DK144564B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af symmetriske methylsubstituerede 3,14-dithia-1,16-hexadecandioler - Google Patents

Description

(φ (19) DANMARK ' i

^ (12) FREMLÆGGELSESSKRIFT od 14456*+B

DIREKTORATET FOR PATENT- OG VAREMÆRKEVÆSENET

(21) Ansøgning nr. 4237/75 (51) Int.CI.3 C 07 C 1 A9 / 18 (22) Indleveringsdag 22. s ep. 1975 (24) Løbedag 22. s ep. 1975 (41) Aim. tilgængelig 24. mar. 197 6 (44) Fremlagt 29. mar. 1982 (86) International ansøgning nr.

(86) International indleveringsdag -(85) Videreførelsesdag ~ (62) Stamansøgning nr. “

(30) Prioritet 25· sep. 1974, 4l 381 /74, GB

(71) Ansøger LABORATOIRE L. LAFON, 94700 Maisons-Alfort, ER.

(72) Opfinder Louis Lafon, FR.

(74) Fuldmægtig Ingeniørfirmaet Hofman-Bang & Boutard.

(54) Analogifremgangsmåde til frem= stilling af symmetriske methyl= substituerede 5,14-dithia-1,1 6-hexadecandioler.

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte symmetriske methylsubstituerede 3,l4-dithia-l,l6-hexadecandioler, der er terapeutisk virksomme.

Forbindelserne er især anvendelige som hypolipidæmiske og hypo-O cholesterolæmiske midler.

CD

LO De omhandlede forbindelser har den i kravets indledning anførte _^· almene formel I, hvori R1 er H eller CH^, og fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i kravets kendeteg-^ nende del anførte.

Ω 2 144564

De omhandlede forbindelser med formel I fremstilles ved en af de følgende to metoder:

Metode 1, ved hvilken man omsætter en Ιό, U)-dihalogendecan med formlen

Hal-CCH^-Hal hvori Hal betegner, F, Cl, Br eller I, fortrinsvis Br, med en mercaptoalkanol med formlen R1 H0-CH2-(j-SH (III) CH* 3 hvori R1 har den ovenfor anførte betydning, i basisk medium, fortrinsvis i en alkohol, i nærværelse af 10 N NaOH, eller metode 2, der består i ved hjælp af LiAlH^ at reducere en substitueret 3 514-dithia-l,16-hexadecan-dicarboxylsyre eller -ester med formlen r1 r1 2 I ? o r^ooc-ch2-c-s-(ch2)10-s-c-ch2-coor^ (IV)

Ih I

ch3 CH3 1 2 hvori R har den ovenfor angivne betydning og R er hydrogen eller alkyl med 1-2 C-atomer.

Til gennemførelse af metode 1 til syntese af forbindelser med formel I, hvori R^" er H, har man udviklet en særlig fremgangsmåde, der omfatter fremstilling af et mellemprodukt, 2-mercap-topropanol. Denne fremgangsmåde består af fire trin, idet man (a) omsætter thiourinstof med propylenoxid i surt medium til dannelse af et β-hydroxythiouroniumsalt, der derpå dekomponeres i basisk medium til 2-methyl-thiiran, 3 14456Å (b) underkaster den således opnåede 2-methyl-thiiran en acetyle- ringsreaktion ved hjælp af eddikesyreanhydrid til opnåelse af 2-acetylmercapto-propylacetat ved åbning af thiiranringen, (c) underkaster det dannede 2-acetylmercapto-propylacetat en me-thanolysereaktion ved hjælp af methanol i nærvær af hydrogenioner til opnåelse af 2-mercaptopropanol, og (d) omsætter den således opnåede 2-mercaptopropanol med en ou,«,’-dihalogendecan med formel II.

Denne reaktionsmekanisme er skematiseret nedenfor, og detajlerne ved processen fremgår nærmere af nedenstående eksempel 2b.

(a) 1. trin: syntese af 2-methyl-thiiran - 1 + .NHn H+ Λ 0Hr,-0H-CH9 + S = CT 2 0H,-CH-CH2-S-C^ 3 \Q/ 2 \NH2 H2° 2 2 XNH2

NaoGO, /NH2

-CH^-CH-CHp + 0 = C

h2° 3 \g/ 2 ^NH2 (b) 2. trin: acetylering af 2-methyl-thiiran cæn ch5-ch-ch2 + (ch5co)2o —0 -> ch3-ch-ch2-o-co-ch3

W S

C0-CH3

Det er vigtigt, at acetyleringen gennemføres med eddikesyreanhydrid, idet man, hvis man anvender acetylchlorid, ikke opnår 2-acetylmercapto-propylat, men derimod den isomere, nemlig 1-acetylmercapto-2-propylacetat med formlen: CH,-CH-CH0-S-CO-CH, 3 i 2 3 o-co-ch3 4· 144564 da erfaringen viser, at (CH^C0)20 og CH^COCl fører til forskellige åbninger af den heterocycliske ring i 2-methyl-tMiran.

(c) 3. trin: methanolyse af 2-acetylmercaptopropylacetat CH^-OH-CH-O-OO-OHr? + 2CH^0H H+ ^ CH^-CH-CHnOH + 20H,C0oGH? J I J J rtrr ΠΤΤ' ^ I ^ J ^ 0

S-C0-0H5 ° 5u SH

(d) 4. trin; kondensation af 2-mercapto-propanol med en ω, dihalogendecan

2 CH3-CH-CH2OH + Hal-(CH2)10-Hal~i> I

»

SH

De omhandlede forbindelser har de i tabel I anførte smeltepunkter og kodenumre. Smeltepunkterne er bestemt på K6flerblok (øjeblikkeligt smeltepunkt).

TABEL I Η1

H0-CH2-C-S-(CH2)10-S-C-CH2-0H

ch3 ch3 R1__Smeltepunkt 0 C__Kode nr«_ CH3 kC 50 CRL 40 055 H 47-48 CRL 40 122

Fremstillingen af forbindelserne beskrives nærmere i de efterfølgende eksempler.

5 144564 EKSEMPEL 1 2,2,15 .J 5-tetramethyl-5,14-dithia-1,16-hexadecandipl CH·* CH, ,3 ,3 ho-ch2-c-s-(ch2)10-s-c-ch2-oh CH5 CH5

Kode nr. CRL 40 055· I et tørt apparat under nitrogenatmosfære indføres i løbet af 17 minutter en opløsning af 21,6 g (0,05 mol) ethyl-2,2,15,15-tetra-methyl-3,14-dithia-1,16-hexadecanoat i 50 ml tetrahydrofuran i en suspension af 3,8 g (0,1 mol) LiAlH^ og 75 ml tetrahydrofuran.

Man opvarmer til 60° C i løbet af 5 timer og 35 minutter, hvorpå man afkøler og tilleder 11,7 ml ethylacetat og 100 ml 4 N saltsyre.

Efter at have filtreret den uopløselige rest, afdampes tetrahydro-furanen under reduceret tryk, og ved ekstraktion med ether opnår man 15,7 g hvide krystaller. Disse renses ved vaskning med petro-leumsether til dannelse af 15,9 g hvide, vanduopløselige krystaller .

Smeltepunkt = < 50° C Udbytte = 80 pct.

EKSEMPEL 2a ί“2ζ2ζ15-άχ5β^£ΐ-3Α14-ΰΐΐΜβ;1Λ16^βχηάθ£3η^ίο1 ho-ch2-ch-s(ch2)10s-ch-ch2oh ch3 ch5

Kode nr. CRL 40 122.

6 U4564 I en omrørt suspension af 2,3 g (0,0605 mol) LiAlH^ i tetrahydro-furan under en nitrogenstrøm udhældes langsomt en opløsning af 7 g (0,0200 mol) (ί)-2,15-dimethyl-3,14-dithia-1,16-hexadecandi--earboxylsyre i tetrahydrofuran. Reaktionsmediet opvarmes under tiltagesvaling i 3 timer og 15 minutter. Efter neutralisation af overskuddet af reduktionsmidlet med ethylacetat og vandig base filtrerer man og afdamper derpå opløsningsmidlerne fra filtratet. Remanensen opdeles ved behandling med vand og methylenchlo-rid. Den organiske fase opsamles, vaskes til neutralitet og tørres. Opløsningsmidlet afdampes under reduceret tryk, og remanensen vaskes ved triturering med petroleumsether. Efter filtrering opnår man 5,4 g af et hvidt krystallinsk pulver, der er uopløseligt i vand. Naturligvis kan man isolere de optisk aktive isomere ud fra den racemiske blanding på i sig selv kendt måde.

Smeltepunkt = 47-48° C Udbytte = 83,7 pot.

EKSEMPEL 2 b fremgangsmåde til industriel fremstilling af (-)-2?_15-dimethyl-

Kode nr. CRL 40 122.

(a) Syntese af 2-methyl-thiiran Udgangsmaterialer thiourinstof............... 2,79 kg (36,75 mol) propylenoxid............... 2,03 kg, dvs. 2,45 1 (35 mol) vand....................... 23 1 svovlsyre, d = 1,83 ........ 1,03 1 (19,25 mol)

Na2C03 ..................... 3,71 kg (35 mol)

Apparatur

En 50 liter dekanteringsbeholder.

En 50 liter reaktor forsynet med omrører, køler og 5 liter tilled ningstragt.

7 144564

Fremstillingsmetode I en 50 1 reaktor anbringes 12,5 1 vand og 1,03 1 svovlsyre (d=l,83). Der afkøles, og man tilsætter 2,79 kg thiourinstof. Der omrøres for at opløse og afkøle den væskeformige masse til 2° C.

Derpå ibældes langsomt 2,03 kg propylenoxid i løbet af ca. 2 timer, idet man holder temperaturen på 0 - 5° C (reaktionen er exotherm). Omrøringen opretholdes i endnu 2 timer, idet temperaturen holdes på mellem 0 og 5° C. Derpå opvarmes påny for at nå omgivelsestemperaturen (20-25° C) og holde denne i yderligere 2 timer. Der ihæl-des langsomt en opløsning af 3,71 kg natriumcarbonat opløst i 10 1 vand (der er risiko for skumdannelse i begyndelsen). Der omrøres i 1 time efter tilledningens afslutning, hvorpå man lader blandingen dekantere. Overvæsken, 1,810 kg, separeres fra. Man kan ekstrahere den vandige fase med pentan, men denne operation er mindre interessant, eftersom 2-methyl-thiiran destillerer ved en lav temperatur (75° C ved 760 mm), og man mister en stor del under koncentrationen.

Overvæsken udvaskes med 500 cnr vand og tørres over natriumsulfat (500 g), idet man sørger for hver gang at opbevare den i en lukket beholder, dels på grund af dens ubehagelige lugt og dels på grund af dens flygtighed.

Udbytte og karakteristika

Efter tørring over natriumsulfat og frafiltrering af natriumsulfatet opsamler man: 1,715 kg råprodukt, dvs. 23,2 mol.

Udbytte (i forhold til propylenoxid) =66,3 pot.

n£° = 1,4762 lq,.: 760 -Hg jovei575° C%%

Den fraktion, der destillerer over mellem 71 og 74° C, repræsenterer 90 pct. af 2-methyl-thiiranen. Dette produkt egner sig perfekt til den følgende reaktion, hvorfor det ikke er nødvendigt yderligere at destillere dette.

8 144564 (b) Syntese af 2-acetylmercapto-propylacetat Udgangsmaterialer 2-methyl-thiiran................ 1.715 kg (23,2 mol) eddikesyreanhydrid .............. 2,930 kg (29 mol) 3 pyridin........................ 200 cm knust is ....................... 13 kg methylenchlorid eller chloroform 12 liter natriumbicarbonat .............. 1 kg

Apparatur 10 1 reaktor med omrører og tilbagesvaler.

En 10 1 reaktoropvarmer.

En 30 1 beholder med omrøring.

En 30 1 dekanteringsbeholder.

Et destillationsapparat forsynet med en adiabatisk kolonne (diameter 25 mm, højde 45 cm og "multiknit11 -garniture), en Perkin-separator og en 6 1 kogebeholder.

En vakuumpumpe og et manometer.

Fremstillingsmetode I en 10 1 reaktor anbringes 2,93 kg eddikesyreanhydrid, 1,715 kg 3 2-methyl-thiiran og 200 cm pyridin. Der opvarmes til tilbagesvaling ved 87° C. Temperaturen stiger langsomt til 100° C i løbet af ca. 3-4 timer. Denne temperatur opretholdes, således at den totale tid fra tilbagesvalingens begyndelse er ca. 6 timer.

Derpå hæves temperaturen til 130° C og holdes der i 3-4 timer.

Man lader afkøle til 30-40° C og udhælder den mørke, brunsorte reaktionsopløsning i en beholder indeholdende 13 kg knust is.

Der omrøres i 1-2 timer, hvorpå der tilsættes 6 1 methylenchlorid eller chloroform. Der omrøres i 30 minutter, og man lader blandingen dekantere. Den organiske fase separeres fra, og man ekstra- 9 14456Λ herer to gange med hver 3 liter methylenchlorid. De organiske faser forenes og udvaskes med 5 1 vand og derpå to gange med 5 1 vand indeholdende 100 g/1 natriumbicarbonat. Der skylles derpå to gange med 5 1 vand. Methylenchlorid eller chloroform afdampes under reduceret tryk, uden at man overskrider 40° C. Der opnås 4,45 g råprodukt i form af en sort olie.

Denne sorte olie destilleres ved 14 mmHg.

Som det fremgår af nedenstående tabel II,opnås der et antal fraktioner, der kromatograferes på en silica-gel-plade Eieselgel 60-1*254, ve^ eluering med en blanding af toluen: ethylformiat: myresyre (50:40:10) (volumenforhold).

fremkalder: svovlsur vanilin.

Rj, og farve; ester = 0,825 (gulgrøn) urenhed = 0,910 (rød).

Den opnåede mængde af produktet i hver fraktion bestemmes ved måling af destillatets brydningsindeks. Resultatet sammenlignes med en kurve, der er opstillet ved en blanding af kendte mængder ren 2-acetylmercaptopropylacetat og ren isoleret urenhed (som man hidtil ikke har forsøgt at identificere).

10 i , 144564 φ φ i Η Ρ Η .¾ a •Ρ Ή δβ δβ -ρ -Ρ Φ ·Η Μ 02 Ρ Ο ιΗ m (D 0) ® ^ Λ Φ p fd Ρ CO ·Η [Η tn Ο tn δβ ιη - CT\

ΟΟ 'Φ tn |>- CD CM CM

τ- ο co =+ cn \— ** tn m ο δο ιη τ— C0 η- ^ ι σ> φ cm ί- ·:- tn in ·3- σ\ ο *- τ— ^— tn ο δθ ιη

ν- CD

CD p- 1 CM CO CM 00 1— CM CM "Μ" C7\ o tn -

CM

ο M in

f- CD

tn =+ i in cd cm CO

1— CM p- "Φ cn

O CO

T— T—

Hi

H CM

Ο δβ in i-q =- co pq| -Φ 'M- I O CD CM 00 pqj i— v- m Φ cn <tjl O'-*' EHl ^ τ- Ο δθ Ο τ- co tn -Μ- 1 CM cD cm cn τ- o oo ·=+ cn O CM »· T~

Ο δα in -P

o tn cd cm τΜ-c- m co =— O +3 τ- ι cn ·Φ Ο φ cn *» v- o cn t- cd

H

cn δβ c- Pi cn cm o -s- -=+ I in co tn p t— CM CM p- p

m τ I

V- O

+3 P cc3 o P

0 x—. Φ o 'd cd a

Ο δβ P ^ H

* d Φ >3

P - ffi -P +3 -P

£ pa +3 cd Φ p Φ +3 o 0 +3+3 Η Φ cd

ο δα os φ P ο ο I

•Η K p Η H cd CM

+3 a φ a h +3 a P cd cd cd a coo +^^+3 p - φ ft wfl d φ o cd p p EH O d -¾ > P ^ 11 144564

Udbytte og karakteristika

Fraktionerne 2, 3, 4, 5, 6, 7 og 8 blandes. Man opnår en tør farveløs væske, n£° = 1,4670 20

Renhed ved n^ = 97 pot.

Totalvægt = 2,838 kg; vægt af rent produkt = 2,750 kg (dvs.

15,65 mol).

Udbytte beregnet på 2-methyl-thiiran = 67,5 pct.

Udbytte beregnet på propylenoxid = 44,8 pct.

(c) Syntese af 2-mercapto-propanol

Udgangsmaterialer 2-acetylmercaptopropylacetat (97 i«) ..... 2,838 kg (15,65 mol) 1 i saXtsur .ethanol ^““^1 6’5 1 (chlorid.......... 65 g vandfri ^£00^ ........................ 106 g

Apparatur 10 1 reaktor med omrøring og tilbagesvaling.

10 1 reaktor-opvarmer.

Frittet glasfilter, porøsitet 2, diameter 185 mm.

Destillationsapparat identisk med det foregående.

Fremgangsmåde I 10 1 reaktoren fyldes 6,5 1 vandfri methanol indeholdende 1 $ saltsyre og 2,838 kg 2-acetylmercaptopropylacetat. Der opvarmes til tilbagesvaling , og temperaturen holdes der i 5 timer. Man kan følge udviklingen af reaktionen ved tyndtlagskromatografi under samme betingelser som ved den foregående destillation. Der afkøles og tilsættes 106 g vandfri natriumcarbonat og omrøres i en halv time. Mineralsaltene filtreres fra.

12 144564

Den således opnåede methanoliske opløsning koncentreres under reduceret tryk, og produktet destilleres ved 20 mmHg.

Som ovenfor kromatograferes hver fraktion på silicagel (Kieselgel 60-^254) °S elueres med en "blanding toluen:ethylformiat:myresyre (50:4-0:10) (volumenforhold).

Fremkalder: svovlsur vanillin.

E.£ og farve: 2-mercaptopropanol = 0,625 (gulgrøn).

Mængden af 2-mercaptopropanol i hver fraktion (jfr. nedenstående tabel III) bestemmes ved måling af brydningsindeks af destillatet. Resultatet sammenlignes med en opstillet kurve for en blanding af kendte mængder 2-mercaptopropanol og methanol.

TABEL· III

Fraktion nr. 1(b) 2 3 4 5 Rest P, mmHg 35-50 50-30 30-20 20 20

Temperatur, °C 20-25 25-34 34-58,5 58,5-61 61-61,5 destille- rer ikke

Opsamlet mængde 4-51125 g 70 g 862 g 135 g 386 g n20 1,3400 1,3767 1,4470 1,4810 1,4820 ikke må lelig total pietter (a) , , + , , + 1 .1+1 9 meget meget meget lille lille lille ^5flt0- 35 80,5 99 99,5 (a) en meget lille plet af 2-mercapto-propanol (b) fraktion 1 består af en blanding af methylacetat og methanel indeholdende 2-4 pct. 2-mercapto-propanol 13 144564

Udbytte og karakteristika

Fraktionerne 3, 4 og 5 blandes. Man opnår en klar farveløs væske .

n£° = 1,4795

Renlied ved n^° = 98 fo.

Totalvægt: 1,067 kg; vægt af rent produkt: 1,045 kg (11,37 mol).

Udbytte beregnet på esteren: 72,6 pct.

Udbytte beregnet på propylenoxid: 32,5 pct.

(d) Kondensation med 1,10-dibromdecan

En opløsning af 2-mercaptopropanol og 1,10-dibromdecan i ethanol udhældes i ION natriumhydroxid. Efter at temperaturen er faldet til stuetemperatur, afdampes alkoholen, og remanensen optages i vand. Ved ekstraktion af den uopløselige rest med chloroform opnås et fast stof, der efter omkrystallisation fra ethylacetat udviser et smeltepunkt på 47-48°0. Udbytte: 100%.

Biologisk Rapport

De omhandlede forbindelser er i besiddelse af hypolipidæmiske og hypocholesterolæmiske egenskaber og er følgelig nyttige i terapien, især ved behandling af hyperlipidæmi og hypercholesterolæmi.

Til dette formål kombineres mindst én forbindelse med formel I med en fysiologisk forligelig excipiens.

Der er foretaget farmakologiske undersøgelser af de to omhandlede forbindelser CRL 40 055 (eksempel 1) og CRL 40 122 (eksempel 2a og 2b), og disse undersøgelser gennemgås nærmere nedenfor. Den foretrukne forbindelse er CRL 40 122.

Resultater for CRL 40 055: I tabel IV nedenfor er anført de opnåede resultater: A: For rotter, der modtager en normal diæt (procent inhibering = 100); 14 144564 B: For rotter, der modtager en hyper lipisk diæt (procent ihhi- bering = 0); C: For rotter, der modtager den hyperlipidiske diæt B sammen med en daglig dosis på 0,1 g/kg af et normolipidæmisk referencemiddel, "BIPAVLON" [ethyl-2-(p-chlorphenoxy)-2-methylpropionat; C10FIBRATTJM, NFN];

B: For rotter, der modtager den samme hyperlipidiske diæt B

sammen med en daglig dosis på 0,1 g/kg af et normolipidæmisk referencemiddel, "ATHEROLIP" [aluminiumsaltet af 2-(p-chlor-phenoxy)-2-me thylpropionsyre];

E: For rotter, der modtager den samme hyperlipidiske diæt B

sammen med en daglig dosis af 0,1 g af et normolipidæmisk referencemiddel "LL 1558" [1,1O-his-(2-hydroxyethylthio)-deean]; F; For rotter, der modtager den samme hyperlipidiske diæt B med en daglig dosis af henholdsvis 0,010 g/kg, 0,025 g/kg eller 0,050 g/kg CEL· 40 055.

Gennemsnitsværdierne for forsøgene foretaget med CR1 40 055 i tre forskellige doser og heregnet ved sammenligning med de korresponderende referenceprodukter i de forskellige forsøg muliggør følgende konklusion om produktets aktivitet: I en dosis på 0,050 g/kg er den procentvise hæmning mellem 40 og 60 pct.; i en dosis på 0,025 g/kg er den procentvise hæmning 30 - 55 pct.; i en dosis på 0,010 g/kg synes aktiviteten at være fuldstændig forsvundet.

En dosis på 0,025 g/kg synes således særlig interessant, eftersom ORL 40 055 ved denne værdi synes at bevare en konstant aktivitet, der kan sammenlignes med de anvendte referenceprodukter i doser på 0,1 g/kg.

15 144564

Resultater for OR! 4O 122:

Produktet er ikke-toxisk. Porsøg over den akutte toxlcitet ved oral indgivelse i mus og rotter har vist, at der ikke er nogen dødelighed hos de behandlede dyr i doser på op til 5 g/kg.

De hypolypidæmiske virkninger af CRL 40 122 er undersøgt på rotter ved to forskellige forsøg:

En undersøgelse på Wistar-rotter, der får en hyperlipidisk diæt (forsøgsrapport i), og en undersøgelse på normale Wistar-rotter (rapport II).

Resultaterne opnået ifølge de to protokoller er overensstemende.

Porsøgsrapport I

Porsøget er gennemført i to uger på Wistar-rotter, der har fået en daglig hyperlipidisk diæt i en dosis på ca. 20 g for dyr med en gennemsnitlig vægt på 150 g.

Det undersøgte produkts aktivitet er angivet i forhold til normale kontrolrotter og i forhold til grupper af rotter, der har fået den samme hyperlipidiske diæt, men som ikke er behandlet.

Por hver dosis CRL 40 122 havde man tre grupper på hver fem dyr (kontrolgruppe, gruppe, der kun fik den hyperlipidiske diæt, og behandlet gruppe). De opnåede resultater svarer til gennemsnittet af hver serie. De viser en meget kraftig virkning af CRL 40 122 i doser fra 10 mg - 50 mg/kg for rotter, der fik indgivet hyperlipidæmisk diæt (sænkning på 64 - 34% af lipider i blodet, afhængigt af dosis, sænkning af cholesterol på 68 -41%).

Porsøgsranport II

Porsøget gennemførtes i 5 dage på normale Wistar-hanrotter.

Grupper på otte dyr for hver dosis af det undersøgte produkt behandledes peroralt dagligt, idet den sidste fodring fandt sted 16 144564 3 timer før dyrene aflivedes. Hver serie opdeltes i to grupper:

En serie aflivedes efter 3 dages forsøg, den anden serie aflivedes efter 5 dages forsøg.

Resultaterne er angivet i forhold til 8 normale rotter, der er underkastet de samme eksperimentelle betingelser, men ikke behandlede. Man observerer en nedgang på 31 f totale lipider og 23 f> cholesterol med en dosis på 20 mg/kg ved peroral indgivelse.

Af disse forsøg kan man aflede følgende konklusioner: (1) De to forsøgsrapporter viser, selv om de er meget forskellige, en aktivitet af produktet af størrelsesordenen 60 fo for en dosis på 50 mg/kg 20 fo for en dosis på 20 mg/kg 20 fa for en dosis på 10 mg/kg (2) Produktets aktivitet er allerede tydelig efter den tredje b ehandlingsdag.

I human terapi har man anvendt CR1 40 122 med succes i form af gelatinøse kapsler indeholdende 100 og 200 mg. De syge, der led af hyperlipidæmi og hypercholesterolæmi, og som fik en total dosis på 400 mg/dag af den aktive forbindelse, har set deres hyperlipidæmi og hypercholesterolæmi falde efter flere dages behandling.

17 144564 ι CO ·Η 5*0 ·· r! c~j d ø d H o c·- cn oo o c- c- o o m ^ o •hi>.hph o i md h- uo o l cm oo no o i c\i co ø s ø ^ P 54 CQ ft d d

pq H φ- O O NO *φ 00 UO Ή CO CM f- NO MO C- NO

\ CM CM UO O'- VO W O CO to CO CM CTi IH NO CM

bO V- -- ^ Η ·Η bD O il id

dd'H O CO MO i- O V£D LT\ O O O O

H ø -Η d o I in tn o l no m uo oivor- <S p ø v- -s- -i-

p ra 'SRP

o 0 ^'o co oo c- cn t- H- tn tn ^ co co to r h t~ σι o Φ w co c\i to σ in to ffl Q \ r. c\ t\ r> »s o »v ri». ^ *x ** *s *s

ttø O tO N W CM O H" NO i- CM O CM τ~ v NO

H hD

Q-j £-J

Cj ri.H O (T\ C- O O CM C" O CM C- O

0 0 H d ΟΙΦ-Κ0-Φ O I CM 03 (O O I CM this- H Η Φ <- ^ H Cti ·Η -P ft

H O H

eg E4 Η uo in Ln no co no

S H C- Ih- CO C" -Φ m 1Λ (M T- O NO ^)- NO m NO

·« *% «\ w ·% ». r> »\ ι\ λ »\ n r. t> ·» pj tø CM O M3 C- Ih- to o σ in CO to 00 N- Φ r- 1—1— M b0 W) AS A4 A! hQ \

Ai bo bo bo s in) bo bo

M M O Ai bO in Ai bO O

\ UO \ Al cm N A ^- v- bD O bfl ^ O W)\0 ·. r. bO - bfl - O T- O T- o *- o *\ r» T*" ·* ^— I O I O-l 0-1 o o ft I m I uo I m H uo I in I in d Hdo do do ø O O O 00 O 00 p d H o Hino Hino

Ai ø |> H- !> uo -Φ i>inH- d i cs ώτ- <Si- H P ft H ft hd Pi ft O 14 -Η Ρί -H ft ρί h ft di

14 <j hl O hl hl D hl d O

+ + + + + + + + +

bO

O 0000 0000 0000

Ai Ai Ai Ai A A A A A A A A

P mcorara rararam ramram SB Ή Ή ·Η ·Η ·Η ·Η ·Η ·Η Ή ·Η ·Η Η •Η Η Η Η Η ΗΗΗΗ Π Η Η Η Η ·Η ·Η Ή ·Η Η ·Η ·Η ·Η Ή ·Η Η Η ftftftft ρ, ft ft ft ft ft ft ft Ρ ·Η Η ·Η ·Η Ή Ή Η Ή *Η Η Η Η

Η Η Η Η Η Η Η Η ι—ΙΗΗ ΗΗι—Ιι li I

d es d d d d d d d d d d d d d d ø g ø ø ø ø g ø ø ø ø g ø ø ø ø > d ft ft ft ft d ft ft ft ft d ft ft ft ft d O >5 !>5 >5 >5 0>5>3>j>3

-¾ s dd W ffi M d W W W W S W W W M

IS 144564

De omhandlede forbindelser er endvidere sammenlignet med en række nært beslægtede forbindelser, dels med hensyn til hypoli-pidæmisk og hypocholesterolæmisk virkning og dels med hensyn til virkning på aorta (afsætning af cholesterol).

Indholdet af total lipid og total cholesterol er bestemt (ved metoden beskrevet ovenfor) hos rotter (vægt 185 g; 10 rotter pr. gruppe) efter 2 ugers behandling, og de tilsvarende procentvise inhiberinger er beregnet for A: rotter, der modtager normal diæt (procent inhibering = 100); B: rotter, der modtager en hyperlipidisk diæt (procent inhibe ring = 0); C: rotter, der modtager den hyperlipidiske diæt B sammen med en daglig dosis på 0,1 g/kg Clofibratum, og D: rotter, der modtager den hyperlipidiske diæt B sammen med en daglig dosis på 0,05 - 0,1 g/kg af en af undersøgte forbindelser.

19 U4 564 Følgende forbindelser er undersøgt: (CH2)n(S-A-0H)2

Forbindelse nr. η A

1 ίο ch2ch2 2 12 CH2CH2 3 5 CH2CH2 4 6 CH2CH2 5 6 (CH2)4 6 6 (CH2)6 7 9 CH2CH2 8 9 (CH2)4 9 10 (CH2)5 iok io c(ch3)2ch2 11 8 CH2CH2 12 7 CH2CH2 133^ io ch(ch3)ch2 14 ii ch2ch2 k Den omhandlede forbindelse CRL 40 055 hk Den omhandlede forbindelse CRL 40 122 20 144564

Resultaterne fremgår af den følgende tabel:

TABEL V

Behandling Totale lipider Total cholesterol 271 * inliibering ^ % inhiberijng A 2,80 100 0,80 100 B 10 0 4,30 0 C (Clofibra- tum) 6,8 50 2,90 60 D (0,1 g/kg forb. 1) 7,6 40 2,55 50 D (0,1 g/kg forb. 2) 10,0 10 3,88 12 D (0,1 g/kg forb. 3) 10,0 10 3,81 14 D (0,1 g/kg forb. 4) 10,16 8 3,95 10 D (0,1 g/kg forb. 5) 11 0 6,1 0 D (0,1 g/kg forb. 6) 11 0 5,1 0 D (0,1 g/kg forb. 7) 10,0 10 3,60 20 D (0,1 g/kg forb. 8) 12 0 4,8 0 D (0,05 g/kg forb. 10)K 6,0 60 1,50 80 D (0,1 g/kg forb. 10)K 4,4 80 1,29 86 D (0,1 g/kg forb. 11) 10,16 8 3,95 10 D(0,1 g/kg forb. 12) 10,0 10 4,05 7 D(0,05 g/kg forb. 13)** 5,04 72 1,43 82 D (0,1 g/kg forb. 13)** 4,32 81 1,22 88 D (0,1 g/kg forb. 14) 1 9,20 1 20_ 3,67 18_ 21 U4564 x CRL 40 055 xx CRL 40 122

Det ses, at de forbindelser, hvori A er en ligekædet carbonhy-dridgruppe med mere end 2 C-atomer, er inaktive, og at de omhandlede forbindelser er mere aktive end Clofibratum og LL 1558, selv i lavere doseringer0 I et andet sammenligningsforsøg går man frem på følgende måde:

Fire kontrolkaniner gøres hyperlipidæmiske ved fodring i 6 uger med en diæt beriget med 1 vægt-% cholesterol. X samme tidsrum fodres andre kaniner (grupper på fire dyr) med samme diæt, idet de samtidig indgives 100 mg/kg/dag Clofibratum eller 50 mg/kg/ dag af de øvrige forbindelser, der skal undersøges. Herefter behandles kaninerne med cholesterol mærket 5 /uCi tritium (1 Ci/ mmol) i 3 uger med henblik på at opnå stationær tilstand.

Derpå dræbes kaninerne ved overskæring af halspulsåren. Fra hver kanin udtages aorta, som renses og skæres i to dele: Den krumme del og den distale del. Hver af disse dele solubiliseres i 1 ml toluen i 24 timer, og til hver solubiliseret prøve tilsættes 10 ml klarings-væske (Instagel, Packard).

Herefter måles afsætningen af mærket cholesterol i aorta ( i Ci/g aorta). Resultaterne fremgår af tabel VI: 22 144564

TABEL VI

Afsætning af cholesterol i aorta (nCi/g aorta)

Behandling Aorta total krum del distal del

Kontrol 448+142 189+ 83 259 + 116 LL 1558 * * x (50 mg/kg 412+175 226+ 98 186 + 146

Clofibratum xx xx xx (100 mg/kg) 816+168 340+ 66 476 + 155 CRL 40 055 x * * (50 mg/kg 450+150 210+ 90 200 + 150 CRL 40 122 x x x (50 mg/kg 380+170 208+ 85 172 + 145

Forbindelse 2 xx xx xx (50 mg/kg 780+175 360+ 70 420 + 150

Forbindelse 3 xx xx xx (50 mg/kg 815+180 320+ 75 495 + 130

Forbindelse 7 xx xx xx (50 mg/kg) 810+165 350+ 80 460 + 145

Forbindelse 14 xx sx xx (50 mg/kg 830+170 356+ 70 474 + 135 x ikke statistisk signifikant xx statistisk signifikant

Af tabellen ses, at LL 1558 og de omhandlede forbindelser bevirker en mindre nedgang i afsætningen af cholesterol, medens alle de øvrige forbindelser bevirker en væsentlig forøgelse af chole-sterolafsætningen i aorta. Den forøgede afsætning af cholesterol i aorta er en betydelig ulempe.