DE69016800T2

DE69016800T2 - Herstellung und Verwendungen von alpha-Glycosylrutin.

Info

Publication number: DE69016800T2
Application number: DE69016800T
Authority: DE
Inventors: Hiromi Hijiya; Toshio Miyake; Kei Suzuki; Yukio Suzuki; Masaru Yoneyama
Original assignee: Hayashibara Biochemical Laboratories Co Ltd
Current assignee: Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo KK
Priority date: 1989-03-08
Filing date: 1990-03-07
Publication date: 1995-07-20
Anticipated expiration: 2010-03-08
Also published as: CA2011618A1; EP0387042B1; DE69016800D1; US5145781A; KR0165956B1; KR0158454B1; KR0176956B1; ES2071010T3; GR3015814T3; DK0387042T3; ATE118550T1; EP0387042A1; KR900014421A

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft die Herstellung und die Verwendung von alpha-Glycosylrutin. Rutin, dessen chemische Struktur unten angegeben ist, ist als ein Gelbpigment und als eine Vitamin P- aktive Verbindung mit physiologischen Aktivitäten bekannt, wie z.B. die Stabilisierung eines Blutgefäßes, die Vorbeugung einer Blutung und die Regulierung des Blutdruckes, und wird von alters her in Nahrungsmitteln. Pharmazeutika und Kosmetika verwendet. Chemische Struktur von Rutin
Es ist bekannt, daß Vitamin P in vivo in einigen physiologischen Aktivitäten von Vitamin C teilnimmt, zum Beispiel in der Hydroxylierung von Prolin und Lysin, welche notwendig sind, um Kollagen, das Hauptelement des lebenden Bindegewebes, zu synthetisieren; in der Oxidations/Reduktions-Reaktion von Cytochrom C, worin Fe&spplus;&spplus;&spplus; zu Fe&spplus;&spplus; reduziert wird; und in der Immunverstärkung über die Leucozytenzunahme. Dies deshalb, weil Vitamin P bei der Aufrechterhaltung und Förderung der Gesundheit in Lebewesen eine bedeutende Rolle spielt.
Heute ist die Verwendung von Rutin nicht auf Mittel beschränkt, welche Vitamin P als ein Nährelement anreichern, sondern es wird auf zahlreiche Anwendungen ausgedehnt. Insbesondere wegen der chemischen Struktur und der physiologischen Aktivitäten ist Rutin als ein Gelbfärbemittel und als ein Antioxidans allein oder in Kombination mit einem oder mehreren Vitaminen zum Beispiel in Nahrungsmitteln, Getranken und Pharmazeutika für darauf ansprechende Krankheiten brauchbar, wie z.B. als Vorbeugungs- und Heilmittel von Kreislaufkrankheiten, sowie als Gelbfärbemittel und als UV-Absorptionsmittel in Kosmetika, wie z.B. Hautreinigungs- und Hautbleich- bzw. Hautweißfärbemittel.
Rutin ist jedoch in Wasser schwer löslich (nur etwa 1 g in 8 Liter Wasser oder etwa 0,01 Gew./Vol.-% bei Umgebungstemperatur). Dies macht seine praktische Verwendung sehr schwierig.
Um diese geringe Wasserlöslichkeit zu verbessern, sind einige Verfahren versucht worden. Die japanische Patentveröffentlichung Nr. 1,677/50 offenbart zum Beispiel ein Verfahren, bei welchem aliphatische Verbindungen mit Aminogruppen Rutin für seine gesteigerte Wasserlöslichkeit zugegeben werden; die japanische Patentveröffentlichung Nr. 2,724/51 offenbart ein anderes Verfahren, bei dem Monohalogenessigsäuren auf Rutin einwirken gelassen werden, um es in Monohalogennatriumacetate mit einer gesteigerten Wasserlöslichkeit umzuwandeln; und die japanische Patentveröffentlichung Nr. 1,285/54 offenbart ein weiteres Verfahren, bei welchem "Rongalit", ein kommerzialisiertes Natriumhydroxymethan, auf Rutin einwirken gelassen wird, um es zu Sulfitverbindungen umzuwandeln, die eine gesteigerte Wasserlöslichkeit besitzen.
Diese Verfahren haben jedoch den Nachteil, daß die Verwendung von Aminoverbindungen, von Monohalogenessigsäuren und Sulfitverbindungen zu einer unerwünschten physiologischen Aktivität und/oder Toxizität in den Endprodukten führen kann, sowie ihre Reinigung sehr schwierig machen kann.
In der japanischen Patentveröffentlichung Nr. 32,073/79 offenbarten wir ein viel sichereres Solubilisierungsverfahren, um die Wasserlöslichkeit von Rutin oder Esculin zu verbessern, umfassend ein Zugeben eines Stärke-Teilhydrolysats zu Rutin oder Eskulin; und ein Ermöglichen, daß durch die Wirkung von Glycosidase oder Transgiycosidase im erhaltenen Gemisch äquimolare oder mehr Glucosereste auf das Rutin oder Esculin übertragen werden, welche Glycosidase oder Transgiycosidase in der Lage sind, (einen) Glucoserest(e) von dem Stärke-Teilhydrolysat auf das Rutin oder Esculin zu übertragen.
Das mit dem Verfahren erhaltene alpha-Glycosylrutin würde eine ausgedehnte Verwendung besitzen, weil es die gleichen physiologischen Aktivitäten wie intäktes Rutin aufweist und frei ist von Toxizität, in Wasder sehr gut löslich ist und daher auf einfache Weise gehandhabt werden kann. In die Realisierung von alpha- Glycosylrutin wurden daher starke Erwartungen gesetzt.
Da alpha-Glycosylrutin viele Vorteile besitzt, wie dies oben beschrieben ist, besteht ein großer Bedarf nach seiner Kommerzialisierung.
Die Anfangskonzentration für Rutin, die mit einem herkömmlichen Verfahren erzielt werden kann, ist jedoch bestenfalls etwa 0,1 Gew./Vol.-%, und dies steigert bei der Herstellung und Reinigung von alpha-Glycosylrutin außerordentlich die Energiekosten und verschwendet Wasser. Dies ist eine der Hauptursachen, welche die Kommerzialisierung von alpha-Glycosylrutin verhindert haben.
Die vorliegende Erfindung zielt darauf ab, die Nachteile der herkömmlichen Verfahren zu überwinden. Wir haben insbesondere Reaktionsverfahren, welche eine gesteigerte Anfangskonzentration für Rutin vorsehen, und Reinigungsverfahren für das erhaltene alpha-Glycosylrutin studiert.
Die vorliegende Erfindung stellt ein Verfahren zur Herstellung von alpha-Glycosylrutin zur Verfügung, umfassend:
Einwirkenlassen eines Saccharid-übertragenden Enzyms auf eine Flüssigkeit mit hohem Rutin-Gehalt, in welcher die Konzentration des Rutins mindestens 0,5 Gew./Vol.-% ist, zusammen mit einer stärkeartigen Substanz, um ein alpha-Glycosylrutin zu bilden, in welchem äquimolare oder mehr Glucose-Reste an das Rutin gebunden sind; und
Gewinnen des alpha-Glycosylrutins,
worin die Flüssigkeit mit hohem Rutin-Gehalt ist:
(i) eine Suspension; oder
(ii) eine Lösung, welche durch Auflösen von Rutin bei einem alkalischen pH oder durch Auflösen von Rutin in einem wäßrigen organischen Lösungsmittel erhältlich ist.
Als Ergebnis fanden wir, daß alpha-Glycosylrutin in einer hohen Ausbeute erhaltlich ist, indem ein Saccharid-übertragendes Enzym auf eine Flüssigkeit mit hohem Rutingehalt, welche Rutin in einer hohen Konzentration enthält, zusammen mit einer stärkeartigen Substanz einwirken gelassen wird, indem zuerst Rutin als eine Suspension mit hoher Konzentration hergestellt oder Rutin bei einem alkalischen pH oder in einem wäßrigen organischen Lösungsmittel zu einer Lösung mit hoher Konzentration gelöst wird, um in jedem Fall eine Anfangskonzentration für Rutin von etwa 0,5 Gew./Vol.-% oder höher, wünschenswerterweise etwa 1,0- 20,0 Gew./Vol.-%, was das etwa 5-fache oder mehr ist, wünschenswertenweise das etwa 10-200-fache jener zu erhalten, welche mit einem herkömmlichen Verfahren erzielt werden kann, worauf ein Saccharid-übertragendes Enzym auf die Suspension oder Lösung mit dem hohen Rutingehalt einwirken gelassen wird.
Wir fanden auch, daß ein alpha-Glycosylrutin, weiches hauptsächlich aus alpha-Glucosylrutin und/oder alpha-Maltosylrutin zusammengesetzt ist, in einer hohen Ausbeute erhältlich ist, indem zuerst ein Saccharid-übertragendes Enzym auf eine Lösung, welche Rutin zusammen mit einer stärkeartigen Substanz enthält, einwirken gelassen wird, worauf Amylase auf das erhaltene Gemisch einwirken gelassen wird.
Wir vollbrachten die vorliegende Erfindung, indem wir ferner die Verwendung von alpha-Glycosylrutin, welches mit diesem Verfahren erhalten wurde, zum Beispiel in Nahrungsmitteln, Geträhken, Pharmazeutika für Krankheiten, die darauf ansprechen, Kosmetika und Antioxidantien, einführten.
Wir kamen noch zu einer weiteren Erkenntnis, daß ein Reaktionsgemisch, welches alpha-Glycosylrutin enthält, auf einfache Weise gereinigt werden kann, indem es zuerst mit einem synthetischen makroporösen Harz in Kontakt gebracht und das Gemisch unter Ausnützung des Unterschieds in der Adsorbierbarkeit fraktioniert wird: Wenn das Reaktionsgemisch ein organisches Lösungsmittel enthält, kann das alpha-Glycosylrutin ahnlich wie oben durch Absenken der Konzentration des organischen Lösungsmittels und Kontaktieren des Reaküonsgemisches mit einem synthetischen makroporösen Harz gereinigt werden.
Wir bestätigten so, daß das Verfahren gemäß der Erfindung Wasser und Energie, welche für die Reaktion und für die Reinigung von alpha-Glycosylrutin erforderlich sind, außerordentlich verringert und spart, wobei es auf diese Weise den Nachteil herkömmlicher Verfahren vollständig überwindet und die Kommerzialisierung von alpha-Glycosylrutin außerordentlich erleichtert.

Detaillierte Beschreibung der Erfindung

Das Rutin, welches in der Erfindung verwendbar ist, soll nicht auf jene in der hochreinen Form beschränkt sein. Gemische mit Flavonoidglycosiden, wie z.E. Citronin, Naringin und Hesperidin, und intakte und teilweise gereinigte Extrakte von Pflanzengeweben sind zum Beispiel geeignet, solange sie Rutin enthalten.
Beispiele solcher Pflanzengewebe sind Blätter und Stengel der Buchweizenpflanze, (Fagopyrum esculentum), von Eukalyptus und Gingko-Baum (Gingko biloba); "kaika" oder "kaibei", Blütenblätter des japanischen Pagodenbaums (Sophora japonica); Blütenblätter des Gemeinen Geißklees (Cytisus scoparius); und Zitrusfrüchte.
Die stärkeartigen Substanzen, die in der Erfindung brauchbar sind, sind jene, welche zulassen, daß ein Saccharid-übertragendes Enzym auf Rutin unter Bildung von alpha-Glycosylrutin einwirkt, wobei äquimolare oder mehr Glucosereste an Rutin gebunden werden Stärke-Teilhydrolysate, wie z.B. Amylose, Dextrin, Cyclodextrin und Maltooligosaccharid, verflüssigte Stärke und gelatinisierte Stärke werden beispielsweise zweckmäßig gewählt.
Um in der Folge die Bildung von alpha-Glycosylrutin zu erleichtern, ist es empfehlenswert, für das einzelne Saccharid-übertragende Enzym eine stärkeartige Substanz zu wählen, die für das Enzym eine ausreichende Empfindlichkeit aufweist.
Zum Beispiel sind im Fall einer Verwendung von alpha-Glucosidase (EC 3.2.1.20) als das Saccharidübertragende Enzym Maltooligosaccharide, wie z.B. Maltose, Maltotriose und Maltotetraose geeignet, sowie Stärke-Teilhydrolysate mit einem DE (Dextroseöquivalent) im Bereich von etwa 10-70. Wenn Cyclomaltodextringlucanotransferase (EC 2.4.1.19) als das Saccharid-übertragende Enzym verwendet wird. sind gelatinisierte Stärken mit einem DE von unter 1 und Stärke-Teilhydrolysate mit einem DE bis etwa 60, sowie Cyclodextrine, geeignet. Wenn alpha-Amylase (EC 3.2.1.1) als das Saccharid-übertragende Enzym verwendet wird, sind gelatinisierte Stärken mit einem DE unter 1 und Dextrine und Stärke-Teilhydrolysate mit einem DE bis zu etwa 30 geeignet.
Die Konzentration einer solchen stärkeartigen Substanz während der Reaktion wird auf einen Pegel festgesetzt, welcher etwa 0,5-50-fach höher ist als jener von Rutin.
Die Bezeichnung "Flüssigkeit mit hohem Rutingehalt", wie sie in der Erfindung verwendet wird, bedeutet eine solche, welche eine hohe Konzentration an Rutin enthält. Zum Beispiel ist eine Lösung, weiche Rutin mit einer hohen Konzentration enthält. welche durch Auflösen von Rutin bei einem pH über 7,0 oder durch Auflösen von Rutin in einem waßrigen organischen Lösungsmittel erhältlich ist, geeignet, sowie eine Suspension, welche Rutin mit einer hohen Konzentration enthält. Die Bezeichnung bedeutet insbesondere eine Suspension oder Lösung, welche einen Rutingehalt von etwa 0,5 Gew./Vol.-% oder höher, wünschenswerterweise etwa 1,0-20,0 Gew./Vol.-%, besitzt.
Die organischen Lösungsmittel, die in der vorliegenden Erfindung verwendbar sind, sind solche, welche die Löslichkeit, verglichen mit jener in Wasser, erhöhen. Zum Beispiel sind mit Wasser mischbare niedere Alkohole und Ketone, wie z.B. Methanol, Ethanol, n-Propanol, Isopropanol, n-Butanol, "ACETOL (1-Hydroxy-2-propanon)" und Aceton, geeignet.
Die Konzentration an einem solchen organischen Lösungsmittel wird auf einem Pegel lestgesetzt, welcher die höchstmögliche Konzentration für Rutin ergibt und die Bildung von alpha-Glycosylrutin fördert, jedoch sowohl die stärkeartige Substanz als auch das Saccharid-übertragende Enzym so wenig wie möglich unlöslich macht; gewöhnlich etwa 3-70 Vol./Vol.-%, wünschenswerterweise etwa 5-60 Vol./Vol.-%.
Um die Auflösung zur höchstmöglichen Konzentration zu erleichtern, wird eine Lösung, welche durch Auflösen von Rutin in einer wäßrigen alkalischen Lösung, wie z.B. jene von Natriumhydroxid und Ammoniak, erhältlich ist, vor der Saccharid-Übertragungsreaktion mit einem wäßrigen organischen Lösungsmittel gemischt und neutralisiert.
Die Saccharid-übertragenden Enzyme, die in der vorliegenden Erfindung brauchbar sind, sind solche, welche alpha-Glycosylrutin ohne Zersetzung von Rutin bilden, wenn sie auf eine Flüssigkeit mit hohem Rutingehalt, welche zusätzlich eine stärkeartige Substanz enthält, die auf das Enzym ausreichend empfindlich ist, einwirken gelassen wird.
Beispiele eines solchen Saccharid-übertragenden Enzyms sind alpha-Glucosidasen, die von Tier- und Pflanzengewebe starrnen, wie z.B. Schweineleber und Buchweizensamen, und von einer Kultur, die durch Kultivieren von Mikroorganismen in einem Nährkulturmedium, einschließlich Bakterien, Schimmelpilzen und Hefen, zum Beispiel jene der Stämme Mocor, Penicillium und Saccharomyces; Cyclomaltodextringlucanotransferasen, die aus einer Kultur von Bakterien stammen, wie z.B. jene der Stämme Bacillus und Klebsiella; und alpha-Amylasen, die von einer Kultur von Pilzen stammen, wie z.B. jene des Stammes Aspergillus.
Ein solches Saccharid-übertragendes Enzym sollte nicht notwendigerweise vor seiner Verwendung gereinigt werden, solange es die obigen Anforderungen erfüllt. In der Regel ist die vorliegende Erfindung mit einem Rohenzym durchführbar.
Falls notwendig, können die Saccharid-übertragenden Enzyme mit einem herkömmlichen Verfahren vor ihrer Verwendung gereinigt werden. Natürlich können kommerzialisierte Saccharid-übertragende Enzyme in dieser Erfindung verwendet werden.
Im Verlauf der Reaktion werden der pH und die Temperatur auf einem Pegel festgesetzt, bei welchem ein Saccharid-übertragendes Enzym alpha-Glycosylrutin bildet; gewöhnlich bei einem pH im Bereich von 3-10 und einer Temperatur im Bereich von 10-90ºC.
Die Menge an Saccharid-übertragendem Enzym und die Reaktionszeit hängen stark voneinander ab. Aus wirtschaftlichem Standpunkt wird das Saccharid-übertragende Enzym in einer Menge verwendet, welche die Reaktion innerhalb etwa 5-80 Stunden beendet.
Immobilisierte Saccharid-übertragende Enzyme können zweckmäßigerweise chargenweise oder auf kontinuierliche Weise verwendet werden.
Falls notwendig, kann alpha-Glycosylrutin durch Kultivieren eines Mikroorganismus, der ein Saccharid-übertragendes Enzym bilden kann, in einem Nährkulturmedium, welches Rutin zusammen mit einer stärkeartigen Subtartz enthält, oder durch Inkubieren in einem solchen Nährkulturmedium eines Tier- oder Pflanzengewebes, welches ein Saccharid-übertragendes Enzym enthält, hergestellt werden.
Die vorliegende Erfindung ist mit jedem Reaktionsverfahren durchführbar, solange es den Schritt aufweist, ein Saccharid-übertragendes Enzym auf eine Flüssigkeit mit hohem Rutingehalt einwirken zu lassen.
In dem Fall, wo zum Beispiel Rutin mit einer hohen Konzentration in Suspension reagieren gelassen wird, wird eine Flüssigkeit mit hohem Rutingehalt, weiche etwa 0,5 Gew./Vol.-% oder mehr, zweckmäßigerweise etwa 1,0-5,0 Gew./Vol.-% Rutin, zusammen mit einer geeigneten Menge einer stärkeartigen Substanz einem Saccharid-übertragenden Enzym unterworfen, während der pH auf etwa 4,5-6,5 und die Temperatur auf dem höchstmöglichen Pegel, wo das Enzym aktiv ist, insbesondere im Bereich von etwa 70-90ºC, gehalten werden. Mit fortschreitender Umwandlung zu alpha-Glycosylrutin löst sich auf diese Weise das Rutin allmählich, um sofort und auf einfache Weise alpha-Glycosylrutin-Spezies, wie z.B. alpha-Glucosylrutin, alpha-Maltosylrutin, alpha-Maltotriosylrutin, alpha-Maltotetraosylrutin, alpha-Maltopentaosylrutin und alpha-Maltohexaosylrutin in einer hohen Konzentration zu bilden. Wir bestätigten, daß die auf diese Weise erhaltene Lösung bei Umgebungstemperatur gewöhnlich eine große Menge alpha-Glycosylrutin und eine kleine Menge des restlichen Rutins enthält, und daß die Gesuntmenge etwa 0,5 Gew./Vol.-% oder mehr, zweckmäßigerweise etwa 1,0-5,0 Gew./Vol.-%, berechnet als Rutin, erreicht.
Im Fälle, daß beispielweise Rutin in hoher Konzentration in Lösung reagieren gelassen wird, wird eine Flüssigkeit mit hohem Rutingehalt, die erhältlich ist, indem zuerst etwa 0,5 Gew./Vol.-% oder mehr, zweckmäßigerweise etwa 1,0-5,0 Gew./Vol.-% Rutin in Wasser bei einem pH über 7,0, insbesondere pH 7,5-10, unter Erhitzen aufgelöst wird, worauf in der erhaltenen Lösung eine geeignete Menge einer stärkeartigen Substanz gelöst wird, einem Saccharid-übertragenden Enzym unterworfen, während sowohl der pH als auch die Temperatur auf den höchstmöglichen Pegeln, wo das Enzym aktiv ist, insbesondere bei einem pH im Bereich von etwa 7,5-10,0 und einer Temperatur im Bereich von etwa 50-80ºC, gehalten werden. Auf diese Weise wird alpha-Glycosylrutin mit einer hohen Konzentration auf einfache Weise gebildet. In diesem Fall wird die Flüssigkeit, da Rutin dazu neigt, sich in einer alkalischen Lösung leicht zu zersetzen, unter Lichtabdeckung und unter anaeroben Bedingungen gehalten, um die Zersetzung zu verhindern.
Wir bestätigten, daß die Lösung, die auf diese Weise erhalten wurde, bei Umgebungstemperatur gewöhnlich eine große Menge alpha-Glycosylrutin und eine kleine Menge an restlichem Rutin enthält, und daß die Gesamtmenge etwa 0,5 Gew./Vol.-% oder mehr, zweckmäßigerweise etwa 1,0-10 Gew./Vol.-%, berechnet als Rutin, enthält.
In dem Fall, wo Rutin in einer Lösung mit hoher Konzentration in einem waßrigen organischen Lösungsmittel reagieren gelassen wird, wird eine Lösung, welche durch Auflösen von Rutin in einem organischen Lösungsmittel unter Erhitzen erhältlich ist, mit einer stärkeartigen Substanz in wäßriger Lösung gemischt worauf ein Saccharid-übertragendes Enzym zugegeben wird. Alternativ werden Rutin und eine stärkeartige Substanz in einem wäßrigen organischen Lösungsmittel unter Erhitzen gelöst, und die erhaltene Lösung wird auf eine vorbestimmte Temperatur abgekuhlt und mit einem Saccharid-übertragenden Enzym versetzt.
Wir bestätigten, daß die auf diese Weise erhaltene Lösung gewöhnlich eine große Menge alpha-Glycosylrutin und eine kleine Menge restliches Rutin enthält, und daß die Gesamtmenge etwa 1,0-10 Gew./Vol.-%, berechnet als Rutin, erreicht.
Alpha-Glycosylrutin kann mit einer hohen Konzentration ähnlich wie oben durch die Kombination von zwei oder mehreren Verfahren gebildet werden; zum Beispiel, indem eine Flüssigkeit mit hohem Rutingehalt zuerst auf einem pH im Bereich von etwa 7,5-10,0 und einer Temperatur im Bereich von 50-80ºC gehalten wird, welche Flüssigkeit in Suspension etwa 2,0-20,0 Gew./Vol.-% Rutin, zusammen mit einer geeigneten Menge einer stärkeartigen Substanz, enthält, worauf die Flüssigkeit einem Saccharid-übertragenden Enzym ausgesetzt wird.
Auch alpha-Glycosylrutin kann auf einfache Weise in hoher Konzentration gebildet werden, indem Rutin in einer stark alkalischen wäßrigen Lösung, zum Beispiel etwa 0,1-1,0 N wäßrige Lösungen von Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, Natriumcarbonat, Calciumhydroxid und Ammoniak gelöst wird, um eine Konzentration von etwa 5,0-20,0 Gew./Vol.-% zu ergeben; indem die erhaltene Lösung mit einer wäßrigen Lösung einer Säure, wie z.B. Chlorwasserstoffsäure und Schwefelsäure, auf einen pH-Pegel eingestellt wird, wo ein Saccharid-übertragendes Enzym aktiv ist; indem eine stärkeartige Substanz der Lösung zugegeben wird; und indem die Lösung sofort dem Enzym ausgesetzt wird. In diesem Fall wird die Saccharid-Übertragungsreaktion, da die pH-Einstellung in einer wäßrigen sauren Lösung dazu neigt, eine Sedimentation in einer Lösung mit hohem Rutingehalt zu verursachen, zweckmäßigerweise initiiert, während die Sedimentation vor der pH-Einstellung durch Zugeben einer stärkeartigen Substanz und/oder einer kleinen Menge an alpha-Glycosylrutin unterdrückt wird. Wir bestätigten, daß bei Umgebungstemperatur und annähernd neutralem pH die auf diese Weise erhaltene Lösung gewöhnlich eine große Menge alpha-Glycosylrutin und eine kleine Menge an restlichem Rutin enthält, und daß die Gesamtmenge bis etwa 5,0-20,0 Gew./Vol.-%, berechnet als Rutin, erreicht.
Falls notwendig, können, um die Löslichkeit von Rutin zu erhöhen, um die Saccharid-Übertragungsreaktion auf es zu erleichtern, ein oder mehrere mit Wasser mischbare organische Lösungsmittel, zum Beispiel niedere Alkohole und Ketone, wie z.B. Methanol, Ethanol, n-Propanol, Isopropanol, n-Butanol, ACETOL und Aceton, vor der Reaktion zu einer Flüssigkeit mit hohem Rutingehalt zugegeben werden.
Wie oben erwähht, bestätigten wir, daß das Verfahren gemäß der Erfindung die Anfangskonzentration für Rutin auf einen Pegel erhöht, welcher etwa 5-fach oder viel höher, zweckmäßigerweise etwa 10-200-fach höher als jener, der mit einem herkömmlichen Verfahren erreichbar ist, steigert, und dies erleichtert die Bildung von alpha-Glycosylrutin in einer hohen Konzentration.
Insbesondere enthält das Reaktionsgemisch bei Beendigung der Reaktion in Lösung eine große Menge alpha-Glycosylrutin und eine kleine Menge restliches Rutin, und ist die Gesamtmenge etwa 0,5 Gew./Vol.-% oder mehr, zweckmäßigerweise bis etwa 1,0-20,0 Gew./Vol.-%, berechnet als Rutin, was etwa das 5-fache oder viel höher, vorzugsweise das etwa 10-200-fache oder viel höher als das ist, was mit einem herkömmiichen Verfahren erzielbar ist.
Das alpha-Glycosylrutin, welches ein relativ hohes Molekulargewicht besitzt, gebildet durch die Saccharid-Übertragungsreaktion, ist mit einer Amylase, wie z.B. Glucoamylase (EC 3.2.1.3) und beta-Amylase (EC 3.2.1.2), intakt oder nach Reinigung mit synthetischen makroporösen Harzen, teilweise hydrolysierbar. Eine solche Hydrolyse verringert ausreichend den Polymerisationsgrad von alpha-D-Glucosyl-Anteilen im alpha-Glycosylrutin. Zum Beispiel hydrolysiert Glucoamylase alpha-Maltosylrutin und höhere Produkte, um Glucose und alpha-Glycosylrutin zu akkumulieren, während beta-Amylase älpha-Maltotriosylrutin und höhere Produkte hydrolysiert, um Maltose und ein Gemisch, welches hauptsächlich aus alpha-Glucosyl- und alpha- Maltosylrutin zusammengesetzt ist, zu akkumulieren.
Das auf diese Weise erhaltene Reaktionsgemisch kann zu Endprodukten ohne weitere besondere Behandlung verarbeitet werden. In der Regel wird das Reaktionsgemisch filtriert und zu einem sirupartigen Produkt konzentriert, welches, falls notwendig, getrocknet und zu einem pulverigen Produkt hergestellt wird.
Zusätzlich zur Verwendung in einem Vitamin P-anreichernden Mittel sind die Produkte vorzugsweise als ein hochgradig sicheres natürliches Gelbfärbemittel, Antioxidans, Stabilisator, Mittel zum Verhindern des Verblassens, qualitätsverbesserndes Mittel, Vorbeugungsmittel, Heilmittel, UV-Absorbens, verderbungsverhinderndes Mittel in Nahrungsmitteln, Getränken, Tabaken, Zigaretten, Futtermitteln, Tiernahrungsmitteln, Pharmazeutika für Krankheiten, die darauf ansprechen, Kosmetika und Kunststoffwaren brauchbar.
Im Falle, daß ein gereinigtes alpha-Glycosylrutin-Produkt benötigt wird, werden alpha-Glycosylrutin und Kontaminantien, einschließlich stärkeartiger Substanzen, getrennt, indem der Unterschied in der Adsorbierbarkeit an ein synthetisches makroporöses Harz ausgenutzt wird.
Der Ausdruck "synthetisches mäkroporöses Harz", wie er in der Erfindung verwendet wird, bedeutet nicht-ionische, poröse, synthetische Harze, welche eine große adsorptive Fläche vorsehen, wie z.B. Styrol/Divinylbenzol-Copolymer, Phenol/Formaldehyd-Harz, Acrylharz und Methacrylatharze. Beispiele für solch ein Harz sind "Amberlite XAD-1", "Amberlite XAD-2", "Amberlite XAD-4", "Amberlite XAD-7", "Amberlite XAD-8", "Amberlite XAD-11" und "Amberlite XAD-12", Produkte von Rohm & Haas Company, Philadelphia, USA; "Diaion HP-10", "Diaion HP-20", "Diaion HP-30", "Diaion HP40" und "Diaion HP-50", Produkte von Mitsubishi Chemical Industries Ltd., Tokio, Japan: und "Imac Syn-42", "Imac Syn-44" und "Imac Syn-46", Produkte der Industrie de Maatshappily activate N.V., Amsterdam, Niederlande.
Das Reinigungsverfahren gemäß der Erfindung enthält den Schritt, daß ein Reaktionsgemisch, welches alpha-Glycosylrutin enthält, zum Beispiel einer Säule aus einem synthetischen makroporösen Harz aufgetragen wird, so daß die Säule das alpha-Glycosylrutin und eine relativ kleine Menge des restlichen Rutins adsorbiert, während große Mengen einer stärkeartigen Substanz und wasserlöslicher Saccharide durch die Säule ausfließt, ohne adsorbiert zu werden.
Insbesondere in dem Fall, wo ein Reaktionsgemisch ein organisches Lösungsmittel enthält, kaun alpha-Glycosylrutin auf ähnliche Weise wie oben gereinigt werden, indem zuerst die Konzentration des organischen Lösungsmittels abgesenkt und dann das Reaktionsgemisch mit einem synthetischen makroporösen Harz in Kontakt gebracht wird, so daß es das alpha-Glycosylrutin und das restliche Rutin adsorbiert.
Falls notwendig, kann das Reaktionsgemisch nach Beendigung der Saccharid-Übertragungsreaktion. aber vor der Behandlung mit einem mäkroporösen Harz mit einem oder mehreren Verfahren behandelt werden: zum Beispiel mit einem Verfahren, bei dem das Reaktionsgemisch erhitzt wird und die unlöslich gemachten Substanzen durch Filtration entfernt werden; mit einem anderen Verfahren, bei dem das Reaktionsgemisch zum Beispiel entweder mit Magnesiumaluminiumsilicathydrat oder mit Magnesiumaluminat behandelt wird. um die proteinartigen Substanzen für ihre Entfernung zu adsorbieren; und mit einem weiteren Verfahren, bei dem das Reaktionsgemisch mit einem stark sauren Ionenaustausch (H-Form) und/oder einem neutralen oder leicht alkalischen Ionenaustausch (OH-Form) entionisiert wird.
Eine Säule aus einem synthetischen makroporösen Harz, auf welchem alpha-Glycosylrutin und eine relativ kleine Menge des restlichen Rutins spezifisch adsorbiert sind, wird mit verdünntem Alkali oder Wasser gewaschen, und dann wird eine relativ kleine Menge eines organischen Lösungsmittels oder Gemisches mit Wasser, zum Beispiel wäßriges Methanol und wäßriges Ethanol, aufgetragen. Auf diese Weise eluiert das alpha-Glycosylrutin zuerst, während das intakte Rutin eluiert werden kann, indem das organische Lösungsmittel aufgetragen wird oder indem die Konzentration des organischen Lösungsmittels erhöht wird.
Das erhaltene, an alpha-Glycosylrutin reiche Eluat, wird destilliert, um das organische Lösungsmittel zu entfernen, und auf einen ausreichenden Pegel konzentriert. Man kann so ein sirupartiges Produkt erhalten, welches hauptsächlich aus alpha-Glycosylrutin zusammengesetzt ist. Nach Trocknen und Pulverisieren des Produktes wird ein pulveriges Produkt erhalten, welches hauptsächlich aus alpha-Glycosylrutin zusammengesetzt ist.
Die Eluierungsoperation, die organische Lösungsmittel verwendet, regeneriert gleichzeitig synthetische makroporöse Harze, und dies ermöglicht ihre wiederholte Verwendung.
Das Reinigungsverfahren, welches synthetische makroporöse Harze verwendet, ist dadurch gekennzeichnet, daß es zusätzlich zu stärkeartigen Substanzen und wasserlöslichen Sacchariden andere Begleitstoffe, einschließlich wasserlösliche Salze, enrfernen kann.
Das auf diese Weise erhaltene alpha-Glycosylrutin ist gekennzeichnet durch:
(1) Es ist hinsichtlich Wasserlöslichkeit dem intakten Rutin überlegen.
(2) Es ist lichtbeständiger und stabiler als intaktes Rutin.
(3) Es hat eine starke antioxidative Aktivität. Wegen dieser ist es bevorzugt als Antioxidans in fetten Nahrungsmitteln und in Pharmazeutika für Krankheiten, die darauf ansprechen, und Kosmetika, welche Öle und Fette enthalten, verwendbar, um ihre Oxidation zu verhindern. Insbesondere wenn es in Pharmazeutika verwendet wird, wirkt alpha-Glycosylrutin als ein Antioxidans, wobei es die Aktivitäten aufweist, aktivierten Sauerstoff zu entfernen und die Bildung von Lipoperoxiden zu unterdrücken, und dies ist bei der Verhinderung und bei der Behandlung von Krankheiten, die darauf ansprechen, und auch bei der Aufrechterhaltung und Förderung der Gesundheit zweckmäßig. Anders als herkömmliche Antioxidantien, wie z.B. Vitamin E und Vitamin C, ist alpha-Glycosylrutin im wesentlichen geruchlos und geschmacklos, und kann ohne die Gefahr, eine unerwünschte Verfärbung, ein Dunkelwerden oder einen unangenehmen Geruch zu verursachen, verwenden werden.
(4) Es ist durch das in vivo-Enzymsystem zu Rutin und Glucose hydrolysierbar, um die physiologische Aktivität, welche Rutin inhärent ist, insbesondere die Vitamin-P-Aktivität, auszuüben. Die Kombination mit Vitamin C fördert die physiologischen Aktivitäten beider Vitamine.
(5) Wenn ein alpha-Glycosylrutin-Produkt zusätzlich eine stärkeartige Substanz enthält, weist die alpha-Glycosylrutin-Komponente seine inhärenten Aktivitäten auf, während die stärkeartige Substanz formverleihende, fällende und süßende Aktivitäten aufweist. Ein Produkt, welches von stärkeartiger Substanz frei ist, ist im wesentlichen geschmacklos und geruchlos und weist die Aktivität von alpha-Glycosylrutin auf, ohne daß im wesentlichen eine Form verliehen wird und die Menge erhöht wird. Das Produkt ist so beim Würzen und schmackhaft machen frei verwendbar.
alpha-Glycosylrutin kann deswegen vorzugsweise als Gelbfärbemittel, Antioxidans, Stabilisator, als ein das Verblassen verhinderndes Mittel, als ein qualitätsverbesserndes Mittel, UV-Absorbens, als ein Vorbeugungs- und Heilmittel lür Krankheiten, die darauf ansprechen wie z.B. virale Erkrankungen, bakterielle Erkrankungen, Kreislaufkrankheiten und bösartige Tumore, allein oder in Kombination mit einem oder mehreren Inhaltstoffen, vorzugweise in einer Menge von 0,001 Gew./Gew.-% oder mehr in Nahrungsmitteln, Getränken, Tabaken, Zigaretten. Futtermitteln, Tiernahrungsmitteln, Pharmazeutika für Krankheiten, die darauf ansprechen, Kosmetika, wie z.B. Hautreinigungs- und Hautbleichmittel, und Kunststoffwaren, sowie in Mitteln, welche auf ein Ameichern eines hochsicheren, natürlichen Vitamin P gerichtet sind, aufgenommen werden.
Da alpha-Glycosylrutin Säure und Wärme gegenüber hochbeständig ist und mit verschiedenartigen Substanzen, welche sauer, salzig, bitter, köstlich und astringierend schmecken, harmonisiert, kann es bevorzugt aufgenommen werden: als ein Vitamin P anreicherndes Mittel, Gelbfärbemittel, Antioxidans, als ein qualitätsverbesserndes Mittel und Stabilisator in Nahrungsmitteln und Getränken im allgemeinen, zum Beispiel Würzmittel, wie z.B. Sojasauce, Sojasaucepulver, Miso, Misopulver, "Moromi", "Hishio", "'Furikake", Mayonaise, Dressing, Essig, "sanbai-zu", "funmatsu-sushi-su", "chuka-no-moto", "tentsuyu (Suppe für tenpura)", "metsuyu (Suppe für Nudeln nach japanischer Art)", Worcester Sauce, Ketchup, "yakiniku-no-tare (Suppe für gegrilltes Fleisch)", Curry, Schmorprämix, Suppenprämix, "dashi-no-moto", Mischgewürz, "mirin (schwer gesäßter Sake)", "shin-mirin (synthetisches mirin)", Tafelzucker und Kaffezucker; Zubereitungen nach japanischer Art, wie z.B. "senbei (Reis-Crackers)", "arare (senbei, zu Pellets geformt)", "okoshi (Hirse- und Reis-Crackers)", "karinto (frittierter Teigkeks)", "gyuhi (Stärkepaste)", Reispaste, "manju (Korinthenbrötchen mit einer Bohnen-Konfitüre-Füllung)", "uiro (süßes Reisgelee)", "an (Bohnenkonfitüre)", "yokan (süßes Gelee aus Bohnen)", "mizu-yokan (weiches Adzuki-Bohnengelee)", "kingyoku", Gelee, Castella und "amedama (Rahmbonbon nach japanischer Art)"; Zubereitungen nach westlicher Art, wie z.B. Korinthenbrötchen, Keks, Cracker, Cookie, Torte, Pudding, Rahmbackwerk, Waffel, Sandtorte, Doughnut, Schokolade, Kaugummi, Cararnei und Bonbons; Eiscreme und Sorbet; Sirupe, wie z.B. jene zum Einmachen von Früchten und "kaki-gori (abgeschabtes Eis)", Streichsachen und Pasten, wie z.B. Buttercreme, Vanillesauce, Mehlteig und Fruchtteig; verarbeitete Früchte, wie z.B. Marmelade, Fruchtsirup und eingemachte Früchte; verarbeitete Nahrungsmittel, wie z.3. jene von Früchten und Gemüsen; Zerealien, wie z.B. Bäckereiprodukte, Nudeln, Vermicelli, gekochter Reis und synthetisches Fleisch; fette Nahrungsstoffe, wie z.B. Salatöl und Margarine; gepökelte Produkte, wie z.B. "fukujinzuke (in dünne Scheiben geschnittenes Gemüse, in Sojasauce gepökelt)", "bettara-zuke (frisches Rettich-Gepökeltes), "senmai-zuke" und "rakkyo-zuke (gepökelte Schalotten)"; Prämix für gepökelte Produkte, wie z.B. "takuan-zuke-no-moto" und "hakusai-zuke-no-moto"; Fleischprodukte, wie z.B. Schinken und Wurst; Fischfleichprodukte, wie z.B. Fischfleischschinken, Fischfleischwurst, "kamaboko (gekochte Fischpaste)", "chikuwa (wörtlich Bambusräder)" und "hanpen"; Gewürze, wie z.B. "uni-no-shiokara (gesalzene Därme von Seeigeln)", "ika-no-shiokara (gesalzene Därme von Tintenfischen)", "su-konbu", "saki-surume" und "fugu-no-mirinboshi" "tsukudani (Speisen, in Sojasauce abgekocht)", wie z.B. jene von "nori (getrockneter Seetang)", "sansai (Berggemüse)", "surume (getrockneter Tintenfisch)", kleiner Fisch und Schalentier; tägliche Gerichte, wie Z.B. "nimame (gekochte Bohnen)", Kartoffelsalat, "konbu-maki (Tangrolle)" und "tenpura (tieffrittierte Nahrungsmittel)", Ei- und Milchprodukte, wie z.B. "kinshi tamago", Milchgetränk, Butter und Käse, Produkte in Flaschen und Dosen, wie z.B. jene von Fleisch, Fischfleisch, Frucht und Gemüse, alkoholische Getranke, wie z.B. synthetischer Sake, "zojo shu", Likör, Wein und Whisky; Getränke, wie z.B. Kaffee, Kakao, Juice. Getränke mit Kohlensäure, Milchsäuregetranke und Lactobacillus-Getränke; Pramix und Instantnahrungsrruttel. wie z.B. Puddingprämix, Heißkuchenprämix, Instantjuice, Instantkaffee und "sokuseki-shiuko (Prämix von adzuki-Bohnensuppe nut Reiskuchen)". Ferner kann alpha Glycosylrutin vorteilhatt als ein Vitamin P anreicherndes Mittel, Antioxidans und als geschmacksverbesserndes Mittel in Futtermitteln, Tiernahrungsmitteln für domestizierte Tiere und Geflügel, einschließlich Haustiere, wie die Honigbiene, der Seidenwurm und Hausfische, aufgenommen werden.
Zusätzlich zur Verwendung als ein UV-Absorbens und ein das Verderben verhinderndes Mittel für Kunststoffwaren kann alpha Glycosylrutin in Tabaken, Zigaretten, Pharmazeutika, einschließlich vorbeugende Mittel und heilende Mittel für Krankheiten, die darauf ansprechen, und Kosmetika, einschließlich Hautreinigungsmittel und Hautbleichmittel in fester Form, in Pastenform oder in flüssiger Form; zum Beispiel Tabak, Zigaretten, Pastillen, Dorschleber-Öltropfen, Vitaminzusammensetzung, Munderfrischungsmittel, Katechu, Gurgelwasser, Intubationsnahrung, Arzneimittel für innerliche Anwendung, Injektion, Zahnputzmittel, Lip penstift, Lippencreme und Sonnenschutzmittel aufgenommen werden.
Die Bezeichnung "Krankheiten, die darauf ansprechen", wie sie in der Erfindung verwendet wird, bedeutet jene Krankheiten, welche mit alpha-Glycosylrutin verhindert und/oder behandelt werden; zum Beispiel virale Erkrankungen, bakterielle Erkrankungen, traumatische Erkrankungen, Immunopathien, Rlieumatismus, Diabetes, Kreislaufkrankheiten und bösartige Tumore. Die Gestalt und die Form von Pharmazeutika für Krankheiten, die darauf ansprechen, können frei gewählt werden, um ihrer Endverwendung zu entsprechen: z.B. flüssige Pharmazeutika, wie z.B. Nebel, Augenwasser, Kollunarium, Mundwasser und Injektion, pastenförmige Pharmazeutika, wie z.B. Salbe, Cataplasma und Creme, und feste Pharmazeutika, wie z.B. Pulver, Granulat, Kapsel und Tablette.
Bei der Herstellung eines solchen Pharmazeutikums können ein oder mehrere Inhaltstoffe, zum Beispiel ein Heilmittel, eine biologisch aktive Substanz, ein Antibiotikum, ein Hilfsstoff, ein Füllmittel, ein Stabilisator, ein Färbemittel und ein Geschmacksmittel, zweckmäßigerweise in Kombination, falls dies notwendig ist, verwendet werden.
Die Dosis wird in Abhängigkeit vom Gehalt an alpha-Glycosylrutin, dem Verabreichungsweg und der Verabreichungshäufigkeit entsprechend geändert: gewöhnlich ist sie als alpha-Glycosylrutin etwa 0,001-50,0 g/Tag/Erwachsener.
Kosmetika können auf ähnliche Weise wie Pharmazeutika hergestellt werden.
Bei der Verwendung wird alpha-Glycosylrutin mit einem herkömmlichen Verfahren vor der Beendigung ihrer Verarbeitung in die Produkte eingearbeitet, zum Beispiel durch Mischen, Kneten, Auflösen. Aufsaugen, Imprägnieren, Aufstreichen, Auftragen, Sprühen und Injizieren.
Der folgende Versuch zeigt die Nicht-Toxizität des alpha-Glycosylrutines der Erfindung.

Versuch

Eine alpha-Glycosylrutin-Probe, die mit dem Verfahren in Beispiel A-3 erhalten wurde, wurde 7 Wochen alten dd-Mäusen für den Test auf akute Toxizität verabreicht. Als Ergebnis starb keine Maus, wenn bis zu 5 Gramm alpha-Glycosylrutin verabreicht wurden, eine höhere Dosis war schwierig.
Dies bestätigte, daß die Probe eine außerordentlich geringe Toxizität aufwies.
Eine weitere alpha-Glycosylrutin-Probe, die nach dem Verfahren in Beispiel A-2 erhalten w urde. wurde auf ähnliche Weise wie oben getestet, wobei das gleiche Ergebnis erhalten wurde, was bestätigt, däß die Toxizität dieser Probe außerordentlich genng war.
Die folgenden Beispiele A und die Beispiele B veranschaulichen die Herstellung bzw. die Verwendungen von alpha-Glycosylrutin.

Beispiel A-1

Alpha-Glycosylrutin

Drei Gewichtsteile Rutin und 15 Gewichtsteile Dextrin (DE 18) wurden in 97 Gewichtsteile Wasser von 80ºC gemischt, um eine Flüssigkeit mit hohem Rutingehalt zu erhalten, worauf dann 20 Einheiten/g Dextrin von Cyclomaltodextringlucanotransferase, welche von Baciilus stearothermophilus stammt, kommerzialisiert von Hayashibara Biochemical, Inc., Okayama, Japan, zugegeben und 64 Stunden unter Rühren reagieren gelassen wurde, während die Flüssigkeit bei pH 6,0 und 75ºC gehalten wurde.
Eine Papierchromatogräphieanalyse des Reaktionsgemisches ergab, daß etwa 85% des Rutins zu alpha-Glycosylrutine wie z.B. alpha-Glucosylrutin, alpha-Maltosylrutin, alpha-Maltotriosylrutin, alpha-Maltotetraosylrutin und alpha-Maltopentaosylrutin, umgewandelt war.
Danach wurde das Reaktionsgemisch erhitzt, um das restliche Enzym zu inaktivieren, und filtriert, wonach das Filtrat konzentriert wurde, um einen alpha-Glycosylrutin-Sirup, welcher zusätzlich eine stärkeartige Substanz enthielt, in der Ausbeute von etwa 90% gegen das Gewicht des Ausgangsmaterials, auf Basis eines trockenen Feststoffs (d.s.b.), zu erhalten.
Das Produkt ist vorzugweise verwendbar als ein hochgradig sicheres natürliches Gelbfärbemittel, Antioxidans, Stabilisator, als ein das Verblassen verhinderndes Mittel, als ein die Qualität verbesserndes Mittel. vorbeugendes Mittel, Heilmittel, und UV-Absorbens in Nahrungsmitteln, Getranken, Tabaken, Zigaretten, Futermitteln, Tiernahrungsmitteln, Pharmazeutika für Krankheiten, die darauf ansprechen, Kosmetika und Plastikwaren, zusätzlich zur Verwendung in einem Mittel, das darauf gerichtet ist, ein in hohem Ausmaß wasserlösliches Vitamin P anzureichern.

Beispiel A-2

Alpha-Glucosylrutin

Ein Gewichtsteil eines alpha-Glycosylrutin-Sirups, der zusätzlich eine stärkeartige Substanz enthielt, erhalten nach dem Verfahren in Beispiel A-1, wurde in 4 Gewichtsteilen Wasser gelöst, und die Lösung wurde auf pH 5,0 eingestellt, mit 100 Einheiten/g Festsirip Glucoamylase (EC 3.2.1.3), kommerzialisieit von Seikagaku-Kogyo Co., Ltd.. Tokio, Japan versetzt und 5 Stunden bei 50ºC reagieren gelassen.
Die papierchromatographische Analyse des Reaktionsgemisches ergab, daß das alpha-Glycosylrutin zu alpha-Glucosylrutin umgewandelt war.
Danach wurde das Reaktionsgemisch erhitzt, um das restliche Enzym zu inaktivieren, und filtriert, wonach das Filtrat einer Säule von "HP-10", einem makroporösen Harz, welches von Mitsubishi Chemical Industries Ltd., Tokio, Japan kommerzialisiert wird, mit einer Fließgeschwindigkeit von SV (Raumgeschwindigkeit) 2 aufgetragen. Als Ergebnis adsorbierte das Harz das alpha-Glycosylrutin und das restliche Rutin, die beide im Reaktionsgemisch vorhanden waren, während Glucose und Salze durch die Säule ausflossen, ohne daß sie eine Adsorption verursachten. Die Säule wurde dann mit Wasser gewaschen und mit wäßrigem Ethanol versetzt, welches eine stufenweise ansteigende Konzentration aufwies, um Fraktionen zu sammeln, die reich an alpha-Glycosylrutin waren, welche dann in vacuo konzentriert und pulverisiert wurden, um ein alpha-Glucosylrutin-Pulver in der Ausbeute von etwa 80% gegen das Gewicht der Ausgangsmaterialien, d.s.b., zu erhalten.
Die Säurehydrolyse des alpha-Glucosylrutins ergab 1 Mol Quercetin, 1 Mol L-Rhamnose und 2 Mol D-Glucose, während eine alpha-Glucosidase, die durch Extraktion aus Schweineleber und teilweise Reinigung erhalten wurde, das alpha-Glucosylrutin zu Rutin und D-Glucose hydrolysierte.
Das Produkt ist vorzugsweise verwendbar als Gelbfärbemittel, Antioxidans, Stabilisator, als ein das Verblassen verhinderndes Mittel, als ein die Qualität verbesserndes Mittel, vorbeugendes Mittel, Heilmittel und UV-Absorbens in Nahrungsmitteln, Getränken, Tabaken, Zigaretten und Pharmazeutika für Krankheiten, die darauf ansprechen, zusätzlich zur Verwendung in einem Mittel, das darauf gerichtet ist, ein in hohem Ausmaß gereinigtes, leicht wasserlösliches Vitamin P anzureichern.

Beispiel A-3

Alpha-Glycosylrutin

Vier Gewichtsteile Rutin wurden bei pH 9,5 in 90 Gewichtsteilen Wasser unter Erhitzen gelöst, und die Lösung wurde mit einem anderen Gemisch vermischt, welches getrennt durch Auflösen von 20 Gewichtsteilen Dextrin (DE 8) in 10 Gewichtsteilen Wasser durch Erhitzen hergestellt wurde. Die erhaltene Flüssigkeit mit hohem Rutingehalt in der Lösung wurde mit 30 Einheiten/g Dextrin von Cyclomaltodextringlucanotransferase versetzt und 40 Stunden unter Rühren reagieren gelassen, während die Flüssigkeit auf pH 8,2 und 65ºC gehalten wurde.
Die papierchromatographische Analyse des Reaktionsgemisches ergab, daß etwa 90% des Rutins zu alpha-Glycosylrutin umgewandelt waren.
Danach wurde das Reaktionsgemisch erhitzt, um das restliche Enzym zu inaktivieren, und filtriert, wonach das Filtrat einer Säule von "Amberlite XAD-7", einem synthetischen makroporösen Harz, welches von Rohm & Haas Co., Philadelphia, USA, kommerzialisiert wird, mit einer Fließgeschwindigkeit von SV 1,5 aufgetragen wurde.
Als Ergebnis adsorbierte die Säule das alpha-Glycosylrutin und das restliche Rutin, die beide im Reaktionsgemisch vorhanden waren, während das Dextrin, die Oligosaccharide und die Salze durch die Säule ausflossen, ohne eine Adsorption zu verursachen.
Dann wurde die Säule mit Wasser gewaschen und mit einem 50 Vol./Vol.-% wäßrigem Ethanol versetzt, um sowohl alpha-Glycosylrutin und intaktes Rutin zu eluieren, welche dann in vacuo konzentriert und pulverisiert wurden, um ein alpha-Glycosylrutin-Pulver in der Ausbeute von etwa 140% gegen das Gewicht des Ausgangsrutins, d.s.b., zu erhalten.
Das Produkt ist vorzugsweise verwendbar als Gelbfärbemittel, Antioxidans, Stabilisator, als ein das Verblassen verhinderndes Mittel, als ein die Qualität verbesserndes Mittel, vorbeugendes Mittel, Heilmittel und UV-Absorbens in Nahrungsmitteln, Getränken, Tabaken, Zigaretten, Futtermitteln, Tiernahrungsmitteln, Pharmazeutika für Krankheiten, die darauf ansprechen, Kosmetika und Kunststoffwaren, zusätzlich zur Verwendung in einem Mittel, das darauf gerichtet ist, ein in hohem Ausmaß gereinigtes, leicht wasserlösliches Vitamin P anzureichern.

Beispiel A-4

Alpha-Glycosylrutin

Ein Gewichtsteil Rutin wurde mit 4 Gewichtsteilen 1 N Natriumhydroxidlösung gelöst, durch Zugabe von 0,01 N Chlorwasserstoffsäurelösung neutralisiert, mit 5 Gewichtsteilen Dextrin (DE 10) versetzt, schnell mit 10 Einheiten/g Dextrin von Cyclomaltodextringlucanotransferase versetzt, und 40 Stunden reagieren gelassen, während das Gemisch bei pH 6,0 und bei 70ºC gehalten wurde.
Die papierchromatographische Analyse des Reaktionsgemisches ergab, daß etwa 80% des Rutins zu alpha-Glycosylrutin umgewandelt waren.
Das Reaktionsgemisch wurde auf ähnliche Weise wie im Beispiel A-3 gereinigt, konzentriert und pulverisiert, um ein alpha-Glycosylrutin-Pulver in der Ausbeute von etwa 120% gegen das Gewicht des Ausgangsrutins, d.s.b., zu erhalten.
Ähnlich wie das Produkt in Beispiel A-3 verwirklicht das Produkt ein in hohem Ausmäß sicheres, natürliches Gelbfärbemittel, Antioxidans, Stabilisator, ein das Verblassen verhinderndes Mittel, ein die Qualität verbesserndes Mittel, vorbeugendes Mittel, Heilmittel und UV-Absorbens für verschiedenste Verwendungen, zusätzlich zur Verwendung in einem Mittel, das darauf gerichtet ist, ein in hohem Ausmäß gereinigtes, leicht wasserlösliches Vitamin P anzureichern.

Beispiel A-5

Alpha-Glycosylrutin

Beispiel A-5 (1)

Herstellung von alpha-Glucosidase

Mucor javanicus IFO 4570 wurde inokuliert und 44 Stunden bei 30ºC unter Belüftungsschüttelbedingungen in 500 Gewichtsteilen eines flüssigen Kulturmediums kultiviert, welches Wasser zusammen mit 4,0 Gew./Vol.-% Maltose, 0,1 Gew./Vol.-% monobasisches Kaliumphosphat, 0,1 Gew./Vol.-% Ammoniumnitrat, 0,05 Gew./Vol.-% Magnesiumsulfat, 0,05 Gew./Vol.-% Kaliumchlorid, 0,2 Gew./Vol.-% Polypepton und 1 Gew./Vol.-% Calciumcarbonat, welche durch Erhitzen sterilisiert worden waren und unmittelbar vor der Inokulierung dem Wasser steril zugegeben worden waren, enthielt.
Nach Beendigung der Kultivierung wurde das Mycel von der Kultur gewonnen, mit 500 Gewichtsteilen 4 Mol Harnstoff in 0,5 Mol Acetatpuffer (pH 5,3) pro 43 Gewichtsteile nasses Mycel versetzt, 40 Stunden bei 30ºC stehengelassen und zentrifugiert. Der Überstand wurde gegen fließendes Wasser über Nacht dialysiert, mit Ammoniumsulfat bis 0,9 Sättigung versetzt und über Nacht bei 4ºC stehengelassen, wonach das erhaltene Sediment gewonnen, in 50 Gewichtsteilen 0,01 Mol Acetatpuffer (pH 5,3) suspendiert und zentrifugiert wurde. Der Überstand wurde als eine alpha-Glucosidase-Probe verwendet.

Beispiel A-5 (2)

Herstellung von alpha-Glycosylrutin

Fünf Gewichtsteile Rutin wurden in 40 Gewichtsteilen 0,5 N Natriumhydroxidlösung durch Erhitzen gelöst, auf pH 9,5 eingestellt und mit einer anderen Lösung vermischt, welche durch Auflösen von 20 Gewichtsteilen Dextrin (DE 30) in 10 Gewichtsteilen Wasser durch Erhitzen hergestellt worden war. Die erhaltene Flüssigkeit mit hohem Rutingehalt in der Suspension wurde mit 10 Gewichtsteilen einer alpha-Glucosidase-Probe versetzt, die nach dem Verfahren in Beispiel A-5 (1) erhalten worden war, und 40 Stunden unter Rühren reagieren gelassen, während die Flüssigkeit auf pH 8,5 und bei 55ºC gehalten wurde.
Die papierchromatographische Analyse des Reaktionsgemisches ergab, daß etwa 60% des Rutins zu alpha-Glycosylrutin umgewandelt waren.
Danach wurde das Reaktionsgemisch auf ähnliche Weise wie im Beispiel A-3 gereinigt, konzentriert und pulverisiert, um ein alpha-Glycosylrutin-Pulver in der Ausbeute von etwa 110% gegen das Gewicht des Ausgangsrutins, d.s.b., zu erhalten.
Ähnlich wie das Produkt in Beispiel A-3 verwirklicht das Produkt ein in hohem Ausmäß sicheres, naturliches Gelbfärbemittel, Antioxidans, Stabilisator, ein das Verblassen verhinderndes Mittel, ein die Qualität verbesserndes Mittel, vorbeugendes Mittel, Heilmittel und UV-Absorbens für verschiedenste Verwendungen, zusätzlich zur Verwendung in einem Mittel, das darauf gerichtet ist, ein in hohem Ausmäß gereinigtes, leicht wasserlösliches Vitamin P anzureichern.

Beispiel A-6

Alpha-Glycosylrutin

Ein Gewichtsteil Rutin und 15 Gewichtsteile Dextrin (DE 18) wurden in 99 Gewichtsteilen 50 Vol./Vol.-% wäßriges Methanol, welches auf 40ºC vorgewärmt war, gelöst, und die Lösung wurde auf 25ºC gekühlt, mit 20 Einheiten/g Dextrin von Cyclomaltodextringlucanotransferase, kommerzialisieit von Hayashibara Biochemical Laboratories, Inc., Okayama. Japan, versetzt, auf pH 6,0 eingesteilt und 72 Stunden reagieren gelassen. Die papierchromatographische Analyse des Reaktionsgemisches ergab, daß etwa 80% des Rutins zu alpha-Glycosylrutinen, wie z.B. alpha-Glucosylrutin, alpha-Maltosylrutin, alpha-Maltotriosylrutin, alpha-Maltotetraosylrutin und alpha-Maltopentaosylrutin, umgewandelt war. Danach wurde das Reaktionsgemisch in vacuo konzentriert, um Methanol abzudestillieren, erhitzt, um das restliche Enzym zu inaktivieren, und filtriert, wonach das Filtrat konzentriert wurde, um einen alpha-Glycosylrutin-Sirup, der zusätzlich eine stärkeartige Substanz enthielt, in der Ausbeute von etwa 95% gegen das Gewicht des Ausgangsmaterials, d.s.b., zu erhalten.
Das Produkt ist vorzugsweise verwendbar als in hohem Ausmäß sicheres Gelbfärbemittel, Antioxidans. Stabilisator, als ein das Verblassen verhinderndes Mittel, als ein die Qualität verbesserndes Mittel, vorbeugendes Mittel, Heilmittel und UV-Absorbens in Nahrungsmitteln. Getränken, Tabaken, Zigaretten, Futtermitteln, Tieinahrungsmitteln, Pharmazeutika für Krankheiten, die darauf ansprechen, Kosmetika und Kunststoffwaren, zusätzlich zur Verwendung in einem Mittel, das darauf gerichtet ist, Vitamin P anzureichern.

Beispiel A-7

Alpha-Glucosylrutin

Ein Gewichtsteil eines alpha-Glycosylrutin-Sirups, der zusätzlich starkeartige Substanzen enthielt, hergestellt nach dem Verfahren in Beispiel A-6 mit einer geringen Modifikation, wurde in 4 Gewichtsteilen Wasser gelöst, mit 100 Einheiten/g Sirupfeststoff von Glucoamylase (EC 3.2.1.3), kommerzialisiert von Toyobo Co., Ltd., Osaka, Japan, versetzt, und 5 Stunden bei 50ºC reagieren gelassen. Die papierchromatographische Analyse des Reaktionsgemisches ergab, daß das alpha-Glycosylrutin zu alpha-Glucosylrutin umgewandelt war.
Danach wurde das Reaktionsgemisch erhitzt, um das restliche Enzym zu inaktivieren, und filtriert, wonach das Filtrat einer Säule von "HP-10", einem malcroporösen Harz, welches von Mitsubishi Chemical Industries Ltd., Tokio, Japan kommerzialisiert wird, mit einer Fließgeschwindigkeit von SV 2 aufgetragen. Als Ergebnis adsorbierte das Harz das alpha-Glycosylrutin und das restliche Rutin, die beide im Reaktionsgemisch vorhanden waren, wahrend Dextrin, Oligosaccharide, Glucose und Salze durch die Säule ausflossen, ohne daß sie eine Adsorption verursachten. Die Säule wurde dann mit Wasser gewaschen und mit wäßrigem Ethanol versetzt, welches eine stufenweise nnsteigende Konzentration aufwies, um Fraktionen zu sammeln, die reich an älpha-Glycosylrutin waren, welche dann in vacuo konzentriert und pulverisiert wurden, um ein alpha-Glucosylrutin-Pulver in der Ausbeute von etwa 80% gegen das Gewicht der Ausgangsmaterialien, d.s.b., zu erhalten.
Ähnlich wie das Produkt in Beispiel A-2 ist das Produkt vorzugsweise verwendbar als Gelbfärbermittel, Antioxidans, Stabilisator, als ein das Verblassen verhinderndes Mittel, als ein die Qualität verbesserndes Mittel, vorbeugendes Mittel, Heilmittel und UV-Absorbens in Nahrungsmitteln, Getränken, Tabaken, Zigaretten, Futtermitteln, Tiemahrungsmitteln, Pharmazeutika für Krankheiten, die darauf ansprechen, und Kosmetika, zusätzlich zur Verwendung in einem Mittel, das darauf gerichtet ist, ein in hohem Ausmäß gereinigtes, leicht wasserlösliches Vitamin P anzureichern.

Beispiel A-8

Alpha-Glycosylrutin

Ein Gewichtsteil Rutin wurde in 5 Gewichtsteilen 50 Vol./Vol.-% wäßrigem Ethanol durch Erhitzen gelöst, und die Lösung wurde mit einer anderen Lösung, welche getrennt durch Auflösen von 10 Gewichtsteilen Dextrin (DE 8) in 45 Gewichtsteilen Wasser unter Erhitzen hergestellt worden war, vermischt Das Gemisch wurde mit 10 Einheiten/g Dextrin von Cyclomaltodextringlucanotranslerase versetzt, auf pH 6,0 eingestellt und 24 Stunden bei 50ºC reagieren gelassen.
Die papierchromatographische Analyse des Reaktionsgemisches ergab, daß etwa 90% des Rutins zu alpha-Glycosylrutin umgewandelt waren.
Danach wurde das Reaktionsgemisch in vacuo konzentriert, um das Ethanol abzudestillieren, erhitzt, um das restliche Enzym zu inaktivieren, und filtriert, wonach das Filtrat einer Säule aus "Amberlite XAD-7", einem synthetischen makroporösen Harz, welches von Rohm & Haas Co., Philadelphia, USA, kommerzialisiert wird, mit einer Fließgeschwindigkeit von SV 1,5 aufgetragen.
Als Ergebnis adsorbierte das Harz das alpha-Glycosylrutin und das restliche Rutin, die beide im Rehktionsgemisch vorhanden waren, während Dextrin, Oligosaccharide und Salze durch die Säule ausflossen, ohne eine Adsorption zu verursachen.
Dann wurde die Säule mit Wasser gewaschen, und es wurde 50 Vol/Vol.-% wäßriges Ethanol aufgetragen, um alpha-Glycosylrutin und das restliche Rutin zu eluieren, welche dann konzentriert und pulverisiert wurden, um ein alpha-Glucosylrutin-Pulver in der Ausbeute von etwa 140% gegen das Gewicht des Ausgangsrutins, d.s.b., zu erhalten.
Das Produkt ist vorzugsweise verwendbar als in hohem Ausmaß sicheres, natürliches Gelbfärbemittel, Antioxidans, Stabilisator, als ein das Verblassen verhinderndes Mittel, als ein die Qualität verbesserndes Mittel. vorbeugendes Mittel, Heilmittel und UV-Absorbens in Nahrungsmitteln, Getränken, Tabaken, Zigaretten, Futterrrtitteln, Tiernahrungsmitteln, Pharmazeutika für Krankheiten, die darauf ansprechen, Kosmetika und Kunststoffwaren, zusätzlich zur Verwendung in einem Mittel, das darauf gerichtet ist, Vitamin P anzureichern.

Beispiel A-9

Alpha-Glycosylrutin

Ein Gewichtsteil Rutin wurde in 5 Gewichtsteilen 60 Vol./Vol.-% wäßrigem Ethanol durch Erhitzen gelöst, und die erhaltene Lösung wurde mit einer anderen Lösung, welche getrennt durch Auflösen von 20 Gewichtsteilen Dextrin (DE 30) in 27 Gewichtsteilen Wasser unter Erhitzen hergestellt worden war, vermischt. Das Gemisch wurde mit 8 Gewichtsteiien einer alpha-Glucosidase-Probe, die mit dem Verfahren in Beispiel A- 5 (1) erhalten wurde, versetzt und 40 Stunden bei 40ºC reagieren gelassen, während das Gemisch auf pH 5,3 gehalten wurde.
Die papierchromatographische Analyse des Reaktionsgemisches ergab, daß etwa 60% des Rutins zu alpha-Glycosylrutin umgewandelt waren.
Danach wurde das Reaktionsgemisch in vacuo konzentriert, um Ethanol abzudestillieren, gereinigt, konzentriert und pulverisiert, ähnlich wie in Beispiel A-8, um ein alpha-Glycosylrutin-Pulver in der Ausbeute von etwa 110% gegen das Gewicht des Ausgangsrutins, d.s.b., zu erhalten.
Ähnlich wie das Produkt in Beispiel A-8 ist das Produkt vorzugsweise verwendbar als in hohem Ausmaß sicheres, natürliches Gelbfärbemittel, Antioxidans, Stabilisator, als ein das Verblassen verhinderndes Mittel, als ein die Qualität verbesserndes Mittel, vorbeugendes Mittel, Heilmittel und UV-Absorbens bei verschiedensten Verwendungen, zusätzlich zur Verwendung in einem Mittel, das darauf gerichtet ist, ein in hohem Ausmaß gereinigtes, leicht wasserlösliches Vitamin P anzureichern.

Beispiel A-10

Alpha-Glycosylrutin

Ein Gewichtsteil eines alpha-Glycosylrutin-Sirups, welcher zusätzlich stärkeartige Substanzen enthielt, hergestellt nach dem Verfahren in Beispiel A-6 mit einer geringen Modikation, wurde in 4 Gewichtsteilen Wasser gelöst, mit 100 Einheiten/g Sirupfeststoff von beta-Amylase (EC 3.2.1.2), kommerzialisiert von Toyobo Co., Ltd., Osaka, Japan, versetzt und 5 Stunden bei 50ºC reagieren gelassen.
Die papierchromatographische Analyse des Reaktionsgemisches ergab, daß das alpha-Glycosylrutin zu alpha-Glycosylrutin umgewandelt war, welches hauptsächlich aus alpha-Glucosylrutin und alpha-Maltosylrutin zusammengesetzt war.
Danach wurde das Reaktionsgemisch erhitzt, um das restliche Enzym zu inaktivieren, und filtriert wonach das Filtrat einer Säule von "HP-10", einem synthetischen, makroporösen Harz, welches von Mitsubishi Chemical Industries Ltd., Tokio, Japan kommerzialisiert wird, mit einer Fließgeschwindigkeit von SV 2 aufgetragen. Als Ergebnis adsorbierte das Harz das alpha-Glycosylrutin und das restliche Rutin, die beide im Reaktionsgemisch vorhanden waren, während Maltose, Oligosaccharide, Glucose und Salze durch die Säule ausflossen, ohne daß sie eine Adsorption verursachten. Die Säule wurde dann mit Wasser gewaschen und mit wäßrigem Ethanol versetzt, welches eine stufenweise ansteigende Konzentration aufwies, um Fraktionen zu sammeln, die reich an alpha-Glycosylrutin waren, welche dann in vacuo konzentriert und pulverisiert wurden, um ein alpha-Glycosylrutin-Pulver in der Ausbeute von etwa 85% gegen das Gewicht der Ausgangsmaterialien, d.s.b., zu erhalten.
Die Glucoarnylase hydrolysierte das alpha-Glycosylrutin zu alpha-Glucosylrurin und D-Glucose, während eine alpha-Glucosidase, die durch Extraktion aus Schweineleber und teilweiser Reinigung hergestellt worden war, das alpha-Glycosylrutin zu Rutin und D-Glucose hydrolysierte.
Das Produkt ist vorzugsweise verwendbar als Gelbfärbemittel, Antioxidans, Stabilisator, als ein das Verblassen verhinderndes Mittel, als ein die Qualität verbesserndes Mittel, vorbeugendes Mittel, Heilmittel und UV-Absorbens in Nahrungsmitteln, Getränken, Tabaken, Zigaretten, Futtermitteln, Tiernahrungsmitteln, Pharmazeutika für Krankheiten, die darauf ansprechen, Kosmetika und Kunststoffwaren, zusätzlich zur Verwendung in einem Mittel, das darauf gerichtet ist, ein in hohem Ausmaß gereinigtes, leicht wasserlösliches Vitamin P aozureichern.

Beispiel B-1

Harte Bonbons

Fünfzehrthundert Gewichtsteile von "MABIT ", einem hydrierten Maltosesirup, der von Hayashibara Shoji, Inc., Okayama, Japan, kommerzialisiert wird, wurden erhitzt, auf einen Feuchtigkeitsgehalt unter etwa 2% konzentriert und mit 15 Gewichtsteilen Zitronensäure, 1 Gewichtsteil eines alpha-Glycosylrutin-Pulvers. welches mit dem Verfahren in Beispiel A-3 erhalten worden war, und einer kleinen Menge Zitronengeschrnackstoff bis zur Homogenität gemischt. wonach das Gemisch geformt und auf herkömmliche Weise verpackt wurde, um ein harte Bonbons zu erhalten.
Das Produkt ist ein gelbgefärbtes, mit Vitamin P angereichertes Zitronenbonbon mit geringer Kariogenität und wenig Kalorien.

Beispiel B-2

"Fulli-no-mizuni (Gekochter Sumpfrhabarber)"

Frischer Sumpfrhabarber wurde abgeschält, in kurze Stäbe geschnitten, in einer verdünnen Salzlösung eingeweicht, und in einer Flüssigkeit, die einen alpha-Glycosylrutin-Sirup, der mit dem Verfahren in Beispiel A-1 erhalten worden war, und "Aoiro Ichi-go (Blau Nr. 1)", einem grünen Färbemittel, abgekocht, um einen frisch grunen "fuki-no-mitzuni" zu erhalten.
Das Produkt ist gefällig anzusehen, wenn es in traditionellen japanischen Küchen angeordnet wird, und es weist eine physiologische Aktivität als Diätfaser auf.

Beispiel B-3

"Gyuhi (Stärkepaste)"

Ein Gewichtsteil wachsartige Reisstärke wurde mit 1,2 Gewichtsteilen Wasser gemischt, und das Gemisch wurde mit 1,5 Gewichtsteilen Sucrose, 0,7 Gewichtsteilen "SUNMALT ", einer kristallinen beta-Maltose, die von Mayashibara Co., Ltd., Okayama. Japan, kommerzialisiert wird, 0,3 Gewichtsteilen Stärkesirtip und 0.2 Gewichtsteilen eines alpha-Glycosyl-Simps, der mit den Verfahren von Beispiel A-6 erhalten wurde, vernuscht, wärend unter Erhitzen gelatinisiert geformt und auf die übliche Weise verpackt wurde, um "gyuhi" zu erhalten.
Das Produkt ist ein Koufekt nach japanischer Art, weicher wie "kibi-dango (Hirsekloß)" aussieht und ausgezeichnet schrneckt und ausgezeichnete Bißeigenschatten aufweist

Beispiel B4

Gemischter Süßstoff

Ein gemischter Süßstoff wurde erhalten, indem 100 Gewichtsteile Honig, 50 Gewichtsteile isomerisierter Zucker, 2 Gewichtsteile "kurozato (unraffinierter Zucker) und 1 Gewichtsteil eines alpha-Glycosylrutin-Pulvers, welches mit dem Verfahren von A-9 erhalten worden war, erhalten.
Das Produkt ist ein mit Vitamin P angereicherter Sußstoff und für ein Gesundheitsratrungsmittel brauchbar.

Beispiel B-5

Cremefüllung

Eine Cremefüllung wurde erhalten, indem auf übliche Weise 1200 Gewichtsteile "FINETOSE , eine kristalline alpha-Maltose, die von Hayashibara Co., Ltd, Okayama, Japan, kommerzialisiert wird, 1000 Gewichtsteile Fett zum Backen, 10 Gewichtsteile eines alpha-Glycosylrutin-Pulvers, welches mit dem Verfahren von Beispiel A-8 erhalten worden war, 1 Gewichtsteil Lecithin, 1 Gewichtsteil Zitronenöl und 1 Gewichtsteil Vanilleöl bis zur Homogenität gemischt wurden.
Das Produkt ist eine gelbgefärbte, mit Vitamin P angereicherte Cremefüllung, weiche ausgezeichnet schmeckt und riecht und ausgezeichnete Schmelz- und Bißeigenschaften besitzt und die Oxidation der fetten Inhaltstoffe verhindert.

Beispiel B-6

Orangejuice

50 Gewichtsteile eines frischen Orangenjuice, 0,1 Teile Zitronensäure, 5 Gewichtsteile Sucrose, 0,5 Gewichtsteile alpha-Glycosylrutin-Pulver, welches mit dem Verfahren in Beispiel A-5 erhalten worden war, 0,1 Gewichtsteile L-Ascorbinsäure (Vitamin C), Geschmackstoff und 46 Gewichtsteile Wasser wurden gemischt, und das Gemisch wurde in Gefäße verteilt und auf übliche Weise pasteurisiert, um das erwähnte Produkt zu erhalten.
Das Produkt ist ein mit Vitamin P und Vitamin C angereicherter Orangenjuice mit ausgezeichneter Farbe, ausgezeichnetem Geschmack und Geruch.

Beispiel B-7

Tablette

Zwanzig Gewichtsteile Ascorbinsäure wurden mit 13 Gewichtsteilen kristalline beta-Maltose, 4 Gewichtsteilen Kornstärke und 3 Gewichtsteilen alpha-Glycosylrutin, welches mit dein Verfahren von Beispiel A- 7 erhalten worden war, bis zur Homogenität gemischt, und das Erhaltene wurde mit einer 20R-Stanzmaschine, Durchmesser 12 mm, tablettiert.
Das Produkt ist eine leicht quellbare Vitaminzusammensetzung, welche Ascorbinsäure und alpha-Glycosylrutin enthält, in welcher die Ascorbinsäure ausgezeichnet stabil ist.

Beispiel B-8

Kapsel

Zehn Gewichtsteile Calciumacetatmonohydrat, 50 Gewichtsteile Magnesium-L-lactattrihydrat, 57 Gewichtsteile Maltose, 20 Gewichtsteile eines alpha-Glycosylrutin-Pulvers, welches mit dem Verfahren von Beispiel A-2 erhalten worden war. 12 Gewichtsteile gamma-Cyclodextrin-Einschiußverbindung, welche 20% Eicosapentaensäure entlielt, würden bis zur Homogenität gemischt, und das Gemisch wurde einem Granulator zugefüit und in Gelatine eingekapselt, um Kapseln mit jeweils 150 mg zu erhalten.
Das Produkt verhindert die Oxidation der Eicosapentaensäure und ist vorzugsweise verwendbar als hochqualitatives, das Blutcholesterin absenkendes Mittel, als Immunverstärker und als Hautreinigungsmittel bei der Vorbeugung und Heilung von Krankheiten, die darauf ansprechen, sowie in Nahrungsmitteln, die auf die Aufrechterhaltung und Förderung der Gesundheit genchtet sind.

Beispiel B-9

Salbe

Ein Gewichtsteil Natriumacetattrihydrat, 4 Gewichtsteile DL-Calciumlactat und 10 Gewichtsteile Glycerin wurden bis zur Homogenität gemischt, und das Gemisch wurde einem anderen Gemisch von 50 Gewichtsteilen Vaseline, 10 Gewichtsteilen Pflanzenwachs, 10 Gewichtsteilen Lanolin, 14,5 Gewichtsteilen Sesamöl, 1 Gewichtsteil eines alpha-Glycosylrutin-Pulvers, welches mit dem Verfahren von Beispiel A4 erhalten worden war, und 0,5 Gewichtsteilen Pfefferminzöl zugegeben und zur Homogenität gemischt, um eine Salbe zu erhalten.
Das Produkt ist Antioxidativ, in hohem Ausmäß stabil und vorzugsweise als hochqualitatives Sonnenschutzmittel, Hautreirugungsmittel, Hautbleichmittel und unterstützendes Mittel zum Heilen von Verletzungen und Verbreitnungen verwendbar.

Beispiel B-10

Injektion

Ein alpha-Glycosylrutin-Pulver, welches mit dem Verfahren von Beispiel A-7 erhalten worden war, wurde in Wasser gelöst und auf übliche Weise steril filtriert, um eine pyrogenfreie Lösung zu erhalten, welche dann in Glasfläschchen von 20 ml verteilt wurde, um einen alpha-Glycosylrutin-Inhalt von 200 mg zu ergeben, in vacuo getrocknet und verschlossen, um das erwähnte Produkt zu erhalten.
Das Produkt ist allein oder in Kombination mit Vitaminen und Mineralien intramuskulär und intravenös verabreichbar. Das Produkt erfordert keine kalte Lagerung und weist bei Verwendung eine ausgezeichnete hohe Löslichkeit in einer Salzlösung auf.
Neben einem Zusatz von Vitamin P wirkt das Produkt als ein Antioxidans, wobei es aktivierten Sauerstoff entfernt und die Bildung von Lipoperoxiden unterdrückt, und ist daher vorteilhaft bei der Vorbeugung und Heilung einer Reihe von Krankheiten. einschließlich viralen Erkrankungen, bakterieilen Erkrankungen, Kreislaufkrankheiten und bösartigen Tumoren, vorteilhaft verwendbar.

Beispiel B-11

Injektionen

Sechs Gewichtsteile Natriumchlorid, 0,3 Gewichtsteile Kaliumchlorid, 0,2 Gewichtsteile Calciumchiorid, 3,1 Gewichtsteile Natriumlactat, 45 Gewichtsteile Maltose und 2 Teile eines alpha-Glycosylrutin-Pulvers, welches mit den Verfahren von Beispiel A-2 erhalten worden war, wurden in 1000 Gewichtsteilen Wasser gelöst und auf herkömmliche Weise steril filtriert. wonach Aliquote von 250 mi der pyrogenfreien Lösung auf sterile Plastikgefäße verteilt wurde, um das erwähnte Produkt zu erhalten.
Das Produktzusätze, zusätzlich zu Vitamin P, Kalorien und Mineralien, sind daher zur Injektion geeignet und darauf gerichtet, aktivierten Sauerstoff zu entfernen und die Bildung von Lipoperoxiden zu unterdrücken. Das Produkt ist daher bei der Vorbeugung und Heilung verschiedener Krankheiten, einschließlich viraler Erkrankungen, bakterieller Erkrankungen, Kreislaufrakheiten und bösartiger Tumoren, sowie bei der Wiederherstellung der Gesundheit während und vor dem Erleiden von Krankheiten vorteilhaft verwendbar.

Beispiel B-12

Intubationsnährstoff

Vierundzwanzig Gramm Aliquote einer Zusammensetzung, die aus 20 Gewichtsteilen krisalline alpha-Maltose, 1,1 Gewichtsteile Glycin, 0,18 Gewichtsteile Natriumglutamat, 1,2 Gewichtsteile Natriumchlorid, 1 Gewichtsteil Zitronensäure, 0,4 Gewichtsteile Calciumlactat, 0,1 Gewichtsteil Magnesiumcarbonat, 0,1 Gewichtsteil eines alpha-Glycosylrutin-Pulvers, welches mit dem Verfahren von Beispiel A-8 erltalten worden war, 0,01 Gewichtsteil Thiamin und 0,01 Gewichtsteil Riboflavin bestand, wurden in laminierte Aluminiumbeutei gepackt und unter Erwärmung verschlossen, um das erwähnte Produkt zu erhalten.
Ein Beutel des Produktes wird bei Verwendung in etwa 300-500 ml Wasser gelöst, und die Lösung ist vorteilhaft als ein Intubationsnährstoff verwendbar, der für orale oder parenterale Verabreichung über Nasenhöhle, Magen und Darm gerichtet ist.

Beispiel B-13

Badflüssigkeit

Eine Badflüssigkeit wurde erhalten, indem 21 Teile DL-Natriumlactat, 8 Gewichtsteile Natriumpynivat, 5 Gewichtsteile eines alpha-Glycosylrutin-Sirups, der mit dem Verfahren von Beispiel von A-1 erhalten worden war, und 40 Gewichtsteile Ethanol mit 26 Gewichtsteilen raffiniertes Wasser und geeigneten Mengen Färbemittel und Geschmacksmittel gemischt wurden.
Das Produkt ist als Hautreinigungsmittel und als Hautbleichmittel geeignet und wird auf das 100- 10000fache in Badewasser verdünng wenn es verwendet wird. Das Produkt ist als Reinigungsflüssigkeit, als Adstringens und Feuchtigkeitsflüssigkeit vorteilhaft verwendbar.

Beispiel B-14

Milchige Lotion

Ein halber Gewichtsteil Polyoxyethylenbehenylether, 1 Gewichtsteil Polyoxyetliylerisorbitoltetraoleat, 1 Gewichtsteil öllösliches Glycerylmonostearat, 0,5 Gewichtsteile Breriztraubensäure, 0,5 Gewichtsteile Behenylalkohol, 1 Gewichtsteil Avocadoöl, 1 Gewichtsteil eines alpha-Glycosylrutin-Pulvers, welches mit dem Verfahren von Beispiel A-3 erhalten worden war, und geeignete Mengen Vitamin E und Antiseptikum wurden gelöst, indem auf herkömmliche Weise erhitzt wurde, und die Lösung wurde mit 1 Gewichtsteil L-Natriumlactat, 5 Gewichtsteilen 1,3-Buylenglycol, 0.1 Gewichtsteil Carboxyvinylpolymer und 85.3 Gewichtsteilen raffiniertes Wasser versetzt in einem Homogenisator emulgiert, mit einer geeigneten Menge eines Geschmacksstoffes versetzt und unter Rühren vermischt, um das erwahnte Produkt zu erhalten.
Das Produkt ist antioxidativ, hochstabil und als hochqualitatives Sonnenschutzmittel, Hautreinigungsmittel und Hautbleichmittel vorteilhaft verwendbar.

Beispiel B-15

Kosmetische Creme

Zwei Gewichtsteile Polyoxyethylenglycolmonostearat, 5 Gewichtsteile selbst-emulgierendes Glycerinmonostearat, 2 Gewichisteile eines alpha-Glycosylrutin-Pulvers, welches mit dem Verfahrn von Beispiel A-2 erhalten worden war, 1 Gewichtsteil flüssiges Paraffin. 10 Gewichtsteile Glyceryltriactanat und eine geeignete Menge Antisepticum wurden gelöst, indem auf herkömmliche Weise erhitzt wurde, und das Gemisch wurde mit 2 Gewichtsteilen L-Milchsäure, 5 Gewichtsteilen 1,3-Butylenglycol und 66 Gewichtsteilen raffiniertes Wasser versetzt, mit einem Homogenisator emulgiert, mit einer geeigneten Menge eines Geschmacksmittels versetzt und unter Rühren vermischt, urn das erwahrite Produkt zu erhalten.
Das Produkt ist antioxidativ, hochstabil und als hochqualitatives Sonnenbräunungsmittel, Hautreinigungsmittel und Hautbleichmittel vorteilhaft verwendbar.

Beispiel B-16

Antioxidans

Ein Antioxidans wurde hergestellt, indem 10 Gewichtsteile eines alpha-Glycosylrutin-Pulvers, weiches mit dem Verfaliren in Beispiel A-10 erhalten worden war, 2 Gewichtsteile Vitamin E&sub2;, 0,1 Gewichtsteil Lecithin und 0,5 Gewichtsteile Natriumcitrat zur Homogenität gemischt wurden.
Das Produkt ist als ein Antioxidans, als ein Stabilisator und als ein qualitätsverbesserndes Mittel in fettigen Nahrungsmitteln, wie z.B. Margarine und Butter, in Pharmazeutika für Krankheiten, die darauf ansprechen, wie z.B. ungesättigte Fettsäuren, öllösliche Vitamine und öllösliche Hormone und Kosmetika, wie z.B. als Cremelotion und kosmetische Creme, vorzugsweise verwendbar, indem es in einer Menge von etwa 0,01-5,0 Gew./Gew.-% eingebracht wird.

Beispiel B-17

Antioxidans

Ein Antioxidans wurde hergestellt, indem 10 Gewichtsteile eines alpha-Glucosylrutin-Pulvers, welches mit dem Verfahren in Beispiel A-2 erhalten worden war, und 0,2 Gewichtsteile Natriumcitrat zur Homogenität gemischt wurden.
Das Produkt ist als ein Antioxidans, als ein Stabilisator und als ein qualitätsverbesserndes Mittel in fettigen Nahrungsmitteln, wie z.B. Margarine und Butter, in Pharmazeutika für Krankheiten, die auf alpha-Glycosylrutin ansprechen, wie z.B. ungesättigte Fettsäuren, öllösliche Vitamine und öllösliche Hormone und Kosmetika, wie z.B. als Cremelotion und kosmetische Creme, vorzugsweise verwendbar, indem es in einer Menge von etwa 0,01-5,0 Gew./Gew.-% eingebracht wird. Außerdem ist das Produkt als Antioxidans, Stabilisator, als ein das Verblassen verhinderndes Mittel und als ein qualitätsverbesserndes Mittel in Nahrungsmitteln und Getranken vorteilhaft verwendbar, welche ein leicht verblassendes natürliches Pigment enthalten, indem es in einer Menge von etwa 0,01-2,0 Gew./Gew.-% eingebracht wird.
Wie oben beschrieben, basiert die vorliegende Erfindung auf der Erkennmis, däß bei der Herstellung von alpha-Glycosylrutin die Anfangskonzentration für Rutin auf etwa das Fünffache oder mehr, wünschenswerterweise auf das etwa 10-200fache der mit einem herkömmlichen Verfahren erreichbaren Konzentration gesteigert werden kann, indem ein Saccharid-übertragendes Enzym auf eine Flüssigkeit mit hohem Rutingehalt einwirken gelassen wird, welche Flüssigkeit Rutin in hoher Konzentration zusammen mit einer stärkeartigen Substanz enthält, wünschenswertenveise auf eine Suspension mit hohem Rutingehalt oder eine Lösung mit hohem Rutingehalt, welche erhältlich ist, indem Rutin bei einem alkalischen pH gelöst wird oder indem Rutin in einem organischen Lösungsmittel gelöst wird. Alpha-Glycosylrutin wird daher in einer hohen Konzentration auf einfache Weise gebildet.
Ferner fanden wir, daß ein alpha-Glycosylrutin, welches alpha-Glucosylrutin und/oder alpha-Maltosylrutin umfaßt, erhältlich ist, indem zuerst ein Saccharid-übertragendes Enzym auf eine Lösung einwirken gelassen wird, welche Rutin zusammen mit einer stärkeartigen Substanz enthält, und indem dann eine Amylase auf das erhaltene Gemisch einwirken gelassen wird.
Wir fanden auch, daß das alpha-Glycosylrutin, weiches im Reaktionsgemisch vorhanden ist, gereinigt werden kann, indem das Gemisch mit einem synthetischen makroporösen Harz in Kontakt gebracht wird. Besonders in dem Fall, wo das Reationsgemisch ein organisches Lösungsmittel enthält, kann das alpha-Glycosylrutin auf ähnliche Weise wie oben gereinigt werden, indem zuerst die Konzentration des organischen Lösungsmittels verringert und dann das Reaktionsgemisch mit einem synthetischen makroporösen Harz in Kontakt gebracht wird.
Dies verringert und spart das Wasser und die Energie in Reaktions- und Reinigungsverfahren für alpha-Glycosylrutin außerordentlich und erleichtert außerordentlich seine Kommerzialisierung.
Das alpha-Glycosylrutin, das auf diese Weise erhalten wird, ist dadurch gekennzeichnet, daß es eine ausgezeichnet hohe Wasserlöslichkeit, Lichtbeständigkeit und Stabilität besitzt, und daß es mit dem in vivo-Enzymsystem zu Rutin und Glucose hydrolysierbar ist, um die physiologischen Eigenschaften aufruweisen, welche Rutin inhärent sind. Deswegen ist das alpha-Glycosylrutin vorzugsweise verwendbar als Gelbfärbemittel, Antioxidans, Stabilisator, als ein das Verblassen verhinderndes Mittel, als ein die Qualität verbesserndes Mittel, vorbeugendes Mittel, Heilmittel und UV-Absorbens und ein das Verderben verhinderndes Mittel in Nahrungsmitteln, Getranken. Tabaken, Zigaretten, Futtermitteln, Tiernahrungsmitteln, Pharmazeutika für Krankheiten, die darauf ansprechen. und Kosmetika, einschließlich Hautreinigungsmitteln, ein die Melaninbildung unterdrückendes Mittel und Hautbleichmittel und Kunststoffwaren, zusätzlich zur Verwendung in einem Mittel, das darauf gerichtet ist ein in hohem Ausmäß sicheres Vitamin P anzureichern.
Dementsprechend besitzt die vorliegende Erfindung im Hinblick auf die Errichtung einer Produktion im industriellen Maßstab und auf die praktischen Verwendungen von alpha-Glycosylrutin eine außerordentlich hohe Bedeutung für die Nahrungsmittel-. Getränke-, Kosmetik-, pharmazeutische und Kunststoffindustrie.

Claims

1. Verehren zur Herstellung von alpha-Glycosylrutin, umfassend:

Einwirkenlassen eines Saccharid-übertragenden Enzyms auf eine Flüssigkeit mit hohem Rutin-Gehalt, in welcher die Konzentration des Rutins mindestens 0,5 Gew./Vol.-% ist, zusammen mit einer stärkeartigen Substanz, um ein alpha-Glycosylrutin zu bilden, in welchem äquimolare oder mehr Glucose-Reste an das Rutin gebunden sind; und

Gewinnen des alpha-Glycosylrutins, worin die Flüssigkeit mit hohem Rutin-Gehalt ist:

(i) eine Suspension; oder

(ii) eine Lösung, welche durch Auflösen von Rutin bei einem alkalischen pH oder durch Auflösen von Rutin in einem wäßrigen organischen Lösungsmittel erhältlich ist.

2. Verfahren, wie in Anspruch 1 beansprucht, worin die Flüssigkeit mit hohem Rutin-Gehalt eine wäßrige Lösung umfaßt, welche ein organisches Lösungsmittel beinhaltet, welches Verfahren ferner umfaßt:

Absenken der Konzentration des organischen Lösungsmittels:

Reinigen des alpha-Glycosylrutins, indem die wäßrige Lösung mit einem synthetischen makroporösen Harz in Kontakt gebracht wird; und

Gewinnen des alpha-Glycosylrutins.

3. Verfahren, wie in Anspruch 1 beansprucht, welches umfaßt:

Einwirkenlassen eines Saccharid-übertragenden Enzyms auf eine Lösung, welche Rutin enthält, zusammen mit einer stärkeartigen Substanz;

Einwirkenlassen einer Amylase auf das erhaltene Gemisch, um alpha-Glucosylrutin und/oder alpha-Maltosylrutin zu bilden; und

Gewinnen des alpha-Glucosylrutins und/oder alpha-Maltosylrutins.

4. Verfahren, wie in Anspruch 1 oder Anspruch 2 beansprucht, welches umfaßt:

Einwirkenlassen einer Amylase, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Glucoamylase (EC 3.2.1.3), beta-Amylase (3.2.1.2) und Gemischen davon, auf das erhaltene Gemisch, um alpha-Glucosylrutin und/oder alpha-Matltosylrutin zu bilden;

Reinigen der erhaltenen Gemischlösung, indem sie mit einem synthetischen makroporösen Harz in Kontakt gebracht wird; und

Gewinnen des alpha-Glucosylrutins und/oder alpha-Maltosylrutins.

5. Verfahren, wie in einem der vorhergehenden Ansprüche beansprucht, worin das Saccharid-übertragende Enzym ein Glied ist, welches aus der Gruppe, bestehend aus alpha-Glucosidase (EC 3.2.1.20), Cyclomaltodextringlucanotrasferase (EC 2.4.1.19) und alpha-Amylase (EC 3.2.1.1), gewählt ist.

6. Verfahren, wie in einem der vorhergehenden Ansprüche beansprucht, worin die stärkeartige Substanz ein Glied ist, welches aus der Gruppe, bestehend aus Maltooligosaccharid, Stärketeilhydrolysat, verflüssigte Stärke und gelatinisierte Stärke, gewählt ist.

7. Verfahren, wie in einem der vorhergehenden Ansprüche beansprucht, worin die Konzentration von Rutin etwa 0,5- bis 50-fach höher als jene der stärkeartigen Substanz ist.

8. Verfahren, wie in einem der vorhergehenden Ansprüche beansprucht, worin das Saccharid-übertragende Enzym bei einem pH im Bereich von 3-10 und bei einer Temperatur im Bereich von 10-90ºC auf die Flüssigkeit mit dem hohen Rutin-Gehalt einwirken gelassen wird.

9. Verfahren, wie in einem der Ansprüche 1 oder 2 beansprucht, worin das alpha-Glycosylrutin ein alpha-Glucosylrutin ist.

10. Verfahren, wie in einem der vorhergehenden Ansprüche beansprucht, worin das organische Lösungsmittel ein mit Wasser mischbares organisches Lösungsmittel ist.

11. Verfahren zur Herstellung eines Nahrungsmittels oder eines Getrankes, umfassend: Einwirkeniassen eines Saccharid-übertragenden Enzyms auf eine Flüssigkeit mit hohem Rutin-Gehalt, in welcher die Konzentration des Rutins mindestens 0,5 Gew./Vol.-% ist, zusammen mit einer stärkeartigen Substanz, um ein alpha-Glycosylrutin zu bilden, in weichem äquimolare oder mehr Glucose-Reste an das Rutin gebunden sind;

Gewinnen des alpha-Glycosylrutins; und

Einbringen des alpha-Glycosylrutins in das Nahrungsmittel oder das Getränk, worin die Flüssigkeit mit hohem Rutin-Gehalt ist:

(i) eine Suspension; oder

12. Verfahren, wie in Anspruch 11 beansprucht, worin das alpha-Glycosylrutin in einer Menge von mindestens 0,001 Gew./Gew. -% aufgenommen wird.

13. Verfahren, wie in einem der Ansprüche 11 oder 12 beansprucht, worin das alpha-Glycosylrutin ein alpha-Glucosylrutin ist.

14. Verfahren zur Herstellung von Phartnazeutika für Krankheiten, die einer Behandlung mit Rutin zugänglich sind, umfassend:

Einwirkenlassen eines Saccharid-übertragenden Enzyms auf eine Flüssigkeit mit hohem Rutin-Gehalt, in welcher die Konzentration des Rutins mindestens 0,5 Gew./Vol.-% ist, zusammen mit einer stärkeatigen Substanz, um ein alpha-Glycosylrutin zu bilden, in welchem äquimolare oder mehr Glucose-Reste an das Rutin gebunden sind;

Gewinnen des alpha-Glycosylrutins; und

Einbringen des alpha-Glycosylrutins als den wirksamen Bestandteil in einen phanazeutisch akzeptablen Träger, worin die Flüssigkeit mit hohem Rutin-Gehalt ist:

(i) eine Suspension; oder

15. Verfahren, wie in Anspruch 14 beansprucht, worin das alpha-Glycosylrutin ein alpha-Glucosylrutin ist.

16. Verfahren zur Hersteilung von Kosmetika, umfassend:

Einwirkenlassen eines Saccharid-übertragenden Enzyms auf eine Flüssigkeit mit hohem Rutin-Gehalt, in welcher die Konzentration des Rutins mindestens 0,5 Gew./Vol.-% ist, zusammen mit einer starkeartigen Substanz, um ein alpha-Glycosylrutin zu bilden, in welchem äquimolare oder mehr Glucose-Reste an das Rutin gebunden sind;

Gewinnen des alpha-Glycosylrutins; und

Einbringen des alpha-Glycosylrutins als den wirksarnen Bestandteil in einen kosmetisch akzeptablen Träger, worin die Flussigkeit mit hohem Rutin-Gehalt ist:

(i) eine Suspension; oder

(ii) eine Lösung, welche durch Auflösen von Rutin bei einem alkalischen pH oder durch Auflösen voa Rutin in einem wäßrigen organischen Lösungsmittel erhältlich ist.

17. Verfahren, wie in Anspruch 16 beansprucht, worin das alpha-Glycosylrutin in einer Menge von mindestens 0,001 Gew./Gew.-% aufgenommen wird.

18. Verfahren, wie in Anspruch 16 oder Anspruch 17 beansprucht, worin das alpha-Glycosylrutin ein alpha-Glucosylrutin ist.

19. Verfahren zur Herstellung eines Antioxidans, umfassend: Einwirkenlassen eines Saccharid-übertragenden Enzyms auf eine Flüssigkeit mit hohem Rutin-Gehalt, in welcher die Konzentration des Rutins mindestens 0,5 Gew./Vol.-% ist, zuarnmen mit einer stärkeartigen Substanz, um ein alpha-Glycosylrutin zu bilden, in weichem äquimolare oder mehr Glucose-Reste an das Rutin gebunden sind;

Gewinnen des alpha-Glycosylrutins; und

Einbringen des alpha-Glycosyrutins als den wirksamen Bestandteil in einen pharmazeutisch älczeptablen Träger, worin die Flüssigkeit mit hohem Rutin-Gehalt ist:

(i) eine Suspension; oder

20. Verfahren, wie in Anspruch 19 beansprucht, worin das alpha-Glycosylrutin ein alpha-Glucosylrutin ist.