical compound CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 3
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 229940111688 monobasic potassium phosphate Drugs 0.000 description 3
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 3
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 231100000161 signs of toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 2
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 239000001903 2-oxo-3-phenylpropanoic acid Substances 0.000 description 2
- ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N Acetoin Chemical compound CC(O)C(C)=O ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 2
- 241000193764 Brevibacillus brevis Species 0.000 description 2
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 2
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 2
- 208000003468 Ehrlich Tumor Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N Gluconic acid Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 2
- DEDGUGJNLNLJSR-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxycinnamic acid Natural products OC(=O)C(O)=CC1=CC=CC=C1 DEDGUGJNLNLJSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 2
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 description 2
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N picric acid Chemical class OC1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M potassium bromide Chemical compound [K+].[Br-] IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N spermidine Chemical compound NCCCCNCCCN ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N tetramethylsilane Chemical compound C[Si](C)(C)C CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZPLCXHWYPWVJDL-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-1,3-oxazolidin-2-one Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1CC1NC(=O)OC1 ZPLCXHWYPWVJDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000607534 Aeromonas Species 0.000 description 1
- 241000607516 Aeromonas caviae Species 0.000 description 1
- 241000607519 Aeromonas sp. Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 description 1
- 241000193747 Bacillus firmus Species 0.000 description 1
- 241001450781 Bipolaris oryzae Species 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 241000222178 Candida tropicalis Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241001508000 Corynebacterium bovis Species 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 241001337994 Cryptococcus <scale insect> Species 0.000 description 1
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 1
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 1
- 239000012029 Fehling's reagent Substances 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- 244000285963 Kluyveromyces fragilis Species 0.000 description 1
- 235000014663 Kluyveromyces fragilis Nutrition 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N 0.000 description 1
- IFQSXNOEEPCSLW-DKWTVANSSA-N L-cysteine hydrochloride Chemical compound Cl.SC[C@H](N)C(O)=O IFQSXNOEEPCSLW-DKWTVANSSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193386 Lysinibacillus sphaericus Species 0.000 description 1
- 241001330975 Magnaporthe oryzae Species 0.000 description 1
- 241000192041 Micrococcus Species 0.000 description 1
- 241000515012 Micrococcus flavus Species 0.000 description 1
- 241000191938 Micrococcus luteus Species 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 241000187480 Mycobacterium smegmatis Species 0.000 description 1
- 229910017897 NH4 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000187654 Nocardia Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000588702 Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum Species 0.000 description 1
- 241000235645 Pichia kudriavzevii Species 0.000 description 1
- HLCFGWHYROZGBI-JJKGCWMISA-M Potassium gluconate Chemical compound [K+].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O HLCFGWHYROZGBI-JJKGCWMISA-M 0.000 description 1
- 241000588770 Proteus mirabilis Species 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 241000521936 Pseudomonas amygdali pv. lachrymans Species 0.000 description 1
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- 241000813090 Rhizoctonia solani Species 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 241001354013 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis Species 0.000 description 1
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 241000607715 Serratia marcescens Species 0.000 description 1
- 241000607764 Shigella dysenteriae Species 0.000 description 1
- 241000607762 Shigella flexneri Species 0.000 description 1
- 241000607760 Shigella sonnei Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 241001147844 Streptomyces verticillus Species 0.000 description 1
- 241000223238 Trichophyton Species 0.000 description 1
- 241001045770 Trichophyton mentagrophytes Species 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000544286 Vibrio anguillarum Species 0.000 description 1
- 241000589655 Xanthomonas citri Species 0.000 description 1
- 241000589652 Xanthomonas oryzae Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000002814 agar dilution Methods 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- 229940065181 bacillus anthracis Drugs 0.000 description 1
- 229940005348 bacillus firmus Drugs 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001722 carbon compounds Chemical class 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 229940023913 cation exchange resins Drugs 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 1
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 230000009615 deamination Effects 0.000 description 1
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 229940111685 dibasic potassium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229940061607 dibasic sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 230000003467 diminishing effect Effects 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L disodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000010410 dusting Methods 0.000 description 1
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- DKAGJZJALZXOOV-UHFFFAOYSA-N hydrate;hydrochloride Chemical compound O.Cl DKAGJZJALZXOOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GFAZHVHNLUBROE-UHFFFAOYSA-N hydroxymethyl propionaldehyde Natural products CCC(=O)CO GFAZHVHNLUBROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N methyl red Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1\N=N\C1=CC=CC=C1C(O)=O CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 238000006395 oxidase reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229940075930 picrate Drugs 0.000 description 1
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-M picrate anion Chemical compound [O-]C1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 239000004224 potassium gluconate Substances 0.000 description 1
- 235000013926 potassium gluconate Nutrition 0.000 description 1
- 229960003189 potassium gluconate Drugs 0.000 description 1
- FJWLWIRHZOHPIY-UHFFFAOYSA-N potassium;hydroiodide Chemical compound [K].I FJWLWIRHZOHPIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229940007046 shigella dysenteriae Drugs 0.000 description 1
- 229940115939 shigella sonnei Drugs 0.000 description 1
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- ZLVSYODPTJZFMK-UHFFFAOYSA-M sodium 4-hydroxybenzoate Chemical compound [Na+].OC1=CC=C(C([O-])=O)C=C1 ZLVSYODPTJZFMK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940073490 sodium glutamate Drugs 0.000 description 1
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 description 1
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 229940074404 sodium succinate Drugs 0.000 description 1
- ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L sodium succinate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CCC([O-])=O ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- GNBVPFITFYNRCN-UHFFFAOYSA-M sodium thioglycolate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)CS GNBVPFITFYNRCN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 1
- ZBCAZEFVTIBZJS-UHFFFAOYSA-M sodium;2-benzamidoacetate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)CNC(=O)C1=CC=CC=C1 ZBCAZEFVTIBZJS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 229940063673 spermidine Drugs 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 125000000542 sulfonic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 108010050327 trypticase-soy broth Proteins 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C279/00—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
- C07C279/04—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of guanidine groups bound to acyclic carbon atoms of a carbon skeleton
- C07C279/14—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of guanidine groups bound to acyclic carbon atoms of a carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/832—Bacillus
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Virology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
i
DK 157890 B
o
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af et hidtil ukendt antibiotikum/BMG162-aF2/ med formlen 5 nh2
XC-NH-(CKp).,-CH-CHp-CO
II 2 4 I 2 I
NH OH NH
10 f-0H
CO-NH-(0¾ ) ( 0¾ ) 3-NHg 15 eller et pharmaceutisk acceptabelt salt deraf, hvilket antibiotikum er aktivt ved behandling af tumorer hos varmblodede dyr.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 1 angivne.
20 Den BMG162-aF2-producerende stamme. Bacillus late- rosporus, BMG162-aF2 FERM-P 5230, ATCC 31.932, er isoleret fra en jordprøve, opsamlet ved Mt. Taihei i Tochigi-præfekturet i Japan i august 1978 af opfinderne.
BMG162-aF2-stammens dyrkhingsmæssige og taksonomiske 25 kendetegn er beskrevet nedenfor.
1. Mikroskopisk morfologi BMG162-aF2-stammen er en bakterie, der udviser foranderlig Gram-reaktion og er en stavformet sporedanner, der i reglen måler 0,6-0,8 x 2-3,5 Ji i størrelse. Den har late-30 rale flageller og udviser aktiv bevægelighed. Sporen er ellipseformet, og dens overvejende stilling er central, og den måler 0,5-0,7 x 1,0-1,5 ji, og staven er tydelig kvældet. Sporen har i sin sidedel et afsnit (parasporalt legeme), der farves godt i kanoform med krystalviolet og er varmebestan-35 2
O
DK 157890B
digt. Sporen farves ikke med syrefast farve.
2. Karakteristika ved vækst på forskellige dyrkningssubstrater (1) På en plade af agarsubstrat: Kolonier er uigennemsigtige, matte og runde af form, og deres kant er uregel- 5 mæssig-1, 0g- de er brunlighvide.
(2) På skråtstillet agarsubstrat: Væksten er diffus og multipliceres på skråagarens overflade, som synes uigennemsigtig og tør. Vækstens farve er brunlighvid.
(3) Ί bouillonsubstrat: Dyrkningssubstratet bliver 10 uklart over det hele på den første inkubationsdag, og på den anden dag begynder en hinde at vokse på overfladen. På tredje dag har hinden bredt sig til hele overfladen, og substratet bliver klart, og myceliet bundfældes i bunden af reagensglasset.
15 (4) På gelatinesubstratstik: Ved inkubering ved 20°C fremkommer formering langs stikket på første dag. På anden dag begynder fordybning i dette formeringsafsnit. Gelatinen i substratet begynder at blive flydende fra ca. 6. dag. Når der derimod inkuberes ved 30°C, begynder en hinde 20 at gro på anden dag, og substratet begynder at blive flydende på den fjerde dag. Gelatinen i substratet er helt flydende på 7. dag.
(5) På BCP-mælk: Pra ca. 5. dags inkubation slår bromcresol-purpur (BCP) om til blåt, og fra ca. 12. dag be- 25 gynder peptonisering.
(6) På Sabouraud-dekstroseagar og i Sabouraud-deks-trosebouillon: / På skrå Sabouraud-dekstrose agar (indeholdende 10 g pepton, 40 g dekstrose, 15 g agar og 1000 ml afioniseret vand, pH ikke indstillet) og i Sabouraud-dekstrosebouil- 30 Ion (indeholdende samme stoffer som ovenfor, med undtagelse af agar) ved 30 og 37°C iagttages ingen vækst i flydende substrat, og svag vækst forekommer på skrå-agaren i dens nederste del.
3. Fysiologiske egenskaber 35 Medmindre andet er specielt anført, er inkubations temperaturen 37°C.
3
O
DK 157890 B
(1) Nitratreduktion: På et substrat af nitratbouil lon (indeholdende 10 g kødekstrakt, 10 g pepton, 5 g NaCl, 1 g KNO^ og 1000 ml afioniseret vand, idet pH er 7,2) påvises nitrit i hele dyrkningssubstratet på 1., 3. og 5. inku-5 bationsdag. På 5. dag iagttages specifikt kendelig reaktion, og når der tilsættes et reagens til dyrkningssubstratet, fremkommer et rødligbrunt bundfald.
(2) Afnitrificeringsreaktion: Når der foretages en afnitrificeringsreaktionsprøve ved hjælp af den af Komagata 10 m.fl. i T. Hasegawa "Taxonomy and Identification of Microorganisms", side 223, The University of Tokyo Press, 1975, beskrevne metode, er resultatet negativt.
(3) MR-prøve: På et dyrkningssubstrat indeholdende 5 g glukose, 7 g pepton, 5 g NaCl og 1000 ml afioniseret 15 vand,-hvor pH er 7,5 ved 30°C foretages en methylrødt-prøve (MR) på 1., 2. og 5. dag , og denne er positiv i alle tilfælde .
(4) VP-prøve: På et dyrkningssubstrat indeholdende 5 g glukose, 7 g pepton, 5 g NaCl og 1000 ml afioniseret vand, 20 hvor pH er 7,5, ved 30°C foretages en Voges-Proskauer-(VP)-prøve på 1., 2. og 5. dag, og denne er i alle tilfældene negativ.
(5) Indoldannelse: På et dyrkningssubstrat indeholdende 20 g polypepton, 5 g NaCl og 1000 ml afioniseret vand, 25 hvor pH er 7,4, iagttages på 1. og 2. dag ingen indoldannelse, derimod på 5. dag.
(6) Dannelse af hydrogensulfid: På TSI-agar (tredobbelt sukker-jernagar: kødekstrakt 3g, gærekstrakt 3 g, pepton 15 g, proteosepepton 5 g, lactose 10 g, saccharose 30 10 g, dekstrose 1 g, ferrosulfat 0,2 g, natriumchlorid 5 g, natriumthiosulfat 0,3 g, agar 12 g, phenolrødt 0,024 g og destilleret vand 1 liter, pH 7,2) iagttages i et tidsrum på 7 dages inkubation ingen dannelse af hydrogensulfid.
(7) Stivelseshydrolyse: På en plade af agarsubstrat 35 indeholdende 0,2% opløselig stivelse gennemføres stregkultur, og afprøvning med iod/kaliumiodopløsning sker på 1., 2., 3., 5., 6., 13. og 15. dag; der iagttages ikke i noget tilfæl 4
O
DK 157890B
de nedbrydning af stivelse.
(8) Udnyttelse af citronsyre: På Koser citratsubstrat og- Christensen-agar i 5 dage iagttages ingen vækst på disse substrater.
5 (9) Udnyttelse af uorganiske nitrogenkilder til vækst: Der afprøves ved at tilsætte nitrogenkilderne (1 g NaNO.j/ 0,78 g (NH^^SO^ eller 1,7 g natriumglutamat) til grundsubstratet (indeholdende 10 g glukose, 1 g K^PO^, 0,5 g MgS04.7H20, 0,2 g KC1 og 1000 ml afioniseret vand, idet 10 pH er 7,2) , og der iagttages ingen vækst i nogen af de afprøvede nitrogenkilder.
(10) Pigmentdannelse: Efter inkubation natten over
på King's A-agar (20 g pepton, 1,4 g magnesiumchlorid, 10 g ammoniumsulfat, 15 g agar og 1 liter detstilleret vand, pH
15 7,2) får kulturen lov at stå ved stuetemperatur i 6 dage, og på King's B-agar (20 g pepton, 1,5 g dibasisk kaliumphos-phat, 1,5 g magnesiumsulfat, 15 g agar og 1 liter destilleret vand, pH 7,2) i 6 dage; der iagttages intet opløseligt pigment i noget af tilfældene.
20 (11) Urease: På urease-substrat (2 g pepton, 20 g urinstof, 5 g natriumchlorid, 9 g monobasisk kaliumphosphat, 3 g dibasiskr natriumphosphat, 0,01 g rød phenol og 1 liter destilleret vand, pH 6,2) i 24 timer er resultatet ureasene-gativt.
25 (12) Oxidase: Frisk dyrkning på skråtstillet agar substrat natten over viser positiv oxidasereaktion med "Cytochrome" oxidasepapir (fremstillet af Nissui Co.).
(13) Catalase: Frisk dyrkning på skråtstillet agarsubstrat natten over danner skum og er positiv ved catalase- 30 prøve med 3%'s vandig hydrogenperoxid.
(14) Vækstbetingelser: Afprøvet i 24 timer på bouillon ved pH 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 6,8, 7,8, 8,2 og 8,8 efter sterilisering iagttages vækst ved pH 5,0 til 8,2. Optimal pH for vækst er pH 6,0-7,8. Afprøvet ved 9, 15, 20, 24, 35 27, 30, 37, 40, 45 og 50°C i 24 timers inkubation iagttages vækst mellem 15 og 40°C. Optimal temperatur for vækst er i nærheden af 37°C.
DK 157890 B
O
5 (15) Oxygens virkning: Når kulturen suspenderes i agarsubstrat indeholdende 1% glucose og størkner på et dybt lag agar, iagttages god vækst rundt om på substratets overflade. På TEP-agar (7 g planteekstrakt, 5 g gærekstrakt, 5 3 g kødekstrakt, 10 g pepton, 10 g tripton, 3 g sojapepton, 3 g dekstrose," 2,5 g monobasisk kaliumphosphat, 2 g natrium-chlorid, 0,3 g L-cystein-HCl, 0,3 g natriumthioglycollat, 14 g agar og 1 liter destilleret vand, pH 7,2) under anaerobe betingelser, iagttages vækst.
10 (16) O-F-prøve (Hugh-Leifson-prøve): Både under aerobe og anaerobe betingelser nedbrydes glukose og der dannes syre.
(17) Udnyttelse af carbonkilder: Når udnyttelsen af carbonforbindelser undersøges ved hjælp af Ii'zuka og Ko-.jg magatas metode (T-Hasegawa, "Taxonomy and Identification of Microorganisms", side 230, The University of Tokyo Press, 1975) udnyttes glukose, glycerin og natriumsuccinat til væksten, medens natriumacetat, natriumcitrat og natriumparahy-droxybenzoat ikke udnyttes.
20 (18) Syre- og gasdannelse fra sukkerforbindelser: BMG162-aF2-stamme stregdyrkes på skråtstillet substrat, der fremstilles ved sterilt at tilsætte forskellige sukkerforbindelser, der er steriliseret separat, til grundsubstratet (indeholdende 1 g (NH4)2HP04, 0,2 g NaCl, 0,2 g MgS04.7H20, 0,2 25 9 gærekstrakt, 15 g agar, 4 ml 0,2%’s vandig opløsning af bromeresolviolet og 1000 ml afioniseret vand, hvor pH er 7,2) ved 1% af slutkoncentrationen af hver sukkerforbindelse og derefter lade det størkne. Syredannelsen undersøges over et tidsrum på 40 dage. Der dannes syre fra D-glucose, D-mannose, 30 D-fructose, D-mannit, maltose, trehalose og glycerin, men ikke fra D-xylose, L-arabinose, D-galactose, rhamnose, D-sorbit, inosit, lactose, saccharose, raffinose og stivelse.
Også gasdannelsen undersøges ved anvendelse af et Durham-glas efter tilsætning af forskellige sukkerforbindel-35 ser på samme måde som nævnt ovenfor til grundsubstraterne (indeholdende 10 g pepton, 5 g NaCl, 0,008 g bromthymolblåt og 1000 ml afioniseret vand, idet pH er 7,2), over et tids 6
O
DK 157890B
rum på 2 uger. Der dannes ingen gas fra nogen af de afprøvede sukkerforbindelser.
-(19) Oxidationsprøve med gluconsyre: Ved hjælp af "Gluconaf'-substrat (2 g monobasisk kaliumphosphat, 0,5 g 5 magnesiumsulfat, 5 g natriumchlorid, 0,5 g ammoniumsulfat, 10 g kaliumgluconat og 1 liter destilleret vand, pH 6,3) * giver prøven et negativt resultat.
(20) Dannelse af dihydroxyacetone: Efter inkubation af dyrkningsmediet indeholdende 10 g gærekstrakt, 20 g gly- 10 cerin, 15 g agar og 1000 ml afioniseret vand, hvor pH er 7,0, i 3, 5, 10‘og 24 dage iagttages ingen dannelse af dihydroxyacetone i nogen af tilfældene, der afprøves med Fehling's reagens .
(21) Modstandsevne over for natriumchlorid: Efter 15 at stammen er inokkuleret i dyrkningssubtratet, der er fremstillet ved at tilsætte natriumchlorid til grundsubstratet indeholdende 10 g trypticase ("Trypticas", BBL) og 1000 ml afioniseret vand, pH 7,0, så at natriumchloridkoncentrationen i hvert substrat er 2, 5 og 7%, iagttages stammens formering 2o på overfladekulturen i et tidsrum på 4 dage. I grundsubstratet med 2% natriumchlorid iagttages stammens formering, men ved en koncentration på over 2% natriumchlorid iagttages ingen vækst.
(22) Sønderdelingsprøve i hippursyre: Ved inkube-25 ring på substrat (pH 7,4) fremstillet ved at tilsætte 10 g natriumhippurat til 1000 ml Heart-infusionsbuilion ("Difco") i 4 dage iagttages sønderdeling af hippursyre ved anvendelse af ferrichloridopløsning.
(23) Prøve med phenylpyrudruesyre (PPA): Efter 30 tæt inokulering på skråtstillet substrat indeholdende 3 g gærekstrakt, 2 g DL-phenylalanin, 1 g NaHPO^, 5 g NaCl, 12 g agar og 1000 ml afioniseret vand ved pH 7,3 og derefter in-kubering i 24 timer er prøven ved anvendelse af 10%'s ferrichloridopløsning negativ.
35 (24) Opløsningsprøve med tyrosin: Ved inkubering på tyrosinagar (indeholdende 1000 ml agarsubstrat og 5 g tyrosin, pH 7,2) ved 30 og 37°C iagttages opløsning af tyrosin
DK 157890 B
7 efter 2 og 4 dages inkubation.
Ved opsummering af de ovennævnte egenskaber bemærkes følgende: BMG162-aF2-stammen er en bakterie, der er fakultativ 5 anaerobisk og udviser skiftende Gram-reaktion, og som har sporer og laterale flageller og altså udviser en vis bevægelighed. Sporen er elliptisk og central og har i siden et afsnit (Parasporallegeme), der farves godt i kanoform med krystalviolet og er varmebestandig. Stavene er klart kvældede 10 og ikke syrebestandige, og stammen breder sig og formerer sig på agarsubstrat og danner hinde i flydende dyrkningssubstrat. Den gør gelatine flydende og peptoniserer BCP-mælk, efter at mælken er blevet blå. Der iagttages ingen vækst på Sabouraud-dekstrosebouillon, men der iagttages svag vækst 15 på Sabouraud-dekstroseagar. Den reducerer nitrat, og deni-trificeringsreaktionen er negativ, og MR-prøve er positiv, medens VP-prøve er negativ. Der påvises indol på 5. dagen, og der dannes intet hydrogensulfid. Den nedbryder ikke stivelse og udnytter ikke citronsyre. Resultaterne af urease-, 20 oxidase- og catalase-prøver er henholdsvis negativ, positiv og negativ. Vækst iagttages inden for et pH-interval på 5,0-8,2, og den optimale pH-værdi for vækst er 6,0-7,8. Der iagttages også vækst inden for et temperaturinterval fra 15 til 40“C, hvor den optimale temperatur for vækst er ved ca.
25 37°C. Der iagttages ligeledes vækst under aerobe betingelser.
Den nedbryder glucose under oxiderende og fermenterende betingelser og danner syre. Den danner syre men ingen gas fra D-glucose, D-mannose, D-fructose, D-mannit, maltose, trehalose og glycerin. Den oxiderer ikke gluconsyre og danner 30 heller ikke dihydroxyacetone. Den nedbryder ikke hippursyre og phenylalanin men opløser tyrosin. Der iagttages ingen vækst i dyrkningssubstrat med mere end 5% natriumchlorid.
På basis af ovenstående karakteristika for stammen BMG162-aF2 bemærkes det, at denne stamme tilhører slægten 35 Bacillus og især ligner Bacillus firmus, Bacillus laterospo-rus, Bacillus brevis eller Bacillus sphaericus, der er en
DK 157890B
δ artsgruppe med fælles karakteristika: catalase-positiv og ingen dihydroxyacetoneproduktion som beskrevet i Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 8. udg., side 542 (R.E. Buchanan og N.E. Gibbons, The Williams & Wilkins Com-5 pany, Baltimore, 1974). Karakteren af stammen BMG162-aF2 vises i tabel I i sammenligning med de ovennævnte fire arter.
' Som det fremgår af tabel I, ligner stammen BMG162- aF2 meget Bacillus laterosporus. Forskellen mellem stammen BMG162-aF2 og Bacillus laterosporus ligger hovedsagelig i 10 beskrivelsen af vækstens udseende på Sabouraud-glucoseagar.
15 20 25 30 35
O
DK 157890B
9
Tabel I
Sammenligning mellem BMG162-aF2-stammen og dermed beslægtede arter B-fir- B.latero- B. bre- B.sphae- BMG162- 5 _mus_sporas_vis_ricus_-aF2_
Spore
Form Ea E E S elliptisk
Udvikler klart spo- - + + + + rangium
10 Dcminerende stilling C C CT T C
Dannelse fra glucose af
Syre +(svag) + + el. - +
Gas
Acetoin - 15 Stave
Bredde, pm 0,6-0,9 0,5-0,8 0,6-0,9 0,6-1 0,6-0,8 Længde, jim 1,2-4 2-5 1,5-4 1,5-5 2-3,5
Gram-reaktion + d&v d&v d&v d&v
Let farvelig del på + (t)*5 - - + 20 sporens ene side
Bevægelighed d + + + +
Væksttanperatur °C
Maksimum 40-45 35-50 40-60 30-45 40
Minimum 5-20 15-20 10-35 5-15 15 25 Syre fra
Arabinose og xylose d
Mannitol + + d - +
Hydrolyse af stivelse + Vækst i 30 Anaerob agar + - - + 7% NaCl + - - d - 3d -
Sabour. dekstrose b. - -(+)° d d +
Sabour. dekstrose ag. -
Produktion af alk. re- + + 35 akt. i V-P-bouillon ife)
Indoldannelse d - - + N03~ til N02” + + d - +
10 DK 157890 B
O
Tabel I (forts.) B.flr- B.latero- B-bre- B.sphae- BMG162- _mas_sporus_vis_ricus -aF2
Nedbrydning af 5 Casein + + + d +
Tyrosin d + + +
Deaminering af phenylalanin_d_-_-_+_- a: E = elliptisk eller cylindrisk, S = sfaarisk eller næsten, 10 C = central, T = endestillet eller delvis endestillet, CT = central til endestilletvariationer indenfor eller mellem stammer, + = positiv for 90-100% af stammer, - = negativ for 90-100% af stammer, d = reaktionerne forskellige, positiv for 11-89% af stammer, v = karakter uens inden for én 15 stamme.
b: Forsøgsresultat jfe) Ved 5 dages dyrkning.
Opfinderne har undersøgt og sammenlignet en stamme 20 af Bacillus laterosporus fra National Institute of Animal Health, Japan, med den foreliggende stamme, og resultatet heraf er, at begge stammer har et kanoformet legeme (et afsnit farvet i kanoform, parasporalt legeme) på siden af deres sporer, hvilket er et bemærkelsesværdigt træk ved denne 25 art. Væksten af begge stammer på Sabouraud-dekstroseagar falder sammen. I betragtning heraf betegnes stammen BMG162--aF2 som Bacillus laterosporus BMGl62-aF2.
Desuden blev denne BMG162-aF2-stamme den 12. oktober 1979 deponeret i det autoriserede japanske "Fermentation 30 Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology", Inage, Chiba-City, Japan, under deponeringsnummeret FERM-P 5230 og derefter den 31. juli 1981 i American Type Culture Collection, Parklawn Drive, Rockville, Maryland, USA med nummeret ATCC 31932. Deponeringen er foretaget i 35 overensstemmelse med Budapesttraktaten.
DK 157890B
11 o
Det ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede antibiotikum har antitumor-virkning og kan anvendes som aktivt stof i antitumorpræparater, der kan anvendes til behandling af tumorer hos varmblodede dyr.
5 Fremgangsmåden til fremstilling af BMG162-aF2 ved hjælp af ovennævnte stamme vil blive beskrevet nedenfor.
På tegningen viser fig. 1 ^I-NMR-spektret for BMG-162-aF2-hydrochlorid i (CD3)2SO, hvor tetramethylsilan anvendes som intern standard (100 MHz), 13 10 fig. 2 viser C-NMR-spektret for BMGk62-aF2-hydro- chlorid i D20, hvor tetramethylsilan anvendes som ydre standard (25 MHz), 15 fig. 3 viser N-NMR-spektret for BMG162naF2-hydro-15 chlorid i D20, hvor NH^ NO^ anvendes som ydre standard (10 15 MHz), og fig. 4 viser det.infrarøde absorptionsspektrum for BMG162-aF2-hydrochlorid i kaliumbromid.
Ved dyrkningen kan næringsstoffer i substrater, der almindeligvis anvendes til dyrkning af almindelige 20 bakterier, anvendes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen.
Således ’er i handelen værende pepton, kød ekstrakt, maj s støbevæske, bomuldsfrømel, jordnøddemel, sojabønnemel, gærekstrakt, N-Z-amin, hydrolysat af casein, natriumnitrat, ammoniumnitrat, ammoniumsulfat og lignende anvendelige nitrogenkilder. I han-25 delen værende glycerin, saccharose, stivelse, glucose, malto se, melasse og andre carbonhydrater samt fedt og olie er anvendelige carbonkilder. Yderligere kan der som saltadditiv i substratet anvendes natriumchlorid, phosphater, calciumcar-bonat, magnesiumsulfat og andre uorganiske salte. Der kan 30 også tilsættes andre metalsalte eller andre salte i spormængder, om nødvendigt, hvis de udnyttes af den BMG162-aF2-producerende stamme og de ikke er skadelige for produktionen af BMG162-aF2. Alle de næringsstoffer, der er kendt til dyrkning af bakterier, kan anvendes ved fremgangsmåden ifølge op-35
O
DK 157890B
12 findelsen, når de blot kan assimileres af den BMG162-aF2--producerende stamme til produktion af BMG162-aF2.
Til fremstilling af BMG162-aF2 i stor målestok foretrækkes dyrkning i væske. Der kan anvendes en hvilken som 5 helst temperatur, ved hvilken den BMG162-aF2-producerende stamme er i stand til at vokse og producere BMG162-aF2, til ' dyrkningen, men en særlig foretrukket inkubationstemperatur ligger i intervallet 20-35°C. Substratets pH-værdi er 5,0- 8,2, fortrinsvis 6,0-7,8. Dyrkningen fortsættes i tilstræk-10 kelig lang tid til at der kan produceres og akkumuleres en tilstrækkelig mængde BMGl62-aF2 i dyrkningsmediet eller bouillonen. Således iagttages der produktion og akkumulering af BMG162-aF2 efter en dags inkubation, når der fremstilles et flydende dyrkningssubstrat indeholdende 2,0% glycerin, 2,0% 15 glucose, 1,0% pepton, 0,3% gærekstrakt, 0,2% calciumcarbonat (den bedst egnede pH-værdi er ca. 7,4) og dette substrat steriliseres, efterfulgt af inokulering med sporer og stave høstet fra en skrå-kultur af BMG162-aF3-stammen og ved roterende rystedyrkning ved 27°C under aerobe betingelser.
20 Afprøvning for BMG162-aF2 kan foretages med Bacil lus subtilis PCI 219 som prøveorganisme ved hjælp af en standard skål-plade-metode, som almindeligvis anvendes til afprøvning af kendte antibiotika.
Ved dyrkningen af en BMG162-aF2-producerende stamme 25 af slægten Bacillus anvendes foruden den ovennævnte rystedyrkning også dyrkning i krukker eller dyrkning i tank, som almindeligvis anvendes til iltnings-omrøringsdyrkning, til produktion i stor målestok. Når det drejer sig om dyrkning i industriel målestok/dyrkes det ovennævnte flydende 30 substrat ved 20-40 timers ryste-dyrkning og inokuleres fortrinsvis ved 0,5-2,0 volumenprocent som podningssubstrat.
Udvinding af BMGl62-aF2 fra det fermenterede bouillonfiltrat kan udføres ved hjælp af søjlechromatografi ved anvendelse af en svag kationisk ionbytterharpiks, der har carb-35 oxylsyre som den aktive gruppe. Som den svage kationbytter-harpiks kan anvendes "Amberlite IRC-50'® og "CG-50'® (varemærker for kationbytterharpikser, hvor aktiviteten udeluk-
DK 157890 B
O
13 kende skyldes carboxylgruppen, og som fremstilles af Rohm &
Haas Co.), "Lewatit CNP"® (varemærke for en kationbytterhar-piks, hvor aktiviteten skyldes carboxylsyre- og sulfonsyre-grupper, fremstillet af Bayer Ltd.) eller "CM-Sephadex"® 5 (varemærke for carboxymethyldekstran, en kationbytter fremstillet af Pharmacia Fine Chemicals), og disse fås i H-form, Na-form, NH^-form eller blandet form. Den BMGl62-aF2, der adsorberes på harpiksen, elueres med vandig syreopløsning såsom saltsyre, eddikesyre etc. og vandig saltopløsning så-10 som natriumchlorid. Som ekstraktions-, fraskillelses- og rensningsmetoder anvendes gelfiltrerings- og ultrafiltreringsmetoder tillige med de nævnte metoder med harpiks til opnåelse af den rene form for BMG162-aF2 ved passende kombinering eller gentagelse deraf.
15 Da BMG162-aF2 er ustabil i form af fri base, isoleres den fortrinsvis som hydrochloridet. Og dette er så hygroskopisk, at det danner et hydrat. BMG162-aF2-hydrochlorid-hydratets fysisk'/kemiske egenskaber er følgende:
Det er umuligt at måle et smeltepunkt, på grund af 24 o 2o stoffets meget store hygroskopicitet. [a] D = -11 ( c = 1,0, vand).
Analyse:
Beregnet for C^yH^^NyO^. 3HC1.2^0: C 37,20, H 8,08, N 17,86, Cl 19,38.
25 Fundet: C 37,55, H 7,89, N 17,52, Cl 18,61.
1 13 H-NMR-spektret er vist i fig. 1. C-NMR-spektret 15 er vist i fig. 2. N-NMR-spektret er vist i fig. 3, der i-agttages 7 nitrogenatomer (3 nitrogenatomer i guanidylgruppe iagttages som signal med 2 spidser). Det ultraviolette ab-30 sorptionsspektrum har kun endabsorption., Det infrarøde spektrum er vist i fig. 4.
BMGl62-aF2-hydrochlorid er let opløseligt i vand og methanol, men tungt opløseligt eller uopløseligt i ethanol, ethylacetat, chloroform og benzen. Det giver positive ninhy-35 drin-, Sakaguchi- og Rydon-Smith-reaktioner. Ved tyndtlags-chromatografi med "Avicel'® (mikrokrystallinsk cellulose) fremkaldt med butanol/pyridin/eddikesyre/vand (6:4:1:3) og
O
DK 157890B
14 butanol/ethano1/vand (4:1:2) udviser BMG162-aF2-hydrochlo-rid en enkelt plet ved Rf = 0,14 og Rf = 0,20. Ved høj-spændingspapirelektroforese (3.500 volt, 15 minutter) med myresyre/eddikesyre/vand (1:3:36) udviser BMGl62-aF2-en 5 bevægelighed på 1,70-1,74 i forhold til alanins, som sættes til 1,00.
* BMG162-aF2's biologiske egenskaber er vist i det følgende. Som vist nedenfor har BMG162-aF2-hydrochlorid kun svag inhiberende virkning på Gram-positive og -negative 10 bakterier jog udviser bemærkelsesværdige virkninger med hensyn til bedring og forlænget overlevelsestid i forsøg med museleukæmi L1210, EL-4, Ehrlich ascites tumor og Sarcoma 180, og det er derfor klart, at antibiotikumet er et nyttigt anti-cancermiddel.
15 (1) BMG162-aF2's antibakterielle virkning.
BMG16.2-aF2 har svag antibakteriel virkning, og den inhiberende minimumskoncentration over for forskellige mikroorganismer på agarsubstrat er vist i tabellerne II-l til II-3. Prøven udføres ved hjælp af agar-fortyndingernetoden 20 ved anvendelse af BMG162-aF2-hydrochlorid. Som det ses i tabel XI—1, inhiberer BMGk62-aF2 svagt Gram-positive og -negative bakterier.
Tabel II-l 25 Antibakteriel aktivitet
Inhib. minim.-koncentration
Prøveorganisme_(mcg/ml)_ 30 1. Staphylococcus aureus FDA209P 100 2. Staphylococcus aureus Smith 12.5 3. Micrococcus flavus FDA16 25 4. Micrococcus lysodeiktieus IF03333 100 35 5. Sarcina lutea PCI1001 100 6. Bacillus anthracis 25
DK 157890B
15
O
Tabel II-l (forts.)
Inhib. minim. -koncentration
Prøveorqanisme_ (mcg/ml)_ 5 7- Bacillus subtilis NRRL B-558 100 8. Bacillus subtilis PCI219 6.25 9. Bacillus cereus ATCC10702 >100 10. Corynebacterium bovis l8l0 50 10 11. Escherichia coli NIHJ >100 12. Escherichia coli K-12 100 13- Escherichia coli ML1629 >100 14. Shigella dysenteriae JS11910 100 15- Shigella flexneri 4bJSll8ll >100 16. Shigella sonnei JS11746 >100 17. Salmonella typhi T-63 >100 20 18. Salmonella enteritidis >100 19. Proteus' vulgaris 0X19 12.5 20. Proteus mirabilis IPM OM-9 >100 21. Proteus rettgeri GN311 >100 25 22. Proteus rettgeri GN466 >100 23- Serratia marcescens >100 24. Pseudomonas aeruginosa A3 >100 25. Klebsiella penumoniae PCI602 >100
uU
26. Mycobacterium smegmatis ATCC607 >100
Anvendt substrat: næringsagar ved 37°C
35 16
DK 157 890 B
0
Tabel II-2
Antibakteriel aktivitet
Inhib. minim.-koncentration 5 Prøveorganisme_(mcq/ml)_ 1. Aeromonas punctata IAM1646 >100 2. Aeromonas salmonecida ATCC14174 >100 3. Aeromonas sp. (KT-444) >100 10 4. Vibrio anguillarum NCBM6 50 5. Pseudomonas fluorescens >100 6. Pseudomonas lachrymans 50 '7. Erwinia aroideae 50 15
Anvendt substrat: Næringsagar ved 27°C.
Tabel II-3
Antimikrobiel aktivitet 20
Inhib. minim.-kone entrati on
Prøveorganisme_(mcg/ml)_ 1. Candida tropicalis F-l >100 25 2. Candida pseudotropicalis NI7494 >100 3. Candida albicans 3147 >100 4. Candida Yu-1200 >100 5· Candida krusei NI7492 >100 30 6. Saccharomyces cerrevisiae >100 7. Cryptococcus neogormans >100 8. Helminthosporium oryzae >100 M 9· Pyricularia oryzae >100 10. Pellicularia filamentosa sasakii >100 11. Xanthomonas citri >100
DK 157890 B
O
17
Tabel II-3 (forts.)
Inhib. minim.-koncentration
Prøveorganisme_(mcg/ml)_ _ 12. Xanthomonas oryzae >100 5 13. Aspergillus niger 100 14. Trichophyton asteroides 429 >100 15- Trichophyton mentagrophytes >100 10 Anvendt substrat: næringsagar + 1% glucose ved 27°C.
(2) BMG162-aF2's anticanceraktivitet.
(a) Virkning på museleukaami L1210 (ip-ip-system).
En gruppe på 8 CDF, hunmus, 6-7 uger gamle får inoku-5 ^ 15 leret intraperitonealt 10 celler/0,25 ml/mus af L1210 leukæmiceller. Efter 24 timer doseres BMGl62-aF2-hydrochlorid opløst i saltvandsopløsning intraperitoenalt en gang daglig i 9 dage kontinuerligt, og dødelighed og størrelsen af forlænget overlevelsestid bestemmes. Af de i tabel III viste re-20 sultater fremgår, at BMG162-aF2 udviser en helbredende virkning og har indvirkning på forlængelsen af overlevelsestiden for museleukæmi L1210.
Tabel III
25 BMG162-aF2"s virkning på museleukæmi L121Q (ip-ip-system)
Gen.sn. overlevel- sesdage for behandl. Antal mus overlevet
Dosis Gen.sn. overlevel- _i 60 dage_ (mg/kg/dag) sesdage for kontrol_Antal afprøvede mus 30 50 295S) 0/8 25 334 0/8 12,5 586 4/8 6,25 732 8/8 3,13 441 3/8 35 1,56 301 1/8 0,78_107_0/8_; £) Der ses tegn på toksicitet
Kontroldyrenes gennemsnitlige antal overlevelsesdage: 8,2
DK 157890B
18
O
(b) Virkning på museleukæmi L1210 (sc-ip-system)
En gruppe på 5 CDF, hunmus, 6-7 uger gamle, får in- -1 5 jiceret museleukæmiceller L-1210 (10 celler/0,25 ml/mus) subcutant. på siden af abdomen og behandles 24 timer efter 5 med BMGl62-aF2-hydrochlorid i saltvandsopløsning intraperi-tonealt en gang daglig i 9 dage kontinuerligt, og dødelighed og størrelsen af forlænget overlevelsestid bestemmes.
Som det fremgår af tabel IV, udviser BMG162-aF2 kraftig terapeutisk virkning og forlængelse af overlevelsestiden lige 10 som ved eksperimentet i afsnit (a).
Tabel IV
BMG162-aF2's virkning på museleukæmi 1.1210 (sc-ip-system)
Gen.sn. overlevel- 15 sesdage for behandl. χ 100 Antal mus overlevet
Dosis Gen.sn. over level- _i 30 dage_ (mg/kg/dag) sesdage for kontrol_antal behandlede mus 50 >309 5/5 25 >309 5/5 . go 12/5 >309 5/5 6,25 >240 3/5 3,13 120 0/5 1,56_105_0/5_
Kontroldyrenes gennemsnitlige antal overlevelsesdage: 9,7.
25 (c) Virkning på museleukæmi EL-4.
En gruppe på 5 C^BL/6 hunmus, 10 uger gamle, inoku-leres med museleukaaniceller EL-4 (10^ celler/0,25 ml/mus) in-traperitoenalt og behandles efter 24 timer med BMG162-aF2--hydrochlorid i saltvandsopløsning intraperitonealt en gang 30 daglig kontinuerligt i 9 dage, og dødelighed og længden af forlænget overlevelsestid bestemmes. Som det fremgår af tabel V, udviser BMG162-aF2 også terapeutisk virkning og forlænger overlevelsestiden ved EL-4.
35
O
DK 157890B
19
Tabel V
BMG162-aF2*s virkning på museleukæmi EL-4 Dosis Gennemsn. ant, overlevelsesdage for behandl. χ 1qQ
(mg/kg/dag) Gennemsn. ant. overlevelsesdage for kontrol_ 5 5 193 2,5 164 1.25 159 0,625 130 0,313_131_ 10 Kontroldyrenes gennemsnitlige antal overlevelsesdage: 11,0 (d) Virkning på Ehrlich ascitestumor.
En gruppe på 4 ICR hunmus, 6 uger gamle, inokule- g res intraperitonealt med Ehrlich ascitestumorceller (2 x 10 celler/0,25 ml/mus) og behandles efter 24 timer med BMG162-15 -aF2-hydrochlorid i saltvandsopløsning ved intraperitoneal injektion en gang daglig kontinuerligt i 9 dage, og størrelsen af forlænget overlevelsestid afprøves. Som det fremgår af tabel VI, udviser BMG162-aF2 også anticancervirkning over for Ehrlich ascitestumor.
20
Tabel VI
BMG162-aF2*s virkning på muse-Ehrlich ascites tumor Dosis Gennemsn. ant. overlevelsesdage for behandl.
(mg/kg/dag)Gennemsn. ant. overlevelsesdage for kontrol_ 25 50 54* 25 72* 12,5 170* 6.25 236 3,13 188 30 1/56_133___ * Der viser sig tegn på toksicitet
Kontroldyrenes gennemsnitlige antal overlevelsesdage: 13,8.
(e) Virkning på sarcom 180.
En gruppe på 4 ICR hunmus, 6 uger gamle inokuleres g 35 intraperitonealt med musesarcom 180-celler (2 x 10 celler/ 0,26 ml/mus) og behandles efter 24 timer med BMG162-aF2-hy-drochlorid i saltvandsopløsning ved intraperitoneal injektion en gang daglig kontinuerligt i 9 dage, og størrelsen
DK 157890B
20 0 af den forlængede overlevelsestid afprøves. Som det fremgår af tabel VII, udviser BMG162-aF2 også anticancervirk-ning over for sarcom 180.
5 Tabel VII
BMG162-aF2's virkning på musesarcom 180 Dosis Gennemsn/ ant. overlevelsesdage for behandl...
(mg/kg/dag) Gennemsn. ant. overlevelsesdage for kontrol_ 50 53* 10 12,5 >279 6,25 181* 3,13 243 1,56_220_ £ Der viser sig tegn på toksicitet 15 Kontroldyrenes gennemsnitlige antal overlevelsesdage: 13,8.
(3) BMG162-aF2's akutte toksicitet Når BMG162-aF2-hydrochlorid injiceres intravenøst på ICR hunmus, 4 uger gamle, er LD,-0 mere end 80 mg/kg.
BMG162-aF2,s fysisk/kemiske og biologiske egenskaber 20 er blevet detaljeret beskrevet ovenfor. Baseret på den kendsgerning, at spermidin er en almindelig bestanddel i molekylet, ligner BMG162-aF2 bleomycin, der produceres af Streptomyces verticillus, LL-BM1238, og Ϊ2 produceret af Nocardia, ede-nin produceret af Bacillus brevis og laterosporamin produce-25 ret af Bacillus. .Eftersom BMG162-aF2's struktur allerede er bestemt og er som anført ovenfor, adskiller BMG162-aF2 sig klart fra bleomycin, LL-BM1233, og °U edenin, der er bestemt ved deres egne strukturer. Desuden adskiller den sig fra laterosporamin (The Journal of Antibiotics 29, 390-30 393 (1976)) med hensyn til infrarødt spektrum, opløselighed i alkohol, antibakterielt spektrum og den kendsgerning, at et Sakaguchi-positivt stof, indbefattende CgH^NgO, der er en bestanddel i laterosporamin, ikke indeholdes i sønderdelte produkter af BMGl62-aF2. Det må derfor fastslås, at 35 BMG162-aF2 er et hidtil ukendt antibiotikum.
Ud fra de foregående resultater udviser BMG162-aF2 karakteristiske anticancer-virkning over for leukæmi hos
DK 157890B
21
O
varmblodede dyr, herunder mennesker, samt sarcomer og andre tumorer og har forholdsvis lav toksicitet. BMG162-aF2 kan derfor anvendes som et udmærket anti-tumorpræparat.
Med hensyn til metoder til fremstilling af pharma-5 ceutika og indgivelse, når der anvendes BMG162-aF2 som antitumor-præparat, kan der anvendes forskellige kendte procedurer. Indgivelsesmetoderne omfatter oral og rectal indgivelse samt injektioner. Ved fremstilling af pharmaceutika anvendes injektionsmidler, pulvere, granulater, tabletter, suppo-jq sitorier og lign.
Til de pharmaceutiske præparater kan der anvendes alle slags pharmaceutisk acceptable bærestoffer såsom faste bærestoffer, flydende bærestoffer, stabilisatorer, antiseptika, hjælpemidler, emulgeringsmidler etc. om nødvendigt, når 15 de blot er uskadelige for BMG162-aF2. En konkret fremgangsmåde til fremstilling af et injektionspræparat er at opløse BMGl62-aF2, fortrinsvis dets vandopløselige salte såsom hy-drochloridet og sukkerforbindelser såsom mannitol i destilleret vand og fylde dette i små beholdere (ampuller), eller 2Q opløsningen kan yderligere lyophiliseres og opløses i saltvandsopløsning eller destilleret vand, så at der fås en opløsning til indgivelse ved injektion.
I de pharmaceutiske præparater kan indholdets størrelsesforhold varieres inden for et bredt interval i overens-25 stemmelse med præparaternes fysiske form, og præparaterne indeholder i reglen 0,01-100 vægtprocent, fortrinsvis 0,1-70 vægtprocent BMGl62-aF2, og det øvrige indhold, dvs. 0-99,9 vægtprocent, fortrinsvis 99,9-30 vægtprocent, er pharmaceutisk acceptable bærestoffer. Når det drejer sig om et in-3ø jektionspræparat, er indholdets størrelsesforhold som følger: BMG162-aF2 0,1-95,0 vægtprocent
Sukkerforbindelser 99,1- 5,0 vægtprocent Natriumchlorid 0 -94,9 vægtprocent.
Selvom indgivelsesmængden af BMG162-aF2 varierer 35 afhængigt af symptomer, anvendes fortrinsvis 0,01-800 mg/dag/ voksen, fortrinsvis 0,1-600 mg/dag/voksen. Dersom kontinuerlig indgivelse er nødvendig, må den daglige mængde reduceres.
22 DK 157890B
O
Til et pharmaceutisk præparat anvendes BMG162-aF2 1 reglen i form at sit salt såsom hydrochloridet, etc., som er velegnet til medicinsk anvendelse.
Opfindelsen vil i det følgende blive nærmere be-5 lyst ved hjælp af eksempler.
Eksempel 1 5 liter flydende substrat indeholdende 2,0% glycerin, 2,0% dekstrin, 1,0% sojapepton ("Bacto-soytone" frem-1Q stillet af Difco Laboratories), 0,3% gærekstrakt (Daigo-
Eiyo-Kagaku Co., Ltd.), 0,2% ammoniumsulfat og 0,2% calcium-carbonat, idet pH er 7,4, anbringes i 125 ml portioner i Sa-kaguchi-kolber med et volumen på 500 ml. Efter sterilisation inokuleres i kolberne 1% podesubstrat fremstillet i forvejen 15 (Bacillus laterosporus BMG162-aF2 (FERM-P 5230, ATCC 31932) dyrkes på skrå-agar i et substrat med samme sammensætning i 2 dage), og dyrkes ved 28°C i 5 dage. Derfås et bouillonfiltrat (4.900 ml), der hældes i en kolonne (500 ml, diameter 5,2 cm) "Amberlite IRC-50'® (Rohm and Haas Co., Na+-type og + 20 H -type-blanding (7:3)), og den aktive komponent adsorberes. Kolonnen vaskes med vand, og den aktive bestanddel elueres med 2000 ml 1,0N HC1 og neutraliseres med ION NaOH til pH 6.
Den neutraliserede opløsning fortyndes 4 gange med vand og hældes i en kolonne (400 ml, diameter 4,3 cm) "CM-Sephadex 25 c-25'® (Pharmacia Fine Chemicals, kvældet ved forbehandling med vand), hvorpå den aktive bestanddel adsorberes. Den aktive bestanddel elueres med 0,3 molær NaCl-^O. Den aktive fraktion inddampes til tørhed under formindsket tryk. Remanensen opløses i 5 ml methanol for at fjerne NaCl-krystaller 30 ved filtrering. Filtratet hældes i en kolonne (445 ml, diameter 2,6 cm) "Sephadex LH-201® (varemærke for dekstran til gelfiltrering med organisk opløsningsmiddel fremstillet af Pharmacia Fine Chemicals, kvældet ved forbehandling med methanol) , og kolonnen fremkaldes med methanol. Den aktive 35 fraktion tørres under formindsket tryk, hvorved der fås 460 mg ren BMG162-aF2-hydrochlorid som et hvidt pulver.
DK 157890 B
23 0
Eksempel 2 10 liter substrat indeholdende 2,0% glycerin, 2,0% dekstrin, 1,0% sojapepton, ("Bacto-soytone®, fremstillet af Difco Laboratories), 0,3% gærekstrakt (Daigo-Eiyo-Kagaku Co., 5 Ltd.), 0,2% ammoniumsulfat, 0,2% calciumcarbonat og 0,03% siliconeolie som antiskumningsmiddel, idet pH er 7,4, fyldes i en tank af rustfrit stål med en kapacitet på 30 liter og steriliseret ved 120°C i 20 minutter. Derefter inokuleres 125 ml bouillon, der er rystedyrket i 48 timer med den 10 BMG162-aF2-producerende stamme, Bacillus laterosporus BMG162--aF2 FERM P 5230, ATCC 31932, aseptisk i den afkølede tank. Dyrkningen udføres under luftning og omrøring ved 28°C (luftningsmængden er 15 liter/min og omrøringen sker med en hastighed på 350 omdr./min., efter 16 timer med 10 liter/min og -15 350 omdr./min.), og efter 40 timers forløb behandles det frem komne bouillonfiltrat på 9,500 ml ved søjlechromatografi på "Amberlite IRC-50® og "CM-Sephadex C-25'® på væsentlig samme måde som i eksempel 1. "Sephadex"-kolonnen fremkaldes med 4 liter 0,3 molær NaCl-^O. 290 dråber af eluatet opsam-20 les i én portion og adskilles i to aktive fraktioner: I (portion nr. 14-63),og II (portion nr. 64-154). Til den aktive fraktion II på 1.660 ml, som ikke indeholder noget stof med absorption ved 280 nm, tilsættes 33 g aktiv trækul for at absorbere det aktive stof. Efter at det aktive trækul er 25 vasket med vand, elueres BMG162-aF2 med 500 ml 0,05N HC1 i 80% methanol/vand. Eluatet neutraliseres med "Amberlite il) IR-45'*^ (Rohm and Haas Co. , OH-type) , og tørres under formindsket tryk, hvilket giver 305 mg BMG162-aF2-hydrochlorid.
Den aktive fraktion I, der indeholder et stof med en absorp-30 tion ved 280 nm, inddampes til tørhed, ekstraheres med methanol, opløses i 1 liter afioniseret vand og genchromato-graferes på en kolonne (400 ml, diameter 4,3 cm) "CM-Sephadex C-25 ' efterfulgt af gradienteluering med 0-1 molær NaCl (4 liter), hvorved der fås en aktiv fraktion, der inddampes 35 til tørhed. Remanensen ekstraheres med methanol og påføres en kolonne (780 ml, diameter 2,8 em) "Sephatdex LH-20®. Kolonnen fremkaldes med methanol for at befri den for NaCl,
O
DK 157890 B
24 og der fås 670 mg rent BMG162-aF2-hydrochlorid. Der udvindes ialt 975 mg BMG162-aF2-hydrochlorid.
Eksempel 3 5 Til en opløsning indeholdende 150 mg BMG162-aF2-hy- drochlorid fremstillet i eksempel 2 opløst i 1 ml methanol tilsættes 1 ml mættet picrinsyre/methanolopløsning, og der opvarmes til kogning. Efter inddampning vaskes remanensen med benzen og ethanol for at fjerne overskud af picrinsyre, 10 og der fås 62 mg krystaller BMG162-aF2-picrat af en opløsning i en blanding af vand og ethanol.
Eksempel 4 30 vægtdele BMG162-aF2-hydrochlorid fremstillet som 15 i eksempel 1 opløses i 970 dele renset vand og filtreres for at få en bakteriefri opløsning med Millipore-filter, type GS. Filtratet (1 g) kommes i en ampul med en kapacitet på 10 ml og lyophiliseres, hvilket giver et frysetørret injektionspræparat indeholdende 30 mg BMG162-aF2-hydro-2o chlorid.
Eksempel 5
Granulat 50 vægtdele BMG162-aF2-hydrochlorid som fremstillet 25 i eksempel 1, 600 vægtdele lactose, 330 vægtdele krystallinsk cellulose og 20 vægtdele hydroxypropylcellulose blandes omhyggeligt, komprimeres ved hjælp af en valsekompressor (‘'Roller-Compactor'*^ og knuses til dannelse af et granulat, der sigtes til en størrelse mellem 16 og 50 mesh.
30
Eksempel 6
Tabletter 30 vægtdele BMG162-aF2-hydrochlorid som fremstillet i eksempel 1, 20 vægtdele krystallinsk lactose, 147 vægtdele 35 krystallinsk cellulose og 3 vægtdele magnesiumstearat blandes i en V-formet blandemaskine, og der fås tabletter indeholdende 300 mg BMGl62-aF2.
Claims (4)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af et antibiotikum, BMGl62-aF2, med formlen
5 NH2 \ C-NH-(CH0 ) i.-CH-CH5-C0 II 2 4 I 2 I NH. OH NH i 1 CH-OH
10 I C 0-NH-(CH2)n-NH-(CH2)3-NH2 eller et pharmaceutisk acceptabelt salt deraf, 15 kendetegnet ved, at Bacillus laterosporus, BMG162-aF2 FERM-P 5230, ATCC 31.932, eller en mutant eller variant heraf med væsentligt samme egenskaber som denne dyrkes i et næringsmedium, der indeholder nitrogenkilder, carbon-kilder og uorganiske salte, hvorpå det dannede antibiotikum 20 udvindes fra kulturen, eventuelt i form af et pharmaceutisk acceptabelt salt.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at dyrkningen udføres aerobt i flydende kultur ved 15-40°C ved pH 5,0-8,2.. 25
3 . Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg net ved, at udvindingen af BMG162-aF2 fra dyrkningsmediet udføres ved hjælp af søjlechromatografi ved anvendelse af en svag kationbytterharpiks med carboxylsyre som den aktive gruppe.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 3, kendeteg net ved, at det på harpiksen adsorberede BMG162-aF2 elue-res med en vandig syreopløsning eller en vandig saltopløsning. 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55123585A JPS5748957A (en) | 1980-09-08 | 1980-09-08 | Novel antibiotic bmg 162-af2, its preparation and carcinostatic agent comprising it as active ingredient |
| JP12358580 | 1980-09-08 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK394281A DK394281A (da) | 1982-03-09 |
| DK157890B true DK157890B (da) | 1990-02-26 |
| DK157890C DK157890C (da) | 1990-07-23 |
Family
ID=14864227
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK394281A DK157890C (da) | 1980-09-08 | 1981-09-07 | Fremgangsmaade til fremstilling af et antibiotikum, bmg162-af2, eller et pharmaceutisk acceptabelt salt deraf |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4416899A (da) |
| JP (1) | JPS5748957A (da) |
| KR (1) | KR870001373B1 (da) |
| AT (1) | AT376239B (da) |
| AU (1) | AU523222B2 (da) |
| BE (1) | BE890229A (da) |
| CA (1) | CA1175763A (da) |
| CH (1) | CH655498B (da) |
| CS (1) | CS226036B2 (da) |
| DE (1) | DE3134353C2 (da) |
| DK (1) | DK157890C (da) |
| ES (1) | ES8302090A1 (da) |
| FR (1) | FR2489819A1 (da) |
| GB (1) | GB2084999B (da) |
| HU (1) | HU188077B (da) |
| IT (1) | IT1209896B (da) |
| NL (1) | NL8104069A (da) |
| SE (1) | SE450836B (da) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57192347A (en) * | 1981-05-18 | 1982-11-26 | Microbial Chem Res Found | N-(4-(3-aminopropyl)aminobutyl)-2,2-dihydroxyethanamide and its synthesis |
| JPS57185254A (en) | 1981-05-11 | 1982-11-15 | Microbial Chem Res Found | Novel carcinostatic substances and their preparation |
| JPS5862152A (ja) * | 1981-10-08 | 1983-04-13 | Microbial Chem Res Found | Ｎ−〔４−（３−アミノプロピル）アミノブチル〕−２−（ω−グアニジノ脂肪酸アミド）−２−ヒドロキシエタンアミドおよびその誘導体ならびにその製造法 |
| JPS5942356A (ja) * | 1982-09-02 | 1984-03-08 | Microbial Chem Res Found | スパガリン関連化合物およびその製造法 |
| JPS60185758A (ja) * | 1984-03-02 | 1985-09-21 | Microbial Chem Res Found | フエニレン基を有するスパガリン関連化合物およびその製造法 |
| US4851446A (en) * | 1984-11-13 | 1989-07-25 | Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai | Immunosuppressing method |
| JPS61134312A (ja) * | 1984-12-06 | 1986-06-21 | Microbial Chem Res Found | 移植免疫抑制剤並びに抗アレルギ−剤 |
| JPS61165322A (ja) * | 1985-01-14 | 1986-07-26 | Microbial Chem Res Found | スパガリン類の注射用凍結乾燥製剤 |
| DE3770680D1 (de) * | 1986-04-04 | 1991-07-18 | Microbial Chem Res Found | Spergualinaehnliche verbindungen und ihr herstellungsverfahren. |
| JP2873340B2 (ja) * | 1988-04-29 | 1999-03-24 | 武田薬品工業株式会社 | 抗生物質ｔａｎ―１０５７，その製造法および用途 |
| JPH0776204B2 (ja) * | 1988-07-01 | 1995-08-16 | 寳酒造株式会社 | スパガリン類の精製法 |
| JPH0263181U (da) * | 1988-10-27 | 1990-05-11 | ||
| US4990536A (en) * | 1989-04-03 | 1991-02-05 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | Immunopotentiator and spergualin-related compound therefor |
| US5162581A (en) * | 1989-05-29 | 1992-11-10 | Takaru Shuzo Co., Ltd. | Crystalline deoxyspergualin, process for its preparation and suppository containing the same |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2998438A (en) * | 1958-03-31 | 1961-08-29 | Merck & Co Inc | Eulicin and process for production |
| US3617448A (en) * | 1967-10-03 | 1971-11-02 | Research Corp | Antibiotic and methods of producing and using it |
| US3743580A (en) * | 1970-04-28 | 1973-07-03 | Microbial Chem Res Found | Antibiotic,negamycin,and processes for the preparation thereof |
| US4163796A (en) * | 1977-12-14 | 1979-08-07 | The Dow Chemical Company | Stabilized aqueous amide antimicrobial composition |
| US4328229A (en) * | 1978-03-29 | 1982-05-04 | Taiho Pharmaceutical Company Limited | Anti-cancer composition for delivering 5-fluorouracil to cancer tissues |
| US4226808A (en) * | 1979-08-17 | 1980-10-07 | Schering Corporation | 1-Aryl-2-dihalogenodeuterioalkanoylamido-1,3-propanediol antibacterial agents |
-
1980
- 1980-09-08 JP JP55123585A patent/JPS5748957A/ja active Granted
-
1981
- 1981-08-26 GB GB8126019A patent/GB2084999B/en not_active Expired
- 1981-08-27 SE SE8105079A patent/SE450836B/sv not_active IP Right Cessation
- 1981-08-28 US US06/297,458 patent/US4416899A/en not_active Expired - Lifetime
- 1981-08-31 DE DE3134353A patent/DE3134353C2/de not_active Expired
- 1981-09-01 HU HU812518A patent/HU188077B/hu not_active IP Right Cessation
- 1981-09-02 NL NL8104069A patent/NL8104069A/nl not_active Application Discontinuation
- 1981-09-02 AU AU74892/81A patent/AU523222B2/en not_active Ceased
- 1981-09-03 CH CH567881A patent/CH655498B/de not_active IP Right Cessation
- 1981-09-04 KR KR1019810003293A patent/KR870001373B1/ko not_active Expired
- 1981-09-04 IT IT8149237A patent/IT1209896B/it active
- 1981-09-04 FR FR8116856A patent/FR2489819A1/fr active Granted
- 1981-09-04 CA CA000385239A patent/CA1175763A/en not_active Expired
- 1981-09-04 BE BE0/205871A patent/BE890229A/fr not_active IP Right Cessation
- 1981-09-07 AT AT0386081A patent/AT376239B/de not_active IP Right Cessation
- 1981-09-07 DK DK394281A patent/DK157890C/da active
- 1981-09-07 ES ES505256A patent/ES8302090A1/es not_active Expired
- 1981-09-07 CS CS816592A patent/CS226036B2/cs unknown
-
1982
- 1982-08-20 US US06/410,160 patent/US4474880A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IT1209896B (it) | 1989-08-30 |
| ES505256A0 (es) | 1983-01-01 |
| DE3134353A1 (de) | 1982-04-22 |
| FR2489819B1 (da) | 1985-02-15 |
| BE890229A (fr) | 1982-01-04 |
| AT376239B (de) | 1984-10-25 |
| AU7489281A (en) | 1982-03-18 |
| JPS6316380B2 (da) | 1988-04-08 |
| DK394281A (da) | 1982-03-09 |
| NL8104069A (nl) | 1982-04-01 |
| ES8302090A1 (es) | 1983-01-01 |
| AU523222B2 (en) | 1982-07-15 |
| IT8149237A0 (it) | 1981-09-04 |
| GB2084999B (en) | 1984-06-13 |
| FR2489819A1 (fr) | 1982-03-12 |
| KR870001373B1 (ko) | 1987-07-24 |
| US4474880A (en) | 1984-10-02 |
| DK157890C (da) | 1990-07-23 |
| ATA386081A (de) | 1984-03-15 |
| SE8105079L (sv) | 1982-03-09 |
| KR830007834A (ko) | 1983-11-07 |
| DE3134353C2 (de) | 1986-03-13 |
| US4416899A (en) | 1983-11-22 |
| CA1175763A (en) | 1984-10-09 |
| SE450836B (sv) | 1987-08-03 |
| CS226036B2 (en) | 1984-03-19 |
| JPS5748957A (en) | 1982-03-20 |
| HU188077B (en) | 1986-03-28 |
| CH655498B (da) | 1986-04-30 |
| GB2084999A (en) | 1982-04-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK157890B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af et antibiotikum, bmg162-af2, eller et pharmaceutisk acceptabelt salt deraf | |
| US4904585A (en) | Novel antibiotic NK84-0218 and process for the production of the same | |
| DE2343963A1 (de) | Staebchenbakterium-peptidase und verfahren zu ihrer herstellung durch kultivierung von staebchenbakterien | |
| DE69527445T2 (de) | Aminooligosaccharid-derivate und verfahren zu ihrer herstellung | |
| US5155041A (en) | Culture of Bacillus subtilis | |
| GB2084158A (en) | Peptide and production thereof | |
| US4246400A (en) | Tallysomycin compounds | |
| USRE29903E (en) | Antibacterial antibiotics AM31α, AM31β and AM31γ | |
| US3969501A (en) | Antibiotic 342-14-I and production thereof | |
| US3843449A (en) | Oxamicetin and process for its production | |
| US4916063A (en) | BU-2867T peptide antibiotics | |
| AT364455B (de) | Verfahren zur herstellung von neuen phosphonsaeuren | |
| US3901877A (en) | Oxamicetin and process for its production | |
| US4950605A (en) | FR-900493 substance, a process for its production and a pharmaceutical composition containing the same | |
| US4169889A (en) | Antibiotic bn-200 substance and process for production thereof | |
| CS251077B2 (en) | Method of new polypeptide antibiotic production with antitumor effect | |
| JPS5934895A (ja) | プルマイシン製造法 | |
| EP0024206A2 (en) | Antitumor substance, composition comprising it and process for preparing said substance | |
| FR2463618A1 (fr) | Nouvel antibiotique aminoglycoside et sa production | |
| HAROUN | Isolation and characterization of NRCS-15, a new iron-containing antibiotic | |
| US3616230A (en) | Method for production of l-asparaginase | |
| Utahara | Studies on ractinomycin A | |
| JPS5928481A (ja) | 抗生物質ｙ−０２０３９ｈおよびその製造法 | |
| Kawaguchi et al. | GLYSPERIN, A NEW ANTIBIOTIC COMPLEX OF BACTERIAL ORIGIN I. PRODUCTION, ISOLATION AND PROPERTIES | |
| JPS6143036B2 (da) |