Verfahren zur Herstellung von Vitamin-Bl2-Konzentraten
Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur
Herstellung von Vitamin-B1.-Konzentraten.
Es :ist bekannt, daß für @d:ie Isolierung und Rein-
darstellung von. Vitamin B12 die Entdeckung, @daß
dasselbe ein koordinativer Cyanö-Koibaltkomplex
ist, von größter Bedeutung war. Es ist auch be-
kannt, @daß zahlreiche andere grundsätzlich gleich-
gebaute Stoffe existieren, die als Vitamine :der
B12-Gruppe bezeichnet werden. Die
Modifikationen dieser mit dem Namen Cobalamin
benannten Stoffgruppe unterscheiden sich lediglich
durch verschiedene, .am Kobaltatom koordinativ
gebundene Gruppen und können durch Austausch-
reaktion ineinander übergeführt werden. Alle diese
Vi:tamin-B12 Analogen, wie z. B. Chloro-cobal:amin,
Hydroxo-cobal.amin, @Sulfato-cobalamin, Nitroso-
cobalami:n, sind im mikrobidlogischen Test mit
Lactobacillus lactis oder Lactdbacillus Leich-
mannii mehr oder weniger @biologisch aktiv. Von
besonderer Bedeutung ist, daß .allle Modifikationen
unter der Einwirkung von Cyani@den in das mikro-
biologisch aktivste Cyano-cobalamin, oder Vit-
amin B12 schlechtweg, übergeführt werden können.
Ferner wurde beschrieben, :daß das Vitamin B12
in Naturprodukten häufig nicht in frdier Form, son-
dern als Konjugat in Peptidbi.ndung vorliegt. So
ist bekannt, daß z. B. bei der Isolierung von Vit-
amin B12 aus Leber eine Proteolyse, z. B. mittels
Papain, notwendig ist, um das Vitamin B12 aus
seiner Peptidbiudung freizusetzen und es so isolier-
bar zu machen. So wurde z. B. eine solche Prote-
olyse von Leberextrakten mittels Papain, welches
aber aktiviert war, durchgeführt.
Es wurde auch festgestellt, daß man eine solche
Proteolyse zur Freisetzung .des Vitamin B12 durch
die Eiänwsrkung von Cyaniden ersetzen kann, wo-
durch die Bindung von Vitamin B12 an ein-Protein
oder eine Peptidgruppe gelöst wird.
Ferner ist ein Verfahren zur Herstellung der
Vitamine der B12 Gruppe bekannt, das darin .be-
steht, daß Konzentrate, die idiese Vitamine ent-
halten , einer Behandlung .mit Cyaniden im pH-Be-
reich 5 bis 7 unterworfen werden, wobei eventuell
eine gleichzeitige Verdauung mit Papain vorge-
nommen wird. Bei .diesem Verfahren. wird. so vor-
gegangen, daß zunächst mit Hilfe anderer be--
kannter Methoden das dn einem Virtamin-B12 aktiven
Gemisch vorhandene Vitamin B12 selbst abgetrennt
wird und erst die zurückbleibenden Anteile mi.t
Cyaniden behandelt werden. Das Verfahren betrifft
also ausdrücklich Konzentrate, die bereits erheb-
liche -Mengen: an Vitamin-B12-Analogen enthalten,
aus denen aber mittels der üblichen Reinigungs-
methoden kein kristallisiertes Vitamin B12 mehr
gewonnen werden kann, so z. B. Abfallprodukte aus
Leber oder Extrakte aus Streptomycinabfall usw.
Weiterhin ist es auch bereits bekannt, Fermen-
tationsflüssigkeitten oder Konzentrate aus solchen
einer Cyanidbehandlungg zu unterziehen. Dieses
bekannte Verfahren unterscheidet sich aber grund-
sätzlich von !dem nachstehend im einzelnen be-
schriebenen erfindungsgemäßen Verfahren.
Gemäß der Erfindung wird nun zur Herstellung
von Vitamin B12 Zubereitungen nicht von den oben-
genannten Konzentraten ausgegangen, sondern
Vitamin-B12 ha'ltiges Feuchtmycel von S.trepto-
mycesarten unmittelbar mit Cyaniden .behandelt.
Solches Feuchtmycel kann .bekanntlich .z. B. da-
durch gewonnen werden;, daß man !das Wachsaum
von Mikroorganiismen bereits zu einer Zeit ab-
bricht, zu der -die Hauptmenge des Vitanvin B12
noch nicht in die Nährflüssigkeit übergegangen ist.
Erfindungsgemäß wird so verfahren, daß man
ohne Rücksucht auf die eventuelle Abtrennbarkeit
von kristallisiertem Vitamin B12 aus dem Roh-
produkt auf dieses selbst unm.i:tt4elbar Cyanide ein-
wirken; läßt. Zwar müssen rin diesem Fallgrößere
Volumina verarbeitet werden als (be;i der obren an-
geführten Arbeitsweise, @doch :besitzt das er=
findungsgemäße Verfahren den Vorteil, @daß man
alle eine Vitamin-B12 Aktivität besitzenden Be-
standteile in einer einzigen Operation erfassen
kann, indem man alle Modiifikatrionen von vorn-
herein in das Cyano-coba'lamin überführt und
außerdem vorhandene Konjugate spaltet. Dabei
wird- von noch lebendem Feuchtmycel von Strep-
tomycesarten ausgegangen. Auf diese Weise wiird
erfindungsgemäß die -proteolytnsChe Wirksamkeit
.des Mycels ausgenutzt, was einen. weiteren nicht
zu unterschätzenden Vorteil des Verfahrens bildet.
Im folgenden soll die Erfindung an Hand von
'einigen Beispielen erläutert werden.
Beri.sp.iel i
i kg Feuchtmycel von Streptomyces griseus wird
mit 5 ccm Toluol versetzt und unter Rühren
8 Stunden bei 5o° stehengelassen. Sodann setzt
man io ccm einer 50/aigen Natriumcyanidlösu:ng
zu und bebrütet weitere 3 Stunden, bei 5d°'. Das
Reaktionsprodukt wird zentrdfugi-ert und .mit wenig
Wasser ausgewaschen. Das gesammelte Filtrat
wird mit i % Aktivkohle versetzt. Nach 1/2stülvdi-
gem Rühren. wird die Kohle abzentri.fwgiert, mit
wenig Wasser gewaschen und fraktioniert mit ioo,
50 und nochmals 50 .ccm 70%aigem ;heißem Äthanol
eluiert. Die vereinigten Eluate werden im Vakuum
verdampft. Dieses Konzentrat enthält die @gesamte
in der ursprünglichen Probe vorhandene Menge :an
Vitamin B12, Bl2 Ämalögen und B12 Konjugaten
nunmehr ,in Form von Cyano-cobalamin.
Be.ispiel2
i kg Feuehtmycel von S.treptomyces olivaceus
rnit einem Trockensubstanzge'halt von etwa 6%
wird mit io com einer 5°/0igen Kahiumcyan.iidlösung
versetzt und bei. 50° 3 Stunden bebrütet. Das er-
haltene Produkt wird abzentrifuigiert und mit
Wasser von. 50!°' ausgewaschen. Das Filtrat wird ;in
gleicher Weise wie im Ausführungisbei,spiel i auf-
gearbeitet. Im Endkonzentrat 'liegt die besamte
Vi.tarnin-B12 akbiwe Substanz als Cyano-coibal-amin
vor.
Process for the production of vitamin B1 concentrates The invention is a method for
Manufacture of vitamin B1 concentrates.
It is known that for @d: he isolation and clean
display of. Vitamin B12 the discovery @ that
the same is a coordinative cyano-koibalt complex
is of paramount importance. It is also
knows @ that numerous others are basically the same
built substances exist as vitamins: the
B12 group. the
Modifications of this with the name Cobalamin
named group of substances only differ
by different, coordinative at the cobalt atom
bound groups and can through exchange
reaction can be converted into one another. All these
Vi: tamin-B12 analogs, such as B. Chloro-cobal: amine,
Hydroxo-cobal.amin, @ sulfato-cobalamin, nitroso-
cobalami: n, are included in the microbid logic test
Lactobacillus lactis or Lactdbacillus Leich-
mannii more or less @biologically active. from
It is of particular importance that all modifications
under the action of cyanides in the micro-
most biologically active cyano-cobalamin, or vit-
amine B12 can simply be transferred.
It was also described that: that vitamin B12
in natural products often not in free form, but rather
which is present as a conjugate in a peptide bond. So
it is known that z. B. in the isolation of Vit-
amine B12 from liver proteolysis, e.g. B. by means of
Papain, is necessary to make the vitamin B12 out
to release its peptide compound and isolate it
to make cash. So was z. B. such a protein
olysis of liver extracts using papain, which
but was activated, carried out.
It was also found that one could do this
Proteolysis to release vitamin B12
can replace the effect of cyanides, where-
by binding vitamin B12 to a protein
or a peptide group is dissolved.
Furthermore, a method for producing the
Vitamins of the B12 group are known to contain.
it says that concentrates that contain these vitamins
a treatment with cyanides in the pH
rich 5 to 7 are subjected, with possibly
simultaneous digestion with papain
is taken. With .this procedure. will. so before-
gone that initially with the help of others
known methods, the active virtamin-B12
Vitamin B12 present in the mixture itself separated
and only the remaining shares mi.t
Cyanides are treated. The procedure concerns
i.e. expressly concentrates that have already been
liche amounts: contain vitamin B12 analogues,
from which, however, by means of the usual cleaning
methods no longer have crystallized vitamin B12
can be obtained, so z. B. waste products
Liver or extracts from streptomycin waste, etc.
Furthermore, it is already known to Fermen-
tation liquids or concentrates from such
to be subjected to a cyanide treatment. This
known processes differ fundamentally
in addition to the following in detail
described method according to the invention.
According to the invention is now to manufacture
vitamin B12 preparations not from the above
mentioned concentrates, but
Vitamin B12 containing moist mycelium from S. trepto-
mycesarten treated directly with cyanides.
As is well known, such moist mycelium can. B. there-
by being won; that one! the wax border
of microorganisms already at one point
breaks, to which -the main amount of Vitanvin B12
has not yet passed into the nutrient fluid.
The procedure according to the invention is such that one
without referring to the possible severability
of crystallized vitamin B12 from the raw
product on this self-contained cyanide
works; leaves. In this case, it is true that larger ones are required
Volumes are processed as (be; i the upper other
guided way of working, @but: has he =
inventive method the advantage that @ that one
all have vitamin B12 activity
record components in a single operation
can be done by starting all the modifications
transferred into the cyano-coba'lamin and
also splits existing conjugates. Included
- from still living moist mycelium of Strep-
tomycesarten assumed. That way wi will
according to the invention the proteolytic effectiveness
.of the mycelium exploited what a. further not
which is an underestimated advantage of the procedure.
In the following the invention with reference to
'are explained in a few examples.
Beri.sp.iel i
i kg of wet mycelium of Streptomyces griseus
mixed with 5 ccm of toluene and stirring
Left to stand for 8 hours at 50 °. Then sets
one 10 ccm of a 50 / aigen sodium cyanide solution: ng
and incubate for a further 3 hours, at 5d ° '. That
The reaction product is centrifuged and with little
Washed out water. The collected filtrate
i% activated carbon is added. After 1 / 2stülvdi
according to stirring. the coal is centrifuged, with
washed a little water and fractionated with ioo,
50 and again 50 .ccm 70% aigem; hot ethanol
eluted. The combined eluates are in vacuo
evaporates. This concentrate contains the @total
Amount present in the original sample: an
Vitamin B12, Bl2 Ämalögen and B12 conjugates
now, in the form of cyano-cobalamin.
Example2
i kg of fire mycelium of S. treptomyces olivaceus
with a dry matter content of about 6%
is with io com a 5% potassium cyanide solution
offset and at. 50 ° incubated for 3 hours. The
held product is centrifuged and with
Water from. 50! ° 'washed out. The filtrate is; in
same way as in the example, play i
worked. The inseminated is in the final concentrate
Vi.tarnin-B12 akbiwe substance as cyano-coibal-amine
before.