DK145042B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af alky1-2-(2-amino-aetyltio)-glykolater eller syreadditionssalte heraf med organiske eller uorganiske syrer - Google Patents

Description

|j| (12) FREMLÆGGELSESSKRIFT od 1 i+5042 B

/tdfar

dø) DANMARK

DIREKTORATET FOR PATENT- OG VAREMÆRKEVÆSENET

(21) Ansøgning nr. 6455/70 (51) IntCI.3 C 07 C 149/243 (22) Indleveringsdag 18. dec. 1970 (24) Løbedag 18. dec. 1970 (41) Aim. tilgængelig 20. jun. 1971 (44) Fremlagt 9· aug. 1982 (86) International ansøgning nr.

(86) International indleveringsdag (85) Videreførelsesdag (62) Stamansøgning nr. -

(30) Prioritet 19. dec. 19%), 6944145# FR

(71) Ansøger LABORATOIRES HOUDE, 75 Paris, FR.

(72) Opfinder Jean-Pierre Fourneau, FR.

(74) Fuldmægtig Firmaet Chas. Hude.

(54) Analogifremgangsmåde til fremF stilling af alkyl-2-(2-amino-ætyltio)-glykolater eller syre* additionssalte heraf med organi* ske eller uorganiske syrer.

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af alkyl-2-(2-amino-ætyltio)-glykolater eller syreadditionssalte heraf med organiske eller uorganiske syrer, som er nyttige til forebyggelse og behandling af skader, der skyldes ioniserende strå-q linger, vi J· ^ Det er kendt, at cysteamin er en udmærket strålingsbeskytter, men D den har den ulempe at have en forholdsvis høj giftighed, hvilket tor i’ _ ringer dens nytte.

jjj Det er et formål med den foreliggende opfindelse at angive en frem gangsmåde til fremstilling af produkter, der er nyttige til forebyg- 2 165042 gelse og behandling af skader, der skyldes ioniserende strålinger, og som har en virkningsgrad af samme størrelsesorden eller højere end af cysteamin, samtidig med at de er væsentligt mindre giftige end sidstnævnte.

Opfindelsen angår en fremgangsmåde til fremstilling af forbindelser af formlen chT ^ch-coor (a)

I 2 I

CH2-NH2 oh hvor R er en alkylgruppe med 1-4- kuls tof atomer, eller syreadditionssalte heraf med organiske eller uorganiske syrer, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at en forbindelse af formlen HS - CH2 - CH2 - UH2 (C) bringes til at reagere med et alkylglyoksylat af formlen OCH-COOR (D) eller med en halvacetalester af formlen

RO - CH - OOOR

I (E)

OH

i nærværelse af en alkohol af formlen ROH, i hvilke formler R har den ovenfor anførte betydning, og at det fremkomne kondensationsprodukt eller dets syreadditionssalte opsamles.

Alle forbindelserne fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen er hidtil uJcendte.

Baserne af formlen (A) er i almindelighed meget ustabile og omdannes til de tilsvarende baser af formlen GE0 CH-OOOR (B) I 2 i ch2-m I modsætning hertil er syreadditionssaltene (hydrokloridet, oksala-tet og lignende) af baserne af formlen (A) stabile og foretrækkes.

3 145042

Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen anvendes alkylglyokaylatet eller halvacetalesteren fortrinsvis i et lille overskud over den støkiometriske mængde, f.eks. i en mængde på 1,1 mol pr. mol af forbindelsen af formlen (c).

Forbindelsen af formlen (C), som typisk kan være cysteamin, L-, Il-eller D,L-cystein, kan anvendes som sådan eller som hydrokloridet.

Reaktionen kan udføres i kulden eller ved kogning under tilbagesvaling. Den varer i almindelighed flere timer. Kondensationsproduktet kan få lov at krystallisere ved afkøling og så filtreres og omkrystalliseres af et egnet opløsningsmiddel. Opløsningsmidlet kan også fjernes ved destillation i vakuum, og remanensen optages i en ringe, mængde vand og så gøres neutral med en alkalimetalbikarbonatopløsning, hvorefter basen kan ekstraheres med æter. Remanensen fra inddampnin-gen af æteren destilleres så i vakuum. Den fremkomne base kan omdannes til hydrokloridet under anvendelse af saltsyre i metanol- eller ætanolopløsning.

De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser er bedre strålingsbeskyttende midler end det beslægtede kendte middel A.E.T., som har formlen ch2 cr μ, ΧϊΗ \ + J 2Br"

Det har således vist sig, at forbindelsen I fremstillet ifølge opfindelsen er 2,25 gange mindre giftig end A.E.T. og giver en bedre beskyttelse mod stråling udtrykt ved tab af legemsvægt pr. strålingsdosis. En sammenlignende undersøgelse af disse to forbindelser er offentliggjort i "Radioprotection" - Dunod 1971 - bind 6, nr. 2, side 119-131.

De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser er endvidere bedre end den fra Arzneimittel-Forschung 10 (1960), No. 4, side 304-307 kendte forbindelse nr. 2 med formlen 4 165062 CH? C.

| OH COOH

CHhCOOH

nh2

For denne forbindelse kendes kun virkningen efter intraperitoneal administration, hvilken virkning er 12% overlevende efter administration af 1200 mg/kg. Det er imidlertid klart, at den eneste antageliae administrationsvej for et strålingsbeskyttelsesmiddel er den orale vej.

De følgende eksempler anføres for at illustrere fremgangsmåden til fremstilling af forbindelserne af formlen (A). Temperaturerne er i °C.

Eksempel 1

Metyl-2-(2-amino-ætyltio)-glykolat hydroklorid (i) (formel A, R=CH^).

En opløsning af 30 g (0,53 mol) metylglyoksylat i 30 ml metanol sættes til 34 g (0,3 mol) cysteamin hydroklorid opløst i 150 ml metanol. Efter 3-5 timers berøringstid fjernes metanolen i vakuum i et vandbad ved 40°C ved hjælp af en roterende fordamper. Remanensen omkrystalliseres af 80 ml metanol og tørres så i en exsiccator i vakuum over fosforpentoksyd. Stoffet smelter langsomt ved 108-109°C linder dekom-ponering. Udbyttet er 73f<>.

Analyse: Beregnet procent for C^H-^CllTO^S = 201,68: 0=29,77 H=5,99 01=17,58 U=6,94 S=15,89 fundet procent 0=29,50 Η=5,9β 01=17,61 JT=7,11 S=15,74.

Eksempel 2

Metyl-2-(2-amino-ætyltio)-glykolat oksalsurt salt (il).

På den ene side opløses frisk destilleret cysteamin (3 g, 0,04 mol) i 60 ml ætanol, og på den anden side opløses oksalsyre dihydrat (2,52 g, 0,02 mol) og metylglyoksylat (3,9 g, 0,044 mol) i 20 ml ætanol. Førstnævnte opløsning sættes dråbevis til sidstnævnte under magnetisk omrøring. Det fremkomne bundfald opsamles, vaskes med ætanol og tørres. Smeltepunkt 105°C under dekomponering.

5 145042

Analyse: Beregnet procent for (C^H-^NO^S^j CgHgO^: 0=34,27 H=5,75 N=6,66 fundet procent 0=34,06 H=5,80 H=7,24.

Eksempel 3 Ætyl-2-(2-amino-ætyltlo)-glykolat oksalsurt salt (III) (formel A, H = C2H5).

Forbindelsen fremstilles på samme måde som forbindelsen (II), idet metylglyoksylat erstattes med ætylglyoksylat. Smeltepunktet er 81-82°C under dekomponering.

Eksempel 4

Propyl-2-(2-amino-ætyltio)-glykolat oksalsurt salt (IV) (formel A, R = GjHy)é

Forbindelsen fremstilles på samme måde som oksalatet (III), idet ætylglyoksylat erstattes med propyl-2-propoksyglykolat (halvacetal= ester, formel E, R = C^Hy). Smeltepunkt 98°C under dekomponering.

Eksempel 5

Butyl-2-(2-amino-ætyltio)-glykolat oksalsurt salt (V) (formel A, R = C4H9)·__

Forbindelsen fremstilles på samme måde som forbindelsen (IV), idet der gås ud fra halvacetalbutylesteren (E) (R = O^H^). Smeltepunkt 102°C under dekomponering. Udbytte 61%.

Analyse: Beregnet procent for (CgH^yRO^S)2, C2H2°4: 0=42,79 H=7,19 N=5,55 fundet procent 0=43,19 H=7,36 N=5,49.

1. Akut giftighed.

De tilnærmede LD^-værdier for mus ved intravenøs intraperitoneal eller peroral administration af forbindelsen I er følgende: 6 145042 LD50 mg/kg i.v.: 575 i.p.: 1000 per os: >1000 2. Strålingsbeskyttende virkninger.

A. Ved en første række undersøgelser blev der udført forsøg med forbindelsen I på følgende måde: a) En første gruppe på seks mus blev udsat for røntgenbestråling tilstrækkeligt til, at alle dyrene døde i løbet af 30 dage, idet 50$ af dyrene var døde den tiende dag (850 røntgen i løbet af ca. 10 minutter). Denne første gruppe fik administreret intraperitonealt 10 ml pr. kg opløsningsmiddel for forbindelsen. I alle fire tilfælde var overlevelsestiden for 50$ af dyrene (ST 50) 10 dage, og ingen mus overlevede den 30. dag.

b) En anden gruppe på 5 hanmus blev ikke udsat for bestråling, men fik administreret intraperitonealt den maksimalt tålelige dosis (MDI) af forsøgsforbindelsen opløst i 10 ml pr. kg opløsningsmiddel. I alle fire tilfælde overlevede musene den 30. dag.

c) En tredie gruppe på 14 mus (7 hanmus og 7 hunmus) blev bestrålet med samme røntgendosis som første gruppe og blev behandlet intraperitonealt på samme måde som anden gruppe med den maksimalt tålelige dosis (MDI) opløst i 10 ml pr. kg opløsningsmiddel. Følgende data blev noteret: Det samlede antal dødsfald, 50$ overlevelsestiden (SI 50), variationen i denne 50$ overlevelsestid i forhold til overlevelsestiden' (10 dage) af ubehandlede bestrålede mus og antallet af mus, som overlevede den 30. dag.

Opløsningsmiddel Destilleret vand MDT 250 mg/kg

Samlet antal dødsfald 0/14 SI 50 >30 dage

Variation i ST 50 >30 dage

Overlevelse af 30. dag 14/14 7 U5042 B. Bølgende supplerende undersøgelser blev udført med forbindelsen I, hvis fremragende virkning er vist ovenfor, 1. LDcjq hos mus ad intraperitoneal vej blev bestemt på mere nøjagtig måde ved "up and down" metoden (A.W. Kinbal m.fl., Radiation Research, 1957, 7, 1) og viste sig at være fra 850 til 965 mg/kg, d.v.s. ca.

900 mg/kg. Den maksimalt tolererede dosis, som blev anvendt i forsøget, blev sat til 450 mg/kg.

2. Undersøgelse af den strålingsbeskyttende evne.

Otte grupper på hver 10 mus fik intraperitonealt administreret den maksimalt tålelige dosis af forbindelsen, d.v.s. 450 mg/kg, og blev bestrålet med følgende doser: 850 r (= bestråling LD 50$), 1000 r (= bestråling LD 90$), 1150 r, 1500 r, 1450 r, 1600 r, 1750 r og 1900 r.

I samme periode fik sammenligningsdyr administreret intraperitonealt samme mængde pr. kg vægt og blev så bestrålet.

De fremkomne resultater er anført i følgende tabeller 1 og 2.

Tabel 1

Overlevelsesgrad efter 30 dage (SR 30)

Udtrykt som procent

Dyr, som havde fået

Dosis (r) Sammenligningsdyr forbindelsen 700 100 850 60 100 1000 20 90 1150 0 40 1300 0 0 1450 0 0 1600 0 0 1750 0 0 1900 0 0 8 145042 gabel 2 G-ennemsnitsoverlevelsestid indenfor 30 dage (AST 30)

Udtrykt i dage

Dyr, som havde fået

Dosis Sammenlignings dyr forbindelsen 850 22,9 30 1000 10,2 28,2 1150 9,7 17,9 1300 - 9,5 1450 - 8,6 1600 - 9,4 1750 - 6,5 1900 - 3,6

Det vil ses, at hos de beskyttede dyr er der en udtalt forøgelse i gennemsnitsoverlevelsestiden i forhold til sammenligningsdyrene.

Tabel 3

Overlevelsestid (ST 50) (udtrykt i dage) 850 >30 >30 1000 10 >30 1150 9,5 12 1300 - 9 1450 - 8 1600 - 9 1750 - 6 1900 - 5

Det vil ses, at også ST 50 forøges hos de beskyttede dyr.

3. Bestemmelse af bestrålings 1D^0 hos beskyttede dyr.

Claims (2)

1. 9 145042 Den blev bestemt ved Karber's metode. Der fremkom én ID^-værdi på 1120 r.
2. 4. Beregning af den dosisreducerende faktor. Da bestrålings LD^q i ubeskyttede dyr er 857 r, fås følgende resultat: DR]? = = 1,30 Man kan derfor drage den konklusion, at forbindelsen I er en strålingsbeskytter, der er i det mindste lige så effektiv som cysteamin, samtidig med at den er væsentligt mindre giftig end sidstnævnte.-L - Forbindelserne fremstillet ifølge opfindelsen kan anvendes til præ-ventive eller curative formål overfor de uregelmæssigheder og skader, der forårsages af ioniserende strålinger, især under strålingsterapeutisk behandling af svulster eller leukæmier, og gøre det muligt for det syge system at tåle højere og derfor mere effektive strålingsdoser. Forbindelserne administreres parenteralt, rektalt, oralt eller lokalt i doser fra 100 mg til 1 g aktiv bestanddel pr. dag. Patentkrav . Analogifremgangsmåde til fremstilling af alkyl-2-(2-amino-ætyltio)-glykolater af formlen OH, CH-COOR (A) I 2 I GH2-NE2 OH hvor R er en alkylgruppe med 1-4 kulstofatomer, eller syreadditionssalte heraf med organiske eller uorganiske syrer, kendetegnet ved, at en forbindelse af formlen hs-ch2-ch2-rh2 (C)