DE820303T1 - p277 PEPTIDANALOGE, PHARMAZEUTISCHE ZUSAMMENSTELLUNG DAVON ZUR BEHANDLUNG UND DIAGNOSE VON DIABETES - Google Patents
p277 PEPTIDANALOGE, PHARMAZEUTISCHE ZUSAMMENSTELLUNG DAVON ZUR BEHANDLUNG UND DIAGNOSE VON DIABETESInfo
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Claims (17)
1. Ein Peptid der Sequenz I:
VaI-LeU-QIy-GIy-GIy-X1-AIa-LeU-LeU-AIg-X2-IIe-PiO-
6 11 (I)
Ala-Leu-Asp-Ser-Leu-XrPro-Ala-Asn-Glu-Asp (SEQIDNO:2)
19
wobei sowohl X1 als auch X2 ein Cys- oder Val-Rest ist, X3 ein Thr- oder Lys-Rest ist, jedoch
X1 und X2 nicht zugleich Cys-Reste sein können, falls X3 Thr ist, und Salze und funktionelle
Derivate davon.
2. Peptid nach Anspruch 1 aus den Peptiden, hier bezeichnet als p277(Val ), wobei Xj
VaI, X2 Cys und X3 Thr ist; p277(Valn), wobei X1 Cys, X2 VaI und X3 Thr ist; p277(Val6-VaI11),
wobei sowohl X1 als auch X2 VaI ist und X3 Thr ist; p277(Lys19), wobei sowohl X1 als
auch X2 Cys ist und X3 Lys ist; p277(Val6-Lys19), wobei X1 VaI, X2 Cys und X3 Lys ist;
p277(Valn-Lys19), wobei X1 Cys, X2 VaI und X3 Lys ist; p277(Val6>
n-Lys19), wobei sowohl X1 als auch X2 VaI ist und X3 Lys ist.
3. Verwendung eines Peptids nach Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung einer Zusammensetzung
zur Diagnose Insulin-abhängiger Diabetes mellitus (nachstehend als IDDM bezeichnet).
4. Verfahren zur Diagnose von IDDM oder eines Anfangsstadiums in einem Patienten,
umfassend eine Untersuchung des Bluts oder des Urins des Patienten mit einem Peptid nach
Anspruch 1 oder 2 als Antigen zum Nachweis von Antikörpern oder T-Zellen, die immuno-
logisch reaktiv mit menschlichem hsp60 sind, wobei ein positives Resultat, das einen Nachweis
von anti-hsp60-Antikörpern oder einer T-Zelle, die mit hsp60 immunoreagiert, liefert,
eine hohe Wahrscheinlichkeit fur IDDM oder eines Anfangsstadiums anzeigt.
5. Verfahren nach Anspruch 4, wobei der Nachweis von anti-hsp60-Antikörpern durch
einen Radioimmunoassay oder durch einen ELISA-Test erbracht wird.
6. Kit zur Diagnose von IDDM durch einen Nachweis von anti-hsp60-Antikörpern, gemäß
dem Verfahren nach Anspruch 4 oder 5, umfassend:
.
(i) ein Antigen, das ein Peptid der Sequenz (I) nach Anspruch 1 darstellt; und
(ii) ein Antikörper mit einem tag, fähig zur Erkennung der nicht-variablen Region der
nachzuweisenden anti-hsp60-Antikörper.
15
15
7. Verfahren nach Anspruch 4, wobei der Nachweis einer mit hsp60 immunoreagierenden
T-Zelle durch einen T-Zell-Vermehrungstest erbracht wird, umfassend die folgenden
Schritte:
(i) Herstellung einer mononuklären Zellfraktion mit T-Zellen aus einer Blutprobe des
Patienten;
(ii) Zugabe eines Antigens, bestehend aus einem Peptid nach Anspruch 1, zu der mononuklären
Zellfraktion;
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(iii) Inkubieren der Zellfraktion in Anwesenheit des Antigens für eine angemessene Zeit
und unter geeigneten Kulturbedingungen;
(iv) Zugabe eines markierten Nukleotids zur inkubierten Zellkultur von (iii) zu einer gün-'
stigen Zeit vor Beendigung der Inkubationsdauer, um den Einbau des markierten
Nukleotids in die DNA der sich vermehrenden T-Zellen zu erlauben; und
(&ngr;) Bestimmung der Menge von sich vermehrenden T-Zellen durch eine Untersuchung der
Menge des in die T-Zellen eingebauten markierten Nukleotids.
8. Verfahren nach Anspruch 4, wobei der Nachweis einer T-Zelle, die mit hsp60
immunoreagiert, durch einen T-Zell-Cytokin-Reaktionstest erbracht wird, umfassend die folgenden
Schritte:
(i) Herstellung einer mononuklären Zellfraktion mit T-Zellen aus einer Blutprobe von
dem Patienten;
10
10
(ii) Zugabe eines Antigens, bestehend aus einem Peptid nach Anspruch 1, zu der mononuklären
Zellfraktion;
(iii) Inkubieren der Zellfraktion in Anwesenheit des Antigens fur eine angemessene Zeit
und unter geeigneten Kulturbedingungen; und
(iv) Nachweis eines von den reagierenden Lymphozyten in das Medium sekretierten
Cytokins, wobei das Cytokin IFN-&ggr;, IL-2, IL-4, IL-6, IL-IO, TNF-ct oder TGFß ist.
9. Kit zur Diagnose von IDDM durch den Nachweis einer T-Zelle, die nach dem Verfahren
von Anspruch 7 mit hsp60 immunoreagiert, umfassend:
(i) ein Antigen, bestehend aus einem Peptid nach Anspruch 1;
(ii) ein markiertes Nukleotid; und
(ii) ein markiertes Nukleotid; und
(iii) ein geeignetes Medium zur Kultivierung von Lymphozyten.
10. Kit zur Diagnose von IDDM durch Nachweis einer T-Zelle, die nach dem Verfahren
von Anspruch 8 mit hsp60 immunoreagiert, umfassend:
(i) ein Antigen, bestehend aus einem Peptid nach Anspruch 1;
(ii) ein geeignetes Medium zur Kultivierung von Lymphozyten; und
(iii) ein Testkit zum Nachweis des von den reagierenden Lymphozyten in das Medium
sekretierten Cytokins.
11. Zubereitung zur Prävention oder Behandlung von IDDM, umfassend ein T-Zell-Produkt
ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus: (a) menschlichen T-Zellen, die sich als spezifisch
gegen die p277-Sequenz aus menschlichem hsp60 erweisen, wobei die Zellen durch Inkubieren in Gegenwart eines Peptids der Sequenz I nach Anspruch 1 aktiviert wurden; (b)
den menschlichen T-Zellen, bestrahlt oder andersartig attenuiert; (c) den menschlichen T-Zellen,
einer Druckbehandlung durch hydrostatischen Druck ausgesetzt und mit einem chemischen
quervemetzenden Reagenz und/oder mit einem Cytoskelett-quervernetzenden Reagenz
behandelt; (d) Oberflächenproteinen oder Fragmenten davon, verbreitet durch die T-Zellen
von (a), (b) oder (c); oder (e) einem Peptid, im wesentlichen bestehend aus der variablen
Region des Rezeptors von (a), spezifisch gegen das Protein, oder ein Salz, ein funktionelles
Derivat, einen Vorläufer oder einen aktiven Bestandteil daraus.
12. Zubereitung nach Anspruch 11, wobei die menschlichen T-Zellen aus (a) autologe T-Zellen
des zu behandelnden IDDM-Patienten sind und sich die Spezifität der T-Zellen durch
in v/frO-Kontaktierung mit dem Peptid der Sequenz I entwickelte.
13. Zubereitung nach Anspruch 11 oder 12, wobei die T-Zellen eine in v/iro-Spezifität
gegen ein Peptid der Sequenz I nach Anspruch 1 entwickelt haben.
14. Pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend ein Peptid der Sequenz I nach
Anspruch 1, und einen pharmazeutisch verträglichen Trägerstoff.
15. Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 14 zur Prävention oder Behandlung
von IDDM.
16. Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 14 oder 15, wobei das Peptid ein
Peptid nach Anspruch 2 ist.
17. Verwendung eines Peptids nach Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung einer pharmazeutischen
Zusammensetzung zur Prävention oder Behandlung von IDDM.
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